CN103952458A - 微波辅助酶解制备鸭血活性肽的方法 - Google Patents

微波辅助酶解制备鸭血活性肽的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了微波辅助酶解制备鸭血活性肽的方法，涉及畜禽副产品深加工及综合利用技术领域。本发明方法包括如下步骤：鸭血抗凝，离心分离，超声波破壁，微波辅助酶解，二次酶解，灭酶，膜过滤，喷雾干燥。产品可作为各种食品原料或添加剂。与传统的方法相比，微波辅助酶解，使蛋白质分子剧烈运动，可显著提高酶解速度，缩短酶解时间。本方法工艺简单，成本低，环保，适合鸭血深加工的工业化生产。

Description

微波辅助酶解制备鸭血活性肽的方法
技术领域
本发明涉及畜禽副产品深加工及综合利用技术领域，特别涉及一种微波辅助酶解制备鸭血活性肽的方法
背景技术
鸭血，为家鸭血液，取新鲜血为好，味咸，性寒，具有补血、解毒之效，鸭血是最理想的补血佳品，用于失血血虚。鸭血含有丰富蛋白质、维生素、富含铁、钙、钾等矿物质。
我国鸭血资源十分丰富，但是目前鸭血血液副产品加工技术落后，利用率不到10％，致使大量宝贵营养资源流失，为了解决鸭血资源浪费问题，本发明以鸭血为原料制备鸭血活性肽。鸭血中蛋白含量高，可生产加工活性肽。活性肽不仅具有营养功能和生物活性，而且还具有被肠道快速吸收的特点。目前工业生产的蛋白粉主要采用酸碱法或酶解法，但是使用酸碱法会使氨基酸营养价值降低，而采用酶解法过程需要十多小时甚至更长时间。微波在辅助酶解上的研究越来越受到研究人员的关注，微波辅助酶解可大大缩短酶解时间，提高生产效率，便于工业化生产。
经专利检索，未发现用微波辅助酶解的方法制备鸭血活性肽的相关文献。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种微波辅助酶解制备鸭血活性肽的方法，包括如下步骤：鸭血抗凝，离心分离，超声波破壁，微波辅助酶解，二次酶解，灭酶，膜过滤，喷雾干燥。
微波辅助酶解制备鸭血活性肽的方法，具体步骤如下：
(1)鸭血抗凝：取色正新鲜、无夹杂鸭毛和杂质、质地柔软、非病鸭合格鸭血，加入0.2％～0.4％柠檬酸钠抗凝；
(2)离心分离：使用高速冷冻离心机进行离心，离心温度1～4℃，离心转速为3000～4800rpm，离心时间10～18min；
(3)超声波破壁：超声波工作条件为功率250～450w，时间8～18min，在常温下操作；
(4)微波辅助酶解：微波辅助第一次酶解，微波功率为550～750w，温度控制在50～65之间，酶解的时间为8～18min，底物浓度为6～9％，用1.2M NaOH调节pH至7.5～10.0，再加入pH为7.5～10.0的磷酸盐缓冲液，加入酶活力为2.5AU-A/g的内切酶，酶的添加量为底物的3～8％；
(5)二次酶解：在第一次酶解结束后，再加入酶活力为220000U/g食品级蛋白酶进行第二次酶解，加酶量为底物的2～3％，酶解时间为2～4min，微波功率和温度与第一次酶解相同，脱去苦味；
(6)灭酶：在90～100℃水浴锅中灭酶，灭酶时间15～30min；
(7)膜过滤：采用孔径为3500Da～10000Da的膜，对酶解液进行过滤，滤除大分子物质；
(8)喷雾干燥：进风口温度控制在160～200℃，出风口温度控制在80～100℃，得到鸭血活性肽粉末。
上述步骤(2)中离心后，血细胞加入同体积0.9％生理盐水冲洗2～4次。
上述步骤(3)中超声波破壁过程中间歇比采用2:1或1:1或1:2。
本发明的有益效果在于：
1、以鸭血为原料，充分利用鸭血资源，避免鸭血资源的浪费。
2、用微波辅助酶解，缩短酶解反应时间，提高生产效率。
3、本方法制备的活性肽，生物活性好，对氨基酸营养破坏小。
4、本发明方法工艺简单，成本低，环保，适合鸭血深加工的工业化生产。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
实施例1
(1)鸭血抗凝：取色正新鲜、无夹杂鸭毛和杂质、质地柔软、非病鸭合格鸭血，加入0.2％柠檬酸钠抗凝，缓慢搅拌；
(2)离心分离：使用高速冷冻离心机进行离心，在4℃条件下，用3000rpm的转速离心18min，离心后，倒出上清液，加入同体积0.9％生理盐水离心冲洗2次，得到较为纯净的血细胞；
(3)超声波破壁：调整功率为250w，采用2:1间歇比，加入两倍体积去离子水，超声处理18min，在常温下操作；用紫外-可见光光度计测量上述溶液，吸光度从0.101上升到0.409，破壁效果显著；
(4)微波辅助酶解：微波辅助第一次酶解，微波功率为550w，温度为为65℃，酶解的时间为18min，底物浓度为6％，用1.2M NaOH调节pH至10.0，再加入pH为10.0的磷酸盐缓冲液，加入酶活力为2.5AU-A/g的内切酶，酶的添加量为底物的3％；
(5)二次酶解：在第一次酶解结束后，再加入酶活力为220000U/g食品级蛋白酶进行第二次酶解，加酶量为底物的2％，酶解时间为4min，微波功率和温度与第一次酶解相同，脱去苦味；
(6)灭酶：在90℃水浴锅中灭酶，灭酶时间30min；
(7)膜过滤：采用孔径为3500Da的膜，对酶解液进行过滤，滤除大分子物质；用高效液相色谱分析滤液，90％以上是小于3500Da的活性肽；
(8)喷雾干燥：进风口温度控制在160℃，出风口温度控制在80℃，得到鸭血活性肽粉末。
实施例2
(1)鸭血抗凝：取色正新鲜、无夹杂鸭毛和杂质、质地柔软、非病鸭合格鸭血，加入0.3％柠檬酸钠抗凝，缓慢搅拌；
(2)离心分离：使用高速冷冻离心机进行离心，在2℃条件下，用3900rpm的转速离心14min，离心后，倒出上清液，加入同体积0.9％生理盐水离心冲洗2次，得到较为纯净的血细胞；
(3)超声波破壁：调整功率为350w，采用1:1间歇比，加入两倍体积去离子水，超声处理13min，在常温下操作；用紫外-可见光光度计测量上述溶液，吸光度从0.10上升到0.401，破壁效果显著；
(4)微波辅助酶解：微波辅助第一次酶解，微波功率为650w，温度为60℃，酶解的时间为13min，底物浓度为7％，用1.2M NaOH调节pH至9.0，再加入pH为9.0的磷酸盐缓冲液，加入酶活力为2.5AU-A/g的内切酶，酶的添加量为底物的5％；
(5)二次酶解：在第一次酶解结束后，再加入酶活力为220000U/g食品级蛋白酶进行第二次酶解，加酶量为底物的3％，酶解时间为3min，微波功率和温度与第一次酶解相同，脱去苦味；
(6)灭酶：在95℃水浴锅中灭酶，灭酶时间20min；
(7)膜过滤：采用孔径为7000Da的膜，对酶解液进行过滤，滤除大分子物质；用高效液相色谱分析滤液，85％以上是小于7000Da的活性肽；
(8)喷雾干燥：进风口温度控制在180℃，出风口温度控制在90℃，得到鸭血活性肽粉末。
实施例3
(1)鸭血抗凝：取色正新鲜、无夹杂鸭毛和杂质、质地柔软、非病鸭合格鸭血，加入0.4％柠檬酸钠抗凝，缓慢搅拌；
(2)离心分离：使用高速冷冻离心机进行离心，在1℃条件下，用4800rpm的转速离心10min，离心后，倒出上清液，加入同体积0.9％生理盐水离心冲洗2次，得到较为纯净的血细胞；
(3)超声波破壁：调整功率为450w，采用1:2间歇比，加入两倍体积去离子水，超声处理8min，在常温下操作；用紫外-可见光光度计测量上述溶液，吸光度从0.105上升到0.405，破壁效果显著；
(4)微波辅助酶解：微波辅助第一次酶解，微波功率为750w，温度为50℃，酶解的时间为18min，底物浓度为9％，用1.2M NaOH调节pH至7.5，再加入pH为7.5的磷酸盐缓冲液，加入酶活力为2.5AU-A/g的内切酶，酶的添加量为底物的8％；
(5)二次酶解：在第一次酶解结束后，再加入酶活力为220000U/g食品级蛋白酶进行第二次酶解，加酶量为底物的3％，酶解时间为2min，微波功率和温度与第一次酶解相同，脱去苦味；
(6)灭酶：在100℃水浴锅中灭酶，灭酶时间15min；
(7)膜过滤：采用孔径为10000Da的膜，对酶解液进行过滤，滤除大分子物质；用高效液相色谱分析滤液，80％以上是小于10000Da的活性肽；
(8)喷雾干燥：进风口温度控制在200℃，出风口温度控制在100℃，得到鸭血活性肽粉末。

