CN104093827A

CN104093827A - 细胞培养用试剂盒、及细胞培养用试剂盒的使用方法

Info

Publication number: CN104093827A
Application number: CN201380007337.9A
Authority: CN
Inventors: 田中乡史; 户谷贵彦; 石崎庸一
Original assignee: Toyo Seikan Kaisha Ltd
Current assignee: Toyo Seikan Group Holdings Ltd
Priority date: 2012-02-01
Filing date: 2013-01-28
Publication date: 2014-10-08
Anticipated expiration: 2033-01-28
Also published as: US9909090B2; JPWO2013114845A1; EP2811011A4; US20140335608A1; KR20140116460A; JP6687041B2; JP2018061519A; KR101909000B1; EP2811011B1; JP6326817B2; EP2811011A1; WO2013114845A1; CN104093827B

Abstract

本发明的课题在于，在使用培养容器的细胞培养中，可以使从细胞注入到培养基追加、取样、回收在试剂盒内在保持封闭系统的同时进行自动培养。解决方法为一种用于培养细胞的封闭系统细胞培养用试剂盒，其分别具有至少1个以上用于培养细胞的培养容器、用于预先储藏培养基等的培养基储藏容器、用于注入细胞的细胞注入容器、和回收培养后的细胞悬浮液的细胞回收容器，培养基储藏容器还作为回收培养后的培养基的废液容器使用，培养容器、培养基储藏容器、细胞注入容器及细胞回收容器通过导管连接。另外，该细胞培养用试剂盒具有至少1个以上能够对培养中的细胞悬浮液的一部分进行取样的取样容器，取样容器通过导管与培养容器连接。

Description

细胞培养用试剂盒、及细胞培养用试剂盒的使用方法

技术领域

本发明涉及用于在使用培养容器进行细胞培养的自动细胞培养装置中使用的细胞培养用试剂盒及其使用方法。

背景技术

近年来，在医药品的生产、基因治疗、再生医疗、免疫疗法等领域中，要求在人工环境下高效地大量培养细胞、组织、微生物等。

在这样的细胞的大量培养中，可以优选使用采用培养容器自动进行细胞培养的自动细胞培养装置。

在使用自动细胞培养装置时，为了降低污染的风险，在封闭系统中进行是很重要的。但是，目前为止还不存在能够将从细胞注入到培养基追加、取样、回收在保持封闭系统的同时进行自动培养的简便的细胞培养用试剂盒。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开2007/052716号小册子

发明内容

发明要解决的课题

即，目前自动细胞培养装置提出了若干方案，还提出了用于该装置的容器试剂盒，但不存在临床应用中需要的能够将从细胞注入到培养基追加、取样、回收在保持封闭系统的状态下，简便地达成的细胞培养用试剂盒。

具体来说，作为使用培养容器自动进行细胞培养的自动细胞培养装置，可以举出例如专利文献1中记载的细胞培养装置。在该装置中，培养基储存装置、表达功能用培养容器、及增殖用培养容器由封闭系统构成(参照权利要求7)。但是，在该细胞培养装置中，没有发现在由废液袋更换为细胞回收袋时可以保持封闭系统的构成，从而可以认为是在开放体系中进行的。另外，除此之外，还没有找到在使从细胞注入到回收保持封闭系统的状态下能够实现这一过程的细胞培养用试剂盒。

另外，在使用自动细胞培养装置时，有时冷藏细胞培养用试剂盒中的培养基储藏容器。但是，若将冷藏的培养基从培养基储藏容器直接送液至培养容器，则存在培养容器内的培养基温度降低、细胞的增殖变差的问题。

而且，冷藏的培养基的气体溶解度高，溶入有大量碳酸气体、氧气。若将其转移至培养容器后加温，则气体的溶解度随着液温升高而降低，因此，存在培养容器内产生气泡的问题。培养容器内产生的气泡在搅拌容器内时产生细泡，对细胞造成不良影响。另外，存在观察容器内部时气泡成为障碍、变得难以观察的问题。

作为这样的问题的对策，可以想到预先对培养基储藏容器自身加热，但若培养基加热时间变长则细胞的培养效率降低。因此，理想的是尽量到即将进行培养之前为止，将培养基冷藏保存。

