CN104095879B - 一种转移因子溶液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物制药技术领域，具体的说是一种转移因子溶液及其制备方法。具体，动物脾脏与NaCl溶液按重量比为1:1.3‑1.4的混合经反复冻融后调节PH值至6.2～7.2，再经过滤，即为转移因子溶液。采用本发明方法利于提高转移因子溶液有效成分的含量、提高产品收率、增加药物的稳定性和安全性。

Description

一种转移因子溶液及其制备方法

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，具体的说是一种转移因子溶液及其制备方法。

背景技术

转移因子溶液是一种天然双向免疫调节剂，是目前治疗免疫功能低下、缺陷等相关疾病的理想药物。

转移因子溶液系用健康猪或牛脾脏为原料，经去脂肪、细胞破碎、透析或超滤制成的分子量小于6000道尔顿的多肽、氨基酸和多核苷酸混合物的溶液。

但，现有技术制得的转移因子溶液中多肽、游离氨基酸、核苷酸的含量较低，高分子物质含量相对较高，转移因子溶液的收率较低。

发明内容

本发明目的在于提供一种转移因子溶液及其制备方法。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为：

一种转移因子溶液，动物脾脏与NaCl溶液按重量比为1:1.3-1.4的混合经反复冻融后调节PH值至6.2～7.2，再经过滤，即为转移因子溶液。

进一步的说，动物脾脏与NaCl溶液按重量比为1:1.3-1.4的混合，混合后磨匀获得的匀浆液经反复冻融处理4-6次，冻融后用HCL溶液，调匀浆液PH值3.5～4.5，而后离心收集上清液，上清液再经NaOH溶液调节PH值至6.2～7.2，最后过滤，即得转移因子溶液。

所述反复冻融处理是将匀浆液在-25±3℃冷冻48-56小时，而后在20-25℃的循环水中融化，作为一次冻融处理，按照此冻融条件反复冻融3-4次；而后再以下述另一冻融条件反复冻融1-2次，另一冻融条件为将匀浆液在-25±3℃冷冻12-18小时，而后在20-25℃的循环水中融化。

所述动物脾脏为猪或牛的脾脏。

所述动物脾脏与NaCl溶液按重量比为1:1.3-1.4的混合，混合后加入胶体磨机中磨1～2分钟，即得匀浆液；其中，胶体磨的缝隙5～10um。

一种转移因子溶液的制备方法，动物脾脏与NaCl溶液按重量比为1:1.3-1.4的混合经反复冻融后调节PH值至6.2～7.2，再经过滤，即为转移因子溶液。

进一步的说，动物脾脏与NaCl溶液按重量比为1:1.3-1.4的混合，混合后磨匀获得的匀浆液经反复冻融处理5-6次，冻融后用HCL溶液，调匀浆液PH值3.5～4.5，而后离心收集上清液，上清液再经NaOH溶液调节PH值至6.2～7.2，最后过滤，即得转移因子溶液。

所述反复冻融处理是将匀浆液在-25±3℃冷冻48-56小时，而后在20-25℃的循环水中融化，作为一次冻融处理，按照此冻融条件反复冻融3-4次；而后再以下述另一冻融条件反复冻融2-3次，另一冻融条件为将匀浆液在-25±3℃冷冻12-18小时，而后在20-25℃的循环水中融化。

所述动物脾脏与NaCl溶液按重量比为1:1.3-1.4的混合，混合后加入胶体磨机中磨1～2分钟，即得匀浆液；其中，胶体磨的缝隙5～10um。

所述PH值3.5～4.5的匀浆液在2000-2500转/分钟的速度离心20-30分钟，收集上清液，上清液再经NaOH溶液调节PH值至6.2～7.2，调节PH值后过滤，过滤后滤液再经中空纤维柱超滤滤液即得转移因子溶液；其中，中空纤维柱超滤压力控制在0.1-0.2Mpa。

本发明所具有的优点：

本发明所获得的转移因子溶液有效成分的含量高，主要技术指标多肽：≥6mg/ml，核苷酸：≥170μg/ml(以D－核糖计)，高于标准的2倍。高分子物质低于3％(标准为5％)。同时采用本发明方法利于提高转移因子溶液有效成分的含量、提高产品收率、增加药物的稳定性和安全性。

附图说明

图1为本发明实施例提供的工艺流程图。

具体实施方式

实施例1

转移因子溶液的制备方法(参见图1)：

将融化后的猪脾脏用纯化水冲洗，去除脂肪，剪去结缔组织，置入绞肉机内绞碎，绞碎(2-3mm)后待用。

绞碎后脾脏与0.9％NaCl(W/V)(W/V，质量体积比)溶液按重量比为1:1.3的混合，混合后加入至胶体磨机中磨1～2分钟，即得匀浆液，其中，胶体磨的缝隙5～10um。

匀浆液经反复冻融处理5次，冻融后用2mol/L的HCL溶液调匀浆液PH值4.0，而后以2000转/分钟的速度离心30分钟，收集上清液，上清液再经2mol/L的NaOH溶液调节PH值至7.0，调节PH值后过滤，过滤后滤液再经中空纤维柱超滤，滤液即得转移因子溶液，所得转移因子溶液分装，送入-25±3℃低温冷冻保存。其中，中空纤维柱超滤压力控制在0.1-0.2Mpa。

