CN105331665A - 一种猪脑蛋白酶解制备脑多肽和脑小分子肽的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种猪脑蛋白酶解制备脑多肽和脑小分子肽的方法。一种猪脑蛋白酶解制备脑多肽和脑小分子肽的方法，包括以下步骤：原料预处理、磨浆、微波、离心、调浆、微波酶解、沉析、粗滤、微滤、超滤、纳滤、RO膜浓缩和冷冻干燥。本发明的方法用微波与高速离心机耦联，替代用有机溶剂提取猪脑分离蛋白，工艺简单，时间短，效率高，生产和劳动安全可靠；本发明的方法提取脑分离蛋白和酶解时间短，因而生产周期短；本发明的方法工艺简单，易控制，适于工厂化规模生产采用。

Description

一种猪脑蛋白酶解制备脑多肽和脑小分子肽的方法

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种猪脑蛋白酶解制备脑多肽和脑小分子肽的方法。

背景技术

哺乳动物脑蛋白的水解物，能治疗一些脑功能疾病，已被临床所证明。上世纪七十年代末期，奥地利一家名叫伊比威(Ebewe)的药厂研制出脑活素，临床用于治疗神经系统疾病，特别是阿尔茨海默病的治疗(AD、俗称老年痴呆症)，能明显延缓老年痴呆病变的进展，改善痴呆症状，对脑中风、脑震荡、脑损伤、脑动脉硬化、新生儿脑缺血缺氧性脑病等的治疗也有较好的疗效。这种脑活素，是用猪脑蛋白经水解并进一步提纯制得的一种生物制剂，含有75﹪的游离氨基酸和25﹪的小分子肽。研究表明脑活素的药理作用与其所含的小分子肽类的多种活性存在量的关系。因此，近年来国内不少机构进行了大量研究，得到了众多的脑蛋白水解物产品进入临床。

据分析，鲜猪脑中含水率在78-82﹪，蛋白质9-11﹪，磷脂7-9﹪，胆固醇3-3.5﹪。

目前，由猪脑制备脑多肽和脑小分子肽的方法，从公开的文献资料中主要是以下几种：

(一)一种猪脑蛋白水解物中小分子肽的制备：将新鲜猪脑去膜、去血管、洗净后切碎，投入索氏提取器内、用丙酮回流12小时后，取出压碎晾干，再用丙酮回流12个小时。所得固形物再用乙醚按上述方法回流提取共24小时，晾干后即得猪脑脱脂蛋白粉。将脱脂蛋白粉加入5倍的纯净水混合并加入猪脑蛋白粉重量2﹪的酸性蛋白酶、混匀后用冰醋酸调PH值在2.0-4.0之间，然后过滤、滤液50℃减压蒸干后分别用石油醚和无水乙醇搅拌24小时、抽滤，滤饼真空干燥即得猪脑蛋白水解物，水解物溶解，用SephadexG15凝胶柱吸附，以0.9﹪Nacl为洗脱液进行分离纯化，分段收集各流份并脱盐，冷冻干燥后既可得到不同分子量范围的小分子肽组份。

(二)一种猪脑水解蛋白和单唾液酸四已糖神经节苷脂联产工艺(选择猪脑水解蛋白部分)，包括以下步骤：

步骤1)将食品级新鲜猪脑粉碎后加入1-4倍体积的极性有机溶剂，匀浆2-4小时后过滤、分别收集滤饼和滤液。

步骤2)向步骤1所得的滤饼中加入1-3倍体积的丙酮，匀浆1-2小时脱去磷脂、过滤、减压浓缩、20-30℃干燥，获得脱脂猪脑粉，向脱脂猪脑粉中加入盐缓冲液调节PH值为5-7，按照1-3g/L的比例分别加入2种或3种水解酶，在25-42℃条件下水解2-10小时，水解结束后，70-100℃灭活5-10分钟，室温放置降温之后将水解物液经一定分子量的超滤膜过滤，所得滤液再经截留分子量为100-500的纳滤膜浓缩和真空冷冻干燥获得注射级猪脑水解蛋白。

