CN103585222B - 一种褐毛橐吾提取物在制备治疗艾滋病药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种褐毛橐吾提取物的新用途，该新用途是褐毛橐吾提取物在制备治疗艾滋病药物中的应用。所述褐毛橐吾提取物是按如下方法制备的：将褐毛橐吾提取后，通过两次大孔吸附树脂纯化得到。本发明所提供的褐毛橐吾提取物对制备治疗艾滋病药物具有重要意义。

Description

一种褐毛橐吾提取物在制备治疗艾滋病药物中的应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种中药材提取物在制备治疗艾滋病药物中的应用，具体是涉及一种褐毛橐吾提取物在制备治疗艾滋病药物中的应用。

背景技术

艾滋病是1981年发现的新病毒性传染病，中医过去对其未有记载。中医对艾滋病辨证，认为艾滋病属于疫病范畴。病因为疫毒热邪侵袭，正气虚弱而致。病机主要为卫外不固，阳气损伤，脏腑受累，引起肺虚脾虚肾虚，继发感染。热伤脉络，气血凝滞，形成癥积肿块肿瘤。

中医辨“证”：主要辨别邪正消长和虚证实证。艾滋病病毒为邪毒，邪毒入里而传变，与机体正气的邪正抗争的动态变化，为疾病的发展过程。感染早期以邪实为主，中期“因实致虚”，晚期“因虚致实”。艾滋病病情复制多变，艾滋病及其继发感染都可形成“病”，且有不同“型”和“期”。中医对艾滋病有辨证辨病，分型分期等不同诊治方案。

艾滋病的中医药治疗目前仍属于研究阶段，目前国内外尚未有公认疗效肯定被批准生产的抗艾滋病病毒中药或中药单体化合物。抗艾滋病病毒植物药和中药研究主要分3种途径，烟具获得的抗艾滋病病毒中药植物药及其成分，有些已在临床试用。

自艾滋病病毒发现以来，国际上用艾滋病病毒细胞培养和逆转录酶，蛋白酶和整合酶等体外实验方法，广泛筛选化合物的同时，也大量筛选植物和中草药提取物及其成分，也研究了一些中药复方制剂，发现在体外抑制艾滋病毒的有效药物，有的可抑制猴免疫缺陷病毒（SIV）感染猴的病毒血症。有些已在临床试用，尚未明确效果。

我国自1987年派中西医结合医疗队去非洲治疗艾滋病病人。国内在2002年以前，缺乏特效抗艾滋病病毒药物，中西医在临床根据中医理论，对艾滋病病人辨病与辨证相结合，以清热解毒，扶正固本，或凉血补肾，活血化瘀等治则，按中药性能，选择中药，处方治疗。通过临床实践，认为有些中药复方治疗艾滋病可改善症状，缓解病情。近年来对实验诊断确诊的艾滋病病人，采用中药治疗，设对照组，在治疗期间，定期检测血液病毒载量（HIV-RNA）和CD4细胞水平，评价效果。有报道可改善症状，提高免疫力，大多仍在临床验证中。进入临床的抗HIV单味中药或植物药及中药复方如下：

甘草甜素：甘草甜素（glycyrrhizin，GL）是中药甘草（GlycyrrhizaglabraL）提取的甘草皂苷，有广谱抗病毒作用，体外抑制HIV-1逆转录酶，在细胞培养内抑制HIV细胞融合，也抗流感病毒和SARS病毒，体内实验证明可保护流感病毒感染小鼠引起的肺炎死亡和肺病变；保护小鼠的CCl₄中毒性肝损伤；诱生γ-干扰素；有类激素作用。日本常用其静脉点滴治疗慢性乙型肝炎，也曾试用治疗艾滋病病人，可抑制血清HIV-1-P24抗原，升高CD4细胞。吕维柏教授1988-1992年在非洲坦桑尼亚应用甘草甜素口服制剂克艾可治疗艾滋病病人可改善症状，CD4细胞略有上升。其效果尚未被验证。

