CN104059121A

CN104059121A - 一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法

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Publication number: CN104059121A
Application number: CN201410279399.1A
Authority: CN
Inventors: 周志宏; 刘菲菲; 王兵; 金良雄; 徐红昆
Original assignee: Yunnan Yun Yao Research Medical Pty Ltd
Current assignee: Yunnan Yun Yao Research Medical Pty Ltd
Priority date: 2014-06-21
Filing date: 2014-06-21
Publication date: 2014-09-24
Anticipated expiration: 2034-06-21
Also published as: CN104059121B

Abstract

本发明涉及一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，属于中药提取技术领域。该方法包括以下步骤：a、取雪胆，加入乙醇提取，得提取液，然后将所述提取液进行浓缩，得浸膏；b、将所述浸膏拌入聚酰胺树脂，烘干，上样于聚酰胺层析柱，先用水洗脱，再用质量百分比浓度为60％～100％的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，分别浓缩得雪胆甲素、雪胆乙素粗品；c、将所述雪胆甲素、雪胆乙素粗品分别用质量百分比浓度为70％～100％的乙醇溶液溶解，静置结晶，过滤，得雪胆甲素、雪胆乙素。本发明的有益效果是：该方法能快速、有效地实现雪胆甲素、乙素与其他成分的分离，且安全无毒，适用于工业化生产。

Description

一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法

技术领域

本发明属于中药提取技术领域，具体涉及一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法。

背景技术

雪胆，别名金龟莲、金盆、罗锅底、曲莲，为葫芦科植物雪胆(Hemsleyaamabilis Diels)及其同属数种植物的干燥块根。雪胆属植物共31种，除2种产于印度、越南外，主要分布于我国云、贵、川三省，云南省占三分之二。本品性苦、寒，入胃、大肠二经，具有清热解毒、抗菌消炎、利湿消肿、健胃止痛的功效。其主要功能性成分雪胆素为雪胆甲素和雪胆乙素的混晶，两者多作为整体用于临床治疗。近期研究发现雪胆甲素具有显著抗肿瘤活性，在体外抗HIV活性中，雪胆甲素和乙素表现出不同强度的抑制性，随着对雪胆甲素药理研究的深入，其临床应用越加广泛。

由雪胆素制成的成药制剂雪胆素片、胶囊等乙广泛应用于临床。其成分为雪胆甲素、乙素的混合物。由于来自不同产地、采收季节，甲素和乙素的含量批次间有巨大差异，严重影响产品质量控制和临床药效，因此，对甲素乙素进行有效分离，才能完全控制每批次间产品内在品质。该技术是目前雪胆素产业中的核心技术问题。

目前，雪胆甲素的制备主要通过溶剂提取与色谱分离相结合的方法，如申请号为200610011065.1的中国专利“一种提取雪胆素的方法”以及申请号为201010235765.5的中国专利“一种提取雪胆素的改进方法”均通过乙醇溶液对雪胆进行回流提取，所得提取液回收溶剂后经大孔吸附树脂进行分离，但因雪胆素难溶于水，上述方法均存在雪胆素在大孔吸附树脂上分散差、吸附困难的问题，后者通过反复吸附来增大吸附量，虽能部分改善，但工艺繁琐，可操作性差；如改用高浓度乙醇溶液作为溶剂来提高雪胆素溶解性，分离效果会显著降低，且成本较高。再如申请号为200610010906.7的中国专利“雪胆甲素的制备方法和在制备治疗癌症的药物中的应用”，该专利公开的方法是取雪胆属植物块根，粉碎，用18～26重量倍的丙酮为溶剂，采用渗漉法提取，提取液在60～75℃水浴锅中回收，即得浸膏；将提出的浸膏拌入1～2重量倍的硅胶，烘干，上硅胶柱，用氯仿-甲醇进行梯度洗脱，其中甲醇体积浓度为2％～10％，回收洗脱液，得粗品；用甲醇或乙醇对粗品在水浴中加热溶解，滤过，置室温，重结晶，得棱柱状结晶，即纯度为98％以上的雪胆甲素。该法中以丙酮作为提取剂，因其细胞穿透性差，使得提取率不高，且溶剂用量大。另丙酮燃点低，安全性差，所用洗脱剂均为毒性高危险品，因此成本较高，难于工业化。

综上所述，针对现有技术缺陷，提出成本低、操作安全、简便的雪胆甲素、乙素提取新方法，是提高雪胆植物资源利用率，实现雪胆甲素、乙素大规模产业化生产亟待解决的关键问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种有效制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，该方法操作简便、安全，适用于工业化生产。