本发明鉴于上述问题而完成，目的在于提供在使用培养容器的细胞培养中，能够将从细胞注入到培养基追加、取样、回收在试剂盒内在保持封闭系统的同时自动进行的细胞培养用试剂盒。

另外，目的在于提供具备用于调节培养基的温度的温度调节容器的细胞培养用试剂盒及其使用方法。

用于解决课题的手段

为了达成上述目的，本发明的细胞培养用试剂盒是用于培养细胞的封闭系统细胞培养用试剂盒，其形成以下构成：分别具有至少1个以上用于培养细胞的培养容器、用于预先储藏培养基等的培养基储藏容器、用于注入细胞的细胞注入容器、和回收培养后的细胞悬浮液的细胞回收容器，培养基储藏容器还作为回收培养后的培养基的废液容器使用，培养容器、培养基储藏容器、细胞注入容器及细胞回收容器通过导管连接。

另外，还优选使本发明的细胞培养用试剂盒形成以下构成：具有至少1个以上能够对培养中的培养基的一部分进行取样的取样容器，取样容器通过导管与培养容器连接。

而且，优选使本发明的细胞培养用试剂盒形成以下构成：用于调节培养基等的温度的温度调节容器从连接培养容器和培养基储藏容器的导管分支设置，还优选形成以下构成：在培养基储藏容器中冷藏的培养基等的一部分或全部被转移至温度调节容器并升温到规定温度后，被转移至培养容器。

另外，本发明的细胞培养用试剂盒的使用方法为如下方法：在细胞培养用试剂盒中分别具有至少1个以上用于培养细胞的培养容器、用于预先储藏培养基等的培养基储藏容器、用于注入细胞的细胞注入容器、回收培养后的细胞悬浮液的细胞回收容器、和用于调节培养基等的温度的温度调节容器，培养基储藏容器还作为回收培养后的培养基的废液容器使用，培养容器、培养基储藏容器、细胞注入容器、细胞回收容器及温度调节容器通过导管连接，在培养基储藏容器中冷藏培养基等，该冷藏的培养基等的一部分或全部从培养基储藏容器被转移至温度调节容器，在温度调节容器中，培养基等升温到规定温度，调节过温度的培养基等被转移至培养容器。

发明效果

在使用培养容器的细胞培养中，能够将从细胞注入到培养基追加、取样、回收在试剂盒内保持封闭系统的同时进行。另外，由于能够将培养基储藏容器中冷藏的培养基转移至温度调节容器并在调节温度后转移至培养容器，因此能够防止培养容器内的培养基温度的降低，防止细胞的增殖障碍。

附图说明

图1是表示本发明的第一实施方式的细胞培养用试剂盒(1接口方式)的构成的图。

图2是表示本发明的第二实施方式的细胞培养用试剂盒(2接口方式)的构成的图。

图3是表示本发明的第三实施方式的细胞培养用试剂盒(3接口方式)的构成的图。

图4是表示本发明的第四实施方式的细胞培养用试剂盒(1接口方式)的构成的图。

图5是表示本发明的第四实施方式的细胞培养用试剂盒(2接口方式)的构成的图。

图6是表示本发明的第四实施方式的细胞培养用试剂盒(3接口方式)的构成的图。

具体实施方式

以下，对本发明的细胞培养用试剂盒的优选实施方式边参照附图边进行说明。

[第一实施方式]

首先，参照图1说明本发明的第一实施方式。该图是表示本实施方式的细胞培养用试剂盒的构成的图。

本实施方式的细胞培养用试剂盒具备：培养容器10、培养基储藏容器20、细胞注入容器30、细胞回收容器40。另外，优选具备取样容器50。

培养容器10是以可挠性材料为材料、形成为袋状(袋型)的容器，是用于加入培养基(培养液)并且接种培养对象的细胞后大量培养细胞的容器。

培养容器10必须具有对于细胞的培养来说必要的透气性。具体来说，优选具有5000ml/m²·天·atm(37℃－80％RH)以上的氧气透过率。

另外，为了能够确认内容物，优选培养容器10的全部或部分具有透明性。图1中，示有在培养容器10上难以发生褶皱、可以使内部的观察容易进行的观察框11。

而且，为了实现高细胞增殖效率，培养容器10优选具有低细胞毒性、低溶出性、及放射线灭菌适应性。

作为满足这样的条件的培养容器10的材料，优选聚乙烯系树脂。聚乙烯系树脂可以列举：聚乙烯、乙烯和α-链状烯烃的共聚物、乙烯和乙酸乙烯酯的共聚物、乙烯和丙烯酸或甲基丙烯酸共聚物、以及使用金属离子的离聚物等。另外，还可以使用聚烯烃、苯乙烯系弹性体、聚酯系热塑性弹性体、硅酮系热塑性弹性体、硅酮树脂等。

