CN105606741A - 一种替格瑞洛的有关物质的含量检测方法 - Google Patents

一种替格瑞洛的有关物质的含量检测方法 Download PDF

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杨高顺
王岚
李宝齐
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Abstract

本发明的目的在于提供一种精密度高，操作简单，适用性强的替格瑞洛的有关物质的含量检测方法，包括以下步骤：(1)系统适用性溶液制备：取羟基物、氨基物、亚砜1和亚砜2、砜、光降解物、五元环羟基物、转位产物、乙酯化物、过程中间体3及替格瑞洛配制成系统适用性溶液；(2)供试品溶液制备：取替格瑞洛原料药配制成供试品溶液；(3)对照溶液的制备：取供试品溶液配制成对照溶液；(4)分别将系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，得到色谱图；(5)根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供试品溶液中有关物质的含量。

Description

一种替格瑞洛的有关物质的含量检测方法
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及一种药物中有关物质的含量检测方法，具体涉及替格瑞洛中有关物质的含量检测方法。
背景技术
替格瑞洛，化学名称为：(1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基}-5-(丙硫基)-3H-[1,2,3]-三唑[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙氧基)环戊烷-1,2-二醇。
替格瑞洛，分子式：C23H28F2N6O4S，分子量：522.57，
化学结构式为：
替格瑞洛通过典型的化学合成法制备，并通过起始原料控制其化学结构上的六个手性中心，原料药为白色至浅粉色粉末。
替格瑞洛具有多晶性，文献报道其有I、II、III、IV四种非溶剂化晶型和多种溶剂化物，目前上市产品使用其II晶型。
替格瑞洛在水中的溶解度很低(0.016mg/mL，20℃)，并且在水相溶液中不显示pH依赖性。替格瑞洛属于BCSIV类药物，即低溶解度、低渗透性的药物。
替格瑞洛是一种环戊三唑嘧啶(CPTP)类化合物。替格瑞洛及其主要代谢产物能可逆性地与血小板P2Y12ADP受体相互作用，阻断信号传导和血小板活化。替格瑞洛及其活性代谢产物的活性相当。
替格瑞洛通过阻滞P2Y12受体而抑制ADP诱发的血小板聚集，与氯吡格雷的作用机制相似。但不同的是，替格瑞洛对P2Y12受体的抑制作用是可逆的，停药后1-3天血小板的功能就可恢复，此中作用对需要进行冠状动脉旁路移植术或其它手术的患者十分重要，因为这能削弱输血引起的血栓效应，明显降低心血管疾病患者的死亡率。
替格瑞洛的另一特点是口服后起效迅速。与噻吩吡啶类药物不同，替格瑞洛不需要在肝脏中经过代谢激活，故可有效降低药物间的相互作用。替格瑞洛的具体作用机制尚未阐明，目前提出的一种假说是：替格瑞洛是一种腺苷前体，口服后会在体内转变为腺苷，增加血液中腺苷的含量。腺苷是一种重要的内源性小分子，能激活4种糖蛋白偶联腺苷受体A1、A2A、A2B和A3，从而调节机体组织的功能，改善心血管疾病的临床床症状。
替格瑞洛作为一种新型具有选择性的抗凝血药在国外已经有诸多不良反应的报道，并且有些不良反应机制尚不明确，还需要进一步研究。
对于存在多个手性中心的原料药为了更好的对其质量进行控制，在质量标准中定入旋光度进行表征。而多晶型药物容易产生体内代谢常数不一致，因此需要对原料药的晶型进行一致性研究。另外为了提高难溶性药物的溶解性需要对其粒度进行考察。
在原料药合成过程中，不可避免的会引入一些杂质，同时在原料存储及制剂制备和存储过程中，不可避免的会引发一些降解杂质。替格瑞洛原料药的合成路线如附图1所示。相关杂质及相对保留时间如表1所示。
表1：各杂质信息及相对响应因子列表
注：亚砜1和亚砜2为旋光异构体，故仅有一个结构式。
为了更好的提高替格瑞洛的药物质量，提升药物的安全性和稳定性。我们对替格瑞洛的有关物质的含量检测方法进行研究。最终找到了一种精密度高，操作简单，适用性强的含量检测方法,可以用于替格瑞洛原料药中上述杂质的质量控制。
发明内容
本发明的目的在于提供一种替格瑞洛的有关物质的含量检测方法。
本发明所建立的液相色谱法检测替格瑞洛的有关物质，通过系统适用性溶液对已知杂质定位，用含校正因子的自身对照法计算已知杂质含量，使有关物质的检测结果更加严格和准确。
本发明所述替格瑞洛的有关物质的含量检测方法，包括以下步骤：
(1)系统适用性溶液制备：取羟基物、氨基物、亚砜1和亚砜2、砜、光降解物、五元环羟基物、转位产物、乙酯化物、过程中间体3及替格瑞洛配制成系统适用性溶液；
(2)供试品溶液制备：取替格瑞洛原料药配制成供试品溶液；
(3)对照溶液的制备：取供试品溶液配制成对照溶液；
(4)分别将系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，得到色谱图；