(三)一种脑蛋白水解液的提取方法，包括以下各步骤：

步骤1)取新鲜猪脑或冷冻猪脑，摘除小脑干，并去除大脑组织表面的筋膜。用纯化水或注射用水清洗干净，加入1-2倍纯化水或注射用水，用胶体磨匀浆2-3次。

步骤2)取步骤(1)的匀浆液、加热至35-45℃、调PH值至7.5-8.5，加浆重0.5-2.5﹪的胰蛋白酶，搅拌反应2-8小时，调节PH值至2.0-2.5，加热至90℃以上保温10-30分钟，冷却至温室度、离心。

步骤3)取步骤(2)离心上清液，按体积比1-3：1-3加入40-50W/V﹪羟胺溶液，调节PH值为1.5-2.5，在80-100℃密闭条件下反应10-30小时，冷却至40℃以下，调PH值至6.9-7.5，离心过滤。

步骤4)取步骤(3)的离心上清液、超滤，收集滤液即为蛋白水解物溶液。

(四)一种从动物脑中提取脑活素的方法，包括以下步骤：

步骤1)将猪脑加蒸馏水、用Ca(oH)2调PH值7-9。

步骤2)加猪或牛胰酶、甲苯、蒸馏水在37-50条件下，搅拌10-20小时，用磷酸调PH值为5.7-5.8.

步骤3)煮沸、过滤、滤液用Hcl调PH值为6-7、减压浓缩，低温冷却再浓缩，用NaOH调PH为7-9减压浓缩干燥。

步骤4)将浓缩至干的物料加水溶解，过滤、滤液用Hcl调PH值为4-5，用活性炭脱色、过滤、滤液浓缩后用截留分子量为10000的透析袋进行对水透析24小时，过滤，透析液加NaHSO3，过滤，分装灭菌而成。

(五)一种制取猪脑多肽的方法，包括以下步骤：

将新鲜猪脑匀浆，三次冻融，在-20℃冷冻12-24小时后，再恢复室温至溶解，如上述重复操作三次，使细胞破碎，加入胰蛋白酶进行酶解，酶解液经微滤和能拦截10000Da的超滤膜过滤，透过液即为脑多肽。

上述5种制取猪脑多肽的方法中，方法(一)、(二)、(三)具有大量使用有机溶剂，生产成本高，生产安全和劳动安全要求高的缺点；且生产周期长，仅分离出脑蛋白的时间分别是48小时、30小时和40小时。方法(四)和方法(五)唯不使用有机溶剂，但生产周期长，从投料到出产品需要3-4天。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种从猪脑中制取脑蛋白肽的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种猪脑蛋白酶解制备脑多肽和脑小分子肽的方法，包括如下步骤：

(1)取出鲜猪脑或解冻的冰冻猪脑，用纯净水洗净表面的污物、血水及杂质，摘取筋膜、血管；

(2)将清洗干净的猪脑，按原料与纯净水比例为1:0.8-1.0混合后，用胶体磨研磨匀浆，初磨时调到最粗的细度，待组织基本破碎完后再调至较细的细度，研磨匀浆循环8-10min/批，然后添加为匀浆2倍的纯净水继续匀浆2-3min，把每批次匀浆好的脑浆液混合均匀，用NaOH溶液调PH值至9.0；

(3)将调节好的脑浆匀浆液，置于带搅拌装置的微波罐中，控制温度55℃，微波20-25min，保温15min；

(4)将经过微波处理的匀浆液排出，在40-50℃用蝶式高速离心机两次分离蛋白和脂质，第一次离心控制排出的轻液在35-45％之间，排出的轻液后，再微波15min后，进行第二次离心，第二次离心所得的轻液即为磷脂溶液，将两次离心的所得的浓液混匀；

(5)将步骤4所得的混匀浓液，用稀盐酸调PH值至4.3-4.5，操作使混匀浓液获得最佳沉析点，使蛋白质成雲状大片沉出，很快分层，然后用200目滤布离心机脱液，收集滤渣，滤渣即为脑分离蛋白；

(6)将收集的滤渣，添加为湿滤渣量2-2.5倍的纯净水，使溶液的浓度在5-8％，用NaOH溶液调PH值为9.0，投入胶体磨将粘结的脑分离蛋白打散均匀，随后添加按分离蛋白质量4.5％的胰酶(5000u/g)继续匀浆循环，数分钟后检测浆液的PH值，当PH值下降至8.0以下时，补碱调PH值至8.2-8.5，再循环数分钟再检测浆液PH值，当PH值再下降至7.5左右时，再补碱调至8.6，再循环3分钟，将浆液排出；