天花粉蛋白：天花粉蛋白（Trichosanthin，TCS，GLQ223，Q物质）为中药栝楼（Trichosantheskirilowii）属葫芦科（Cucurbitaceae），我国民间用于流产的中药复方的主要中药成分为栝楼，我国科学家分离鉴定器抗早孕和引产的有效成分为天花粉蛋白，分子量为27kD，其一、二级结构和三维结构已完全弄清，为抑制蛋白合成的植物毒蛋白，是单链的核糖体失活蛋白（RibosomeInactivatingProtein,RIP）。美国在筛选抗HIV-1药物时，发现其在淋巴细胞培养内抑制HIV-1细胞融合，其后发现在单核巨噬细胞培养内HIV-1的P24抗原和RNA，在3只猴艾滋病病毒（SIV）感染猴静脉注射可抑制血浆HIV-1。美国在林场使用静脉点滴治疗艾滋病病人，可抑制外周血HIV-1感染的T淋巴细胞和单核巨噬细胞内HIV-1-P24抗原，使CD4/CD8比例略有升高。由于可引起过敏性反应死亡，神经毒性的精神失常和肾毒性反应，临床实验已中止。近年来从天花粉中分离出其他蛋白TAP29，分子量在29kD，也有抑制HIV-1的作用，但毒性较小，未在临床试用。此外苦瓜（MOmordicacharantia）的苦瓜蛋白和商陆（Phytolaccaamericana）的商陆蛋白（Pokeweedprotein）等都有抑制HIV的作用。

金丝桃素：植物贯叶金丝桃（St.JohnWort,Hypericumperforatum）民间传统用其提取物治疗抑郁症，从花提出的活性成分是金丝桃素（hypericin），是芳香族多环二聚蒽醌类化合物，为抗抑郁症药物，已全合成。金丝桃素具有多种抗病毒活性，在细胞培养内抑制HIV，其作用机制为阻断病毒的脱衣，装配和释放，有杀病毒作用，可通过血脑屏障。在细胞培养内可抑制鼠白血病病毒繁殖。在体内可抑制鼠白血病病毒感染小鼠引起的脾肿大，也可抑制鸭乙型肝炎病毒感染鸭血请病毒DNA，并有广谱抗细菌活性。曾在临床I/II期试用治疗艾滋病患者，因有光敏感作用已停止试验。

右旋胡同素A：右旋胡同素A（+CalanolideA）是1992年报道从马来西亚热带雨林植物Calophyllumlanigerum中分离的天然化合物，鼠香豆素类化合物，抑制HIV-1逆转录酶，但对HIV-2无效。属于非核苷类HIV-1逆转录酶抑制剂，在细胞培养内多对多住临床分离的AZT敏感和耐药HIV-1有效，并与AZT,NVP有协同作用。在HIV空纤维管小鼠体内实验模型（HIVhollowfibermousemodel）中证明有抗艾滋病病毒作用，与AZT联合应用可增强药效。已全合成，进行了I-II其临床试验证明有抑制HIV-1感染的治疗效果，毒性小，副作用轻，有头痛和食欲不振等，与AZT联合用药有效。是目前唯一进入II期临床实验的单一植物成分，正在观察验证疗效中，尚未批准生产。

小柴胡汤：小柴胡汤（柴胡，人参，半夏，黄芩，甘草，生姜，大枣）

是张仲景伤寒论方。日本用其治疗乙型肝炎，发现其在细胞培养内抑制HIV。美国在临床用于治疗数例艾滋病病人，可降低血清P24抗原。我们证明其有抑制HIV-1逆转录酶和在细胞培养内抑制HIV-1的作用。分别研究其7种成分中药的效果，发现仅黄芩水提物及其成分黄芩苷（baicalin）有抑制HIV-1作用，在体外无细胞系统中抑制HIV-1逆转录酶，在人T细胞和外周血单核细胞培养内抑制HIV-1细胞病变，病毒荧光抗原和P24抗原，体内鼠白血病病毒感染小鼠口服可抑制脾肿大和血白细胞升高。日本Ono报道黄芩苷元（baicalien）抑制HIV-1逆转录酶。

