CN103467412B - 用于痛风的药物化合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于痛风的药物化合物。该药物化合物具有以下式I所示结构。本发明还涉及制备式I药物化合物的方法该方法包括使用有机溶剂对式I化合物进行精制的步骤。本发明药物化合物具有良好的药学性质。

Description

用于痛风的药物化合物

技术领域

本发明涉及医药技术领域，涉及一种黄嘌呤氧化酶抑制剂非布司他，特别是用于痛风的药物化合物，特别是涉及一种稳定的非布司他，还涉及由该非布司他制备的药物组合物，以及该该非布司他的制备方法。本发明提供的非布司他具有优良的药学性质。

背景技术

高尿酸血症是由于尿酸产生增多和/或肾尿酸分泌减少所致，它是诱发痛风的最危险的因素。使用药物降低血内尿酸浓度是预防痛风发生的常用方法之一，这类药物包括可以阻断肾小管腔膜对尿酸吸收的促尿酸尿药和黄嘌呤氧化酶/黄嘌呤脱氢酶抑制剂。但是，促尿酸尿药禁用于肾功能障碍病人，而具有正常肾功能的病人用此类药物则会导致尿碱化；别嘌醇则是目前唯一上市的黄嘌呤氧化酶/黄嘌呤脱氢酶抑制剂，但它仅用于下列3种病人：促尿酸药不能使其血内尿酸浓度低于70mg/L的病人、对促尿酸药不能耐受的病人及由于尿酸产生增多导致痛风同时伴有肾功能障碍的病人，而且别嘌醇有明显的不良反应，如肝炎、肾病和过敏反应等。

鉴于对黄嘌呤氧化酶的抑制是预防痛风发生的机制，因而研究人员已把目光瞄准较别嘌醇更为安全有效的药物开发。回顾近两年痛风治疗药物市场，不难看出在这一领域很难见到新品上市，市场依然以别嘌呤醇和苯溴马隆为主。这两种药都是缓解期用药，前者以抑制尿酸生成为主，后者以促进排泄为主。

非布司他(febuxostat)，亦称非布索坦，化学名：2-[3-氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸，英文名：2-[3-cyano-4-(2-methylpropoxy)phenyl]-4-methylthiazole-5-carboxylic acid，其分子式为：C₁₆H₁₆N₂O₃S，分子量为316.38，化学结构式为：

非布司他是帝人(Teijin)公司合成的新一代抗痛风药物，显示出极好的活性，它是一种选择性黄嘌呤氧化酶/黄嘌呤脱氢酶抑制剂，具有良好的应用前景。帝人公司于2004年4月在日本递交了非布司他片20～40mg剂量的申请，非布司他化合物已被特许给了欧洲的Ipsen公司及韩国的SK Chemical公司开发。2008年5月欧盟批准Ipsen公司的非布司他(Adenuric)上市，用于治疗痛风的慢性高尿酸血症。2009年2月FDA批准TAKEDA公司的非布司他(ULORIC)在美国上市，规格40mg、80mg。

抗痛风药目前品种不多，临床治疗主要以秋水仙碱、非甾体类抗炎药、激素、促进尿酸排泄药(如丙磺舒、磺吡酮及苯溴马隆)和抑制尿酸合成药(别嘌呤醇)为主。这些药物在治疗上都有缺陷。疗效差、副作用大成为其临床应用的瓶颈。而非布司他的有效性和特异性均强于目前治疗痛风的标准药物别嘌醇，是40年来首个治疗高尿酸血症的新药。

非布司他是一个非嘌呤类黄嘌呤氧化酶抑制剂，它的基本作用机制与别嘌醇相仿。然而，别嘌醇伴随明显的过敏反应，非布司他却没有显示与别嘌醇具有交叉反应。而且，非布司他用于肾衰患者具有较高安全性。关于有效性方面，非布司他80mg/d显示对于尿酸的降低优于别嘌醇300mg/d。

一项多中心、双盲、随机临床研究评价了非布司他的安全性和对痛风的疗效。总共有136名男性和17名女性痛风病人随机接受安慰剂或本品(40、80或120mg/d)，4周后检测发现，本品各剂量组病人血清尿酸(sUA)浓度较治疗前均显著降低，按剂量由低至高各组分别平均降低37%、44%和59%，而安慰剂组病人sUA浓度仅降低了2%；且安慰剂组及由低至高各剂量组中sUA浓度降到60mg/L以下的病人分别占0%、56%、76%和94%；绝大多数病人坚持完成了试验，非布司他和安慰剂组不良反应发生率相近，分别为54%和50%，并且这些不良反应大多轻微，具有自限性。

与别嘌醇一样，非布司他可阻断尿酸的形成，而尿酸结晶沉积在痛风病人的关节处，引起疼痛性肿胀。但是，别嘌醇会抑制一系列参与尿酸通路的酶，非布司他则仅抑制黄嘌呤氧化酶，因而其作用更具特异性。TAP公司的MacDonald博士认为，这种作用差异在理论上使得非布司他要比别嘌醇更为安全。别嘌醇可致大约1%～2%的病人出现副作用，其中25%甚至是致命的。尤其是，本品主要在肝脏代谢，可能更适用于肾衰病人，而别嘌醇是经由肾排泄。

非布司他是一种不吸潮的白色结晶粉易，溶于二甲基甲酰胺，溶于二甲基亚砜；微溶于乙醇；略微溶于甲醇和乙腈，基本不溶于水。熔点范围205℃至208℃。

现有技术公开了诸多制备非布司他的方法。例如，中国专利申请号200910170029.3(美迪康信)公开了一种合成非布司他的改进方法，其是以对氰基苯酚为起始原料制备非布司他，首先与2-溴乙酰乙酸乙酯反应合环生成噻唑环；运用达夫反应在酚羟基的邻位引入醛基，生成醛基取代化物，然后4位羟基烷基化，再将3位醛基还原成氰基后得到关键中间体2-(3-氰基-4-异丁氧基苯基)-4-甲基-5-噻唑甲酸乙酯，最后在碱性条件下水解得到非布司他。据信该方法的整个过程中不涉及高温、高压、易燃、易爆、剧毒等操作，原材料和试剂均为价格便宜的普通试剂，市场上很容易获得，各步骤均可得到固体产物，易于转运和储藏，成本大大降低，非常适合工业化大生产。

中国专利申请号201010022543.5(药源药物)涉及一种非布索坦(Febuxostat)的制备方法该方法中，以便宜易得的2,4-二卤代苯酚(化合物1)为起始原料，经过烷基化、氰化、硫代甲酰化、环合、脱保护的新路线进行非布索坦的合成。据信该方法路线短，并且利用毒性低的氰化亚铜进行氰化，避免了使用剧毒的氰化钾、氰化钠等化合物，因此工艺安全性大大提高。

中国专利申请号201210471769.2(葛长乐)涉及一种非布索坦的新工艺制法，包括2-羟基-5-氰基-苯甲醛与NaSH在溶剂中反应得到3-醛基-4-羟基硫代苯甲酰胺；然后3-醛基-4-羟基硫代苯甲酰胺与2-卤代乙酰乙酸乙酯反应，闭环得到2-(3-醛基-4-羟基苯基)-4-甲基-5-乙氧基羰基噻唑；然后与羟胺在甲酸溶液中反应得到2-(3-氰基-4-羟基苯基)-4-甲基-5-乙氧基羰基噻唑；接着与卤代异丁烷在碳酸钾作用下，得到2-(3-醛基-4-异丁氧基苯基)-4-甲基-5-乙氧基羰基噻唑；最后用氢氧化钠水解脱去酯基，得到产品非布索坦。据信该方法工艺较为简单，重现性好，所使用的原料和试剂容易获得且毒性小，避开了氰化物的使用，副产物少，污染小、收率高、成本低、生产周期短，质量易于控制，适合工业化生产。

