CN106170540A - 多腔室培养容器以及细胞培养方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种能够将在多个不同的培养条件下培养出的细胞利用简便的操作转移的培养容器。本发明制成如下的多腔室培养容器，是对具有透气性的材料进行加工而得的多腔室培养容器(1)，形成两个以上的用于培养细胞的培养室，各培养室(11、12)与至少一个其他的培养室连通，并且具备至少一个用于与多腔室培养容器的外部连通的外部连接部(111、121)。

Description

多腔室培养容器以及细胞培养方法

技术领域

本发明涉及一种细胞的培养技术，特别涉及一种能够在多个不同的培养环境、培养条件下培养细胞的细胞培养容器。

背景技术

近年来，在医药品的生产、基因治疗、再生医疗、免疫疗法等领域中，要求在人工环境下高效地大量培养细胞、组织等。

在细胞、组织等的培养的过程中，有时需要多个不同的培养环境、培养条件。另外，有时也要将在多个不同的培养环境、培养条件下培养的细胞在后面的工序中混合。在这些情况下，需要将经过培养的细胞在多个容器间进行转移。

但是，当在开放系统进行此种细胞的转移时，会有产生污染的危险，因此在利用手工操作进行细胞的转移的情况下，需要在无菌环境下进行操作。此外，在像这样将细胞在多个容器间进行转移的情况下，溶液有可能溢出，另外必须严格地管理容器的对应关系，存在有处置烦杂的问题。

此处，作为能够在细胞的转移或培养液的追加时防止污染的技术，提出过通过将多个培养容器连接而构成封闭系统的细胞培养试剂盒、并使用它来进行细胞培养的方案(参照专利文献1、2)。

【特許文献1】：日本特开2007－175028号公报

专利文献2：日本特开2005－058103号公报

发明内容

发明所要解决的问题

但是，即使使用此种细胞培养试剂盒，也无法充分地改善其处置的烦杂性。

即，在使用了此种细胞培养试剂盒的情况下，如果所连接的培养容器的数量变多，则会因管路缠绕、或者培养容器错杂而分不清哪个是哪个等，仍然存在有其处置变得烦杂的问题。

另外，最近，还提出过使用了自动细胞培养装置的细胞培养方法，然而也存在有将此种包含多个容器的细胞培养试剂盒向自动细胞培养装置中的安装操作非常烦杂的问题。

另外，在进行淋巴细胞的培养的情况下，以往一般是向将抗CD3抗体固相化了的烧瓶中加入淋巴细胞而使之活化后，将活化了的淋巴细胞转移到扩增用的培养袋中而进行培养。

现在，在技术上，也可以在由具有透气性的膜材料构成的培养袋的内面将抗CD3抗体固相化而制作活化用的培养袋，将其与扩增用的培养袋连接而构成细胞培养试剂盒，使用自动细胞培养装置来进行淋巴细胞的培养。

但是，此种活化用的培养袋与烧瓶相比成本相当大，因此无法简单地进行从烧瓶向活化用的培养袋的置换。

因而，本发明人等进行了深入研究，成功地通过在一个培养袋内形成多个培养室，并将它们连通，而制造出制造成本低、并且操作极为简便的培养容器，从而完成了本发明。

即，本发明的目的在于，提供能够将在多个不同的培养环境、培养条件下培养出的细胞利用简便的操作进行转移的多腔室培养容器、以及使用了该多腔室培养容器的细胞培养方法。

用于解决问题的方法

为了达成上述目的，本发明的多腔室培养容器是对具有透气性的材料进行加工而得的多腔室培养容器，采用了如下的构成，即，形成有两个以上的用于培养细胞的培养室，各培养室与至少一个其他的培养室连通，并且具备至少一个用于与所述多腔室培养容器的外部连通的外部连接部。

