CN104510740A - 一种治疗艾滋病的药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种治疗艾滋病的药物组合物，本发明药物组合物是以穗花杉双黄酮、雪胆素甲、贝母甲素、原百部碱为原料药，配比而成，可按常规制剂工艺制成各种剂型，本发明所提供的药物组合物对制备治疗艾滋病药物具有重要意义。

Description

一种治疗艾滋病的药物组合物
技术领域
本发明属于生物医药领域，涉及一种治疗艾滋病的药物组合物。
背景技术
艾滋病是1981年发现的新病毒性传染病，中医过去对其未有记载。中医对艾滋病辨证，认为艾滋病属于疫病范畴。病因为疫毒热邪侵袭，正气虚弱而致。病机主要为卫外不固，阳气损伤，脏腑受累，引起肺虚脾虚肾虚，继发感染。热伤脉络，气血凝滞，形成癥积肿块肿瘤。
中医辨“证”：主要辨别邪正消长和虚证实证。艾滋病病毒为邪毒，邪毒入里而传变，与机体正气的邪正抗争的动态变化，为疾病的发展过程。感染早期以邪实为主，中期“因实致虚”，晚期“因虚致实”。艾滋病病情复制多变，艾滋病及其继发感染都可形成“病”，且有不同“型”和“期”。中医对艾滋病有辨证辨病，分型分期等不同诊治方案。
艾滋病的中医药治疗目前仍属于研究阶段，目前国内外尚未有公认疗效肯定被批准生产的抗艾滋病病毒中药或中药单体化合物。抗艾滋病病毒植物药和中药研究主要分3种途径，烟具获得的抗艾滋病病毒中药植物药及其成分，有些已在临床试用。
自艾滋病病毒发现以来，国际上用艾滋病病毒细胞培养和逆转录酶，蛋白酶和整合酶等体外实验方法，广泛筛选化合物的同时，也大量筛选植物和中草药提取物及其成分，也研究了一些中药复方制剂，发现在体外抑制艾滋病毒的有效药物，有的可抑制猴免疫缺陷病毒（SIV）感染猴的病毒血症。有些已在临床试用，尚未明确效果。
我国自1987年派中西医结合医疗队去非洲治疗艾滋病病人。国内在2002年以前，缺乏特效抗艾滋病病毒药物，中西医在临床根据中医理论，对艾滋病病人辨病与辨证相结合，以清热解毒，扶正固本，或凉血补肾，活血化瘀等治则，按中药性能，选择中药，处方治疗。通过临床实践，认为有些中药复方治疗艾滋病可改善症状，缓解病情。近年来对实验诊断确诊的艾滋病病人，采用中药治疗，设对照组，在治疗期间，定期检测血液病毒载量（HIV-RNA）和CD4细胞水平，评价效果。有报道可改善症状，提高免疫力，大多仍在临床验证中。进入临床的抗HIV单味中药或植物药及中药复方如下：
甘草甜素：甘草甜素（glycyrrhizin，GL）是中药甘草（Glycyrrhiza glabra L）提取的甘草皂苷，有广谱抗病毒作用，体外抑制HIV-1逆转录酶，在细胞培养内抑制HIV细胞融合，也抗流感病毒和SARS病毒，体内实验证明可保护流感病毒感染小鼠引起的肺炎死亡和肺病变；保护小鼠的CCl4中毒性肝损伤；诱生γ-干扰素；有类激素作用。日本常用其静脉点滴治疗慢性乙型肝炎，也曾试用治疗艾滋病病人，可抑制血清HIV-1-P24抗原，升高CD4细胞。吕维柏教授1988-1992年在非洲坦桑尼亚应用甘草甜素口服制剂克艾可治疗艾滋病病人可改善症状，CD4细胞略有上升。其效果尚未被验证。