中国专利申请号201210518579.1(华润赛科)涉及一种高纯度非布司他的制备方法，该方法使用2-(3-甲酰基-4-羟基苯基)-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯与精馏后的溴代异丁烷成醚，然后经氰化、水解得到非布司他粗品，重结晶后得到高纯度的非布司他。按照本方法制备的非布司他中，杂质2-[3-氰基-4-正丙氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸含量小于0.10%。

中国专利申请号201210556647.3(悦康凯悦)涉及一种非布司他的制备方法，其是向反应容器中加入29.5～30.5kg式(I)化合物、20～25L DMF，搅拌溶解，加入无水碳酸钾4.15～4.25kg、溴代异丁烷3.3～3.5kg，升温至94～97℃反应5～7h；反应结束后冷却至室温，加水22～24L后，用相同体积的乙酸乙酯分3次萃取，合并有机层，浓缩得浅黄色固体，用DMF24～26L重结晶；抽滤，滤饼用DMF洗涤，干燥得白色固体，即式(II)化合物。据信该方法制备工艺简捷，适合于工业化生产，收率较高，有效缩短反应时间。同时，精制工艺较为简捷，产品纯度较高。

中国专利申请号201310220003.1(华南理工)公开了一种非布索坦的制备方法，以4-羟基苯甲腈和硫代乙酰胺为原料，在盐酸溶液中反应制得4-羟基硫代苯甲酰胺，将其与2-氯乙酰乙酸乙酯反应制得2-(4-羟基苯基)-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯，将所得化合物在甲烷磺酸和三氟乙酸混酸体系下与六亚甲基四胺反应制得2-(3-甲酰基-4-羟基苯基)-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯，将该化合物与盐酸羟胺、碳酸钾、溴代异丁烷等在极性质子性溶剂中“一锅法”合成2-(3-腈基-4-异丁氧基苯基)-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯，最后在碱性条件下水解制得目标产物非布索坦。据信该方法总收率提高至66%，分离步骤减少，不涉及任何剧毒物质，环境污染少。

众所周知，药物原料或其制剂中的单一杂质需要控制在一定水平以内，例如0.5%以下、0.25%以下、0.2%以下或0.1%以下等。在规定了其限度以后，药品在其贮藏有效期内该杂质的量允许有微量的但不能超过限度的增长。对于非布司他而言，其中杂质含量相对较低，例如201210518579.1中涉及的杂质2-[3-氰基-4-正丙氧基苯基]-4-甲基噻唑-5-甲酸可以达到0.1%以下，这样，通常而言，在原料和制剂的质量标准中，对于该杂质的限度可以定为例如“不得过0.2%”。已经发现，非布司他原料或其制剂在长期存放过程中，有某种特定的杂质显示随留样时间延长而增加的趋势，这种现象对于严格要求“质量可控”的医药品而言是非常不利的。

因此，本领域仍然期待有新的方法以获得具有良好药学性能的非布司他。

发明内容

本发明的目的在于为临床提供一种新的方法以获得具有良好药学性能的非布司他，例如期待获得的非布司他或其制剂具有良好的稳定性。本发明人发现，即使是不同工艺获得的非布司他原料药，经本发明方法处理后可以有效地使RRT3.55杂质降低到有意义的限度；而且降到该限度以下后，原料和由其制备的制剂中其它杂质例如RRT0.65杂质随药物贮藏时间的延长而不致显著增加。本发明基于此发现而得以完成。

为此，本发明第一方面提供了制备以下式I药物化合物的方法：

该方法包括使用有机溶剂对式I化合物进行精制的步骤。

本发明所述“药物化合物”其可作为药物制剂即药物组合物生产用的原料药，因此其亦可理解为式I化合物即非布司化的原料药。

根据本发明第一方面任一实施方案的方法，其包括使用有机溶剂对式I化合物进行重结晶以达到精制目的的步骤。

根据本发明第一方面任一实施方案的方法，其包括将式I化合物溶解于有机溶剂中，接着对溶液降温使式I化合物从溶剂中结晶的步骤。

根据本发明第一方面任一实施方案的方法，其包括将式I化合物在加热条件下溶解于有机溶剂中，接着对溶液降温使式I化合物从溶剂中结晶的步骤。在一个实施方案中，所述的加热是指以回流温度或稍低于回流温度的方式加热。在本文中，短语“稍低于回流温度”是指在低于回流温度10℃至回流温度的范围内。

根据本发明第一方面任一实施方案的方法，其包括将式I化合物在加热条件下溶解于有机溶剂中，接着对溶液降温至低于室温的温度下使式I化合物从溶剂中结晶的步骤。根据本发明第一方面任一实施方案的方法，其包括将式I化合物在加热条件下溶解于有机溶剂中，接着对溶液降温至0～25℃的温度下使式I化合物从溶剂中结晶的步骤。

根据本发明第一方面任一实施方案的方法，其中所述有机溶剂选自：甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、水、正丁醇、或其组合。

根据本发明第一方面任一实施方案的方法，其中所述有机溶剂是乙醇和乙腈的混合物。

根据本发明第一方面任一实施方案的方法，其中在所述有机溶剂中还添加有有机酸。

根据本发明第一方面任一实施方案的方法，其中在所述有机溶剂中还添加有选自下列的有机酸：甲酸、乙酸、冰乙酸。在一个实施方案中，所述有机酸是甲酸。

根据本发明第一方面任一实施方案的方法，其中所述有机溶剂中包括乙醇、乙腈和甲酸。在一个实施方案中，所述有机溶剂中乙醇、乙腈和甲酸的体积比为100：10～100：1～10，例如为100：10～60：1～8，例如为100：20～40：2～5。另外，式I化合物在加热条件下溶解于有机溶剂是以在所述加热条件下基本上达到最大溶解的程度进行溶解的，这也是化合物精制/结晶工艺中常规的操作。

根据本发明第一方面任一实施方案的方法，其特征在于式I化合物经乙醇、乙腈和甲酸的混合溶剂重结晶后，还进一步包括使用乙醇水溶液进行重结晶的步骤。在一个实施方案中，所述乙醇水溶液是70～99%乙醇溶液，例如75～95%乙醇溶液，例如80～90%乙醇溶液。已经发现，使用该乙醇水溶液进一步结晶可以有效地除去前面步骤中使用的甲酸。另外，使用该乙醇水溶液进一步结晶还可以获得CN1275126A(中国专利申请号99801366.8，帝人)实施例1所述的A晶型。当然，由于通过本发明的所述有机溶剂可以有效地除去RRT3.55杂质，由此获得的原料药还可以使用其它方法进行结晶例如参考文献已公开的方法获得其它多晶型。

根据本发明第一方面任一实施方案的方法，其所制得的式I药物化合物照以下【高效液相色谱法A】测定，其中相对保留时间在3.55±0.20处的杂质(在本发明中亦可称为RRT3.55杂质或称为RRT3.55；其它杂质亦可类似表示)相对于式I药物化合物而言含量低于0.5%(例如低于0.25%，例如低于0.2%)；