(5)根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供试品溶液中有关物质的含量；
其中，所述液相色谱的色谱条件如下：
色谱柱：AgilentZorbaxEclipseXDB-C18；
流动相：流动相A：10mmol/L磷酸盐缓冲液，流动相B：选自甲醇或乙腈，进行梯度洗脱。
优选的，液相色谱的色谱条件如下：
色谱柱：AgilentZorbaxEclipseXDB-C18，型号为：150×4.6mm,5μm；
流动相：
流动相A：10mmol/L磷酸盐缓冲液(取二水合磷酸二氢钠约1.56g，加水900ml使溶解，用磷酸调节pH值至3.0-4.0，加水稀释成1000ml)；
流动相B：选自甲醇、乙腈中的一种；
梯度洗脱过程如下：
检测波长：242nm；
柱温：30℃-40℃；
流速：1ml/min；
进样量10μL；
溶剂：甲醇-水或乙腈-水。
优选的，本发明所述的检测方法，包括以下步骤：
(1)系统适应性溶液的制备：称取替格瑞洛、羟基物、氨基物、亚砜1和亚砜2、砜、光降解物、五元环羟基物、转位产物、乙酯化物、过程中间体3，同置于25ml量瓶中，加水适量使溶解，再加水稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含替格瑞洛0.2mg、各杂质各约5μg的溶液，作为系统适用性溶液，
(2)供试品溶液的制备：取替格瑞洛原料药样品约25mg，精密称定，置25mL容量瓶中，加溶剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；
(3)对照溶液的制备：精密量取适量替格瑞洛对照品，用35％乙腈溶液稀释制成每1ml中约含5μg的溶液作为对照溶液(1)，精密量取替格瑞洛对照品5ml，置50ml量瓶中，用35％乙腈溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液(2)；
(4)精密量取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；精密量取对照溶液(2)10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；精密量取供试品溶液与对照溶液(1)各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；
(5)根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供试品溶液中有关物质的含量。
其中，步骤3，对照溶液的制备：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得到替格瑞洛对照品；
其中，所述液相色谱的色谱条件如下：
色谱柱：AgilentZorbaxEclipseXDB-C18(150×4.6mm,5μm,P/N:993967-902)；
流动相：流动相A：10mmol/L磷酸盐缓冲液(取二水合磷酸二氢钠约1.56g，加水900ml使溶解，用磷酸调节pH值至3.0-4.0，加水稀释成1000ml)，
流动相B：选自甲醇、乙腈中的一种；
梯度洗脱程序：
检测波长：242nm；
柱温：30℃-40℃；
流速：1ml/min；
进样量10μL；
溶剂：甲醇-水或乙腈-水。
通过以下实验进一步说明本发明的有益效果：
实验一、系统适用性试验
取羟基物、氨基物、亚砜1和亚砜2、砜、光降解物、五元环羟基物、转位产物、乙酯化物、过程中间体3、替格瑞洛对照品适量，加水溶解，制成含有羟基物、氨基物、亚砜1和亚砜2、砜、光降解物、五元环羟基物、转位产物、乙酯化物、过程中间体3浓度为5μg/ml、替格瑞洛浓度为200μg/ml的样品作为系统适用性溶液，进样测定。
表2系统适用性试验结果
杂质名称 浓度(μg/ml) 相对保留时间 分离度
羟基物 5 0.16 >2
氨基物 5 0.25 >2
亚砜物1 5 0.48 >2
亚砜物2 5 0.49 1.05
砜 5 0.56 >26 -->
光降解物 5 0.77 >2
五元环羟基物 5 0.93 >2
替格瑞洛 200 1.00 >2
转位产物 5 1.13 1.51
乙酯物 5 1.45 >2
过程中间体3 5 1.63 >2
从上表中结果我们可以看出：各色谱峰之间的峰面积相对标准偏差符合规定。
实验二、专属性试验
2.1干扰及定位试验
分别取供试品溶液、各杂质溶液、空白溶剂分别进样，各杂质与主峰均能达到完全分离，且空白溶剂不干扰测定。
2.2破坏性实验
替格瑞洛原料药在强制降解试验前后的降解杂质对比如下：
A.氧化降解：
将取替格瑞洛1g溶于100mL甲醇中，向此溶液中缓慢滴加10％的过氧化氢溶液10mL。滴加完毕30分钟后，取替格瑞洛氧化破坏后的溶液过0.22μm粒径的微孔滤膜进行样品测试，并与破坏前同浓度的样品进行对比。结果见表3。
表3替格瑞洛样品氧化前后杂质情况对比表
两个亚砜杂质 替格瑞洛砜
150201(氧化前) 0.09％ 0.03％
150201(氧化后) 14％ 2％
B、酸降解
将取替格瑞洛1g溶于100mL甲醇中，向此溶液中缓慢滴加10％的盐酸溶液10mL。滴加完毕30分钟后，取替格瑞洛酸破坏后的溶液过0.22μm粒径的微孔滤膜进行样品测试，并与破坏前同浓度的样品进行对比。结果见表4。