天花粉蛋白：天花粉蛋白（Trichosanthin，TCS，GLQ223，Q物质）为中药栝楼（Trichosanthes kirilowii）属葫芦科（Cucurbitaceae），我国民间用于流产的中药复方的主要中药成分为栝楼，我国科学家分离鉴定器抗早孕和引产的有效成分为天花粉蛋白，分子量为27kD，其一、二级结构和三维结构已完全弄清，为抑制蛋白合成的植物毒蛋白，是单链的核糖体失活蛋白（Ribosome Inactivating Protein, RIP）。美国在筛选抗HIV-1药物时，发现其在淋巴细胞培养内抑制HIV-1细胞融合，其后发现在单核巨噬细胞培养内HIV-1的P24抗原和RNA，在3只猴艾滋病病毒（SIV）感染猴静脉注射可抑制血浆HIV-1。美国在林场使用静脉点滴治疗艾滋病病人，可抑制外周血HIV-1感染的T淋巴细胞和单核巨噬细胞内HIV-1-P24抗原，使CD4/ CD8比例略有升高。由于可引起过敏性反应死亡，神经毒性的精神失常和肾毒性反应，临床实验已中止。近年来从天花粉中分离出其他蛋白TAP29，分子量在29 kD，也有抑制HIV-1的作用，但毒性较小，未在临床试用。此外苦瓜（MOmordica charantia）的苦瓜蛋白和商陆（Phytolacca americana）的商陆蛋白（Pokeweed protein）等都有抑制HIV的作用。
金丝桃素：植物贯叶金丝桃（St. John Wort, Hypericum perforatum）民间传统用其提取物治疗抑郁症，从花提出的活性成分是金丝桃素（hypericin），是芳香族多环二聚蒽醌类化合物，为抗抑郁症药物，已全合成。金丝桃素具有多种抗病毒活性，在细胞培养内抑制HIV，其作用机制为阻断病毒的脱衣，装配和释放，有杀病毒作用，可通过血脑屏障。在细胞培养内可抑制鼠白血病病毒繁殖。在体内可抑制鼠白血病病毒感染小鼠引起的脾肿大，也可抑制鸭乙型肝炎病毒感染鸭血请病毒DNA，并有广谱抗细菌活性。曾在临床I/II期试用治疗艾滋病患者，因有光敏感作用已停止试验。
右旋胡同素A：右旋胡同素A（+Calanolide A）是1992年报道从马来西亚热带雨林植物Calophyllum lanigerum 中分离的天然化合物，鼠香豆素类化合物，抑制HIV-1逆转录酶，但对HIV-2无效。属于非核苷类HIV-1逆转录酶抑制剂，在细胞培养内多对多住临床分离的AZT敏感和耐药HIV-1有效，并与AZT, NVP有协同作用。在HIV空纤维管小鼠体内实验模型（HIV hollow fiber mouse model）中证明有抗艾滋病病毒作用，与AZT联合应用可增强药效。已全合成，进行了I-II其临床试验证明有抑制HIV-1感染的治疗效果，毒性小，副作用轻，有头痛和食欲不振等，与AZT联合用药有效。是目前唯一进入II期临床实验的单一植物成分，正在观察验证疗效中，尚未批准生产。
小柴胡汤：小柴胡汤（柴胡，人参，半夏，黄芩，甘草，生姜，大枣）
是张仲景伤寒论方。日本用其治疗乙型肝炎，发现其在细胞培养内抑制HIV。美国在临床用于治疗数例艾滋病病人，可降低血清P24抗原。我们证明其有抑制HIV-1逆转录酶和在细胞培养内抑制HIV-1的作用。分别研究其7种成分中药的效果，发现仅黄芩水提物及其成分黄芩苷（baicalin）有抑制HIV-1作用，在体外无细胞系统中抑制HIV-1逆转录酶，在人T细胞和外周血单核细胞培养内抑制HIV-1细胞病变，病毒荧光抗原和P24抗原，体内鼠白血病病毒感染小鼠口服可抑制脾肿大和血白细胞升高。日本Ono报道黄芩苷元（baicalien）抑制HIV-1逆转录酶。
中研I号：中研I号（主药有紫花地丁，天花粉等组成）商品名为：艾
克冲剂，以清热解毒为治则，由我国中药研究院组方1992-1993年在非洲坦桑尼亚对早中期艾滋病临床应用，认为有一定改善症状，提高免疫力的效果。实验室证明该药体外抑制HIV逆转录酶活性，体内对猴艾滋病毒感染猴实验治疗结果表明，能降低血浆病毒滴度，并且能提高CD4细胞数目及CD4/CD8比值和T, B淋巴细胞数值，诱生干扰素和产生免疫调节功能。曾在非洲和我国临床试用，尚未批准临床验证。
