CN103717619A - 治疗发炎及自体免疫疾病之抗-kir抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明系关于抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物，其包含中和NK细胞抑制性受体之化合物(例如抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体)；以及使用该等化合物及含有该等化合物之组合物治疗及预防发炎或自体免疫病症的方法。

Description

治疗发炎及自体免疫疾病之抗-KIR抗体
相关申请案之交叉引用
本申请案主张2011年5月25日申请之美国临时申请案第61/489,806号之优先权，该临时申请案之揭示内容全部并入本文中。
发明所属之技术领域
本发明系关于使用免疫调节性抗-KIR抗体调节NK细胞活性以治疗或预防发炎疾病及自体免疫疾病，尤其至少部分由促发炎T细胞介导之疾病。
先前技术
天然杀手(NK)细胞为充当细胞毒性免疫细胞之大颗粒淋巴球之子集。由NK细胞介导之天然针对标靶细胞(例如癌细胞、病毒感染细胞)之细胞毒性活性一般表现为分别由活化性及抑制性细胞表面受体传递之正信号与负信号「平衡」之结果。
NK细胞可藉由许多已知细胞表面标记来识别，该等细胞表面标记在物种之间不同(例如，在人类中，常使用CD56、CD16、NKp44、NKp46及NKp30；在小鼠中，常使用NK1.1、Ly49A-W、CD49b)。在活性状态下，NK细胞能够杀死某些自体性、同种异体及甚至异种肿瘤细胞、病毒感染细胞、某些细菌(例如伤寒沙氏杆菌(Salmonella typhi))及其它标靶细胞。NK细胞看似优先杀死在表面上几乎不表现第I类主要组织兼容性(MHCI或MHC-I)分子之标靶细胞。NK细胞亦杀死连接至抗体分子之标靶细胞，一种称作抗体依赖性细胞毒性(ADCC)之机制。在针对标靶细胞之作用中，NK细胞可释放称为穿孔素之成孔蛋白质、称为颗粒酶之蛋白水解酶及直接导致标靶细胞凋亡或溶解或调控其它免疫反应之细胞激素/趋化因子(例如TNFα、IFNγ)。在活化后，NK细胞亦可表现Fas配体(FasL)，使得此等细胞能够诱导表现Fas之细胞凋亡。
足够之NK细胞活性及NK细胞计数通常皆为引发充足之由NK细胞介导之免疫反应所必需。NK细胞可以正常数目存在于个体体内，但此等细胞若不被活化则在发挥重要免疫系统功能(诸如消除异常细胞)方面不起作用。NK细胞活性降低与许多疾病产生及进展有关。举例而言，研究表明NK细胞活性较低会导致更易患上诸如慢性疲劳症候群(CFS)、病毒感染之疾病及产生癌症。
NK细胞活性由NK细胞活性调节受体(NKCAMR)所调控，该等NK细胞活性调节受体可能对各种配体(诸如MHC-I分子、MHC-I同源物或于标靶细胞上表现之其它生物分子)具特异性。NK细胞在个体体内通常呈现多种活化受体及抑制性受体。NK细胞之活性系藉由经由此等活化受体及抑制性受体所转导之信号的平衡来调控。大部分NK细胞活性调节受体看似属于两类蛋白质中之一类：免疫球蛋白(Ig)样受体超家族(IgSF)或C型凝集素样受体(CTLR)超家族。参见例如Radaev及Sun(2003)Annu.Rev.Biomol.Struct.32:93-114。然而，已知其它形式之NKCAMR。
许多NK细胞活化受体属于Ig超家族(IgSF)(该等受体在本文中亦可称为Ig样受体或「ILR」)。活化ILR NK受体(AILR)包括例如CD2、CD16、CD69、DNAX辅助分子-1(DNAM-1)、2B4、NK1.1；杀手免疫球蛋白(Ig)样活化受体(KAR)；ILT/LIR；及自然细胞毒性受体(NCR)，诸如NKp44、NKp46及NKp30。若干其它活化受体属于CLTR超家族(例如NKRP-1、CD69；CD94/NKG2C及CD94/NKG2E杂二聚体、NKG2D均二聚体；且在小鼠中，为Ly49之活化同功异型物，诸如Ly49A-D)。其它活化受体(例如LFA-1及VLA-4)属于整合素蛋白质超家族且其它活化受体甚至可能具有其它可区别的结构。许多活化受体具有结合至MHC-I分子之细胞外域，及相对较短且缺乏为抑制性NK受体所特有的基于酪氨酸之免疫受体抑制基元(ITIM)信号传导基元的细胞质域。此等受体之跨膜域通常包括带电荷的氨基酸残基，该带电荷的氨基酸残基有助于此等受体与信号转导相关分子(例如CD3ζ、FcεRIγ、DAP12及DAP10)缔合(然而，2B4看似为此一般规律之一个例外)，该等信号转导相关分子含有传播NK细胞活化信号之称作「基于酪氨酸之免疫受体活化基元」(ITAM)之短氨基酸序列。受体2B4在其胞质尾区含有4个基于酪氨酸之免疫受体转换基元(ITSM)。ITSM基元亦可见于NKCAR CS1/CRACC及NTB-A中。2B4及SLAM之细胞质域含有两个或两个以上独特之基于酪氨酸之基元，其类似于活化受体及抑制性受体中所存在之基元且可募集含有SH2域之蛋白质SHP-2及SLAM相关蛋白(SAP)。
压力诱导之分子(例如MIC-A、MIC-B及ULBP(人类)以及Rae-1及H-60(小鼠))可用作活化受体(诸如NKG2D均二聚体)之配体。细胞碳水化合物、病原性抗原及抗体亦可为活化受体配体。举例而言，NKR-P1可结合至碳水化合物配体且引起尤其针对展现异常糖基化型态之肿瘤细胞的NK细胞活化。病毒血球凝集素可用作自然细胞毒性受体(NCR)(诸如ILR NKCAR NKp30、NKp44、NKp46及NKp80)之配体。
活化受体可直接转导活化信号或可连同接附分子或其它受体一起起作用(在有时单独有效之受体之间的协同反应之情况下或在共受体-受体配对之情况下)。举例而言，NCR通常缺乏ITAM且因此经由其跨膜域中之带电荷残基结合至接附分子(例如NKp30与CD3ξ链缔合；NKp44与DAP12及/或KARAP缔合；NKp46偶合至CD3ξ链及FcRIγ链)，该等接附分子又能够募集蛋白质酪氨酸激酶(PTK)以传播NK细胞活化信号。CD16为对NK细胞介导之ADCC及细胞激素产生而言重要的活化受体，其与由CD3ξ及/或γ链形成之均二聚体或杂二聚体缔合。NKG2D看似与NCR及活化受体在NK细胞活化中起互补及/或协同作用。活化针对特定标靶之NK细胞可能需要多个活化受体或NCR协同活化，或仅单个受体起作用。包括2B4及NKp80之其它触发表面分子看似充当NK细胞活化之共受体。
人类杀手免疫球蛋白样受体(KIR)之活化同功异型物(例如KIR2DS及KIR3DS)及鼠类Ly-49蛋白之活化同功异型物(例如Ly-49D及Ly-49H)由某些NK细胞表现。天然杀手(NK)细胞之刺激或耐受系经由由细胞表面活化受体及抑制性受体产生之信号串扰来达成。杀手细胞免疫球蛋白样受体(KIR)为用作人类NK细胞功能之关键调节剂的高度多形性活化及抑制性受体家族。不同KIR家族成员中截然不同之结构域藉由提供配体或信号传导蛋白质之停泊位点(docking site)来决定功能。参见Campbell及Purdy(2011)Immunology132(3):315-25。此等分子与其抑制性对应物(论述于下文中)不同之处在于在其相对较短之细胞质域中缺乏ITIM且具有与信号转导多肽(诸如二硫键连接之DAP12二聚体)缔合之带电荷跨膜区。
ILR(IgSF)NK细胞抑制性受体包括对HLA-A、HLA-B或HLA-C异型具特异性之多种不同人类KIR，KIR可识别特定异型内之复对偶基因，例如KIR2DL1识别HLA-Cw2、HLA-Cw4及HLA-Cw6异型。CTLR超家族抑制性受体包括CD94/NKG2蛋白质家族之成员，其包含由凝集素样CD94与NKG2家族之各种成员(诸如NKG2A)形成之受体，且识别非经典MCH-I分子HLA-E及Qa-1(分别为人类及小鼠之分子)，且包括识别小鼠之典型MHC-I分子之鼠类Ly49分子。更进一步对比而言，NKRP1A、Nkrp1f及Nkrp1d为配体与MHC无关但为各种细胞类型(诸如树突状细胞、巨噬细胞及淋巴球)上表现之CTLR家族成员的抑制性受体。
第I类MHC特异性NKCIR包括CTLR Ly-49受体(小鼠)；IgSF受体白血球免疫球蛋白样受体(LIR)(人类)、KIR(例如p58及p70杀手细胞免疫球蛋白样受体)(人类)及CTLR CD94/NKG2受体(小鼠及人类)。所有MHC-I特异性NKCIR看似利用共同的抑制性机制，该机制显然涉及在MHC-I结合及募集酪氨酸磷酸酶(例如SHP-1及SHP-2)期间其细胞质域中之ITIM磷酸化成磷酸化之ITIM，从而抑制与经由NKCAR活化NK有关之邻近蛋白质酪氨酸激酶(PTK)。针对活性调节受体(诸如KIR)之抗体先前已经描述。亦至少提出某种关于将抗-NK受体抗体(诸如抗-KIR抗体)与先前技术之其它抗癌剂组合的建议。举例而言，WO2004/056392描述将抗-NKp30及/或抗-NKp46抗体与介白素-2(IL-2)混合使用。WO2008/084106描述抗-KIR调配物、剂量及给药方案。WO2005/079766亦描述用于癌症疗法中之包括抗-KIR抗体之抗体(例如抗-组织因子抗体)组合。WO2005/003168及WO2005/003172描述多种抗-KIR抗体与多种药剂(包括IL-2及介白素-21(IL-21))之组合。WO2005/037306同样描述IL-21、IL-21衍生物及IL-21类似物以及抗-KIR抗体之组合。WO2005/009465描述治疗性抗体(例如美罗华(Rituxan))与阻断NK细胞之抑制性受体或刺激NK细胞之活化受体的化合物(例如抗-KIR单株抗体，诸如单株抗体DF200，或抗-NKp30单株抗体)组合以便增强以治疗性抗体治疗人类个体之有效性。
自体免疫疾病
自体免疫病症为一种在免疫系统错误地侵袭及破坏健康身体组织时出现之病状。存在超过80种不同类型之自体免疫病症。通常，免疫系统之白血球协助保护身体免受称为抗原之有害物质影响。抗原之实例包括细菌、病毒、毒素、癌细胞及来自另一人或另一物种之血液或组织。免疫系统产生抗体，其破坏此等有害物质。
然而，在患有自体免疫病症之患者体内，免疫系统不能区分自身与非自身(例如健康组织与外来抗原)。结果为免疫反应破坏正常身体组织。此反应为类似于过敏性病状中之反应的过敏反应。
在过敏中，免疫系统对其在正常情况下不会起反应之外部物质起反应。在自体免疫病症的情况下，免疫系统对其在正常情况下不会起反应之正常身体组织起反应。
什么会使得免疫系统不再能够区分健康身体组织与抗原尚未得知。一种理论为一些微生物(诸如细菌或病毒)或药物可能引发此等变化中之一些变化，尤其对于具有使得患上自体免疫病症之可能性较大之基因的人员而言。
自体免疫病症会引起对一或多种身体组织的破坏、器官异常生长及器官功能改变。自体免疫病症可能侵害一或多种器官或组织类型。常受自体免疫病症侵害之器官及组织包括血管、结缔组织、内分泌腺(例如甲状腺或胰脏)、关节、肌肉、红血球及皮肤。人可能同时患有一种以上自体免疫病症。
自体免疫疾病之症状基于疾病及异常免疫反应之位置而不同。自体免疫疾病常出现之共同症状包括疲劳、发热及一般生病感觉(不适)。可用以诊断自体免疫病症之测试可包括：抗核抗体测试、自体抗体测试、CBC、C-反应蛋白(CRP)及红血球沈降率(ESR)。
常开立药物处方来控制或减轻免疫系统反应。其常被称为免疫抑制药物。该等药物可包括皮质类固醇(诸如强的松(prednisone))及非类固醇药物，诸如硫唑嘌呤(azathioprine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、霉酚酸酯(mycophenolate)、西罗莫司(sirolimus)或他克莫司(tacrolimus)。
并发症为常见的且视疾病而定。用于抑制免疫系统之药物的副作用可能为重度的，诸如可能难以控制之感染。「Autoimmune disorders.」MedlinePlus－U.S.National Library of Medicine(2012年4月19日)。
发炎病状
炎症为血管组织对有害刺激物(诸如病原体、受损细胞或刺激物)之复杂生物反应之一部分。炎症为生物体试图移除有害刺激物及引发愈合过程之保护性反应。在无炎症的情况下，创口及感染决不会痊愈。同样，对组织之进行性破坏将危及生物体之存活。然而，慢性炎症亦会导致许多疾病，诸如枯草热、牙周炎、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎及甚至癌症(例如胆囊癌)。出于该原因，炎症通常由身体严密调控。
炎症可分类为急性炎症或慢性炎症。急性炎症为身体对有害刺激物之初始反应且藉由增强血浆及白血球(尤其颗粒球)自血液向受损组织中移动而达成。生物化学事件级联使发炎反应扩散且成熟，累及局部血管系统、免疫系统及受损组织内之各种细胞。长期炎症称作慢性炎症，其引起存在于炎症部位之细胞类型发生进行性变化且特征在于由发炎过程同时破坏组织及使组织愈合。Kindt等人,(2006)Kuby Immunology[第6版]。
T细胞与炎症散播有关。天然T细胞分化，导致产生T细胞子集，各子集具有不同细胞激素表现型态以发挥不同免疫功能。经由活化各别信号传导路径，此过程产生分化之辅助T(Th)细胞(称作Th1、Th2及Th17)以及诱导之调节性T细胞(其抑制Th细胞)。此等不同细胞对于对抗感染性疾病及癌症为重要的；然而，在异常时，其可能导致慢性发炎疾病。一种此类疾病为发炎性肠病(IBD)，其中各T细胞子集在疾病中可能起作用。Zenewicz等人,(2009)Trends in Molecular Medicine15(5):199-207。
虽然NK细胞在科学文献中在其潜在促成抗肿瘤及抗病毒反应方面已受到广泛关注，但很少有研究旨在研究NK细胞在炎症及自体免疫中之作用(尤其表现KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3之子集)。针对此等NK细胞之方法即使存在亦因NK细胞可能促成炎症及自体免疫而设法消除或抑制NK细胞。迄今为止未着手了解由KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3介导之NK细胞细胞毒性增强在发炎背景下之效应。
因此，此项技术中需要利用NK细胞调节作用来向患者提供改良益处之方法。
发明内容
经特定研发以研究人类KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3阻断之活体内模型(KIR2DL3及其HLA配体之转殖基因小鼠)展示投与抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2或抗-KIR2DL3抗体能够诱导NK细胞有效减少或消除刀豆球蛋白A(con A)母细胞。Con A主要作用于T-淋巴球且引起淋巴球生长及分裂，且因此常用作炎症模型。结果表明替代于设法在炎症及自体免疫中减少或消除KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3阳性NK细胞，增强此等NK细胞活性可为有益的，因为其可有助于移除促发炎T细胞，包括(但不限于)循环中之T细胞，而不诱导自体反应性相关毒性。
本发明提供治疗患有发炎或自体免疫病症之个体的方法。该等方法可包含投与个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。该个体可能患有由T细胞介导之发炎或自体免疫病症，例如涉及促发炎、活化及/或增殖性T细胞(例如在循环中或在患病或发炎组织中)、CD4+T细胞、浸润性T细胞及/或表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞的病症。在一个实施例中，个体可能患有选自由以下组成之群的发炎或自体免疫病症：全身性红斑狼疮、韦格纳氏肉芽肿病(Wegener's granulomatosis)、自体免疫肝炎、克罗恩氏病(Crohn's disease)、硬皮病、溃疡性结肠炎、休格连氏症候群(
Figure BDA0000462467460000071
syndrome)、第1型糖尿病、葡萄膜炎、心肌炎、风湿热、僵直性脊椎炎、类风湿性关节炎、多发性硬化症及牛皮癣。
在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可基于其阻断或中和KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3介导之对NK之抑制作用且从而增强NK细胞针对以其它方式阻断之标靶细胞之活性的能力来表征。
在一个实施例中，抗体可为单一抗-KIR抗体或抗-KIR抗体之组合。在另一实施例中，抗体可为抗-KIR2DL1抗体与抗-KIR2DL2抗体之组合，或抗-KIR2DL1抗体与抗-KIR2DL3抗体之组合，或抗-KIR2DL1抗体与抗-KIR2DL2抗体及抗-KIR2DL3抗体之组合，或结合至少两种选自由KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3组成之群之不同人类抑制性KIR接受体基因产物的抗-KIR抗体，或抗-KIR抗体结合KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3中之每一者，其中该抗体能够中和由KIR介导之对表现特定KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3受体之NK细胞的NK细胞细胞毒性之抑制作用。
在一个实施例中，一或多种KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3抗体之有效量可为在投与该抗体后该抗体可使得NK细胞上之KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3实质上完全饱和(90%，视情况95%受体占有率)达至少约1周，视情况约2周，视情况约3周，视情况约一个月之时段的量。
在一个实施例中，可以一定量及一定频率投与抗体以使得NK细胞上之KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3实质上完全饱和(90%，视情况95%受体占有率)达至少约1周之时段而在治疗期间无显著「去饱和」。在一个实施例中，一或多种KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3抗体之有效量可为在投与该抗体后该抗体使得循环NK细胞上之KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3实质上完全饱和(90%KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3占有率，视情况95%KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3占有率)达至少约2周，视情况约3周，视情况约一个月之时段的量，且可投与抗体至少两次，其中约每2周一次、每3周一次或每月一次进行给药(后继给药相隔约2周、3周或一个月)。
在一个实施例中，可以一定量及一定频率投与抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体以使得NK细胞上之KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3实质上完全饱和(90%，视情况95%受体占有率)达至少约1周之时段且在治疗期间允许显著「去饱和」。在一个实施例中，一或多种KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3抗体之有效量可为在投与该抗体后该抗体使得循环NK细胞上之KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3实质上完全饱和(90%KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3占有率，视情况95%KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3占有率)达至少约2周，视情况约3周，视情况约一个月之时段的量，且可投与抗体至少两次，其中约每两个月一次进行给药(后继给药相隔约2个月)。
在一个实施例中，制备抗体之方法可包含：(a)用包含KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之免疫原使非人类哺乳动物免疫；(b)选择来自该免疫之哺乳动物的抗体，其中该等抗体结合该KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽；及(c)选择(b)中增强NK细胞对T细胞，尤其活化之CD4+T细胞之消除作用的抗体。在另一实施例中，可确定步骤(c)中所选之抗体适用于治疗发炎或自体免疫病症。在另一实施例中，制备抗体之方法可包含视情况藉由噬菌体呈现技术提供抗体库。在一个实施例中，制备抗体之方法可包含：(a)藉由噬菌体呈现技术提供抗体库；(b)自该库中选择抗体，其中该等抗体结合该KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽；及(c)选择(b)中增强NK细胞对T细胞，尤其活化之CD4+T细胞之消除作用的抗体。较佳的是，将确定步骤(c)中所选之抗体适用于治疗发炎或自体免疫病症。
在一个实施例中，活体外或活体内减少或消除T细胞之方法可包含使T细胞与抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物在表现KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之细胞(例如NK细胞)存在下接触。在另一实施例中，T细胞可为促发炎、活化及/或增殖性T细胞、CD4+T细胞、浸润性T细胞及/或表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞。
在一个实施例中，活体内减少或消除T细胞之方法可包含投与患有发炎或自体免疫病症(较佳为至少部分由该等T细胞介导之疾病)的个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，T细胞可为活化及/或增殖性T细胞、CD4+T细胞、促发炎T细胞(例如在循环中或在患病或发炎组织中)、表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞或浸润性T细胞。在另一实施例中，浸润性T细胞可浸润至疾病组织(包括(但不限于)滑膜关节组织或滑液)中，浸润至中枢神经系统、结肠或皮肤组织中。在一个实施例中，减少或消除T细胞之方法包含投与患有发炎或自体免疫病症的个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，该等T细胞为活化及/或增殖性T细胞、CD4+T细胞、促发炎T细胞(例如在循环中或在患病或发炎组织中)、浸润性T细胞(浸润至疾病组织(例如滑膜关节组织或滑液)中，浸润至中枢神经系统、结肠、皮肤组织中)，及/或表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞。在另一实施例中，该患者可患有至少部分由该等T细胞介导之疾病。在另一实施例中，有效量可为抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物有效减少该等T细胞数目的量。
在一个实施例中，针对活化及/或增殖性T细胞之方法可包含投与患有发炎或自体免疫病症(较佳为至少部分由该等T细胞介导之疾病)的个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在一个实施例中，减少或消除T细胞CD4+T细胞之方法包含投与患有发炎或自体免疫病症(较佳为至少部分由该等T细胞介导之疾病)的个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在一个实施例中，针对促发炎T细胞(例如在循环中或在患病或发炎组织中)之方法可包含投与患有发炎或自体免疫病症(较佳为至少部分由该等T细胞介导之疾病)的个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在一个实施例中，减少或消除浸润性T细胞(浸润至疾病组织(例如滑膜关节组织或滑液)中，浸润至中枢神经系统、结肠、皮肤组织中)的方法可包含投与患有发炎或自体免疫病症(较佳为至少部分由该等T细胞介导之疾病)的个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，该抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物为抗体、抗体片段、肽、糖苷生物碱(glycoalkoid)、反义核酸、核糖核酸酶、类视黄素、高亲和性多聚体(avemir)、小分子或其任何组合。在另一实施例中，该化合物为嵌合、人类化、抗个体基因型、单链、双功能或共特异性抗体或其抗体片段。
在一个实施例中，减少或消除表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞的方法可包含投与患有发炎或自体免疫病症(较佳为至少部分由该等T细胞介导之疾病)的个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，该抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物为抗体、抗体片段、肽、糖苷生物碱、反义核酸、核糖核酸酶、类视黄素、高亲和性多聚体、小分子或其任何组合。在另一实施例中，该化合物为嵌合、人类化、抗个体基因型、单链、双功能或共特异性抗体或其抗体片段。
在另一实施例中，该抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物为抗体、抗体片段、肽、糖苷生物碱、反义核酸、核糖核酸酶、类视黄素、高亲和性多聚体、小分子或其任何组合。在另一实施例中，该化合物为嵌合、人类化、抗个体基因型、单链、双功能或共特异性抗体或其抗体片段。
在另一实施例中，该抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物为抗体、抗体片段、肽、糖苷生物碱、反义核酸、核糖核酸酶、类视黄素、高亲和性多聚体、小分子或其任何组合。在另一实施例中，该化合物为嵌合、人类化、抗个体基因型、单链、双功能或共特异性抗体或其抗体片段。
在一个实施例中，治疗发炎病症之方法可包含：(a)确定个体是否患有发炎或自体免疫病症；及(b)若该个体患有发炎或自体免疫病症，则用有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗该个体。在另一实施例中，治疗自体免疫病症之方法可包含：(a)确定个体是否患有发炎或自体免疫病症；及(b)若该个体患有发炎或自体免疫病症，则用有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗该个体。在另一实施例中，该抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物为抗体、抗体片段、肽、糖苷生物碱、反义核酸、核糖核酸酶、类视黄素、高亲和性多聚体、小分子或其任何组合。在另一实施例中，该化合物为嵌合、人类化、抗个体基因型、单链、双功能或共特异性抗体或其抗体片段。
在一个实施例中，治疗发炎病症之方法可包含：(a)确定个体是否患有至少部分由T细胞(例如促发炎、活化及/或增殖性T细胞(例如在循环中或在患病或发炎组织中)、CD4+T细胞、浸润性T细胞及/或表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞)介导之发炎病症；及(b)若该个体患有至少部分由该等T细胞介导之发炎病症，则用有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗该个体。在另一实施例中，该抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物为抗体、抗体片段、肽、糖苷生物碱、反义核酸、核糖核酸酶、类视黄素、高亲和性多聚体、小分子或其任何组合。在另一实施例中，该化合物为嵌合、人类化、抗个体基因型、单链、双功能或共特异性抗体或其抗体片段。
在一个实施例中，治疗自体免疫病症之方法可包含：(a)确定个体是否患有至少部分由T细胞(例如促发炎、活化及/或增殖性T细胞(例如在循环中或在患病或发炎组织中)、CD4+T细胞、浸润性T细胞及/或表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞)介导之自体免疫病症；及(b)若该个体患有至少部分由该等T细胞介导之自体免疫病症，则用有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗该个体。在另一实施例中，该抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物为抗体、抗体片段、肽、糖苷生物碱、反义核酸、核糖核酸酶、类视黄素、高亲和性多聚体、小分子或其任何组合。在另一实施例中，该化合物为嵌合、人类化、抗个体基因型、单链、双功能或共特异性抗体或其抗体片段。
在一个实施例中，治疗个体之发炎疾病的方法可包含：(a)评估个体之发炎疾病之存在、阶段及/或进展；及(b)投与该个体有效剂量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。视情况而定，评估个体之疾病的存在、阶段及/或进展可包含分析自体抗体、CRP或任何蛋白水解酶、发炎介体或进行性炎症之标记的含量。若该个体经确定适于以抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗(例如个体患有关节炎、病情恶化)，则投与该个体有效剂量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，该抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物为抗体、抗体片段、肽、糖苷生物碱、反义核酸、核糖核酸酶、类视黄素、高亲和性多聚体、小分子或其任何组合。在另一实施例中，该化合物为嵌合、人类化、抗个体基因型、单链、双功能或共特异性抗体或其抗体片段。
在一个实施例中，治疗个体之自体免疫疾病的方法可包含：(a)评估个体之自体免疫疾病之存在、阶段及/或进展；及(b)投与该个体有效剂量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。视情况而定，评估个体之疾病的存在、阶段及/或进展可包含分析自体抗体、CRP或任何蛋白水解酶、发炎介体或进行性炎症之标记的含量。若该个体经确定适于以抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗(例如个体患有关节炎、病情恶化)，则投与该个体有效剂量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，该抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物为抗体、抗体片段、肽、糖苷生物碱、反义核酸、核糖核酸酶、类视黄素、高亲和性多聚体、小分子或其任何组合。在另一实施例中，该化合物为嵌合、人类化、抗个体基因型、单链、双功能或共特异性抗体或其抗体片段。
在一个实施例中，治疗个体之发炎疾病的方法可包含：(a)确定该个体是否确诊有发炎疾病；及(b)若该个体确诊有发炎疾病，则投与该患者有效剂量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在一个实施例中，治疗个体之自体免疫疾病的方法可包含：(a)确定该个体是否确诊有自体免疫疾病；及(b)若该个体确诊有自体免疫疾病，则投与该患者有效剂量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在一个实施例中，该化合物为抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。
在一个实施例中，治疗个体之发炎疾病的方法可包含：(a)确定该个体是否确诊有发炎疾病；及(b)若该个体确诊有发炎疾病，则投与该患者有效剂量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在一个实施例中，治疗个体之自体免疫疾病的方法可包含：(a)确定该个体是否确诊有自体免疫疾病；及(b)若该个体确诊有自体免疫疾病，则投与该患者有效剂量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在一个实施例中，该化合物为抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。
在一个实施例中，治疗个体之发炎疾病的方法可包含(a)确定该个体是否正经历发炎疾病之发作、危象、恶化或突发；及(b)若该个体经历发炎疾病之发作、危象、恶化或突发，则投与该个体有效剂量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在一个实施例中，该化合物为抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。在一个实施例中，治疗个体之自体免疫疾病的方法可包含(a)确定该个体是否正经历自体免疫疾病之发作、危象、恶化或突发；及(b)若该个体经历自体免疫疾病之发作、危象、恶化或突发，则投与该个体有效剂量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在一个实施例中，该化合物为抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。
在一个实施例中，治疗个体之发炎疾病的方法可包含(a)确定该个体是否患有特征在于存在T细胞之发炎疾病；及(b)若该个体患有特征在于存在该等T细胞之发炎疾病，则投与该患者有效剂量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，该等T细胞可为活化及/或增殖性T细胞、CD4+T细胞、促发炎T细胞、浸润性T细胞及/或表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞。在一个实施例中，该化合物为抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。在一个实施例中，治疗个体之自体免疫疾病的方法可包含(a)确定该个体是否患有特征在于存在T细胞之自体免疫疾病；及(b)若该个体患有特征在于存在该等T细胞之自体免疫疾病，则投与该患者有效剂量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，该等T细胞可为活化及/或增殖性T细胞、CD4+T细胞、促发炎T细胞、浸润性T细胞及/或表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞。在一个实施例中，该化合物为抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。
在一个实施例中，治疗患有发炎疾病，尤其确诊有发炎疾病或正经历发炎疾病之发作、危象、恶化或突发之个体的方法可包含投与该个体抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在一个实施例中，治疗患有自体免疫疾病，尤其确诊有自体免疫疾病或正经历自体免疫疾病之发作、危象、恶化或突发之个体的方法包含投与该个体抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在一个实施例中，该化合物为抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。
在一个实施例中，治疗发炎疾病之方法可包含投与抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在一个实施例中，该化合物为抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。在一个实施例中，治疗自体免疫疾病之方法可包含投与抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在一个实施例中，该化合物为抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。
在一个实施例中，治疗个体之方法可包含：(a)确定个体是否患有发炎或自体免疫病症；及(b)若该个体患有发炎或自体免疫病症，则用有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗该个体。