另外，本发明的细胞培养方法是使用了上述的多腔室培养容器的细胞培养方法，采用了如下的方法，即，作为所述多腔室培养容器中的所述培养室，形成用于使淋巴细胞活化的固相化有抗CD3抗体的活化培养室、和用于使经过活化的淋巴细胞扩增的扩增培养室，将淋巴细胞及培养液注入所述活化培养室，在所述活化培养室中使淋巴细胞活化，从所述活化培养室向所述扩增培养室移送经过活化的淋巴细胞及培养液，在所述扩增培养室中使淋巴细胞扩增。

此外，本发明的细胞培养方法是使用了上述的多腔室培养容器的细胞培养方法，采用了如下的方法，即，作为所述多腔室培养容器中的所述培养室，形成有用于将白血球分离为淋巴细胞和贴壁系细胞而培养贴壁系细胞的贴壁系细胞培养室、用于使淋巴细胞活化的固相化有抗CD3抗体的活化培养室、和用于扩增淋巴细胞的扩增培养室，

将从血液分离出的白血球及培养液注入所述贴壁系细胞培养室并静置，使所述白血球中的贴壁系细胞贴附在所述贴壁系细胞培养室内的底面，然后，从所述贴壁系细胞培养室向所述活化培养室，移送所述白血球中的淋巴细胞和培养液，在所述活化培养室中使淋巴细胞活化，向所述贴壁系细胞培养室注入含有诱导成为树状细胞的诱导因子的培养液并培养所述贴壁系细胞，将所述贴壁系细胞诱导成为树状细胞，从所述活化培养室向所述扩增培养室移送经过活化的淋巴细胞及培养液，在所述扩增培养室中使淋巴细胞扩增。

发明效果

根据本发明，可以提供能够将在多个不同的培养条件下培养出的细胞利用简便的操作转移的多腔室培养容器、以及使用了该多腔室培养容器的细胞培养方法。

附图说明

图1是表示本发明的第一实施方式的多腔室培养容器的图。

图2是表示本发明的第二实施方式的多腔室培养容器的图。

图3是表示本发明的第三实施方式的多腔室培养容器的图。

图4是表示使用了本发明的第三实施方式的多腔室培养容器的内容物的移送方法的图。

图5是表示本发明的第四实施方式的多腔室培养容器的图。

图6是表示本发明的第五实施方式的多腔室培养容器的图。

具体实施方式

以下，对本发明的多腔室培养容器及细胞培养方法的实施方式进行详细说明。

[第一实施方式]

首先，参照图1，对本发明的第一实施方式的多腔室培养容器及细胞培养方法进行说明。

本实施方式的多腔室培养容器的特征在于，是对具有透气性的材料进行加工而得的多腔室培养容器，形成有两个以上用于培养细胞的培养室，各培养室与至少一个其他的培养室连通，并且具备至少一个用于与多腔室培养容器的外部连通的外部连接部。

具体而言，图1中，多腔室培养容器1作为用于培养细胞的培养区域，具备培养室11和培养室12。

在培养室11中，具备用于与多腔室培养容器1的外部连通的外部连接端口111、用于与其他的培养室连通的室间连接端口112、和用于进行取样的取样端口113。

虽然未图示，然而外部连接端口111经由管路2与培养液供给容器等连接，被用于向培养室11的培养液的供给等。

室间连接端口112经由管路2与培养室12的室间连接端口122连接，被用于将培养室12的内容液向培养室11移送。

取样端口113被用于进行在培养室11中经过培养的细胞的取样。

在培养室12中，具备用于与多腔室培养容器1的外部连通的外部连接端口121、和用于与其他的培养室连通的室间连接端口122。

虽然未图示，然而外部连接端口121经由管路2与细胞供给容器等连接，被用于向培养室12的细胞的注入等。

室间连接端口122经由管路2与培养室11的室间连接端口112连接，被用于将培养室12的内容液向培养室11移送。

作为形成多腔室培养容器1的材料，需要具有细胞的培养时所必需的透气性。具体而言，优选具有5000ml/m²·day·atm(37℃－80％RH)以上的氧透过率。另外，为了可以看到多腔室培养容器1中的内容物，培养容器材料优选具有透明性。此外，为了实现高细胞增殖效率，培养容器材料优选具有低细胞毒性、低溶出性、以及辐射灭菌适应性。

