CN102012406B - 盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了甲砜霉素甘氨酸酯的质量检测方法，属医药技术领域。本发明主要是对甲砜霉素甘氨酸酯有关物质和含量的控制。该方法专属性强、重现性好、精密度高、操作方便，能够很好地控制甲砜霉素甘氨酸酯的质量，真正确保了临床用药的安全、有效、可控。本发明还可以结合其他方法共同控制其质量。
Description
技术领域
一种盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的质量检测方法，属医药技术领域。
背景技术
甲砜霉素又称硫霉素，化学名为1-对甲磺酰基-苯基-2-二氯乙酰胺-1，3丙二醇。其结构相似于氯霉素，其抗菌谱与氯霉素基本相似。同时，它也是一种强大的免疫抑制剂，这一作用比氯霉素强6倍，主要与抑制蛋白质合成和抑制抗体产生有关。我国于1971年起开始试用，但由于其水溶性差，剂型受到限制。国内目前生产销售甲砜霉素制剂的企业有多家，但由于前述原因，目前临床上广泛使用的甲砜霉素制剂均为固体制剂，如片剂、胶囊剂等。
为了拓宽甲砜霉素的临床应用，克服其水溶性差的劣势，日本エ一ザイ株式会社研制开发了甲砜霉素的衍生物--盐酸甲砜霉素甘氨酸酯，其水溶性好，水溶液的PH值约3.0，当溶液的PH值增高或受到体内酶的作用后，其迅速释放出甲砜霉素而发挥作用。
关于盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的质量检测国内也有相关文献报道，现有文献方法有采用磷酸铵盐与乙腈的组合或是三氟乙酸与乙腈的组合作为流动相，但均存在样品溶液稳定性差，主峰出峰时间过早，杂质与主峰分离度较差的现象，很难客观的反应产品真实质量。
因此，发明一种科学合理、方法有效的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的质量检测方法势在必行。
发明内容
本发明提供了一种盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的质量检测方法。
本发明主要是通过如下技术方案实现的：
本发明所述流动相采用磷酸二氢钾溶液、甲醇、三乙胺及磷酸的混合溶液。
本发明所述磷酸二氢钾溶液-甲醇的比例为10∶90～30∶70；优选为15∶85～25∶75；更优选为20∶80。
本发明盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的质量检测方法其有关物物的测定方法优选如下：
照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录V D)测定；
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液-三乙胺(20∶80∶0.05)，混匀后用磷酸调节pH至3.0为流动相；检测波长为226nm；柱温：30℃；
测定法称取本品适量，精密称定，用0.01mol/L的盐酸制成每1ml中含1.0mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液适量，加0.01mol/L的盐酸稀释成每1ml中含10μg的溶液，作为对照溶液。精密量取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为满量程的20％，再精密量取供试品溶液及对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的5倍。供试品溶液的色谱图中如显杂质峰，量取各杂质峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积(1.0％)。
本发明盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的质量检测方法其含量测定方法优选如下：
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液-三乙胺(20∶80∶0.05)，混匀后用磷酸调节pH至3.0为流动相；检测波长为226nm；柱温：30℃；
测定法称取本品适量，精密称定，加0.01mol/L的盐酸制成每1ml中含0.1mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸甲砜霉素甘氨酸酯对照品适量，精密称定，加0.01mol/L的盐酸制成每1ml中含0.1mg的溶液，作为对照溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
本发明盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的质量检测方法专属性强、重现性好、精密度高、操作方便，能够很好的检测盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的质量，真正确保了临床用药的安全、有效、可控；本发明适用于盐酸甲砜霉素甘氨酸酯原料及注射制剂，还可以结合其他方法共同检测其质量。
有益的技术效果
通过如下试验例和实施例对本发明的技术方法作进一步的描述，但不作为对本发明的限制。
以盐酸甲砜霉素甘氨酸酯为例，进行本发明试验例研究。
试验例1检测波长的确定
分别取盐酸甲砜霉素甘氨酸酯原料、起始原料甲砜霉素及其中间体甲砜霉素氯乙酸酯适量，加0.01mol/L的盐酸配制成浓度20μg/ml、22μg/ml、45μg/ml的溶液。分别于200～400nm波长范围内扫描，三种物质均在220-230nm附近有最大吸收，检测波长可定为226nm。