另外，培养容器10具备用于进行培养基、细胞的注入、回收等的接口。该接口的数量没有特别限定，但如下所述可以优选使用1～3接口的培养容器。

培养基储藏容器20是容纳向培养容器10转移的、用于培养细胞的培养基的容器。为了使容纳的培养基的pH在培养期间不会大幅变化，培养基储藏容器20优选具有气体阻隔性。具体来说优选具有1000ml/m²·天·atm(23℃－80％RH)以下的二氧化碳透过率。这是由于，为了避免培养基中含有的高浓度的碳酸气体漏到空气中从而培养基中的碳酸气体浓度下降，结果pH上升，理想的是尽量减少二氧化碳从培养基储藏容器20的内部向外部漏出。

另外，在培养基储藏容器20上，优选具备至少2个接口。其中1个接口连接着与培养容器10连接的导管(管)，配合着培养细胞的增殖等新鲜的培养基从该培养基储藏容器20一点点输送至培养容器10。装有培养基的培养基储藏容器20优选用冰箱保存。另外，培养基储藏容器20的另1个接口是用于由本实施方式的细胞培养用试剂盒的外部将培养基供给至培养基储藏容器20的培养基填充口21，经由无菌接合装置等由该培养基填充口21填充培养基。

另外，在本实施方式的细胞培养用试剂盒中，还可以使用仅具备1个接口的培养基储藏容器20，由该接口将培养基填充至培养基储藏容器20后，由该接口将培养基转移至培养容器10。

此外，培养基储藏容器20还可以在培养结束后作为废液容器使用。即，通过在从培养容器10向细胞回收容器40回收细胞之前将培养基的上清液转移至作为废液容器的培养基储藏容器20，可以将之后浓缩的细胞悬浮液从培养容器10送至细胞回收容器40。这在不使用专用的废液容器的第二实施方式中也同样。

另外，在本实施方式的细胞培养用试剂盒中，也可以具备2个以上培养基储藏容器20。由此，除了能够储藏2倍量同样的培养基之外，通过分别储藏不同的培养基，还可以向培养容器10以各种变更方式供给培养基。

细胞注入容器30是装有在培养开始时必要的细胞和培养基的容器。将该容器的内容物移至培养容器10，开始培养。加入细胞注入容器30的细胞和培养基优选总量约250ml左右，但并不限于此。

另外，由于细胞注入容器30是加入细胞和培养基的容器，因此优选与培养容器10同样地具有透气性。另外，还优选具有低细胞毒性、低溶出性等。因此，作为细胞注入容器30的材料，优选使用与培养容器10同样的材料。

该细胞注入容器30具备至少1个接口。然后，通过该接口从细胞注入容器30向培养容器10输送培养开始时的细胞和培养基。

细胞回收容器40是在培养结束后，用于从培养容器10回收培养的细胞和培养基的一部分的容器。因此，细胞回收容器40也优选具有与培养容器10同样的特性，作为其材料优选使用与培养容器10同样的材料。

细胞回收容器40具备至少1个接口，通过该接口从培养容器10向细胞回收容器40输送细胞和培养基的一部分。

取样容器50是在细胞的培养中、培养结束后，用于将培养容器10中的细胞悬浮液的一部分转移并进行取样的容器。作为向该取样容器50转移的样品，优选例如10ml左右的量，但并不限于此。

取样容器50具备2个接口，其中一个接口上连接着与培养容器10连接的导管(管)，从而细胞悬浮液可从培养容器10向取样容器50输送。另外，另一个接口是为了提取取样容器50内的细胞悬浮液的一部分来进行各种分析而使用的。另外，还可以形成具备均进行这些的1个接口的构成、具备3个以上接口并可以进行多次分取的构成。