【高效液相色谱法A】：

A1)照中国药典2010年版二部附录ⅤD所载高效液相色谱法进行；

A2)色谱条件与系统适用性试验：以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；以0.1%磷酸溶液(用三乙胺调节pH值至3.10±0.05)-乙腈(57：43)为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表进行线性梯度洗脱：

时间(min)	A(%)	B(%)
			0	100	0
12	100	0
			40	60	40

流速约为每分钟1ml以使非布司他峰的保留时间在7～11分钟范围内，检测波长为219nm，柱温55℃；

A3)取供试品适量，精密称定，加乙腈-水(1：1)适量，超声溶解并定量稀释制成每1ml中约含非布司他500μg的溶液，必要时过滤，作为供试品溶液；精密量取该供试品溶液5ml置500ml量瓶中，用乙腈-水(1：1)稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；

A4)读取对照溶液色谱图中主成分(即式I化合物，在本发明其它处提及时亦具有相同含义)峰的峰面积；读取供试品溶液色谱图中主成分峰的峰面积，以及该色谱图中经面积归一化法计算峰面积百分数大于0.01%的杂质峰的峰面积，计算这些杂质峰相对于主成分峰的相对保留时间；

用下式计算在该供试品中，任意一个单一杂质其相对于式I化合物的含量：

用下式计算杂质的相对保留时间(在本发明中其可缩写为RRT)：

根据本发明第一方面任一实施方案的方法，其中所述以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱可以使用市场上可购得的各种品牌的色谱，以及它们的各种型号，只要可以使非布司他峰的保留时间在7～11分钟范围内即可，示例性的色谱柱可以是品牌为ZORBAX Eclipse XDB-C8的色谱柱，其型号例如可以是4.6*150mm，5μm。在本发明下文进行测试时，如未另外说明，所用的色谱柱均是ZORBAX Eclipse XDB-C8，4.6*150mm，5μm色谱柱。

根据本发明第一方面任一实施方案的方法，其所制得的式I药物化合物照本发明【高效液相色谱法A】测定，其中相对保留时间在0.65±0.10处的杂质(在本发明中亦可称为RRT0.65杂质或称为RRT0.65)相对于式I药物化合物而言含量低于0.5%(例如低于0.25%，例如低于0.2%)。

根据本发明第一方面任一实施方案的方法，其所制得的式I药物化合物照本发明【高效液相色谱法A】测定，其中相对保留时间在3.55±0.20处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.5%(例如低于0.25%，例如低于0.2%)；相对保留时间在0.65±0.10处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.5%(例如低于0.25%，例如低于0.2%)。

根据本发明第一方面任一实施方案的方法，其所制得的式I药物化合物照本发明【高效液相色谱法A】测定，其中相对保留时间在3.55±0.20处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.25%；相对保留时间在0.65±0.10处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.25%。

根据本发明第一方面任一实施方案的方法，其所制得的式I药物化合物照本发明【高效液相色谱法A】测定，其中相对保留时间在3.55±0.20处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.2%；相对保留时间在0.65±0.10处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.2%。

根据本发明第一方面任一实施方案的方法，其所制得的式I药物化合物在40℃条件下密封、避光放置6个月，计算在此条件下处置6个月后某杂质相对于0月时的含量增加百分数，其中RRT0.65杂质含量增加百分数低于200%，例如低于150%，例如低于100%，例如低于75%，例如低于50%。所述的术语“杂质含量增加百分数”是照下式计算的：

进一步地，本发明第二方面提供了以下式I药物化合物：

根据本发明第二方面任一项的药物化合物，其照以下【高效液相色谱法A】测定，其中相对保留时间在3.55±0.20处的杂质(在本发明中亦可称为RRT3.55杂质或称为RRT3.55；其它杂质亦可类似表示)相对于式I药物化合物而言含量低于0.5%(例如低于0.25%，例如低于0.2%)；

【高效液相色谱法A】：

A1)照中国药典2010年版二部附录ⅤD所载高效液相色谱法进行；

A2)色谱条件与系统适用性试验：以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；以0.1%磷酸溶液(用三乙胺调节pH值至3.10±0.05)-乙腈(57：43)为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表进行线性梯度洗脱：

时间(min)	A(%)	B(%)
			0	100	0
12	100	0
			40	60	40

流速约为每分钟1ml以使非布司他峰的保留时间在7～11分钟范围内，检测波长为219nm，柱温55℃；

A3)取供试品适量，精密称定，加乙腈-水(1：1)适量，超声溶解并定量稀释制成每1ml中约含非布司他500μg的溶液，必要时过滤，作为供试品溶液；精密量取该供试品溶液5ml置500ml量瓶中，用乙腈-水(1：1)稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；

A4)读取对照溶液色谱图中主成分(即式I化合物，在本发明其它处提及时亦具有相同含义)峰的峰面积；读取供试品溶液色谱图中主成分峰的峰面积，以及该色谱图中经面积归一化法计算峰面积百分数大于0.01%的杂质峰的峰面积，计算这些杂质峰相对于主成分峰的相对保留时间；

用下式计算在该供试品中，任意一个单一杂质其相对于式I化合物的含量：

用下式计算杂质的相对保留时间(在本发明中其可缩写为RRT)：

根据本发明第二方面任一项的药物化合物，其中所述以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱可以使用市场上可购得的各种品牌的色谱，以及它们的各种型号，只要可以使非布司他峰的保留时间在7～11分钟范围内即可，示例性的色谱柱可以是品牌为ZORBAX Eclipse XDB-C8的色谱柱，其型号例如可以是4.6*150mm，5μm。在本发明下文进行测试时，如未另外说明，所用的色谱柱均是ZORBAX Eclipse XDB-C8，4.6*150mm，5μm色谱柱。

根据本发明第二方面任一项的药物化合物，其照本发明【高效液相色谱法A】测定，其中相对保留时间在0.65±0.10处的杂质(在本发明中亦可称为RRT0.65杂质或称为RRT0.65)相对于式I药物化合物而言含量低于0.5%(例如低于0.25%，例如低于0.2%)。

根据本发明第二方面任一项的药物化合物，其照本发明【高效液相色谱法A】测定，其中相对保留时间在3.55±0.20处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.5%(例如低于0.25%，例如低于0.2%)；相对保留时间在0.65±0.10处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.5%(例如低于0.25%，例如低于0.2%)。

根据本发明第二方面任一项的药物化合物，其照本发明【高效液相色谱法A】测定，其中相对保留时间在3.55±0.20处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.25%；相对保留时间在0.65±0.10处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.25%。

根据本发明第二方面任一项的药物化合物，其照本发明【高效液相色谱法A】测定，其中相对保留时间在3.55±0.20处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.2%；相对保留时间在0.65±0.10处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.2%。

根据本发明第二方面任一项的药物化合物，其在40℃条件下密封、避光放置6个月，计算在此条件下处置6个月后某杂质相对于0月时的含量增加百分数，其中RRT0.65杂质含量增加百分数低于200%，例如低于150%，例如低于100%，例如低于75%，例如低于50%。所述的术语“杂质含量增加百分数”是照下式计算的：