在一个实施例中，治疗个体之方法可包含：(a)确定个体是否患有至少部分由T细胞介导之发炎或自体免疫病症；及(b)若该个体患有至少部分由该等T细胞介导之发炎或自体免疫病症，则用有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗该个体。
在一个实施例中，治疗个体之方法可包含：(a)评估个体之发炎或自体免疫疾病之存在、阶段及/或进展；及(b)投与该个体有效剂量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
在一个实施例中，治疗个体之方法可包含：(a)确定该个体是否确诊有发炎或自体免疫疾病；及(b)若该个体确诊有发炎或自体免疫疾病，则投与该患者有效剂量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
在一个实施例中，治疗个体之方法可包含：(a)确定该个体是否正经历发炎或自体免疫疾病之发作、危象、恶化或突发；及(b)若该个体经历发炎或自体免疫疾病之发作、危象、恶化或突发，则投与该个体有效剂量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
在一个实施例中，抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物以单疗法形式投与，亦即以单一药剂形式用于治疗中。举例而言，药物可包含抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物，而不含任何其它医药活性剂及/或不使用其它医药活性剂治疗个体之特定疾病病状。在活体外方法中，抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物可在不添加或存在其它活性剂的情况下使用。
在本发明之治疗方法之一个实施例中，抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物可与第二治疗剂组合投与，亦即在第二治疗剂之前、与第二治疗剂并行，或在第二治疗剂之后投与。
在一个实施例中，抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物可与第二治疗剂，视情况在特定疾病病状之情况下通常使用之任何药剂组合投与。较佳的是，该第二药剂可为除如下治疗性抗体以外的药剂，该治疗性抗体经由ADCC诱导表现该第二药剂所结合之抗原的细胞死亡。较佳的是，该第二治疗剂可为除如下抗体以外的药剂，该抗体具有IgG1或IgG3同型，其作用方式涉及诱导针对抗体所结合之细胞的ADCC。在一个实施例中，该第二药剂可为具有IgG4同型之恒定区之抗体或抗体片段(例如Fab或F(ab)'2片段)。在一个实施例中，该第二药剂可为连接至细胞毒性部分之抗体。在一个实施例中，该第二药剂可为非抗体多肽。在一个实施例中，该第二治疗剂可为合成小分子药剂。在另一实施例中，该第二治疗剂可为小分子化学治疗剂。在另一实施例中，该第二治疗剂可为DMARD。在另一实施例中，该第二治疗剂为
视情况而定，在任何治疗方法中，该等方法可进一步包含投与该个体DMARD。在一个实施例中，可提供治疗患有自体免疫或发炎疾病之个体的方法，其可包含投与该个体(a)有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物，及(b)DMARD。
较佳的是，化合物抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽且因抑制该KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽而调节NK细胞之细胞毒性。较佳的是，化合物可包含结合KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之抗体。
在一个实施例中，确定患者以抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗之适合性的方法可包含确定该患者是否确诊有发炎疾病，该患者是否可能正经历疾病之发作、危象、恶化或突发，及/或该患者是否患有特征在于存在例如以下之T细胞的疾病：活化及/或增殖性T细胞、CD4+T细胞、促发炎T细胞、浸润性T细胞及/或表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞。在一个实施例中，确定患者以抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗之适合性的方法可包含确定该患者是否确诊有自体免疫疾病，该患者是否可能正经历疾病之发作、危象、恶化或突发，及/或该患者是否患有特征在于存在例如以下之T细胞的疾病：活化及/或增殖性T细胞、CD4+T细胞、促发炎T细胞、浸润性T细胞及/或表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞。
在一个实施例中，治疗自体免疫病症之方法可包含投与抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，该化合物为抗体、抗体片段、肽、糖苷生物碱、反义核酸、核糖核酸酶、类视黄素、高亲和性多聚体、小分子或其任何组合。在另一实施例中，该化合物为抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。在一个实施例中，个体患有由T细胞介导之自体免疫病症。在另一实施例中，自体免疫病症为后天免疫缺乏症候群(AIDS)、后天脾萎缩、急性前葡萄膜炎、急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、急性痛风性关节炎、急性坏死性出血性脑白质炎、急性或慢性窦炎、急性化脓性脑膜炎(或其它中枢神经系统发炎病症)、急性严重炎症、艾迪森氏病(Addison's disease)、肾上腺炎、成人发作型糖尿病(第II型糖尿病)、成人发作型特发性副甲状腺低能症(AOIH)、无γ球蛋白血症、颗粒球缺乏症、血管炎病(包括血管炎(包括大血管血管炎(包括风湿性多肌痛及巨细胞性(高安氏(Takayasu's))关节炎))、过敏病状、过敏性接触性皮炎、过敏性皮炎、过敏性肉芽肿性血管炎、过敏病症、过敏性神经炎、过敏反应、斑形脱发、全秃、阿尔波特氏症候群(Alport's syndrome)、肺泡炎(例如过敏性肺泡炎及纤维化肺泡炎)、阿兹海默氏病(Alzheimer's disease)、淀粉样变性、肌萎缩性侧索硬化(ALS；葛雷克氏病(Lou Gehrig's disease))、嗜伊红血球相关病症(例如嗜伊红血球增多)、全身性过敏反应、僵直性脊椎炎、血管扩张、抗体介导之肾炎、抗-GBM/抗-TBM肾炎、抗原-抗体复合物介导之疾病、抗丝球体基底膜病、抗-磷脂抗体症候群、抗磷脂症候群(APS)、口疮、口疮性口炎、再生不能性贫血、心律不整、动脉硬化、动脉硬化病症、关节炎(例如类风湿性关节炎，诸如急性关节炎、慢性类风湿性关节炎)、慢性渐进性关节炎、变形性关节炎、蛔虫病、曲霉肿(或含有嗜伊红血球之肉芽肿)、曲菌病、无精液症(aspermiogenese)、哮喘(例如支气管哮喘(asthma bronchiale/bronchialasthma)及自体免疫哮喘)、共济失调毛细管扩张症、共济失调硬化、动脉粥样硬化、自闭症、自体免疫血管性水肿、自体免疫再生不能性贫血、自体免疫萎缩性胃炎、自体免疫糖尿病、睾丸及卵巢之自体免疫疾病(包括自体免疫睾丸炎及卵巢炎)、与胶原病有关之自体免疫病症、自体免疫自主神经障碍、自体免疫耳部疾病(例如自体免疫内耳疾病(AGED))、自体免疫内分泌疾病(包括甲状腺炎，诸如自体免疫甲状腺炎)、自体免疫肠病症候群、自体免疫性腺衰竭、自体免疫听力丧失、自体免疫溶血、自体免疫肝炎、自体免疫肝脏病症、自体免疫高脂质血症、自体免疫免疫缺乏症、自体免疫内耳疾病(AIED)、自体免疫心肌炎、自体免疫嗜中性球减少症、自体免疫胰脏炎、自体免疫多内分泌病、第I型自体免疫多腺体症候群、自体免疫视网膜病、自体免疫血小板减少性紫癜(ATP)、自体免疫甲状腺病、自体免疫荨麻疹、自体免疫介导之胃肠疾病、轴突及神经元神经病、巴娄病(Balo disease)、白塞氏病(Behcet's disease)、良性家族性及缺血再灌注损伤、良性淋巴球性血管炎、伯格氏病(Berger's disease)(IgA肾病)、养鸟者肺(bird-fancier's lung)、失明、伯克氏病(Boeck's disease)、阻塞性细支气管炎(非移植)伴有NSIP(bronchiolitisobliterans(non-transplant)vs NSIP)、支气管炎、支气管肺炎曲菌病、布鲁顿氏症候群(Bruton's syndrome)、大疱性类天疱疮、卡普兰氏症候群(Caplan'ssyndrome)、心肌病、心血管缺血、卡斯曼氏症候群(Castleman's syndrome)、乳糜泻、脂肪便症(麸质性肠病)、小脑退化、大脑缺血及伴有血管形成之疾病、恰加斯氏病(Chagas disease)、通道病(例如癫痫症)、CNS通道病、脉络膜视网膜炎、脉络膜炎、自体免疫血液学病症、慢性活动性肝炎或自体免疫慢性活动性肝炎、慢性接触性皮炎、慢性嗜伊红血球肺炎、慢性疲劳症候群、慢性肝炎、慢性过敏性肺炎、慢性发炎性关节炎、慢性发炎性髓鞘脱失多神经病(CIDP)、慢性难治炎症、慢性黏膜与皮肤性念珠菌病、慢性神经病(例如IgM多神经病或IgM介导之神经病)、慢性阻塞性气管疾病、慢性肺部发炎疾病、慢性复发性多灶性骨髓炎(CRMO)、慢性甲状腺炎(桥本氏甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis))或亚急性甲状腺炎、彻奇-斯全司症候群(Churg-Strauss syndrome)、瘢痕性类天疱疮/良性黏膜类天疱疮、CNS发炎病症、CNS血管炎、腹腔病、柯刚氏症侯群(Cogans syndrome)、冷凝集素病、息肉状结肠炎、结肠炎(诸如溃疡性结肠炎(ulcerative colitis/colitis ulcerosa)、胶原性结肠炎)、涉及T细胞浸润及慢性发炎反应之病状、先天性心脏传导阻滞、先天性风疹感染、库姆氏阳性贫血(Coombs positive anemia)、冠状动脉疾病、科沙奇病毒性心肌炎(Coxsackie myocarditis)、CREST症候群(钙质沉着、雷诺氏现象(Raynaud's phenomenon))、克罗恩氏病、冷球蛋白血症、库欣氏症候群(Cushing's syndrome)、睫状体炎(例如慢性睫状体炎、异时性睫状体炎、虹膜睫状体炎或福斯氏睫状体炎(Fuch's cyclitis))、囊肿性纤维化、细胞激素诱发之毒性、聋症、退化性关节炎、髓鞘脱失疾病(例如自体免疫髓鞘脱失疾病)、髓鞘脱失神经病、登革热(dengue)、疱疹样皮炎及异位性皮炎、皮炎(包括接触性皮炎)、皮肌炎、具有急性发炎组分之皮肤病、德维克氏病(Devic'sdisease)(视神经脊髓炎)、糖尿病性大动脉病症、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、戴-布二氏贫血(Diamond Blackfan anemia)、弥漫性间质性肺纤维化、扩张型心肌病、盘状狼疮、涉及白血球渗出之疾病、卓斯勒症候群(Dressler'ssyndrome)、杜普伊特伦氏挛缩(Dupuytren's contracture)、埃可病毒感染(echovirus infection)、湿疹(包括过敏性或异位性湿疹)、脑炎(诸如罗氏脑炎(Rasmussen's encephalitis)及边缘叶及/或脑干脑炎)、脑脊髓炎(例如过敏性脑脊髓炎(allergic encephalomyelitis/encephalomyelitis allergica)及实验性过敏性脑脊髓炎(EAE))、动脉内膜增生、心内膜炎、内分泌性眼病、子宫内膜异位症、心内膜心肌纤维化、晶状体过敏性眼内炎(endophthalmiaphacoanaphylactica)、眼内炎、过敏性肠炎、嗜伊红血球增多-肌痛症候群、嗜伊红血球性筋膜炎、流行性角膜结膜炎、后天性大疱性表皮松懈(EBA)、巩膜外层、巩膜外层炎、埃-巴二氏病毒感染(Epstein-Barr virus infection)、持久性隆起性红斑、多形红斑、麻风结节性红斑、结节性红斑、胎儿红血球母细胞增多症、食道运动功能障碍(esophageal dysmotility)、原发性混合型冷球蛋白血症、筛骨、伊文氏症候群(Evan's syndrome)、实验性过敏性脑脊髓炎(EAE)、因子VIII缺乏症、农民肺(farmer's lung)、风湿热、费尔提氏症候群(Felty's syndrome)、肌肉纤维疼痛、纤维化肺泡炎、丝虫病、局部区段性丝球体硬化症(FSGS)、食物中毒、额叶萎缩、胃萎缩、巨细胞性关节炎(颞关节炎)、巨细胞性肝炎、巨细胞性多肌痛、丝球体肾炎、伴有及不伴有肾病症候群之丝球体肾炎(GN)(诸如慢性或急性丝球体肾炎(例如原发性GN))、古德帕斯彻氏症候群(Goodpasture's syndrome)、痛风性关节炎、颗粒球输注相关症候群、肉芽肿病(包括淋巴瘤样肉芽肿病)、伴有多血管炎之肉芽肿病(GPA)、肉芽肿性葡萄膜炎、格雷氏病(Grave's disease)、古立安-白瑞症候群(Guillain-Barre syndrome)、点状牛皮癣、阵发性血红素尿、黑-里二氏病(Hamman-Rich's disease)、桥本氏病(Hashimoto's disease)、桥本氏脑炎、桥本氏甲状腺炎、血色病、溶血性贫血或免疫性溶血性贫血(包括自体免疫溶血性贫血(AIHA))、溶血性贫血、A型血友病、亨-舍二氏紫癜(Henoch-Schonleinpurpura)、妊娠疱疹、人类免疫缺乏病毒(HIV)感染、痛觉过敏、低γ球蛋白血症、性腺低能症、副甲状腺低能症、特发性尿崩症、特发性面瘫、特发性甲状腺功能低下、特发性IgA肾病、特发性膜性GN或特发性膜性肾病、特发性肾病症候群、特发性肺纤维化、特发性口炎性腹泻、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、IgA肾病、IgE介导之疾病(例如全身性过敏反应以及过敏性及异位性鼻炎)、IgG4相关硬化性疾病、局部回肠炎、免疫复合物肾炎、与由细胞激素及T-淋巴球介导之急性及迟发型过敏症有关之免疫反应、免疫介导之GN、免疫调节性脂蛋白(包括成人或急性呼吸窘迫症候群(ARDS))、包涵体肌炎、感染性关节炎、由抗精原细胞抗体所致之不孕症、全部或部分葡萄膜炎症、发炎性肠病(IBD)、发炎性过度增殖性皮肤疾病、发炎性肌病、胰岛素依赖型糖尿病(第1型)、胰岛炎、间质性膀胱炎、间质性肺病、间质肺纤维化、虹膜炎、缺血再灌注病症、关节炎症、青少年关节炎、青少年皮肌炎、青少年糖尿病、青少年发作型(第I型)糖尿病(包括儿童胰岛素依赖型糖尿病(IDDM))、青少年发作型类风湿性关节炎、川崎氏症候群(Kawasakisyndrome)、干燥性角膜结膜炎、锥虫病(kypanosomiasis)、蓝伯-伊顿症候群(Lambert-Eaton syndrome)、利什曼体病(leishmaniasis)、麻风病、白血球减少症、白血球黏附缺乏症、白血球破碎性血管炎、白血球减少症、扁平苔癣、硬化性苔癣、木质性结膜炎、线性IgA皮肤病、线性IgA疾病(LAD)、吕弗勒氏症候群(Loffler's syndrome)、类狼疮性肝炎、狼疮(包括肾炎、大脑炎、儿童、非肾、肾外、盘状、脱发)、狼疮(SLE)、播散性红斑狼疮、莱姆关节炎(Lyme arthritis)、莱姆病、淋巴间质性肺炎、疟疾、男性及女性自体免疫不孕症、上颌骨病、中血管血管炎(包括川崎氏病及结节性多动脉炎)、膜状增生性或膜增生性GN(MPGN)(包括第I型及第II型)及快速进行性GN、膜性GN(膜性肾病)、美尼尔氏病(Meniere's disease)、脑膜炎、显微性结肠炎、显微性多血管炎、偏头痛、微小肾病变、混合型结缔组织病(MCTD)、感染性单核细胞增多症、莫伦氏溃疡(Mooren's ulcer)、穆-哈二氏病(Mucha-Habermann disease)、多灶性运动神经病、多发性内分泌衰竭、多器官损伤症候群(诸如继发于败血症、创伤或出血之多器官损伤症候群)、多器官损伤症候群、多发性硬化症(MS)(诸如脊髓-眼MS)、多发性硬化症、流行性腮腺炎、肌肉病症、重症肌无力(诸如胸腺瘤相关重症肌无力)、重症肌无力、心肌炎、肌炎、发作性睡病、坏死性小肠结肠炎及透壁性结肠炎，及自体免疫发炎性肠病；坏死性、皮肤或过敏性血管炎；新生儿狼疮症候群(NLE)、肾病、肾病症候群、神经疾病、视神经脊髓炎(德维克氏)、视神经脊髓炎、神经性肌强直、嗜中性球减少症、非癌性淋巴球增多症、非肉芽肿性葡萄膜炎、非恶性胸腺瘤、眼部及眼眶发炎病症、眼部瘢痕性类天疱疮、卵巢炎、交感神经性眼炎、眼阵挛肌阵挛症候群(OMS)、眼阵挛或眼阵挛肌阵挛症候群(OMS)，及感觉神经病、视神经炎、肉芽肿性睾丸炎、骨关节炎、复发性风湿病、胰脏炎、全部血球减少症、PANDAS(与链球菌(Streptococcus)有关之儿童自体免疫神经精神病症)、肿瘤相关小脑退化、肿瘤相关症候群；肿瘤相关症候群，包括神经肿瘤相关症候群(例如蓝伯-伊顿肌无力症候群或伊顿-蓝伯症候群)；寄生物疾病，诸如利什曼原虫属(Lesihmania)；阵发性夜间血红素尿(PNH)、帕-罗二氏症候群(Parry Romberg syndrome)、睫状体平坦部炎(周边葡萄膜炎)、帕-特二氏症候群(Parsonnage-Turner syndrome)、小病毒感染；类天疱疮，诸如大疱性类天疱疮及皮肤类天疱疮；天疱疮(包括寻常天疱疮)、红斑性天疱疮、落叶状天疱疮、天疱疮黏膜类天疱疮、天疱疮、消化性溃疡、周期性麻痹、周边神经病、静脉周边性脑脊髓炎、恶性贫血(pernicious anemia/anemia perniciosa)、恶性贫血、晶状体抗原性葡萄膜炎、肺硬化、POEMS症候群；结节性多动脉炎，第I型、第II型及第III型；原发性慢性多发性关节炎、多软骨炎(例如难治或复发性多软骨炎)、多内分泌腺自体免疫疾病、多内分泌异常(polyendocrine failure)、多腺体症候群(例如自体免疫多腺体症候群(或多腺体内分泌病症候群))、风湿性多肌痛、多发性肌炎、多发性肌炎/皮肌炎、多神经病、急性多神经根炎、心切开术后症候群、后葡萄膜炎、或自体免疫葡萄膜炎、心肌梗塞后症候群、心包切开术后症候群、链球菌感染后肾炎、疫苗接种后症候群、早老性痴呆、原发性胆汁性肝硬化、原发性甲状腺功能低下、原发性特发性黏液水肿；原发性淋巴球增多症，其包括单株B细胞淋巴球增多症(例如良性单株γ球蛋白病及意义未明之单株γ球蛋白病MGUS)；原发性黏液水肿、原发性进行性MS(PPMS)及复发-缓解型MS(RRMS)、原发性硬化性胆管炎、孕酮皮炎、进行性全身性硬化、增生性关节炎；牛皮癣，诸如斑块型牛皮癣；牛皮癣、牛皮癣性关节炎、肺泡蛋白沈积症、肺部浸润性嗜伊红血球增多、纯红血球贫血或再生不良(purered cell anemia or aplasia，PRCA)、纯红血球再生不良、化脓性或非化脓性窦炎、脓疱性牛皮癣及指甲牛皮癣、肾盂炎、坏疽性脓皮病、奎汶氏甲状腺炎(Quervain's thyreoiditis)、雷诺氏现象、反应性关节炎、反复流产、血压反应降低、反射性交感神经失养症、难治型口炎性腹泻、莱特尔氏病(Reiter'sdisease)或症候群、复发性多软骨炎、心肌或其它组织再灌注损伤、再灌注损伤、呼吸窘迫症候群、腿不宁症候群、视网膜自体免疫、腹膜后纤维化、雷诺氏症候群、风湿性疾病、风湿热、风湿病、类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎、风疹病毒感染、塞氏症候群(Sampter's syndrome)、类肉瘤病、血吸虫病、施密特症候群(Schmidt syndrome)、SCID及埃-巴二氏病毒相关疾病(Epstein-Barr virus-associated disease)、巩膜、巩膜炎、指硬皮病、硬皮病(包括全身性硬皮病)、硬化性胆管炎、播散性硬化；硬化，诸如全身性硬化；感觉神经性听力丧失、血清反应阴性脊椎关节炎、席汉氏症候群(Sheehan'ssyndrome)、夏尔曼氏症候群(Shulman's syndrome)、硅肺病、休格连氏症候群、精子及睾丸自体免疫、蝶窦炎、斯-约二氏症候群(Stevens-Johnson syndrome)、僵人(stiff-man/stiff-person)症候群、亚急性细菌性心内膜炎(SBE)、亚急性皮肤红斑狼疮、突发性听力丧失、苏萨克氏症候群(Susac's syndrome)、西登哈姆氏舞蹈病(Sydenham's chorea)、交感神经性眼炎、全身性红斑狼疮(SLE)(systemic lupus erythematosus/systemic lupus erythematodes)(例如皮肤SLE)、全身性坏死性血管炎及ANCA相关血管炎，诸如彻奇-斯全司血管炎或症候群(CSS)；脊髓痨、高安氏动脉炎、毛细血管扩张、颞动脉炎/巨细胞性动脉炎、血栓闭塞性脉管炎；血小板减少症(例如如由心肌梗塞患者所显现)，包括血栓性血小板减少性紫癜(TTP)，及自体免疫或免疫介导之血小板减少症，诸如特发性血小板减少性紫癜(ITP)，包括慢性或急性ITP；血小板减少性紫癜(TTP)、甲状腺中毒症、组织损伤、托-享二氏症候群(Tolosa-Huntsyndrome)、中毒性表皮坏死溶解、中毒性休克症候群、输血反应、婴儿期短暂性低γ球蛋白血症、横贯性脊髓炎(transverse myelitis/traverse myelitis)、热带肺性嗜伊红血球增多、结核病、溃疡性结肠炎、未分化型结缔组织病(UCTD)、荨麻疹(例如慢性过敏性荨麻疹及慢性特发性荨麻疹，包括慢性自体免疫荨麻疹)、葡萄膜炎(例如前葡萄膜炎)、葡萄膜视网膜炎(uveoretinitis)、瓣膜炎、血管功能障碍、血管炎、脊椎关节炎、水疱性皮肤病、白斑病、韦格纳氏肉芽肿病(现称作伴有多血管炎之肉芽肿病(GPA))、维斯科特-奥尔德里奇症候群(Wiskott-Aldrich syndrome)或X性联高IgM症候群。
在一个实施例中，治疗发炎病症之方法可包含投与抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，该化合物为抗体、抗体片段、肽、糖苷生物碱、反义核酸、核糖核酸酶、类视黄素、高亲和性多聚体、小分子或其任何组合。在另一实施例中，该化合物为抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。在一个实施例中，个体患有由T细胞介导之发炎病症。
在另一实施例中，发炎病症为风湿性疾病(例如类风湿性关节炎、骨关节炎、牛皮癣性关节炎)、脊椎关节病(例如僵直性脊椎炎、反应性关节炎、莱特尔氏症候群)、结晶性关节病(例如痛风、假性痛风、焦磷酸钙沈积病)、多发性硬化症、莱姆病、风湿性多肌痛；结缔组织疾病(例如全身性红斑狼疮、全身性硬化、多发性肌炎、皮肌炎、休格连氏症候群)；血管炎病(例如结节性多动脉炎、韦格纳氏肉芽肿病、彻奇-斯全司症候群)；发炎病状，包括创伤或缺血之后果、类肉瘤病；血管疾病，包括动脉粥样硬化性血管疾病、动脉粥样硬化及血管阻塞性疾病(例如动脉粥样硬化、缺血性心脏病、心肌梗塞、中风、周边血管疾病)、血管支架再狭窄；眼部疾病，包括葡萄膜炎、角膜病、虹膜炎、虹膜睫状体炎、白内障；酸逆流/胃灼热、痤疮、寻常痤疮、过敏及敏感、阿兹海默氏病、哮喘、动脉粥样硬化及血管阻塞性疾病(例如动脉粥样硬化、缺血性心脏病、心肌梗塞、中风、周边血管疾病)及血管支架再狭窄、自体免疫疾病、支气管炎、癌症、心脏炎、白内障、乳糜泻、慢性疼痛、慢性前列腺炎、肝硬化、结肠炎、结缔组织病(例如全身性红斑狼疮、全身性硬化、多发性肌炎、皮肌炎、休格连氏症候群)、角膜病、克罗恩氏病、结晶性关节病(例如痛风、假性痛风、焦磷酸钙沈积病)、痴呆、皮炎、糖尿病、干眼症、湿疹、水肿、气肿、肌肉纤维疼痛、胃肠炎、齿龈炎、丝球体肾炎、心脏病、肝炎、高血压、过敏、发炎性肠病；发炎病状，包括创伤或缺血之后果；胰岛素抗性、间质性膀胱炎、虹膜睫状体炎、虹膜炎、关节疼痛/关节炎/类风湿性关节炎、莱姆病、代谢症候群(症候群X)、多发性硬化症、肌炎、肾炎、肥胖症；眼部疾病，包括葡萄膜炎；骨质减少、骨质疏松症、帕金森氏症(Parkinson's Disease)、骨盆发炎性疾病、牙周病、多动脉炎、多软骨炎、风湿性多肌痛、牛皮癣、再灌注损伤、风湿性关节炎、风湿性疾病(例如类风湿性关节炎、骨关节炎、牛皮癣性关节炎)、类风湿性关节炎、类肉瘤病、硬皮病、窦炎、休格连氏症候群、结肠痉挛、脊椎关节病(例如僵直性脊椎炎、反应性关节炎、莱特尔氏症候群)、全身性念珠菌病、腱炎、移植排斥反应、UTI、阴道炎；血管疾病，包括动脉粥样硬化性血管疾病；血管炎病(例如结节性多动脉炎、韦格纳氏肉芽肿病、彻奇-斯全司症候群)及血管炎。
在另一实施例中，该化合物可为抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。在一个实施例中，抗体可为嵌合、人类化、抗个体基因型、单链、双功能或共特异性抗体。在一个实施例中，抗体可包含氨基酸序列SEQID NO:1、3或5之VL氨基酸序列。在一个实施例中，SEQ ID NO:3之残基3、4、9、24、32、41、47、50、55、71及74可分别为Q、L、S、R、A、G、L、D、E、F及A。在一个实施例中，抗体可包含氨基酸序列SEQ ID NO:2、4或6之VH氨基酸序列。在另一实施例中，SEQ ID NO:3之残基3、4、9、24、32、41、47、50、55、71及74可分别为R、M、F、W、Y、A、F、Y、Q、Y及T。
在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可包含对应于SEQ ID NO:1之残基24至34的轻链CDR1氨基酸序列；对应于SEQ ID NO:1之残基50至56的轻链CDR2氨基酸序列；对应于SEQ ID NO:1之残基89至97的轻链CDR3氨基酸序列；对应于SEQ ID NO:2之残基31至35的重链CDR1氨基酸序列；对应于SEQ ID NO:2之残基50至65的重链CDR2氨基酸序列；或对应于SEQ ID NO:2之残基99至112的重链CDR3氨基酸序列。
在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可包含对应于SEQ ID NO:3之残基24至34的轻链CDR1氨基酸序列；对应于SEQ ID NO:3之残基50至56的轻链CDR2氨基酸序列；对应于SEQ ID NO:3之残基89至97的轻链CDR3氨基酸序列；对应于SEQ ID NO:4之残基31至35的重链CDR1氨基酸序列；对应于SEQ ID NO:4之残基50至66的重链CDR2氨基酸序列；或对应于SEQ ID NO:4之残基99至113的重链CDR3氨基酸序列。
在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可包含分别包含氨基酸序列SEQ ID NO:1及SEQ ID NO:2，分别包含氨基酸序列SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4，或分别包含氨基酸序列SEQ ID NO:5及6的VL及VH序列。
在一个实施例中，用于本发明治疗方法中之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可包含如下CDR区：大致对应于SEQ ID NO:1之残基24至34的轻链CDR1氨基酸序列；大致对应于SEQ ID NO:1之残基50至56的轻链CDR2氨基酸序列；大致对应于SEQ ID NO:1之残基89至97的轻链CDR3氨基酸序列；大致对应于SEQ ID NO:2之残基31至35的重链CDR1氨基酸序列；大致对应于SEQ ID NO:2之残基50至65的重链CDR2氨基酸序列；或大致对应于SEQ ID NO:2之残基99至112的重链CDR3氨基酸序列。
在一个实施例中，用于本发明治疗方法中之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可包含如下CDR区：大致对应于SEQ ID NO:3之残基24至34的轻链CDR1氨基酸序列；大致对应于SEQ ID NO:3之残基50至56的轻链CDR2氨基酸序列；大致对应于SEQ ID NO:3之残基89至97的轻链CDR3氨基酸序列；大致对应于SEQ ID NO:4之残基31至35的重链CDR1氨基酸序列；大致对应于SEQ ID NO:4之残基50至66的重链CDR2氨基酸序列；或大致对应于SEQ ID NO:4之残基99至113的重链CDR3氨基酸序列。
在一个实施例中，用于本发明治疗方法中之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可包含基本上由SEQ ID NO:1之残基24至34组成的轻链CDR1氨基酸序列；基本上由SEQ ID NO:1之残基50至56组成的轻链CDR2氨基酸序列；基本上由SEQ ID NO:1之残基89至97组成的轻链CDR3氨基酸序列；基本上由SEQ ID NO:2之残基31至35组成的重链CDR1氨基酸序列；基本上由SEQ ID NO:2之残基50至65组成的重链CDR2氨基酸序列；或基本上由SEQ ID NO:2之残基99至112组成的重链CDR3氨基酸序列。
在一个实施例中，用于本发明治疗方法中之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可包含如下CDR区：基本上由SEQ ID NO:3之残基24至34组成的轻链CDR1氨基酸序列；基本上由SEQ ID NO:3之残基50至56组成的轻链CDR2氨基酸序列；基本上由SEQ ID NO:3之残基89至97组成的轻链CDR3氨基酸序列；基本上由SEQ ID NO:4之残基31至35组成的重链CDR1氨基酸序列；基本上由SEQ ID NO:4之残基50至66组成的重链CDR2氨基酸序列；或基本上由SEQ ID NO:4之残基99至113组成的重链CDR3氨基酸序列。
在一个实施例中，用于本发明治疗方法中之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可结合氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9或10内之抗原决定基。在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可在由至少一个选自由以下组成之群的氨基酸残基所界定之区域内结合KIR2DL1：105、106、107、108、109、110、111、127、129、130、131、132、133、134、135、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、181及192。在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可在由至少一个选自由以下组成之群的氨基酸残基所界定之区域内结合KIR2DL1及KIR2DL2/3：105、106、107、108、109、110、111、127、129、130、131、132、133、134、135、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、181及192。
在一个实施例中，用于本发明治疗方法中之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体或其抗体片段可直接或间接结合至标记、细胞毒性剂、治疗剂或免疫抑制剂。在一个实施例中，标记可为化学发光标记、顺磁性标记、MRI对比剂、荧光标记、生物发光标记或放射性标记。在一个实施例中，顺磁性标记可为铝、锰、铂、氧、镧、镏、钪、钇或镓。在一个实施例中，细胞毒性剂可为抑制DNA、RNA或蛋白质合成之部分、放射性核种或核糖体抑制蛋白。在一个实施例中，细胞毒性剂可为212Bi、131I、188Re、90Y、长春地辛(vindesine)、甲胺喋呤(methotrexate)、阿霉素(adriamycin)、顺铂(cisplatin)、商陆抗病毒蛋白(pokeweed antiviral protein)、假单胞菌(Pseudomonas)外毒素A、蓖麻毒素、白喉(diphtheria)毒素、蓖麻毒素A链或细胞毒性磷脂酶。
在一个实施例中，用于本发明治疗方法中之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2或抗-KIR2DL3抗体阻断或中和NK抑制作用。在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2或抗-KIR2DL3抗体可结合至KIR2DL1、KIR2DL2或KIR2DL3中之至少一者且中和KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3介导之对NK细胞之细胞毒性的抑制作用。在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2或抗-KIR2DL3抗体之中和可包含使得NK细胞介导之NK标靶细胞特异性溶解增加至少约20%。
在一个实施例中，用于本发明治疗方法中之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2或抗-KIR2DL3抗体可与单株抗体1-7F9、DF200及/或NKVSF1竞争结合相同抗原决定子区。在一个实施例中，用于本发明治疗方法中之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2或抗-KIR2DL3抗体可结合至NK细胞表面上之至少两种抑制性KIR受体。在一个实施例中，用于本发明治疗方法中之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2或抗-KIR2DL3抗体可结合人类KIR2DL受体之共同抗原决定子区。在一个实施例中，用于本发明治疗方法中之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2或抗-KIR2DL3抗体可结合至KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3受体。在一个实施例中，用于本发明治疗方法中之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2或抗-KIR2DL3抗体对KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3之亲和力为至少约104至约1010M-1。在一个实施例中，用于本发明治疗方法中之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2或抗-KIR2DL3抗体对KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3之亲和力可为至少约107至约109M-1。在一个实施例中，用于本发明治疗方法中之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2或抗-KIR2DL3抗体结合KIR之解离常数可小于约100nM。在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2或抗-KIR2DL3抗体可与KIR2DL1加上2DL2/3、3DL1加上3DL2、2DL1(及2DL2/3)加上2DS4，以及2DL1(及2DL2/3)交叉反应，但不与2D24交叉反应。在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2或抗-KIR2DL3抗体可为DF200、1-7F9或NKVSF1抗体。
在一个实施例中，用于本发明治疗方法中之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物可以单疗法形式投与。在一个实施例中，用于本发明治疗方法中之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物可与第二治疗剂组合投与。在一个实施例中，该第二治疗剂可为减轻炎症之药剂。在一个实施例中，该第二治疗剂可为小分子化学剂。在一个实施例中，第二治疗剂可为DMARD，视情况为抗-TNFα抗体、小分子酪氨酸激酶抑制剂或甲氨喋呤(MTX)。在一个实施例中，第二治疗剂可为除具有IgG1或IgG3同型之抗体以外的药剂。