中研I号：中研I号（主药有紫花地丁，天花粉等组成）商品名为：艾

克冲剂，以清热解毒为治则，由我国中药研究院组方1992-1993年在非洲坦桑尼亚对早中期艾滋病临床应用，认为有一定改善症状，提高免疫力的效果。实验室证明该药体外抑制HIV逆转录酶活性，体内对猴艾滋病毒感染猴实验治疗结果表明，能降低血浆病毒滴度，并且能提高CD4细胞数目及CD4/CD8比值和T,B淋巴细胞数值，诱生干扰素和产生免疫调节功能。曾在非洲和我国临床试用，尚未批准临床验证。

中研2号：中研2号（黄芪，人参，当归，枸杞和甘草等）是我国中医

研究院医疗队组方。1992年在非洲坦桑尼亚治疗艾滋病病人。1998-1999年在非洲专科门诊对29例艾滋病病人治疗，2/16例HIV病毒载量下降，CD48/29例CD4升高。2001-2002年在北京佑安医院治疗15例艾滋病病人，3/15例病毒载量下降，CD41/15例CD4升高。有改善症状的效果。实验证明该药在人体内对猴艾滋病毒感染猴实验治疗表明，用药4-12周能降低血浆病毒滴度，P27抗原，并且能提高CD4细胞数目，对感染猴淋巴细胞有激活作用。

　褐毛橐吾为菊科植物褐毛橐吾Ligμlariaachyrotricha（Diels）Ling或大黄橐吾L.duciformis(C.windl.)Hand.-Mazz.的干燥全草。6～7月采集全草，洗净，晒干。收载于《中华人民共和国卫生部药品标准藏药（第一册）》，标准编号：WS3-BC-0122-95。性凉，味甘、苦。具有清热解毒之功效。用于龙热病，脾热病，白喉，疫疠，疮疖，皮肤病。为我国藏蒙等少数民族地区的常用药物。但有关阿氏蒿的基础研究尚十分有限，使该药材的后续推广和应用受到限制。现代研究关于阿氏蒿的化学成分及药理作用鲜有报道。

国内专利检索结果，未见褐毛橐吾相关专利。

上述文献及专利等，尚未见褐毛橐吾或褐毛橐吾提取物用于制备治疗艾滋病药物的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种褐毛橐吾提取物在制备治疗艾滋病药物中的应用。

本发明是通过如下技术方案实现的：

本发明所用褐毛橐吾为菊科植物褐毛橐吾Ligμlariaachyrotricha（Diels）Ling或大黄橐吾L.duciformis(C.windl.)Hand.-Mazz.的干燥全草。

本发明一种褐毛橐吾提取物在制备治疗艾滋病药物中的应用，所述褐毛橐吾提取物的制备方法为:

（1）褐毛橐吾，用浓度50%-95%乙醇作为溶剂，在30℃-60℃温浸提取，提取次数为2-6次，每次提取时间为2-8小时，每次溶剂用量为褐毛橐吾重量的10-30倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度d=1.05-1.12，滤过，得药液A；

（2）将步骤（1）得到的药液A，通过非极性大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度60%-95%的乙醇溶液洗脱，收集不同浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得褐毛橐吾提取物A；

（3）将步骤（1）得到药渣A用水为溶剂，回流提取，提取次数为2-5次，每次提取时间为1-6小时，每次溶剂用量为褐毛橐吾重量的6-20倍，滤过，提取液浓缩至相对密度d=1.05-1.12，滤过，得药液B；

（4）将步骤（3）得到的药液B，通过极性大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度30%-80%的乙醇溶液洗脱，收集不同浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得褐毛橐吾提取物B；

（5）将上述褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B，其中一种或两种按一定比例混匀，即得本发明的褐毛橐吾提取物。

褐毛橐吾提取物的制备方法为:

（1）褐毛橐吾，用浓度50%-95%乙醇作为溶剂，在30℃-60℃温浸提取，提取次数为2-6次，每次提取时间为2-8小时，每次溶剂用量为褐毛橐吾重量的10-30倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度d=1.05-1.12，滤过，得药液A；

（2）将步骤（1）得到的药液A，通过非极性大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度60%-95%的乙醇溶液洗脱，收集不同浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得褐毛橐吾提取物A；