根据本发明第二方面任一项的药物化合物，其是通过使用有机溶剂对式I化合物进行精制而获得的。

根据本发明第二方面任一项的药物化合物，其制备精制方法中，包括使用有机溶剂对式I化合物进行重结晶以达到精制目的的步骤。

根据本发明第二方面任一项的药物化合物，其制备精制方法中，包括将式I化合物溶解于有机溶剂中，接着对溶液降温使式I化合物从溶剂中结晶的步骤。

根据本发明第二方面任一项的药物化合物，其制备精制方法中，包括将式I化合物在加热条件下溶解于有机溶剂中，接着对溶液降温使式I化合物从溶剂中结晶的步骤。在一个实施方案中，所述的加热是指以回流温度或稍低于回流温度的方式加热。在本文中，短语“稍低于回流温度”是指在低于回流温度10℃至回流温度的范围内。

根据本发明第二方面任一项的药物化合物，其制备精制方法中，包括将式I化合物在加热条件下溶解于有机溶剂中，接着对溶液降温至低于室温的温度下使式I化合物从溶剂中结晶的步骤。根据本发明第二方面任一项的药物化合物，其制备方法中，包括将式I化合物在加热条件下溶解于有机溶剂中，接着对溶液降温至0～25℃的温度下使式I化合物从溶剂中结晶的步骤。

根据本发明第二方面任一项的药物化合物，其制备精制方法中，所述有机溶剂选自：甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、水、正丁醇、或其组合。

根据本发明第二方面任一项的药物化合物，其制备精制方法中，所述有机溶剂是乙醇和乙腈的混合物。

根据本发明第二方面任一项的药物化合物，其制备精制方法中，在所述有机溶剂中还添加有有机酸。

根据本发明第二方面任一项的药物化合物，其制备精制方法中，在所述有机溶剂中还添加有选自下列的有机酸：甲酸、乙酸、冰乙酸。在一个实施方案中，所述有机酸是甲酸。

根据本发明第二方面任一项的药物化合物，其制备精制方法中，所述有机溶剂中包括乙醇、乙腈和甲酸。在一个实施方案中，所述有机溶剂中乙醇、乙腈和甲酸的体积比为100：10～100：1～10，例如为100：10～60：1～8，例如为100：20～40：2～5。另外，式I化合物在加热条件下溶解于有机溶剂是以在所述加热条件下基本上达到最大溶解的程度进行溶解的，这也是化合物精制/结晶工艺中常规的操作。

根据本发明第二方面任一项的药物化合物，其制备精制方法中，式I化合物经乙醇、乙腈和甲酸的混合溶剂重结晶后，还进一步包括使用乙醇水溶液进行重结晶的步骤。在一个实施方案中，所述乙醇水溶液是70～99%乙醇溶液，例如75～95%乙醇溶液，例如80～90%乙醇溶液。已经发现，使用该乙醇水溶液进一步结晶可以有效地除去前面步骤中使用的甲酸。另外，使用该乙醇水溶液进一步结晶还可以获得CN1275126A(中国专利申请号99801366.8，帝人)实施例1所述的A晶型。当然，由于通过本发明的所述有机溶剂可以有效地除去RRT3.55杂质，由此获得的原料药还可以使用其它方法进行结晶例如参考文献已公开的方法获得其它多晶型。

进一步地，本发明第三方面提供了一种药物组合物，其中包含本发明第二方面任一项所述的药物化合物，以及任选的药学可接受的载体或辅料。

根据本发明第三方面任一实施方案的药物组合物，其是口服制剂或者注射制剂。

根据本发明第三方面任一实施方案的药物组合物，其是片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂(包括注射液和冷冻干燥粉针剂)、混悬剂、丸剂。

根据本发明第三方面任一实施方案的药物组合物，其是片剂，该片剂中包含本发明第二方面任一项所述的药物化合物，以及至少一种选自下列的药学可接受的载体或辅料：稀释剂(其例如乳糖、淀粉、微晶纤维素等)、崩解剂(其例如交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、交联聚维酮等)、粘合剂(其例如羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等)、润滑剂(其例如硬脂酸镁、滑石粉、二氧化硅、聚乙二醇等)。

根据本发明第三方面任一实施方案的药物组合物，其是片剂，其中包含本发明第二方面任一实施方案所述药物化合物，以及乳糖一水合物、微晶纤维素、羟基丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、二氧化硅和硬脂酸镁。

根据本发明第三方面任一实施方案的药物组合物，其是片剂，其中包含本发明第二方面任一实施方案所述药物化合物40重量份，以及乳糖一水合物20～60重量份、微晶纤维素20～60重量份、羟丙基纤维素3-30重量份、交联羧甲基纤维素钠2-15重量份、二氧化硅0.5-2重量份、和硬脂酸镁0.5-2重量份。

根据本发明第三方面任一实施方案的药物组合物，其是片剂，其中包含本发明第二方面任一实施方案所述药物化合物，以及微晶纤维素、预胶化淀粉、羧甲淀粉钠、聚维酮K30、硬脂酸镁。

根据本发明第三方面任一实施方案的药物组合物，其是片剂，其中包含本发明第二方面任一实施方案所述药物化合物40重量份，以及微晶纤维素60～120重量份、预胶化淀粉30～50重量份、羧甲淀粉钠5～15重量份、2～6重量份的聚维酮K30、硬脂酸镁0.5～2重量份。

根据本发明第三方面任一实施方案的药物组合物，其是片剂，并且其进一步被包衣。示例性的包衣材料例如购自卡乐康公司的Opadry II。衣层重可以是大约占片剂总重的1-4%。

根据本发明第三方面任一实施方案的药物组合物，其照以下【高效液相色谱法A】测定，其中相对保留时间在3.55±0.20处的杂质(在本发明中亦可称为RRT3.55杂质或称为RRT3.55；其它杂质亦可类似表示)相对于式I药物化合物而言含量低于0.5%(例如低于0.25%，例如低于0.2%)；

【高效液相色谱法A】：

A1)照中国药典2010年版二部附录ⅤD所载高效液相色谱法进行；

A2)色谱条件与系统适用性试验：以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；以0.1%磷酸溶液(用三乙胺调节pH值至3.10±0.05)-乙腈(57：43)为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表进行线性梯度洗脱：

时间(min)	A(%)	B(%)
			0	100	0
12	100	0
			40	60	40

流速约为每分钟1ml以使非布司他峰的保留时间在7～11分钟范围内，检测波长为219nm，柱温55℃；

A3)取供试品适量，精密称定，加乙腈-水(1：1)适量，超声溶解并定量稀释制成每1ml中约含非布司他500μg的溶液，必要时过滤，作为供试品溶液；精密量取该供试品溶液5ml置500ml量瓶中，用乙腈-水(1：1)稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；

A4)读取对照溶液色谱图中主成分(即式I化合物，在本发明其它处提及时亦具有相同含义)峰的峰面积；读取供试品溶液色谱图中主成分峰的峰面积，以及该色谱图中经面积归一化法计算峰面积百分数大于0.01%的杂质峰的峰面积，计算这些杂质峰相对于主成分峰的相对保留时间；

