CN103837676A - 一种金属纳米岛载体及其制备方法和在免疫检测中的应用 - Google Patents

一种金属纳米岛载体及其制备方法和在免疫检测中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN103837676A
CN103837676A CN201410106206.2A CN201410106206A CN103837676A CN 103837676 A CN103837676 A CN 103837676A CN 201410106206 A CN201410106206 A CN 201410106206A CN 103837676 A CN103837676 A CN 103837676A
Authority
CN
China
Prior art keywords
carrier
metal nano
nano island
island
biochip
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201410106206.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103837676B (zh
Inventor
刘开
袁超
刘庄
赵信博
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
SUZHOU NADA BIOTECH Co Ltd
Original Assignee
SUZHOU NADA BIOTECH Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by SUZHOU NADA BIOTECH Co Ltd filed Critical SUZHOU NADA BIOTECH Co Ltd
Priority to CN201410106206.2A priority Critical patent/CN103837676B/zh
Publication of CN103837676A publication Critical patent/CN103837676A/zh
Priority to PCT/CN2014/085081 priority patent/WO2015139422A1/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103837676B publication Critical patent/CN103837676B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/551—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being inorganic
    • G01N33/553—Metal or metal coated
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y15/00—Nanotechnology for interacting, sensing or actuating, e.g. quantum dots as markers in protein assays or molecular motors

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
  • Powder Metallurgy (AREA)

Abstract

一种金属纳米岛载体及其制备方法和在免疫检测中的应用，涉及金属纳米岛载体及其制备方法和在免疫检测中的应用的领域。本发明解决了现有荧光免疫分析中背景噪声大、检测灵敏度低的问题。一种金属纳米岛载体是在载体材料表面形成金属纳米岛而得到的。制备方法：一、在载体材料表面吸附金纳米种子；二、配置生长金属纳米岛反应液；三、在载体材料表面生长金属纳米岛；四、清洗、干燥。金属纳米岛载体在免疫检测中的应用，使用金属纳米岛载体作为捕获分子的修饰载体制成生物芯片，进行荧光扫描和数据分析，进而完成免疫检测。本发明具有高灵敏度、大大降低背景荧光噪声，实现了fm级的超灵敏检测。本发明适用于功能材料、生物芯片和免疫检测领域。