接着，对本实施方式的细胞培养用试剂盒中的连接各容器的导管进行说明。这些导管的材料优选根据使用目的适宜选择适当的材料。可以使用例如硅酮树脂、软质氯乙烯树脂、聚丁二烯树脂、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物、聚氨酯系热塑性弹性体、聚酯系热塑性弹性体、硅酮系热塑性弹性体、苯乙烯系弹性体，例如SBS(苯乙烯-丁二烯-苯乙烯)、SIS(苯乙烯-异戊二烯-苯乙烯)、SEBS(苯乙烯-乙烯-丁烯-苯乙烯)、SEPS(苯乙烯-乙烯-丙烯-苯乙烯)、聚烯烃树脂、氟系树脂等。

另外，在本实施方式的细胞培养用试剂盒中，导管可以使用大致分为2种的不同导管。

即，用于连接培养容器10和培养基储藏容器20的培养基供给用管、和连接其他容器的组合之间的培养基转移用管。

作为用于连接培养容器10和培养基储藏容器20的培养基供给用管，特别优选使用包含聚烯烃或硅酮树脂的管。培养基供给用管是在培养期间一点点将培养基转移至培养容器10的管，因此特别优选具有优异的低细胞毒性、低溶出性等。另一方面，该培养基供给用管在培养工序中没有特别熔断(溶断)的必要性。因此，考虑到这些，优选使用包含上述材料的管。

图1中，假定培养基储藏容器连接管22由这样的培养基供给用管构成，可以适宜使用例如内径3.5mm、外径6.0mm的硅管等。

连接其他容器的组合之间的培养基转移用管不是持续长时间转移培养基的管，因此，没有必要使用在低细胞毒性、低溶出性等方面具备高度功能的管。另外，理想的是可以通过熔断导管，在将细胞注入容器、细胞回收容器(废液容器)、取样容器保持封闭系统的状态下从本实施方式的细胞培养用试剂盒中取出使用。

因此，作为与这些容器连接的培养基转移用管，优选使用至少一处由热塑性树脂形成的管。另外，也可以使培养基转移用管的全体由热塑性树脂形成。

另外，作为热塑性树脂，可以使用例如软质氯乙烯树脂，但并不限于此。

图1中，假定细胞注入容器连接管31、细胞回收容器连接管41、及取样容器连接管51由这样的培养基转移用管构成，可以优选使用例如内径3.3mm、外径5.0mm的氯乙烯管等。

另外，在形成用于从本实施方式的细胞培养用试剂盒的外部将培养基供给至培养基储藏容器20的培养基填充口21的接口上，优选连接包含热塑性树脂的管，特别优选连接包含软质氯乙烯树脂的管。这是由于，通过无菌接合装置从该培养基填充口21对培养基储藏容器20填充培养基，但现在与该无菌接合装置的连接中主要使用软质氯乙烯树脂。另外，对于管的前端处理，除了使用本实施方式的二段密封以外，还可以应用螺旋接头(luer connector)、无针接头、隔板(セプタム)等构件。

本实施方式的细胞培养用试剂盒如图1所示，是在培养容器10上仅具备1个接口的1接口方式。

即，在本实施方式的细胞培养用试剂盒中，在培养容器10上具备第一接口12，在该第一接口12上通过培养基储藏容器连接管22连接有培养基储藏容器20。而且，形成在该培养基储藏容器连接管22上连接着其他容器的构成。

即，细胞注入容器30通过细胞注入容器连接管31与培养基储藏容器连接管22连接。另外，细胞回收容器40通过细胞回收容器连接管41与培养基储藏容器连接管22连接。另外，取样容器50通过取样容器连接管51与培养基储藏容器连接管22连接。而且，管泵仅在培养基储藏容器连接管22上具备。

此处，细胞注入容器30优选与培养基储藏容器连接管22中的培养容器10的近旁连接。这是由于，若这样设置，则在培养开始时，从培养基储藏容器20向培养容器10注入培养基的过程中，可以将培养基储藏容器连接管22内的空气进入培养容器10的量抑制到最小限度。