试验例2流动相的筛选试验
1)流动相种类的筛选
供试品溶液取本品适量，用0.01mol/L的盐酸制成每1ml中含1.0mg的溶液，作为供试品溶液。
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以有机相-0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液-三乙胺(20∶80∶0.05)，混匀后用磷酸调节pH至3.0为流动相；检测波长为226nm；柱温：30℃；
流动相的筛选试验
| 有机相 | 主峰保留时间 | 峰形 | 基线噪音 |
[0029]
| 甲醇 | 7min | 对称 | 噪音小，基线平稳 |
| 乙腈 | 4min | 对称 | 噪音大，基线相对不平稳 |
由上表可见，选用乙腈作为流动相中的有机相时主峰保留时间过早，甲醇相对乙腈作为流动相中的有机相，保留时间相对较合理，噪音小，基线平稳，对色谱柱的损耗相对较小。因此，优选甲醇作为有机相。
2)流动相比例的筛选
供试品溶液取本品适量，用0.01mol/L的盐酸制成每1ml中含1.0mg的溶液，作为供试品溶液。
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液，两者比例如下表所示，加0.05％的三乙胺，混匀后用磷酸调节pH至3.0为流动相；检测波长为226nm；柱温：30℃；
流动相的筛选
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
| 磷酸二氢钾溶液 | 60 | 65 | 70 | 75 | 80 | 85 | 90 | 95 |
| 甲醇 | 40 | 35 | 30 | 25 | 20 | 15 | 10 | 5 |
流动相的筛选试验结果
| 编号 | 保留时间(min) | 峰形 | 分离度 |
| 1 | 3.5 | 不对称 | 小于1.5 |
| 2 | 4.4 | 对称，略有拖尾， | 小于1.5 |
| 3 | 5.3 | 对称，无拖尾，峰尖且窄 | 大于1.5 |
| 4 | 6.2 | 对称，无拖尾，峰尖且窄 | 大于1.5 |
| 5 | 7.5 | 对称，无拖尾，峰尖且窄 | 大于1.5 |
| 6 | 15.7 | 对称，无拖尾，峰尖且窄 | 大于1.5 |
| 7 | 23.8 | 对称，无拖尾，峰尖且窄 | 大于1.5 |
| 8 | 35.2 | 出峰时间较晚 | 大于1.5 |
由上表可见，根据峰形和分离度，优选磷酸二氢钾溶液-甲醇为70∶30～90∶10，分离度、峰形符合要求；根据保留时间优选磷酸二氢钾溶液-甲醇为75∶25～85∶15之间，更优选磷酸二氢钾溶液-甲醇为80∶20。
3)磷酸盐种类的筛选
供试品溶液取本品适量，用0.01mol/L的盐酸制成每1ml中含1.0mg的溶液，作为供试品溶液。
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-磷酸盐(磷酸二氢铵、磷酸氢二铵、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠)溶液-三乙胺(20∶80∶0.05)，混匀后用 磷酸调节pH至3.0为流动相；检测波长为226nm；柱温：30℃；
磷酸盐种类的筛选结果
由上表可见，选用磷酸铵盐时保留时间较短且峰形有拖尾现象；选用磷酸钠盐时保留时间较合理但峰形有拖尾现象；选用磷酸钾盐时，保留时间合理，峰形相对较好，分离度达到要求。
综上所述：选用磷酸钠盐和磷酸钾盐优于磷酸铵盐，选用磷酸钾盐优于磷酸钠盐，而在磷酸钾盐中磷酸二氢钾优于磷酸氢二钾。
4)PH调节剂的筛选
供试品溶液取本品适量，用0.01mol/L的盐酸制成每1ml中含1.0mg的溶液，作为供试品溶液。
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液-三乙胺(20∶80∶0.05)，混匀后不调PH值、用冰醋酸调PH值、用磷酸调节pH值、用0.1mol/L盐酸调PH值；检测波长为226nm；柱温：30℃；
PH调节剂的筛选结果
由上表可见，不调PH值的流动相峰形存在拖尾和不能达到基线分离现象，且基线不平；
PH调节剂调PH值的流动相使分离度达到要求，选用冰醋酸和0.1mol/L的盐酸调PH值时噪音较大，拖尾现象较严重，影响检测的准确度。综上所述：优选为磷酸调PH值到2.0～3.0，最优选为磷酸调PH值到3.0。
5)峰型调节剂的筛选
供试品溶液取本品适量，用0.01mol/L的盐酸制成每1ml中含1.0mg的溶液，作为供试品溶液。
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以有机相-0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液(20∶80)，加入三乙胺(加入比例如下表)混匀后用磷酸调节pH至3.0为流动相；检测波长为226nm；柱温：30℃
三乙胺加入量的筛选试验结果
| 编号 | 三乙胺(％) | 峰形 | 分离度 |
| 1 | 0.01 | 拖尾严重 | 小于1.5 |
| 2 | 0.02 | 拖尾严重 | 小于1.5 |
| 3 | 0.03 | 略有拖尾 | 大于1.5 |
| 4 | 0.04 | 略有拖尾 | 大于1.5 |
| 5 | 0.05 | 无拖尾，峰尖且窄 | 大于1.5 |
| 6 | 0.06 | 无拖尾，峰尖且窄 | 大于1.5 |
| 7 | 0.07 | 无拖尾，峰尖且窄 | 大于1.5 |
| 8 | 0.08 | 无拖尾，峰展宽 | 大于1.5 |
