CN105349512A - 一种从木瓜中提取蛋白酶的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种从木瓜中提取蛋白酶的方法，包括下述步骤：(1)挑选新鲜青木瓜，将之洗净，用刀片将其切成小块，然后用榨汁设备将新鲜木瓜块压榨，得到木瓜榨汁后加入保护剂。(2)将采集的木瓜榨汁用过滤设备过滤。(3)将过滤之后的滤液去杂质，并放入干燥设备内进行干燥处理而得木瓜蛋白酶粗品。(4)将木瓜蛋白酶粗粉碎与半胱氨酸溶液混合后放入研磨机进行研磨。(5)将研磨后所得混合液的PH调后进行过滤。(6)将所得滤液放入硫酸铵和氯化钠进行二次盐析。(7)将盐析无放入低温半胱氨酸溶液中进行结晶(8)将结晶体溶于蒸馏水中进行重结晶，而得木瓜蛋白酶。本发明采用了研磨、盐析、结晶等精细方法，使得木瓜蛋白酶的纯度大大提高，能完全适用于食品、饲料、工业以及医学领域，且木瓜蛋白酶的活性大，产量高,成本低。

Description

一种从木瓜中提取蛋白酶的方法
技术领域
本发明公开一种从木瓜中提取蛋白酶的方法。
背景技术
木瓜又称番木瓜或万寿果，原产于热带美洲及非洲，是一种热带水果，后来引种到我国。木瓜果实呈肉色橙黄或红橙色，可食率高，含有丰富的的木瓜酶、维生素C、钙、胡萝卜素和蛋白质及矿物质等，营养介值很高。其中的木瓜酶的用途可用于食品加工业、医药保健品、饲料添加剂、皮革工业和纺织工业等，用途非常广泛。由此，越来越多的厂家开始从事从木瓜中提取生物蛋白酶的产业，但目前从木瓜中提取的生物蛋白酶的纯度不是特别高，究其原因是相关提取的工艺相对落后，现有的木瓜蛋白酶提取的方法通常为：原料验收木瓜乳汁→胶体磨→酶分离→冷藏→微滤→超滤→冷冻干燥→粉碎→包装，这个方法存在着的问题有(1)在酶分离过程中，采用碟片分离机对木瓜乳汁进行酶与水、杂质和纤维的分离，在经碟片分离机前的木瓜浆酶活力u/g≥12万，而木瓜乳汁经过碟片分离机后的木瓜浆酶活力u/g≤8万，即木瓜蛋白酶的存活率降低了许多；(2)在微滤过程中一直采用0.2μm中空纤维管的中空纤维组合微滤机过滤木瓜乳汁，在实践中发现，0.2μm的中空纤维滤管容易堵塞、造成过滤慢，而且滤出的清液经过检测，微生物总数≥2000个，超过了国家标准；(3)在超滤过程中用6000分子量的中空纤维组合的中空纤维组合超滤机对木瓜乳汁进行超滤，木瓜蛋白酶跑漏5％。影响到木瓜蛋白酶的生产质量和产量。近年来，由于木瓜生物蛋白酶在工业和医学上的应用日趋广泛，对其纯度要求要更高。因此，有必要对提取纯化工艺作进一步研究。
发明内容
发明目的：本发明为了解决现有技术的不足，提供了一种从木瓜中提取蛋白酶的方法，以改善现有从木瓜中提取蛋白酶的纯度问题。
本发明的技术方案是这样实现的：
一种从木瓜中提取蛋白酶的方法，具体包括以下步骤：
(1)挑选新鲜青木瓜，将之洗净，用刀片将其切成小块，然后用榨汁设备将新鲜木瓜块压榨，得到木瓜榨汁后加入保护剂；
(2)将采集的木瓜榨汁用过滤设备过滤；
(3)将过滤之后的滤液去杂质，并放入干燥设备内进行干燥处理而得木瓜蛋白酶粗品；
(4)将木瓜蛋白酶粗粉碎与半胱氨酸溶液混合后放入研磨机进行研磨；
(5)将研磨后所得混合液的PH调后进行过滤；
(6)将所得滤液放入硫酸铵和氯化钠进行二次盐析；
(7)将盐析无放入低温半胱氨酸溶液中进行结晶；
(8)将结晶体溶于蒸馏水中进行重结晶，而得木瓜蛋白酶。
进一步地，所述的新鲜木瓜浆液为去纤维后的新鲜木瓜渣。
进一步地，所述步骤(2)的过滤为采用80-180目滤网的过滤。
进一步地，所述步骤(4)中所述的研磨是将木瓜蛋白酶粗粉碎与0.01-0.05M半胱氨酸溶液混合。
进一步地，所述步骤(5)的混合液PH值调到7.0-10.0。
进一步地，所述步骤(7)中所述的结晶是在2-4℃的温度下进行结晶。
本发明的有益效果为：
1.本发明的有益效果是：本发明操作流程简单，提取到的木瓜蛋白酶的纯度高、活性大且产量高。
2.木瓜蛋白酶在医学上有抗癌、肿瘤、消炎、止痛等功效；在食品业可利用酶促反应有效转化蛋白质，大大提高食品营养价值，降低成本，有利于人体的消化和吸收，还涉及其他产业，用途广泛，本发明提供的方法提取的木瓜蛋白酶能够充分发挥挖掘木瓜的潜在的经济价值，为农民增收提供了一种新的途径。
具体实施方式
下面通过具体的实施例对本发明做进一步的详细描述。
实施例1：
一种从木瓜中提取蛋白酶的方法，具体包括以下步骤：
(1)挑选新鲜青木瓜，将之洗净，用刀片将其切成小块，然后用榨汁设备将新鲜木瓜块压榨，得到木瓜榨汁后加入保护剂；
(2)用80目过滤网过滤木瓜榨汁，去除杂质，得到滤液；
(3)将滤液放入干燥设备内进行干燥处理而得木瓜蛋白酶粗品；
(4)将木瓜蛋白酶粗粉碎与0.02M半胱氨酸溶液混合后放入研磨机进行研磨；
(5)将研磨后所得混合液的PH调到7.0后进行过滤；
(6)将所得滤液放入硫酸铵和氯化钠进行二次盐析；
(7)将盐析无放入2℃半胱氨酸溶液中进行结晶；
(8)将结晶体溶于蒸馏水中进行重结晶，而得木瓜蛋白酶。
实施例2：
一种从木瓜中提取蛋白酶的方法，具体包括以下步骤：
(1)挑选新鲜青木瓜，将之洗净，用刀片将其切成小块，然后用榨汁设备将新鲜木瓜块压榨，得到木瓜榨汁后加入保护剂；
(2)用160目过滤网过滤木瓜榨汁，去除杂质，得到滤液；
(3)将滤液放入干燥设备内进行干燥处理而得木瓜蛋白酶粗品；
(4)将木瓜蛋白酶粗粉碎与0.03M半胱氨酸溶液混合后放入研磨机进行研磨；
(5)将研磨后所得混合液的PH调到9.0后进行过滤；
(6)将所得滤液放入硫酸铵和氯化钠进行二次盐析；
(7)将盐析无放入3℃半胱氨酸溶液中进行结晶；
(8)将结晶体溶于蒸馏水中进行重结晶，而得木瓜蛋白酶。
实施例3：
一种从木瓜中提取蛋白酶的方法，具体包括以下步骤：
(1)挑选新鲜青木瓜，将之洗净，用刀片将其切成小块，然后用榨汁设备将新鲜木瓜块压榨，得到木瓜榨汁后加入保护剂；
(2)用180目过滤网过滤木瓜榨汁，去除杂质，得到滤液；
(3)将滤液放入干燥设备内进行干燥处理而得木瓜蛋白酶粗品；
(4)将木瓜蛋白酶粗粉碎与0.04M半胱氨酸溶液混合后放入研磨机进行研磨；
(5)将研磨后所得混合液的PH调到10.0后进行过滤；
(6)将所得滤液放入硫酸铵和氯化钠进行二次盐析；
(7)将盐析无放入4℃半胱氨酸溶液中进行结晶；
(8)将结晶体溶于蒸馏水中进行重结晶，而得木瓜蛋白酶。
经过上述三个实例所得到的木瓜蛋白酶的分别是134万单位/克；145万单位/克；152万单位/克。