具体来说，首先从培养基储藏容器20向细胞注入容器30输送培养基，从而连接培养基储藏容器20和细胞注入容器30之间的导管的内部充满培养基。此时，该导管的内部存在的空气移动到细胞注入容器30的内部。接着，从细胞注入容器30向培养容器10输送细胞和培养基时，可以使细胞注入容器30内的空气移动到上部，而仅将细胞和培养基从细胞注入容器30向培养容器10送出。

因此，进入培养容器10的空气仅在从连接细胞注入容器30的培养基储藏容器连接管22的近旁到培养容器10之间存在。因此，通过使细胞注入容器30连接在培养基储藏容器连接管22中尽量靠近培养容器10的位置，可以在不妨碍细胞的观察、撮影的程度上将输送至培养容器10的空气抑制到最小限度。

另外，至少对于培养基储藏容器20和细胞注入容器30，优选在细胞培养用试剂盒中能够取下地构成。这是由于，在使用前培养基储藏容器20中填充有培养基，细胞注入容器30中填充有细胞和培养基，在使用时使它们与细胞培养用试剂盒连接来使用。它们以外的培养容器10、细胞回收容器40、取样容器50和附属于它们的管类优选在使用前(制造时)作为一体地构成。另外，后述的废液容器60也可以在使用前作为一体地构成。

而且，优选在各管上具备夹子，或者用电磁阀等控制各管中的培养基等的转移。

另外，培养基储藏容器连接管22中的连接部分可以使用带帽或带盖的螺旋接头(无针接头)等。

而且，本实施方式的细胞培养用试剂盒中，培养基储藏容器连接管22使用硅管，除此之外使用氯乙烯管，根据需要使用连接管(例如内径5.3mm、外径7.0mm)，但本发明并不限于类似于这些的具体的构成。

本实施方式的细胞培养用试剂盒可以采用例如类似于以下的方法使用。

首先，在图1所示细胞培养用试剂盒中，连接填充有培养基的培养基储藏容器20的培养基储藏容器连接管22中的接头，并且通过接头连接填充有细胞和培养基的细胞注入容器30的细胞注入容器连接管31。

接着，从培养基储藏容器20通过培养基储藏容器连接管22和细胞注入容器连接管31将培养基转移至细胞注入容器30。此时，进入培养基被转移的部分的管的空气进入细胞注入容器30。

接着，从细胞注入容器30向培养容器10转移细胞和培养基。此时，通过使细胞注入容器30的接口朝下侧竖立，使进入细胞注入容器30的空气集中在上部等，可以不将空气输送至培养容器10，而仅将细胞和培养基转移至培养容器10。

接着，从培养基储藏容器20通过培养基储藏容器连接管22将培养基转移至培养容器10。另外，从细胞注入容器30将细胞和培养基转移至培养容器10的时机不限于上述，还可以在例如从培养基储藏容器20向培养容器10转移一部分或全部培养基的时候进行。

然后，若在培养容器10中填充有规定量的培养基和细胞，则进行适宜振动、搅拌，进行一定期间细胞的培养。在细胞培养中，通过将样品从培养容器10向取样容器50适宜转移，可以用于调查、分析。

一定期间的细胞培养一结束，就进行细胞的回收。此时，培养基储藏容器20作为废液容器使用。

即，首先使培养容器10静止将细胞沉淀到下部后，将细胞悬浮液的上清液从培养容器10向培养基储藏容器20转移。由此，可以浓缩培养容器10中的细胞悬浮液，可以降低向细胞回收容器40转移的液量。接着，将该浓缩的细胞悬浮液从培养容器10回收至细胞回收容器40。

像这样，通过使用本实施方式的细胞培养用试剂盒，可以在封闭系统中进行细胞培养。

如上所述，根据本实施方式的细胞培养用试剂盒，在使用培养容器的细胞培养中，可以将从细胞注入到培养基追加、取样、回收在试剂盒内在保持封闭系统的同时自动进行。另外，本实施方式的细胞培养用试剂盒是1接口方式，因此送液用管泵有1个即可，可以简化装置。

[第二实施方式]