| 9 | 0.09 | 无拖尾，峰展宽 | 大于1.5 |
| 10 | 0.10 | 无拖尾，峰展宽 | 大于1.5 |
当三乙胺加入量达到0.05％时色谱峰无拖尾，峰尖且窄；当加入三乙胺的量达到0.08％ 时，色谱峰无拖尾，但峰形渐展宽；当加入三乙胺的量为0.05％、0.06％和0.07％时色谱峰形基本相当，但考虑降低成本，减小污染，优选三乙胺加入量为0.05％。
综上所述，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液-三乙胺(20∶80∶0.05)，混匀后用磷酸调节pH至3.0为流动相；检测波长为226nm；柱温：30℃；经各种破坏试验后各降解产物与主峰均得到良好分离，建立的此色谱条件最可行。
试验例3空白实验
本品以0.01mol/L盐酸为溶剂，考察0.01mol/L盐酸对试验的干扰。取0.01mol/L盐酸20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，结果表明：在上述选定的液相色谱条件下，空白溶剂对测定无干扰。
试验例4色谱图采集时间考查
在上述选定的液相色谱条件下，记录本品色谱图至盐酸甲砜霉素甘氨酸酯峰保留时间的10倍，结果表明，在盐酸甲砜霉素甘氨酸酯主峰保留时间约7分钟左右，色谱图中保留时间最晚的杂质峰约27分钟左右，之后的色谱图中未见有杂质峰，故色谱图时间可记录至盐酸甲砜霉素甘氨酸酯峰保留时间的5倍即可。
试验例5专属性
1)试验设计使用高温、强酸、强碱、氧化和强光照射以加速本品的降解，在上述选定的液相色谱条件下考察本品有关物质检查方法的专属性。
2)样品配制方法分别称取盐酸甲砜霉素甘氨酸酯约25mg，置25ml量瓶中，共称取6份，
A：未破坏取上述样品一份，用0.01mol/L的盐酸溶解稀释至刻度。
B：高温破坏取上述样品一份，用电炉直接加热至熔融，用0.01mol/L的盐酸溶解稀释至刻度。
C：酸破坏取上述样品一份，加入1mol/L HCl 1ml，室温放置2小时，加10ml0.01mol/L的盐酸，用氨水调节pH至中性，再用0.01mol/L的盐酸溶解稀释至刻度。
D：碱破坏取上述样品一份，加入0.2mol/LNaOH 1ml，室温放置2小时，加10ml0.01mol/L的盐酸，用磷酸调节pH至中性，再用0.01mol/L的盐酸溶解稀释至刻度。
E：氧化破坏取上述样品一份，30％的双氧水1ml，室温放置2小时，再用0.01mol/L的盐酸溶解稀释至刻度。
F：光照破坏取上述样品一份，Lx4500强光照射24小时，再用0.01mol/L的盐酸溶解稀释至刻度。
3)测试方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液-三乙胺(20∶80∶0.05)，混匀后用磷酸调节pH至3.0为流动相；检测波长为226nm；柱 温：30℃；取上述测试液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的5倍。
4)试验结果
结果表明，在选定的色谱条件下，样品经酸、碱、氧化、高温、光照等条件降解后，样品中的有关物质均能有效检出。其中本品经高温和强光破坏后样品有新降解的杂质峰；酸破坏、碱破坏和氧化破坏后样品未见有新降解杂质峰。上述供试液杂质的保留时间及分离度如下表所示。
盐酸甲砜霉素甘氨酸酯有关物质检查专属性试验结果
*分离度以距离主峰最近的杂质峰计算
试验例6溶液稳定性对比研究
1、色谱条件：
①本发明方法：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液-三乙胺(20∶80∶0.05)，混匀后用磷酸调节pH至3.0为流动相；检测波长为226nm；柱温：30℃；以0.01mol/L的盐酸溶液为溶样溶剂。
②文献方法1：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.2％磷酸二氢铵溶液-乙腈(85∶15)为流动相；检测波长为224nm；以流动相为溶样溶剂。
③文献方法2：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.01mol/L的三氟乙酸-乙腈(88∶12)，用三乙胺调pH 3.0；检测波长为223nm；柱温：40℃；以0.01mol/L的盐酸溶液为溶样溶剂。
2、实验方案设计与结果
1)取供试品适量，共3份，按上述规定的溶样溶剂用0.01mol/L的盐酸制备成0.1mg/ml的溶液，室温中放置，并在配制后第0、30、60、120、180、240、360和480分钟，量取20μl注入液相色谱仪，依法测定，记录主峰面积，结果见下表。
盐酸甲砜霉素甘氨酸酯含量溶液稳定性考察
结论：从上述数据可知，使用本发明方法测定时样品含量有微小的下降趋势，在480分钟内RSD仅为0.04％，表明样品溶液相对稳定，适合常规分析；而采用文献方法测定样品含量时，在30分钟内就有明显的降低，随着时间的延长，样品降解更为明显，在480分钟内RSD分别为7.5％和5.3％，表明采用文献方法测定样品时，样品溶液极不稳定。因此说明文献方法不能真实地反应和控制样品的质量，本发明方法优于文献方法。
2)取供试品，共3份，按上述规定的溶样溶剂制备成1.0mg/ml的溶液，室温中放置，并在配制后第0、30、60、120、180和240分钟，量取20μl注入液相色谱仪，依法测定，记录杂质峰面积和，结果见下表。
盐酸甲砜霉素甘氨酸酯有关物质溶液稳定性考察
结论：由上述数据可知，使用本发明方法考察样品有关物质溶液稳定性时，随着时间延长有关物质略有增长，但并不明显；而采用文献方法考察样品有关物质溶液稳定性时，30分钟时有关物质就变成了0分钟的10倍，样品极不稳定。因此说明文献方法不能真实地反应和控制样品的质量，本发明方法优于文献方法。