在一个实施例中，用于本发明治疗方法中之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3之化合物可为能够阻断或中和由KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3介导之NK抑制作用且从而增强NK细胞针对以其它方式阻断之标靶细胞的活性之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。在一个实施例中，抗体可为可结合KIR2DL1及KIR2DL2/3之抗-KIR抗体。在一个实施例中，抗-KIR抗体可与1-7F9竞争结合至KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3。
在一个实施例中，抗体可为1-7F9。在一个实施例中，抗体可包含1-7F9之VL域及VH域。在一个实施例中，抗体可包含1-7F9之VL CDR及VH CDR。在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可以医药学上可接受之组合物形式投与，该组合物可包含有效量之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。在一个实施例中，该组合物可不含任何其它医药活性剂。
在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可以一定量投与以使得NK细胞上之KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3实质上完全饱和达至少约1周之时段。在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可以一定量投与以使得NK细胞上之KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3实质上完全饱和达至少约2周之时段。在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可以一定量投与以使得NK细胞上之KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3实质上完全饱和达至少约1个月之时段。在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可以约每2周一次之给药频率多次投与。在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可以约每1个月一次之给药频率多次投与。在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可以约每2个月一次或每2个月以上之时段一次之给药频率多次投与。
在一个实施例中，本发明提供一种治疗自体免疫或发炎病症之组合物，其可包含抗-KIR2DL1抗体及视情况选用之另一活性剂。在另一实施例中，组合物可包含抗-KIR2DL2抗体。在另一实施例中，用于本发明中之组合物可包含抗-KIR2DL3抗体及视情况选用之另一活性剂。在另一实施例中，组合物可包含抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体及视情况选用之另一活性剂。
在一个实施例中，用于治疗自体免疫病症之组合物可包含有效量之抗-KIR2DL1抗体。在一个实施例中，本发明之用于治疗自体免疫病症之组合物可包含有效量之抗-KIR2DL2抗体。在一个实施例中，本发明之用于治疗自体免疫病症之组合物可包含投与有效量之抗-KIR2DL3抗体。在另一实施例中，用于治疗自体免疫病症之组合物可包含投与有效量之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。
在一个实施例中，本发明之用于治疗发炎病症之组合物可包含抗-KIR2DL1抗体。在一个实施例中，本发明之用于治疗发炎病症之组合物可包含抗-KIR2DL2抗体。在一个实施例中，本发明之用于治疗发炎病症之组合物可包含抗-KIR2DL3抗体。在另一实施例中，本发明之用于治疗发炎病症之组合物可包含抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。
在一个实施例中，本发明提供一种制备抗体之方法，其包含(a)用KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽使动物免疫；(b)取得该动物之脾脏且制备单细胞悬浮液；(c)使脾细胞与骨髓瘤细胞融合；(d)在融合瘤选择培养基中培养融合后细胞；(e)培养所得融合瘤；(f)针对特异性抗体产生进行筛选；及(g)选择产生所需抗体之融合瘤。
在一个实施例中，本发明提供一种制备用于治疗发炎或自体免疫病症之抗体的方法，其包含(a)用包含KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之免疫原使非人类哺乳动物免疫；(b)选择来自该免疫之哺乳动物的抗体，其中该等抗体结合该KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽；及(c)选择(b)中增强NK细胞对T细胞之消除作用的抗体。
在一个实施例中，本发明提供一种制备用于治疗发炎或自体免疫病症之抗体的方法，其包含(a)藉由噬菌体呈现技术提供抗体库；(b)库，其中该等抗体结合该KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽；及(c)选择(b)中增强NK细胞对T细胞之消除作用的抗体。
在另一实施例中，上述各种方法中之任一者可进一步视情况藉由应用用一或多种其它治疗剂(例如小分子药剂、DMARD(较佳为不为主要作用方式可为诱导ADCC之抗体))之治疗而改良。
在一个实施例中，本发明提供一种治疗自体免疫病症之方法，其可包含投与有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，治疗发炎病症之方法可包含投与有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，消除或减少与疾病病状有关之T细胞数目的方法可包含在表现KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之细胞存在下使该等T细胞与抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物接触。在一个实施例中，表现KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之细胞为NK细胞。在一个实施例中，其系离体达成。在一个实施例中，其在活体内达成。在一个实施例中，T细胞包括促发炎、活化及/或增殖性T细胞、CD4+T细胞、浸润性T细胞及/或表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞中之一或多者。
在另一实施例中，消除或减少与发炎病症病理有关之T细胞数目的方法可包含投与患有发炎病症之个体可有效减少该等T细胞数目之量的抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，消除或减少与自体免疫病症病理有关之T细胞数目的方法可包含投与患有自体免疫病症之个体可有效减少该等T细胞数目之量的抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在一个实施例中，T细胞包含活化及/或增殖性T细胞、CD4+T细胞、促发炎T细胞及/或表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞。在一个实施例中，T细胞包括以下一或多者：循环中之T细胞；患病或发炎组织中所包含之T细胞；浸润性T细胞；已浸润于疾病组织中之T细胞；滑膜关节组织或滑液中所包含之T细胞；或中枢神经系统、结肠或皮肤组织中所包含之T细胞。在一个实施例中，个体患有至少部分由该等T细胞介导之疾病。
在另一实施例中，活体内消除或减少与发炎或自体免疫病症病理有关之活化及/或增殖性T细胞数目的方法可包含投与患有发炎或自体免疫病症之个体可有效减少该等T细胞数目之量的抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，消除或减少与发炎或自体免疫病症病理有关之CD4+T细胞数目的方法可包含投与患有发炎或自体免疫病症之个体可有效减少该等T细胞数目之量的抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，消除或减少促发炎T细胞数目的方法可包含投与患有发炎或自体免疫病症之个体可有效减少该等T细胞数目之量的抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在一个实施例中，该疾病至少部分由该等T细胞介导。
在另一实施例中，消除或减少浸润性T细胞数目的方法可包含投与患有发炎或自体免疫病症之个体可有效减少该等T细胞数目之量的抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在一个实施例中，该疾病至少部分由该等T细胞介导。在一个实施例中，浸润性T细胞包括以下一或多者：已浸润于疾病组织中之细胞、已浸润于滑膜关节组织或滑液中之细胞，或已浸润于中枢神经系统、结肠或皮肤组织中之细胞。
在另一实施例中，消除或减少表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞数目的方法可包含投与患有发炎或自体免疫病症之个体可有效减少该等T细胞数目之量的抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在一个实施例中，该等T细胞至少部分介导该病症。
在另一实施例中，治疗发炎病症之方法可包含：(a)确定个体是否患有发炎或自体免疫病症；及(b)若该个体患有发炎或自体免疫病症，则用有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗该个体。
在另一实施例中，治疗自体免疫病症之方法可包含：(a)确定个体是否患有发炎或自体免疫病症；及(b)若该个体患有发炎或自体免疫病症，则用有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗该个体。
在另一实施例中，治疗发炎病症之方法可包含：(a)确定个体是否患有至少部分由T细胞介导之发炎病症，及(b)若该个体患有至少部分由该等T细胞介导之发炎病症，则用有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗该个体。在一个实施例中，T细胞包括以下一或多者：促发炎、活化及/或增殖性T细胞、循环中或患病或发炎组织中之T细胞、CD4+T细胞、浸润性T细胞及/或表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞。
在另一实施例中，治疗自体免疫病症之方法可包含：(a)确定个体是否患有至少部分由T细胞介导之自体免疫病症；及(b)若该个体患有至少部分由该等T细胞介导之自体免疫病症，则用有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗该个体。在一个实施例中，T细胞包括以下一或多者：促发炎、活化及/或增殖性T细胞、循环中之T细胞或患病或发炎组织中之T细胞、CD4+T细胞、浸润性T细胞及/或表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞。
在另一实施例中，治疗个体之发炎疾病的方法可包含：(a)评估个体之发炎疾病之存在、阶段及/或进展；及(b)投与该个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，治疗个体之自体免疫疾病的方法可包含：(a)评估个体之自体免疫疾病之存在、阶段及/或进展；及(b)投与该个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在一个实施例中，该方法可包含评估个体之疾病的存在、阶段及/或进展，其可包含分析自体抗体、CRP、任何蛋白水解酶、发炎介体或进行性炎症之标记的含量。在一个实施例中，确定该个体适用于用抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗，投与该个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，治疗个体之发炎疾病的方法可包含：(a)确定该个体是否确诊有发炎疾病；及(b)若该个体确诊有发炎疾病，则投与该患者有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，治疗个体之自体免疫疾病的方法可包含：(a)确定该个体是否确诊有自体免疫疾病；及(b)若该个体确诊有自体免疫疾病，则投与该患者有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，治疗个体之发炎疾病的方法可包含(a)确定该个体是否正经历发炎疾病之发作、危象、恶化或突发；及(b)若该个体经历发炎疾病之发作、危象、恶化或突发，则投与该个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，治疗个体之自体免疫疾病的方法可包含(a)确定该个体是否正经历自体免疫疾病之发作、危象、恶化或突发；及(b)若该个体经历自体免疫疾病之发作、危象、恶化或突发，则投与该个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，治疗个体之发炎疾病的方法可包含(a)确定该个体是否患有特征在于存在T细胞之发炎疾病；及(b)若该个体患有特征在于存在该等T细胞之发炎疾病，则投与该患者有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，治疗个体之自体免疫疾病的方法可包含(a)确定该个体是否患有特征在于存在T细胞之自体免疫疾病；及(b)若该个体患有特征在于存在该等T细胞之自体免疫疾病，则投与该患者有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
在一个实施例中，T细胞可为活化及/或增殖性T细胞、CD4+T细胞、促发炎T细胞、浸润性T细胞及/或表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞。
在一个实施例中，本发明提供治疗正经历发炎疾病之发作、危象、恶化或突发之个体的方法，其可包含投与该个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在一个实施例中，该个体确诊有发炎疾病。在另一实施例中，治疗正经历自体免疫疾病之发作、危象、恶化或突发之个体的方法可包含投与该个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在一个实施例中，该个体患有自体免疫发炎疾病。在另一实施例中，治疗个体之方法可包含：(a)确定个体是否患有发炎或自体免疫病症；及(b)若该个体患有发炎或自体免疫病症，则用有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗该个体。在另一实施例中，治疗个体之方法可包含：(a)确定个体是否患有至少部分由T细胞介导之发炎或自体免疫病症；及(b)若该个体患有至少部分由该等T细胞介导之发炎或自体免疫病症，则用有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗该个体。在另一实施例中，治疗个体之方法可包含：(a)评估个体之发炎或自体免疫疾病之存在、阶段及/或进展；及(b)投与该个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在另一实施例中，治疗个体之方法可包含：(a)确定该个体是否确诊有发炎或自体免疫疾病；及(b)若该个体确诊有发炎或自体免疫疾病，则投与该患者有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
在另一实施例中，治疗个体之方法可包含：(a)确定该个体是否正经历发炎或自体免疫疾病之发作、危象、恶化或突发；及(b)若该个体经历发炎或自体免疫疾病之发作、危象、恶化或突发，则投与该个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。在一个实施例中，该化合物为抗体、抗体片段、肽、糖苷生物碱、反义核酸、核糖核酸酶、类视黄素、高亲和性多聚体、小分子或其任何组合。在一个实施例中，个体患有由T细胞介导之发炎或自体免疫病症。在一个实施例中，自体免疫病症为后天免疫缺乏症候群(AIDS)、后天脾萎缩、急性前葡萄膜炎、急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、急性痛风性关节炎、急性坏死性出血性脑白质炎、急性或慢性窦炎、急性化脓性脑膜炎(或其它中枢神经系统发炎病症)、急性严重炎症、艾迪森氏病、肾上腺炎、成人发作型糖尿病(第II型糖尿病)、成人发作型特发性副甲状腺低能症(AOIH)、无γ球蛋白血症、颗粒球缺乏症、血管炎病(包括血管炎(包括大血管血管炎(包括风湿性多肌痛及巨细胞性(高安氏)关节炎))、过敏病状、过敏性接触性皮炎、过敏性皮炎、过敏性肉芽肿性血管炎、过敏病症、过敏性神经炎、过敏反应、斑形脱发、全秃、阿尔波特氏症候群、肺泡炎(例如过敏性肺泡炎及纤维化肺泡炎)、阿兹海默氏病、淀粉样变性、肌萎缩性侧索硬化(ALS；葛雷克氏病)、嗜伊红血球相关病症(例如嗜伊红血球增多)、全身性过敏反应、僵直性脊椎炎、血管扩张、抗体介导之肾炎、抗-GBM/抗-TBM肾炎、抗原-抗体复合物介导之疾病、抗丝球体基底膜病、抗-磷脂抗体症候群、抗磷脂症候群(APS)、口疮、口疮性口炎、再生不能性贫血、心律不整、动脉硬化、动脉硬化病症、关节炎(例如类风湿性关节炎，诸如急性关节炎、慢性类风湿性关节炎)、慢性渐进性关节炎、变形性关节炎、蛔虫病、曲霉肿(或含有嗜伊红血球之肉芽肿)、曲菌病、无精液症、哮喘(例如支气管哮喘及自体免疫哮喘)、共济失调毛细管扩张症、共济失调硬化、动脉粥样硬化、自闭症、自体免疫血管性水肿、自体免疫再生不能性贫血、自体免疫萎缩性胃炎、自体免疫糖尿病、睾丸及卵巢之自体免疫疾病(包括自体免疫睾丸炎及卵巢炎)、与胶原病有关之自体免疫病症、自体免疫自主神经障碍、自体免疫耳部疾病(例如自体免疫内耳疾病(AGED))、自体免疫内分泌疾病(包括甲状腺炎，诸如自体免疫甲状腺炎)、自体免疫肠病症候群、自体免疫性腺衰竭、自体免疫听力丧失、自体免疫溶血、自体免疫肝炎、自体免疫肝脏病症、自体免疫高脂质血症、自体免疫免疫缺乏症、自体免疫内耳疾病(AIED)、自体免疫心肌炎、自体免疫嗜中性球减少症、自体免疫胰脏炎、自体免疫多内分泌病、第I型自体免疫多腺体症候群、自体免疫视网膜病、自体免疫血小板减少性紫癜(ATP)、自体免疫甲状腺病、自体免疫荨麻疹、自体免疫介导之胃肠疾病、轴突及神经元神经病、巴娄病、白塞氏病、良性家族性及缺血再灌注损伤、良性淋巴球性血管炎、伯格氏病(IgA肾病)、养鸟者肺、失明、伯克氏病、阻塞性细支气管炎(非移植)伴有NSIP、支气管炎、支气管肺炎曲菌病、布鲁顿氏症候群、大疱性类天疱疮、卡普兰氏症候群、心肌病、心血管缺血、卡斯曼氏症候群、乳糜泻、脂肪便症(麸质性肠病)、小脑退化、大脑缺血及伴有血管形成之疾病、恰加斯氏病、通道病(例如癫痫症)、CNS通道病、脉络膜视网膜炎、脉络膜炎、自体免疫血液学病症、慢性活动性肝炎或自体免疫慢性活动性肝炎、慢性接触性皮炎、慢性嗜伊红血球肺炎、慢性疲劳症候群、慢性肝炎、慢性过敏性肺炎、慢性发炎性关节炎、慢性发炎性髓鞘脱失多神经病(CIDP)、慢性难治炎症、慢性黏膜与皮肤性念珠菌病、慢性神经病(例如IgM多神经病或IgM介导之神经病)、慢性阻塞性气管疾病、慢性肺部发炎疾病、慢性复发性多灶性骨髓炎(CRMO)、慢性甲状腺炎(桥本氏甲状腺炎)或亚急性甲状腺炎、彻奇-斯全司症候群、瘢痕性类天疱疮/良性黏膜类天疱疮、CNS发炎病症、CNS血管炎、腹腔病、柯刚氏症侯群、冷凝集素病、息肉状结肠炎、结肠炎(诸如溃疡性结肠炎、胶原性结肠炎)、涉及T细胞浸润及慢性发炎反应之病状、先天性心脏传导阻滞、先天性风疹感染、库姆氏阳性贫血、冠状动脉疾病、科沙奇病毒性心肌炎、CREST症候群(钙质沉着、雷诺氏现象)、克罗恩氏病、冷球蛋白血症、库欣氏症候群、睫状体炎(例如慢性睫状体炎、异时性睫状体炎、虹膜睫状体炎或福斯氏睫状体炎)、囊肿性纤维化、细胞激素诱发之毒性、聋症、退化性关节炎、髓鞘脱失疾病(例如自体免疫髓鞘脱失疾病)、髓鞘脱失神经病、登革热、疱疹样皮炎及异位性皮炎、皮炎(包括接触性皮炎)、皮肌炎、具有急性发炎组分之皮肤病、德维克氏病(视神经脊髓炎)、糖尿病性大动脉病症、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、戴-布二氏贫血、弥漫性间质性肺纤维化、扩张型心肌病、盘状狼疮、涉及白血球渗出之疾病、卓斯勒症候群、杜普伊特伦氏挛缩、埃可病毒感染、湿疹(包括过敏性或异位性湿疹)、脑炎(诸如罗氏脑炎及边缘叶及/或脑干脑炎)、脑脊髓炎(例如过敏性脑脊髓炎及实验性过敏性脑脊髓炎(EAE))、动脉内膜增生、心内膜炎、内分泌性眼病、子宫内膜异位症、心内膜心肌纤维化、晶状体过敏性眼内炎、眼内炎、过敏性肠炎、嗜伊红血球增多-肌痛症候群、嗜伊红血球性筋膜炎、流行性角膜结膜炎、后天性大疱性表皮松懈(EBA)、巩膜外层、巩膜外层炎、埃-巴二氏病毒感染、持久性隆起性红斑、多形红斑、麻风结节性红斑、结节性红斑、胎儿红血球母细胞增多症、食道运动功能障碍、原发性混合型冷球蛋白血症、筛骨、伊文氏症候群、实验性过敏性脑脊髓炎(EAE)、因子VIII缺乏症、农民肺、风湿热、费尔提氏症候群、肌肉纤维疼痛、纤维化肺泡炎、丝虫病、局部区段性丝球体硬化症(FSGS)、食物中毒、额叶萎缩、胃萎缩、巨细胞性动脉炎(颞动脉炎)、巨细胞性肝炎、巨细胞性多肌痛、丝球体肾炎、伴有及不伴有肾病症候群之丝球体肾炎(GN)(诸如慢性或急性丝球体肾炎(例如原发性GN))、古德帕斯彻氏症候群、痛风性关节炎、颗粒球输注相关症候群、肉芽肿病(包括淋巴瘤样肉芽肿病)、伴有多血管炎之肉芽肿病(GPA)、肉芽肿性葡萄膜炎、格雷氏病、古立安-白瑞症候群、点状牛皮癣、阵发性血红素尿、黑-里二氏病、桥本氏病、桥本氏脑炎、桥本氏甲状腺炎、血色病、溶血性贫血或免疫性溶血性贫血(包括自体免疫溶血性贫血(AIHA))、溶血性贫血、A型血友病、亨-舍二氏紫癜、妊娠疱疹、人类免疫缺乏病毒(HIV)感染、痛觉过敏、低γ球蛋白血症、性腺低能症、副甲状腺低能症、特发性尿崩症、特发性面瘫、特发性甲状腺功能低下、特发性IgA肾病、特发性膜性GN或特发性膜性肾病、特发性肾病症候群、特发性肺纤维化、特发性口炎性腹泻、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、IgA肾病、IgE介导之疾病(例如全身性过敏反应以及过敏性及异位性鼻炎)、IgG4相关硬化性疾病、局部回肠炎、免疫复合物肾炎、与由细胞激素及T-淋巴球介导之急性及迟发型过敏症有关之免疫反应、免疫介导之GN、免疫调节性脂蛋白(包括成人或急性呼吸窘迫症候群(ARDS))、包涵体肌炎、感染性关节炎、由抗精原细胞抗体所致之不孕症、全部或部分葡萄膜炎症、发炎性肠病(IBD)、发炎性过度增殖性皮肤疾病、发炎性肌病、胰岛素依赖型糖尿病(第1型)、胰岛炎、间质性膀胱炎、间质性肺病、间质肺纤维化、虹膜炎、缺血再灌注病症、关节炎症、青少年关节炎、青少年皮肌炎、青少年糖尿病、青少年发作型(第I型)糖尿病(包括儿童胰岛素依赖型糖尿病(IDDM))、青少年发作型类风湿性关节炎、川崎氏症候群、干燥性角膜结膜炎、锥虫病、蓝伯-伊顿症候群、利什曼体病、麻风病、白血球减少症、白血球黏附缺乏症、白血球破碎性血管炎、白血球减少症、扁平苔癣、硬化性苔癣、木质性结膜炎、线性IgA皮肤病、线性IgA疾病(LAD)、吕弗勒氏症候群、类狼疮性肝炎、狼疮(包括肾炎、大脑炎、儿童、非肾、肾外、盘状、脱发)、狼疮(SLE)、播散性红斑狼疮、莱姆关节炎、莱姆病、淋巴间质性肺炎、疟疾、男性及女性自体免疫不孕症、上颌骨病、中血管血管炎(包括川崎氏病及结节性多动脉炎)、膜状增生性或膜增生性GN(MPGN)(包括第I型及第II型)及快速进行性GN、膜性GN(膜性肾病)、美尼尔氏病、脑膜炎、显微性结肠炎、显微性多血管炎、偏头痛、微小肾病变、混合型结缔组织病(MCTD)、感染性单核细胞增多症、莫伦氏溃疡、穆-哈二氏病、多灶性运动神经病、多发性内分泌衰竭、多器官损伤症候群(诸如继发于败血症、创伤或出血之多器官损伤症候群)、多器官损伤症候群、多发性硬化症(MS)(诸如脊髓-眼MS)、多发性硬化症、流行性腮腺炎、肌肉病症、重症肌无力(诸如胸腺瘤相关重症肌无力)、重症肌无力、心肌炎、肌炎、发作性睡病、坏死性小肠结肠炎及透壁性结肠炎，及自体免疫发炎性肠病；坏死性、皮肤或过敏性血管炎；新生儿狼疮症候群(NLE)、肾病、肾病症候群、神经疾病、视神经脊髓炎(德维克氏)、视神经脊髓炎、神经性肌强直、嗜中性球减少症、非癌性淋巴球增多症、非肉芽肿性葡萄膜炎、非恶性胸腺瘤、眼部及眼眶发炎病症、眼部瘢痕性类天疱疮、卵巢炎、交感神经性眼炎、眼阵挛肌阵挛症候群(OMS)、眼阵挛或眼阵挛肌阵挛症候群(OMS)，及感觉神经病、视神经炎、肉芽肿性睾丸炎、骨关节炎、复发性风湿病、胰脏炎、全部血球减少症(pancytopenia)、PANDAS(与链球菌有关之儿童自体免疫神经精神病症)、肿瘤相关小脑退化、肿瘤相关症候群；肿瘤相关症候群，包括神经肿瘤相关症候群(例如蓝伯-伊顿肌无力症候群或伊顿-蓝伯症候群)；寄生物疾病，诸如利什曼原虫病(Lesihmania)；阵发性夜间血红素尿(PNH)、帕-罗二氏症候群、睫状体平坦部炎(周边葡萄膜炎)、帕-特二氏症候群、小病毒感染；类天疱疮，诸如大疱性类天疱疮及皮肤类天疱疮；天疱疮(包括寻常天疱疮)、红斑性天疱疮、落叶状天疱疮、天疱疮黏膜类天疱疮、天疱疮、消化性溃疡、周期性麻痹、周边神经病、静脉周边性脑脊髓炎、恶性贫血(pernicious anemia/anemia perniciosa)、恶性贫血、晶状体抗原性葡萄膜炎、肺硬化、POEMS症候群；结节性多动脉炎，第I型、第II型及第III型；原发性慢性多发性关节炎、多软骨炎(例如难治或复发性多软骨炎)、多内分泌腺自体免疫疾病、多内分泌异常、多腺体症候群(例如自体免疫多腺体症候群(或多腺体内分泌病症候群))、风湿性多肌痛、多发性肌炎、多发性肌炎/皮肌炎、多神经病、急性多神经根炎、心切开术后症候群、后葡萄膜炎、或自体免疫葡萄膜炎、心肌梗塞后症候群、心包切开术后症候群、链球菌感染后肾炎、疫苗接种后症候群、早老性痴呆、原发性胆汁性肝硬化、原发性甲状腺功能低下、原发性特发性黏液水肿；原发性淋巴球增多症，其包括单株B细胞淋巴球增多症(例如良性单株γ球蛋白病及意义未明之单株γ球蛋白病MGUS)；原发性黏液水肿、原发性进行性MS(PPMS)及复发-缓解型MS(RRMS)、原发性硬化性胆管炎、孕酮皮炎、进行性全身性硬化、增生性关节炎；牛皮癣，诸如斑块型牛皮癣；牛皮癣、牛皮癣性关节炎、肺泡蛋白沈积症、肺部浸润性嗜伊红血球增多、纯红血球贫血或再生不良(PRCA)、纯红血球再生不良、化脓性或非化脓性窦炎、脓疱性牛皮癣及指甲牛皮癣、肾盂炎、坏疽性脓皮病、奎汶氏甲状腺炎、雷诺氏现象、反应性关节炎、反复流产、血压反应降低、反射性交感神经失养症、难治型口炎性腹泻、莱特尔氏病或症候群、复发性多软骨炎、心肌或其它组织再灌注损伤、再灌注损伤、呼吸窘迫症候群、腿不宁症候群、视网膜自体免疫、腹膜后纤维化、雷诺氏症候群、风湿性疾病、风湿热、风湿病、类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎、风疹病毒感染、塞氏症候群、类肉瘤病、血吸虫病、施密特症候群、SCID及埃-巴二氏病毒相关疾病、巩膜、巩膜炎、指硬皮病、硬皮病(包括全身性硬皮病)、硬化性胆管炎、播散性硬化；硬化，诸如全身性硬化；感觉神经性听力丧失、血清反应阴性脊椎关节炎、席汉氏症候群、夏尔曼氏症候群、硅肺病、休格连氏症候群、精子及睾丸自体免疫、蝶窦炎、斯-约二氏症候群、僵人症候群、亚急性细菌性心内膜炎(SBE)、亚急性皮肤红斑狼疮、突发性听力丧失、苏萨克氏症候群、西登哈姆氏舞蹈病、交感神经性眼炎、全身性红斑狼疮(SLE)(例如皮肤SLE)、全身性坏死性血管炎及ANCA相关血管炎，诸如彻奇-斯全司血管炎或症候群(CSS)；脊髓痨、高安氏动脉炎、毛细血管扩张、颞动脉炎/巨细胞性动脉炎、血栓闭塞性脉管炎；血小板减少症(例如如由心肌梗塞患者所显现)，包括血栓性血小板减少性紫癜(TTP)，及自体免疫或免疫介导之血小板减少症，诸如特发性血小板减少性紫癜(ITP)，包括慢性或急性ITP；血小板减少性紫癜(TTP)、甲状腺中毒症、组织损伤、托-享二氏症候群、中毒性表皮坏死溶解、中毒性休克症候群、输血反应、婴儿期短暂性低γ球蛋白血症、横贯性脊髓炎、热带肺性嗜伊红血球增多、结核病、溃疡性结肠炎、未分化型结缔组织病(UCTD)、荨麻疹(例如慢性过敏性荨麻疹及慢性特发性荨麻疹，包括慢性自体免疫荨麻疹)、葡萄膜炎(例如前葡萄膜炎)、葡萄膜视网膜炎、瓣膜炎、血管功能障碍、血管炎、脊椎关节炎、水疱性皮肤病、白斑病、韦格纳氏肉芽肿病(现称作伴有多血管炎之肉芽肿病(GPA))、维斯科特-奥尔德里奇症候群或X性联高IgM症候群。
在一个实施例中，发炎病症为风湿性疾病(例如类风湿性关节炎、骨关节炎、牛皮癣性关节炎)、脊椎关节病(例如僵直性脊椎炎、反应性关节炎、莱特尔氏症候群)、结晶性关节病(例如痛风、假性痛风、焦磷酸钙沈积病)、多发性硬化症、莱姆病、风湿性多肌痛；结缔组织疾病(例如全身性红斑狼疮、全身性硬化、多发性肌炎、皮肌炎、休格连氏症候群)；血管炎病(例如结节性多动脉炎、韦格纳氏肉芽肿病、彻奇-斯全司症候群)；发炎病状，包括创伤或缺血之后果、类肉瘤病；血管疾病，包括动脉粥样硬化性血管疾病、动脉粥样硬化及血管阻塞性疾病(例如动脉粥样硬化、缺血性心脏病、心肌梗塞、中风、周边血管疾病)、血管支架再狭窄；眼部疾病，包括葡萄膜炎、角膜病、虹膜炎、虹膜睫状体炎、白内障；酸逆流/胃灼热、痤疮、寻常痤疮、过敏及敏感、阿兹海默氏病、哮喘、动脉粥样硬化及血管阻塞性疾病(例如动脉粥样硬化、缺血性心脏病、心肌梗塞、中风、周边血管疾病)及血管支架再狭窄、自体免疫疾病、支气管炎、癌症、心脏炎、白内障、乳糜泻、慢性疼痛、慢性前列腺炎、肝硬化、结肠炎、结缔组织病(例如全身性红斑狼疮、全身性硬化、多发性肌炎、皮肌炎、休格连氏症候群)、角膜病、克罗恩氏病、结晶性关节病(例如痛风、假性痛风、焦磷酸钙沈积病)、痴呆、皮炎、糖尿病、干眼症、湿疹、水肿、气肿、肌肉纤维疼痛、胃肠炎、齿龈炎、丝球体肾炎、心脏病、肝炎、高血压、过敏、发炎性肠病；发炎病状，包括创伤或缺血之后果；胰岛素抗性、间质性膀胱炎、虹膜睫状体炎、虹膜炎、关节疼痛/关节炎/类风湿性关节炎、莱姆病、代谢症候群(症候群X)、多发性硬化症、肌炎、肾炎、肥胖症；眼部疾病，包括葡萄膜炎；骨质减少、骨质疏松症、帕金森氏症、骨盆发炎性疾病、牙周病、多动脉炎、多软骨炎、风湿性多肌痛、牛皮癣、再灌注损伤、风湿性关节炎、风湿性疾病(例如类风湿性关节炎、骨关节炎、牛皮癣性关节炎)、类风湿性关节炎、类肉瘤病、硬皮病、窦炎、休格连氏症候群、结肠痉挛、脊椎关节病(例如僵直性脊椎炎、反应性关节炎、莱特尔氏症候群)、全身性念珠菌病、腱炎、移植排斥反应、UTI、阴道炎；血管疾病，包括动脉粥样硬化性血管疾病；血管炎病(例如结节性多动脉炎、韦格纳氏肉芽肿病、彻奇-斯全司症候群)及血管炎。
在一个实施例中，该化合物可为抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。在一个实施例中，抗体可为嵌合、人类化、抗个体基因型、单链、双功能或共特异性抗体。
在一个实施例中，该抗体之轻链可包含氨基酸序列SEQ ID NO:1、3或5。在一个实施例中，氨基酸序列SEQ ID NO:3之残基3、4、9、24、32、41、47、50、55、71及74分别为Q、L、S、R、A、G、L、D、E、F及A。在一个实施例中，氨基酸序列SEQ ID NO:3之残基3、4、9、24、32、41、47、50、55、71及74分别为R、M、F、W、Y、A、F、Y、Q、Y及T。在一个实施例中，该抗体之重链可包含氨基酸序列SEQ ID NO:2、4或6。在一个实施例中，该抗体可包含对应于氨基酸序列SEQ ID NO:1之残基24至34的轻链CDR1氨基酸序列；对应于氨基酸序列SEQ ID NO:1之残基50至56的轻链CDR2氨基酸序列；或对应于氨基酸序列SEQ ID NO:1之残基89至97的轻链CDR3氨基酸序列。在一个实施例中，该抗体可包含对应于氨基酸序列SEQ ID NO:3之残基24至34的轻链CDR1氨基酸序列；对应于氨基酸序列SEQ ID NO:3之残基50至56的轻链CDR2氨基酸序列；或对应于氨基酸序列SEQ ID NO:3之残基89至97的轻链CDR3氨基酸序列。
在一个实施例中，该抗体可包含对应于氨基酸序列SEQ ID NO:2之残基31至35的重链CDR1氨基酸序列；对应于氨基酸序列SEQ ID NO:2之残基50至65的重链CDR2氨基酸序列；或对应于氨基酸序列SEQ ID NO:2之残基99至112的重链CDR3氨基酸序列。在一个实施例中，该抗体可包含对应于氨基酸序列SEQ ID NO:4之残基31至35的重链CDR1氨基酸序列；对应于氨基酸序列SEQ ID NO:4之残基50至66的重链CDR2氨基酸序列；或对应于氨基酸序列SEQ ID NO:4之残基99至113的重链CDR3氨基酸序列。
在一个实施例中，抗体可包含可分别包含SEQ ID NO:1及SEQ ID NO:2之可变轻链及可变重链序列。在一个实施例中，抗体可包含可分别包含氨基酸序列SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4之可变轻链及可变重链序列。在一个实施例中，抗体可包含可分别包含氨基酸序列SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6之可变轻链及可变重链序列。在一个实施例中，抗体结合以下氨基酸序列内之抗原决定基：SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24。在一个实施例中，抗体可在由至少一个选自由以下组成之群的氨基酸残基所界定之区域内结合KIR2DL1：105、106、107、108、109、110、111、127、129、130、131、132、133、134、135、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、181及192。在一个实施例中，抗体可在由至少一个选自由以下组成之群的氨基酸残基所界定之区域内结合KIR2DL1及KIR2DL2/3：105、106、107、108、109、110、111、127、129、130、131、132、133、134、135、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、181及192。
在一个实施例中，抗体或片段可直接或间接结合至标记、细胞毒性剂、治疗剂或免疫抑制剂。在一个实施例中，标记可为化学发光标记、顺磁性标记、MRI对比剂、荧光标记、生物发光标记或放射性标记。在一个实施例中，顺磁性标记可为铝、锰、铂、氧、镧、镏、钪、钇或镓。在一个实施例中，细胞毒性剂可为抑制DNA、RNA或蛋白质合成之部分、放射性核种或核糖体抑制蛋白。在一个实施例中，细胞毒性剂可为212Bi、131I、188Re、90Y、长春地辛、甲胺喋呤、阿霉素、顺铂、商陆抗病毒蛋白、假单胞菌外毒素A、蓖麻毒素、白喉毒素、蓖麻毒素A链或细胞毒性磷脂酶。
在一个实施例中，抗体阻断或中和NK抑制作用。在一个实施例中，抗体结合至KIR2DL1、KIR2DL2或KIR2DL3中之至少一者且中和KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3介导之对NK细胞之细胞毒性的抑制作用。在一个实施例中，抗体之中和可包含使得NK细胞介导之NK标靶细胞特异性溶解增加至少约20%。
在一个实施例中，抗体与单株抗体1-7F9、DF200及/或NKVSF1竞争结合相同抗原决定子区。在一个实施例中，抗体结合至NK细胞表面上之至少两种抑制性KIR受体。在一个实施例中，抗体结合人类KIR2DL受体之共同抗原决定区。在一个实施例中，抗体结合至KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3受体。
在一个实施例中，抗体对KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3之亲和力为至少约104M-1至约1010M-1。在一个实施例中，抗体对KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3之亲和力为至少约107M-1至约109M-1。在一个实施例中，抗体结合KIR之解离常数可小于约100nM。
在一个实施例中，抗体与KIR2DL1加上2DL2/3、3DL1加上3DL2、2DL1(及2DL2/3)加上2DS4，以及2DL1(及2DL2/3)交叉反应，但不与2D24交叉反应。