接着，参照图2对本发明的第二实施方式进行说明。该图为表示本实施方式的细胞培养用试剂盒的构成的图。

本实施方式的细胞培养用试剂盒在形成2接口方式的方面与第一实施方式不同，在其他方面上形成与第一实施方式的细胞培养用试剂盒同样的构成。即，本实施方式的细胞培养用试剂盒优选具备培养容器110、培养基储藏容器20、细胞注入容器30、细胞回收容器40，而且优选具备取样容器50。

本实施方式的细胞培养用试剂盒中的培养容器110如图2所示，具备第一接口112和第二接口113。

在第一接口112上，与第一实施方式同样，培养基储藏容器20通过培养基储藏容器连接管22连接。在第二接口113上，细胞回收容器40通过细胞回收容器连接管41连接。在培养基储藏容器连接管22及细胞回收容器连接管41中，分别使用管泵，分别进行培养基、细胞悬浮液的转移。

另外，细胞注入容器30通过细胞注入容器连接管31与培养基储藏容器连接管22连接，取样容器50通过取样容器连接管51与培养基储藏容器连接管22连接。

本实施方式的细胞培养用试剂盒的使用方法可以作为直到细胞的培养结束为止与第一实施方式同样的方法。而且，在细胞的回收时，可以不经由培养基储藏容器连接管22，而经由第二接口113和细胞回收容器连接管41，通过管泵将细胞悬浮液回收至细胞回收容器40。

根据本实施方式的细胞培养用试剂盒，如上所述，可以在细胞的回收时，不经由培养基储藏容器连接管22，通过专用的管泵将细胞悬浮液从培养容器110回收至细胞回收容器40。因此，可以更高效地进行细胞的回收。本实施方式为2接口方式的一例，也可以代替细胞回收容器40而通过第二接口113和取样容器连接管51连接取样容器50。

[第三实施方式]

接着，参照图3对本发明的第三实施方式进行说明。该图为表示本实施方式的细胞培养用试剂盒的构成的图。

本实施方式的细胞培养用试剂盒在形成3接口方式的方面与第一实施方式不同，在其他方面上形成与第一实施方式的细胞培养用试剂盒同样的构成。即，本实施方式的细胞培养用试剂盒优选具备培养容器210、培养基储藏容器20、细胞注入容器30、细胞回收容器40、废液容器60，另外优选具备取样容器50。另外，作为培养基储藏容器20，具备培养基储藏容器20a和20b这两个。

本实施方式的细胞培养用试剂盒中的培养容器210如图3所示，具备第一接口212、第二接口213、及第三接口214。

本实施方式中，取样容器50和废液容器60分别通过取样容器连接管51、废液容器连接管61连接于第一接口。另外，在这些管发生合流的管部分使用管泵，分别进行细胞悬浮液向取样容器50的转移、以及上清液向废液容器60的转移。

另外，在第二接口213上，通过培养基储藏容器连接管22(22a、22b)，连接着培养基储藏容器20a、20b。通过像这样使用多个培养基储藏容器，可以组合不同组成的培养基，并向培养容器10转移，可以使供给的培养基的组成、时机等具有不同变换方式。另外，在培养基储藏容器连接管22使用管泵，进行培养基向培养容器210的转移。

另外，在第三接口214上，细胞回收容器40通过细胞回收容器连接管41连接，通过管泵，细胞悬浮液从培养容器210向细胞回收容器40转移。

本实施方式的细胞培养用试剂盒的使用方法首先直到开始细胞的培养为止，可以采用与第一实施方式同样的方法。另外，图3中，出于记载空间的限制，细胞注入容器连接管31连接在培养基储藏容器连接管22的中途，但实际上为了抑制在培养容器210中进入空气，其优选连接在第二接口的近旁。

另外，在细胞培养中，通过将样品从培养容器210向取样容器50适宜转移，可以用于调查、分析。

进一步，在细胞培养结束后，可以将细胞悬浮液的上清液从培养容器210向废液容器60通过废液容器连接管61进行转移，从而浓缩培养容器210中的细胞悬浮液。最后，将该浓缩的细胞悬浮液从培养容器210回收至细胞回收容器40。

根据本实施方式的细胞培养用试剂盒，可以同时进行多项操作。尤其是在培养基储藏容器20、培养基储藏容器连接管22还残留有培养基的情况下，也可以进行向取样容器50的取样，可以灵活调整培养基的供给和取样的时机。

[第四实施方式]