表4替格瑞洛样品酸破坏后杂质情况对比表
氨基物杂质 转位杂质
150201(酸破坏前) 0.001％ 0.002％
150201(酸破坏后) 0.05％ 1％
C、高温降解
将取替格瑞洛1g加热熔融，冷却至室温后以甲醇溶解，配制成5μg每mL的溶液进行高温前后样品的杂质情况比较。结果见表5。
表5替格瑞洛加热破坏的杂质情况对比表
氨基物杂质 转位杂质
150201(高温前) 0.001％ 0.002％
150201(高温后) 0.66％ 4.58％
由图可以看出，在本法色谱条件下，能够很好地检测出破坏后的各有关物质及降解产物，且杂质峰可分离完全。
因此，采用上述色谱条件来测定本品的有关物质及其降解产物可行。
实验三、检测限定量限验证
考虑到梯度洗脱基线漂移的影响，单一阶段的水平基线不代表整个洗脱过程的灵敏度，因此，根据浓度为0.2μg/mL的混合溶液连续进样六次，所得各成分峰面积的标准差(SD)进行了灵敏度的推算，结果见表6。根据信噪比(信噪比由工作站自动计算，表格中数据为信噪比最低的结果)计算，各成分的最小定量限在0.1～0.8μg/mL的水平；按照峰面积积分的相对标准偏差计算，以此分析方法测定各成分的最小定量限均可达到0.1μg/mL～0.3μg/mL的水平，相当于供试品溶液1mg/mL标示浓度的0.01％～0.03％，考虑到不同分析批之间的误差，对此方法设定了0.02％的报告阈。
表6各成分检测限和定量限的计算
成分 浓度 信噪比
羟基物 0.208 5.7
氨基物 0.226 18.2
亚砜物1 0.129 5.4
亚砜物2 0.089 3.4
砜 0.221 7.4
光降解物 0.204 3.5
五元环羟基物 0.206 3.5
替格瑞洛 0.203 3.9
转位杂质 0.210 2.7
乙酯物 0.207 7.1
过程中间体3 0.214 8.2
实验四、线性验证
取各杂质及替格瑞洛在相当于供试品浓度的0.04％～0.6％进行了线性实验，并将浓度与峰面积进行线性回归。以替格瑞洛线性斜率与各杂质线性斜率的比值作为相对响应因子。结果显示，各成分在供试品浓度的0.04％～0.6％之间，浓度与峰面积线性关系良好，相关系数r2均大于0.999，符合验证要求。
表7线性关系试验结果表(n＝6，浓度：μg/ml)
实验五、重复性
在标准曲线的测定中，浓度约为1μg/mL的混合标准溶液连续进样六次，各成分峰面积的相对标准偏差见表5，在相当于供试品溶液浓度0.1％水平的各成分连续进样的精密度都可以达到10％的验收标准。按原色谱条件进样，重复6次，记录峰面积，结果见表8。
表8混合标准溶液(1μg/mL)连续进样的重复性
结果表明，重复性良好。
实验六、溶液稳定性
取140502批样品配制成供试品溶液在冷藏条件下的同一分析批内进行了重复进样，样品在连续进样六次后，分别在第6小时、第12小时和第30小时再次进样，表9中列出了主要的潜在降解产物氨基物和亚砜、以及未知杂质的的峰面积变化，和总杂质的测定结果，验证了供试品溶液在避光、冷藏条件下至少30小时内的稳定性。
表9供试品溶液在相同分析批中30小时的测定结果
试验七、耐用性
取供试品溶液分别在不同色谱柱条件下进样，记录分离度、柱效并计算含量。结果见表10，流动相中有机相比例变化对结果影响较小，其它条件变化对结果基本无影响，表明系统耐用性良好。
表10不同色谱柱进行流速调整后各成分的洗脱行为
通过上述实验结果证明，本发明的检测方法能够准确有效地检出替格瑞洛的有关物质，提高检测的精密度和准确性，同时该检测方法还具有重复性好和稳定性好等特点。
本发明的检测方法与现有方法相比较，可以有效地检出样品的有关物质，并通过加校正因子的自身对照法计算各已知杂质的含量，准确地控制产品相关杂质，提高了产品的质量，增强产品的安全性和可靠性。
附图说明
附图1：替格瑞洛原料药合成路线；
附图2：替格瑞洛及杂质标准品系统适用性高效液相色谱图；
具体实施方式
通过以下具体实施例对本发明作进一步的说明，但不用于限制本发明。
对于替格瑞洛的有关物质，行业标准规定：
供试品溶液色谱图中，转位产物(相对保留时间约为1.13)不得大于对照溶液主峰面积的0.3倍(0.15％)；
亚砜1(相对保留时间约为0.49)和亚砜2(相对保留时间约为0.50)的峰面积之和不得大于对照溶液主峰面积的0.4倍(0.2％)；
氨基物(相对保留时间约为0.25)按校正后的峰面积计算(乘以相对响应因子0.5)不得大于对照溶液主峰面积的0.3倍(0.15％)；
其余单个杂质的峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.2倍(0.1％)；
总杂质以各已知杂质和未知杂质的总量计，不得过0.5％。
实施例1、检测方法
步骤一，系统适用性溶液：称取替格瑞洛、羟基物、氨基物、亚砜1和亚砜2、砜、光降解物、五元环羟基物、转位产物、乙酯化物、过程中间体3，同置于25ml量瓶中，加水适量使溶解，制成每1ml中含替格瑞洛0.2mg、各杂质各约5μg的溶液，作为系统适用性溶液，要求替格瑞洛峰与转位产物峰的分离度应大于4.0。
步骤二，供试品溶液取替格瑞洛原料药样品约25mg，精密称定，置25mL容量瓶中，加溶剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(约1mg/mL)。