（3）将步骤（1）得到药渣A用水为溶剂，回流提取，提取次数为2-5次，每次提取时间为1-6小时，每次溶剂用量为褐毛橐吾重量的6-20倍，滤过，提取液浓缩至相对密度d=1.05-1.12，滤过，得药液B；

（4）将步骤（3）得到的药液B，通过极性大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度30%-80%的乙醇溶液洗脱，收集不同浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得褐毛橐吾提取物B；

（5）将上述褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B混匀，即得本发明的褐毛橐吾提取物。

优选的褐毛橐吾提取物的制备方法为:

（1）褐毛橐吾，用浓度70%乙醇作为溶剂，在50℃温浸提取，提取次数为3次，每次提取时间为4小时，每次溶剂用量为褐毛橐吾重量的20倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度d=1.10，滤过，得药液A；

（2）将步骤（1）得到的药液A，通过D101大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度60%的乙醇溶液依次洗脱，收集60%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得褐毛橐吾提取物A；

（3）将步骤（1）得到药渣A用水为溶剂，回流提取，提取次数为3次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为褐毛橐吾重量的10倍，滤过，提取液浓缩至相对密度d=1.11，滤过，得药液B；

（4）将步骤（3）得到的药液B，通过DM130大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度70%的乙醇溶液洗脱，收集70%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得褐毛橐吾提取物B；

（5）将上述褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B混匀，即得本发明的褐毛橐吾提取物。

本发明的褐毛橐吾提取物的制备方法，其特征在于：所采用的非极性大孔吸附树脂为AB-8大孔吸附树脂、D101大孔吸附树脂；所采用的极性大孔吸附树脂为DM130大孔吸附树脂、LSA-40大孔吸附树脂。

本发明的褐毛橐吾提取物用于制备治疗艾滋病药物。

本发明的褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B在制备治疗艾滋病药物中的应用。

本发明的褐毛橐吾提取物与化学药或中药或天然药物组成的治疗艾滋病药物。

本发明的褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B与化学药或中药或天然药物组成的治疗艾滋病药物。

本发明的褐毛橐吾提取物，通过加入药剂学允许的各种辅料，制成药剂学上的片剂、颗粒剂、胶囊等口服剂型。

本发明首次探索研究以豆科植物褐毛橐吾MucunabirdwoodianaTutcher的干燥种子为原料提取制备治疗艾滋病提取物。本实验研究表明，褐毛橐吾各提取物体外对流感病毒、副流感病毒I型(HVJ)、呼吸道合胞病毒(RSV)、柯萨奇B族病毒4型(C_oxB₄)、腺病毒3型((Ard₃)及鼻病毒的细胞病变较病毒对照组均有所减轻。体明对小鼠流感性肺炎有明显抑制作用，对流感至小鼠死亡有明显的保护作用，表明褐毛橐吾各提取物有较好的抗病毒作用。临床观察试验结果表明，服用褐毛橐吾提取物治疗的15例艾滋病患者，明显改善症状、修复肝肾功能，提高、稳定或延CD₄下降，抑制病毒复制等有明显的疗效。

具体实施方式

下面通过具体实验例和实施例对一种褐毛橐吾提取物在制备治疗艾滋病药物中的应用做进一步说明，但不限于本发明。

实施例1：褐毛橐吾提取物的制备

（1）褐毛橐吾30kg，用浓度70%乙醇作为溶剂，在50℃温浸提取，提取次数为3次，每次提取时间为4小时，每次溶剂用量为褐毛橐吾重量的20倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度d=1.10，滤过，得药液A；

（2）将步骤（1）得到的药液A，通过D101大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度60%的乙醇溶液依次洗脱，收集60%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得褐毛橐吾提取物A；

（3）将步骤（1）得到药渣A用水为溶剂，回流提取，提取次数为3次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为褐毛橐吾重量的10倍，滤过，提取液浓缩至相对密度d=1.11，滤过，得药液B；

（4）将步骤（3）得到的药液B，通过DM130大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度70%的乙醇溶液洗脱，收集70%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得褐毛橐吾提取物B；