作为满足此种条件的材料，优选聚乙烯系树脂。作为聚乙烯系树脂，例如可以举出聚乙烯、乙烯与α－烯烃的共聚物、乙烯与乙酸乙烯酯的共聚物、使用了乙烯与丙烯酸或甲基丙烯酸共聚物和金属离子的离聚物等。另外，还可以使用聚烯烃、苯乙烯系弹性体、聚酯系热塑性弹性体、硅酮系热塑性弹性体、硅酮树脂等。

通过对此种透气性材料进行热封加工或压缩空气成形、真空成形等片成形，就可以制造本实施方式的多腔室培养容器1。

本实施方式的多腔室培养容器1的形状没有特别限定，然而可以合适地使用近似长方形的形状，形成于其内部的各培养室的形状也优选制成近似长方形。

在本实施方式的多腔室培养容器1中，也优选在各培养室中具备各自不同的培养基材料，进行各自不同的培养环境、培养条件下的细胞培养。在具有三个以上的培养室的情况下，可以在全部的培养室中具备各自不同的培养基材料，也可以在一部分的培养室中具备各自不同的培养基材料。

利用本实施方式的多腔室培养容器1的培养用途没有特别限定，然而例如可以适用于淋巴细胞的培养、DC－LAK疗法(树状细胞、淋巴细胞的培养)、ES细胞的培养、iPS细胞的培养等。

以下，对在本实施方式的多腔室培养容器1中设置了多个不同的培养环境、培养条件时的细胞培养举出具体例进行说明。

[淋巴细胞的培养]

在进行淋巴细胞的培养的情况下，不对培养室11的内面进行特别的处理，而将其作为用于使淋巴细胞扩增的扩增培养室使用，可以在培养室12的内面涂布(固相化)抗CD3抗体，将其作为用于使淋巴细胞活化的活化培养室使用。

此后，如图1所示，在连接培养室11与培养室12的管路2安装夹子等流路开闭机构，控制管路2中的流路的开闭。而且，作为流路开闭机构，例如也可以使用夹管阀、双向旋塞阀等。

此后，将淋巴细胞及培养液注入培养室12，在培养室12中使淋巴细胞活化。注入到培养室12中的淋巴细胞因大约3天左右的抗CD3抗体的刺激而被活化。

其后，开放管路2中的流路，从培养室12向培养室11移送经过活化的淋巴细胞及培养液，在培养室11中使淋巴细胞扩增。

此时，与淋巴细胞的扩增同时地向培养室11中追加培养液，在大约4天到10天左右可以大量地获得经过活化的T淋巴细胞。

而且，也可以在培养室12的内面涂布其他的生理活性物质，使其他的细胞活化后，将其移送到培养室11，使之扩增。

[ES细胞的培养]

在进行ES细胞的培养的情况下，可以对培养室11的内面进行Matrigel胶涂布处理，将其作为用于使ES细胞扩增的ES细胞培养室使用，对培养室12填充实施了丝裂霉素C处理的MEF(小鼠胚胎成纤维细胞)，将其作为用于培养MEF的MEF培养室使用。

然后，在从培养室12中除去MEF用培养液后，用人ES细胞用培养液清洗，向培养室12中填充人ES细胞用培养液，在37℃、2％二氧化碳浓度的条件下，将MEF培养一夜。第二天，开放管路2中的流路，从培养室12向培养室11移送培养上清液。由此，就可以将培养室11作为具备MEF条件化培养液的培养室使用。

此后，将预先准备的人ES细胞播种到培养室11中，利用MEF条件化培养液(添加有bFGF)在37℃、2％二氧化碳浓度的条件下进行培养，可以使人ES细胞扩增。

如此所述，根据本实施方式的多腔室培养容器1，可以防止污染的发生，另外可以对培养室11和培养室12一体化地进行处置，因此能够极为容易地进行从培养室11向培养室12的细胞的转移操作。