步骤三，对照溶液精密量取适量替格瑞洛对照品，用35％乙腈溶液稀释制成每1ml中约含5μg的溶液作为对照溶液(1)，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用35％乙腈溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液(2)，对照溶液(2)作灵敏度检查，要求主成分峰信噪比应大于10。
步骤四，精密量取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，替格瑞洛峰与转位产物峰的分离度应大于4.0；精密量取对照溶液(2)10μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，主成分峰信噪比应大于10；精密量取供试品溶液与对照溶液(1)各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
步骤五，根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供试品溶液中有关物质的含量；
其中，液相色谱条件如下：
色谱柱AgilentZorbaxEclipseXDB-C18(150×4.6mm,5μm,P/N:993967-902)；
流动相流动相A：10mmol/L磷酸盐缓冲液(取二水合磷酸二氢钠约1.56g，加水900ml使溶解，用磷酸调节pH值至3.0±0.2，加水稀释成1000ml)
流动相B：乙腈
梯度洗脱程序：
计算公式：
杂质含量(％)＝A×RRF/(AR×N)×100
式中：A为供试品溶液中杂质峰面积；
AR为对照溶液中主成分峰面积；
N为对照溶液稀释倍数；
RRF为杂质相对响应因子。
应用此方法对六个批次的替格瑞洛原料药进行了检测，结果如下表所示：
表6：不同批次的替格瑞洛产品的有关物质测定情况
实施例2、检测方法
步骤一，系统适用性溶液：称取替格瑞洛、羟基物、氨基物、亚砜1和亚砜2、砜、光降解物、五元环羟基物、转位产物、乙酯化物、过程中间体3，同置于25ml量瓶中，加水适量使溶解，制成每1ml中含替格瑞洛0.2mg、各杂质各约5μg的溶液，作为系统适用性溶液，要求替格瑞洛峰与转位产物峰的分离度应大于4.0。
步骤二，供试品溶液取替格瑞洛原料药样品约25mg，精密称定，置25mL容量瓶中，加溶剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(约1mg/mL)。
步骤三，对照溶液精密量取适量，用35％乙腈溶液稀释制成每1ml中约含5μg的溶液作为对照溶液(1)，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用35％乙腈溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液(2)。对照溶液(2)作灵敏度检查，要求主成分峰信噪比应大于10。
步骤四，精密量取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，替格瑞洛峰与转位产物峰的分离度应大于4.0；精密量取对照溶液(2)10μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，主成分峰信噪比应大于10；精密量取供试品溶液与对照溶液(1)各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
步骤五，根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供试品溶液中有关物质的含量；
其中，液相色谱条件如下：
色谱柱AgilentZorbaxEclipseXDB-C18(150×4.6mm,5μm,P/N:993967-902)；
流动相流动相A：10mmol/L磷酸盐缓冲液(取二水合磷酸二氢钾约1.56g，加水900ml使溶解，用磷酸调节pH值至4.0±0.2，加水稀释成1000ml)
流动相B：甲醇
梯度洗脱程序：
有关物质含量的计算公式：
杂质含量(％)＝A×RRF/(AR×N)×100
式中：A为供试品溶液中杂质峰面积；
AR为对照溶液中主成分峰面积；
N为对照溶液稀释倍数；
RRF为杂质相对响应因子。
实施例3、含量检测方法
步骤一，系统适用性溶液：称取替格瑞洛、羟基物、氨基物、亚砜1和亚砜2、砜、光降解物、五元环羟基物、转位产物、乙酯化物、过程中间体3，同置于25ml量瓶中，加水适量使溶解，制成每1ml中含替格瑞洛0.2mg、各杂质各约5μg的溶液，作为系统适用性溶液，要求替格瑞洛峰与转位产物峰的分离度应大于4.0。
步骤二，供试品溶液取本品约25mg，精密称定，置25mL容量瓶中，加溶剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(约1mg/mL)。
步骤三，对照溶液精密量取适量，用35％乙腈溶液稀释制成每1ml中约含5μg的溶液作为对照溶液(1)，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用35％乙腈溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液(2)。对照溶液(2)作灵敏度检查，要求主成分峰信噪比应大于10。