试验例7检测方法的对比研究
本发明方法：照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录V D)测定；
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液-三乙胺(20∶80∶0.05)，混匀后用磷酸调节pH至3.0为流动相；检测波长为226nm；柱温：30℃；
测定法称取本品适量，精密称定，用0.01mol/L的盐酸制成每1ml中含1.0mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液适量，加0.01mol/L的盐酸稀释成每1ml中含10μg的溶液，作为对照溶液。精密量取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为满量程的20％，再精密量取供试品溶液及对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的5倍。
文献方法1：色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.2％磷酸二氢铵溶液-乙腈(85∶15)为流动相；检测波长为224nm；
测定法取本品适量，用0.01mol/L的盐酸制成每1ml中含1.0mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液适量，加0.01mol/L的盐酸稀释成每1ml中含10μg的溶液，作为对照溶液。精密量取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为满量程的20％，再精密量取供试品溶液及对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的5倍。
文献方法2：色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.01mol/L的三氟乙酸-乙腈(88∶12)，用三乙胺调pH 3.0；检测波长为223nm；柱温：40℃；
测定法取本品适量，用流动相制成每1ml中含1.0mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液适量，加流动相稀释成每1ml中含10μg的溶液，作为对照溶液。精密量取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为满量程的20％，再精密量取供试品溶液及对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的5倍。
采用以上方法分别对盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的有关物质进行了测定。有关物质检查结果 见下表：
不同方法对于同一样品有关物质的测定结果
对盐酸甲砜霉素甘氨酸酯有关物质的测定中，采用本发明方法检测样品时，有关物质较低；但采用文献方法1和文献方法2检出值较高。盐酸甲砜霉素甘氨酸酯是甲砜霉素的衍生物，其水溶性好，水溶液的PH值约3.0，当溶液的PH值略增高时，其迅速水解出甲砜霉素和其它降解物。经大量试验研究验证，发现使用文献方法1、文献方法2检测时样品降解速度非常快，极不稳定，同一批样品在不同时间段检出值也用很大差异，而采用本发明方法测定时，则非常稳定。
下述实施例均能够实现上述实验例所述的效果
下列具体的实施例进一步描述本发明，但所述的实施例仅用于说明本发明而不是限制本发明。
实施例1盐酸甲砜霉素甘氨酸酯有关物质测定
照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录V D)测定。
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液-三乙胺(20∶80∶0.05)，混匀后用磷酸调节pH至3.0为流动相；检测波长为226nm；柱温：30℃；
测定法称取本品适量，精密称定，用0.01mol/L的盐酸制成每1ml中含1.0mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液适量，加0.01mol/L的盐酸稀释成每1ml中含10μg的溶液，作为对照溶液。照含量测定项下的方法试验，精密量取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为满量程的20％，再精密量取供试品溶液及对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的5倍。经测定样品有关物质为0.06％。
实施例2盐酸甲砜霉素甘氨酸酯含量测定
照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录V D)测定。
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液-三乙胺(15∶85∶0.05)，混匀后用磷酸调节pH至3.0为流动相；检测波长为226nm；柱温：30℃；
测定法称取本品适量，精密称定，加0.01mol/L的盐酸制成每1ml中含0.1mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸甲砜霉素甘氨酸 酯对照品适量，精密称定，加0.01mol/L的盐酸制成每1ml中含0.1mg的溶液，作为对照溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，含量为99.9％。