Description

一种金属纳米岛载体及其制备方法和在免疫检测中的应用
技术领域：
本发明涉及金属纳米岛载体及其制备方法和在免疫检测中的应用的领域。
背景技术：
体液免疫检查在在生物医学研究和疾病早期诊断中具有极为重要的研究价值，尤其是实现对心脑血管、癌症等一系列重大疾病的早期检测和筛查的关键所在。然而要实现对这些体液中较低浓度目标分子的分析检测，现有的免疫检测技术如放射免疫分析(RIA)、酶联免疫吸附分析(ELISA)、荧光免疫分析(FIA)、胶体金免疫层析技术(GICA)还存在着灵敏度低、特异性差等一些问题。尤其是荧光免疫检测技术，虽然理论上能够实现对单分子水平的标记，但由于受到生物分子背荧光、激光散射噪声等影响而严重降低了其检测灵敏度(通常只能到几十pg数量级)。
发明内容：
本发明是要解决现有的荧光免疫分析中背景噪声大、检测灵敏度低的问题，而提供了一种金属纳米岛载体及其制备方法和在免疫检测中的应用。
一种金属纳米岛载体，是在载体材料表面形成金属纳米岛而得到的，所述的金属纳米岛是分立的，所述的金属纳米岛的尺寸为10～500nm，所述的金属纳米岛之间的间隙为5～200nm。
所述的载体材料为固相材料或悬浮材料。
所述的固相材料为二维平面结构。
所述的固相材料可以为玻片、硅片、石英、聚偏二氟乙烯膜或硝酸纤维素膜。
所述的悬浮材料可以为玻璃微珠、磁珠、聚苯乙烯微球、聚甲基丙烯酸甲酯微球、聚苯乙烯磁性微球或聚甲基丙烯酸甲酯磁性微球。
所述的金属可以为银、金-银合金或银／金核壳结构。
制备金属纳米岛载体的方法，具体是按照以下步骤进行的：
一、在载体材料表面吸附一层金纳米种子，得到了表面吸附金纳米种子的载体材料；
二、配置生长金属纳米岛的反应溶液：将还原剂加入到含有金属离子的溶液中，混合均匀；其中，所述的还原剂与含有的金属离子的摩尔比为(0.5～2)∶1；所述的金属离子的溶液的浓度为0.1～5mM；
三、将步骤一中得到的表面吸附一层金纳米种子的载体材料放入步骤二中得到的生长金属纳米岛的反应溶液中，在18～30℃下振荡反应2～60min；
四、将步骤三中反应完成的载体材料取出，用水清洗，干燥，即得到金属纳米岛载体。
所述的步骤一中的金纳米种子是通过化学还原法还原Au3+得到的，然后利用物理吸附或化学偶联相互作用结合到载体材料表面的。
所述的步骤一中的载体材料表面吸附的金纳米种子的粒径为1～20nm。
所述的步骤一中的载体材料为固相材料或悬浮材料。
所述的固相材料为二维平面结构。
所述的固相材料可以为玻片、硅片、石英、聚偏二氟乙烯膜或硝酸纤维素膜。
所述的悬浮材料可以为玻璃微珠、磁珠、聚苯乙烯微球、聚甲基丙烯酸甲酯微球、聚苯乙烯磁性微球或聚甲基丙烯酸甲酯磁性微球。
所述的金属可以为银、金-银合金或银／金核壳结构。
所述的步骤二中的还原剂为NaBH4，NH2OH，N2H4，CH2O或C6H12O6。
所述的金属离子溶液为Ag+溶液或Au3+溶液中的一种或两种的混合溶液。
所述的步骤二中的还原剂与含有的金属离子的摩尔比为(0.7～1.5)∶1。
所述的步骤二中的还原剂与含有的金属离子的摩尔比为1：1。
所述的步骤二中的金属离子的溶液的浓度为0.3～5mM。
所述的步骤二中的金属离子的溶液的浓度为0.5～1mM。
所述的步骤四中的水为去离子水。
金属纳米岛载体在免疫检测中的应用，是生物芯片中的捕获分子捕获相应的物质，进行荧光扫描和数据分析，进而完成免疫检测，其中使用所述金属纳米岛载体作为捕获分子的修饰载体制成生物芯片。
所述的金属纳米岛载体表面修饰肿瘤标志物抗体分子制备成生物芯片实现在肿瘤的早期检测中的应用。
所述的金属纳米岛载体表面修饰自体免疫疾病相关的抗原、抗体分子制备成生物芯片实现在自体免疫疾病检测中的应用。
所述的金属纳米岛载体表面修饰乙肝抗体分子、流感病毒DNS序列、结合病抗体、疟原虫抗原(或抗体)、大肠杆菌抗体制备成生物芯片实现在传染性疾病的检测中的应用。
所述的金属纳米岛载体表面修饰白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子超家族、集落刺激因子、趋化因子或生长因子的单克隆抗体制备成生物芯片实现在细胞因子的检测中的应用。
所述的金属纳米岛载体表面修饰对不同疾病的单克隆抗体制备成生物芯片实现在对捕获的目标细胞分泌物进行Elispot检测中的应用。
所述的生物芯片为微阵列生物芯片或悬浮式生物芯片。
本发明的优点：一、本发明是基于湿化学合成方法，通过金纳米种子诱导的原位还原生长过程在载体材料表面实现了不同种类金属纳米岛功能载体的制备，并进一步利用制备的金属纳米岛载体表面等离子体共振效应进行高灵敏度的免疫检测分析，尤其是利用近红外荧光增强技术大大降低了背景荧光噪声，实现了fm级的超灵敏检测；
二、本发明是通过控制金属的种类以及纳米岛的尺寸、形貌、间距等来实现调控金属纳米岛载体的等离子体共振吸收峰的连续可调，涵盖了从可见光到近红外区域(420～1700nm)的一系列波段，满足免疫检测的需求。
附图说明：
图1为试验一的载玻片银纳米岛载体的扫描电子显微镜图；
图2为试验三的载玻片银／金核壳结构纳米岛载体的扫描电子显微镜图；
图3为试验一的载玻片银纳米岛载体和试验三的载玻片银／金核壳结构纳米岛载体的等离子吸收光谱曲线对比图；
图4为普通玻璃、试验一的载玻片银纳米岛载体和试验三的载玻片银／金核壳结构纳米岛载体的荧光扫描对比图；
图5为普通玻璃和试验一的载玻片银纳米岛载体表面荧光强度的对比图；
图6为试验五中步骤一得到的聚苯乙烯微球的扫描电子显微镜图；
图7为试验六中步骤一得到的磁性聚苯乙烯微球和试验六中步骤五得到的磁性聚苯乙烯微球金纳米岛载体在磁铁富集作用前后的效果对比图；
图8为试验六得到的磁性聚苯乙烯微球金纳米岛载体的紫外吸收光谱图。
具体实施方式：
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。