（5）将上述褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B混匀，即得本发明的褐毛橐吾提取物。

实施例2：褐毛橐吾提取物的制备

（1）褐毛橐吾23kg，用浓度50%乙醇作为溶剂，在60℃温浸提取，提取次数为6次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为褐毛橐吾重量的10倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度d=1.12，滤过，得药液A；

（2）将步骤（1）得到的药液A，通过AB-8非极性大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度60%的乙醇溶液洗脱，收集60%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得褐毛橐吾提取物A；

（3）将步骤（1）得到药渣A用水为溶剂，回流提取，提取次数为2次，每次提取时间为6小时，每次溶剂用量为褐毛橐吾重量的20倍，滤过，提取液浓缩至相对密度d=1.05，滤过，得药液B；

（4）将步骤（3）得到的药液B，通过LSA-40极性大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度30%的乙醇溶液洗脱，收集30%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得褐毛橐吾提取物B；

（5）将上述褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B混匀，即得本发明的褐毛橐吾提取物。

实施例3：褐毛橐吾提取物的制备

（1）褐毛橐吾16kg，用浓度95%乙醇作为溶剂，在30℃温浸提取，提取次数为2次，每次提取时间为8小时，每次溶剂用量为褐毛橐吾重量的30倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度d=1.05，滤过，得药液A；

（2）将步骤（1）得到的药液A，通过D101非极性大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度95%的乙醇溶液洗脱，收集95%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得褐毛橐吾提取物A；

（3）将步骤（1）得到药渣A用水为溶剂，回流提取，提取次数为5次，每次提取时间为1小时，每次溶剂用量为褐毛橐吾重量的6倍，滤过，提取液浓缩至相对密度d=1.12，滤过，得药液B；

（4）将步骤（3）得到的药液B，通过LSA-40极性大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度80%的乙醇溶液洗脱，收集80%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得褐毛橐吾提取物B；

（5）将上述褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B混匀，即得本发明的褐毛橐吾提取物。

实施例4：褐毛橐吾提取物片的制备

取实施例1褐毛橐吾提取物245g，加入淀粉70g，混匀，制粒，干燥，过筛，加微晶纤维素11.5g，硬脂酸镁2.5g，混匀，压制成1000片,即得褐毛橐吾提取物片。

实施例5：褐毛橐吾提取物颗粒的制备

取实施例2褐毛橐吾提取物245g，加入糊精105g，混匀，制粒，干燥，整粒，即得褐毛橐吾提取物颗粒。

实施例6：褐毛橐吾提取物胶囊的制备

取实施例3褐毛橐吾提取物255g，加入淀粉85g，制粒，干燥，整粒，装胶囊1000粒，即得褐毛橐吾提取物胶囊。

实验例l：褐毛橐吾各提取物的抗病毒作用

试验材料:褐毛橐吾提取物、褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B（按本发明实施例1方法制备得到，批号分别为20111102、20111103、20111104）；病毒唑(三氮唑核苷)由湖北省医药工业研究所生产，批号:20110503；双黄连胶囊由北京京海药业有限责任公司生产，批号:20110701；流感病毒甲3型、柯萨奇B族病4型(C_oxB₄)、副流感病毒I型(HVJ)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒3型(Ard₃)、鼻病毒14型和流感病毒亚甲型鼠肺适应株FM1，分别购自中国预防医学科学院病毒学研究所及儿科研究所;人喉癌传代细胞HEP-2株，购自卫生部药品生物制品检定所；含10%小牛血清、0.29mg谷氨酞胺/m1，100μl青、链毒素的Eagle'MEM；细胞维持液，除所含小牛血清为2%外，其他含量均同培养液。昆明种小鼠，由山东省实验动物中心提供。

实验方法

1.体外抗病毒作用:对Hep-2培养细胞的毒性试验:将药液用Eagle's培养作1:20-1:1280倍比稀释，加到已长成单层的HEP-2细胞培养板中，100μl/孔，每个稀释度药液做3个复孔，同时设正常细胞对照。将培养板置37℃，5%C0₂培养箱中培养4天，每日倒置显微镜下观察细胞生长情况，确定细胞不出现明显退变的最低释稀倍数，实验时顺延做到最小有效浓度(即最大稀释倍数)。按Reed-Muench法计算50%毒性浓度(TC₅₀)和最大无毒浓度(TC₀)，结果见表1。