实施例3注射用盐酸甲砜霉素甘氨酸酯有关物质测定
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液-三乙胺(25∶75∶0.05)，混匀后用磷酸调节pH至3.0为流动相；检测波长为226nm；柱温：30℃；
测定法称取本品适量，精密称定，用0.01mol/L的盐酸制成每1ml中含1.0mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液适量，加0.01mol/L的盐酸稀释成每1ml中含10μg的溶液，作为对照溶液。照含量测定项下的方法试验，精密量取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为满量程的20％，再精密量取供试品溶液及对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的5倍。经测定样品有关物质为0.50％。
实施例4注射用盐酸甲砜霉素甘氨酸酯含量测定
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液-三乙胺(30∶70∶0.05)，混匀后用磷酸调节pH至3.0为流动相；检测波长为226nm；柱温：30℃；
测定法称取本品适量，精密称定，加0.01mol/L的盐酸制成每1ml中含0.1mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸甲砜霉素甘氨酸酯对照品适量，精密称定，加0.01mol/L的盐酸制成每1ml中含0.1mg的溶液，作为对照溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，含量为99.9％。
实施例5注射用盐酸甲砜霉素甘氨酸酯含量测定
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液-三乙胺(10∶90∶0.05)，混匀后用磷酸调节pH至3.0为流动相；检测波长为226nm；柱温：30℃；
测定法称取本品适量，精密称定，加0.01mol/L的盐酸制成每1ml中含0.1mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸甲砜霉素甘氨酸酯对照品适量，精密称定，加0.01mol/L的盐酸制成每1ml中含0.1mg的溶液，作为对照溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，含量为99.8％。
Claims (5)
1.盐酸甲砜霉素甘氨酸酯检测方法，高效液相色谱法色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长为226nm，柱温30℃，其特征在于用磷酸调节流动相pH至2.0～3.0，流动相采用磷酸二氢钾溶液-甲醇-三乙胺的比例为10∶90～30∶70∶0.05。
2.如权利要求1所述盐酸甲砜霉素甘氨酸酯检测方法，其特征在于流动相磷酸二氢钾溶液-甲醇的比例为15∶85～25∶75。
3.如权利要求2所述盐酸甲砜霉素甘氨酸酯检测方法，其特征在于流动相磷酸二氢钾溶液-甲醇的比例为20∶80。
4.如权利要求3所述的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的检测方法，其特征在于有关物质的测定方法如下：
照中国药典2010年版二部附录VD高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液-三乙胺20∶80∶0.05，混匀后用磷酸调节pH至3.0为流动相；检测波长为226nm；柱温：30℃；
测定法称取本品适量，精密称定，用0.01mol/L的盐酸制成每1ml中含1.0mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液适量，加0.01mol/L的盐酸稀释成每1ml中含10μg的溶液，作为对照溶液；精密量取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为满量程的20％，再精密量取供试品溶液及对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的5倍；供试品溶液的色谱图中如显杂质峰，量取各杂质峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积。
5.如权利要求3所述的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的检测方法，其特征在于含量的测定方法如下：
照中国药典2010年版二部附录VD高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液-三乙胺20∶80∶0.05，混匀后用磷酸调节pH至3.0为流动相；检测波长为226nm；柱温：30℃；
测定法称取本品适量，精密称定，加0.01mol/L的盐酸制成每1ml中含0.1mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸甲砜霉素甘氨酸酯对照品适量，精密称定，加0.01mol/L的盐酸制成每1ml中含0.1mg的溶液，作为对照溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
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