[第二实施方式]

下面，参照图2，对本发明的第二实施方式的多腔室培养容器及细胞培养方法进行说明。

本实施方式的多腔室培养容器1a如同图所示，除了培养室11和培养室12以外，还具备培养室13。

在培养室13中，具备用于与多腔室培养容器1a的外部连通的外部连接端口131、和用于与其他的培养室连通的室间连接端口132。

虽然未图示，然而外部连接端口131经由管路2与细胞供给容器等连接，被用于向培养室13的细胞的注入等。室间连接端口132经由管路2与培养室11的室间连接端口112及培养室12的室间连接端口122连接，可以用于将培养室13的内容液向培养室12等移送。虽然未图示，然而培养室12的外部连接端口121经由管路2与培养液供给容器等连接，可以用于向培养室12供给培养液等。

对于其他的方面，可以设为与第一实施方式的多腔室培养容器1相同的构成。

另外，本实施方式的多腔室培养容器1a在各培养室中具备各自不同的培养基材料，由此可以在进行各种各样的细胞培养的情况下使用。例如，可以利用如下所示的方法，来培养树状细胞和淋巴细胞。

[树状细胞和淋巴细胞的培养]

不对培养室11的内面进行特别的处理，而将其作为用于使淋巴细胞扩增的扩增培养室使用，在培养室12的内面涂布抗CD3抗体，将其作为用于使淋巴细胞活化的活化培养室使用。另外，对培养室13的内面进行用于培养贴壁系细胞的表面处理，将其作为贴壁系细胞培养室使用。该贴壁系细胞培养室被用于将白血球分离为淋巴细胞和贴壁系细胞而培养贴壁系细胞。此后，如图2所示，在连接培养室11与培养室12的管路2、和连接培养室12与培养室13的管路2安装夹子等流路开闭机构，控制管路2中的流路的开闭。

此后，向培养室13中注入从血液分离出的白血球(细胞漂浮液)和培养液，在37℃静置约2小时。由此，白血球中的贴壁系细胞就会贴附在培养室13的底面。

然后，开放连接培养室12与培养室13的管路2中的流路，从培养室13向培养室12移送白血球中的漂浮系细胞(淋巴细胞)和培养液。此后，在培养室12中，使淋巴细胞活化。

然后，向培养室13中，加入添加有100ng/ml的GM－CSF(Granulocyte Macrophagecolony-stimulating Factor，粒细胞巨噬细胞集落刺激因子)和50ng/ml的IL－4(Interleukin-4，白介素－4)(有时将它们称作诱导成为树状细胞的诱导因子。)的培养液(AIM-V，Life Technologies公司制等)，将贴壁系细胞在37℃、5％二氧化碳浓度的条件下培养约5天。

对像这样由贴壁系细胞诱导出的未熟树状细胞，提呈癌抗原并培养约2天，可以得到成熟了的树状细胞。

另一方面，移动到培养室12的淋巴细胞因大约3天左右的抗CD3抗体的刺激而被活化。

其后，开放连接培养室11与培养室12的管路2中的流路，从培养室12向培养室11移送经过活化的淋巴细胞及培养液，在培养室11中使淋巴细胞扩增。此时，与淋巴细胞的扩增同时地向培养室11中追加培养液，在大约4天左右可以大量地获得经过活化的T淋巴细胞(T细胞)。

最终，制备这些细胞，可以将树状细胞和淋巴细胞分别施用于人。

如此所述，根据本实施方式的多腔室培养容器1a，在具备三个以上的培养室的情况下，也可以通过在一个培养容器内具备它们，而一体化地进行处置，可以容易地进行细胞的转移操作，从而能够以简单的操作来实施复杂的培养工序。

[第三实施方式]

下面，参照图3及图4，对本发明的第三实施方式的多腔室培养容器及细胞培养方法进行说明。

本实施方式的多腔室培养容器的特征在于，在其一边具备使用管路连接的两个以上的室间连接部，以使各培养室的具备室间连接部的一边与多腔室培养容器的对应一边的距离依照各培养室的排列顺序变大或变小的方式形成各培养室。对于其他的方面，可以设为与第一实施方式的多腔室培养容器1相同的构成。