步骤四，精密量取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，替格瑞洛峰与转位产物峰的分离度应大于4.0；精密量取对照溶液(2)10μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，主成分峰信噪比应大于10；精密量取供试品溶液与对照溶液(1)各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
步骤五，根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供试品溶液中有关物质的含量；
其中，液相色谱条件如下：
色谱柱AgilentZorbaxEclipseXDB-C18(150×4.6mm,5μm,P/N:993967-902)；
流动相流动相A：10mmol/L磷酸盐缓冲液(取二水合磷酸二氢铵约1.62g，加水900ml使溶解，用磷酸调节pH值至3.5±0.2，加水稀释成1000ml)
流动相B：甲醇
梯度洗脱程序：
有关物质含量的计算公式：
杂质含量(％)＝A×RRF/(AR×N)×100
式中：A为供试品溶液中杂质峰面积；
AR为对照溶液中主成分峰面积；
N为对照溶液稀释倍数；
RRF为杂质相对响应因子。

Claims (10)

1.一种替格瑞洛的有关物质的含量检测方法，包括以下步骤：
(1)系统适用性溶液制备：取羟基物、氨基物、亚砜1和亚砜2、砜、光降解物、五元环羟基物、转位产物、乙酯化物、过程中间体3及替格瑞洛配制成系统适用性溶液；
(2)供试品溶液制备：取替格瑞洛原料药配制成供试品溶液；
(3)对照溶液的制备：取供试品溶液配制成对照溶液；
(4)分别将系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，得到色谱图；
(5)根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供试品溶液中有关物质的含量；
其中，所述液相色谱的色谱条件如下：
色谱柱：AgilentZorbaxEclipseXDB-C18；
流动相：流动相A：10mmol/L磷酸盐缓冲液，流动相B：选自甲醇或乙腈，进行梯度洗脱。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)系统适应性溶液的制备：称取替格瑞洛、羟基物、氨基物、亚砜1和亚砜2、砜、光降解物、五元环羟基物、转位产物、乙酯化物、过程中间体3，同置于25ml量瓶中，加水适量使溶解，再加水稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含替格瑞洛0.2mg、各杂质各约5μg的溶液，作为系统适用性溶液。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)供试品溶液的制备：取替格瑞洛原料药样品约25mg，精密称定，置25mL容量瓶中，加溶剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)对照溶液的制备：精密量取适量替格瑞洛对照品，用35％乙腈溶液稀释制成每1ml中约含5μg的溶液作为对照溶液(1)，精密量取替格瑞洛对照品5ml，置50ml量瓶中，用35％乙腈溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液(2)。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(4)精密量取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；精密量取对照溶液(2)10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；精密量取供试品溶液与对照溶液(1)各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，液相色谱的色谱条件如下：
色谱柱：AgilentZorbaxEclipseXDB-C18，型号为：150×4.6mm,5μm；
流动相：
流动相A：10mmol/L磷酸盐缓冲液；
流动相B：选自甲醇或乙腈；
梯度洗脱过程如下：
检测波长：242nm；
流速：1.0ml/min；
进样量10μL；
柱温：30℃-40℃。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)系统适用性溶液制备：称取替格瑞洛、羟基物、氨基物、亚砜1和亚砜2、砜、光降解物、五元环羟基物、转位产物、乙酯化物、过程中间体3，同置于25ml量瓶中，加水适量使溶解，制成每1ml中含替格瑞洛0.2mg、各杂质各约5μg的溶液，作为系统适用性溶液；
(2)供试品溶液制备：取替格瑞洛原料药样品约25mg，精密称定，置25mL容量瓶中，加溶剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；