用下式计算在该供试品中，任意一个单一杂质其相对于式I化合物的含量：

用下式计算杂质的相对保留时间(在本发明中其可缩写为RRT)：

根据本发明第三方面任一实施方案的药物组合物，其中所述以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱可以使用市场上可购得的各种品牌的色谱，以及它们的各种型号，只要可以使非布司他峰的保留时间在7～11分钟范围内即可，示例性的色谱柱可以是品牌为ZORBAX Eclipse XDB-C8的色谱柱，其型号例如可以是4.6*150mm，5μm。在本发明下文进行测试时，如未另外说明，所用的色谱柱均是ZORBAX EclipseXDB-C8，4.6*150mm，5μm色谱柱。

根据本发明第三方面任一实施方案的药物组合物，其照本发明【高效液相色谱法A】测定，其中相对保留时间在0.65±0.10处的杂质(在本发明中亦可称为RRT0.65杂质或称为RRT0.65)相对于式I药物化合物而言含量低于0.5%(例如低于0.25%，例如低于0.2%)。

根据本发明第三方面任一实施方案的药物组合物，其照本发明【高效液相色谱法A】测定，其中相对保留时间在3.55±0.20处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.5%(例如低于0.25%，例如低于0.2%)；相对保留时间在0.65±0.10处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.5%(例如低于0.25%，例如低于0.2%)。

根据本发明第三方面任一实施方案的药物组合物，其照本发明【高效液相色谱法A】测定，其中相对保留时间在3.55±0.20处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.25%；相对保留时间在0.65±0.10处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.25%。

根据本发明第三方面任一实施方案的药物组合物，其照本发明【高效液相色谱法A】测定，其中相对保留时间在3.55±0.20处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.2%；相对保留时间在0.65±0.10处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.2%。

根据本发明第三方面任一实施方案的药物组合物，其在40℃条件下密封、避光放置6个月，计算在此条件下处置6个月后某杂质相对于0月时的含量增加百分数，其中RRT0.65杂质含量增加百分数低于200%，例如低于150%，例如低于100%，例如低于75%，例如低于50%。所述的术语“杂质含量增加百分数”是照下式计算的：

本发明的任一方面的任一实施方案，可以与其它实施方案进行组合，只要它们不会出现矛盾。此外，在本发明任一方面的任一实施方案中，任一技术特征可以适用于其它实施方案中的该技术特征，只要它们不会出现矛盾。

在本发明中，“%”的含义可根据具体使用环境而定，特别是其具有如2010年版中国药典二部凡例中“计量”项下第二十八条(4)款所述含义。

在本发明中，单独提及时，“乙醇”是指无水乙醇。

在本发明的任一方面的任一实施方案中，所述【高效液相色谱法A】中的色谱条件与系统适用性试验，必要时可以满足以下要求：取供试品溶液适量，于约15000lux光强处放置16～20小时，取10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，非布司他峰的保留时间约为7～11分钟，理论板数按非布司他峰计算应不低于3000，在相对非布司他峰保留时间约1.1处应出现杂质峰，与非布司他峰的分离度应符合要求。由此，在本发明中，尽管本发明人尚不清楚RRT3.55和RRT0.65两个特定杂质具体为何物，但是可通过本发明具体明确的【高效液相色谱法A】来定性表征。而这种表征方法是药学领域对原料药或者制剂质量标准所允许的，完全具备产业实用性。

在本发明中，确定各种物料(例如各种作为药物制剂用原料药即例如本发明的药物化合物、药物组合物例如药物制剂等)中非布司他或者其它杂质的含量时，以及确定这些物料中的色谱纯度时，可以采用下面的一些方法进行测定，例如下面的“含量测定法”、“有关物质检查法”、“溶出度测定法”，在本发明后文的实施例部分，如需要测定某些物料的含量、有关物质、溶出度、粉末X射线衍射，如未另外说明，均是照如下方法进行。

含量测定法(本法可用于测定原料药、药物组合物中非布司他的含量、溶出度等)：

采用高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录VD)测定：

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-磷酸盐缓冲溶液(取无水磷酸氢二钠5.8g，加水溶解，加入16.7g柠檬酸，并稀释至1000ml，调节pH至3.0)＝36:64为流动相；检测波长为284nm。理论板数按峰非布索坦计算应不小于4000；

对照品溶液的制备：取非布司他对照品约40mg，精密称定，置200ml量瓶中，加乙腈：水(36：64)适量，超声使溶解后稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml置100ml量瓶中，加乙腈：水(36：64)稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

供试品溶液制备：取约相当于非布司他40mg的待测试样，精密称定，置200ml量瓶中，加乙腈：水(36：64)适量，超声使溶解后稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml置100ml量瓶中，加乙腈：水(36：64)稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；溶出度试样可在过滤后直接用上述溶剂稀释至相当浓度后测定；

测定法：精密量取对照品溶液和供试品溶液各50ul。分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。

有关物质检查法(即【高效液相色谱法A】，本法可用于测定原料药或组合物中单 一杂质或总杂质的含量)：

【高效液相色谱法A】：

A1)照中国药典2010年版二部附录ⅤD所载高效液相色谱法进行；

A2)色谱条件与系统适用性试验：以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(具体测试中使用ZORBAX Eclipse XDB-C8，4.6*150mm，5μm色谱柱)；以0.1%磷酸溶液(用三乙胺调节pH值至3.10±0.05)-乙腈(57：43)为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表进行线性梯度洗脱：

时间(min)	A(%)	B(%)
			0	100	0
12	100	0
			40	60	40

流速约为每分钟1ml以使非布司他峰的保留时间在7～11分钟范围内，检测波长为219nm，柱温55℃；取供试品溶液适量，于约15000lux光强处放置16～20小时，取10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，非布司他峰的保留时间约为7～11分钟，理论板数按非布司他峰计算应不低于3000，在相对非布司他峰保留时间约1.1处应出现杂质峰，与非布司他峰的分离度应符合要求；

A3)取供试品(其可以是原料药例如本发明的药物化合物或者是药物制剂例如本发明的药物组合物；对于药物制剂，可预先研成细粉以方便处理；称量物料时以其中所含的活性成分非布司他计)适量，精密称定，加乙腈-水(1：1)适量，超声溶解并定量稀释制成每1ml中约含非布司他500μg的溶液，必要时过滤，作为供试品溶液；精密量取该供试品溶液5ml置500ml量瓶中，用乙腈-水(1：1)稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；

A4)读取对照溶液色谱图中主成分(即式I化合物，在本发明其它处提及时亦具有相同含义)峰的峰面积；读取供试品溶液色谱图中主成分峰的峰面积，以及该色谱图中经面积归一化法计算峰面积百分数大于0.01%的杂质峰的峰面积(即扣除峰面积百分数小于0.01%的杂质峰)，计算这些杂质峰相对于主成分峰的相对保留时间；

用下式计算在该供试品中，任意一个单一杂质其相对于式I化合物的含量：

用下式计算杂质的相对保留时间(在本发明中其可缩写为RRT)：

在本发明中，可按本领域技术人员公知的方法，通过各杂质峰的峰面积与对照溶液色谱图中主峰面积比较计算供试品中该杂质的含量；例如对照溶液色谱图中主峰面积为1000(其相当于供试品溶液浓度的1%)，如果在供试品溶液色谱图中某杂质的峰面积为500则该杂质在供试品中的含量为0.5%，如果在供试品溶液色谱图中某杂质的峰面积为200则该杂质在供试品中的含量为0.2%；这些计算可以得到该供试品中的最大单一杂质的含量、特定杂质例如RRT3.55和RRT0.65含量；全部杂质的含量加和可以得到总杂质含量。以上在测定有关物质时，对于包含药用辅料的药物组合物，在计算时扣除色谱图中辅料的色谱峰。