具体而言，如图3所示，以使具备室间连接端口112和122的多腔室培养容器1b的边与培养室11的具备室间连接端口112的边的距离d1、与具备室间连接端口112和122的多腔室培养容器1的边与培养室12的具备室间连接端口122的边的距离d2的差为给定的大小d的方式，形成培养室11及培养室12。该d(＝d2－d1)优选设为3mm以上，更优选设为5mm～50mm，进一步优选设为7mm～20mm。

由此，只需倾斜多腔室培养容器1b，就能够合适地进行从培养室12向培养室11的内容物的移送。

即，对于本实施方式的多腔室培养容器1b，使各培养室11和12的具备室间连接部112和122的边与具备室间连接端口112和122的多腔室培养容器1b的边的距离越大的培养室越位于上方，并且在使具备室间连接部112和122的多腔室培养容器1b的边向下的同时，以使多腔室培养容器1b的一个角位于最下端的方式倾斜多腔室培养容器1b，从位于上方的培养室向位于下方的培养室进行内容物的移送。

具体而言，如图4所示，使具备室间连接端口112和122的多腔室培养容器1的边与具备室间连接端口的培养室的边的距离更大的培养室12位于上方，并且在使具备室间连接端口112和122的多腔室培养容器1b的边倾斜向下的同时，以使多腔室培养容器1b的一个角位于最下端的方式倾斜多腔室培养容器1b。由此，就能够使培养室12的内容物经由管路2向培养室11自然地移送。

另一方面，例如在将第一实施方式的多腔室培养容器1如图4所示地倾斜的情况下，无法获得足以从培养室12向培养室11移送内容物的压力差，存在有在培养室12内残留内容物的问题。

与此不同，根据本实施方式的多腔室培养容器1b，可以大幅度减少培养室12的内容物的残存。

[第四实施方式]

下面，参照图5，对本发明的第四实施方式的多腔室培养容器及细胞培养方法进行说明。

本实施方式的多腔室培养容器的特征在于，用于将各培养室与其他的培养室连通的流路是在多腔室培养容器内对膜材料进行热封加工而形成。

具体而言，如图5所示，在多腔室培养容器1c中，形成有连通培养室11与培养室12的移送流路3。由此，从培养室11和培养室12中，省略了室间连接端口。对于其他的方面，可以设为与第一实施方式的多腔室培养容器1相同的构成。

移送流路3可以利用物理机构来控制开闭。作为该物理机构，例如可以使用推压构件等，通过控制其推入量，可以开闭移送流路3。

根据此种本实施方式的多腔室培养容器1c，不需要将培养室11与培养室12用管路2连接，另外可以省略各培养室的室间连接端口，从而能够获得结构更加简单的多腔室培养容器。另外，由于没有连接各培养室间的管路，因此其处置非常简单，在安装于自动培养装置中的情况下，也能够极为容易地进行。

[第五实施方式]

下面，参照图6对本发明的第五实施方式的多腔室培养容器及细胞培养方法进行说明。

本实施方式的多腔室培养容器1d如图6所示，具备：作为用于使细胞活化的活化培养室的培养室12、作为用于使细胞扩增的扩增培养室的培养室11、用于对细胞进行取样的取样室14、用于回收细胞的回收室15。

此外，形成有连通培养室12与培养室11的移送流路3，并且在培养室11与取样室14之间、以及培养室11与回收室15之间，也通过对膜材进行热封加工而形成有移送流路3。

此外，在取样室14和回收室15的周围，设有用于可以将它们分别容易地切掉的包含针眼、狭缝、刻痕、缺口等的易切断部4。另外，也可以为了切掉各培养室而设置此种易切断部4。