在一个实施例中，抗体可为DF200、1-7F9或NKVSF1抗体。
在一个实施例中，抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物可以单疗法形式投与。在一个实施例中，抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物可与第二治疗剂组合投与。在一个实施例中，该第二治疗剂可为减轻炎症之药剂。在一个实施例中，该第二治疗剂可为小分子化学剂。在一个实施例中，第二治疗剂可为DMARD，视情况为抗-TNFα抗体、小分子酪氨酸激酶抑制剂或甲氨喋呤(MTX)。在一个实施例中，第二治疗剂可为除具有IgG1或IgG3同型之抗体以外的药剂。
在一个实施例中，抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3之化合物可为能够阻断或中和由KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3介导之NK抑制作用且从而增强NK细胞针对以其它方式阻断之标靶细胞的活性之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。在一个实施例中，抗体可为结合KIR2DL1及KIR2DL2/3之抗-KIR抗体。在一个实施例中，抗-KIR抗体与1-7F9竞争结合至KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3。在一个实施例中，抗体可为1-7F9。在一个实施例中，抗体可包含1-7F9之VL域及VH域。在一个实施例中，抗体可包含1-7F9之VL CDR及VH CDR。
在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可以医药学上可接受之组合物形式投与，该组合物可包含有效量之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。在一个实施例中，该组合物可不含任何其它医药活性剂。
在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可以一定量投与以使得NK细胞上之KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3实质上完全饱和达至少约1周之时段。在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可以一定量投与以使得NK细胞上之KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3实质上完全饱和达至少约2周之时段。在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可以一定量投与以使得NK细胞上之KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3实质上完全饱和达至少约1个月之时段。在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可以约每2周一次之给药频率多次投与。在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可以约每1个月一次之给药频率多次投与。在一个实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可以约每2个月一次或每2个月以上之时段一次之给药频率多次投与。
本发明亦提供用于治疗自体免疫病症之组合物，其可包含抗-KIR2DL1抗体。在另一实施例中，用于治疗自体免疫病症之组合物可包含抗-KIR2DL2抗体。在另一实施例中，用于治疗自体免疫病症之组合物可包含抗-KIR2DL3抗体。在另一实施例中，用于治疗发炎病症之组合物可包含抗-KIR2DL1抗体。在另一实施例中，用于治疗发炎病症之组合物可包含抗-KIR2DL2抗体。在另一实施例中，用于治疗发炎病症之组合物可包含抗-KIR2DL3抗体。
在另一实施例中，本发明提供抗-KIR2DL1抗体之用途，其用于制备治疗自体免疫病症之药物。在一个实施例中，本发明提供抗-KIR2DL2抗体之用途，其用于制备治疗自体免疫病症之药物。在一个实施例中，本发明提供抗-KIR2DL3抗体之用途，其用于制备治疗自体免疫病症之药物。在一个实施例中，本发明提供抗-KIR2DL1抗体之用途，其用于制备治疗发炎病症之药物。在一个实施例中，本发明提供抗-KIR2DL2抗体之用途，其用于制备治疗发炎病症之药物。在一个实施例中，本发明提供抗-KIR2DL3抗体之用途，其用于制备治疗发炎病症之药物。
在一个实施例中，本发明提供一种制备用于治疗发炎或自体免疫病症之抗体的方法，该方法可包含以下步骤：(a)用可包含KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之免疫原使非人类哺乳动物免疫；(b)选择来自该免疫之哺乳动物的抗体，其中该等抗体结合该KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽；及(c)选择(b)中增强NK细胞对T细胞之消除作用的抗体。
在一个实施例中，本发明提供一种制备用于治疗发炎或自体免疫病症之抗体的方法，该方法可包含藉由噬菌体呈现技术提供抗体库，其中该等抗体结合该KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽；及选择增强NK细胞对T细胞之消除或消耗作用的抗体。
此等态样更全面描述于本文提供之[实施方式]中，且根据本文提供之[实施方式]，本发明之其它态样、特征及优势将为显而易见的。
附图简单说明
图1A展示相较于未经处理之KIR2DL3tg B6小鼠以及经处理及未经处理之C57Bl6小鼠，KIR2DL3tg B6小鼠在用抗体1-7F9处理时PBMC中经CSFE标记之细胞(Con A母细胞)的百分比降低。
图1B展示相较于未经处理之KIR2DL3tg B6小鼠以及经处理及未经处理之C57Bl6小鼠，KIR2DL3tg B6小鼠在用抗体1-7F9处理时经CSFE标记之脾细胞的百分比降低。
图2展示相较于未经处理之KbDb KO cw3tg小鼠，KIR2DL3tg B6小鼠在用抗体1-7F9处理时PBMC及脾脏中KbDb-/-cw3ConA母细胞之存活率降低。
发明描述
为了可充分地了解本文所述之本发明，阐述以下详细描述。详细描述本发明之各种实施例且可藉由所提供之实例来进一步说明。
定义
除非另外定义，否则本文所用之所有技术及科学术语的含义与一般熟习本发明所属技术之人员通常所了解之含义相同。尽管在本发明中或在试验本发明时可使用类似或等同于本文所述方法及物质的方法及物质，但本文描述适合之方法及物质。该等物质、方法及实例仅用于说明，而不意欲具限制性。
除非上下文另外明确规定，否则如本文描述中及贯穿随后之申请专利范围中所用之「一(a)」、「一(an)」及「该」之含义包括复数个参考物。
如本文所用之「抗原呈现细胞」广泛指专职性抗原呈现细胞(例如B淋巴球、单核细胞、树突状细胞及郎格罕氏细胞(Langerhans cell))以及其它抗原呈现细胞(例如角化细胞、内皮细胞、星形胶质细胞、纤维母细胞及寡树突神经胶质细胞)。
如本文所用之「氨基酸」广泛地指天然存在及合成的氨基酸，以及以类似于天然存在之氨基酸的方式发挥功能的氨基酸类似物及氨基酸模拟物。天然存在之氨基酸为由遗传密码编码之氨基酸，以及后来经修饰之氨基酸(例如羟脯氨酸、γ-羧基麸氨酸及O-磷酸丝氨酸)。氨基酸类似物系指与天然存在之氨基酸具有相同基本化学结构(亦即结合至氢、羧基、胺基之碳)且具有R基团的化合物(例如高丝氨酸、正白氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍)。该等类似物具有经修饰之R基团(例如正白氨酸)或经修饰之肽主链，但保留与天然存在之氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物系指具有与氨基酸之一般化学结构不同之结构，但以类似于天然存在之氨基酸的方式发挥功能的化合物。
如本文所用之「无因变性」或「耐受性」广泛地指针对活化受体介导之刺激的耐性(refractivity)。该耐性一般具抗原特异性且在暴露于耐受性抗原之后持续存在。
如本文所用之「抗体」广泛地指抗体之「抗原结合部分」(亦可与「抗体部分」、「抗原结合片段」、「抗体片段」互换使用)以及全抗体分子。如本文所用之术语「抗原结合部分」系指保留特异性结合至抗原(例如KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3)之能力的一或多个抗体片段。已显示可由全长抗体之片段来发挥抗体之抗原结合功能。术语抗体之「抗原结合部分」所涵盖之抗原结合片段的实例包括：(a)Fab片段，其为由VL、VH、CL及CH1域组成之单价片段；(b)F(ab')2片段，其为包含由铰链区之二硫桥键连接之两个Fab片段的二价片段；(c)由VH及CH1域组成之Fd片段；(d)由抗体单臂之VL及VH域组成之Fv片段；(e)dAb片段(Ward等人,(1989)Nature341:544-546)，其由VH域组成；及(f)分离之互补决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段之两个域(即VL及VH)系由各别基因编码，但可使用重组方法藉由可使其成为单一蛋白质链之合成连接子将其连接，其中VL与VH区配对而形成单价分子(称作单链Fv(scFv)；参见例如Bird等人,(1988)Science242:423-426；Huston等人,(1988)Proc Natl.Acad.Sci.USA85:5879-5883；及Osbourn等人,(1998)Nat.Biotechnol.16:778)。术语抗体之「抗原结合部分」亦意欲涵盖此等单链抗体。特定scFv之任何VH及VL序列可连接至人类免疫球蛋白恒定区cDNA或基因组序列，以产生编码完整IgG分子或其它同型之表现载体。亦可利用蛋白质化学或重组DNA技术使用VH及VL来产生Fab、Fv或免疫球蛋白之其它片段。亦涵盖其它形式之单链抗体，诸如双功能抗体。双功能抗体为二价双特异性抗体，其中VH及VL域表现于单一多肽链上，但使用过短而不允许同一链上之两个域配对的连接子，从而迫使该等域与另一链之互补域配对且形成两个抗原结合位点。参见例如Holliger等人,(1993)Proc Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448；Poljak等人,(1994)Structure2:1121-1123。
此外，抗体或其抗原结合部分(抗原结合片段、抗体片段、抗体部分)可为较大免疫黏附分子之一部分，该较大免疫黏附分子由抗体或抗体部分与一或多种其它蛋白质或肽共价或非共价缔合而形成。该等免疫黏附分子之实例包括使用抗生蛋白链菌素核心区来形成四聚scFv分子(Kipriyanov等人,(1995)Hum.Antibodies Hybridomas6:93-101)及使用半胱氨酸残基、标记肽及C端聚组氨酸标签来形成二价且经生物素标记之scFv分子。Kipriyanov等人,(1994)Mol Immunol.31:1047-1058。可分别使用诸如对全抗体进行木瓜蛋白酶消化或胃蛋白酶消化之习知技术自全抗体来制备诸如Fab及F(ab')2片段之抗体部分。此外，可使用如本文所述之标准重组DNA技术来获得抗体、抗体部分及免疫黏附分子。
抗体可为多株、单株、异种、同种异体、同基因抗体，或其经修饰形式，例如人类化、嵌合抗体。较佳的是，本发明之抗体特异性或实质上特异性结合至KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽。如本文所用之术语「单株抗体」及「单株抗体组合物」指仅含有一种能够与抗原之特定抗原决定基发生免疫反应之抗原结合位点的抗体分子群体，而术语「多株抗体」及「多株抗体组合物」指含有多种能够与特定抗原相互作用之抗原结合位点的抗体分子群体。单株抗体组合物通常对与其发生免疫反应之特定抗原呈现单一结合亲和力。
如本文所用之「抗原」广泛地指能够由抗体结合之分子或一部分分子，其另外能够诱导动物产生能够结合至彼抗原之抗原决定基的抗体。抗原可具有一个抗原决定基，或具有一个以上抗原决定基。本文所提及之特异性反应指示抗原将以高选择性方式与其相应抗体反应且不与可被其它抗原激发之多种其它抗体反应。在需要增强对相关特定抗原之免疫反应的状况下，该等抗原包括(但不限于)可引起保护性免疫反应之感染性疾病抗原，该等抗原为例示性的。
如本文所用之「反义核酸分子」广泛地指与编码蛋白质之「有义」核酸互补(例如与双股cDNA分子之编码股互补)、与mRNA序列互补或与基因之编码股互补的核苷酸序列。因此，反义核酸分子可以氢键键结至有义核酸分子。
如本文所用之「细胞凋亡」广泛地指可使用此项技术中已知之技术表征的渐进式细胞死亡。细胞凋亡性细胞死亡特征在于细胞皱缩、胞膜空泡化(membrane blebbing)及染色质凝聚，最终导致细胞破碎。经历凋亡之细胞亦呈现核小体间DNA裂解之特有模式。
如本文所用之「自体免疫」或「自体免疫疾病或病状」广泛地指由个体自身组织引起且针对个体自身组织之疾病或病症，或其共分离(co-segregate)或表现症状或由此产生之病状。
如本文所用之「嵌合抗体」广泛地指一种抗体分子，其中恒定区或其部分经改变、置换或交换，从而使抗原结合位点(可变区)连接至不同或改变之类别、效应功能及/或物种之恒定区，或赋予嵌合抗体以新特性之完全不同之分子，例如酶、毒素、激素、生长因子、药物，可变区或其部分用具有不同或改变之抗原特异性的可变区改变、置换或交换。
如本文所用之「编码区」广泛地指核苷酸序列中包含转译成氨基酸残基之密码子的区域，而术语「非编码区」系指核苷酸序列中不转译成氨基酸之区域(例如5'及3'非转译区)。
如本文所用之「经保守修饰之变异体」适用于氨基酸及核酸序列，且对于特定核酸序列，广泛地指经保守修饰之变异体，其系指编码相同或基本上相同的氨基酸序列之核酸，或其中核酸不将氨基酸序列编码成基本上相同的序列。由于遗传密码简并，所以大量功能相同之核酸编码任何既定蛋白质。该等核酸变异为「沉默变异」，其为一种经保守修饰之变异。本文中每个编码多肽之核酸序列亦描述核酸之每个可能之沉默变异。熟习此项技术者应了解，核酸中之各密码子(例外为AUG，其通常为甲硫氨酸之唯一密码子；及TGG，其通常为色氨酸之唯一密码子)可经修饰而产生功能相同之分子。
如本文所用之「互补决定区」、「高变区」或「CDR」广泛地指见于抗体轻链或重链之可变区中的一或多个高变区或互补决定区(CDR)。参见Kabat等人,(1987)「Sequences of Proteins of Immunological Interest」NationalInstitutes of Health,Bethesda,MD。此等措辞包括如由Kabat等人,(1983)「Sequences of Proteins of Immunological Interest」U.S.Dept.of Health andHuman Services所定义之高变区或抗体3维结构中之高变环。Chothia及Lesk(1987)J Mol.Biol.196:901-917。各链中之CDR由构架区以紧密接近方式固持在一起且与另一链之CDR一起促使形成抗原结合位点。在CDR内存在选定氨基酸，其已被描述为选择性决定区(SDR)，该等区域代表由CDR用于抗体-抗原相互作用之关键接触残基。Kashmiri(2005)Methods36:25-34。
如本文所用之「对照量」广泛地指与标记之测试量相比较的标记之任何量或量之范围。举例而言，标记之对照量可为患有特定疾病或病状之患者或未患该疾病或病状之人员的标记之量。对照量可为绝对量(例如微克/毫升)或相对量(例如信号相对强度)。
如本文所用之「诊断」广泛地指识别病理病状之存在或性质。诊断方法在其灵敏度及特异性方面有所不同。诊断分析之「灵敏度」为测试呈阳性之患病个体的百分比(「真阳性」百分比)。未由分析侦测出之患病个体为「假阴性」。未患病及在分析中测试呈阴性之个体称作「真阴性」。诊断分析之「特异性」为1减去假阳性率，其中「假阳性」率定义为未患疾病而测试呈阳性者的比例。虽然特定诊断方法可能不提供对病状之明确诊断，但若该方法提供有助于诊断之阳性指示，则足矣。
如本文所用之「诊断」广泛地指将疾病或症状分类、确定疾病之严重度、监测疾病进展、预测疾病结果及/或恢复之希望。术语「侦测」亦可视情况涵盖上述任一者。根据本发明诊断疾病在一些实施例中可藉由测定自个体获得之生物样品中本发明之聚核苷酸或多肽的含量来达成，其中所测定之含量可能与疾病易感性或存在或不存在疾病有关。应注意，「自个体获得之生物样品」亦可视情况包含并非以物理方式自个体取得之样品。
如本文所用之「有效量」广泛地指化合物、抗体、抗原或细胞在投与患者以用于治疗疾病时足以达成该对疾病之治疗作用的量。有效量可为可有效防治之量及/或可有效预防之量。有效量可为可有效减轻体征/症状之量、可有效预防体征/症状出现、降低出现体征/症状之严重度、消除体征/症状出现、减缓体征/症状出现之进展、预防体征/症状出现之进展，及/或实现防治体征/症状出现的量。「有效量」可视疾病及其严重度以及所治疗患者之年龄、体重、病史、敏感性及既有病状而不同。出于本发明之目的，术语「有效量」与「治疗有效量」同义。
如本文所用之「细胞外域」广泛地指蛋白质自细胞表面扩展之部分。
如本文所用之「表现载体」广泛地指用于达成活体外或活体内于任何细胞(包括原核、酵母、真菌、植物、昆虫或哺乳动物细胞)中组成性或诱导性表现本发明核酸序列之目的的任何重组表现系统。该术语包括线性或环状表现系统。该术语包括保持游离型或整合至宿主细胞基因组中之表现系统。该等表现系统能够自行复制或不能够自行复制，亦即仅促使短暂表现于细胞中。该术语包括重组表现卡匣，其仅含有重组核酸转录所需之最少组件。
如本文所用之「Fc受体」(FcR)广泛地指免疫球蛋白分子(Ig)之Fc部分的细胞表面受体。Fc受体见于参与免疫反应之许多细胞上。迄今已鉴别之人类FcR之中有识别IgG(命名为FcγR)、IgE(FcεR1)、IgA(FcαR)及聚合IgM/A(FcμαR)的FcR。FcR见于以下细胞类型中：FcεR I(肥大细胞)、FcεRII(多种白血球)、FcαR(嗜中性白血球)及FcμαR(腺上皮细胞、肝细胞)。Hogg(1988)Immunol.Today9:185-86。经广泛研究之FcγR在细胞免疫防御中为重要的，且负责刺激炎症之介体及与自体免疫疾病发病有关之水解酶释放。Unkeless(1988)Annu.Rev.Immunol.6:251-87。FcγR为效应细胞与分泌Ig之淋巴球之间提供重要联系，因为巨噬细胞/单核细胞、多形核性白血球及自然杀手(NK)细胞FcγR赋予由IgG介导之特异性识别的组件。人类白血球具有至少三种不同之IgG受体：hFcγRI(见于单核细胞/巨噬细胞上)、hFcγRII(见于单核细胞、嗜中性白血球、嗜伊红血球、血小板上，可能见于B细胞及K562细胞株上)及FcγIII(见于NK细胞、嗜中性白血球、嗜伊红血球及巨噬细胞上)。
对于T细胞，向T细胞传递共刺激信号涉及不由环孢素A(cyclosporin A)抑制之信号传导路径。另外，共刺激信号可诱导T细胞中细胞激素分泌(例如IL-2及/或IL-10)及/或可防止诱导对抗原之无反应性、诱导无因变性或诱导T细胞之细胞死亡。
如本文所用之「构架区」或「FR」广泛地指抗体之轻链可变区及重链可变区内之一或多个构架区。参见Kabat等人,(1987)「Sequences of Proteins ofImmunological Interest」National Institutes of Health,Bethesda,MD。此等措辞包括在抗体之轻链可变区及重链可变区内插入CDR之间的氨基酸序列区域。
如本文所用之「异源」广泛地指核酸之部分显示核酸包含两个或两个以上在性质上未发现彼此存在相同关系的子序列。举例而言，核酸通常为重组产生，由来自无关基因之两个或两个以上序列排列而产生新功能性核酸(例如启动子来自一种来源而编码区来自另一来源)。同样，异源蛋白质显示该蛋白质包含两个或两个以上在性质上未发现彼此存在相同关系的子序列(例如融合蛋白)。
如本文所用之「高亲和力」广泛地指抗体对目标抗原之KD为至少10-8M，更佳为至少10-9M且甚至更佳为至少10-10M。然而，其它抗体同型之「高亲和力」结合可能不同。举例而言，IgM同型之「高亲和力」结合系指抗体之KD为至少10-7M，更佳为至少10-8M。
如本文所用之「同源性」广泛地指核酸序列与参考核酸序列之间或多肽序列与参考多肽序列之间的相似度。同源性可为部分或完全同源性。完全同源性指示核酸或氨基酸序列相同。部分同源核酸或氨基酸序列为与参考核酸或氨基酸序列不同之核酸或氨基酸序列。同源度可藉由序列比较来确定。术语「序列一致性」可与「同源性」互换使用。
如本文所用之「宿主细胞」广泛地指当中引入有本发明之核酸分子(诸如本发明之重组表现载体)的细胞。宿主细胞可为原核细胞，诸如大肠杆菌；或真核细胞，诸如酵母、昆虫(例如SF9)、两栖动物或哺乳动物细胞，诸如CHO、HeLa、HEK-293，例如培养之细胞、外植体及活体内细胞。术语「宿主细胞」与「重组宿主细胞」在本文中可互换使用。应了解，该等术语不仅意指特定个体细胞，而且意指此种细胞之子代或潜在子代。由于某些修饰可能因突变或环境影响而在继代中存在，所以该子代实际上可能不与母细胞相同，但其仍包括在如本文所用之该术语之范畴内。
如本文所用之「人类化抗体」广泛地包括由非人类细胞产生之具有可变区及恒定区之抗体，其已经改变而更接近地类似于由人类细胞产生之抗体。举例而言，藉由改变非人类抗体氨基酸序列以并入见于人类生殖系免疫球蛋白序列中之氨基酸。本发明之人类化抗体可包括不由人类生殖系免疫球蛋白序列编码之氨基酸残基(例如，在活体外藉由随机或定点突变诱发或在活体内藉由体细胞突变而引入之突变)，例如在CDR中。如本文所用之术语「人类化抗体」亦包括源自另一哺乳动物物种(诸如小鼠)之生殖系的CDR序列已移植于人类构架序列上的抗体。
如本文所用之「杂交」广泛地指互补(包括部分互补)聚核苷酸股在将该等股彼此反向平行排列时由互补核苷酸之间形成氢键而产生的物理相互作用。
如本文所用之「免疫细胞」广泛地指源于造血且在免疫反应中起作用之细胞。免疫细胞包括淋巴球，诸如B细胞及T细胞；自然杀手细胞；及骨髓细胞，诸如单核细胞、巨噬细胞、嗜伊红血球、肥大细胞、嗜碱细胞及颗粒球。
如本文所用之「免疫分析」广泛地指使用抗体来特异性结合抗原的分析。免疫分析特征可在于利用特定抗体之特异性结合特性来分离、靶向及/或定量抗原。
如本文所用之「免疫反应」广泛地指T细胞介导及/或B细胞介导之免疫反应，其受调节T细胞共刺激影响。例示性免疫反应包括B细胞反应(例如抗体产生)、T细胞反应(例如细胞激素产生及细胞之细胞毒性)及细胞激素反应性细胞(例如巨噬细胞)活化。如本文所用之术语「下调」就免疫反应而言包括任一或多种免疫反应减少，而术语「上调」就免疫反应而言包括任一或多种免疫反应增强。应了解，一类免疫反应上调会引起另一类型免疫反应相应下调。举例而言，某些细胞激素(例如IL-10)之产生上调可能引起细胞免疫反应下调。
如本文所用之「发炎病状或发炎疾病」广泛地指慢性或急性发炎疾病。
如本文所用之「分离」广泛地指将物质自其所天然存在之原始环境中获取且因此自其天然环境经人为改变。分离之物质可为例如载体系统中所包括之外源核酸、宿主细胞内所含之外源核酸，或自原始环境中获取且因此经人为改变之任何物质(例如「分离之抗体」)。举例而言，如本文所用之「分离」或「纯化」广泛地指蛋白质、DNA、抗体、RNA或其生物活性部分实质上不含细胞物质或来自生物物质所源于之细胞或组织来源的其它污染性蛋白质，或实质上不含在化学合成时存在之化学前驱体或其它化学物质。措辞「实质上不含细胞物质」包括蛋白质已与分离出其或重组产生其之细胞之细胞组分分离的KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3蛋白质制剂。
如本文所用之「K-assoc」或「Ka」广泛地指特定抗体-抗原相互作用之缔合速率，而如本文所用之术语「Kdiss」或「Kd」系指特定抗体-抗原相互作用之解离速率。如本文所用之术语「KD」意欲指解离常数，其系由Kd相对于Ka之比率(亦即Kd/Ka)所获得，且表示为莫耳浓度(M)。抗体之KD值可使用此项技术中公认之方法来测定。
如本文所用之「标记」或「可侦测部分」广泛地指可由光谱、光化学、生物化学、免疫化学、化学或其它物理方式侦测的组合物。
如本文所用之「低严格度」、「中等严格度」、「高严格度」或「极高严格度条件」广泛地指用于核酸杂交及洗涤之条件。关于进行杂交反应之指导可见于Ausubel等人,(2002)Short Protocols in Molecular Biology(第5版)John Wiley&Sons,NY中。例示性特异性杂交条件包括(但不限于)：(1)低严格度杂交条件为在约45℃下于6×氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中，继而至少在50℃下于0.2×SSC、0.1%SDS中洗涤两次(对于低严格度条件而言，洗涤温度可升高至55℃)；(2)中等严格度杂交条件为在约45℃下于6×SSC中，继而在60℃下于0.2×SSC、0.1%SDS中洗涤一或多次；(3)高严格度杂交条件为在约45℃下于6×SSC中，继而在65℃下于0.2×SSC、0.1%SDS中洗涤一或多次；及(4)极高严格度杂交条件为在65℃下0.5M磷酸钠、7%SDS，继而在65℃下于0.2×SSC、1%SDS中洗涤一或多次。
如本文所用之「哺乳动物」广泛地指哺乳动物纲之任何及所有温血脊椎动物，包括人类，其特征在于皮肤上覆盖有毛发且雌性存在有用于养育幼仔之产生乳汁之乳腺。哺乳动物之实例包括(但不限于)羊驼、犰狳、水豚、猫、骆驼、黑猩猩、绒鼠、牛、狗、山羊、大猩猩、仓鼠、马、人类、狐猴、美洲驼、小鼠、非人类灵长类动物、猪、大鼠、绵羊、鼯、松鼠及貘。哺乳动物包括(但不限于)牛、狗、马、猫、鼠类、羊、猪、灵长类动物及啮齿动物物种。哺乳动物亦包括由华盛顿之史密森尼学会(Smithsonian Institution)之国家自然历史博物馆(National Museum of Natural History)所保存之世界哺乳动物物种(Mammal Species of the World)上所列出的任何及所有哺乳动物。
如本文所用之「天然存在之核酸分子」广泛地指具有自然界中存在之核苷酸序列(例如编码天然蛋白质)的RNA或DNA分子。
如本文所用之「核酸」或「核酸序列」广泛地指呈单股或双股形式之脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸寡核苷酸。该术语涵盖含有天然核苷酸之已知类似物之核酸，亦即寡核苷酸。该术语亦涵盖具有合成主链之核酸样结构。除非另外指示，否则特定核酸序列亦隐含地涵盖其经保守修饰之变异体(例如简并密码子取代)及互补序列以及明确指示之序列。术语核酸可与基因、cDNA、mRNA、寡核苷酸及聚核苷酸互换使用。
如本文所用之「可操作地连接」广泛地指使两个DNA片段接合以使由该两个DNA片段编码之氨基酸序列保持同框。
如本文所用之「互补位」广泛地指抗体中识别抗原之部分(例如抗体之抗原结合位点)。互补位可为抗体Fv区中之小型区域(例如15至22个氨基酸)且可含有抗体重链及轻链之部分。参见Goldsby等人,Antigens(第3章)Immunology(第5版)New York:W.H.Freeman and Company,第57-75页。
如本文所用之「患者」广泛地指任何需要治疗以减轻疾病病况或防止疾病病况出现或复发的动物。并且，如本文所用之「患者」广泛地指任何具有风险因素、疾病病史、敏感性、症状、体征、先前经诊断、有患病风险或为疾病之患者群体成员的动物。患者可为临床患者(诸如人类)或兽医学患者，诸如伴侣动物、驯养动物、家畜、外来动物或动物园动物。术语「个体」可与术语「患者」互换使用。
「多肽」、「肽」及「蛋白质」可互换使用且广泛地指氨基酸残基之聚合物。该等术语适用于一或多个氨基酸残基为相应之天然存在的氨基酸之类似物或模拟物的氨基酸聚合物以及天然存在之氨基酸聚合物。该等术语适用于一或多个氨基酸残基为相应之天然存在的氨基酸之人工化学仿真物的氨基酸聚合物以及天然存在之氨基酸聚合物及非天然存在之氨基酸聚合物。多肽可例如藉由添加碳水化合物残基以形成醣蛋白来修饰。术语「多肽」、「肽」及「蛋白质」包括醣蛋白以及非醣蛋白。
如本文所用之「启动子」广泛地指导引核酸转录之一系列核酸序列。如本文所用之启动子包括靠近起始转录位点之必需核酸序列，诸如在聚合酶II型启动子的状况下包括TATA组件。启动子亦视情况包括远侧强化子或阻遏子组件，其位置距离起始转录位点可多达数千个碱基对。「组成性」启动子为在大部分环境及研发条件下具活性之启动子。「诱导性」启动子为在环境或研发调控下具活性之启动子。
如本文所用之「防治有效量」广泛地指化合物在投与患者以用于防治疾病或预防疾病复发时足以达成该对疾病或复发之防治的量。防治有效量可为有效预防体征及/或症状出现之量。「防治有效量」可视疾病及其严重度以及所治疗患者之年龄、体重、病史、病状易感性、既有病状而不同。
如本文所用之「防治」广泛地指在患者不存在体征及/或症状，体征及/或症状有所缓解或患者先前存在体征及/或症状的情况下进行之治疗过程。防治包括在患者中预防疾病在治疗疾病之后出现。此外，预防包括治疗可能潜在患上疾病之患者，尤其易患疾病之患者(例如患者群体之成员、具有风险因素者，或有患病风险者)。
如本文所用之「重组」对于产物(例如细胞或核酸、蛋白质或载体)而言广泛地指示细胞、核酸、蛋白质或载体已藉由引入异源核酸或蛋白质或改变原生核酸或蛋白质而得到修饰，或细胞源自经如此修饰之细胞。因此，举例而言，重组细胞表现并非见于原生(非重组)形式之细胞内之基因或表现以其它方式异常表现、低表现或根本不表现之原生基因。
如本文所用之「特异性(或选择性)结合」至抗体或「特异性(或选择性)免疫反应性」或「特异性相互作用或结合」广泛地系关于蛋白质或肽(或其它抗原决定基)，在一些实施例中系关于决定异源蛋白质及其它生物制剂群体中该蛋白质之存在的结合反应。举例而言，在指定免疫分析条件下，指定抗体与特定蛋白质之结合为背景(非特异性信号)之至少两倍且指定抗体不实质上以显著量结合至样品中存在之其它蛋白质。通常，特异性或选择性反应将为背景信号或噪声的至少两倍且更通常为背景的约10至100倍以上。
如本文所用之「可特异性杂交」及「互补」广泛地指核酸可藉由传统沃森-可瑞克(Watson-Crick)或其它非传统类型与另一核酸序列形成氢键。核酸分子与其互补序列之结合自由能足以允许发挥核酸之相关功能，例如RNAi活性。对核酸分子之结合自由能的测定在此项技术中为熟知的。参见例如Turner等人,(1987)CSH Symp.Quant.Biol.LII:123-33；Frier等人,(1986)PNAS83:9373-77；Turner等人,(1987)J.Am.Chem.Soc.109:3783-85。互补百分比指示核酸分子中可与第二核酸序列形成氢键(例如沃森-可瑞克碱基配对)的连续残基之百分比(例如10个中有约至少5个、6个、7个、8个、9个、10个为约至少50%、60%、70%、80%、90%及100%互补(包括正好为50%、60%、70%、80%、90%及100%))。「完全互补」或100%互补广泛地指核酸序列中所有连续残基皆与第二核酸序列中之相同数目之连续残基以氢键键结。「实质性互补」系指聚核苷酸股展现约至少90%互补性，排除聚核苷酸股中经选为非互补之区域(诸如突出物)。特异性结合需要足够之互补度以避免寡聚化合物在需要特异性结合之条件下，亦即在活体内分析或治疗性处理的状况下于生理条件下，或在活体外分析的状况下于进行分析之条件下非特异性结合至非目标序列。非目标序列通常有至少5个核苷酸不同。
如本文所用之疾病之「体征」广泛地指可在检查患者时发现的任何指示疾病之异常；客观疾病迹象，其与症状相反，症状为疾病之主观迹象。
如本文所用之「固体支撑物」、「支撑物」及「基质」广泛地指提供可连接另一物质之固体或半固体结构的任何物质，包括(但不限于)平滑支撑物(例如金属、玻璃、塑料、硅及陶瓷表面)以及刻花及多孔材料。
如本文所用之「个体」广泛地指适于根据本发明加以治疗的任一者，包括(但不限于)禽类及哺乳动物个体且较佳为哺乳动物。本发明之哺乳动物包括(但不限于)狗、猫、牛、公山羊、马、绵羊、猪、啮齿动物(例如大鼠及小鼠)、兔类动物、灵长类动物、人类。任何需要根据本发明治疗之哺乳动物个体为适合的。两种性别及处于任何发育阶段(亦即新生儿、婴儿、青少年、青年期、成年)之人类个体可根据本发明来治疗。亦可出于兽医学目的及出于药物筛选及药物研发目的对动物个体，尤其哺乳动物个体，诸如小鼠、大鼠、狗、猫、牛、山羊、绵羊及马实施本发明。「个体」可与「患者」互换使用。
如本文所用之疾病之「症状」广泛地指由患者所遭受且指示疾病的相对于正常结构、功能或感觉的任何病态现象或偏差。
如本文所用之「T细胞」广泛地指CD4+T细胞及CD8+T细胞。术语T细胞亦包括第1型辅助T细胞及第2型辅助T细胞。
如本文所用之「疗法」、「治疗性」、「治疗(treating)」或「治疗(treatment)」广泛地指治疗疾病、阻止或减少疾病或其临床症状产生，及/或减轻疾病、使得疾病或其临床症状消退。疗法涵盖防治、治疗、医冶、减少、减轻及/或缓解疾病、疾病之体征及/或症状。疗法涵盖减轻具有进行性疾病体征及/或症状(例如炎症、疼痛)之患者的体征及/或症状。疗法亦涵盖「防治」。术语「减少」出于疗法之目的广泛地指体征及/或症状在临床上显著减少。疗法包括治疗复发或复发性体征及/或症状(例如炎症、疼痛)。疗法涵盖(但不限于)防止体征及/或症状在任何时候出现以及减少现有体征及/或症状及减少或消除现有体征及/或症状。疗法包括治疗慢性疾病(「维持」)及急性疾病。举例而言，治疗包括治疗或预防体征及/或症状(例如炎症、疼痛)复发或反复。
如本文所用之「可变区」或「VR」广泛地指抗体中各对轻链与重链内直接与抗体结合至抗原有关的域。各重链在一端具有可变域(VH)，继之以多个恒定域。各轻链在一端具有可变域(VL)且在其另一端具有恒定域；轻链之恒定域与重链之第一恒定域对准，且轻链可变域与重链之可变域对准。
如本文所用之「载体」广泛地指一种核酸分子能够转运其所连接之另一核酸分子。一类载体为「质体」，其系指当中可接合其它DNA段之环状双股DNA环。另一类载体为病毒载体，其中其它DNA段可接合至病毒基因组中。某些载体能够在引入有其之宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起点之细菌载体及游离型哺乳动物载体)。其它载体(例如，非游离型哺乳动物载体)在引入宿主细胞中之后整合至宿主细胞之基因组中，且藉此与宿主基因组一起加以复制。此外，某些载体能够导引其可操作地连接之基因表现。该等载体在本文中称作「重组表现载体」或简称为「表现载体」。一般而言，在重组DNA技术中具效用之表现载体通常呈质体形式。在本说明书中，「质体」与「载体」可互换使用，因为质体为载体之最常用形式。然而，本发明意欲包括发挥等同功能之其它形式之表现载体，诸如病毒载体(例如，复制缺陷反转录病毒、腺病毒及腺相关病毒)。技术及程序一般根据此项技术中熟知之习知方法且如贯穿本说明书所引用及论述之各种一般及更特定的参考文献中所述来进行。参见例如Sambrook等人,(2001)Molec.Cloning:Lab.Manual[第3版]Cold Spring Harbor Laboratory Press。可对重组DNA、寡核苷酸合成及组织培养以及转型(例如电穿孔、脂质体转染)使用标准技术。可根据制造商说明书或如此项技术中通常所达成或如本文所述进行酶促反应及纯化技术。关于本文所述之分析化学、合成有机化学以及医学及医药化学所用之命名法以及上述方面之实验室程序及技术为此项技术中熟知且通常使用者。可使用标准技术进行化学合成、化学分析、药物制备、调配及传递以及治疗患者。
NK细胞抑制性受体KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3
KIR为细胞表面醣蛋白，包含1至3个细胞外免疫球蛋白样域，其由某些T细胞以及大部分人类NK细胞所表现。多种KIR经充分表征(参见例如Carrington及Norman,The KIR Gene Cluster,2003年5月28日，可经由国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information，NCBI)网站得到)。人类KIR包括KIR2DL及KIR3DL(KIR亦可以各种其它名称来提及，诸如CD158e1、CD158k、CD158z、p58KIR CD158e1(p70)、CD244)。参见例如美国专利申请公开案第2004/0038894号；Radaev等人,Annu.Rev.Biophys.Biomol.Struct.,32:93-114(2003)；Cerweknka等人,Nat.Rev.Immunol.1:41-49(2001)；Farag等人,Expert Opin.Biol.Ther.,3(2):237-250(2003)；Biassoni等人,J.Cell.Mol.Med.,7(4):376-387(2003)；及Warren等人,British J.Haematology,121:793-804(2003)，其各自据此以全文引用之方式并入本文中。多种KIR之结构已经阐明且揭示此等蛋白质之间有显著结构相似性。参见例如Radaev等人(同上)。