(7)将步骤(6)得到的浆液送入微波前检测PH值，当PH值小于7.5时，补碱调PH值至7.8，进行微波辅助酶解，微波15-20min，控制温度小于55℃，当酶解液PH值下降至7.2时结束酶解，启动微波罐最大微波功率，将酶解液升温至85℃时，保温5-10min，灭酶活；

(8)将已灭酶活的酶解液排出，酶解液温度下降小于50℃时，在搅拌条件下，添加入用15％醋酸溶解1.5％壳聚糖溶液，调节PH值至4.8-5.0，沉析未酶解的脑蛋白、磷脂及其它大分子杂质；沉析物用200目滤布离心过滤，去除沉淀；

(9)步骤(8)所得的离心液，用0.45um中空纤维膜进行微滤，滤液用能拦截分子量10000Da的超滤膜过滤，透过液即为猪脑多肽溶液，若只做多肽时，将此溶液减压浓缩，然后冷冻干燥，即得多肽粉；

(10)当要制备小分子脑肽时，将多肽液进一步用能拦截分子量1000Da的纳滤膜过滤，滤液再用RO膜浓缩，将浓缩液冷冻，干燥，即得到小分子脑肽。

作为优选，步骤(2)中的所述的最粗的细度为80目；所述的较细的细度为120目。

作为优选，步骤(3)中所述的微波罐的频率为2450MHZ，功率为20KW。

作为优选，步骤(4)中的第一次离心的转速为8000r/min；第二次离心的转速为10000r/min。

作为优选，步骤(4)中的第二次离心时匀浆液的温度不低于38℃。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

1.本发明的方法用微波与高速离心机耦联，替代用有机溶剂提取猪脑分离蛋白，工艺简单，时间短，效率高，生产和劳动安全可靠。

2.本发明的方法提取脑分离蛋白和酶解时间短，因而生产周期短。

3.本发明的方法工艺简单，易控制，适于工厂化规模生产采用。

附图说明

图1为本发明制备脑多肽和脑小分子肽的方法的工艺流程图。

具体实施方式

下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，但本发明的实施方式并不局限于实施例表示的范围。这些实施例仅用于说明本发明，而非用于限制本发明的范围。此外，在阅读本发明的内容后，本领域的技术人员可以对本发明作各种修改，这些等价变化同样落于本发明所附权利要求书所限定的范围。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1：

一种猪脑蛋白酶解制备脑多肽和脑小分子肽的方法，包括如下步骤：

(1)取出鲜猪脑或解冻的冰冻猪脑，用纯净水洗净表面的污物、血水及杂质，摘取筋膜、血管；

(2)将清洗干净的猪脑，按原料与纯净水比例为1:0.8混合后，用胶体磨研磨匀浆，初磨时调到最粗的细度，待组织基本破碎完后再调至较细的细度，研磨匀浆循环8min/批，然后添加为匀浆2倍的纯净水继续匀浆2min，把每批次匀浆好的脑浆液混合均匀，用NaOH溶液调PH值至9.0；所述的最粗的细度为80目；所述的较细的细度为120目；

(3)将调节好的脑浆匀浆液，置于带搅拌装置的微波罐中，控制温度55℃，微波20min，保温15min；所述的微波罐的频率为2450MHZ，功率为20KW；

(4)将经过微波处理的匀浆液排出，在40℃用蝶式高速离心机两次分离蛋白和脂质，第一次离心控制排出的轻液为35％，排出的轻液后，再微波15min后，进行第二次离心，第二次离心所得的轻液即为磷脂溶液，将两次离心的所得的浓液混匀；第一次离心的转速为8000r/min；第二次离心的转速为10000r/min；第二次离心时匀浆液的温度不低于38℃；

(5)将步骤4所得的混匀浓液，用稀盐酸调PH值至4.3，操作使混匀浓液获得最佳沉析点，使蛋白质成雲状大片沉出，很快分层，然后用200目滤布离心机脱液，收集滤渣，滤渣即为脑分离蛋白；