(3)对照溶液的制备：精密量取适量替格瑞洛对照品，用35％乙腈溶液稀释制成每1ml中约含5μg的溶液作为对照溶液(1)，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用35％乙腈溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液(2)；
(4)精密量取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，替格瑞洛峰与转位产物峰的分离度应大于4.0；精密量取对照溶液(2)10μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，主成分峰信噪比应大于10；精密量取供试品溶液与对照溶液(1)各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；
(5)根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供试品溶液中有关物质的含量；
其中，液相色谱条件如下：
色谱柱AgilentZorbaxEclipseXDB-C18，型号150×4.6mm,5μm,P/N:993967-902；
流动相流动相A：10mmol/L磷酸盐缓冲液
流动相B：乙腈
梯度洗脱程序：
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)系统适用性溶液制备：称取替格瑞洛、羟基物、氨基物、亚砜1和亚砜2、砜、光降解物、五元环羟基物、转位产物、乙酯化物、过程中间体3，同置于25ml量瓶中，加水适量使溶解，制成每1ml中含替格瑞洛0.2mg、各杂质各约5μg的溶液，作为系统适用性溶液，
(2)供试品溶液制备：取替格瑞洛原料药样品约25mg，精密称定，置25mL容量瓶中，加溶剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，
(3)对照溶液的制备：精密量取适量，用35％乙腈溶液稀释制成每1ml中约含5μg的溶液作为对照溶液(1)，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用35％乙腈溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液(2)，
(4)精密量取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，替格瑞洛峰与转位产物峰的分离度应大于4.0；精密量取对照溶液(2)10μl，注入液相色谱仪；精密量取供试品溶液与对照溶液(1)各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，
(5)根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供试品溶液中有关物质的含量；
其中，液相色谱条件如下：
色谱柱AgilentZorbaxEclipseXDB-C18(150×4.6mm,5μm,P/N:993967-902)；
流动相流动相A：10mmol/L磷酸盐缓冲液
流动相B：甲醇
梯度洗脱程序：
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)系统适用性溶液制备：称取替格瑞洛、羟基物、氨基物、亚砜1和亚砜2、砜、光降解物、五元环羟基物、转位产物、乙酯化物、过程中间体3，同置于25ml量瓶中，加水适量使溶解，制成每1ml中含替格瑞洛0.2mg、各杂质各约5μg的溶液，作为系统适用性溶液，
(2)供试品溶液制备：取本品约25mg，精密称定，置25mL容量瓶中，加溶剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，
(3)对照溶液的制备：精密量取适量，用35％乙腈溶液稀释制成每1ml中约含5μg的溶液作为对照溶液(1)，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用35％乙腈溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液(2)，
(4)精密量取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，替格瑞洛峰与转位产物峰的分离度应大于4.0；精密量取对照溶液(2)10μl，注入液相色谱仪；精密量取供试品溶液与对照溶液(1)各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，
(5)根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供试品溶液中有关物质的含量；
其中，液相色谱条件如下：
色谱柱AgilentZorbaxEclipseXDB-C18(150×4.6mm,5μm,P/N:993967-902)；
流动相流动相A：10mmol/L磷酸盐缓冲液
流动相B：甲醇
梯度洗脱程序：