本发明所采取的技术方案是一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，包括以下步骤：

a、取雪胆，加入乙醇提取，得提取液，然后将所述提取液进行浓缩，得浸膏；

b、将所述浸膏拌入聚酰胺树脂，烘干，上样于聚酰胺层析柱，先用水洗脱，再用质量百分比浓度为60％～100％的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，分别浓缩得雪胆甲素、雪胆乙素粗品；

c、将所述雪胆甲素、雪胆乙素粗品分别用质量百分比浓度为70％～100％的乙醇溶液溶解，静置结晶，过滤，得雪胆甲素、雪胆乙素。

优选的，所述步骤a中乙醇的质量百分比浓度为50％～100％。

优选的，所述步骤a中乙醇的加入量为所述雪胆重量的5～15倍。

优选的，所述步骤a中提取的次数为2～4次，每次提取的时间为1～4小时。

优选的，所述步骤b中拌入聚酰胺树脂的重量为所述浸膏重量的1～5倍。

优选的，所述步骤b中聚酰胺树脂的型号选自尼龙-6或尼龙-66；所述聚酰胺树脂的粒度为60目～120目。

优选的，所述步骤a中用于提取雪胆的溶剂包括质量百分比浓度为50％～100％的甲醇溶液。

优选的，所述步骤b中用于洗脱雪胆甲素、雪胆乙素粗品的洗脱剂包括质量百分比浓度为50％～100％的甲醇溶液。

优选的，所述步骤c中用于溶解雪胆甲素、雪胆乙素粗品的溶解剂包括质量百分比浓度为70％～100％的甲醇溶液、质量百分比浓度为70％～100％的丙酮溶液。

本发明还提供一种所述制备方法得到的雪胆甲素或/和雪胆乙素。

本发明的有益效果在于：本发明针对雪胆甲素、雪胆乙素的结构特点，通过与聚酰胺树脂发生氢键吸附来进行精制，因氢键吸附具有选择性以及不同物质氢键缔合能力不同，该法可快速、有效实现雪胆甲素、乙素与其他成分的分离，并采用固体上样，解决雪胆素水溶液在分离填料上分散差、吸附困难的问题；与硅胶相比，聚酰胺树脂可重复利用，经济性强，且所用洗脱剂为乙醇溶液，安全无毒，适用于工业化生产。

具体实施方式

为使本领域技术人员详细了解本发明的生产工艺和技术效果，下面以具体的生产实例来进一步介绍本发明的应用和技术效果。

实施例1：

a、取雪胆块茎100kg，粉碎至粗粉，加入7倍重量质量百分比浓度为95％的乙醇加热回流提取3次，每次提取2小时，过滤，得提取液，然后将提取液进行减压浓缩，得浸膏；

b、以浸膏的重量为基准，在浸膏中加入3倍重量的聚酰胺树脂，混匀，烘干，上样于聚酰胺层析柱，先用3倍BV的水以3BV/h的流量进行洗脱，再用质量百分比浓度为70％的乙醇溶液以1BV/h的流量进行梯度洗脱，收集洗脱液，分别浓缩得雪胆甲素、雪胆乙素粗品；在收集洗脱液时，以雪胆甲素、雪胆乙素为对照品，采用薄层色谱法鉴别后来分别进行收集。其中，聚酰胺树脂的型号选自粒度为100目的尼龙-6。

c、将所述雪胆甲素、雪胆乙素粗品分别用质量百分比浓度为85％的乙醇溶液加热回流溶解，静置，结晶得棱柱状、针状晶体，过滤，得985g雪胆甲素、236g雪胆乙素。经检测，雪胆甲素的纯度为98.8％，雪胆乙素的纯度为98.5％。

实施例2：

a、取雪胆块茎100kg，粉碎至粗粉，加入10倍重量质量百分比浓度为85％的乙醇加热回流提取4次，每次提取1.5小时，过滤，得提取液，然后将提取液进行减压浓缩，得浸膏；

b、以浸膏的重量为基准，在浸膏中加入5倍重量的聚酰胺树脂，混匀，烘干，上样于聚酰胺层析柱，先用4倍BV的水以2BV/h的流量进行洗脱，再用质量百分比浓度为65％的乙醇溶液以1BV/h的流量进行梯度洗脱，收集洗脱液，分别浓缩得雪胆甲素、雪胆乙素粗品；在收集洗脱液时，以雪胆甲素、雪胆乙素为对照品，采用薄层色谱法鉴别后来分别进行收集。其中，聚酰胺树脂的型号选自粒度为80目的尼龙-66。

c、将所述雪胆甲素、雪胆乙素粗品分别用质量百分比浓度为90％的乙醇溶液加热回流溶解，静置结晶，分别得棱柱状、针状晶体，过滤，得992g雪胆甲素、243g雪胆乙素。经检测，雪胆甲素的纯度为98.4％，雪胆乙素的纯度为98.1％。

实施例3：

a、取雪胆块茎100kg，粉碎至粗粉，加入10倍重量质量百分比浓度为100％的甲醇加热回流提取4次，每次提取1.5小时，过滤，得提取液，然后将提取液进行减压浓缩，得浸膏；

c、将所述雪胆甲素、雪胆乙素粗品分别用质量百分比浓度为90％的乙醇溶液加热回流溶解，静置结晶，分别得棱柱状、针状晶体，过滤，得983g雪胆甲素、251g雪胆乙素。经检测，雪胆甲素的纯度为98.3％，雪胆乙素的纯度为98.1％。