本发明药物组合物中使用的“药学可接受的载体”可以是药物制剂领域中任何常规的载体。特定载体的选择将取决于用于治疗特定患者的给药方式或疾病类型和状态。用于特定给药模式的合适药物组合物的制备方法完全在药物领域技术人员的知识范围内。例如，可以作为药学可接受的载体包括药学领域常规的稀释剂、载体、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体和润滑剂等。必要时，还可以在药物组合物中加入香味剂、防腐剂和甜味剂等。

本发明的药物组合物可以制成片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂、注射乳剂(注射用无菌粉针)等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。

再进一步地，本发明提供了本发明第二方面任一实施方案所述药物化合物在制备用于痛风及其并发症例如高尿酸血症的药物中的用途。

现已上市销售的非布司他药剂(例如片剂等)，其可用于治疗痛风及其并发症例如高尿酸血症。本发明提供一种新的非布司他原料药即药物化合物，其在稳定性能方面具有优良的特点，因此本发明新的非布司他原料药物同样可用于治疗痛风及其并发症例如高尿酸血症。

附图说明

图1：本发明实施例1步骤(2)所得可作为非布司他原料药的产物的HPLC图。

图2：本发明组合物例4所得非布司他片剂的HPLC图。

具体实施方式

通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。

实施例1：制备非布司他原料药

步骤(1)：照中国专利申请号200910170029.3(CN102002016A，美迪康信)说明书[0022]至[0042]段所记载的方法制备，得到产物非布司他精制品。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.31%，RRT0.65含量=0.23%。CN102002016A中记载产物的色谱纯度大于99.5%以及单杂0.1%以下，其是以区别于本发明方法的“归一化法”计算，并且其检测条件例如检测波长可能不同于本发明，因此不具可比性；但是本步骤(1)产物的RRT3.55含量和RRT0.65含量与下文产物采用相同测定方法测定的，因此它们的结果具有可比性。

步骤(2)：精制：向精制罐中预先加入乙醇-乙腈-甲酸(100：30：3)混合液1000ml，启动搅拌后加入步骤(1)所得产物120g(溶剂：溶质=8.3(v/w)，此比例时在回流条件下达到饱和的溶解程度)，加热回流至固体全部溶解后停止加热，冷却降温至20～25℃，继续搅拌10～12小时，降温至5～10℃，保温搅拌1～2小时，离心，得到可作为非布司他原料药的产物(如此精制一次的收率95.2%)。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.12%，RRT0.65含量=0.07%。其典型的HPLC图见图1。

如果因各种原因例如步骤(1)产物中杂质例如RRT3.55、RRT0.65量过高而造成步骤(2)产物中这些杂质仍然较高时，可以重复步骤(2)以进一步降低这些杂质的量。

步骤(3)：重结晶(转晶)：向溶解罐中预先加入85%乙醇水溶液100ml，启动搅拌后加入步骤(2)所得产物12g，加热至回流，溶解，停止加热，溶解罐中用氮气加压，料液经管道压滤器压滤至转晶罐（除去不溶性颗粒物），启动搅拌，再次加热至回流，停止加热再用冷冻水（5～10℃）冷却至20～25℃，离心，得转晶后湿品。将鼓风干燥箱预先加热至待用状态（设定烘箱温度为100℃），将转晶后湿品均匀铺设在干燥盘中鼓风干燥6～8小时，得成品为A晶型(与CN1275126A所载A晶型相同)，转晶收率：88.5%。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.11%，RRT0.65含量=0.06%。

另外，步骤(2)产物经气相色谱法显示其中的甲酸含量已低于我国药品注册要求的限度规定，但是通过以上步骤(3)处理后，其中的甲酸含量相比而言可降低80%，表明以上步骤(3)可有效地用于降低甲酸含量。

实施例2：制备非布司他原料药

向精制罐中预先加入乙醇-乙腈-甲酸(100：20：5)混合液1000ml，启动搅拌后加入本发明实施例1步骤(1)所得产物100g(溶剂：溶质=10(v/w))，在比回流温度低10℃的温度下加热至使固体全部溶解后停止加热，冷却降温至20～25℃，继续搅拌10～12小时，降温至0～10℃，保温搅拌1～2小时，离心，得到可作为非布司他原料药的产物(如此精制一次的收率93.3%)。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.08%，RRT0.65含量=0.06%。

实施例3：制备非布司他原料药

向精制罐中预先加入乙醇-乙腈-甲酸(100：40：2)混合液1000ml，启动搅拌后加入本发明实施例1步骤(1)所得产物130g(溶剂：溶质=7.7(v/w))，在回流温度下加热至使固体全部溶解后停止加热，冷却降温至20～25℃，继续搅拌10～12小时，降温至0～5℃，保温搅拌1～2小时，离心，得到可作为非布司他原料药的产物(如此精制一次的收率94.1%)。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.11%，RRT0.65含量=0.08%。

实施例4：制备非布司他原料药

步骤(1)：照中国专利申请号201010022543.5(CN102120733A，药源药物)说明书[0032]至[0064]段所记载的方法制备，得到产物非布司他。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.44%，RRT0.65含量=0.28%。

步骤(2)：照本发明实施例1步骤(2)所载方法，将以上步骤(1)产物进行精制，得到产物非布司他。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.28%，RRT0.65含量=0.21%。

步骤(3)：照本发明实施例2所载方法，将以上步骤(2)产物进行精制，得到产物非布司他。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.16%，RRT0.65含量=0.12%。

实施例5：制备非布司他原料药

步骤(1)：照中国专利申请号201210471769.2(CN102936230A，葛长乐)说明书[0023]至[0031]段所记载的方法制备，得到产物非布司他。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.49%，RRT0.65含量=0.32%。

步骤(2)：照本发明实施例3所载方法，将以上步骤(1)产物进行精制，得到产物非布司他。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.27%，RRT0.65含量=0.20%。

步骤(3)：照本发明实施例1步骤(2)所载方法，将以上步骤(2)产物进行精制，得到产物非布司他。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.13%，RRT0.65含量=0.07%。

对照例1：参照上文实施例1步骤(2)，不同的仅是其中不加甲酸，得到产物非布司他。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.29%，RRT0.65含量=0.22%。

对照例2：以实施例4步骤(1)的产物为原料，参照上文实施例2的方法，不同的仅是其中不加甲酸，得到产物非布司他。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.40%，RRT0.65含量=0.24%。

对照例3：以实施例5步骤(1)的产物为原料，参照上文实施例3的方法，不同的仅是其中不加甲酸，得到产物非布司他。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.43%，RRT0.65含量=0.27%。

对照例4：参照上文实施例1步骤(2)，不同的仅是将其中的甲酸改为冰乙酸，得到产物非布司他。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.28%，RRT0.65含量=0.20%。

对照例5：参照上文实施例5步骤(2)，不同的仅是改用乙醇-甲酸(140：40：2)混合溶剂，得到产物非布司他。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.46%，RRT0.65含量=0.29%。

对照例6：参照上文实施例4步骤(2)，不同的仅是改用乙腈-甲酸(130：3)混合溶剂，得到产物非布司他。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.42%，RRT0.65含量=0.27%。