中研2号：中研2号（黄芪，人参，当归，枸杞和甘草等）是我国中医
研究院医疗队组方。1992年在非洲坦桑尼亚治疗艾滋病病人。1998-1999年在非洲专科门诊对29例艾滋病病人治疗，2/16例HIV病毒载量下降，CD4 8/29例CD4升高。2001-2002年在北京佑安医院治疗15例艾滋病病人，3/15例病毒载量下降，CD4 1/15例CD4升高。有改善症状的效果。实验证明该药在人体内对猴艾滋病毒感染猴实验治疗表明，用药4-12周能降低血浆病毒滴度，P27抗原，并且能提高CD4细胞数目，对感染猴淋巴细胞有激活作用。
穗花杉双黄酮（amentoflavone）：CAS号1617-53-4 ，分子式 C30H18O10，分子量 538.46 ，抗真菌(烟曲霉菌,灰葡萄孢和粉绿木霉菌)，核苷酸二磷酸酶抑制剂。
雪胆素甲（dihydromorin）：CAS号18422-83-8，分子式C15H12O7，分子量304.3。
贝母甲素（peimine）：CAS号23496-41-5，分子式C27H45NO3，分子量431.65。
原百部碱（protostemonine）：CAS号：27495-40-5，分子式C23H31NO6，分子量417.50。
本发明药物组合物的4种药物结构如下：
           
穗花杉双黄酮（amentoflavone）           雪胆素甲（dihydromorin）
               
贝母甲素（peimine）                原百部碱（protostemonine）。
发明内容
本发明的目的是克服背景技术的不足，提供一种治疗艾滋病的药物组合物。
本发明是通过如下技术方案实现的：
本发明的一种治疗艾滋病的药物组合物的原料药的组成和重量份为：
穗花杉双黄酮2-15重量份  雪胆素甲2-15重量份 贝母甲素2-15重量份 原百部碱2-15重量份 。
本发明的一种治疗艾滋病的药物组合物可以采用制剂学的常规方法制备成片剂、胶囊剂、滴丸。
本发明的一种治疗艾滋病的药物组合物，其特征在于用于治疗艾滋病。
本发明提供的药物组合物口服可抑制FLV引起的脾肿大。脾脏为病毒的主要靶器官，FLV感染鼠的脾增重大小可定量反映病毒量，因此药物能否抑制病毒，脾指数为一个直观而可靠的指标。脾脏有丰富的淋巴细胞和巨噬细胞，它们都参与体液免疫反应，所以在实验中药物组合物可抑制脾肿大，显示其不仅具有体内抗FLV作用，还可能具有提高体液免疫功能的作用。从免疫学指标的实验结果来看，药物组合物对细胞免疫具有很好的上调作用，特别是在逆转录病毒造成的机体免疫功能低下时表现尤为显著，显示该药物组合物可增强机体细胞免疫功能，抑制FLV引起的免疫缺陷，是一个较好的免疫调节剂。
具体实施方式
下面通过具体实验例和实施例对一种治疗艾滋病的药物组合物做进一步说明，但不限于本发明。
实施例1：治疗艾滋病的药物组合物
治疗艾滋病的药物组合物的原料药的组成和重量份为：
穗花杉双黄酮5重量份  雪胆素甲10重量份 贝母甲素8重量份 原百部碱12重量份。
实施例2：治疗艾滋病的药物组合物
治疗艾滋病的药物组合物的原料药的组成和重量份为：
穗花杉双黄酮15重量份  雪胆素甲2重量份 贝母甲素15重量份 原百部碱2重量份。
实施例3：治疗艾滋病的药物组合物
治疗艾滋病的药物组合物的原料药的组成和重量份为：