表1对培养细胞的TC₀TC₅₀(mg/ml)。

2、体内抗病毒作用:对小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用:取小鼠70只，按体重随机分成7组，分别为正常动物对照组、病毒感染对照组，试验药物3组（褐毛橐吾提取物、褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B）、病毒唑组、双黄连胶囊组。除正常对照组外，将小鼠用乙醚轻度麻醉，以15个LD50流感病毒液滴鼻感染，每只0.05ml。从感染前一天开始灌胃给药，每天3次，每次0.5ml，连续5天，对照组在同等条件下蒸馏水灌胃。第6天称取小鼠体重后解剖，肉眼观察肺部病变，记录肺部肝样实变的程度，摘取全肺称重，逐个计算肺指数值，并求出肺指数抑制率。结果：褐毛橐吾各提取物对流感病毒引起的小鼠肺炎均有明显的抑制作用，结果见表2。

表2对小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用

注:与正常对照组比较:^##P<0.01；与病毒对照组比较:**P<0.01，*P<0.05。

3、对流感病毒所致小鼠死亡的保护作用：取小鼠120只，按体重随机分成6组。分别为试验药物3组（褐毛橐吾提取物、褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B）、病毒唑组、双黄连组及病毒感染对照组。各组小鼠用乙醚轻度麻醉后，以2个LD50流感病毒液滴鼻感染，每只0.05ml。从感染前一天开始灌胃给药，每天3次，每次0.5ml，连续7天。累计感染后小鼠的死亡数，计算死亡率、保护率及生命延长率，结果见表3、4。

表3对流感病毒致小鼠死亡的保护作用

注:与感染对照组比较:^**P<0.0l，^*P<0.05。

表4对流感病毒致小鼠死亡的保护作用

注:与感染对照组比较:^**P<0.0l，^*P<0.05。

表3，表4结果显示:小鼠感染病毒后14天内，褐毛橐吾各提取物组小鼠的死亡数较感染对照组明显减少，小鼠平均存活天数较感染对照组明显延长，表明试验药物在此剂量时对流感病毒感染致小鼠死亡有一定保护作用。

在实验研究中发现褐毛橐吾各提取物体外对流感病毒、副流感病毒I型(HVJ)、呼吸道合胞病毒(RSV)、柯萨奇B族病毒4型(C_oxB₄)、腺病毒3型((Ard₃)及鼻病毒的细胞病变较病毒对照组均有所减轻。体内对小鼠流感性肺炎有明显抑制作用，对流感至小鼠死亡有明显的保护作用，表明褐毛橐吾各提取物有较好的抗病毒作用，故有较好的开发研制的基础。

实验例2：褐毛橐吾提取物治疗艾滋病的临床疗效观察:

一般资料:15例病例均经医院诊断为艾滋病患者，自愿接受临床研究；能够坚持接受评估检测及治疗；年龄21-60岁；男13例，女2例；平均年龄34岁。所有病例从未接受过抗病毒药物治疗。

诊断标准:所有病例均符合HIV/AIDS诊断标准。

治疗方法:所有病例均口服本发明褐毛橐吾提取物，一次1g，一日3次，30天为一疗程。

临床疗效评定标准:根据国家中医药管理局制定的《中医药治疗艾滋病试点项目临床技术方案》，疗效评价标准如下:有效:临床症状体征改善明显，总积分下降≥1/3；CD₄升高≥30%或50μl；病毒载量降低>0.5log/ml；稳定:临床症状体征有所改善，总积分下降<1/3；CD₄升高或下降<30%或50μl；病毒载量上升或下降<0.5log/ml。无效:临床症状体征无改善或加重，总积分不下降或增加；CD₄下降≥30%或50μl；病毒载量水平持续上升，拷贝数上升>0.5log/ml。