具体实施方式一：本实施方式是一种金属纳米岛载体，是在载体材料表面形成金属纳米岛而得到的，所述的金属纳米岛是分立的，所述的金属纳米岛的尺寸为10～500nm，所述的金属纳米岛之间的间隙为5～200nm。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：所述的载体材料为固相材料或悬浮材料。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二的不同点是：所述的固相材料为二维平面结构。其它与具体实施方式一或二相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一的不同点是：所述的固相材料可以为玻片、硅片、石英、聚偏二氟乙烯膜或硝酸纤维素膜。其它与具体实施方式一至三相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一的不同点是：所述的悬浮材料可以为玻璃微珠、磁珠、聚苯乙烯微球、聚甲基丙烯酸甲酯微球、聚苯乙烯磁性微球或聚甲基丙烯酸甲酯磁性微球。其它与具体实施方式一至四相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一的不同点是：所述的金属可以为银、金-银合金或银／金核壳结构。其它与具体实施方式一至五相同。
具体实施方式七：本实施方式是制备金属纳米岛载体的方法，具体是按照以下步骤进行的：
一、在载体材料表面吸附一层金纳米种子，得到了表面吸附金纳米种子的载体材料；
二、配置生长金属纳米岛的反应溶液：将还原剂加入到含有金属离子的溶液中，混合均匀；其中，所述的还原剂与含有的金属离子的摩尔比为(0.5～2)∶1；所述的金属离子的溶液的浓度为0.1～5mM；
三、将步骤一中得到的表面吸附一层金纳米种子的载体材料放入步骤二中得到的生长金属纳米岛的反应溶液中，在18～30℃下振荡反应2～60min；
四、将步骤三中反应完成的载体材料取出，用水清洗，干燥，即得到金属纳米岛载体。
所述的金属纳米岛功能载体是通过金纳米种子诱导的原位化学还原生长实现的。
所述的单位mM为mmol／L。
具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式七的不同点是：所述的步骤一中的金纳米种子是通过化学还原法还原Au3+得到的，然后利用物理吸附或化学偶联相互作用结合到载体材料表面的。其它与具体实施方式七相同。
所述的步骤一中的操作方法，具体按照以下步骤完成的：
a、将1ml的THPC还原剂加入到含有1mM NaOH的水溶液中，剧烈搅拌30min，待用；b、向步骤a中迅速注入1mL的AuHCl4溶液，室温下剧烈搅拌反应30min；c、将得到的金纳米种子溶液置于室温下避光熟化24h；d、将载体材料放入步骤c得到的金纳米种子溶液中，室温下反应10～300min，即得到表面吸附金纳米种子的载体材料
具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式七至八之一的不同点是：所述的步骤一中的载体材料表面吸附的金纳米种子的粒径为1～20nm。其它与具体实施方式七至八相同。
具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式七至九之一的不同点是：所述的步骤一中的载体材料为固相材料或悬浮材料。其它与具体实施方式七至九相同。
具体实施方式十一：本实施方式与具体实施方式七至十之一的不同点是：所述的固相材料为二维平面结构。其它与具体实施方式七至十相同。
具体实施方式十二：本实施方式与具体实施方式七至十一之一的不同点是：所述的固相材料可以为玻片、硅片、石英、聚偏二氟乙烯膜或硝酸纤维素膜。其它与具体实施方式七至十一相同。
具体实施方式十三：本实施方式与具体实施方式七至十二之一的不同点是：所述的悬浮材料可以为玻璃微珠、磁珠、聚苯乙烯微球、聚甲基丙烯酸甲酯微球、聚苯乙烯磁性微球或聚甲基丙烯酸甲酯磁性微球。其它与具体实施方式七至十二相同。
具体实施方式十四：本实施方式与具体实施方式七至十三之一的不同点是：所述的金属可以为银、金-银合金或银／金核壳结构。其它与具体实施方式七至十三相同。
具体实施方式十五：本实施方式与具体实施方式七至十四之一的不同点是：所述的步骤二中的还原剂为NaBH4，NH2OH，N2H4，CH2O或C6H12O6。其它与具体实施方式七至十四相同。
具体实施方式十六：本实施方式与具体实施方式七至十五之一的不同点是：所述的金属离子溶液为Ag+溶液或Au3+溶液中的一种或两种的混合溶液。其它与具体实施方式七至十五相同。
具体实施方式十七：本实施方式与具体实施方式七至十六之一的不同点是：所述的步骤二中的还原剂与含有的金属离子的摩尔比为(0.7～1.5)∶1其它与具体实施方式七至十六相同。
具体实施方式十八：本实施方式与具体实施方式七至十七之一的不同点是：所述的步骤二中的还原剂与含有的金属离子的摩尔比为1∶1。其它与具体实施方式七至十七相同。
具体实施方式十九：本实施方式与具体实施方式七至十八之一的不同点是：所述的步骤二中的金属离子的溶液的浓度为0.3～5mM。其它与具体实施方式七至十八相同。
具体实施方式二十：本实施方式与具体实施方式七至十九之一的不同点是：所述的步骤二中的金属离子的溶液的浓度为0.5～1mM。其它与具体实施方式七至十九相同。
具体实施方式二十一：本实施方式与具体实施方式七至二十之一的不同点是：所述的步骤四中的水为去离子水。其它与具体实施方式七至二十相同。
具体实施方式二十二：本实施方式是一种金属纳米岛载体在免疫检测中的应用，是生物芯片中的捕获分子捕获相应的物质，进行荧光扫描和数据分析，进而完成免疫检测，其中使用所述金属纳米岛载体作为捕获分子的修饰载体制成生物芯片。
具体实施方式二十三：本实施方式与具体实施方式二十二的不同点是：所述的金属纳米岛载体表面修饰肿瘤标志物抗体分子制备成生物芯片实现在肿瘤的早期检测中的应用。其它与具体实施方式二十二相同。
具体实施方式二十四：本实施方式与具体实施方式二十二或二十三的不同点是：所述的金属纳米岛载体表面修饰自体免疫疾病相关的抗原、抗体分子制备成生物芯片实现在自体免疫疾病检测中的应用。其它与具体实施方式二十二或二十三相同。