KIR可在结构上以及功能上进行分类。举例而言，大部分KIR具有两个Ig结构域(58kDa KIR2D KIR)，而其它者具有三个Ig结构域(70kDa KIR3DKIR)(有时分别称为p58及p70分子)。KIR之胞质尾区长度亦不同。通常，具有相对较长胞质尾区(L)之KIR传递抑制性信号，而具有短胞质尾区(S)之KIR可活化NK或T细胞反应。对KIR之命名因此可基于细胞外域数目(KIR2D或KIR3D)及胞质尾区是否长(KIR2DL或KIR3DL)抑或短(KIR2DS或KIR3DS)。关于KIR之其它命名信息提供于以下[实施方式]中。「KIR家族」之一些成员为NKCAR，或更尤其为「KAR」(例如KIR2DS2及KIR2DS4)；其通常包含一或多个与具有免疫刺激基元(ITAM)之接附分子(例如DAP12)缔合之带电荷跨膜残基(例如Lys)。抑制性KIR之细胞质内部分通常包含一或多个募集磷酸酶之ITIM。抑制性KIR结合至HLA分子之α1/α2域。抑制性KIR看似并非通常需要与接附分子缔合以具活性。除非另外说明，否则诸如「KIR」及其类似术语之术语指「KIR家族」之KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3成员且诸如「KAR」及其类似术语之术语指「KIR家族」之NKCAR成员。
KIR可结合MHC-I分子(例如某些第I类HLA异型)，通常引起对抗且可能超过刺激活化信号之负信号传递至NK细胞，从而阻止NK细胞杀死相关潜在标靶细胞(显然经由ITIM磷酸化及酪氨酸磷酸酶(例如含有SH2域之蛋白质酪氨酸磷酸酶，诸如SHP-1及SHP-2)募集，引起PTK(例如Syk、TcR及/或ZAP70)去磷酸化及/或LAT/PLC复合物形成，抑制及连带破坏ITAM级联)。由于病毒常抑制第I类MHC在其所感染之细胞中表现，所以该等受病毒感染之细胞变得易被NK细胞杀死。由于癌细胞之第I类MHC表现亦常有减少或无，所以此等细胞亦会变得易被NK细胞杀死。感染之细胞亦可在糖基化方面改变结合于MHC中之蛋白质。若此发生，则细胞表现之MHC-I:蛋白质复合物将被改变。若NK相关KIR不能结合至此等「外来」复合物，则不能产生抑制性信号，且将进行溶解。
所有确定之抑制性KIR看似与HLA/MHC抗原之不同子集相互作用，视KIR亚型而定。在人类中，具有两个Ig结构域之KIR(KIR2D)识别HLA-C异型：KIR2DL2(原先称作p58.2)且密切相关基因产物KIR2DL3皆识别第1组HLA-C异型(Cw1、Cw3、Cw7及Cw8)所共有之抗原决定基，而KIR2DL1(p58.1)识别相应第2组HLA-C异型(Cw2、Cw4、Cw5及Cw6)所共有之抗原决定基。KIR2DL1之特异性看似由第2组HLA-C对偶基因之位置80上之Lys残基的存在所决定。KIR2DL2及KIR2DL3识别看似由位置80上Asn残基之存在所决定。实质上大部分HLA-C对偶基因在位置80上具有Asn或Lys残基。一种具有三个Ig结构域之KIR(KIR3DL1(p70))识别HLA-Bw4对偶基因所共有之抗原决定基。最终，具有三个Ig结构域之分子的均二聚体(KIR3DL2(p140))识别HLA-A3及HLA-A11。
任一类型(活化或抑制性)之个别MHC-I特异性NK细胞受体通常不与所有第I类MHC分子相互作用，但特异性结合至某些异型(由单个基因座之不同变异体编码之蛋白质)。此外，个别NK细胞可表现彼此独立地起作用之多种不同之抑制性及/或活化受体。举例而言，在人类中，单个个体体内NK细胞间在存在或不存在既定KIR方面有所不同。在人类中亦存在相对高程度之KIR多形现象，其中某些KIR分子存在于一些而非所有个体体内。尽管KIR及其它识别MHC之抑制性受体可由NK细胞共同表现，但在任何既定个体之NK谱系中，通常存在表现单个KIR之细胞；因此，此后一类型之NK细胞之相应NK细胞活性仅被表现特异性MHC-I对偶基因群之细胞抑制。实际上，新近对群体内KIR基因型多样性程度之评估表明<0.24%之无关个体预期具有相同基因型。最常见白种人单纯型「A」单纯型(约47%至59%之出现率)仅含有一个活化KIR基因(KIR2DS4)及六个抑制性KIR基因座(KIR3DL3、KIR2DL3、KIR2DL1、KIR2DL4、KIR3DL1及KIR3DL2)。剩余「B」单纯型极为多样化且含有2至5个活化KIR基因座(包括KIR2DS1、KIR2DS2、KIR2DS3及KIR2DS5)。
应注意，KIR可用若干别名来称呼，如此处在表1及表2中所反映：
表1-KIR命名
Figure BDA0000462467460000561
Figure BDA0000462467460000571
获自HUGO基因命名委员会(Hugo Gene Nomenclature Committee)网站。
表2-KIR CD命名
常用名称1 常用名称2 CD命名
KIR3DL7 KIRC1 CD158z
KIR2DL2/L3 p58.2/p58.3 CD158b1/b2
KIR2DL1 p58.1 CD158z
KIR2DS6 KIRX CD158b1/b2
KIR2DL4 - CD158c
KIR3DL1/S1 p70 CD158d
KIR2DL5 - CD158e1/e2
KIR2DS5 - CD158f
KIR2DS1 p50.1 CD158h
KIR2DS4 p50.3 CD158i
KIR2DS2 p50.2 CD158j
KIR3DL2 p140 Cd158k
Andre等人,Nature Immunol.2(8):661(2001)。
例示性KIR2DL1、KIR2DL2、KIR2DL3及KIR2DS4分子包含以下各别氨基酸序列：
KIR2DL1细胞外域：
HEGVHRKPSLLAHPGXLVKSEETVILQCWSDVMFEHFLLHREGMFNDTLRLIGEHHDGVSKANFSISRMTQDLAGTYRCYGSVTHSPYQVSAPSDPLDIVIIGLYEKPSLSAQXGPTVLAGENVTLSCSSRSSYDRhYHLSREGEAHERRLPAGPKVNGTFQADFPLGPATHGGTYRCFGSFHDSPYEWSKSSDPLLVSVTGNPSNSWPSPTEPSSKTGNPRHLH
(SEQ ID NO：7)，其中位置16之「X」为P或R，且其中位置114之「X」为P或L，表示对偶基因变异体。
KIR2DL2细胞外域：
HEGVHRKPSLLAHPGRLVKSEETVILQCWSDVRFEHFLLHREGKFKDTLHLIGEHHDGVSKANFSIGPMMQDLAGTYRCYGSVTHSPYQLSAPSDPLDIVITGLYEKPSLSAQPGPTVLAGESVTLSCSSRSSYDMYHLSREGEAHECRFSAGPKVNGTFQADFPLGPATHGGTYRCFGSFRDSPYEWSNSSDPLLVSVIGNPSNSWPSPTEPSSKTGNPRHLH(SEQIDNO：8)。
KIR2DL3细胞外域：
HEGVHRXPSLLAHPGPLVKSEETVILQCWSDVRFQHFLLHREGKFKDTLHLIGEHHDGVSKANFSIGPMMQDLAGTYRCYGSVTHSPYQLSAPSDPLDTVITGLYEKPSLSAQPGPTVLAGESVTLSCSSRSSYDMYHLSREGEAHERRFSAGPKVNGTFQADFPLGPATHGGTYRCFGSFRDSPYEWSNSSDPLLVSVTGNPSNSWPSPTEPSSETGNPRHLH(SEQIDNO:9)。
KIR2DS4细胞外域：
QEGVHRKPSFLALPGHLVKSEETVILQCWSDVMFEHFLLHREGKFNNTLHLIGEHHDGVSKANFSIGPMMPVLAGTYRCYGSVPHSPYQLSAPSDPLDMV(SEQIDNO.10)。
中和KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3相关NK细胞抑制作用
抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可基于其阻断或中和NK抑制作用且从而增强NK细胞针对以其它方式阻断之标靶细胞(例如T细胞、CD4+T细胞)之活性的能力来表征。如上所示，在本发明上下文中可使用结合至至少一种KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3足够长时间以中和KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3介导之对NK细胞之NK细胞毒性之抑制作用的抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。该等抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可以原生形式直接用作治疗剂。本发明之更尤其有利之特征为与两种或两种以上KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3交叉反应且中和与该等相关KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3中之一些或所有(通常较佳所有)KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3有关之抑制性活性的抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。
中和性抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可部分或完全中和KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3介导之对NK细胞之细胞毒性之抑制作用。中和系指对以其它方式存在之抑制信号的任何实质阻断。可藉由任何适合方法量测中和作用。在一个态样中，对抑制作用之中和反映在中和性抗-KIR抗体使NK与NK标靶细胞之特定混合物中之NK细胞介导之特异性溶解相较于通常在实质上相同之情形但不存在抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体之情况下出现的特异性溶解之量增加至少约20%、较佳至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60%、至少约75%或75%以上(例如约25%至100%)。当藉由例如与由NK标靶细胞(例如T细胞、任何适合之细胞株)与未阻断相关KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3之NK细胞之混合物(100%)及NK细胞与NK标靶细胞之混合物(其中NK标靶细胞呈现KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3之配体)(0%)获得之铬释放毒性测试分析法结果比较来研究抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体或其它抗体时可测定此态样中之增加百分比。在抗-KIR抗体之状况下，可与由NK标靶细胞与未阻断相关KIR之NK细胞之混合物(100%)及NK细胞与NK标靶细胞之混合物(其中NK标靶细胞呈现NK细胞上之抑制性KIR的同源第I类MHC分子)(0%)获得之铬释放毒性测试分析法结果进行比较。在一有利态样中，本发明提供抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体，其诱导在不存在该抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体的情况下不会有效溶解之细胞溶解。或者，中和KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3抑制性活性可由例如铬分析法结果来指示，该铬分析法使用表现一种或若干种抑制性KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3(例如KIR、NKG2、NKG2A、LIR(例如LILRB1、LILRB5))之NK细胞纯系或转染物及仅表现一种由NK细胞上之一种KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3所识别之配体(例如HLA多肽或对偶基因、HLA-E)的标靶细胞，其中在抗体存在下获得之细胞毒性度为在针对KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3之配体的已知阻断性抗体存在下所观测到之细胞毒性的至少约20%，诸如至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60%、至少约70%或70%以上(例如约25%至100%)。举例而言，当测试抗-KIR抗体时，在实质上相同情形下投与抗第I类MHC分子抗体，诸如W6/32抗第I类MHC抗体(其当前可自例如Research Diagnostics,Flanders,NJ,USA得到及描述于例如Shields等人,Tissue Antigens.1998年5月;51(5):567-70中)。
评估NK细胞之细胞溶解活性之铬释放分析法及其它方法在此项技术中已知。适用于该等分析法之条件亦为熟知的。藉由以下进行典型铬释放分析法：用Na2 51CrO4标记标靶细胞(例如Cw3及/或Cw4阳性细胞株，微量滴定盘中约例如每孔5000个细胞)(以使51Cr溶解且由活标靶细胞保留)，洗涤以移除过量放射性，随后在抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体存在或不存在下以适合之效应物:标靶比率(例如约4:1)暴露于NK细胞达约4小时之时间，及量测后续51Cr含量，从而反映标靶细胞死亡及溶解。该分析法之实例描述于例如Moretta等人(1993)J Exp Med178:597-604中。在相似分析法中，可用3H-胸苷标记增殖之标靶细胞，3H-胸苷可并入复制之DNA中。在NK细胞发挥细胞溶解作用后，标靶细胞之DNA快速断裂且保留于滤液中，而未断裂之大DNA可收集于过滤器上，因此可量测此等片段之释放量或3H-胸苷于细胞DNA中之保留量。关于该等分析法之其它实例及相关论述可见于例如WO2006/072625中。
在另一态样中，本发明提供抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体，其特征在于能够与交叉反应性及/或中和性抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体竞争结合至同源KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3及/或能够与该等已知抗体结合至同一抗原决定子区/抗原决定基。短语「与......竞争」在提及特定单株抗体(例如1-7F9)时意谓在使用重组KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3分子或表面表现之KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3分子的结合分析法中抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体与参考抗体或其它分子竞争。举例而言，若抗-KIR抗体在结合分析法中可侦测地抑制1-7F9结合至通常由1-7F9结合之KIR分子，则该抗-KIR抗体可称为与1-7F9「竞争」。与1-7F9「竞争」之抗-KIR抗体可与1-7F9竞争结合至KIR2DL1人类受体、KIR2DL2/3人类受体，或KIR2DL1及KIR2DL2/3人类受体两者。
尽管常相关，但在与参考结合蛋白竞争方面相较于蛋白质与参考蛋白结合至同一或实质上相似抗原决定基之能力描述蛋白质在一些状况下表示显著不同之生物学及物理化学特性。结合蛋白之间的竞争表示测试抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体结合至与抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体所结合之抗原决定基至少部分重迭或位于与该抗原决定基足够近的位置上以使该抗-KIR抗体因位阻而与已知抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体竞争的抗原决定基。抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可在不结合至相同或相似抗原决定基之情况下因抗体尺寸较大而与参考抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体竞争。该种竞争性抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体即使结合不同抗原决定子亦可适用于阻断与同参考抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体相同的抗原决定区有关之相互作用。
在另一例示性态样中，本发明提供一种抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体，其与可用之抗-KIR抗体(诸如1-7F9、DF200及/或NKVSF1)结合至实质上相同之抗原决定子区。参见例如WO2006/003179。
竞争系指在结合于结合搭配物之另一分子存在下特定分子结合特定结合搭配物之倾向的任何显著降低。通常，竞争意谓在竞争性分子(例如抗-KIR抗体)存在下例如抗-KIR抗体与至少一种KIR之间的结合减少至少约15%，诸如结合减少至少约20%(例如结合减少约25%或25%以上、约30%或30%以上、约15%至35%)。在某些情形下，诸如在属于竞争性抗体之抗原决定基紧密地位于抗原中的状况下，竞争可由以下来指示：受体(例如KIR)结合约40%以上相对抑制、至少约50%抑制、至少约55%抑制、至少约60%抑制、至少约75%抑制或更高程度之抑制(诸如约45%至95%之抑制程度)。
评估竞争通常涉及使用第一量之第一分子(例如抗-KIR抗体)；第二量之第二分子(例如已知抗-KIR抗体)；及第三量之第三分子(例如KIR)评估相对抑制性结合，其中第一量、第二量及第三量皆足以使得比较得以进行以提供关于相关分子相对于提供之其它分子之选择性及/或特异性的信息。通常，对于ELISA竞争分析法，使用约5μg至50μg(例如约10μg至50μg、约20μg至50μg、约5μg至20μg、约10μg至20μg)之抗-KIR抗体、已知抗-KIR抗体及至少一种KIR评估是否存在竞争。条件亦应适于使竞争性分子结合至其假定/已知标靶。生理条件或接近生理条件(例如约20℃至40℃之温度、约7至8之pH值)可通常适用于抗-KIR抗体：KIR。
可藉由使用免疫分析法来测定两个或两个以上分子之间的竞争(或相对结合抑制)，在该等免疫分析法中，将对照KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3结合分子(例如抗体1-7F9)与测试抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体混合(或预先吸附)且施加于含有相关KIR(诸如KIR2DL1及KIR2DL2/3两者)之样品中(该等KIR各自已知由DF200结合)。基于ELISA、放射免疫分析法、西方墨点法及其类似分析法之方案适用于该等竞争研究中。通常在适于分子结合之条件(例如，生理条件，尤其在抗体结合构形/非线性抗原决定基之状况下)下进行竞争ELISA。竞争亦可藉由例如流动式细胞量测测试、SPR分析及其它技术来评估，该等技术见于例如Harlow等人,Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,ColdSpring Harbor,N.Y.,1988)；Colligan等人编,Current Protocols in Immunology,Greene Publishing Assoc.and Wiley Interscience,N.Y.,(1992,1993)；Ausubel等人编,Short Protocols in Molecular Biology,(第5版),John Wiley&Sons(2002)；及Muller,Meth.Enzymol.92:589-601(1983)中。
可由多种已知技术鉴别抗原决定子区或抗原决定基。举例而言，可藉由「足迹(foot printing)」分析法，诸如经由化学修饰标靶KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3蛋白质中暴露之胺/羧基快速鉴别抗原决定区。该足迹技术之一个特定实例为使用HXMS(藉由质谱侦测之氢-氘交换)，其中受体与配体蛋白质酰胺质子进行氢/氘交换，结合且进行反向交换(back exchange)，其中参与蛋白结合之主链酰胺基受保护而免于反向交换且因此保持氘化。此时可藉由胃蛋白酶蛋白质溶解、快速微孔高效液相层析分离及/或电喷雾电离质谱鉴别相关区域。参见例如Ehring H,Analytical Biochemistry,第267(2)卷,第252-259页(1999)及/或Engen,J.R.及Smith,D.L.(2001)Anal.Chem.73,256A-265A。
适合抗原决定基鉴别技术之另一实例为核磁共振(NMR)抗原决定基定位，其中通常比较游离抗原及与抗原结合肽(诸如抗体)复合之抗原的二维NMR谱中信号之位置。通常用15N选择性同位素标记抗原，以使在NMR谱中仅可见到对应于抗原之信号而不可见来自抗原结合肽之信号。源自涉及与抗原结合肽相互作用之氨基酸的抗原信号在复合物之谱中通常相较于在游离抗原之谱中移动位置，且涉及结合之氨基酸可以彼方式鉴别。参见例如ErnstSchering Res Found Workshop.2004;(44):149-67；Huang等人,Journal ofMolecular Biology281(1):61-67(1998)；以及Saito及Patterson,Methods.1996年6月;9(3):516-24。
亦可使用质谱法进行抗原决定基定位/表征。参见例如Downward,J MassSpectrom.2000年4月;35(4):493-503；以及Kiselar及Downard,Anal Chem.1999年5月1日;71(9):1792-801。
蛋白酶消化技术在抗原决定基定位及鉴别之背景下亦可适用。可藉由蛋白酶消化，例如藉由在37℃及pH7-8下以约1:50之比率使用胰蛋白酶对KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3进行隔夜消化，继而进行质谱(MS)分析以用于肽鉴别来确定抗原决定子相关区域/序列。随后可藉由比较进行胰蛋白酶消化之样品与连同抗体一起培育且接着由例如胰蛋白酶进行消化(从而揭露结合子之足迹)之样品来鉴别由抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3结合子保护而免于胰蛋白酶裂解之肽。其它酶(如胰凝乳酶、胃蛋白酶)或者或此外可用于相似抗原决定基表征方法中。此外，酶促消化可提供在未表面暴露且因此在抗原性方面很可能不相关之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3多肽的情况下分析潜在抗原决定子序列是否处于KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3之区域内的快速方法。关于对相似技术之论述，参见例如Manca,Ann Ist Super Sanita.1991;27(1):15-9。
各种噬菌体呈现技术亦可用于鉴别抗原决定基。参见例如Wang及Yu,Curr Drug Targets.2004年1月;5(1):1-15；Burton,Immunotechnology.1995年8月;1(2):87-94；Cortese等人,Immunotechnology.1995年8月;1(2):87-94；及Irving等人,Curr Opin Chem Biol.2001年6月;5(3):314-24。共同抗原决定基亦可经由改良之噬菌体呈现相关技术来鉴别(参见Mumey等人,J.Comput.Biol.10:555-567；及Mumey,Proceedings of the Sixth Annual InternationalConference on Computational Molecular Biology(RECOMB-02),第233-240页(ACM Press,New York))(关于论述，亦参见Bailey等人,Protein Science(2003),12:2453-2475；Dromey等人,J Immunol.2004年4月1日;172(7):4084-90；Parker等人,Mol Biotechnol.2002年1月;20(1):49-62；及Czompoly等人,BiochemBiophys Res Commun.2003年8月8日;307(4):791-6)。
藉由两种KIR结合分子(其中一者经结合生物素(例如已知抗-KIR抗体)或以其它方式经类似标记)竞争性结合至KIR来进行抗原决定基定位为另一种鉴别相关抗原决定子区之方法。
其它可能有助于定位抗原决定基之方法包括结晶学技术、X射线绕射技术(诸如由Poljak及他人在二十世纪70年代至80年代研发之X射线绕射/序列研究技术)，及应用多针肽合成技术(Multipin Peptide Synthesis Technology)。
基于计算机之方法(诸如序列分析以及三维结构分析及对接)亦可用于鉴别抗原决定子。举例而言，亦可藉由使用KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3或其部分之结构在对接个别mAb之Fab片段之结构的情况下进行分子模型化来确定抗原决定基。必要时，可藉由使用程序(诸如MOE(分子操作环境)(Molecular Operating Environment)，其可自Chemical ComputingGroup(Montreal,Quebec,Canada-www.chemcomp.com)获得)以经结构表征之KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3进行同源性模型化来得到KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3之模型。此等及其它定位方法论述于EpitopeMapping A Practical Approach(Westwood及Hay编)2001Oxford UniversityPress中(亦参见Cason(1994)J Virol Methods.49(2):209-19)。
抗-KIR抗体之特征
有利之抗-KIR抗体可基于功能特征，尤其针对其交叉反应或交叉结合一种以上KIR(诸如一种以上类型之抑制性KIR)之能力及/或有效中和NK抑制信号之能力进行分类。
有效结合至一种以上类型之KIR的抗-KIR抗体为本发明之尤其有利之特征。在一特定例示性态样中，本发明提供结合至NK细胞表面上之至少两种抑制性KIR受体的抗-KIR抗体。在一个更特定的说明性态样中，本发明提供结合人类KIR2DL受体之共同抗原决定子区的抗-KIR抗体。在另一更特定的态样中，本发明提供结合至KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3受体之抗-KIR抗体。
术语「KIR2DL2/3」可用于指KIR2DL2及KIR2DL3受体中之任一者或两者。此两种受体具有极高同源性，为同一基因之对偶基因形式，且被此项技术视作在许多方面可互换。因此，KIR2DL2/3在某些方面可视作单个抑制性KIR分子。虽然与KIR2DL2/3交叉反应之抗-KIR抗体处于本发明范围内，但KIR结合型态仅包括KIR2DL2及KIR2DL3之抗-KIR抗体不视作具「交叉反应性」。
由于KIR2DL1或KID2DL2/3中之至少一者存在于至少约90%之人类群体中，所以KIR2DL1-KIR2DL2/3交叉反应性抗-KIR抗体可促进或增强NK针对大部分HLA-C异型相关细胞(分别为第2组HLA-C异型及第1组HLA-C异型)的活性。在治疗及/或诊断大部分人类个体中可使用包含具有该交叉反应性之单个交叉反应性KIR抗体的组合物，从而不需要对患者进行遗传识别且减少投与至患者以确保有效结果所需之不同抗体之量。
交叉反应性抗-KIR抗体可具有任何适合之组成且可藉由多种适合技术获得。举例而言，交叉反应性抗-KIR抗体可包含结合至不同KIR之多种KIR配体及/或抗-KIR抗体序列，其可藉由结合、多聚化或(在肽配体之状况下)藉由包含于融合蛋白中而缔合于一起。在另一态样中，提供抗-KIR抗体，其包含来自交叉反应性抗-KIR抗体之抗-KIR抗体序列。
可获得或产生KIR结合序列之交叉反应性抗-KIR抗体为已知的。该抗体之实例为抗体NKVSF1(亦称为pan2D mAb；识别CD158a(KIR2DL1)、CD158b(KIR2DL2)及p50.3(KIR2DS4)之共同抗原决定基)，其具有展示于例如WO2006/003179(Innate Pharma;Novo Nordisk;University of Genoa)之图15中之可变区及CDR序列。与KIR家族之各种成员(包括KIR2DL1及KIR2DL2/3)反应的单株抗体DF200为该交叉反应性抗体之另一实例。产生DF200之融合瘤已以标识号「DF200」、注册号CNCM I-3224(在2004年6月10日注册)寄存于CNCM菌种中心(Collection Nationale de Cultures deMicroorganismes,Institut Pasteur,25,Rue du Docteur Roux,F-75724ParisCedex15,France)。可产生若干其它单株抗体且证明为交叉反应性抗-KIR抗体。其它实例为WO2006/003179中所述之抗体1-7F9及1-4F1。
交叉反应性抗-KIR抗体可对其所结合之两种或两种以上KIR具有任何适合之亲和力及/或亲合力。亲和力系指抗-KIR抗体或其它抗原结合蛋白结合至抗原决定基或抗原决定子之强度。通常，亲和力系以解离常数Kd来量度，该解离常数Kd定义为[Ab]×[Ag]/[Ab-Ag]，其中[Ab-Ag]为抗体-抗原复合物之莫耳浓度，[Ab]为未结合之抗体的莫耳浓度且[Ag]为未结合抗原之莫耳浓度。亲和常数Ka系由1/Kd定义。适用于藉由竞争抑制、平衡透析及其类似方法确定结合肽特异性及亲和力的方法可见于例如Harlow等人,Antibodies:ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.,1988)；Colligan等人编,Current Protocols in Immunology,GreenePublishing Assoc.and Wiley Interscience,N.Y.,(1992,1993)；及Muller,Meth.Enzymol.92:589-601(1983)中。
通常，本发明提供之抗-KIR抗体对至少一种KIR具有约104M-1至约1010M-1(例如约107M-1至约109M-1)范围内的亲和力。本文中之术语免疫反应通常系指抗-KIR抗体以低于约10-4M之解离常数Kd结合至KIR。举例而言，在一特定态样中，本发明提供抗-KIR抗体，其对于KIR2DL1及KIR2DL2/3之平均解离常数(KD)为约7×10-9M或7×10-9M以上，如由例如表面电浆共振(SPR)筛选(诸如藉由以
Figure BDA0000462467460000651
SPR分析装置进行分析)所测定。在一更特定例示性态样中，本发明提供抗-KIR抗体，其对于KIR2DL2/3之KD为约2×10-9M(例如约0.1-4×10-9M)或2×10-9M以上且对于KIR2DL1之KD为约11×10-9M(例如约7-15×10-9M)或11×10-9M以上。
可藉由本文别处所述之任何方法或其在此项技术中之已知等效方法来测定亲和力。可用于测定亲和力之一种方法的实例系提供于Munson及Pollard,Anal.Biochem.107:220(1980)之斯卡查德分析(Scatchard analysis)中。结合亲和力亦可藉由平衡法(例如酶联结免疫吸附剂分析法(ELISA)或放射免疫分析(RIA))或动力学分析(例如
Figure BDA0000462467460000661
分析)来测定。
此外或或者，抗-KIR抗体特征可在于展现KIR结合之解离常数如下：小于约100nM、小于约50nM、小于约10nM、约5nM或5nM以下、约1nM或1nM以下、约0.5nM或0.5nM以下、约0.1nM或0.1nM以下、约0.01nM或0.01nM以下，或甚至约0.001nM或0.001nM以下。
亲合力系指结合蛋白与抗原之间总相互作用的总强度(例如抗-KIR抗体与KIR之间相互作用之总强度)。亲和力为抗体或其它结合肽上之单个抗原结合位点与单个抗原决定基或抗原决定子之间总的非共价相互作用的强度。亲合力通常取决于三个主要因素：结合蛋白对其所结合之抗原决定基或抗原决定子之固有亲和力、抗体或结合蛋白及抗原之价数(例如价数为3、4或4以上之抗-KIR抗体相较于二价抗体对抗原通常展现较高程度之亲合力，且二价抗体相较于单价抗体对抗原具有较高亲合力，尤其在抗原中存在重复之抗原决定基的情况下)及/或相互作用组分之几何排列。亲合力通常由与用于评估亲和力之技术相同类型之技术来量测。
在另一态样中，本发明提供与来自两种或两种以上物种之KIR交叉反应的抗-KIR抗体。举例而言，在一个态样中，本发明提供与人类及食蟹猕猴之KIR交叉反应的抗-KIR抗体。在一特定态样中，本发明提供与至少两种人类KIR交叉反应且亦结合至食蟹猕猴之NK细胞的抗-KIR抗体。该种抗-KIR抗体可包含来自或源自展现该种交叉反应性型态之抗体NKVSF1的序列。必要时，可在食蟹猕猴中对该等抗-KIR抗体进行毒性测试及其它适用之研究。
可与多种KIR交叉反应之抗体可用于本发明之组合组合物及方法中。该等抗体之例示性交叉反应性型态包括抗体与KIR2DL1加上2DL2/3交叉反应、与3DL1加上3DL2交叉反应、与2DL1(及2DL2/3)加上2DS4交叉反应，以及与2DL1(及2DL2/3)交叉反应，但不与2DS4交叉反应。
由此，例如，本发明方法或组合物可包含如例如WO2005003168中所述结合KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3且抑制或阻断KIR介导之对NK细胞之细胞毒性的抑制作用之抗-KIR抗体。
适用于本发明组合方法及组合物中之例示性抗-KIR抗体包括如下抗-KIR抗体，其包含对应于抗-KIR抗体DF200之VL区或基本上由该VL区组成(为实质上相似的且保持相似之结合型态及亲和力)的VL区，或与DF200之VL序列高度相似(例如至少约90%一致或95%一致)之VL序列/域。DF200之VL序列展示于WO2006/3179中。该等抗-KIR抗体亦可或者定义为包含DF200之轻链可变区CDR之集合(亦展示于WO2006/3179中)。该种抗体通常亦将包含DF200之VH域或高度相似之序列(例如，与DF200VH域具有高度一致性或者基本上由该种序列组成之序列)或至少DF200之重链可变区CDR(展示于WO2006/3179中)。
在另一例示性态样中，本发明之组合组合物或方法包括如下抗-KIR抗体，其包含对应于抗体1-7F9之VH及VL序列(展示于WO2006/3179中)或与抗体1-7F9之VH及VL序列高度相似(例如基本上由其组成)或至少包含1-7F9之VL及VH CDR的VH及VL序列。
与交叉反应性及/或中和性抗-KIR抗体竞争
在另一态样中，本发明方法或组合物特征在于包含与此等抗体中之一者或并入本文中之参考文献中所述之其它抗-KIR抗体中之一者(例如1-7F9)竞争的抗-KIR抗体。
与例示性抗-KIR抗体(诸如DF200、1-7F9及/或NKVSF1)竞争之抗体可使用已知筛选分析法来鉴别。多种该等分析法按常规实践且在此项技术中为熟知的(参见例如美国专利第5,660,827号，其以引用方式特定并入本文中)。基于例如ELISA、放射免疫分析法、西方墨点法及使用BIACORE分析之方案适用于该等竞争研究中。