临床观累结果:治疗前后症状体征变化:有效12例,稳定:2例，无效:1例。

治疗前后CD₄细胞变化:有效10例,稳定:3例，无效:2例。

治疗前后病毒载量变化:有效11例，稳定:2例，无效:2例。

临床观察结果表明:服用褐毛橐吾提取物治疗的15例艾滋病患者，明显改善症状、修复肝肾功能，提高、稳定或延CD₄下降，抑制病毒复制等有明显的疗效。

Claims (8)

1.一种褐毛橐吾提取物在制备治疗艾滋病药物中的应用，所述褐毛橐吾提取物的制备方法为:

（1）褐毛橐吾，用浓度50%-95%乙醇作为溶剂，在30℃-60℃温浸提取，提取次数为2-6次，每次提取时间为2-8小时，每次溶剂用量为褐毛橐吾重量的10-30倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度1.05-1.12，滤过，得药液A；

（2）将步骤（1）得到的药液A，通过非极性大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度60%-95%的乙醇溶液洗脱，收集不同浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得褐毛橐吾提取物A；

（3）将步骤（1）得到药渣A用水为溶剂，回流提取，提取次数为2-5次，每次提取时间为1-6小时，每次溶剂用量为褐毛橐吾重量的6-20倍，滤过，提取液浓缩至相对密度1.05-1.12，滤过，得药液B；

（4）将步骤（3）得到的药液B，通过极性大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度30%-80%的乙醇溶液洗脱，收集不同浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得褐毛橐吾提取物B；

（5）将上述褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B，其中一种或两种按一定比例混匀，即得褐毛橐吾提取物。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述褐毛橐吾提取物是按如下方法制备得到:

（1）褐毛橐吾，用浓度50%-95%乙醇作为溶剂，在30℃-60℃温浸提取，提取次数为2-6次，每次提取时间为2-8小时，每次溶剂用量为褐毛橐吾重量的10-30倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度1.05-1.12，滤过，得药液A；

（2）将步骤（1）得到的药液A，通过非极性大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度60%-95%的乙醇溶液洗脱，收集不同浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得褐毛橐吾提取物A；

（3）将步骤（1）得到药渣A用水为溶剂，回流提取，提取次数为2-5次，每次提取时间为1-6小时，每次溶剂用量为褐毛橐吾重量的6-20倍，滤过，提取液浓缩至相对密度1.05-1.12，滤过，得药液B；

（4）将步骤（3）得到的药液B，通过极性大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度30%-80%的乙醇溶液洗脱，收集不同浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得褐毛橐吾提取物B；

（5）将上述褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B混匀，即得褐毛橐吾提取物。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述褐毛橐吾提取物是按如下方法制备得到:

（1）褐毛橐吾，用浓度70%乙醇作为溶剂，在50℃温浸提取，提取次数为3次，每次提取时间为4小时，每次溶剂用量为褐毛橐吾重量的20倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度1.10，滤过，得药液A；

（2）将步骤（1）得到的药液A，通过D101大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度60%的乙醇溶液依次洗脱，收集60%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得褐毛橐吾提取物A；

（3）将步骤（1）得到药渣A用水为溶剂，回流提取，提取次数为3次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为褐毛橐吾重量的10倍，滤过，提取液浓缩至相对密度1.11，滤过，得药液B；

（4）将步骤（3）得到的药液B，通过DM130大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度70%的乙醇溶液洗脱，收集70%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得褐毛橐吾提取物B；

（5）将上述褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B混匀，即得褐毛橐吾提取物。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的褐毛橐吾提取物的制备方法所采用的非极性大孔吸附树脂为AB-8大孔吸附树脂、D101大孔吸附树脂；所采用的极性大孔吸附树脂为DM130大孔吸附树脂、LSA-40大孔吸附树脂。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的褐毛橐吾提取物与化学药或天然药物组成的治疗艾滋病药物。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B在制备治疗艾滋病药物中的应用。

7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B与化学药或天然药物组成的治疗艾滋病药物。

8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的褐毛橐吾提取物通过加入药剂学允许的各种辅料制成药剂学上口服的片剂、颗粒剂或胶囊。