具体实施方式二十五：本实施方式与具体实施方式二十二至二十四之一的不同点是：所述的金属纳米岛载体表面修饰乙肝抗体分子、流感病毒DNS序列、结合病抗体、疟原虫抗原(或抗体)、大肠杆菌抗体制备成生物芯片实现在传染性疾病的检测中的应用。其它与具体实施方式二十二至二十五相同。
具体实施方式二十六：本实施方式与具体实施方式二十二至二十五之一的不同点是：所述的金属纳米岛载体表面修饰白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子超家族、集落刺激因子、趋化因子或生长因子的单克隆抗体制备成生物芯片实现在细胞因子的检测中的应用。其它与具体实施方式二十二至二十五相同。
具体实施方式二十七：本实施方式与具体实施方式二十二至二十六之一的不同点是：所述的金属纳米岛载体表面修饰对不同疾病的单克隆抗体制备成生物芯片实现在对捕获的目标细胞分泌物进行Elispot检测中的应用。其它与具体实施方式二十二至二十六相同。
具体实施方式二十八：本实施方式与具体实施方式二十二至二十七之一的不同点是：所述的生物芯片为微阵列生物芯片或悬浮式生物芯片。其它与具体实施方式二十二至二十七相同。
采用下述试验验证本发明的效果：
试验一：银纳米岛载体，在载玻片表面形成银纳米岛而得到的，所述的银纳米岛是分立的，所述的银纳米岛的平均尺寸在100～500nm之间，所述的银纳米岛之间的间隙为30～100nm。
银纳米岛载体的制备方法，具体是按照以下步骤进行的：
一、在载玻片表面吸附一层金纳米种子，得到了表面吸附金纳米种子的载玻片；
二、配置生长银纳米岛的反应溶液：将CH2O加入到AgNO3溶液中，混合均匀；其中，所述的CH2O与AgNO3的摩尔比为0.5∶1；所述的AgNO3溶液的摩尔浓度为1mM；
三、将步骤一中得到的表面吸附一层金纳米种子的载玻片放入步骤二中得到的生长银纳米岛的反应溶液中，在20℃下反应30min；
四、将步骤三中反应完成的载玻片取出，用水清洗，干燥，即得到银纳米岛载体。
对试验一得到的银纳米岛载体进行扫描电子显微镜测试，得到图1。图1为试验一的银纳米岛载体的扫描电子显微镜图。从图1中，可以看出银纳米岛的平均尺寸在100～500nm之间，银纳米岛之间的间隙为30～100nm。
试验二：金-银合金纳米岛载体，在载玻片表面形成金-银合金纳米岛而得到的，所述的金-银合金纳米岛是分立的，所述的金-银合金纳米岛的平均尺寸在100～500nm之间，所述的金-银合金纳米岛之间的间隙为30～100nm。
金-银合金纳米岛载体的制备方法，具体是按照以下步骤进行的：
一、在载玻片表面吸附一层金纳米种子，得到了表面吸附金纳米种子的载玻片；
二、配置生长金-银合金纳米岛的反应溶液：将NH2OH加入到AgNO3溶液和AuHCl4溶液的混合溶液中，混合均匀；其中，所述的NH2OH与AgNO3的摩尔比为2∶1；所述的AuHCl4与AgNO3的摩尔比为1∶1；所述的AgNO3溶液的摩尔浓度为0.5mM；所述的AuHCl4溶液的摩尔浓度为0.5mM；
三、将步骤一中得到的表面吸附一层金纳米种子的载玻片放入步骤二中得到的生长金-银合金纳米岛的反应溶液中，在20℃下震荡反应30分钟；
四、将步骤三中反应完成的载玻片取出，用水清洗，干燥，即得到金-银合金纳米岛载体。
试验三：银／金核壳结构纳米岛载体
银／金核壳结构纳米岛载体，在载玻片表面形成银／金核壳结构纳米岛而得到的，所述的银／金核壳结构纳米岛是分立的，所述的银／金核壳结构纳米岛的平均尺寸在100～500nm之间，所述的银／金核壳结构纳米岛之间的间隙为30～100nm。
银／金核壳结构纳米岛载体的制备方法，具体是按照以下步骤进行的：
一、在载玻片表面吸附一层金纳米种子，得到了表面吸附金纳米种子的载玻片；
二、配置生长银纳米岛的反应溶液：将CH2O加入到AgNO3溶液中，混合均匀；其中，所述的CH2O与AgNO3的摩尔比为1∶1；所述的AgNO3溶液的摩尔浓度为1mM；
三、将步骤一中得到的表面吸附一层金纳米种子的载玻片放入步骤二中得到的生长银纳米岛的反应溶液中，在20℃下反应30min；
四、将步骤三中得到的载玻片放入AuHCl4溶液中，继续反应1小时，使银纳米岛表面包覆一层金纳米壳层；所述的AuHCl4溶液的摩尔浓度为10μM；
五、将步骤四中反应完成的载玻片取出，用水清洗，干燥，即得到银／金核壳结构纳米岛载体。
对试验三得到的银纳米岛载体进行扫描电子显微镜测试，得到图2。图2为试验三的银／金核壳结构纳米岛载体的扫描电子显微镜图。从图2中，可以看出银／金核壳结构纳米岛的平均尺寸在100～500nm之间，银纳米岛之间的间隙为30～100nm。
对试验一得到的银纳米岛载体和试验三得到的银／金核壳结构纳米岛载体进行等离子吸收光谱测试，得到图3。图3是等离子吸收光谱曲线；其中，实线为银纳米岛载体等离子吸收光谱曲线，虚线为银／金核壳结构纳米岛载体等离子吸收光谱曲线。从图3中，可以得到两个载体的吸收峰分别位于450nm和420nm附近，OD值为0.60上下，可以看出包覆金壳层会引起银本征等离子吸收峰的变化，因此理论上通过改变银-金纳米岛的化学计量比和结构能够实现等其离子共振吸收峰从可见光到近红外区的调控，从而实现对宽光谱范围的荧光增强和超灵敏免疫检测分析。
对普通玻璃、试验一得到的银纳米岛载体和试验三得到的银／金核壳结构纳米岛载体进行荧光强度测试。测试方法：采用Cy5.5标记的BSA按一定的浓度梯度在普通玻璃和银纳米岛及银／金核壳结构纳米岛等不同载体上进行了点样测试：100，10，1，0.1，0.01，0μg／ml，然后用商品化的Odyssey荧光扫描仪(Licor)进行分析，扫描结果如图4所示。从图4中，可以观察到银纳米岛载体和银／金核壳结构纳米岛都有明显的荧光增强效果。将此图片通过分析软件测量后得到的普通玻璃和银纳米岛载体表面荧光强度信号结果如图5所示；其中，■为普通玻璃，▲为银纳米岛载体。从图5中，可以观察到银纳米岛载体相对于普通玻璃的荧光强度约增强了10倍，检测限约提高了2个量级。
试验四：玻璃微珠银纳米岛载体
玻璃微珠银纳米岛载体的制备方法，具体是按照以下步骤进行的：
一、将玻璃微珠加入到金纳米种子溶液中，室温下搅拌反应30min，然后离心清洗3次，得到了表面吸附金纳米种子的玻璃微珠；