穗花杉双黄酮2重量份  雪胆素甲15重量份 贝母甲素2重量份 原百部碱15重量份。
实施例4：治疗艾滋病的药物组合物
治疗艾滋病的药物组合物的原料药的组成和重量份为：
穗花杉双黄酮6重量份  雪胆素甲7重量份  贝母甲素8重量份 原百部碱4重量份。
实施例5：片剂的制备
取实施例1组合物150g，加入淀粉75g，混匀，制粒，干燥，加微晶纤维素20g，硬脂酸镁2.5g，混匀，压制成1000片, 即得本发明组合物片剂。
实施例6：胶囊的制备
取实施例2组合物165g，加入淀粉65g，混匀，制粒，干燥，整粒，加入适量硬脂酸镁，混匀，装胶囊1000粒，即得本发明组合物胶囊。
实施例7：滴丸的制备
称取聚乙二醇 6000  200g水浴(80℃)加热煮熔，加入实施例3组合物50g，充分搅拌均匀，以液体石蜡为冷却剂，置玻璃管（4*80cm）中，冷却温度为10℃，滴口内外径为7.0/2.0(mm/mm)，滴口距液面为2cm，滴速以每分50滴为最佳条件，用棉布吸干滴丸表面的冷凝剂，即得本发明组合物滴丸。
实验例1：药物组合物对艾滋病小鼠治疗作用
1.材料与方法
药物：实施例1药物组合物、实施例2药物组合物、实施例3药物组合物、实施例4药物组合物，批号分别为：20111010、20111011、20111012、20111013，试验时以30g/L的二甲基亚砜(DMSO)溶解，再用蒸馏水稀释至所需浓度；阳性对照药物齐多呋定(AZT)由厦门制药厂生产，批号为090907。
动物 ：SPF级BALB/C小鼠5O只，雌性，体质量l3-15 g，由广东省实验动物中心提供，合格证号：SCXK(粤)2009-0002粤监证字2011A013。
毒种 :Friend型鼠白血病病毒(FriendLeukemia virus，FLV)引自美国典型培养物收藏中心(American Typical Culture Centre，ATCC)，经小鼠传代增强毒力后制成100 g／L脾悬液，-70℃冻存备用。
主要试剂:PE/Cy5 anti-mouse CD3e单克隆双标抗体；PE/Cy5 Mouse IgG1，K Isotype Ctrl同型对照；FITC anti-mouse CD4/PE anti-mouse CD8a单克隆单标抗体；FITC Mouse IgG1，K Isotype Ctrl/PEMouse IgG1，K Isotype Ctrl同型对照，以上均为美国Biolegend公司产品。
病毒半数感染量(ID50) 滴定：腹腔注射FLV，制成0.1g/L脾悬液，收集脾悬液按文献方法计算ID50，实验时以60倍ID50为小鼠艾滋病模型的实验浓度。
药物组合物对FLV致小鼠脾肿大的抑制作用：将70只小鼠分为正常组、模型组、实施例1药物组合物组、实施例2药物组合物组、实施例3药物组合物组、实施例4药物组合物组、AZT组，每组各10只；除正常组外，均采用FLV腹腔注射感染小鼠。正常组和模型组每天以蒸馏水0.2mL/只灌胃，实施例1药物组合物组、实施例2药物组合物组、实施例3药物组合物组、实施例4药物组合物组剂量均为20mg/kg， AZT组剂量为100mg/kg，均以蒸馏水配成2mL溶液，在病毒攻击后l d开始以灌胃方式给药，0.2mL/只，1次/d，连续给药21d；给药21d后剖杀小鼠，计算小鼠脾指数与脾指数抑制率，脾指数(质量比) ω脾=m脾(mg)/mbody(g)，p脾指数抑制= (ω平均，模型组-ω平均，给药组)/ω平均，模型组×100％。对所得实验数据用统计软件SPSS 10．0进行分析，各组间比较采用单因素方差分析(LSD)。