(6)将收集的滤渣，添加为湿滤渣量2倍的纯净水，使溶液的浓度在5％，用NaOH溶液调PH值为9.0，投入胶体磨将粘结的脑分离蛋白打散均匀，随后添加按分离蛋白质量4.5％的胰酶(5000u/g)继续匀浆循环，数分钟后检测浆液的PH值，当PH值下降至8.0以下时，补碱调PH值至8.2，再循环数分钟再检测浆液PH值，当PH值再下降至7.5左右时，再补碱调至8.6，再循环3分钟，将浆液排出；

(7)将步骤(6)得到的浆液送入微波前检测PH值，当PH值小于7.5时，补碱调PH值至7.8，进行微波辅助酶解，微波15min，控制温度小于55℃，当酶解液PH值下降至7.2时结束酶解，启动微波罐最大微波功率，将酶解液升温至85℃时，保温5min，灭酶活；

(8)将已灭酶活的酶解液排出，酶解液温度下降小于50℃时，在搅拌条件下，添加入用15％醋酸溶解1.5％壳聚糖溶液，调节PH值至4.8，沉析未酶解的脑蛋白、磷脂及其它大分子杂质；沉析物用200目滤布离心过滤，去除沉淀；

(9)步骤(8)所得的离心液，用0.45um中空纤维膜进行微滤，滤液用能拦截分子量10000Da的超滤膜过滤，透过液即为猪脑多肽溶液，若只做多肽时，将此溶液减压浓缩，然后冷冻干燥，即得多肽粉；

(10)当要制备小分子脑肽时，将多肽液进一步用能拦截分子量1000Da的纳滤膜过滤，滤液再用RO膜浓缩，将浓缩液冷冻，干燥，即得到小分子脑肽。

实施例2：

一种猪脑蛋白酶解制备脑多肽和脑小分子肽的方法，包括如下步骤：

(1)取出鲜猪脑或解冻的冰冻猪脑，用纯净水洗净表面的污物、血水及杂质，摘取筋膜、血管；

(2)将清洗干净的猪脑，按原料与纯净水比例为1:1.0混合后，用胶体磨研磨匀浆，初磨时调到最粗的细度，待组织基本破碎完后再调至较细的细度，研磨匀浆循环10min/批，然后添加为匀浆2倍的纯净水继续匀浆3min，把每批次匀浆好的脑浆液混合均匀，用NaOH溶液调PH值至9.0；所述的最粗的细度为80目；所述的较细的细度为120目；

(3)将调节好的脑浆匀浆液，置于带搅拌装置的微波罐中，控制温度55℃，微波25min，保温15min；所述的微波罐的频率为2450MHZ，功率为20KW；

(4)将经过微波处理的匀浆液排出，在50℃用蝶式高速离心机两次分离蛋白和脂质，第一次离心控制排出的轻液在45％，排出的轻液后，再微波15min后，进行第二次离心，第二次离心所得的轻液即为磷脂溶液，将两次离心的所得的浓液混匀；第一次离心的转速为8000r/min；第二次离心的转速为10000r/min；第二次离心时匀浆液的温度不低于38℃；

(5)将步骤4所得的混匀浓液，用稀盐酸调PH值至4.5，操作使混匀浓液获得最佳沉析点，使蛋白质成雲状大片沉出，很快分层，然后用200目滤布离心机脱液，收集滤渣，滤渣即为脑分离蛋白；

(6)将收集的滤渣，添加为湿滤渣量2.5倍的纯净水，使溶液的浓度在8％，用NaOH溶液调PH值为9.0，投入胶体磨将粘结的脑分离蛋白打散均匀，随后添加按分离蛋白质量4.5％的胰酶(5000u/g)继续匀浆循环，数分钟后检测浆液的PH值，当PH值下降至8.0以下时，补碱调PH值至8.5，再循环数分钟再检测浆液PH值，当PH值再下降至7.5左右时，再补碱调至8.6，再循环3分钟，将浆液排出；

(7)将步骤(6)得到的浆液送入微波前检测PH值，当PH值小于7.5时，补碱调PH值至7.8，进行微波辅助酶解，微波20min，控制温度小于55℃，当酶解液PH值下降至7.2时结束酶解，启动微波罐最大微波功率，将酶解液升温至85℃时，保温10min，灭酶活；