所述反复冻融处理是将匀浆液在-25±3℃冷冻48小时，而后在20℃的循环水中融化，作为一次冻融处理，按照此冻融条件反复冻融4次；而后再以下述另一冻融条件反复冻融1次，另一冻融条件为将匀浆液在-25±3℃冷冻18小时，而后在20℃的循环水中融化。

通过上述制备所得的转移因子溶液有效成分的含量高，主要技术指标多肽：≥6mg/ml，核苷酸：≥170μg/ml(以D－核糖计)，高于标准(标准为多肽：≥1.5mg/ml，核苷酸(以D－核糖计)：≥50μg/ml)的3倍以上。高分子物质低于3％(标准为不得过5％)。细胞活力测定玫瑰花结百分率≥15％(标准为玫瑰花结百分率≥10％)；每毫升含游离氨基酸的量大于2.5mg(标准规定不得少于2mg)。

实施例2

转移因子溶液的制备方法(参见图1)：

将融化后的猪脾脏用纯化水冲洗，去除脂肪，剪去结缔组织，置入绞肉机内绞碎，绞碎后待用。

绞碎后脾脏与0.9％NaCl溶液按重量比为1:1.4的混合，混合后加入至胶体磨机中磨1～2分钟，即得匀浆液。其中，胶体磨的缝隙5～10um。

匀浆液经反复冻融处理5次，冻融后用2mol/L的HCL溶液调匀浆液PH值4.0，而后以2500转/分钟的速度离心20分钟，收集上清液，上清液再经2mol/L的NaOH溶液调节PH值至7.0，调节PH值后过滤，过滤后滤液再经中空纤维柱超滤(压力控制在0.1-0.2Mpa)，滤液即得转移因子溶液，所得转移因子溶液分装，送入-25±3℃低温冷冻保存。其中，中空纤维柱超滤压力控制在0.1-0.2Mpa。

所述反复冻融处理是将匀浆液在-25±3℃冷冻56小时，而后在25℃的循环水中融化，作为一次冻融处理，按照此冻融条件反复冻融3次；而后再以下述另一冻融条件反复冻融2次，另一冻融条件为将匀浆液在-25±3℃冷冻12小时，而后在25℃的循环水中融化。

通过上述制备所得的转移因子溶液有效成分的含量高，主要技术指标多肽：≥6mg/ml，核苷酸：≥170μg/ml(以D－核糖计)，高于标准(标准为多肽：≥1.5mg/ml，核苷酸(以D－核糖计)：≥50μg/ml)的3倍以上。高分子物质低于3％(标准为不得过5％)。细胞活力测定玫瑰花结百分率≥15％(标准为玫瑰花结百分率≥10％)；每毫升含游离氨基酸的量大于2.5mg(标准规定不得少于2mg)。

Claims (6)

1.一种转移因子溶液，其特征在于：动物脾脏与NaCl溶液按重量比为1:1.3-1.4的混合，混合后磨匀，获得的匀浆液经反复冻融处理4-6次，冻融后用HCl溶液，调匀浆液p H值3.5～4.5，而后离心收集上清液，上清液再经NaOH溶液调节p H值至6.2～7.2，最后过滤，即得转移因子溶液；

所述反复冻融处理是将匀浆液在-25±3℃冷冻48-56小时，而后在20-25℃的循环水中融化，作为一次冻融处理，按照此冻融条件反复冻融3-4次；而后再以下述另一冻融条件反复冻融1-2次，另一冻融条件为将匀浆液在-25±3℃冷冻12-18小时，而后在20-25℃的循环水中融化。

2.按权利要求1所述的转移因子溶液，其特征在于：所述动物脾脏为猪或牛的脾脏。

3.按权利要求1所述的转移因子溶液，其特征在于：所述动物脾脏与NaCl溶液按重量比为1:1.3-1.4的混合，混合后加入胶体磨机中磨1～2分钟，即得匀浆液。

4.一种权利要求1所述的转移因子溶液的制备方法，其特征在于：动物脾脏与NaCl溶液按重量比为1:1.3-1.4的混合，混合后磨匀，获得的匀浆液经反复冻融处理5-6次，冻融后用HCl溶液，调匀浆液pH 值3.5～4.5，而后离心收集上清液，上清液再经NaOH溶液调节p H值至6.2～7.2，最后过滤，即得转移因子溶液；

所述反复冻融处理是将匀浆液在-25±3℃冷冻48-56小时，而后在20-25℃的循环水中融化，作为一次冻融处理，按照此冻融条件反复冻融3-4次；而后再以下述另一冻融条件反复冻融2-3次，另一冻融条件为将匀浆液在-25±3℃冷冻12-18小时，而后在20-25℃的循环水中融化。

5.按权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述动物脾脏与NaCl溶液按重量比为1:1.3-1.4的混合，混合后加入胶体磨机中磨1～2分钟，即得匀浆液。

6.按权利要求4所述的转移因子溶液的制备方法，其特征在于：所述pH 值3.5～4.5的匀浆液在2000-2500转/分钟的速度离心20-30分钟，收集上清液，上清液再经NaOH溶液调节pH 值至6.2～7.2，调节pH 值后过滤，过滤后滤液再经中空纤维柱超滤，滤液即得转移因子溶液。