10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述羟基物、氨基物、亚砜1和亚砜2、砜、光降解物、五元环羟基物、转位产物、乙酯化物、过程中间体3及替格瑞洛结构式如下：
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107976497A (zh) * 2017-11-23 2018-05-01 重庆华邦制药有限公司 替格瑞洛中间体1的合成反应程度测定方法及应用
CN110698482A (zh) * 2019-10-29 2020-01-17 株洲千金药业股份有限公司 一种s型手性亚砜类化合物的制备方法
CN112326836A (zh) * 2020-11-05 2021-02-05 泓博智源(开原)药业有限公司 一种定量测定替格瑞洛中间体tkg中二聚体杂质的方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012063126A2 (en) * 2010-11-09 2012-05-18 Actavis Group Ptc Ehf Improved processes for preparing pure (3ar,4s,6r,6as)-6-amino-2,2-dimethyltetrahdro-3ah-cyclopenta[d] [1,3]-dioxol-4-ol and its key starting material
CN104250251A (zh) * 2013-06-25 2014-12-31 上海京新生物医药有限公司 一种替格瑞洛的制备方法
CN105055351A (zh) * 2015-08-03 2015-11-18 天津红日药业股份有限公司 一种替格瑞洛片剂组合物
CN105092768A (zh) * 2014-05-21 2015-11-25 天津市汉康医药生物技术有限公司 一种分析分离替格瑞洛中间体的异构体杂质的方法
CN105237540A (zh) * 2015-09-21 2016-01-13 南京正大天晴制药有限公司 一种替格瑞洛有关物质的制备方法、检测方法及用途
CN105301142A (zh) * 2015-11-28 2016-02-03 重庆植恩药业有限公司 一种采用高效液相色谱检测替格瑞洛及其有关物质的方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012063126A2 (en) * 2010-11-09 2012-05-18 Actavis Group Ptc Ehf Improved processes for preparing pure (3ar,4s,6r,6as)-6-amino-2,2-dimethyltetrahdro-3ah-cyclopenta[d] [1,3]-dioxol-4-ol and its key starting material
CN104250251A (zh) * 2013-06-25 2014-12-31 上海京新生物医药有限公司 一种替格瑞洛的制备方法
CN105092768A (zh) * 2014-05-21 2015-11-25 天津市汉康医药生物技术有限公司 一种分析分离替格瑞洛中间体的异构体杂质的方法
CN105055351A (zh) * 2015-08-03 2015-11-18 天津红日药业股份有限公司 一种替格瑞洛片剂组合物
CN105237540A (zh) * 2015-09-21 2016-01-13 南京正大天晴制药有限公司 一种替格瑞洛有关物质的制备方法、检测方法及用途
CN105301142A (zh) * 2015-11-28 2016-02-03 重庆植恩药业有限公司 一种采用高效液相色谱检测替格瑞洛及其有关物质的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HASSANE SADOU YAYE ET AL.: "Identification of the major degradation pathways of ticagrelor", 《JOURNAL OF PHARMACEUTICAL AND BIOMEDICAL ANALYSIS》 *
曾志旋 等: "替格瑞洛的合成工艺改进", 《化学研究与应用》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107976497A (zh) * 2017-11-23 2018-05-01 重庆华邦制药有限公司 替格瑞洛中间体1的合成反应程度测定方法及应用
CN107976497B (zh) * 2017-11-23 2020-11-10 重庆华邦制药有限公司 替格瑞洛中间体1的合成反应程度测定方法及应用
CN110698482A (zh) * 2019-10-29 2020-01-17 株洲千金药业股份有限公司 一种s型手性亚砜类化合物的制备方法
CN112326836A (zh) * 2020-11-05 2021-02-05 泓博智源(开原)药业有限公司 一种定量测定替格瑞洛中间体tkg中二聚体杂质的方法

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