二、配置生长银纳米岛的反应溶液：将CH2O加入到AgNO3溶液中，混合均匀；其中，所述的CH2O与AgNO3的摩尔比为1∶1；所述的AgNO3溶液的摩尔浓度为0.5mM；
三、将步骤一中得到的表面吸附一层金纳米种子的玻璃微珠放入步骤二中得到的生长银纳米岛的反应溶液中，在20℃下反应60min；
四、将步骤三中反应完成的玻璃微珠离心，用水清洗，重新分散到水溶液中，即得到玻璃微珠银纳米岛载体。
试验五：聚苯乙烯微球银纳米岛载体
聚苯乙烯微球银纳米岛载体的制备方法，具体是按照以下步骤进行的：
一、利用分散聚合法制备聚苯乙烯微球，聚苯乙烯微球尺寸均匀，直径约为3.5μm；
二、将聚苯乙烯微球加入到金纳米种子溶液中，室温下搅拌12小时，使材料表面吸附一层金纳米种子，得到了表面吸附金纳米种子的聚苯乙烯微球；
三、配置生长银纳米岛的反应溶液：将CH2O加入到AgNO3溶液中，混合均匀；其中，所述的CH2O与AgNO3的摩尔比为1∶1；所述的AgNO3溶液的摩尔浓度为0.5mM；
四、将步骤二中得到的表面吸附一层金纳米种子的聚苯乙烯微球放入步骤三中得到的生长银纳米岛的反应溶液中，在20℃下反应60min；
五、将步骤四中反应完成的聚苯乙烯微球离心，用水清洗，重新分散到水溶液中，即得到聚苯乙烯微球银纳米岛载体。
对试验五中步骤一得到的聚苯乙烯微球进行扫描电子显微镜的测试，得到图6。从图6中，可以观察到制备得到的聚苯乙烯微球的尺寸分布非常均匀，直径约为3.5μm。
试验六：磁珠金纳米岛载体
磁珠银纳米岛载体的制备方法，具体是按照以下步骤进行的：
一、制备磁性Fe3O4纳米粒子，并将其吸附到聚苯乙烯小球表面，得到磁珠；
二、将磁珠加入到金纳米种子溶液中，室温下搅拌12小时，使材料表面吸附一层金纳米种子，得到了表面吸附金纳米种子的磁珠；
三、配置生长金纳米岛的反应溶液：将NH2OH加入到AuHCl4溶液中，混合均匀；其中，所述的NH2OH与AuHCl4的摩尔比为1∶1；所述的AuHCl4溶液的摩尔浓度为1mM；
四、将步骤二中得到的表面吸附一层金纳米种子的磁珠放入步骤三中得到的生长金纳米岛的反应溶液中，在20℃下搅拌反应60min；
五、将步骤四中反应完成的磁珠离心，用水清洗，重新分散到水溶液中，即得到磁珠金纳米岛载体。
对试验六步骤一制备得到的磁性聚苯乙烯微球和试验六步骤五得到的磁性聚苯乙烯微球金纳米岛载体在磁铁富集作用前后分别进行了扫描电子显微镜测试，对比后得到图7。从图7中，可以看出磁性聚苯乙烯小球在吸附金纳米种子功能载体后仍具有很强的磁富集效果。
对试验六得到的磁性聚苯乙烯微球金纳米岛载体进行紫外吸收光谱测试，得到图8。从图8中，可以观察到在540nm处具有明显的金等离子吸收峰，因此可以证明磁性聚苯乙烯小球表面可以吸附金纳米种子，从而为后面进一步生长金纳米岛膜提供材料支撑。
试验七：金属纳米岛载体表面修饰肿瘤标志物抗体分子制备成微阵列生物芯片在肿瘤的早期检测中的应用，具体操作方法如下：首先将12种不同的肿瘤标志物抗体：糖类抗原CA19-9，糖类抗原CA125，癌胚抗原CEA，铁蛋白Ferritin，人类绒毛膜性腺激素Beta-HCG，甲型胎儿蛋白AFP，前列腺等异性抗原PSA，生长激素HGH，糖类抗原CA15-3，神经元特异烯醇化酶NSE等按不同的阵列修饰到金属纳米岛功能载体表面，再利用5％BSA室温下封闭2h，制备成微阵列生物芯片。然后将病人血清样品滴加到芯片表面，抗体就会把相关的肿瘤标志抗原捕获在表面，最后加入荧光标记的二抗，利用共聚焦扫描仪进行荧光信号扫描和数据分析，即可快速完成对肿瘤的筛查。
试验八：金属纳米岛载体制备成微阵列生物芯片在系统性红斑狼疮的检测中的应用。(细胞因子分析)
红斑狼疮患者体内存在多种自身抗体，95％以上病人抗核抗体阳性，可出现抗DNA(双股、单股)、抗组蛋白、抗RNA一非组蛋白、抗核糖核蛋白(主要为Smith抗原)、抗粒细胞、抗血小板、抗平滑肌等抗体，其中抗双股DNA和抗Smith抗原具相对特异性，阳性率分别为60％和30％，而在其他结缔组织病的阳性率，均低于5％。利用玻片金属纳米岛载体表面修饰相应的单克隆抗体分子微阵列，制作生物芯片，实现对系统性红斑狼疮的检测。
试验九：金属纳米岛载体制备成微阵列生物芯片在类风湿性关节炎的检测中的应用。(细胞因子分析)
类风湿性关节炎是常见的以关节滑膜慢性炎症病变为主要表现的自身免疫性疾病。检测RA病人免疫球蛋白及补体，对了解RA患者体液免疫功能及在RA诊断、判断预后及治疗效果等方面的作用具有重要作用。利用金属纳米岛载体表面修饰不同的单克隆抗体阵列，可以提高RA患者血清中的免疫球蛋白及补体、类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽抗体(抗-CCP)、C-反应蛋白(CRP)、抗链球菌溶血素(ASO)的检测灵敏度。
试验十：金属纳米岛载体制备成微阵列生物芯片在乙型肝炎病毒的检测中的应用。(传染病检测)
HBsAg是乙型肝炎病毒(HBV)的外膜蛋白，是血清中首先出现的标志物。在急性肝炎时它很快消失，若6个月以后仍不消失者，可成为慢性肝炎(CH)或HBsAg携带者，并可持续几年或几十年。HBsAg的检测对于乙型肝炎的诊断和鉴别、流行病学的调查、献血员的筛选、预后判断及治疗效果的考察和药物的筛选具有重要的意义。在金属纳米岛载体表面上包被HBs单抗，制备乙肝病毒检测试剂盒，利用夹心法原理检测血清中HBsAg。若样本中含有HBsAg，则被载体表面结合，再加入荧光标记的抗HBs多抗，形成夹心复合物，最后通过扫描仪读数，从而判定结果。
试验十一：金属纳米岛载体表面修饰肿瘤标志物抗体分子制备成悬浮式生物芯片在肿瘤的早期检测中的应用，具体操作方法如下：首先在以不同尺寸的磁性聚苯乙烯小球等为基底制备金属纳米岛功能载体，然后利用具有不同荧光发射的量子点(如600，700，800nm)分别对不同尺寸的聚苯乙烯小球进行编码，并在载体表面分别标记针对不同检测物的核酸、抗体、抗原等分子，从而实现对不同疾病的检测。在捕获目标分子后用荧光标记的二抗对微球进行进一步的标记显色，并利用自主研发的近红外流式细胞计数系统进行数据采集和分子，最终给出诊断结果。