对照例7：参照上文实施例1步骤(2)，不同的仅是使用乙醇-乙腈-甲酸(100：30：8)混合液、或者乙醇-乙腈-甲酸(100：30：15)混合液，得到两批产物非布司他。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55和RRT0.65含量均低于0.2%，但是两种条件下的收率分别为76%和61%，表明当甲酸用量过大后会造成收率的严重下降。

对照例8：参照上文实施例3，不同的是改用乙醇-乙腈-甲酸(100：40：1)混合液，得到产物非布司他，经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.27%，RRT0.65含量=0.20%。表明甲酸用量过少时不能有效地降低杂质的量。

组合物例1：制备非布司他片剂

使用上文实施例1步骤(2)制备得到的非布司他为原料药。

配方：非布司他40mg、乳糖一水合物45mg、微晶纤维素45mg、羟丙基纤维素20mg、交联羧甲基纤维素钠10mg、二氧化硅1mg、和硬脂酸镁1mg；使用50%乙醇为润湿剂以常规湿法制粒方法制备片剂。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.13%，RRT0.65含量=0.07%。

组合物例2：制备非布司他片剂

使用上文实施例1步骤(3)制备得到的非布司他为原料药。

配方：非布司他40mg、乳糖一水合物60mg、微晶纤维素20mg、羟丙基纤维素3mg、交联羧甲基纤维素钠15mg、二氧化硅2mg、和硬脂酸镁0.5mg；使用水为润湿剂以常规湿法制粒方法制备片剂。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.11%，RRT0.65含量=0.06%。

组合物例3：制备非布司他片剂

使用上文实施例2制备得到的非布司他为原料药。

配方：非布司他40mg、乳糖一水合物20mg、微晶纤维素60mg、羟丙基纤维素30mg、交联羧甲基纤维素钠2mg、二氧化硅0.5mg、和硬脂酸镁2mg；使用常规的干法制粒方法制备片剂。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.09%，RRT0.65含量=0.06%。

组合物例4：制备非布司他片剂

使用上文实施例3制备得到的非布司他为原料药。

配方：非布司他40mg、微晶纤维素85mg、预胶化淀粉40mg、羧甲淀粉钠10mg、4mg聚维酮K30、硬脂酸镁1mg；使用PVP配制的水溶液为粘合剂以常规湿法制粒方法制备片剂。使用购自卡乐康公司的Opadry II包薄膜衣，包层重大约占片剂总重的3%。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.11%，RRT0.65含量=0.09%，其典型的HPLC图见图2。

对照组合物例1：制备非布司他片剂

使用上文实施例1步骤(1)制备得到的非布司他为原料药，照上文组合物例1的配方和方法制备片剂。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.32%，RRT0.65含量=0.22%。

对照组合物例2：制备非布司他片剂

使用上文实施例4步骤(1)制备得到的非布司他为原料药，照上文组合物例2的配方和方法制备片剂。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.43%，RRT0.65含量=0.27%。

对照组合物例3：制备非布司他片剂

使用上文实施例5步骤(2)制备得到的非布司他为原料药，照上文组合物例4的配方和方法制备片剂。经【高效液相色谱法A】测定，RRT3.55含量=0.28%，RRT0.65含量=0.21%。

试验例1：稳定性试验

将以上各实施例1～实施例5、对照例1～对照例6所制备的各种纯度的非布司他，以上组合物例1～组合物例4、对照组合物例1～对照组合物例3所得片剂共24个样品作为试样，进行稳定性考察。

将上述各原料药或片剂分别用铝箔袋密封包装，置于40°C恒温箱中放置6月，测定各试样在0月(即放样前)和6月时活性成分的含量以及有关物质含量(稳定单一杂质、总杂质)。

对于每一试样，以其6月活性成分含量除以0月活性成分含量所得的百分值，作为高温处置6月后的活性成分相对含量(%)，即计算式如下：

活性成分相对含量(%)=(6月含量÷0月含量)×100%

此外，对于每一试样中的某一特定杂质，照下式计算该特定杂质的杂质含量增加百分数：

出人意料地发现，具有本发明特征的非布司他及其制备的组合物，特别是其中RRT3.55杂质含量低于0.2%的非布司他及其制备的组合物，其在经高温处理后RRT0.65杂质增加不明显，活性成分的含量变化小，具有良好的综合稳定性；而RRT3.55杂质含量高于0.2%的非布司他及其制备的组合物在经高温处理RRT0.65后杂质显著增加。高温处置6月后具体结果如表1所示。

表1：

从表中结果可见，对于具有较低RRT3.55杂质和/或RRT0.65杂质的试样，不论其是原料药还是组合物，其活性成分均具有更好的稳定性，而对于RRT3.55杂质，其在经高温处理后并无明显增加，但是对于RRT0.65杂质却出现完全令人意外的结果，即对于RRT3.55杂质和/或RRT0.65杂质含量低于0.2%的试样，其RRT0.65杂质增加百分数均低于50%，但是对于RRT3.55杂质和/或RRT0.65杂质含量高于0.2%特别是高于0.25%的试样，其RRT0.65杂质增加百分数均低于大于170%，增加量是本发明特征试样的4倍以上。

以上全部试样，包括对照例和对照组合物例的样品，经多次测试(不同人员、不同仪器、不同实验室)，它们的RRT3.55杂质相对保留时间均在3.35～3.75范围内，即在3.55±0.20范围内，RRT0.65杂质相对保留时间均在0.55～0.75范围内，即在0.65±0.10范围内。

试验例2：生物学试验

参考本发明【高效液相色谱法A】，改用制备型HPLC条件，通过液相色谱法富集制备RRT0.65杂质(绝度大于98%)，使用其与本发明实施例3的非布司他进行急性毒性试验，照符合中国药品注册管理法规的方法，以小鼠口服给药测定上述RRT0.65杂质和实施例3非布司他，测定二者的半数致死量(LD50，g试药/kg动物体重)。结果非布司他LD50是RRT0.65杂质的5.1倍，显示非布司他比RRT0.65杂质明显更安全，控制其在产品中的量是有重要的临床意义的。

另外，本发明人在大鼠高尿酸血症模型中，采用氧嗪酸盐抑制尿酸酶6天，本发明实施例3非布司他可剂量依赖性地抑制黄嘌呤氧化酶和降低血清尿酸浓度(非布司他的ED50为1.6mg/kg)，而RRT0.65杂质在为100mg/kg以上仍未见抑制黄嘌呤氧化酶和降低血清尿酸浓度的效果。可见非布是一种有效的黄嘌呤氧化酶抑制剂，但RRT0.65杂质无效。

试验例3：片剂溶出度的测定方法

取上文各组合物例和对照组合物例所制备的片剂(均取未包衣的素片)测定溶出度，照溶出度测定法(中华人民共和国药典2010年版二部附录XC第二法)，0.25%十二烷基硫酸钠溶液900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经45分钟时，取溶液适量，滤过，精密量取续滤液适量，用溶出介质定量稀释，用HPLC法测定。结果表明，所测试的全部片剂的溶出度均达到87～95%的范围，例如组合物例1的片剂在45分钟时的溶出度为92.4%。

以上所揭露的仅为本发明的较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明的权利范围，因此依本发明申请专利范围所作的等同变化，仍属本发明所涵盖的范围。

Claims (20)