(8)将已灭酶活的酶解液排出，酶解液温度下降小于50℃时，在搅拌条件下，添加入用15％醋酸溶解1.5％壳聚糖溶液，调节PH值至5.0，沉析未酶解的脑蛋白、磷脂及其它大分子杂质；沉析物用200目滤布离心过滤，去除沉淀；

(9)步骤(8)所得的离心液，用0.45um中空纤维膜进行微滤，滤液用能拦截分子量10000Da的超滤膜过滤，透过液即为猪脑多肽溶液，若只做多肽时，将此溶液减压浓缩，然后冷冻干燥，即得多肽粉；

(10)当要制备小分子脑肽时，将多肽液进一步用能拦截分子量1000Da的纳滤膜过滤，滤液再用RO膜浓缩，将浓缩液冷冻，干燥，即得到小分子脑肽。

实施例3：

一种猪脑蛋白酶解制备脑多肽和脑小分子肽的方法，包括如下步骤：

(1)取出鲜猪脑或解冻的冰冻猪脑，用纯净水洗净表面的污物、血水及杂质，摘取筋膜、血管；

(2)将清洗干净的猪脑，按原料与纯净水比例为1:0.9混合后，用胶体磨研磨匀浆，初磨时调到最粗的细度，待组织基本破碎完后再调至较细的细度，研磨匀浆循环9min/批，然后添加为匀浆2倍的纯净水继续匀浆2.5min，把每批次匀浆好的脑浆液混合均匀，用NaOH溶液调PH值至9.0；所述的最粗的细度为80目；所述的较细的细度为120目；

(3)将调节好的脑浆匀浆液，置于带搅拌装置的微波罐中，控制温度55℃，微波22min，保温15min；所述的微波罐的频率为2450MHZ，功率为20KW；

(4)将经过微波处理的匀浆液排出，在45℃用蝶式高速离心机两次分离蛋白和脂质，第一次离心控制排出的轻液在40％，排出的轻液后，再微波15min后，进行第二次离心，第二次离心所得的轻液即为磷脂溶液，将两次离心的所得的浓液混匀；第一次离心的转速为8000r/min；第二次离心的转速为10000r/min；第二次离心时匀浆液的温度不低于38℃；

(5)将步骤4所得的混匀浓液，用稀盐酸调PH值至4.4，操作使混匀浓液获得最佳沉析点，使蛋白质成雲状大片沉出，很快分层，然后用200目滤布离心机脱液，收集滤渣，滤渣即为脑分离蛋白；

(6)将收集的滤渣，添加为湿滤渣量2.3倍的纯净水，使溶液的浓度在7％，用NaOH溶液调PH值为9.0，投入胶体磨将粘结的脑分离蛋白打散均匀，随后添加按分离蛋白质量4.5％的胰酶(5000u/g)继续匀浆循环，数分钟后检测浆液的PH值，当PH值下降至8.0以下时，补碱调PH值至8.3，再循环数分钟再检测浆液PH值，当PH值再下降至7.5左右时，再补碱调至8.6，再循环3分钟，将浆液排出；

(7)将步骤(6)得到的浆液送入微波前检测PH值，当PH值小于7.5时，补碱调PH值至7.8，进行微波辅助酶解，微波18min，控制温度小于55℃，当酶解液PH值下降至7.2时结束酶解，启动微波罐最大微波功率，将酶解液升温至85℃时，保温8min，灭酶活；

(8)将已灭酶活的酶解液排出，酶解液温度下降小于50℃时，在搅拌条件下，添加入用15％醋酸溶解1.5％壳聚糖溶液，调节PH值至4.9，沉析未酶解的脑蛋白、磷脂及其它大分子杂质；沉析物用200目滤布离心过滤，去除沉淀；

(9)步骤(8)所得的离心液，用0.45um中空纤维膜进行微滤，滤液用能拦截分子量10000Da的超滤膜过滤，透过液即为猪脑多肽溶液，若只做多肽时，将此溶液减压浓缩，然后冷冻干燥，即得多肽粉；

(10)当要制备小分子脑肽时，将多肽液进一步用能拦截分子量1000Da的纳滤膜过滤，滤液再用RO膜浓缩，将浓缩液冷冻，干燥，即得到小分子脑肽。

表1本发明猪脑蛋白酶解制备脑多肽和脑小分子肽的方法的效果

从表1可以看出，本发明从猪脑蛋白酶解制备脑多肽和脑小分子肽的方法得到猪脑多肽纯度均在48％以上，猪脑小肽纯度均在63％以上，猪脑蛋白的酶解度均在38％以上。

前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。

Claims (5)