Claims (10)

1.一种金属纳米岛载体，其特征在于：金属纳米岛载体是在载体材料表面形成金属纳米岛而得到的，所述的金属纳米岛是分立的，所述的金属纳米岛的尺寸为10～500nm，所述的金属纳米岛之间的间隙为5～200nm。
2.根据权利要求1所述的一种金属纳米岛载体，其特征在于所述的载体材料为固相材料或悬浮材料；所述的固相材料为二维平面结构；所述的固相材料可以为玻片、硅片、石英、聚偏二氟乙烯膜或硝酸纤维素膜；所述的悬浮材料可以为玻璃微珠、磁珠、聚苯乙烯微球、聚甲基丙烯酸甲酯微球、聚苯乙烯磁性微球或聚甲基丙烯酸甲酯磁性微球；所述的金属可以为银、金-银合金或银／金核壳结构。
3.一种制备金属纳米岛载体的方法，其特征在于：制备方法具体是按照以下步骤进行的：
一、在载体材料表面吸附一层金纳米种子，得到了表面吸附金纳米种子的载体材料；
二、配置生长金属纳米岛的反应溶液：将还原剂加入到含有金属离子的溶液中，混合均匀；其中，所述的还原剂与含有的金属离子的摩尔比为(0.5～2)∶1；所述的金属离子的溶液的浓度为0.1～5mM；
三、将步骤一中得到的表面吸附一层金纳米种子的载体材料放入步骤二中得到的生长金属纳米岛的反应溶液中，在18～30℃下振荡反应2～60min；
四、将步骤三中反应完成的载体材料取出，用水清洗，干燥，即得到金属纳米岛载体。
4.根据权利要求3所述的制备金属纳米岛载体的方法，其特征在于所述的步骤一中的金纳米种子是通过化学还原法还原Au3+得到的，然后利用物理吸附或化学偶联相互作用结合到载体材料表面的；所述的步骤一中的载体材料表面吸附的金纳米种子的粒径为1～20nm。
5.根据权利要求3所述的制备金属纳米岛载体的方法，其特征在于所述的步骤一中的载体材料为固相材料或悬浮材料；所述的固相材料为二维平面结构；所述的固相材料可以为玻片、硅片、石英、聚偏二氟乙烯膜或硝酸纤维素膜；所述的悬浮材料可以为玻璃微珠、磁珠、聚苯乙烯微球、聚甲基丙烯酸甲酯微球、聚苯乙烯磁性微球或聚甲基丙烯酸甲酯磁性微球；根据权利要求7所述的制备金属纳米岛载体的方法，其特征在于所述的金属可以为银、金-银合金或银／金核壳结构。
6.根据权利要求3所述的制备金属纳米岛载体的方法，其特征在于所述的步骤二中的还原剂为NaBH4，NH2OH，N2H4，CH2O或C6H12O6；所述的步骤二中的金属离子溶液为Ag+溶液或Ag+与Au3+的混合溶液。
7.根据权利要求3或6所述的制备金属纳米岛载体的方法，其特征在于所述的步骤二中的还原剂与含有的金属离子的摩尔比为(0.7～1.5)∶1；所述的步骤二中的金属离子的溶液的浓度为0.3～5mM。
8.如权利要求1或2所述的金属纳米岛载体在免疫检测中的应用，其特征在于：生物芯片中的捕获分子捕获相应的物质，进行荧光扫描和数据分析，进而完成免疫检测，其中使用所述金属纳米岛载体作为捕获分子的修饰载体制成生物芯片。
9.根据权利要求8所述的金属纳米岛载体在免疫检测中的应用，其特征在于金属纳米岛载体在免疫检测中的应用包括：所述的金属纳米岛载体表面修饰肿瘤标志物抗体分子制备成生物芯片实现在肿瘤的早期检测中的应用；所述的金属纳米岛载体表面修饰自体免疫疾病相关的抗原、抗体分子制备成生物芯片实现在自体免疫疾病检测中的应用；所述的金属纳米岛载体表面修饰乙肝抗体分子、流感病毒DNS序列、结合病抗体、疟原虫抗原(或抗体)、大肠杆菌抗体制备成生物芯片实现在传染性疾病的检测中的应用；所述的金属纳米岛载体表面修饰白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子超家族、集落刺激因子、趋化因子或生长因子的单克隆抗体制备成生物芯片实现在细胞因子的检测中的应用；所述的金属纳米岛载体表面修饰对不同疾病的单克隆抗体制备成生物芯片实现在对捕获的目标细胞分泌物进行Elispot检测中的应用。
10.根据权利要求8或9中所述的金属纳米岛载体在免疫检测中的应用，其特征在于所述的生物芯片为微阵列生物芯片或悬浮式生物芯片。
CN201410106206.2A 2014-03-20 2014-03-20 一种金属纳米岛载体及其制备方法和在免疫检测中的应用 Active CN103837676B (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410106206.2A CN103837676B (zh) 2014-03-20 2014-03-20 一种金属纳米岛载体及其制备方法和在免疫检测中的应用
PCT/CN2014/085081 WO2015139422A1 (zh) 2014-03-20 2014-08-25 一种金属纳米岛载体及其制备方法和在免疫检测中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410106206.2A CN103837676B (zh) 2014-03-20 2014-03-20 一种金属纳米岛载体及其制备方法和在免疫检测中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103837676A true CN103837676A (zh) 2014-06-04
CN103837676B CN103837676B (zh) 2016-08-17