可例如预先混合对照抗体(例如DF200、NKVSF1或1-7F9)与不同量之测试抗体(例如以约1:1、1:2、1:10或约1:100之比率)持续一段时间，然后施加于KIR抗原样品中。或者，可在暴露于KIR抗原样品期间简单地单独添加且混合对照物及不同量之测试抗体。只要可区分结合抗体与游离抗体(例如藉由使用分离或洗涤技术以消除未结合之抗体)以及对照抗体与测试抗体(例如藉由使用物种特异性或同型特异性二次抗体或藉由以可侦测标记特异性标记对照抗体)，即能够确定测试抗体是否降低对照抗体与不同KIR2DL抗原之结合，指示测试抗体与对照物识别实质上相同之抗原决定基。(经标记)对照抗体在完全无关抗体(其不结合KIR)存在下之结合可用作对照高值。对照低值可藉由将经标记之对照抗体与相同但未标记之对照抗体一起培育而获得，其中将出现竞争且减少经标记抗体之结合。在测试分析法中，经标记抗体反应性在测试抗体存在下显著降低则指示测试抗体识别实质上相同之抗原决定基，亦即其与经标记之对照抗体竞争。举例而言，任何在对照抗体:测试抗体之任何比率介于约1:1或1:10与约1:100之间下使对照抗体与KIR2DL1及KIR2DL3抗原中之一者或两者的结合减少至少约50%、诸如至少约60%、或更佳至少约70%(例如约65%至100%)的测试抗体即视为与对照物竞争之抗体。
亦可藉由例如流动式细胞量测术评估竞争。在该测试中，可首先将带有既定KIR之细胞与对照抗体一起培育，且接着与经荧光染料或生物素标记之测试抗体一起培育。若在与饱和量之对照抗体一起预培育后所获得之结合为在未与对照抗体一起预培育下由测试抗体所获得之结合(如藉助于荧光所量测)的约80%、较佳约50%、约40%或40%以下(例如约30%)，则称抗体与对照抗体竞争。或者，若由经标记对照抗体(藉由荧光染料或生物素标记)对与饱和量之测试抗体一起预培育之细胞所获得的结合为在未与测试抗体一起预培育的情况下所获得之结合的约80%、较佳约50%、约40%或40%以下(例如约30%)，则称抗体与对照抗体竞争。
亦可有利地使用简易竞争分析法，其中预先吸附测试抗体且以饱和浓度施加于上面固定有KIR2DL1或KIR2DL2/3或两者的表面上。简易竞争分析法中之表面较佳为BIACORE芯片(或其它适用于表面电浆共振分析之介质)。量测对照抗体与涂有KIR之表面的结合。将此单独对照抗体与含有KIR之表面的结合与对照抗体在测试抗体存在下之结合相比较。在测试抗体存在下，对照抗体与含有KIR2DL1及KIR2DL2/3之表面的结合显著减少指示测试抗体与对照抗体识别实质上相同之抗原决定基，因此测试抗体与对照抗体「竞争」。任何使对照抗体与KIR2DL1及KIR2DL2/3抗原两者之结合减少至少约20%或20%以上、至少约40%、至少约50%、至少约70%或70%以上的测试抗体即可视为与对照抗体竞争之抗体。较佳地，该测试抗体将使对照抗体与至少KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3抗原中之每一者的结合减少至少约50%(例如至少约60%、至少约70%或70%以上)。应了解，可颠倒对照抗体与测试抗体之次序；亦即，在竞争分析法中可首先使对照抗体结合至表面且接着之后使测试抗体与表面接触。较佳地，首先使对KIR2DL1及KIR2DL2/3抗原具有较高亲和力之抗体结合至含有KIR2DL1及KIR2DL2/3之表面，因为对于第二抗体所观测到之结合减少(假定该等抗体互相竞争)预期将有较大量值。该等分析法之其它实例提供于本文实例及例如Saunal及Regenmortel,(1995)J.Immunol.Methods183:33-41中，该文献之揭示内容以引用方式并入本文中。
在另一态样中，本发明方法或组合物特征在于仅包括不与一种以上KIR交叉反应的抗体。举例而言，仅对KIR2DL1具特异性之单株抗体已经展示可阻断KIR2DL1与HLA-Cw4异型以及与Cw4属于同一组之相似HLA-C异型之间的相互作用(Moretta等人,J Exp Med.1993;178(2):597-604；其揭示内容以引用方式并入本文中)。在另一实例中，针对KIR2DL2/3之单株抗体亦已经描述可阻断KIR2DL2/3与HLACw3(或其类似物)异型之间的相互作用(Moretta等人,1993,同上)。视情况而定，抗体可选自由以下组成之群：GL183(KIR2DL2/3/S2特异性，可自Immunotech,France及Beckton Dickinson,USA获得)；EB6(KIR2DL1/s1特异性，可自Immunotech,France及BecktonDickinson,USA获得)。
抗原决定基
在其它态样中，本发明提供针对各种KIR上存在之特定抗原区及/或抗原决定基的抗-KIR抗体。在一个例示性态样中，本发明提供在由选自以下之一或多个(或所有)氨基酸残基所界定之区域内特异性结合KIR2DL1的抗-KIR抗体：氨基酸残基105、106、107、108、109、110、111、127、129、130、131、132、133、134、135、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、181及192。在另一实施例中，本发明提供在由以下一或多个(或所有)氨基酸残基所界定之区域中特异性结合至KIR2DL1及KIR2DL2/3的抗-KIR抗体：氨基酸残基105、106、107、108、109、110、111、127、129、130、131、132、133、134、135、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、181及192。
在另一态样中，本发明提供抗-KIR抗体，其结合至KIR2DL1，但以相对显著降低之结合亲和力(为对KIR2DL1所展现之亲和力的约20%或20%以下、约30%或30%以下、约40%或40%以下、约50%或50%以下、约60%或60%以下、约70%或70%以下)结合至R131为Ala之KIR2DL1突变体。在另一态样中，本发明提供抗-KIR抗体，其结合至KIR2DL1，但以相对降低之结合亲和力(为对KIR2DL1所展现之亲和力的约20%或20%以下、约30%或30%以下、约40%或40%以下、约50%或50%以下、约60%或60%以下、约70%或70%以下)结合至R157为Ala之KIR2DL1突变体。在另一态样中，本发明提供抗-KIR抗体，其结合至KIR2DL1，且以相对降低之结合亲和力(为对KIR2DL1所展现之亲和力的约20%或20%以下、约30%或30%以下、约40%或40%以下、约50%或50%以下、约60%或60%以下、约70%或70%以下)结合R158为Ala之KIR2DL1突变体。
本发明提供结合至KIR2DL1残基131、157及158之抗-KIR抗体。
本发明提供结合至KIR2DS3(R131W)但不结合至野生型KIR2DS3之抗-KIR抗体。在另一态样中，本发明提供结合至KIR2DL1及KIR2DL2/3以及KIR2DS4之抗-KIR抗体。在另一态样中，本发明提供结合至KIR2DL1及KIR2DL2/3两者，但不结合至KIR2DS4之抗-KIR抗体。
为说明抗-KIR抗体序列在抗-KIR抗体之组成及建构中之用途，此处将描述例示性抗-KIR抗体序列及抗体序列变异体。例示性KIR抗体DF200及1-7F9之可变区及CDR之氨基酸及核酸序列亦揭示于WO2006/003179中。
例示性抗-KIR mAb包括mAb1-7F9及1-4F1，其相较于其它抗-KIR抗体具有若干优势。举例而言，1-7F9及1-4F1为完全人类抗体，因此在投与个体时可减少或最小化针对抗体之任何免疫反应。此外，如下文所述，1-7F9及1-4F1皆具有适用于治疗性抗-KIR抗体之同型(分别为IgG4及IgG2)。1-7F9在诱导表现KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3之NK细胞产生之杀死作用时相较于鼠类mAb EB6、GL183、DF200及NKVSF1(Pan2D)亦更为有效。此外，1-7F9对KIR之亲和力高于先前已知之抗-KIR mAb。举例而言，1-7F9结合至KIR2DL1及KIR2DL3之解离常数(Kd)分别为0.43nM及0.025nM，表示其对两种抗原之亲和力高于例如DF200。本发明之尤其较佳之抗体因此与1-7F9及/或1-4F1具有相同或相似之抗原特异性。举例而言，与1-7F9包含相同或相似VH及VL区之抗体可与1-7F9具有相同或相似之抗原结合及/或NK刺激特性；且与1-4F1包含相同或相似之VH及VL区之抗体可与1-4F1具有相同或相似之抗原结合特性。
抗体可包含如下1-7F9之VL区及/或VH区之氨基酸序列：
1-7F9VL区(SEQ ID NO:1)：
EIVLTQSPVTLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWMYTFGQGTKLEIKRT1-7F9VH区(SEQ ID NO:2)：
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSFYAISWVRQAPGQGLEWMGGFIPIFGAANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSDDTAVYYCARIPSGSYYYDYDMDVWGQGTTVTVSSo
1-4F1VL区及VH区之氨基酸序列分别提供于SEQ ID NO:3及4中。在一特定实施例中，SEQ ID NO:3之残基3、4、9、24、32、41、47、50、55、71及74分别为Q、L、S、R、A、G、L、D、E、F及A。在另一特定实施例中，SEQ ID NO:3之残基3、4、9、24、32、41、47、50、55、71及74分别为R、M、F、W、Y、A、F、Y、Q、Y及T。
1-7F9CDR之氨基酸序列如下：对应于SEQ ID NO:1之残基24至34的轻链CDR1氨基酸序列；对应于SEQ ID NO:1之残基50至56的轻链CDR2氨基酸序列；对应于SEQ ID NO:1之残基89至97的轻链CDR3氨基酸序列；对应于SEQ ID NO:2之残基31至35的重链CDR1氨基酸序列；对应于SEQ ID NO:2之残基50至65的重链CDR2氨基酸序列；及对应于SEQ ID NO:2之残基99至112的重链CDR3氨基酸序列。1-4F1CDR之氨基酸序列已鉴别如下：对应于SEQ ID NO:3之残基24至34的轻链CDR1氨基酸序列；对应于SEQ ID NO:3之残基50至56的轻链CDR2氨基酸序列；对应于SEQ ID NO:3之残基89至97的轻链CDR3氨基酸序列；对应于SEQ ID NO:4之残基31至35的重链CDR1氨基酸序列；对应于SEQ ID NO:4之残基50至66的重链CDR2氨基酸序列；及对应于SEQ ID NO:4之残基99至113的重链CDR3氨基酸序列。
完整1-7F9轻链及重链之氨基酸序列分别提供于SEQ ID NO:5及6中。
因此，例如各种人类抗体子类之其它抗体；抗体片段、抗体衍生物及其它KIR结合肽可容易地基于此信息藉由例如重组技术来制备。举例而言，在一个态样中，本发明提供具有分别基本上由SEQ ID NO:1及SEQ ID NO:2组成之VL及VH序列的抗体，及/或具有分别基本上由SEQ ID NO:3及SEQ IDNO:4组成之VL及VH序列的抗体。在另一态样中，本发明提供包含基本上由上文所述之1-7F9或1-4F1VH CDR1-3及VL CDR1-3组成之CDR区的抗体，或具有分别基本上由SEQ ID NO:5及6之1-7F9轻链及重链组成之轻链及重链的抗体。在另一态样中，本发明提供一种抗体，其包含如下CDR区：大致对应于SEQ ID NO:1之残基24至34的轻链CDR1氨基酸序列；大致对应于SEQID NO:1之残基50至56的轻链CDR2氨基酸序列；大致对应于SEQ ID NO:1之残基89至97的轻链CDR3氨基酸序列；大致对应于SEQ ID NO:2之残基31至35的重链CDR1氨基酸序列；大致对应于SEQ ID NO:2之残基50至65的重链CDR2氨基酸序列；及大致对应于SEQ ID NO:2之残基99至112的重链CDR3氨基酸序列。在另一态样中，本发明提供一种抗体，其包含如下CDR区：大致对应于SEQ ID NO:3之残基24至34的轻链CDR1氨基酸序列；大致对应于SEQ ID NO:3之残基50至56的轻链CDR2氨基酸序列；大致对应于SEQ ID NO:3之残基89至97的轻链CDR3氨基酸序列；大致对应于SEQ IDNO:4之残基31至35的重链CDR1氨基酸序列；大致对应于SEQ ID NO:4之残基50至66的重链CDR2氨基酸序列；及大致对应于SEQ ID NO:4之残基99至113的重链CDR3氨基酸序列。在另一态样中，本发明提供一种抗体，其包含基本上由SEQ ID NO:1之残基24至34组成的轻链CDR1氨基酸序列；基本上由SEQ ID NO:1之残基50至56组成的轻链CDR2氨基酸序列；基本上由SEQID NO:1之残基89至97组成的轻链CDR3氨基酸序列；基本上由SEQ ID NO:2之残基31至35组成的重链CDR1氨基酸序列；基本上由SEQ ID NO:2之残基50至65组成的重链CDR2氨基酸序列；及基本上由SEQ ID NO:2之残基99至112组成的重链CDR3氨基酸序列。在另一态样中，本发明提供一种抗体，其包含如下CDR区：基本上由SEQ ID NO:3之残基24至34组成的轻链CDR1氨基酸序列；基本上由SEQ ID NO:3之残基50至56组成的轻链CDR2氨基酸序列；基本上由SEQ ID NO:3之残基89至97组成的轻链CDR3氨基酸序列；基本上由SEQ ID NO:4之残基31至35组成的重链CDR1氨基酸序列；基本上由SEQ ID NO:4之残基50至66组成的重链CDR2氨基酸序列；及基本上由SEQID NO:4之残基99至113组成的重链CDR3氨基酸序列。
本发明亦涵盖抗-KIR抗体、抗体片段或抗体衍生物或KIR结合多肽之用途，其包含至少一个与1-7F9或1-4F1VH或VL序列或与其中CDR区实质上一致之变异氨基酸序列。变异氨基酸序列可包含以下或基本上由以下组成：与1-7F9或1-4F1CDR、VH或VL区或重链或轻链序列具有至少约50%、80%、90%、95%、98%或99%(例如约50%至99%、约65%至99%、约75%至99%或约85%至99%)一致性之氨基酸序列。抗体可例如包含各自具有分别与SEQ IDNO:5及6具有至少约50%、80%、90%、95%、98%或99%(例如约50%至99%、约65%至99%、约75%至99%或约85%至99%)一致性之序列的1-7F9轻链及重链。变异氨基酸序列可例如包含1、2或3个包含与1-7F9或1-4F1CDR具有至少约80%、至少约90%或至少约95%一致性之氨基酸序列或由该等氨基酸序列组成的CDR。变异氨基酸序列或者或亦可包含1、2或3个包含与1-7F9或1-4F1CDR具有至少约80%、至少约90%或至少约95%一致性之氨基酸序列或由该等氨基酸序列组成的CDR。因此，在一个态样中，本发明提供一种人类抗体，其包含与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3之残基24至34具有至少约80%、至少约90%或至少约95%一致性的轻链CDR1氨基酸序列；与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3之残基50至56具有至少约80%、至少约90%或至少约95%一致性的轻链CDR2氨基酸序列；与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3之残基89至97具有至少约80%、至少约90%或至少约95%一致性的轻链CDR3氨基酸序列；与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4之残基31至35具有至少约80%、至少约90%或至少约95%一致性的重链CDR1氨基酸序列；与SEQ ID NO:2之残基50至65或与SEQ ID NO:4之残基50至66具有至少约80%、至少约90%或至少约95%一致性的重链CDR2氨基酸序列；及与SEQ ID NO:2之残基99至112或与SEQ ID NO:4之残基99至113具有至少约80%、至少约90%或至少约95%一致性的重链CDR3氨基酸序列。保留于该等变异氨基酸序列中之源自1-7F9或1-4F1之KIR结合性氨基酸序列的基本特性合乎需要地包括1-7F9或1-4F1序列对一或多种KIR之特异性及/或亲合力，且或者或亦可包括1-7F9阻断KIR/HLA-C相互作用及增强NK细胞之溶解活性的能力。
在另一态样中，本发明提供抗-KIR抗体、抗体片段或抗体衍生物或KIR结合多肽之用途，其包含藉助于一或多个残基插入、缺失及/或取代而与1-7F9或1-4F1KIR结合序列有一或多个氨基酸残基(例如至少2个、3个、5个、至少约10个、至少约15个、至少约20个、至少约25个、至少约30个、至少约35个、至少约40个、至少约50个或50个以上氨基酸残基)不同的KIR结合性氨基酸序列。该变异KIR结合序列使得亲和力较大；特异性较大或不同；免疫原性较小(就宿主对序列之反应而言)；活体内稳定性较大；及/或变异序列相较于包含原生1-7F9或1-4F1序列之基本上一致之氨基酸序列的其它有益特性。适合之序列变异体进一步描述于本文别处。抗-KIR抗体、抗体片段或抗体衍生物或KIR结合多肽之KIR结合部分亦可包含任何适合数目之非氨基酸组分或取代基，诸如非氨基酸有机部分，以促成KIR结合及/或提供其它有利之物理化学或免疫学特性。
如已提及，抗原结合性抗体序列(诸如抗-KIR抗体序列)之适合序列变异体可并入本发明之抗体中。在大部分类型之抗体序列中进行变异可为适合的。由此，例如，抗-KIR抗体可包含变异型恒定序列及/或变异型构架序列。
本发明提供一种抗-KIR抗体，其包含一或多个变异型CDR序列(亦即，与类似野生型CDR序列不同之处在于一或多处相对于野生型相关序列影响序列之生物学及/或物理化学特性之氨基酸插入、缺失、添加及/或取代的CDR序列)。参见例如WO2006/072625中揭示之技术。CDR、VH及VL序列变异体可分别与一或多个「亲本」CDR、VH及VL序列(诸如抗-KIR mAb DF200及/或抗-KIR mAb NKVSF1之CDR、VH及VL序列)展现任何适合程度之一致性。通常，结合至与亲本序列基本上相同的抗原决定子区之变异序列将与亲本序列保持至少约40%氨基酸序列一致性，诸如与亲本序列保持约50%或50%以上、约60%或60%以上、约70%或70%以上、约75%或75%以上、约80%或80%以上、约85%或85%以上、约90%或90%以上或至少约95%(例如约45%至99%、约55%至99%或约65%至99%)一致性。然而，在一些状况下，尤其对于靶向基本上相同之抗原决定基的CDR序列，具有较低程度之一致性的变异体可为适合的。
结合至不同抗原决定子区或不同抗原决定子区集合(或「型态」)之CDR、VH及VL序列变异体亦可藉由本文别处所述之任何技术(合理设计、突变诱发、定向进化)而产生。在该等情况下，与亲本序列之氨基酸序列一致性程度预期显著较低。举例而言，在CDR-L1、CDR-H1、CDR-H2或CDR H3变异体与亲本序列具有不同抗原决定基结合型态的情况下，促进NKCAMR(诸如KIR)结合之变异体与亲本CDR序列可能仅仅展现约20%至30%氨基酸序列一致性。
WO2006/072625进一步提供抗-KIR抗体序列之变异体，其包括CDR及可变区序列之特定结构式，该案之揭示内容以引用方式并入本文中。
通常，变异体主要因保守性取代而与「亲本」序列有所不同；变异体中例如至少约35%、约50%或50%以上、约60%或60%以上、约70%或70%以上、约75%或75%以上、约80%或80%以上、约85%或85%以上、约90%或90%以上、约95%或95%以上(例如约65%至99%)之取代为保守性氨基酸残基置换。在本发明之上下文中，保守性取代可由WO2006/072625(Novo Nordisk AS及Innate Pharma SA)之表4、表5及表6中之一或多者中所反映之氨基酸类别内的取代所限定。WO2006/072625亦描述其它保守性取代分组；藉由选择保守性较低之取代使功能实质改变；适用于设计及选择肽变异体之原理；在亲水/亲水性特性方面保守；使变异型肽之结构维持实质上类似于亲本肽之结构，包括在保守性取代、亲水特性、重量守恒、二级结构比较或相似性得分(如藉由使用BLAST程序所测定)方面评估肽之相似性的方法；变异体与亲本之间的其它变异点/分异点为可接受的；CDR之有利序列变化；引起糖基化改变之序列变异；高变区插入及产生变异型抗体及更一般产生CDR变异体。
在本发明之氨基酸序列的情况下一致性可藉由任何适合技术，通常藉由尼德曼-温思科比对分析(Needleman-Wunsch alignment analysis)来测定(参见Needleman及Wunsch,J.Mol.Biol.(1970)48:443-453)，诸如经由以ALIGN2.0使用BLOSUM50评分矩阵(起始间隙罚分为-12且扩展罚分为-2)进行分析而提供(关于对并入ALIGN程序中之整体比对技术之论述，参见Myers及Miller,CABIOS(1989)4:11-17)。ALIGN2.0程序之复本可例如经由San DiegoSupercomputer(SDSC)生物学工作台(Biology Workbench)得到。由于尼德曼-温思科比对提供两个序列之间的总体或整体一致性量测结果，故应了解可以类似于完全序列之方式使用可为较大肽序列之部分或子序列的目标序列，或者，可使用如由例如史密斯-沃特曼比对(Smith-Waterman alignment)(J.Mol.Biol.(1981)147:195-197)所测定之局部比对值来评估子序列之间的关系，该等局部比对值可经由可用程序获得(可适用于分析一致性之其它局部比对方法包括应用试误式局部比对算法之程序，诸如FastA及BLAST程序)。用于评估一致性之其它相关方法描述于例如国际专利申请案WO2003/048185中。设法对尼德曼-温思科算法进行改良之高氏算法(Gotoh algorithm)或者可用于整体序列比对。参见例如Gotoh,J.Mol.Biol.162:705-708(1982)。
抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物(包括抗体)能够增强对可能有力促成炎症之T细胞的消除作用，使得包括抗体之此等化合物适用于慢性情形及急性炎症中，以及与用于发炎情形之第二治疗剂组合使用。特定而言，在类风湿性关节炎及其它可使用第二治疗剂之病状的状况下，该第二治疗剂减轻炎症，例如用于慢性及急性情形之药剂，诸如疾病改善性抗风湿药(DMARD)，诸如抗-TNFα及MTX。由于促成炎症(尤其急性及慢性炎症)之机制常咸信为复杂的，所以本发明抗体尤其适于与作用于除直接杀死(例如经由ADCC)T细胞以外的炎症机制，但具有相似之生物学目标(诸如减少促发炎细胞激素产生或作用，尤其减少或抑制TNFα)之药剂组合使用。
抗体产生
单株抗体尤其可使用由Kohler等人,Nature,256:495(1975)首先描述之融合瘤方法或藉由其它熟知之随后研发之方法(参见例如Goding,MonoclonalAntibodies:Principles and Practice,第59-103页(Academic Press,1986))来制备。可藉由化学融合、电融合或任何其它适合技术，用任何适合类型之骨髓瘤、异源骨髓瘤、淋巴母细胞样细胞(phoblastoid cell)、浆细胞瘤或类似永生化细胞及任何适合类型之抗体表现细胞形成融合瘤及其它融合细胞。
转型之永生化B细胞亦可用于高效地产生抗体。转型之B细胞可藉由标准技术，诸如用艾伯斯坦-巴尔病毒(Epstein Barr Virus)或转型基因转型而产生。(参见例如「Continuously Proliferating Human Cell Lines SynthesizingAntibody of Predetermined Specificity,」Zurawaki,V.R.等人,MonoclonalAntibodies,Kennett R.H.等人编,Plenum Press,N.Y.1980,第19-33页)。由此，稳定且持续及/或永生化的表现抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体之细胞及细胞株为本发明之另一特征。产生抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体之方法的步骤可包括例如以下步骤：产生可产生抗体之永生化B细胞，使其与适当搭配物融合以产生抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体，或对其进行定序且使用该等序列产生重组抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。
可用作用于重组蛋白质表现之宿主的细胞株在此项技术中为熟知的且包括多种可自美国菌种中心(American Type Culture Collection，ATCC)获得的永生化细胞株。此等细胞株尤其包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、NSO细胞、SP2细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人类肝细胞癌细胞(例如Hep G2)、A549细胞及多种其它细胞株。其它可使用之细胞株为昆虫细胞株，诸如Sf9细胞。当将编码抗体基因之核酸(或含有核酸之载体)引入哺乳动物宿主细胞中时，可藉由培养宿主细胞足以允许抗体在宿主细胞中表现或更佳使抗体分泌至培养宿主细胞之培养基中的一段时间以产生抗体。可使用标准蛋白质纯化方法自培养基中回收抗体。抗体在直接表现而无分泌信号时亦可自宿主细胞溶胞物中回收。
可藉由应用多种此项技术中已知之适合技术(包括例如免疫亲和管柱纯化；硫酸盐沈淀；层析聚焦；制备型SDS-PAGE及其类似技术)纯化来自细胞培养物、细胞溶胞物及转殖基因动物或由其获得之生物材料(例如，来自产生抗体之转殖基因动物之腹水)的抗体。
抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体亦可在细菌细胞及真核单细胞微生物(诸如酵母)中产生。细菌细胞产生之抗体缺乏正常糖基化且因此就ADCC功能及可能另外与在哺乳动物细胞及/或动物中产生之基本上相同抗体有关之免疫反应的其它态样而言可能有缺陷。
可使用适用于纯化、筛选及选择抗体之方法，包括WO2006/072625中所述之方法。可藉由任何适合技术或技术组合筛选及选择抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。举例而言，可使用多种免疫分析形式来选择与特定蛋白质、变异体或片段选择性结合的抗体。举例而言，常规使用固相ELISA免疫分析来选择对蛋白质、蛋白质变异体或其片段具选择性免疫反应性的抗体。参见Harlow及Lane(同上)。单株抗体之结合亲和力可例如藉由Munson等人,Anal.Biochem.,107:220(1980)之斯卡查德分析来测定。
通常针对诸如藉由抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3介导之信号，促进NK细胞经由NK活化受体介导之信号活化来调节NK细胞活性的能力来筛选抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。已研发多种适用于该等情况之NK细胞分析法，包括例如流动式细胞量测术筛选法。参见例如McGinnes等人,(1984)J_Immunol Methods801984:70-85。与培养NK细胞、评估NK细胞及其类似方面有关之方法在此项技术中为已知的。参见例如Campbell及Colonna,Natural Killer Cell Protocols(Methods in MolecularBiology Series第121卷)(2000)。
在抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体之情况下，NK细胞中和活性可藉由抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体复原由KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3阳性NK细胞引起之标靶细胞溶解的能力来表明。亦可藉由各种基于细胞之细胞毒性分析法来评估抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体相关NK细胞调节(例如KIR抑制)。重导向杀伤实验(Redirected killing)为一种用于确定NK细胞受体诱导细胞毒性之能力的实验系统。评估涂布有对候选受体具特异性之抗体的NK细胞杀死表现抗体所结合之Fc受体之标靶细胞的能力。在另一变体中，可在细胞激素释放分析法中评估与抗-KIR抗体有关之NK细胞活性调节作用。亦可使用与各种抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体有关之其它生物活性来评估抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。
通常以实质上纯之形式使用及提供抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。实质上纯分子为在发现其之组合物中相对于其所属之分子类别为主要物质的分子(例如，实质上纯抗体为发现其之组合物中之主要蛋白质物质)。实质上纯物质占组合物中之此类型分子的至少约50%且通常构成组合物中至少约70重量%、至少约80重量%、至少约85重量%、至少约90重量%、至少约95重量%或95重量%以上百分比之物质。通常，包含抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体之组合物在组合物中之所有存在之肽物质的情况下或至少相对于建议使用之情况下的实质上活性肽物质展现至少约98%、98%或99%抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体均质性。举例而言，肽稳定剂/缓冲剂(诸如白蛋白)可在不妨碍抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体之活性的情况下有意包括于最终医药调配物中，且因此可自该等纯度计算中排除。在实质上纯组合物之情况下亦可接受不干扰基本活性之杂质的存在。可藉由适于既定化合物之方法(例如层析法；琼脂糖及/或聚丙烯酰胺凝胶电泳；HPLC分析等)量测纯度。
分离之分子系指不与显著含量(例如约1%以上、约2%以上、约3%以上或约5%以上)之任何外来及不合需要之生物分子(诸如产生抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体之细胞、细胞培养物、化学培养基或动物内所含之非抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体生物分子)缔合的分子。分离之分子亦指已因人类干预(自动、手动或两者)通过该纯度阶段显著长时间(例如至少约10分钟、至少约20分钟、至少约1小时或更长时间)的任何分子。在本发明提供之许多各种组合物中，诸如在包含一或多种医药学上可接受之载剂之组合物中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可以组合物中之全部分子物质之数目计相对较小之量存在(例如，在组合物包含大量医药学上可接受之载剂、稳定剂及/或防腐剂的状况下)。在一些状况下，诸如BSA之其它肽可包括于该含先前纯化之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体之组合物中。然而，假如组合物之该等其它组分可为抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体之预期应用所接受，则仍可将该组合物描述为包含分离之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。换言之，术语「分离」不意欲排除与其它化合物或物质之人工或合成混合物，诸如可形成医药学上可接受之制剂的一部分。
医药学上可接受之载剂
抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可与一或多种适于一或多种预期投药途径之载剂(稀释剂、赋形剂及其类似物)及/或佐剂组合以提供医药学上可接受之组合物。
抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可例如与以下混合：乳糖、蔗糖、粉末(例如淀粉粉末)、烷酸之纤维素酯、硬脂酸、滑石、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸及硫酸之钠盐及钙盐、阿拉伯胶、明胶、海藻酸钠、聚乙烯吡咯啶及/或聚乙烯醇，且视情况进一步制锭或囊封以用于习知投药。或者，可将抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体溶解于生理食盐水、水、聚乙二醇、丙二醇、羧甲基纤维素胶体溶液、乙醇、玉米油、花生油、棉籽油、芝麻油、黄蓍胶及/或各种缓冲剂中。其它载剂、佐剂及投药方式在医药技术中为熟知的。载剂或稀释剂可包括时间延迟物质，诸如单独单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯或连同蜡，或其它功能上相似之物质。
医药学上可接受之载剂一般包括生理学上与抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体兼容之任何及所有适合之溶剂、分散介质、涂布剂、抗细菌剂及抗真菌剂、等张剂及吸收延迟剂及其类似物。医药学上可接受之载剂之实例包括水、生理食盐水、磷酸盐缓冲生理食盐水、右旋糖、甘油、乙醇及其类似物，以及其任何组合。在多种状况下，在该组合物中可能需要包括例如糖、多元醇(诸如甘露糖醇、山梨糖醇)或氯化钠之等张剂。医药学上可接受之物质(诸如湿润剂)或少量之助剂物质(诸如湿润剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂)可合乎需要地延长抗-KIR抗体、相关组合物或组合之存放期或增强其有效性。载剂及医药组合物之其它组分的适合性系根据对抗体之所需生物学特性无显著负面影响来确定。
本发明之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体组合物、相关组合物及组合可呈多种适合形式。该等形式包括例如液体、半固体及固体剂型，诸如液体溶液(例如可注射及可输注溶液)、分散液或悬浮液、乳液、微乳液、锭剂、丸剂、散剂、脂质体、树状体及其它奈米粒子(参见例如Baek等人,Methods Enzymol.2003;362:240-9；Nigavekar等人,Pharm Res.2004年3月;21(3):476-83)、微粒及栓剂。调配物、盐进一步描述于WO2006/072625中。
通常，呈可注射或可输注溶液形式之组合物，诸如类似于用于以其它抗体使人类被动免疫之组合物的组合物可用于传递本发明之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。传递抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体组合物之典型模式为非经肠投药(例如静脉内、皮下、腹膜内及/或肌肉内投药)。在一个态样中，藉由静脉内输注或注射向人类患者投与抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。
用于医药用途之组合物亦可包括各种稀释剂、填充剂、盐、缓冲剂、清洁剂(例如非离子型清洁剂，诸如Tween-80)、稳定剂(例如糖或无蛋白质氨基酸)、防腐剂、组织固定剂、增溶剂及/或其它适于包括于用于医药用途之组合物中之物质。适合组分之实例亦描述于例如Berge等人,J.Pharm.Sci.,6661),1-19(1977)；Wang及Hanson,J.Parenteral.Sci.Tech:42,S4-S6(1988)；美国专利第6,165,779号及第6,225,289号。该医药组合物亦可包括防腐剂、抗氧化剂或其它为熟习此项技术者所知之添加剂。其它医药学上可接受之载剂在此项技术中已知。参见例如WO2006/072625中之参考文献。
KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽
本发明提供KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽及含有抑制该等多肽之化合物的用于治疗或预防自体免疫及发炎病症的组合物。例示性KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽阐述于氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24中。参见表1。