1.制备以下式I药物化合物的方法：

 I

其包括将式I化合物在加热条件下溶解于有机溶剂中，接着对溶液降温至低于室温的温度下使式I化合物从溶剂中结晶以进行精制的步骤；所述有机溶剂中包括乙醇、乙腈和甲酸，且乙醇、乙腈和甲酸的体积比为100：10~60：1~8。

2.根据权利要求1的方法，其中所述有机溶剂中乙醇、乙腈和甲酸的体积比为100：20~40：2~5。

3.根据权利要求1的方法，其所制得的式I药物化合物照【高效液相色谱法A】测定，其中相对保留时间在3.55±0.20处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.2%；

【高效液相色谱法A】：

A1)照中国药典2010年版二部附录ⅤD所载高效液相色谱法进行；

A2)色谱条件与系统适用性试验：以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；以用三乙胺调节pH值至3.10±0.05的体积比为57：43的0.1%磷酸溶液-乙腈为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表进行线性梯度洗脱：

时间(min) A(%) B(%) 0 100 0 12 100 0 40 60 40

流速约为每分钟1ml以使非布司他峰的保留时间在7~11分钟范围内，检测波长为219nm，柱温55℃；

A3)取供试品适量，精密称定，加体积比为1：1的乙腈-水适量，超声溶解并定量稀释制成每1ml中约含非布司他500μg的溶液，过滤，作为供试品溶液；精密量取该供试品溶液5ml置500ml量瓶中，用体积比为1：1的乙腈-水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；

A4)读取对照溶液色谱图中主成分即式I化合物峰的峰面积；读取供试品溶液色谱图中主成分峰的峰面积，以及该色谱图中经面积归一化法计算峰面积百分数大于0.01%的杂质峰的峰面积，计算这些杂质峰相对于主成分峰的相对保留时间；

用下式计算在该供试品中，任意一个单一杂质其相对于式I化合物的含量：

；

用下式计算杂质的相对保留时间，其缩写为RRT：

。

4.根据权利要求1的方法，其所制得的式I药物化合物照【高效液相色谱法A】测定，其中相对保留时间在0.65±0.10处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.2%；所述【高效液相色谱法A】如权利要求3所述。

5.根据权利要求1的方法，其所制得的式I药物化合物在40°C条件下密封、避光放置6个月，计算在此条件下处置6个月后某杂质相对于0月时的含量增加百分数，其中RRT0.65杂质含量增加百分数低于50%。

6.以下式I药物化合物：

 I   ，

其照以下【高效液相色谱法A】测定，其中相对保留时间在3.55±0.20处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.2%；

【高效液相色谱法A】：

A1)照中国药典2010年版二部附录ⅤD所载高效液相色谱法进行；

A2)色谱条件与系统适用性试验：以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；以用三乙胺调节pH值至3.10±0.05的体积比为57：43的0.1%磷酸溶液-乙腈为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表进行线性梯度洗脱：

时间(min) A(%) B(%) 0 100 0 12 100 0 40 60 40

流速约为每分钟1ml以使非布司他峰的保留时间在7~11分钟范围内，检测波长为219nm，柱温55℃；

A3)取供试品适量，精密称定，加体积比为1：1的乙腈-水适量，超声溶解并定量稀释制成每1ml中约含非布司他500μg的溶液，过滤，作为供试品溶液；精密量取该供试品溶液5ml置500ml量瓶中，用体积比为1：1的乙腈-水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；

A4)读取对照溶液色谱图中主成分即式I化合物峰的峰面积；读取供试品溶液色谱图中主成分峰的峰面积，以及该色谱图中经面积归一化法计算峰面积百分数大于0.01%的杂质峰的峰面积，计算这些杂质峰相对于主成分峰的相对保留时间；

用下式计算在该供试品中，任意一个单一杂质其相对于式I化合物的含量：

；

用下式计算杂质的相对保留时间，其缩写为RRT：

。

7.根据权利要求6的药物化合物，其照【高效液相色谱法A】测定，其中相对保留时间在0.65±0.10处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.2%。

8.根据权利要求6的药物化合物，其在40°C条件下密封、避光放置6个月，计算在此条件下处置6个月后某杂质相对于0月时的含量增加百分数，其中相对保留时间在0.65±0.10处的杂质含量增加百分数低于50%。

9.一种药物组合物，其中包含权利要求6-8任一项所述的药物化合物，以及任选的药学可接受的载体或辅料。

10.根据权利要求9的药物组合物，其是口服制剂或者注射制剂。

11.根据权利要求9的药物组合物，其是片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、混悬剂或丸剂。

12.根据权利要求9的药物组合物，其是片剂，该片剂中包含权利要求6-8任一项所述的药物化合物，以及至少一种选自下列的药学可接受的载体或辅料：稀释剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂。

13.根据权利要求9的药物组合物，其是片剂，其中包含权利要求6-8任一项所述的药物化合物，以及乳糖一水合物、微晶纤维素、羟基丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、二氧化硅和硬脂酸镁。

14.根据权利要求9的药物组合物，其是片剂，其中包含权利要求6-8任一项所述的药物化合物，以及微晶纤维素、预胶化淀粉、羧甲淀粉钠、聚维酮K30、硬脂酸镁。

15.根据权利要求9-14任一项的药物组合物，其照以下【高效液相色谱法A】测定，其中相对保留时间在3.55±0.20处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.2%；

【高效液相色谱法A】：

A1)照中国药典2010年版二部附录ⅤD所载高效液相色谱法进行；

A2)色谱条件与系统适用性试验：以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；以用三乙胺调节pH值至3.10±0.05的体积比为57：43的0.1%磷酸溶液-乙腈为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表进行线性梯度洗脱：

时间(min) A(%) B(%) 0 100 0 12 100 0 40 60 40

流速约为每分钟1ml以使非布司他峰的保留时间在7~11分钟范围内，检测波长为219nm，柱温55℃；

A3)取供试品适量，精密称定，加体积比为1：1的乙腈-水适量，超声溶解并定量稀释制成每1ml中约含非布司他500μg的溶液，过滤，作为供试品溶液；精密量取该供试品溶液5ml置500ml量瓶中，用体积比为1：1的乙腈-水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；

A4)读取对照溶液色谱图中主成分即式I化合物峰的峰面积；读取供试品溶液色谱图中主成分峰的峰面积，以及该色谱图中经面积归一化法计算峰面积百分数大于0.01%的杂质峰的峰面积，计算这些杂质峰相对于主成分峰的相对保留时间；

用下式计算在该供试品中，任意一个单一杂质其相对于式I化合物的含量：

；

用下式计算杂质的相对保留时间，其缩写为RRT：

。

16.根据权利要求15的药物组合物，其照【高效液相色谱法A】测定，其中相对保留时间在0.65±0.10处的杂质相对于式I药物化合物而言含量低于0.2%。

17.根据权利要求15的药物组合物，其在40°C条件下密封、避光放置6个月，计算在此条件下处置6个月后某杂质相对于0月时的含量增加百分数，其中相对保留时间在0.65±0.10处的杂质含量增加百分数低于50%。

18.根据权利要求16的药物组合物，其在40°C条件下密封、避光放置6个月，计算在此条件下处置6个月后某杂质相对于0月时的含量增加百分数，其中相对保留时间在0.65±0.10处的杂质含量增加百分数低于50%。

19.权利要求6-8任一项所述的药物化合物在制备用于痛风及其并发症的药物中的用途。

20.根据权利要求19的用途，其中所述痛风并发症是高尿酸血症。