Family

ID=50801388

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410106206.2A Active CN103837676B (zh) 2014-03-20 2014-03-20 一种金属纳米岛载体及其制备方法和在免疫检测中的应用

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN103837676B (zh)
WO (1) WO2015139422A1 (zh)

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104237537A (zh) * 2014-10-21 2014-12-24 南京基蛋生物科技有限公司 一种检测心肌肌钙蛋白的免疫层析荧光试剂条及制备方法
WO2015139422A1 (zh) * 2014-03-20 2015-09-24 苏州纳达生物科技有限公司 一种金属纳米岛载体及其制备方法和在免疫检测中的应用
CN105181956A (zh) * 2015-09-30 2015-12-23 华东理工大学 基于金属离子特异响应的荧光检测法在免疫检测中的应用
CN106770083A (zh) * 2016-11-23 2017-05-31 中山大学 一种三维光子晶体‑等离激元模式增强荧光纳米结构及其制备方法和应用
CN107233941A (zh) * 2017-04-24 2017-10-10 深圳无微华斯生物科技有限公司 一种多重近红外荧光增强生物芯片筛选循环肿瘤细胞方法
CN108196053A (zh) * 2017-12-28 2018-06-22 无锡准因生物科技有限公司 一种捕获白细胞的微流体装置及其制造方法
CN109799205A (zh) * 2019-02-20 2019-05-24 电子科技大学 一种平面薄膜结构的红外分子指纹传感器及其制备方法
CN109856076A (zh) * 2019-02-19 2019-06-07 章毅 检测细胞的组合物及检测方法
CN112143489A (zh) * 2020-08-14 2020-12-29 南方医科大学皮肤病医院（广东省皮肤病医院、广东省皮肤性病防治中心、中国麻风防治研究中心） 一种运用金岛增强型多重量子点荧光策略的循环肿瘤核酸检测方法
CN116115818A (zh) * 2021-11-12 2023-05-16 刘庄 活性金属微球、基于活性金属微球的复合栓塞剂及其应用

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050142605A1 (en) * 2003-09-08 2005-06-30 American Environmental Systems, Inc. Plasmon-enhanced marking of fragile materials and other applications thereof
JP2008249433A (ja) * 2007-03-29 2008-10-16 Kansai Bunri Sogo Gakuen 被験物質に対するプローブの結合親和性を測定する方法及びその利用
CN101305280A (zh) * 2005-06-10 2008-11-12 吉卢比有限公司 诊断纳米传感器及其在医学中的用途
CN101566570A (zh) * 2009-05-27 2009-10-28 东南大学 有序可控的表面增强拉曼散射活性基底及其制备方法
CN102142362A (zh) * 2010-02-02 2011-08-03 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 利用金属化合物的电泳沉积图案进行光刻的方法
CN102338801A (zh) * 2011-08-05 2012-02-01 张灿 一种高灵敏度免疫芯片检测系统及其使用方法
CN102774807A (zh) * 2012-07-05 2012-11-14 上海大学 核壳式纳米线阵列拉曼散射增强基底制备方法
CN102976266A (zh) * 2012-12-03 2013-03-20 东南大学 基于金银纳米线阵列的表面增强拉曼散射标记及其制备方法
US20130172207A1 (en) * 2011-12-28 2013-07-04 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Fluorescence enhancing plasmonic nanoscopic gold films and assays based thereon

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0611116D0 (en) * 2006-06-06 2006-07-19 Oxford Genome Sciences Uk Ltd Proteins
US8841137B2 (en) * 2010-02-25 2014-09-23 University Of Rochester Hybrid target analyte responsive polymer sensor with optical amplification
CN102183505A (zh) * 2011-02-18 2011-09-14 王小倩 一种阵列型微流控表面增强拉曼散射专用检测芯片的分析系统
CN102266784B (zh) * 2011-06-07 2013-02-27 李伟 一种新型负载型复合金属催化剂制备方法及其应用
CN102313814B (zh) * 2011-07-22 2016-03-30 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 一种基于纳米金增强的多种肺癌标志物的高灵敏检测方法
CN102732636B (zh) * 2012-07-17 2014-01-15 海南医学院 一种检测肿瘤细胞egfr基因突变的芯片
CN103018231A (zh) * 2012-12-27 2013-04-03 济南大学 一种复合纳米材料纸芯片电化学发光免疫传感器的制备方法及应用
CN103837676B (zh) * 2014-03-20 2016-08-17 苏州纳达生物科技有限公司 一种金属纳米岛载体及其制备方法和在免疫检测中的应用