编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之核酸可使用标准分子生物技术进行修饰以产生包含至少一种KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3并在氨基酸序列中包括(但不限于)缺失、添加及取代且保留KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之特异性抗原性(例如KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽可由抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体结合)的变异多肽。另外，包含至少一种KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之变异多肽亦可保留KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之抗原性(例如，在个体体内免疫后分别提高针对KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽以及变异KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽的特异性免疫反应)。KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽可用医药载剂调配以制造适用作「癌症疫苗」之抗原组合物(例如引起针对KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3(例如氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24)之特异性免疫反应且在于个体体内免疫后产生抗-KIRD2L1、抗-KIRD2L2及/或抗-KIRD2L3抗体的医药组合物)。
多肽衍生物及类似物
应了解，本文所述之多肽可为降解产物、合成肽或重组肽以及肽模拟物、合成肽、类肽及半类肽(例如肽类似物，其可具有例如修饰以使得肽在体内同时更稳定或渗入细胞中之能力更高)。本文所述之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之修饰包括(但不限于)N端修饰、C端修饰、肽键修饰(例如CH2-NH、CH2-S、CH2-S=O、O=C-NH、CH2-O、CH2-CH2、S=C-NH、CH=CH或CF=CH)、主链修饰及残基修饰。用于制备肽模拟化合物之方法在此项技术中为熟知的。Martin,(2010)Quantitative Drug Design:A CriticalIntroduction[第2版]CRC Press。
肽内之肽键(-CO-NH-)可经例如以下取代：N上经甲基化之键(-N(CH3)-CO-)、酯键(-C(R)H-C-O-O-C(R)-N-)、酮亚甲基键(-CO-CH2-)、α-氮杂键(-NH-N(R)-CO-)(其中R为任何烷基，例如甲基)、碳桥键(carbabond)(-CH2-NH-)、羟基伸乙基键(-CH(OH)-CH2-)、硫酰胺键(-CS-NH-)、烯烃双键(-CH=CH-)、逆酰胺键(retro amide bond)(-NH-CO-)、肽衍生物(-N(R)-CH2-CO-)，其中R为天然存在于碳原子上之「正」侧链。此等修饰沿肽链可存在于任何键处且甚至可同时存在于多处(2至3处)。
天然芳族氨基酸Trp、Tyr及Phe可经合成非天然酸取代，诸如苯基甘氨酸、TIC、萘基丙氨酸(Nol)、苯丙氨酸之环甲基化衍生物、苯丙氨酸之卤化衍生物或邻甲基-酪氨酸。除上述之外，本发明多肽亦可包括一或多个经修饰氨基酸或一或多个非氨基酸单体(例如脂肪酸、复合碳水化合物)，例如羟脯氨酸、磷酸丝氨酸及磷酸苏氨酸；及其它特殊氨基酸，包括(但不限于)2-胺基己二酸、羟基离氨酸、异锁链素(isodesmosine)、正缬氨酸、正白氨酸及鸟氨酸。此外，术语「氨基酸」包括D-氨基酸及L-氨基酸。
由于本发明之多肽较佳用于需要肽呈可溶形式之治疗剂中，所以本发明多肽可包含一或多个非天然或天然极性氨基酸，包括(但不限于)丝氨酸及苏氨酸，其能够因其含有羟基之侧链而提高肽溶解度。
本发明之多肽可呈线性形式，但应了解在有些状况下亦可使用其它形式。
本文所述之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽可自已经改变而表现其(例如重组)之细胞中纯化。可将编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之DNA序列插入表现载体中且接着转型(或转染)于适当宿主细胞中及/或表现于转殖基因动物中。可接着藉由此项技术中已知之方法分离由此所表现之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽(例如氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24)。参见例如Maniatis等人,(2001)Molecular Cloning:A Laboratory Manual[第3版]Cold Spring Harbor Laboratory Press。
本发明之多肽可诸如藉由使用标准固相技术而以生物化学方式合成。此等方法包括单独固相合成、部分固相合成法、片段缩合、经典溶液合成。在肽相对较短(亦即10kDa)时及/或在其不可由重组技术产生(亦即并非由核酸序列所编码)且因此涉及不同化学时较佳使用此等方法。固相肽合成程序在此项技术中为熟知的且进一步由Stewart(1984)Solid Phase PeptideSyntheses[第2版]Pierce Chemical Company以及Benoiton(2005)Chemistryof Peptide Synthesis CRC Press描述。合成肽可藉由制备型高效液相层析纯化且其组成可经由氨基酸定序来确定。参见Creighton(1992)[第2版]Proteins,Structures and Molecular Principles W.H.Freeman and Company；Aguilar(2004)[编]HPLC of Peptides and Proteins:Methods and Protocols HumanaPress；Simpson(2002)Protein Sequencing Protocols[第2版]Humana Press。
在需要大量本发明多肽的状况下，可使用诸如由以下文献所述之重组技术产生本发明多肽：Invitrogen(2002)「Guide to Baculovirus ExpressionVector Systems(BEVs)and Insect Culture Techniques」Instruction Manual；Hatti-Kaul及Mattiasson(2003)[编]Isolation and Purification of Proteins；Ahmed(2004)Principles and Reactions of Protein Extraction,Purificationand Characterization CRC Press。其它重组技术诸如由例如以下文献所述：Bitter等人,(1987)Methods in Enzymol.153:516-544；Studier等人,(1990)Methods in Enzymol.185:60-89；Brisson等人,(1984)Nature310:511-514；Takamatsu等人,(1987)EMBO J.6:307-311；Coruzzi等人,(1984)EMBO J.3:1671-1680；及Brogli等人,(1984)Science224:838-843；Gurley等人,(1986)Mol.Cell.Biol.6:559-565；以及Weissbach及Weissbach(1988)Methods forPlant Molecular Biology,Academic Press,NY,Section VIII,第421-463页。
多肽序列变异体
对于氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24之任何KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3序列，可藉由系统地添加或移除氨基酸残基以产生较长或较短肽，且测试彼等肽以及藉由将具有较长或较短尺寸之窗口自该点沿抗原向上或向下移动所产生之序列来进一步表征或最佳化。将此产生新候选标靶之方法与如此项技术中已知或如本文所述在免疫原性分析中测试基于彼等序列之抗原分子之有效性联用可对抗原进行进一步操控。此外，该等最佳化序列可如此项技术中已知及/或如本文所述藉由例如添加、缺失或其它突变而得到调节以进一步最佳化KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3(例如增强血清稳定性或循环半衰期、增强热稳定性、增强传递性、增强免疫原性、提高溶解度、靶向特定活体内位置或细胞类型)。
本文所述之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽可包含保守性取代突变(亦即一或多个氨基酸由相似氨基酸取代)。举例而言，保守性取代系指氨基酸经同一一般类别中之另一氨基酸取代，例如一个酸性氨基酸经另一酸性氨基酸取代、一个碱性氨基酸经另一碱性氨基酸取代，或一个中性氨基酸经另一中性氨基酸取代。
KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽序列可与氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24中之任一或多者具有至少约60%、65%、70%、75%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同源性。更佳，本发明涵盖与氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽序列中之任一或多个多肽序列具有至少约95%序列同源性，甚至更佳具有至少约98%序列同源性，且更佳具有至少约99%序列同源性的多肽序列。测定氨基酸序列以及核酸序列之间的同源性之方法为一般技术者所熟知。参见例如Nedelkov及Nelson(2006)New and Emerging Proteomic Techniques Humana Press。
因此，KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽可与多肽序列具有至少约80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同源性。举例而言，KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽可与氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24具有至少约80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同源性。
术语同源性或一致性应理解为意谓与其它蛋白质相同之氨基酸的数目(一致性)，以百分比表示。较佳藉助于计算机程序比较既定序列与其它蛋白质来测定一致性。若彼此进行比较之序列的长度不同，则以将短序列与较长序列所共有之氨基酸数目测定为一致性百分比的方式测定一致性。一致性可常规地藉助于已知计算机程序来测定，该等计算机程序可公开得到，诸如ClustalW。Thompson等人,(1994)Nucleic Acids Research22:4673-4680。ClustalW可自欧洲分子生物学实验室(European Molecular Biology Laboratory)公开得到且可自各种因特网页面下载，尤其自IGBMC(Institut de Génétique etde Biologie Moléculaire et Cellulaire)以及EBI及所有镜像EBI因特网页面(欧洲生物信息学会(European Bioinformatics Institute))下载。若使用ClustalW计算机程序版本1.8测定例如本申请案之参考蛋白与其它蛋白质之间的一致性，则设定以下参数：KTUPLE=1；TOPDIAG=5；WINDOW=5；PAIRGAP=3；GAPOPEN=10；GAPEXTEND=0.05；GAPDIST=8；MAXDIV=40；MATRIX=GONNET；ENDGAPS(OFF)；NOPGAP；NOHGAP。亦参见在线可得到之欧洲生物信息学会(EBI)工具箱以及Smith(2002)ProteinSequencing Protocols[第2版]Humana Press。
一种发现相似序列之可能情况为进行序列数据库研究。此处，可输入一或多个序列，正如所知，作为一次查询。接着使用统计学计算机程序将此查询序列与所选数据库中存在之序列相比较。该等数据库查询(blast搜寻)为熟练技术人员所知且可在不同供应者处进行。若例如在NCBI(国家生物技术信息中心)处进行该数据库查询，则应使用各别比较查询之标准设置。对于蛋白质序列比较(blastp)，此等设置为entrez限制条件=未活化；过滤=低复杂性活化；预期值=10；字长=3；矩阵=BLOSUM62；空隙罚分：存在=11，扩展=1。该查询之结果为查询序列与见于数据库中之相似序列之间的一致度以及其它参数。
KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽包括该等多肽之功能性片段。该多肽之「功能性片段」包括编码该KIR2DL1、该KIR2DL2及该KIR2DL3之基因或cDNA片段，该片段能够引起免疫反应(例如体液或细胞免疫反应)。因此，举例而言，本发明之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之片段对应于促进抗原之免疫原性之氨基酸残基且该等片段可用以充当抗原以引起免疫反应(例如体液或细胞免疫反应)。本发明之此态样亦包括本发明多肽之经差异剪接之同功异型物及转录起点。本发明之多肽亦可包含KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之片段、衍生物及对偶基因变异体。制备KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之片段的方法及材料在此项技术中为熟知的。参见例如Maniatis等人,(2001)Molecular Cloning:A Laboratory Manual[第3版]ColdSpring Harbor Laboratory Press。
变异KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽可保留其结合其各别抗体之抗原特异性(例如变异KIR2DL1、KIR2DL2或KIR2DL3多肽应由抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2或抗-KIR2DL3抗体结合)。完全抗原性变异体可仅含有保守性变异或非关键残基或非关键区中之变异。抗原性变异体亦可含有相似氨基酸之取代，其不引起抗原性出现变化或出现显著变化。或者，该等取代可在某种程度上正向或负向地影响抗原性。非抗原性变异体通常含有一或多处非保守性氨基酸取代、缺失、插入、倒位(inversions)或截短，或抗原决定基之关键残基或关键区中之取代、插入、倒位或缺失。用于修饰KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽，同时保持多肽对其各别抗体之特异性抗原性的分子生物学及生物化学技术在此项技术中为熟知的。参见例如Ho等人,(1989)Gene77(1):51-59；Landt等人,(1990)Gene96(1):125-128；Hopp及Woods(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA78(6):3824-3828；Kolaskar及Tongaonkar(1990)FEBS Letters276(1-2):172-174；及Welling等人,(1985)FEBS Letters188(2):215-218。
KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之变异体可充当KIR2DL1、KIR2DL2或KIR2DL3促效剂(模拟物)或KIR2DL1、KIR2DL2或KIR2DL3拮抗剂。KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之变异体可藉由对KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽进行突变诱发，例如个别点突变或截短而产生。KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之促效剂可保留与KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之天然存在形式实质上相同之生物活性或其生物活性之子集。KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之拮抗剂可藉由例如竞争性调节KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3介导之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之活性来抑制KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之天然存在形式之一或多种活性。因此，特定生物学效应可由用具有有限功能之变异体进行治疗来达成。举例而言，可用具有多肽之天然存在形式之生物活性之子集的变异体治疗个体，此相对于用KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之天然存在形式治疗而言对个体之副作用较少。
充当KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3促效剂(模拟物)或KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3拮抗剂的KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽变异体可藉由针对KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽促效剂或拮抗剂活性筛选KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之突变体(例如截短型突变体)之组合库来鉴别。
肽模拟物
除仅由天然存在之氨基酸组成的KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之外，亦提供KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3肽模拟物。肽类似物通常在医药行业中用作特性类似于模板肽之特性的非肽药物。此等类型之非肽化合物称作「肽模拟物(peptide mimetic)」或「肽模拟物(peptidomimetic)」(Fauchere(1986)Adv.Drug Res.15:29；Advances in Amino Acid Mimetics andPeptidomimetics(第2卷)Andrew Abell(编)(1999)JAI Press,Inc.；及Evans等人(1987)J.Med.Chem30:1229)且通常藉助于计算机化分子模型化来产生。结构上类似于治疗适用肽之肽模拟物可用于产生等效之治疗性或防治性作用。一般而言，肽仿真物在结构上类似于模式多肽(亦即具有生物学或药理学活性之多肽)(诸如人类或小鼠KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3)，但其一或多个肽键视情况经选自由以下组成之群的键置换：-CH2NH-、-CH2S-、-CH2-CH2-、-CH=CH-(顺式及反式)、-COCH2-、-CH(OH)CH2-及-CH2SO-，该置换系藉由此项技术中已知且进一步描述于以下参考文献中之方法来达成：Spatola,Chemistry and Biochemistry of Amino Acids,Peptides,and ProteinsWeinstein,B.编,Marcel Dekker,New York,第267页(1983)；Spatola,VegaData(1983年3月),第1卷，第3期,「Peptide Backbone Modifications」；Morley(1980)Trends.Pharm.Sci.第463-468页；Hudson等人,(1979)Int.J.Pept.Prot.Res.14:177-185(-CH2NH-、CH2CH2-)；Spatola等人,(1986)Life.Sci.38:1243-1249(-CH2-S)；Hann,(1982)J.Chem.SoC Perkin.Trans.I307-314(-CH-CH-，顺式及反式)；Almquist等人,(1980)J.Med.Chem.23:1392-1398(-COCH2-)；Jennings-White等人,(1982)Tetrahedron Lett.23:2533(-COCH2-)；(-CH(OH)CH2-)；Holladay等人,(1983)Tetrahedron.Lett.24:4401-4404(-C(OH)CH2-)；及Hruby(1982)Life Sci.31:189-199(-CH2-S-)。尤其较佳之非肽键为-CH2NH-。该等肽模拟物相较于多肽实施例可具有显著优势，包括例如：制备成本较低、化学稳定性较大、药理学特性(半衰期、吸收、效能、功效)增强、特异性改变(例如广泛之生物活性)、抗原性降低及其它优势。标记肽仿真物通常涉及使一或多个标记直接或经由间隔基(例如酰胺基)共价连接至肽模拟物上无干扰的位置，该等位置可藉由定量结构活性数据及/或分子模型化来预测。该等无干扰之位置一般为不与和肽模拟物结合以产生治疗作用之巨分子形成直接接触之位置。衍生化(例如标记)肽仿真物不应实质上干扰肽仿真物之所需生物学或药理学活性。
KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3氨基酸序列之一或多个氨基酸经相同类型之D-氨基酸系统性取代(例如D-离氨酸替代L-离氨酸)可用于产生较稳定之肽。另外，包含KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3氨基酸序列或实质上一致之序列变异体的限制性肽可藉由此项技术中已知之方法产生(Rizo及Gierasch(1992)Annu.Rev.Biochem.61:387)；例如，藉由添加能够形成分子内二硫桥键以使肽环化的内部半胱氨酸残基。本文所鉴别之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之氨基酸序列将使得熟习此项技术者能够产生对应于KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3肽序列及其序列变异体的多肽。该等多肽可在原核或真核宿主细胞中藉由表现编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3肽序列之聚核苷酸而产生(常作为较大多肽之一部分)。或者，该等肽可藉由化学方法合成。用于在重组宿主中表现异源多肽、化学合成多肽及活体外转译之方法在此项技术中为熟知的。核心序列之某些胺基端及/或羧基端修饰及/或肽延伸可提供有利之物理、化学、生物化学及药理学特性，诸如：稳定性增强、效能及/或功效增强、对血清蛋白酶具抗性、药物动力学特性合乎需要，及其它特性。肽可治疗性用于治疗患者疾病，例如藉由改变共刺激来达成。
对功能而言必需之氨基酸可藉由此项技术中已知之方法来鉴别，诸如定点突变诱发或丙氨酸扫描突变诱发。Cunningham等人,(1989)Sci.244:1081-85。后一程序在分子中之每个残基上引入单个丙氨酸突变。接着测试所得突变体分子之生物活性，诸如抗原决定基结合或活体外ADCC活性。对于配体-受体结合关键之位点亦可藉由结构分析(诸如结晶学、核磁共振或光亲和标记)来测定。Smith等人,(1992)J.Mol.Biol.224:899-904；de Vos等人,(1992)Sci.255:306-12。
举例而言，一类取代为保守性氨基酸取代。该等取代为KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽中之既定氨基酸经另一具有类似特征之氨基酸取代的取代。通常视作保守性取代者为脂族氨基酸Ala、Val、Leu及Ile间的置换(一个氨基酸置换为另一氨基酸)；羟基残基Ser与Thr互换；酸性残基Asp与Glu交换；酰胺残基Asn与Gln之间的取代；碱性残基Lys与Arg交换；芳族残基Phe、Tyr间的置换。关于何种氨基酸改变有可能为表型沉默性氨基酸改变的指导见于例如Bowie等人,(1990)Sci.247:1306-10中。因此，一般技术者应了解，本发明者拥有肽变异体而未描绘所有特异性变异体。对于氨基酸序列，熟习此项技术者应了解，对核酸、肽、多肽或蛋白质序列进行的改变、添加或缺失所编码序列中单个氨基酸或小百分比氨基酸的个别取代、缺失或添加为「经保守修饰之变异体」，其中该改变使得氨基酸经化学上相似之氨基酸取代。提供功能上相似之氨基酸的保守性取代表在此项技术中为熟知的。该等经保守修饰之变异体另外为且不排除本发明之多形变异体、种间同源物及对偶基因。参见例如Creighton(1992)Proteins:Structures andMolecular Properties[第2版]W.H.Freeman。
此外，多肽常含有除20种「天然存在」氨基酸以外的氨基酸。此外，许多氨基酸(包括末端氨基酸)可藉由天然方法(诸如加工及其它转译后修饰)或藉由此项技术中熟知之化学修饰技术来修饰。已知修饰包括(但不限于)乙酰化、酰化、ADP-核糖基化、酰胺化、共价连接黄素、共价连接血红素部分、共价连接核苷酸或核苷酸衍生物、共价连接脂质或脂质衍生物、共价连接磷脂酰肌醇、交联、环化、形成二硫键、去甲基、形成共价交联、形成胱氨酸、形成焦麸氨酸盐、甲酰化、g-羧化、糖基化、形成GPI锚定、羟基化、碘化、甲基化、肉豆蔻酰基化、氧化、蛋白水解加工、磷酸化、异戊二烯化、外消旋化、硒砜基化(selenoylation)、硫酸化、转移RNA介导之向蛋白质中添加氨基酸(诸如精胺酰基化)及泛素化。参见Creighton(1992)Proteins:Structureand Molecular Properties[第2版]；及Lundblad(1995)Techniques in ProteinModification[第1版]。关于此主题之许多详细评述为可得到的。参见例如Wold(1983)Posttranslational Covalent Modification of Proteins Acad.Press,NY；Seifter等人,(1990)Meth.Enzymol.182:626-46；及Rattan等人,(1992)Ann.NY Acad.Sci.663:48-62。
片段
KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之生物活性部分包括KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之参与KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3分子与非KIR2DL1、非KIR2DL2及非KIR2DL3分子(例如KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之天然配体)之间的相互作用之片段。KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之生物活性部分包括包含与KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之氨基酸序列(例如展示于SEQ ID NO:2、4或5中之氨基酸序列)具有足够之一致性或源自KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之氨基酸序列的氨基酸序列之肽，其所包括之氨基酸少于全长KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽且展现KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之至少一种活性。通常，生物活性部分包含具有KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之至少一种活性的结构域或基元，该至少一种活性为例如调节(抑制)CD4T细胞对抗-CD3之增殖反应、以抗原特异性方式抑制同源CD4T细胞之增殖反应、对特定细胞激素表现之影响。KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之生物活性部分可为氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24之长度为例如25个、50个、75个、100个、125个、150个、175个、200个、225个或225个以上氨基酸的多肽。KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之生物活性部分可作为标靶用于研发可调节KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3介导之活性(例如免疫细胞活化)之药剂。
KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之生物活性部分可包含至少一部分细胞外域。KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之生物活性部分可含有至少一部分细胞外域及一或多个以下结构域：信号肽域、跨膜域及细胞质域。此外，多肽之其它区缺失的其它生物活性部分可藉由重组技术来制备且针对原生KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之一或多种功能活性对其进行评估。
KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽可具有展示于氨基酸序列SEQ IDNO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24中之氨基酸序列。KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽可与氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24实质上一致，且保留氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24之多肽的功能活性，而氨基酸序列因天然对偶基因变异或突变诱发而有所不同，如本文所述。
融合蛋白
包含KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之融合体亦处于本发明范畴内。举例而言，融合蛋白可与GST融合蛋白有关，其中KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽序列融合至GST序列之C端。该等融合蛋白可有助于纯化重组KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽。或者，可使KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽与结合B细胞滤泡之蛋白质融合，从而引发体液免疫反应及T细胞活化。Berney等人,(1999)J.Exp.Med.190:851-60。或者，举例而言，KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽可以基因方式与抗树突状细胞抗体偶合以将抗原传递至免疫系统且刺激细胞免疫反应。He等人,(2004)Clin.CancerRes.10:1920-27。本发明之嵌合或融合蛋白可藉由标准重组DNA技术产生。举例而言，根据习知技术，例如藉由使用用于接合之钝端或交错端端点、提供适当端点之限制酶消化、酌情填入黏性末端、避免不合需要之连接的碱性磷酸酶处理及酶促接合将编码不同多肽序列之DNA片段同框接合于一起。融合基因可藉由习知技术(包括自动DNA合成器)来合成。
融合蛋白可包括C端或N端易位序列。此外，融合蛋白可包含例如用于蛋白质侦测、纯化或其它应用之其它组件。有助于侦测及纯化之结构域包括(但不限于)金属螯合肽，诸如聚组氨酸束、组氨酸-色氨酸模块或其它允许在固定金属上纯化的结构域；麦芽糖结合蛋白；蛋白质A结构域，其允许在固定之免疫球蛋白上纯化；或用于FLAG延伸/亲和纯化系统(Sigma-Aldrich,St.Louis MO.)中之结构域。
融合蛋白可由本发明之蛋白质藉由与包含免疫球蛋白之恒定区的一部分免疫球蛋白融合来制备。更佳，免疫球蛋白之该部分包含视情况且更佳为人类重链恒定区之重链恒定区。重链恒定区最佳为IgG重链恒定区，且视情况且最佳为Fc链，最佳为包含CH2及CH3域之IgG Fc片段。虽然可视情况使用任何IgG亚型，但IgG1亚型较佳。Fc链可视情况为已知或「野生型」Fc链，或者可为突变Fc链。参见例如美国专利申请公开案第2006/0034852号。术语「Fc链」亦视情况包含任何类型之Fc片段。IgG子类中多种涉及抗体恒定区介导之活性的特定氨基酸残基已经鉴别。包括、取代或排除此等特定氨基酸从而会允许包括或排除特定免疫球蛋白恒定区介导之活性。此外，特定改变可引起Fc链之例如去糖基化及/或其它所需改变。可视情况作出至少某些改变以阻断Fc之被视作不合需要之功能，诸如不合需要之免疫系统作用。参见McCafferty等人,(2002)Antibody Engineering:A Practical Approach(编)Oxford University Press。
在易位结构域(用于高效质膜表现)与新转译之多肽的其余部分之间包括可裂解连接子序列，诸如因子Xa(参见例如Ottavi,(1998)Biochimie80:289-93)、枯草杆菌蛋白酶识别基元(参见例如Polyak(1997)Protein Eng.10:615-19)；肠激酶(Invitrogen,San Diego,CA.)可用于促成纯化。举例而言，一种构筑体可包括编码多肽之核酸序列，其连接至6个组氨酸残基，继而为硫氧还原蛋白、肠激酶裂解位点(参见例如Williams(1995)Biochemistry34:1787-97)及C端易位结构域。组氨酸残基有助于侦测及纯化，而肠激酶裂解位点提供自融合蛋白之其余部分纯化所需蛋白质的方式。关于编码融合蛋白之载体的技术以及融合蛋白之应用充分描述于科学及专利文献中。参见例如Kroll(1993)DNA Cell.Biol.12:441-53。
融合蛋白可为GST-KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3融合蛋白，其中KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3序列融合至GST序列之C端。该等融合蛋白可有助于纯化重组KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3。在另一实施例中，融合蛋白为在N端含有异源信号序列之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽。在某些宿主细胞(例如哺乳动物宿主细胞)中，KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之表现及/或分泌可经由使用异源信号序列而得到增强。在一实施例中，融合蛋白为Ig-KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3融合蛋白，其中KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3序列融合至Ig分子之一部分。融合蛋白之Ig部分可包括免疫球蛋白恒定区，例如人类Cγ1域或Cγ4域(例如人类IgCγ1或人类IgCγ4之铰链、CH2及CH3区)(参见例如美国专利第5,116,964号；第5,580,756号；第5,844,095号)。所得融合蛋白的KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3溶解度、结合亲和力、稳定性及/或价数(亦即每个分子结合位点之数目)可有所改变且其可提高蛋白质纯化之效率。