1.一种猪脑蛋白酶解制备脑多肽和脑小分子肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)取出鲜猪脑或解冻的冰冻猪脑，用纯净水洗净表面的污物、血水及杂质，摘取筋膜、血管；

(2)将清洗干净的猪脑，按原料与纯净水比例为1:0.8-1.0混合后，用胶体磨研磨匀浆，初磨时调到最粗的细度，待组织基本破碎完后再调至较细的细度，研磨匀浆循环8-10min/批，然后添加为匀浆2倍的纯净水继续匀浆2-3min，把每批次匀浆好的脑浆液混合均匀，用NaOH溶液调PH值至9.0；

(3)将调节好的脑浆匀浆液，置于带搅拌装置的微波罐中，控制温度55℃，微波20-25min，保温15min；

(4)将经过微波处理的匀浆液排出，在40-50℃用蝶式高速离心机两次分离蛋白和脂质，第一次离心控制排出的轻液在35-45％之间，排出的轻液后，再微波15min后，进行第二次离心，第二次离心所得的轻液即为磷脂溶液，将两次离心的所得的浓液混匀；

(5)将步骤4所得的混匀浓液，用稀盐酸调PH值至4.3-4.5，操作使混匀浓液获得最佳沉析点，使蛋白质成雲状大片沉出，很快分层，然后用200目滤布离心机脱液，收集滤渣，滤渣即为脑分离蛋白；

(6)将收集的滤渣，添加为湿滤渣量2-2.5倍的纯净水，使溶液的浓度在5-8％，用NaOH溶液调PH值为9.0，投入胶体磨将粘结的脑分离蛋白打散均匀，随后添加按分离蛋白质量4.5％的胰酶(5000u/g)继续匀浆循环，数分钟后检测浆液的PH值，当PH值下降至8.0以下时，补碱调PH值至8.2-8.5，再循环数分钟再检测浆液PH值，当PH值再下降至7.5左右时，再补碱调至8.6，再循环3分钟，将浆液排出；

(7)将步骤(6)得到的浆液送入微波前检测PH值，当PH值小于7.5时，补碱调PH值至7.8，进行微波辅助酶解，微波15-20min，控制温度小于55℃，当酶解液PH值下降至7.2时结束酶解，启动微波罐最大微波功率，将酶解液升温至85℃时，保温5-10min，灭酶活；

(8)将已灭酶活的酶解液排出，酶解液温度下降小于50℃时，在搅拌条件下，添加入用15％醋酸溶解1.5％壳聚糖溶液，调节PH值至4.8-5.0，沉析未酶解的脑蛋白、磷脂及其它大分子杂质；沉析物用200目滤布离心过滤，去除沉淀；

(9)步骤(8)所得的离心液，用0.45um中空纤维膜进行微滤，滤液用能拦截分子量10000Da的超滤膜过滤，透过液即为猪脑多肽溶液，若只做多肽时，将此溶液减压浓缩，然后冷冻干燥，即得多肽粉；

(10)当要制备小分子脑肽时，将多肽液进一步用能拦截分子量1000Da的纳滤膜过滤，滤液再用RO膜浓缩，将浓缩液冷冻，干燥，即得到小分子脑肽。

2.根据权利要求1所述的猪脑蛋白酶解制备脑多肽和脑小分子肽的方法，其特征在于，步骤(2)中的所述的最粗的细度为80目；所述的较细的细度为120目。

3.根据权利要求1所述的猪脑蛋白酶解制备脑多肽和脑小分子肽的方法，其特征在于，步骤(3)中所述的微波罐的频率为2450MHZ，功率为20KW。

4.根据权利要求1所述的猪脑蛋白酶解制备脑多肽和脑小分子肽的方法，其特征在于，步骤(4)中的第一次离心的转速为8000r/min；第二次离心的转速为10000r/min。

5.根据权利要求1所述的猪脑蛋白酶解制备脑多肽和脑小分子肽的方法，其特征在于，步骤(4)中的第二次离心时匀浆液的温度不低于38℃。