本实施方式的多腔室培养容器1d例如可以如下所示地用于淋巴细胞的培养等。

与第一实施方式相同，对培养室11的内面不进行特别的处理，而将其作为用于使淋巴细胞扩增的扩增培养室使用，在培养室12的内面固相化抗CD3抗体，将其作为用于使淋巴细胞活化的活化培养室使用。

另外，为了对培养室11中的培养细胞进行取样而使用取样室14，为了回收培养室11中的培养细胞的一定量而使用回收室15。

此后，在将连通培养室12与培养室11的移送流路3利用物理机构关闭后，向培养室12注入淋巴细胞和培养液，使淋巴细胞活化。另外，将连通取样室14与培养室11、以及连通回收室15与培养室11的移送流路3也利用物理机构关闭。

使淋巴细胞活化后，开放培养室12与培养室11间的移送流路3，从培养室12将淋巴细胞和培养液向培养室11推出，使活化了的淋巴细胞移送到培养室11，在培养室11中使淋巴细胞扩增。此时，可以与淋巴细胞的扩增同时地经由外部连接端口111从培养液供给容器向培养室11追加必需的培养液。该培养液的追加也可以通过使用无菌接合装置等而无菌地进行。另外，也可以改良培养液的成分，在培养室11中预先填充有追加培养液。此外，也可以在本实施方式的多腔室培养容器1d中形成培养液供给室，从而能够从培养液供给室向培养室11追加培养液。

另外，在对在培养室11中经过培养的细胞进行取样的情况下，可以开放取样室14与培养室11间的移送流路3，从培养室11向取样室14移送少量的淋巴细胞和培养液后，将取样室14与培养室11间的移送流路3利用热封等熔断，沿着易切断部4切掉取样室14，用于细胞分析、检查等。

此外，在回收培养细胞的一部分，实行分为2次地施用的医疗方法等情况下，可以开放回收室15与培养室11间的移送流路3，从培养室11向回收室15移送必需量的淋巴细胞和培养液后，将回收室15与培养室11间的移送流路3利用热封等熔断，沿着易切断部4切掉回收室15，将收容于回收室15中的淋巴细胞用于施用等。

如此所述，根据本实施方式的多腔室培养容器1d，由于可以将这些操作全都在封闭系统的多腔室培养容器1d内实施，因此能够在确保了无菌性的状态下，简便地进行细胞培养。

另外，由于本实施方式的多腔室培养容器1d是流路被一体化了的多腔室培养容器，因此只需进行密封条的设计，就能够简便地以低成本制作各种室、流路。另外，在设置于自动培养装置中时，也不需要复杂的管路的安装，因此不仅操作效率提高，而且还可以减少安装错误等的风险。

本发明并不限定于以上的实施方式、实施例，当然可以在本发明的范围内进行各种变更实施。

例如，可以进行如下所示等适当的变更，即，将上述各实施方式组合，或为了移送贴壁系细胞，而具备用于向培养室供给用于将贴壁系细胞从培养室的内面剥离的酶溶液的酶溶液供给容器、以及用于向培养室供给用于阻碍该酶的作用的阻碍剂溶液的阻碍剂溶液供给容器。

产业上的可利用性

本发明在医药品的生产、基因治疗、再生医疗、免疫疗法等领域中，可以在使用封闭系统的培养容器来培养细胞的情况下合适地使用。

符号的说明

1、1a、1b、1c、1d 多腔室培养容器，

11 培养室，

111 外部连接端口，

112 室间连接端口，

113 取样端口，

12 培养室，

121 外部连接端口，

122 室间连接端口，

13 培养室，

131 外部连接端口，

132 室间连接端口，

14 取样室，

141 外部连接端口，

15 回收室，

151 外部连接端口，

2 移送管路，

3 移送流路，

4 易切断部。

Claims (11)