Claims (3)

1.微波辅助酶解制备鸭血活性肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)鸭血抗凝：取鸭血，加入0.2％～0.4％柠檬酸钠抗凝；
(2)离心分离：使用高速冷冻离心机进行离心，离心温度1～4℃，离心转速为3000～4800rpm，离心时间10～18min；
(3)超声波破壁：超声波工作条件为功率250～450w，时间8～18min，在常温下操作；
(4)微波辅助酶解：微波辅助第一次酶解，微波功率为550～750w，温度控制在50～65之间，酶解的时间为8～18min，底物浓度为6～9％，用1.2M NaOH调节pH至7.5～10.0，再加入pH为7.5～10.0的磷酸盐缓冲液，加入酶活力为2.5AU-A/g的内切酶，酶的添加量为底物的3～8％；
(5)二次酶解：在第一次酶解结束后，再加入酶活力为220000U/g食品级蛋白酶进行第二次酶解，加酶量为底物的2～3％，酶解时间为2～4min，微波功率和温度与第一次酶解相同，脱去苦味；
(6)灭酶：在90～100℃水浴锅中灭酶，灭酶时间15～30min；
(7)膜过滤：采用孔径为3500Da～10000Da的膜，对酶解液进行过滤，滤除大分子物质；
(8)喷雾干燥：进风口温度控制在160～200℃，出风口温度控制在80～100℃，得到鸭血活性肽粉末。
2.根据权利要求1所述微波辅助酶解制备鸭血活性肽的方法，其特征在于：步骤(2)中离心后，血细胞加入同体积0.9％生理盐水冲洗2～4次。
3.根据权利要求1所述微波辅助酶解制备鸭血活性肽的方法，其特征在于：步骤(3)中超声波破壁过程中间歇比采用2:1或1:1或1:2。
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