实施例4：

a、取雪胆块茎100kg，粉碎至粗粉，加入10倍重量质量百分比浓度为75％的甲醇加热回流提取4次，每次提取1.5小时，过滤，得提取液，然后将提取液进行减压浓缩，得浸膏；

b、以浸膏的重量为基准，在浸膏中加入5倍重量的聚酰胺树脂，混匀，烘干，上样于聚酰胺层析柱，先用4倍BV的水以2BV/h的流量进行洗脱，再用质量百分比浓度为75％的甲醇溶液以1BV/h的流量进行梯度洗脱，收集洗脱液，分别浓缩得雪胆甲素、雪胆乙素粗品；在收集洗脱液时，以雪胆甲素、雪胆乙素为对照品，采用薄层色谱法鉴别后来分别进行收集。其中，聚酰胺树脂的型号选自粒度为80目的尼龙-66。

c、将所述雪胆甲素、雪胆乙素粗品分别用质量百分比浓度为70％的丙酮溶液加热回流溶解，静置结晶，分别得棱柱状、针状晶体，过滤，得994g雪胆甲素、233g雪胆乙素。经检测，雪胆甲素的纯度为98.9％，雪胆乙素的纯度为98.7％。

实施例5：

a、取雪胆块茎100kg，粉碎至粗粉，加入5倍重量质量百分比浓度为90％的乙醇加热回流提取4次，每次提取1小时，过滤，得提取液，然后将提取液进行减压浓缩，得浸膏；

b、以浸膏的重量为基准，在浸膏中加入2倍重量的聚酰胺树脂，混匀，烘干，上样于聚酰胺层析柱，先用4倍BV的水以2BV/h的流量进行洗脱，再用质量百分比浓度为50％的甲醇溶液以1BV/h的流量进行梯度洗脱，收集洗脱液，分别浓缩得雪胆甲素、雪胆乙素粗品；在收集洗脱液时，以雪胆甲素、雪胆乙素为对照品，采用薄层色谱法鉴别后来分别进行收集。其中，聚酰胺树脂的型号选自粒度为120目的尼龙-66。

c、将所述雪胆甲素、雪胆乙素粗品分别用质量百分比浓度为70％的甲醇溶液加热回流溶解，静置结晶，分别得棱柱状、针状晶体，过滤，得979g雪胆甲素、237g雪胆乙素。经检测，雪胆甲素的纯度为98.3％，雪胆乙素的纯度为98.5％。

实施例6：

a、取雪胆块茎100kg，粉碎至粗粉，加入15倍重量质量百分比浓度为50％的乙醇加热回流提取2次，每次提取4小时，过滤，得提取液，然后将提取液进行减压浓缩，得浸膏；

b、以浸膏的重量为基准，在浸膏中加入1倍重量的聚酰胺树脂，混匀，烘干，上样于聚酰胺层析柱，先用4倍BV的水以2BV/h的流量进行洗脱，再用质量百分比浓度为100％的乙醇溶液以1BV/h的流量进行梯度洗脱，收集洗脱液，分别浓缩得雪胆甲素、雪胆乙素粗品；在收集洗脱液时，以雪胆甲素、雪胆乙素为对照品，采用薄层色谱法鉴别后来分别进行收集。其中，聚酰胺树脂的型号选自粒度为60目的尼龙-66。

c、将所述雪胆甲素、雪胆乙素粗品分别用质量百分比浓度为100％的丙酮溶液加热回流溶解，静置结晶，分别得棱柱状、针状晶体，过滤，得981g雪胆甲素、236g雪胆乙素。经检测，雪胆甲素的纯度为98.8％，雪胆乙素的纯度为98.6％。

最后应说明的是，以上实施例仅用以说明而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域技术人员应当理解，依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。

Claims

1.一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，其特征在于：所述步骤a中乙醇的质量百分比浓度为50％～100％。

3.根据权利要求1所述的一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，其特征在于：所述步骤a中乙醇的加入量为所述雪胆重量的5～15倍。

4.根据权利要求1所述的一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，其特征在于：所述步骤a中提取的次数为2～4次，每次提取的时间为1～4小时。

5.根据权利要求1所述的一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，其特征在于：所述步骤b中拌入聚酰胺树脂的重量为所述浸膏重量的1～5倍。

6.根据权利要求1所述的一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，其特征在于：所述步骤b中聚酰胺树脂的型号选自尼龙-6或尼龙-66；所述聚酰胺树脂的粒度为60目～120目。

7.根据权利要求1所述的一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，其特征在于：所述步骤a中用于提取雪胆的溶剂包括质量百分比浓度为50％～100％的甲醇溶液。

8.根据权利要求1所述的一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，其特征在于：所述步骤b中用于洗脱雪胆甲素、雪胆乙素粗品的洗脱剂包括质量百分比浓度为50％～100％的甲醇溶液。

9.根据权利要求1所述的一种制备雪胆甲素、雪胆乙素的方法，其特征在于：所述步骤c中用于溶解雪胆甲素、雪胆乙素粗品的溶解剂包括质量百分比浓度为70％～100％的甲醇溶液、质量百分比浓度为70％～100％的丙酮溶液。

10.一种基于权利要求1-9中任一项所述制备方法得到的雪胆甲素或/和雪胆乙素。