接着，参照图4～图6对本发明的第四实施方式进行说明。这些图是表示本实施方式的细胞培养用试剂盒的构成的图。

本实施方式的细胞培养用试剂盒的特征在于，在第一实施方式～第三实施方式的构成的基础上，还具备用于调整培养基的温度的温度调节容器70及温度调节容器连接管71。对于其他构成，可以形成与第一实施方式～第三实施方式中的构成同样的构成。

以下，采用表示对第一实施方式的细胞培养用试剂盒追加温度调节容器70及温度调节容器连接管71的本实施方式的细胞培养用试剂盒的图4进行说明，但对于图5、6中的温度调节容器70及温度调节容器连接管71也和图4同样。

温度调节容器70是在从培养基储藏容器20向培养容器10转移培养基时，用于暂时储存转移的培养基、调整培养基的温度的容器。转移的培养基的量没有特别限定，可以为培养基储藏容器20内的培养基的一部分或全部。另外，在细胞培养用试剂盒中具备多个培养基储藏容器20的情况下，在其中一部分培养基储藏容器20中储藏用于向培养容器10的培养中的培养基追加的生理活性物质、细胞活素、其他各种物质而不是培养基时，还可以通过温度调节容器70使这些升温。温度调节容器70的容器优选具有与培养基储藏容器20同样的气体阻隔性。

温度调节容器70上具备至少1个接口，接口上连接有温度调节容器连接管71，温度调节容器连接管71与连接培养基储藏容器20和培养容器10的培养基储藏容器连接管22连接。即，温度调节容器70从连接培养基储藏容器20和培养容器10的管分支，以保持封闭系统的形式在细胞培养用试剂盒中具备。温度调节容器连接管71和培养基储藏容器连接管22也可以是一体地形成的。

另外，温度调节容器70优选由软包材料构成，还优选具有除气的构成。若在温度调节容器70中培养基升温，则在培养基中溶解的气体逸出。此时，通过使温度调节容器70的接口朝下，可以使气体集中在温度调节容器70的上部，可以仅将培养基送液至培养容器10。因此，可以培养容器10内不混入多余气泡地转移培养基。

温度调节容器70优选在配置有培养容器10的恒温箱的内部配置。在这种情况下，温度调节容器70内的培养基可以调节到与培养容器10内的培养基相同的温度。作为该温度，可以设为例如37℃。

另外，还优选将温度调节容器70配置于恒温箱的外部，例如通过其他加温装置对温度调节容器70加温，调整温度调节容器70内的培养基温度。这种情况下，可以调整到例如30～37℃等温度范围。

而且，通过将温度调节容器70配置于恒温箱的外部，不设置特别的加温装置而使其静置，由此也可以使温度调节容器70内的培养基温度回到常温(室温)。

另外，在本实施方式的细胞培养用试剂盒中，也可以具备2个以上温度调节容器70。由此，可以同时调节2倍量以上的培养基、其他物质的温度。

由于温度调节容器连接管71在培养期间将培养基一点点向培养容器10转移，所以特别理想的是具有优异的低细胞毒性、低溶出性等，另外在培养工序中，没有特别熔断的必要性。因此，温度调节容器连接管71优选设为与连接培养容器10和培养基储藏容器20的培养基储藏容器连接管22同样的管。

如上所述，根据本实施方式的细胞培养用试剂盒，可以将用于转移至培养容器的必要的量的培养基加入温度调节容器并升温后，送液至培养容器。

因此，培养容器内的培养基温度不降低，可以阻止细胞的增殖障碍。

另外，由于可以像这样通过温度调节容器使培养基升温，培养基储藏容器内的培养基可以如之前一样冷藏保存，可以防止培养基的加热时间变长时细胞的培养效率降低这样的问题的发生。

而且，由于通过升温溶于培养基的气体逸出，因此可以从温度调节容器向培养容器仅转移培养基，可以防止气泡混入培养容器内。

本发明不限于以上的实施方式，在本发明的范围内，各种变更实施当然是可能的。

例如实施方式中示出使用特定大小的管的例子，还使用特定的接头，但在本发明的技术的范围内，能够使用可以得到同样功能的其他部件等进行适宜变更。另外，也可以将填充完用于向培养中的培养基中追加的生理活性物质、细胞活素、其他各种物质的容器预先附加安装在实施方式的试剂盒中。