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050142605A1 (en) * 2003-09-08 2005-06-30 American Environmental Systems, Inc. Plasmon-enhanced marking of fragile materials and other applications thereof
CN101305280A (zh) * 2005-06-10 2008-11-12 吉卢比有限公司 诊断纳米传感器及其在医学中的用途
JP2008249433A (ja) * 2007-03-29 2008-10-16 Kansai Bunri Sogo Gakuen 被験物質に対するプローブの結合親和性を測定する方法及びその利用
CN101566570A (zh) * 2009-05-27 2009-10-28 东南大学 有序可控的表面增强拉曼散射活性基底及其制备方法
CN102142362A (zh) * 2010-02-02 2011-08-03 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 利用金属化合物的电泳沉积图案进行光刻的方法
CN102338801A (zh) * 2011-08-05 2012-02-01 张灿 一种高灵敏度免疫芯片检测系统及其使用方法
US20130172207A1 (en) * 2011-12-28 2013-07-04 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Fluorescence enhancing plasmonic nanoscopic gold films and assays based thereon
CN102774807A (zh) * 2012-07-05 2012-11-14 上海大学 核壳式纳米线阵列拉曼散射增强基底制备方法
CN102976266A (zh) * 2012-12-03 2013-03-20 东南大学 基于金银纳米线阵列的表面增强拉曼散射标记及其制备方法

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015139422A1 (zh) * 2014-03-20 2015-09-24 苏州纳达生物科技有限公司 一种金属纳米岛载体及其制备方法和在免疫检测中的应用
CN104237537A (zh) * 2014-10-21 2014-12-24 南京基蛋生物科技有限公司 一种检测心肌肌钙蛋白的免疫层析荧光试剂条及制备方法
CN105181956A (zh) * 2015-09-30 2015-12-23 华东理工大学 基于金属离子特异响应的荧光检测法在免疫检测中的应用
CN106770083A (zh) * 2016-11-23 2017-05-31 中山大学 一种三维光子晶体‑等离激元模式增强荧光纳米结构及其制备方法和应用
CN107233941A (zh) * 2017-04-24 2017-10-10 深圳无微华斯生物科技有限公司 一种多重近红外荧光增强生物芯片筛选循环肿瘤细胞方法
CN108196053A (zh) * 2017-12-28 2018-06-22 无锡准因生物科技有限公司 一种捕获白细胞的微流体装置及其制造方法
CN109856076B (zh) * 2019-02-19 2021-08-20 章毅 检测细胞的组合物及检测方法
CN109856076A (zh) * 2019-02-19 2019-06-07 章毅 检测细胞的组合物及检测方法
CN109799205A (zh) * 2019-02-20 2019-05-24 电子科技大学 一种平面薄膜结构的红外分子指纹传感器及其制备方法
CN109799205B (zh) * 2019-02-20 2021-11-09 电子科技大学 一种平面薄膜结构的红外分子指纹传感器及其制备方法
CN112143489A (zh) * 2020-08-14 2020-12-29 南方医科大学皮肤病医院（广东省皮肤病医院、广东省皮肤性病防治中心、中国麻风防治研究中心） 一种运用金岛增强型多重量子点荧光策略的循环肿瘤核酸检测方法
CN112143489B (zh) * 2020-08-14 2023-02-28 南方医科大学皮肤病医院（广东省皮肤病医院、广东省皮肤性病防治中心、中国麻风防治研究中心） 一种运用金岛增强型多重量子点荧光策略的循环肿瘤核酸检测方法
CN116115818A (zh) * 2021-11-12 2023-05-16 刘庄 活性金属微球、基于活性金属微球的复合栓塞剂及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
WO2015139422A1 (zh) 2015-09-24
CN103837676B (zh) 2016-08-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103837676A (zh) 一种金属纳米岛载体及其制备方法和在免疫检测中的应用
Yap et al. Bifunctional plasmonic-magnetic particles for an enhanced microfluidic SERS immunoassay
Dykman et al. Gold nanoparticles in biology and medicine: recent advances and prospects
CN106525814B (zh) 一种基于磁核-金卫星组装体的psa检测方法
Zhou et al. Immunoassay for tumor markers in human serum based on Si nanoparticles and SiC@ Ag SERS-active substrate
CN105628672B (zh) 一种通过sers信号快速检测外泌体的方法
CN109839501B (zh) 一种测定循环肿瘤细胞的电致化学发光免疫传感器及其制备方法与应用
Tai et al. Gold nanoparticles based optical biosensors for cancer biomarker proteins: a review of the current practices
CN106940310B (zh) 一种自组装金纳米棒sers免疫基底及其制备方法
WO2018054391A1 (zh) 一种细胞内atp的圆二色光谱实时检测方法
CN104568923A (zh) 电化学发光检测外周血循环肿瘤细胞抗原的方法及试剂盒
CN104880456A (zh) 一种基于GO/MWCNTs-COOH/Au@CeO2构建的电化学发光免疫传感器的制备方法及应用
KR102257511B1 (ko) 자성-광학 복합 나노구조체
CN110483683A (zh) 一种靶向肿瘤纳米人工抗体的制备方法和用途
CN106124756A (zh) 感测芯片及感测方法
CN107643400B (zh) 基于银聚集体-聚合物和金纳米线阵列的癌症标志物检测体系的制备方法及其应用
Park et al. Highly photoluminescent superparamagnetic silica composites for on-site biosensors
CN107290423A (zh) 纳米酶原位定量细胞膜蛋白表达量的方法
Zhang et al. Superparamagnetic Composite Nanobeads Anchored with Molecular Glues for Ultrasensitive Label‐free Proteomics
CN112521455B (zh) 一种检测膀胱癌抗原蛋白特异性的多肽及其应用
KR101712429B1 (ko) 표면-증강 라만 산란 기반의 탄저균 검출용 미세유체칩 및 이를 이용한 탄저균 검출 방법
CN109807345B (zh) 一种光热转换点阵阵列芯片的制备和应用
CN103018462B (zh) 纳米氧化锌修饰的免疫毛细管及其制备方法和应用
CN107727632B (zh) 一种sers增强的可控链状组装体检测凝血酶的方法
Lee et al. In vitro dual detection of GNPs conjugated rabbit IgG using anti-IgG anchored calcein green fluorescent LC microdroplets

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant