CN104212862A - 一种林蛙蛋白和骨钙的提取方法 - Google Patents
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Abstract
一种林蛙蛋白和骨钙的提取方法，步骤为：将剔去林蛙肉后的林蛙皮及林蛙骨清洗破碎后，加入胃蛋白酶酶解，离心，取上清液备用；分离出的残渣再加入木瓜蛋白酶继续酶解，离心，取上清液将两次酶解上清液；合并两次酶解所取的上清液，纳米滤膜过滤，将截留的大分子蛋白，冷冻干燥，得林蛙蛋白；酶解后的残渣加入乳酸菌和天然西红柿培养基发酵，组织破碎，离心，取上清与酶解步骤透过纳米滤膜的流出液合并，浓缩干燥，得林蛙骨钙。采用分步酶解，增加了林蛙蛋白的产出，酶解后的残渣用乳酸菌发酵富集，得到第二种提取物林蛙骨钙，提高了林蛙活性成分获取率；采用纳米滤膜富集、冷冻干燥，保持了蛋白和多肽的活性。工艺过程简单，无环境污染。
Description
技术领域
本发明属于生物化学领域，具体涉及林蛙蛋白的酶解提取和骨钙乳酸菌发酵提取方法。
背景技术
长白山林蛙是我国东北地区长白山集药、食、补于一体的珍贵蛙种，由于近年来人工养殖技术的成熟和完善，其资源十分丰富。作为一种高价值的药用动物，长白山林蛙在食品、药品、化妆品、保健品等方面有着广泛的应用。林蛙皮及林蛙骨是摘取林蛙油后作为饲料或废弃物的物质。本发明立足于长白山林蛙资源丰富以及蛙皮蛙骨中含有大量生物活性物质这一优势，发明一种复合酶酶解与乳酸菌发酵联用技术，提取林蛙骨钙和林蛙蛋白，用于开发保健食品和化妆品的原料。
目前现有的技术多是对林蛙皮进行单一酶酶解或利用酸解方法得到林蛙皮蛋白，这种方法提取效率低，生产成本高，酶解或水解后的溶液多通过喷雾干燥的方式进行干燥，生产周期长，不适合于工业化生产。而且现有技术多为单一酶解或酸水解林蛙皮单一部位，然而由于林蛙本身的特殊性，导致林蛙皮很难脱骨剥离。
发明内容
本发明的目的是提供一种林蛙蛋白和骨钙的提取方法，用于林蛙活性成分提取，克服现有的提取方法存在的前述不足。
本发明的林蛙蛋白和骨钙的提取方法包括：
1、将林蛙剔去蛙肉，取其皮、骨清洗破碎；
2、向破碎后的林蛙皮、骨混合物中加入1/1000—1/750的胃蛋白酶和8—10倍重量的水，在PH6-8的条件下37-45℃酶解5-10小时，离心，取上清液备用；
3、将步骤2分离出的残渣加入木瓜蛋白酶在PH6-8的条件下37-45℃继续酶解5-10小时，离心，取上清液备用；
4、将步骤2和步骤3得到的酶解上清液合并，用分子量500-1000的纳米滤膜收集，被截留的大分子蛋白，冷冻干燥，得林蛙蛋白；
5、将步骤3酶解后的残渣加入原林蛙皮、骨混合物重量2%—10%的乳酸菌和2-10倍重量的天然西红柿培养基，再加入培养基重量的1%-5%的葡萄糖，发酵30-40小时，组织破碎，离心，取上清液，将本步骤中所得上清液与步骤（4）透过纳米滤膜含小分子量蛋白的流出液合并，浓缩干燥，得林蛙骨钙。
本发明的积极效果是：
提取过程中林蛙皮及林蛙骨同时利用，避免的资源浪费、降低了原料前处理的难度，提高了工作效率；
采用复合酶分步酶解的方法，提高了酶解的效率，增加了林蛙蛋白的产出，酶解后的残渣再通过乳酸菌发酵游离并富集林蛙骨中的钙质，得到第二种提取物林蛙骨钙，提高了林蛙活性成分获取率；
用的是纳米滤膜富集后冷冻干燥的方法，避免了加热过程，保持了蛋白和多肽的活性；
工艺过程简单，生产成本低，无环境污染，适合于产业化生产。
具体实施方式
1、将剔去林蛙肉后的林蛙皮及林蛙骨清洗、破碎、称重；
2、向破碎后的林蛙皮及林蛙骨中加入林蛙骨、皮重量1/800的胃蛋白酶和9倍重量的水，在PH6的条件下45℃酶解5小时，离心，取上清液备用；
3、将步骤2分离出的残渣加入原林蛙骨、皮重量1/800的木瓜蛋白酶和9倍重量的水，在PH6的条件下45℃继续酶解5小时，离心，取上清液；
4、将两次酶解上清液合并，用分子量500的纳米滤膜收集，将被截留的大分子蛋白，冷冻干燥，得林蛙蛋白。
5、将酶解后的残渣加入原林蛙骨、皮等重量5%的乳酸菌（保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌）和5倍重量的天然西红柿培养基，再加入培养基重量的3%的葡萄糖，发酵30小时，组织破碎，离心，取上清，将本步骤中所得上清液与步骤（4）透过纳米滤膜含小分子量蛋白的流出液合并，浓缩干燥，即得林蛙骨钙。
Claims (1)
1.一种林蛙蛋白和骨钙的提取方法，其特征是包括下述步骤：
（1）将林蛙剔去蛙肉，取其皮、骨清洗破碎；
（2）向破碎后的林蛙皮、骨混合物中加入其重量1/1000—1/750的胃蛋白酶和8—10倍重量的水，在PH6-8的条件下37-45℃酶解5-10小时，离心，取上清液备用；
（3）将步骤（2）分离出的残渣加入原林蛙皮、骨混合物重量1/1000—1/750的木瓜蛋白酶和8—10倍重量的水，在PH6-8的条件下37-45℃继续酶解5-10小时，离心，取上清液备用；
（4）将步骤（2）和步骤（3）得到的酶解上清液合并，用分子量500-1000的纳米滤膜收集，被截留的大分子蛋白，冷冻干燥，得林蛙蛋白；
（5）将步骤（3）酶解后的残渣加入原林蛙皮、骨混合物重量2%—10%的乳酸菌和2-10倍重量的天然西红柿培养基，再加入培养基重量的1%-5%的葡萄糖，发酵30-40小时，组织破碎，离心，取上清液，将本步骤中所得上清液与步骤（4）透过纳米滤膜含小分子量蛋白的流出液合并，浓缩干燥，得林蛙骨钙。
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