1.一种多腔室培养容器，其特征在于，

对具有透气性的材料进行加工而得，

所述多腔室培养容器形成有两个以上的用于培养细胞的培养室，

各培养室与至少一个其他的培养室连通，并且具备至少一个用于与所述多腔室培养容器的外部连通的外部连接部。

2.根据权利要求1所述的多腔室培养容器，其特征在于，

在所述各培养室中，分别具备用于与所述其他的培养室连通的室间连接部，所述室间连接部之间被使用管路连接。

3.根据权利要求1所述的多腔室培养容器，其特征在于，

用于将所述各培养室与所述其他的培养室连通的流路，在所述多腔室培养容器内对具有透气性的膜材料进行热封加工而形成。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的多腔室培养容器，其特征在于，

作为所述培养室，至少具备用于使细胞活化的活化培养室、和用于使细胞扩增的扩增培养室。

5.根据权利要求3所述的多腔室培养容器，其特征在于，

作为所述培养室，具备用于使细胞活化的活化培养室、和用于使细胞扩增的扩增培养室，并且具备用于对细胞进行取样的取样室、和用于回收细胞的回收室，形成有连通所述活化培养室与所述扩增培养室的所述流路，在所述扩增培养室与所述取样室间、以及所述扩增培养室与所述回收室间，分别在所述多腔室培养容器内对具有透气性的膜材料进行热封加工而形成流路。

6.根据权利要求5所述的多腔室培养容器，其特征在于，

设有用于切掉选自所述各培养室、所述取样室、以及所述回收室中的至少任意一个室的易切断部。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的多腔室培养容器，其特征在于，

在全部或一部分的所述培养室中具备各自不同的培养基材料。

8.根据权利要求1～7中任一项所述的多腔室培养容器，其特征在于，

所述多腔室培养容器呈近似长方形，在所述多腔室培养容器的一边具备使用管路连接的两个以上的所述室间连接部，以使所述各培养室的具备所述室间连接部的边与所述多腔室培养容器的一边的距离依照所述各培养室的排列顺序变大或变小的方式形成所述各培养室。

9.一种细胞培养方法，其特征在于，使用了权利要求8所述的多腔室培养容器，

所述细胞培养方法使所述各培养室的具备所述室间连接部的边与所述多腔室培养容器的一边的距离越大的培养室越位于上方，并且，在使具备所述室间连接部的所述多腔室培养容器的边倾斜向下的同时，以使所述多腔室培养容器的一个角位于最下端的方式倾斜所述多腔室培养容器，从位于上方的培养室向位于下方的培养室进行内容物的移送。

10.一种细胞培养方法，其特征在于，使用了权利要求1～3中任一项所述的多腔室培养容器，

作为所述多腔室培养容器中的所述培养室，形成用于使淋巴细胞活化的固相化有抗CD3抗体的活化培养室、和用于使淋巴细胞扩增的扩增培养室，

将淋巴细胞及培养液注入所述活化培养室，在所述活化培养室中使淋巴细胞活化，

从所述活化培养室向所述扩增培养室移送经过活化的淋巴细胞及培养液，在所述扩增培养室中使淋巴细胞扩增。

11.一种细胞培养方法，其特征在于，使用了权利要求1～3中任一项所述的多腔室培养容器，

作为所述多腔室培养容器中的所述培养室，形成用于将白血球分离为淋巴细胞和贴壁系细胞而培养贴壁系细胞的贴壁系细胞培养室、用于使淋巴细胞活化的固相化有抗CD3抗体的活化培养室、和用于扩增淋巴细胞的扩增培养室，

将从血液分离出的白血球及培养液注入所述贴壁系细胞培养室并静置，使所述白血球中的贴壁系细胞贴附在所述贴壁系细胞培养室内的底面，

然后，从所述贴壁系细胞培养室向所述活化培养室移送所述白血球中的淋巴细胞和培养液，在所述活化培养室中使淋巴细胞活化，

向所述贴壁系细胞培养室注入含有诱导成为树状细胞的诱导因子的培养液并培养所述贴壁系细胞，将所述贴壁系细胞诱导成为树状细胞，

从所述活化培养室向所述扩增培养室移送经过活化的淋巴细胞及培养液，在所述扩增培养室中使淋巴细胞扩增。