Claims (6)

1.一种从木瓜中提取蛋白酶的方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)挑选新鲜青木瓜，将之洗净，用刀片将其切成小块，然后用榨汁设备将新鲜木瓜块压榨，得到木瓜榨汁后加入保护剂；
(2)将采集的木瓜榨汁用过滤设备过滤；
(3)将过滤之后的滤液去杂质，并放入干燥设备内进行干燥处理而得木瓜蛋白酶粗品；
(4)将木瓜蛋白酶粗粉碎与半胱氨酸溶液混合后放入研磨机进行研磨；
(5)将研磨后所得混合液的PH调后进行过滤；
(6)将所得滤液放入硫酸铵和氯化钠进行二次盐析；
(7)将盐析无放入低温半胱氨酸溶液中进行结晶；
(8)将结晶体溶于蒸馏水中进行重结晶，而得木瓜蛋白酶。
2.根据要求1所述的从木瓜榨汁提取蛋白酶的方法，其特征在于，所述的新鲜木瓜浆液为去纤维后的新鲜木瓜渣。
3.根据要求1所述的从木瓜榨计提取蛋白酶的方法，其特征在于，所述步骤(2)的过滤为采用80-180目滤网的过滤。
4.根据要求1所述的从木瓜榨计提取蛋白酶的方法，其特征在于，所述步骤(4)中所述的研磨是将木瓜蛋白酶粗粉碎与0.01-0.05M半胱氨酸溶液混合。
5.根据要求1所述的从木瓜榨计提取蛋白酶的方法，其特征在于，所述步骤(5)的混合液PH值调到7.0-10.0。
6.根据要求1所述的从木瓜榨计提取蛋白酶的方法，其特征在于，所述步骤(7)中所述的结晶是在2-4℃的温度下进行结晶。
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