血象检查：摘眼球抗凝取血，以全自动血球计数仪进行红细胞(RBC)计数、白细胞(WBC)计数。
对细胞免疫功能的影响：测定小鼠胸腺指数(质量比)，ω胸腺=m胸腺(mg)／mbody (g)；外周血T细胞亚群水平检测，采用流式细胞仪测定BALB／C小鼠外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4 +/CD8+ 的水平。
2. 结果
2．1 各组对FLV致小鼠脾肿大的抑制作用的比较
各药物组合物组的脾指数与模型组相比具有显著性差异(P<0.05)，显示药物组合物对FLV致小鼠脾肿大具有抑制作用，抑制率分别为：78.45%、73.56%、67.54%、65.80%。结果见表1。
表1各药物组合物对FLV感染小鼠脾肿大的抑制作用
①：P<0.05，② ：P<0.0l，与正常对照组比较；③ ：P<0.05，④ ：P<0.0l， 与模型组比较 (下同)。
2.2 各组细胞免疫功能的比较
各药物组合物组胸腺得到较好保护。未出现明显萎缩，可拮抗病毒感染后引起的胸腺指数的下降，显示了较好的免疫保护作用。外周血T淋巴细胞分析(TLC)显示，各药物组合物能明显提高外周血CD3+ 、CD4+ 、CD8+ T淋巴细胞水平，并能一定程度调整CD4+ /CD8+ 比值趋向正常。结果见表2。
表2各药物组合物对FLV感染小鼠的细胞免疫功能的影响
本实验结果显示，本发明各药物组合物口服可抑制FLV引起的脾肿大。脾脏为病毒的主要靶器官，FLV感染鼠的脾增重大小可定量反映病毒量，因此药物能否抑制病毒，脾指数为一个直观而可靠的指标。脾脏有丰富的淋巴细胞和巨噬细胞，它们都参与体液免疫反应，所以在实验中药物组合物可抑制脾肿大，显示其不仅具有体内抗FLV作用，还可能具有提高体液免疫功能的作用。从免疫学指标的实验结果来看，药物组合物对细胞免疫具有很好的上调作用，特别是在逆转录病毒造成的机体免疫功能低下时表现尤为显著，显示各药物组合物可增强机体细胞免疫功能，抑制FLV引起的免疫缺陷，是一个较好的免疫调节剂。

Claims (7)

1.一种治疗艾滋病的药物组合物，其特征在于制成该药物组合物的原料药的组成和重量份为：
穗花杉双黄酮2-15重量份  雪胆素甲2-15重量份  贝母甲素2-15重量份 原百部碱2-15重量份。
2.根据权利要求1所述：一种治疗艾滋病的药物组合物，其特征在于制成该药物组合物的原料药的组成和重量份为：
穗花杉双黄酮5重量份  雪胆素甲10重量份 贝母甲素8重量份 原百部碱12重量份。
3.根据权利要求1所述：一种治疗艾滋病的药物组合物，其特征在于制成该药物组合物的原料药的组成和重量份为：
穗花杉双黄酮15重量份  雪胆素甲2重量份 贝母甲素15重量份 原百部碱2重量份。
4.根据权利要求1所述：一种治疗艾滋病的药物组合物，其特征在于制成该药物组合物的原料药的组成和重量份为：
穗花杉双黄酮2重量份  雪胆素甲15重量份 贝母甲素2重量份 原百部碱15重量份。
5.根据权利要求1所述：一种治疗艾滋病的药物组合物，其特征在于制成该药物组合物的原料药的组成和重量份为：
穗花杉双黄酮6重量份  雪胆素甲7重量份  贝母甲素8重量份 原百部碱4重量份。
6.根据权利要求1所述的一种治疗艾滋病的药物组合物，可以采用制剂学的常规方法制备成片剂、胶囊剂、滴丸。
7.根据权利要求1所述的一种治疗艾滋病的药物组合物，其特征在于用于治疗艾滋病。
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