产业上的可利用性

本发明在需要培养大量细胞的生物医药、再生医疗、免疫疗法等领域中，可以优选地利用。

Claims

1.一种细胞培养用试剂盒，其特征在于，其是用于培养细胞的封闭系统细胞培养用试剂盒，

分别具有至少1个以上用于培养细胞的培养容器、用于预先储藏培养基等的培养基储藏容器、用于注入细胞的细胞注入容器和回收培养后的细胞悬浮液的细胞回收容器，

所述培养基储藏容器还作为回收培养后的培养基的废液容器使用，

所述培养容器、所述培养基储藏容器、所述细胞注入容器及所述细胞回收容器通过导管连接。

2.如权利要求1所述的细胞培养用试剂盒，其特征在于，

具有至少1个以上能够对培养中的细胞悬浮液的一部分进行取样的取样容器，

所述取样容器通过导管与所述培养容器连接。

3.如权利要求1或2所述的细胞培养用试剂盒，其特征在于，

除所述培养基储藏容器之外，还具有至少1个以上回收培养中或培养后的培养基的废液容器，

所述废液容器通过导管与所述培养容器连接。

4.如权利要求1～3中任一项所述的细胞培养用试剂盒，其特征在于，

具有2个所述培养基储藏容器，分别填充有同样的或不同的培养基。

5.如权利要求1～4中任一项所述的细胞培养用试剂盒，其特征在于，

用于调节培养基等的温度的温度调节容器从连接所述培养容器和所述培养基储藏容器的导管分支设置。

6.如权利要求5所述的细胞培养用试剂盒，其特征在于，

在所述培养基储藏容器中冷藏的培养基等的一部分或全部被转移至所述温度调节容器并升温到规定温度后，被转移至所述培养容器。

7.如权利要求1～6中任一项所述的细胞培养用试剂盒，其特征在于，

所述各容器由可挠性材料形成为袋状。

8.如权利要求1～7中任一项所述的细胞培养用试剂盒，其特征在于，

所述培养基储藏容器在23℃－80％RH条件下具有1000ml/m²·天·atm以下的二氧化碳透过率，所述培养容器在37℃－80％RH条件下具有5000ml/m²·天·atm以上的氧气透过率。

9.如权利要求1～8中任一项所述的细胞培养用试剂盒，其特征在于，

所述培养基储藏容器具有至少2条导管，未与所述培养容器连接的导管由软质氯乙烯树脂形成。

10.如权利要求2～9中任一项所述的细胞培养用试剂盒，其特征在于，

通向所述细胞注入容器、所述细胞回收容器、所述取样容器及所述废液容器的导管的至少一处由热塑性树脂形成。

11.一种细胞培养用试剂盒，其特征在于，

所述培养基储藏容器、及所述细胞注入容器中的至少任意一个能够从权利要求1～10中任一项所述的细胞培养用试剂盒上取下。

12.如权利要求1～11中任一项所述的细胞培养用试剂盒，其特征在于，

所述培养基储藏容器与所述培养容器之间的导管为聚烯烃或硅酮树脂。

13.如权利要求1～12中任一项所述的细胞培养用试剂盒，其特征在于，

所述细胞注入容器从连接所述培养基储藏容器和所述培养容器的导管中的所述培养容器的近旁分支。

14.一种细胞培养用试剂盒的使用方法，其特征在于，其是用于培养细胞的封闭系统细胞培养用试剂盒的使用方法，

在所述细胞培养用试剂盒中，分别具有至少1个以上用于培养细胞的培养容器、用于预先储藏培养基等的培养基储藏容器、用于注入细胞的细胞注入容器、回收培养后的细胞悬浮液的细胞回收容器、和用于调节培养基等的温度的温度调节容器，

所述培养容器、所述培养基储藏容器、所述细胞注入容器、所述细胞回收容器及所述温度调节容器通过导管连接，

在所述培养基储藏容器中冷藏有培养基等，

该冷藏的培养基等的一部分或全部从所述培养基储藏容器被转移至所述温度调节容器，

在所述温度调节容器中，培养基等升温到规定温度，

调节过温度的培养基等被转移至所述培养容器。