尤其较佳之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3Ig融合蛋白包括偶合至免疫球蛋白恒定区(例如Fc区)的KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之细胞外域。免疫球蛋白恒定区可含有减少或消除为免疫球蛋白结构所固有之效应活性的遗传修饰。举例而言，可将编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之细胞外部分的DNA连接至由定点突变诱发所修饰之编码人类IgGγ1及/或IgGγ4之铰链、CH2及CH3区的DNA，例如如WO97/28267中所教示。可将本发明之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3融合蛋白并入医药组合物中且活体内投与个体。KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3融合蛋白可用于影响KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合搭配物之生物可用率。KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3融合蛋白可治疗性用于治疗将受益于调节免疫反应之病状或病症。此外，本发明之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3融合蛋白可用作免疫原以在个体体内产生抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体，可用于纯化KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合蛋白，且可用于筛选分析中以鉴别抑制KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3与其天然结合搭配物相互作用的分子。
结合物
KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽可结合至其它部分。该等结合物常用于制备疫苗。KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽可结合至碳水化合物(例如甘露糖、岩藻糖、葡萄糖、GlcNA、麦芽糖)，该碳水化合物可由树突状细胞及巨噬细胞上存在之甘露糖受体所识别。随后之结合、聚集及受体介导之内饮及吞噬功能使得先天及应变性免疫得到增强。参见Mahnke等人,(2000)J.Cell Biol.151:673-84；Dong等人,(1999)J.Immonol.163:5427-34。其它适于结合以引起免疫反应之部分包括(但不限于)匙孔螺血氰蛋白(KLH)、白喉类毒素、霍乱类毒素、假单胞菌外蛋白A及微生物外膜蛋白(OMPS)。
多肽分离
本发明亦提供分离KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽(例如氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24)之方法。举例而言，相关细胞株可自患有自体免疫或发炎病症之患者获得。在均质化且于清洁剂中溶解之后，以层析方式对抗原进行纯化。尺寸排阻或亲和层析可用于此目的，且可连同抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体一起使用。举例而言，可将抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体固定于固体支撑物(例如偶合至树脂、磁性珠粒)上以进行简单抗原吸附、洗涤且自固体支撑物溶离。接着针对抗原存在、表征及鉴别进一步研究溶离之蛋白质。参见Walker(2002)Protein ProtocolsHandbook[第2版]Humana Press及Culture(2003)[编]Protein PurificationProtocols Humana Press。
以此方式分离之抗原可用于使用习知医药赋形剂及载剂物质来制备药物。举例而言，活体内投与于生理NaCl溶液中之经纯化抗原。
另外，本发明之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽在作为高通量筛选之一部分的活性鉴别中可用作抗原。高通量筛选法为熟习此项技术者所知。Wells(2002)High Throughout Bioanalytical Sample Preparation ElsevierHealth Sciences。
编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之聚核苷酸
本发明亦提供编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之核苷酸。本发明亦提供编码氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽的聚核苷酸。本发明亦提供本文所述之聚核苷酸序列之片段、可与本文所述之聚核苷酸序列杂交之序列以及与本文所述之聚核苷酸序列至少约80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源之序列。
本发明亦提供包含至少一种KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3序列之编码类似多肽之聚核苷酸，其使用不同密码子，具有特征在于天然存在或以随机或靶向方式人工诱导之突变的改变之序列，诸如一或多个核苷酸缺失、插入或取代。本发明亦涵盖同源核酸序列(例如，其形成本发明聚核苷酸序列之一部分)，其包括本发明聚核苷酸独特之序列区域。
本发明亦涵盖编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之同源物的核酸，该等同源物与本文所述之氨基酸序列具有至少约80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致同源性，如可使用国家生物技术信息中心(NCBI)之BlastP软件使用预设参数所测定。本发明亦涵盖上述聚核苷酸之片段以及具有天然存在或以随机或靶向方式人工诱导之突变(诸如一或多个核酸缺失、插入或取代)的多肽。
核酸分子可编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3，或该核酸分子之功能性片段。该核酸之「功能性片段」包括编码该KIR2DL1、该KIR2DL2及该KIR2DL3之基因或cDNA片段，该片段能够经表现而产生能够引起免疫反应(例如选择性结合KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之抗体)的KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3。因此，举例而言，对应于促进抗原之免疫原性之氨基酸残基的本发明之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之片段且该等片段可用以充当抗原以引起免疫反应(例如体液或细胞免疫反应)。本发明之此态样亦包括本发明核酸之经差异剪接之同功异型物及转录起点。本发明之核酸分子亦包含上文所述之编码本发明之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3的核酸分子之片段、衍生物及对偶基因变异体。制备编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之片段之核酸的方法及材料在此项技术中为熟知的。参见例如Maniatis等人,(2001)Molecular Cloning:A Laboratory Manual[第3版]Cold Spring HarborLaboratory Press。
涵盖编码氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24之聚核苷酸之全部或一部分的核酸分子或直系同源物或变异体可藉由聚合酶链反应(PCR)使用基于编码氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24之聚核苷酸的序列所设计之合成寡核苷酸引子而分离。
本发明之核酸分子可使用cDNA、mRNA，或者使用基因组DNA作为模板且使用适当寡核苷酸引子根据标准PCR扩增技术来扩增。可将由此扩增之核酸分子选殖至适当载体中且由DNA序列分析表征。此外，对应于KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3核苷酸序列之寡核苷酸可藉由标准合成技术，例如使用自动DNA合成器来制备。
在一实施例中，本发明之分离之编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之核酸分子包含展示于SEQ ID NO:1或3中之核苷酸序列或其片段。在另一实施例中，本发明之核酸分子包含为展示于SEQ ID NO:1或3中之核苷酸序列或此等任何核苷酸序列之一部分之互补序列的核酸分子。与编码氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24之聚核苷酸互补的核酸分子为如下核酸分子，其与编码氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24之聚核苷酸的核苷酸序列足够互补以使其可与分别编码氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24之聚核苷酸的核苷酸序列杂交，从而形成稳定双螺旋体。
在另一实施例中，本发明之分离之核酸分子包含与编码氨基酸序列SEQID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24之完全长度之聚核苷酸至少约70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或99.5%一致的核苷酸序列，或此等任何核苷酸序列之一部分。
此外，本发明之核酸分子可仅包含编码氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24之聚核苷酸的一部分，例如可用作探针或引子之片段或编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之一部分，例如KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之生物活性部分的片段。由选殖人类PD-L2基因所测定之核苷酸序列允许产生设计用于鉴别及/或选殖其它PD-L2家族成员以及其它物种之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3同源物的探针及引子。探针/引子通常包含实质上纯化之寡核苷酸。该寡核苷酸通常包含在严格条件下与有义序列SEQ ID NO:1或3之至少约12或15个，较佳约20或25个，更佳约30、35、40、45、50、55、60、65或75个连续核苷酸杂交之核苷酸序列的区域；编码氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24之聚核苷酸或编码氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24之聚核苷酸之天然存在之对偶基因变异体或突变体的反义序列的区域。
在一个实施例中，本发明之核酸分子包含长度大于约50-100个、100-150个、150-200个、200-250个、250-300个、300-350个、350-400个、400-450个、450-500个、500-550个、550-600个、600-650个、650-700个、700-750个、750-800个、800-850个、850-900个、900-950个或950个以上核苷酸且在严格杂交条件下与编码氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24之聚核苷酸或其互补序列杂交的核苷酸序列。在另一实施例中，本发明之核酸分子包含长度大于约880-900个、900-950个、950-1000个、1000-1050个、1050-1100个、1100-1150个或1150个以上核苷酸且在严格杂交条件下与编码氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24之聚核苷酸或其互补序列杂交的核苷酸序列。在另一实施例中，本发明之核酸分子包含长度大于50-100个、100-150个、150-200个、200-250个、250-300个或300个以上核苷酸且在严格杂交条件下与包含编码氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24之聚核苷酸之编码区之核酸分子或其互补序列杂交的核苷酸序列。在另一实施例中，本发明之核酸分子包含如下核苷酸序列，该核苷酸序列的长度大于约50-100个、100-150个、150-200个、200-250个、250-300个、300-350个、350-400个、400-450个、450-500个、500-550个、550-600个、600-650个、650-700个、700-750个、750-800个、850-900个、900-950或950个以上核苷酸，包括包含编码氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24之聚核苷酸之编码区之序列或其互补序列的至少约15个(亦即15个连续)核苷酸，且在严格条件下与包含编码氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24之聚核苷酸的核酸分子或其互补序列杂交。
基于KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3核苷酸序列之探针可用于侦测编码相同或同源多肽之转录物或基因组序列。在实施例中，探针进一步包含与其连接之标记基团，例如标记基团可为放射性同位素、荧光化合物、酶或酶辅因子。该等探针可作为诊断性测试套组之一部分用于诸如藉由量测来自个体之细胞样品中编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之核酸的含量，例如侦测KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3mRNA含量或确定基因组KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3基因是否已突变抑或缺失来鉴别误表现(misexpress)KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之细胞或组织。
除编码氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24之聚核苷酸的KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3核苷酸序列之外，熟习此项技术者应了解，在群体(例如人类群体)内可能存在DNA序列多形现象而使得KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之氨基酸序列发生改变。在群体内个体间可能因天然对偶基因变异而存在KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3基因之该遗传多形现象。如本文所用之术语「基因」及「重组基因」指包括编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽，较佳哺乳动物KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之开放阅读框架且可进一步包括非编码调节序列及内含子的核酸分子。
人类或小鼠KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之对偶基因变异体包括功能性及非功能性KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽。功能性对偶基因变异体为人类或小鼠KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之天然存在氨基酸序列变异体，其保持结合天然KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合搭配物及/或调节CD4+及CD8+T细胞增殖及细胞激素产生以及淋巴球活化的能力。功能性对偶基因变异体通常仅含有氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24中一或多个氨基酸之保守性取代，或多肽之非关键区中之非关键残基的取代、缺失或插入。
非功能性对偶基因变异体为人类或小鼠KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之天然存在氨基酸序列变异体，其不能够结合天然KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合搭配物及/或调节本文所述之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3活性中之任一者。非功能性对偶基因变异体通常含有氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23及24之非保守性取代、缺失或插入或提前截短，或多肽之关键残基或关键区之取代、插入或缺失。
本发明进一步提供人类或小鼠KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之非人类、非小鼠直系同源物。人类KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之直系同源物为自非人类、非小鼠生物体分离且与本文所揭示之人类及鼠类KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽具有相同之结合活性及/或淋巴球活化调节活性以及调节CD4+及CD8+T细胞增殖及细胞激素产生之能力的多肽。
可分析突变型KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽结合天然KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合搭配物及/或调节天然KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合搭配物之活性、调节细胞内或细胞间信号传导、调节T淋巴球活化及/或调节生物体之免疫反应的能力。
分离之核酸分子编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3或KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3融合蛋白。包含至少一种编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3或KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3蛋白质、多肽或肽之第一核苷酸序列可操作地连接至编码非KIR2DL1、非KIR2DL2及非KIR2DL3蛋白质、多肽或肽之第二核苷酸序列的该等核酸分子可藉由标准重组DNA技术制备。
此外，一致性广泛地指相关核酸分子或由其编码之蛋白质之间存在功能性及/或结构等效性。与上文所述之分子同源且构成此等分子之衍生物的核酸分子一般为此等分子之变异体，其构成修饰物且发挥相同生物功能。同时，变异体可天然存在，例如其可为来自其它物种之序列，或其可为突变体，其中此等突变体可能以天然方式存在，或藉由目标性突变诱发而引入。变异体亦可为以合成方式制备之序列。对偶基因变异体可为天然存在之变异体且亦可为以合成方式制备之变异体或由重组DNA技术产生之变异体。因遗传密码简并而与本发明核酸分子不同之核酸分子构成特殊形式之衍生物。
在本发明范畴内亦包括任何编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之氨基酸序列的核苷酸序列。由于遗传密码简并，一个以上密码子可用于编码特定氨基酸。使用遗传密码，可鉴别一或多个不同核苷酸，其各自应能够编码氨基酸。特定核苷酸实际上构成实际密码子编码序列之机率可藉由考虑异常碱基配对关系及在表现KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之真核或原核细胞中实际上使用特定密码子(用于编码特定氨基酸)的频率来估算。该等「密码子使用规则」系由Lathe等人,(1985)J.Molec.Biol.183:1-12揭示。
经修饰之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3聚核苷酸
本发明之核苷酸可为经修饰之聚核苷酸。未经修饰之核苷酸在某些应用中常并非最佳，例如倾向于由细胞核酸酶降解。对寡核苷酸之一或多个次单位进行化学修饰可赋予改良之特性，例如可使得聚核苷酸之核酸酶稳定性较大。典型寡核苷酸修饰在此项技术中为熟知的且可包括以下一或多者：(i)一或两个非键联磷酸酯氧及/或磷酸二酯糖间键联中一或多个键联磷酸酯氧之改变，例如置换；(ii)核糖之组分的改变，例如置换，例如核糖上之2'羟基的修饰或置换；(iii)磷酸酯部分全部置换；(iv)天然存在之碱基经非天然碱基修饰或置换；(v)核糖-磷酸酯主链例如经肽核酸(PNA)置换或修饰；(vi)寡核苷酸之3'端或5'端之修饰；及(vii)糖之修饰，例如六员环。根据本发明使用之聚核苷酸可藉由此项技术中熟知之多种方式合成，或购自多种商业供货商(LCSciences,Houston,TX；Promega,Madison,WI；Invitrogen,Carlsbad,CA)。
反义序列
除上文所述之编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之核酸分子之外，本发明之另一态样关于为其反义序列的分离之核酸分子。「反义」核酸包含与编码多肽之「有义」核酸互补，例如与双股cDNA分子之编码股互补或与mRNA序列互补的核苷酸序列。因此，反义核酸可以氢键键结至有义核酸。反义核酸可与整个KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3编码股互补，或仅与其一部分互补。在一个实施例中，反义核酸分子为编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之核苷酸序列之编码股之「编码区」的反义序列。术语「编码区」系指核苷酸序列中包含可转译成氨基酸残基之密码子的区域。在另一实施例中，反义核酸分子为编码PD-L之核苷酸序列之编码股之「非编码区」的反义序列。术语「非编码区」系指侧接编码区之不转译成氨基酸之5'及3'序列(亦称为5'及3'非转译区)。在编码本文所揭示之人类或小鼠KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3的编码股序列之情况下，可根据沃森-可瑞克碱基配对规则来设计本发明之反义核酸。反义核酸分子可与KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3mRNA之整个编码区互补，但更佳为仅为KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3mRNA之一部分编码区或非编码区之反义序列的寡核苷酸。举例而言，反义寡核苷酸可与KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3或KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3mRNA之转译起始位点附近之区域互补。反义寡核苷酸之长度可为例如约5个、10个、15个、20个、25个、30个、35个、40个、45个或50个核苷酸。本发明之反义核酸分子可使用化学合成及酶促接合反应，使用此项技术中已知之程序来建构。举例而言，反义核酸分子(例如反义寡核苷酸)可使用天然存在之核苷酸或经设计以增强分子之生物稳定性或增强反义核酸与有义核酸之间形成的双螺旋体之物理稳定性的经不同修饰之核苷酸来化学合成，例如可使用硫代磷酸酯衍生物及吖啶取代之核苷酸。可用于产生反义核酸之经修饰核苷酸的实例包括5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、4-乙酰胞密啶、5-(羧基羟甲基)尿嘧啶、5-羧甲基胺基甲基-2-硫尿苷、5-羧甲基胺基甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、β-D-半乳糖苷基Q核苷、肌苷、N6-异戊烯基腺嘌呤、1-甲基鸟嘌呤、1-甲基肌苷、2,2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲胺基甲基尿嘧啶、5-甲氧基胺基甲基-2-硫尿嘧啶、β-D-甘露糖基Q核苷、5'-甲氧基羧甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N6-异戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧基乙酸(v)、氧丁氧苷(oxybutoxosine)、假尿嘧啶、Q核苷、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧基乙酸甲酯、尿嘧啶-5-氧基乙酸(v)、5-甲基-2-硫尿嘧啶、3-(3-胺基-3-N-2-羧丙基)尿嘧啶、(acp3)w及2,6-二胺基嘌呤。或者，反义核酸可使用当中以反义定向(亦即，自插入之核酸转录之RNA将具有以下子部分中所进一步描述之相关目标核酸之反义定向)次选殖有核酸的表现载体来以生物方式产生。
本发明之反义核酸分子通常投与个体或就地产生以使其与编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之细胞mRNA及/或基因组DNA杂交或结合，从而例如藉由抑制转录及/或转译来抑制多肽表现。杂交可藉由习知核苷酸互补性以形成稳定双螺旋体，或例如在结合至DNA双螺旋体之反义核酸分子的状况下，经由双螺旋之大沟(major groove)中的特定相互作用来达成。本发明之反义核酸分子之投药途径的实例包括直接注射于组织部位处。或者，反义核酸分子可经修饰以靶向所选细胞且接着全身投与。举例而言，对于全身投与，可例如藉由将反义核酸分子连接至可结合至细胞表面受体或抗原之肽或抗体来修饰反义分子以使其特异性结合至所选细胞表面上表现之受体或抗原。亦可使用本文所述之载体将反义核酸分子传递至细胞。为达成足够之反义分子细胞内浓度，在强pol II或pol III启动子控制下置放有反义核酸分子的载体构筑体为较佳的。
KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3反义核酸分子可为α-变旋异构核酸分子。α-变旋异构核酸分子与互补RNA形成特定双股杂交物，其中与常见β-单位相反，各股彼此平行。Gaultier等人,(1987)Nucleic Acids Res.15:6625-6641。反义核酸分子亦可包含2'-O-甲基核糖核苷酸(Inoue等人,(1987)Nucleic Acids Res.15:6131-6148)或嵌合RNA-DNA类似物(Inoue等人,(1987)FEBS Lett.215:327-330)。
KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3反义核酸可为核糖核酸酶。核糖核酸酶为具有核糖核酸酶活性之能够裂解与其具有互补区之单股核酸(诸如mRNA)的催化性RNA分子。因此，核糖核酸酶(例如锤头型核糖核酸酶(描述于Haseloff及Gerlach(1988)Nature334:585-591中))可用于催化裂解KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3mRNA转录物，从而抑制KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3mRNA转译。对编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之核酸具有特异性之核糖核酸酶可基于本文揭示之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3cDNA之核苷酸序列来设计。举例而言，可建构眼原虫属(Tetrahymena)L-19IVS RNA之衍生物，其中活性位点之核苷酸序列与编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之mRNA中欲裂解之核苷酸序列互补。参见例如美国专利第4,987,071号及美国专利第5,116,742号。或者，KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3mRNA可用于自RNA分子池中选择具有特异性核糖核酸酶活性之催化性RNA。参见例如Bartel及Szostak(1993)Science261:1411-1418。
或者，KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3基因表现可藉由靶向与KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之调节区(例如KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3启动子及/或强化子)互补的核苷酸序列，以形成参螺旋结构，从而防止KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3基因在标靶细胞中转录来抑制。一般参见Helene(1991)Anticancer Drug Des.6(6):569-84；Helene等人,(1992)Ann.N.Y.Acad.Sci.660:27-36；及Maher,L.J.(1992)Bioessays14(12):807-15。
肽核酸
在另一实施例中，本发明之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3核酸分子可在碱基部分、糖部分或磷酸酯主链上得到修饰以改良例如分子之稳定性、杂交性或溶解度。举例而言，核酸分子之磷酸脱氧核糖主链可经修饰以产生肽核酸。参见Hyrup及Nielsen(1996)Bioorg.Med.Chem.4(1):5-23。如本文所用之术语「肽核酸」或「PNA」指核酸模拟物，例如DNA模拟物，其中磷酸脱氧核糖主链经假肽主链置换且仅保留四个天然核碱基。PNA之中性主链已经展示可允许DNA与RNA在低离子浓度之条件下特异性杂交。可使用标准固相肽合成方案合成PNA寡聚物，如Hyrup及Nielsen(1996)(同上)以及Perry-O'Keefe等人,(1996)Proc Natl.Acad.Sci.USA93:14670-675中所述。
KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3核酸分子之PNA可用于治疗性及诊断性应用。举例而言，PNA可用作反义或反基因(antigene)药剂以藉由例如诱导转录或转译停滞或抑制复制来对基因表现进行序列特异性调节。KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3核酸分子之PNA亦可用于分析基因中之单碱基对突变(例如藉由PNA导引之PCR锁止技术(PCR clamping))；在与其它酶(例如S1核酸酶(Hyrup及Nielsen(1996)(同上)))组合使用时用作『人工限制酶』；或用作DNA定序或杂交之探针或引子(Hyrup及Nielsen(1996)(同上)；Perry-O'Keefe等人(1996)(同上))。
KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之PNA可藉由将亲脂性或其它辅助基团连接至PNA、藉由形成PNA-DNA嵌合体或藉由使用脂质体或此项技术中已知之其它药物传递技术来修饰(例如以增强其稳定性或细胞吸收)。举例而言，KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3核酸分子之PNA-DNA嵌合体可经产生而可组合PNA及DNA之有利特性。该等嵌合体允许DNA识别酶(例如RNAse H及DNA聚合酶)与DNA部分相互作用，同时PNA部分提供高结合亲和力及特异性。PNA-DNA嵌合体可使用根据碱基堆积、核碱基之间键的数目及定向所选之适当长度之连接子来连接(Hyrup及Nielsen(1996)(同上))。可如Hyrup及Nielsen(1996)(同上)以及Finn P.J.等人(1996)Nucleic Acids Res.24(17):3357-63中所述合成PNA-DNA嵌合体。举例而言，DNA链可在固体支撑物上，使用标准胺基磷酸酯偶合化学法及经修饰之核苷类似物来合成，例如5'-(4-甲氧基三苯甲基)胺基-5'-脱氧-胸苷胺基磷酸酯可用作PNA与DNA之5'端之间的桥(Mag,M.等人(1989)Nucleic Acids Res.17:5973-88)。接着以逐步方式偶合PNA单体，产生具有5'PNA段及3'DNA段之嵌合分子(Finn P.J.等人(1996)(同上))。或者，嵌合分子可经合成而具有5'DNA段及3'PNA段(Peterser等人,(1975)Bioorganic Med.Chem.Lett.5:1119-11124)。
寡核苷酸
寡核苷酸可包括其它附加之基团，诸如肽(例如用于活体内靶向宿主细胞受体)或促成跨细胞膜(参见例如Letsinger等人(1989)Proc Natl.Acad.Sci.USA86:6553-6556；Lemaitre等人(1987)Proc Natl.Acad.Sci.USA84:648-652；PCT公开案第WO88/09810号)或血脑障壁(参见例如PCT公开案第WO89/10134号)转运之药剂。另外，寡核苷酸可用杂交引发之裂解剂(参见例如Krol等人(1988)Biotechniques6:958-976)或嵌入剂(参见例如Zon(1988)Pharm.Res.5:539-549)修饰。为此目的，寡核苷酸可结合至另一分子(例如肽、杂交引发之交联剂、转运剂或杂交引发之裂解剂)。
表现
本发明之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之分离及表现可藉由公认选殖程序，使用基于本申请案中所揭示之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3核酸序列所建构之探针或引子来达成。相关KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3序列亦可自人类或其它物种基因组数据库中使用本文揭示之序列及已知之基于计算机之搜寻技术(例如BLAST序列搜寻)来鉴别。本文揭示之假基因可用于鉴别功能性对偶基因或相关基因。
接着可使用表现载体来感染或转染宿主细胞以使此等序列进行功能性表现。可制备此等基因及载体且使其活体外或活体内表现。熟习此项技术者应了解，改变及控制核酸表现所需之表型可藉由调节本发明载体内基因及核酸(例如启动子、强化子)之表现或活性来获得。可使用所述之任何用于增加或降低表现或活性之已知方法。
在另一实施例中，重组哺乳动物表现载体能够导引核酸优先表现于特定细胞类型中(例如使用组织特异性调节组件来使核酸表现)。组织特异性调节组件在此项技术中为已知的。适合之组织特异性启动子之非限制性实例包括白蛋白启动子(肝特异性；Pinkert等人(1987)Genes Dev.1:268-277)、淋巴特异性启动子(Calame及Eaton(1988)Adv.Immunol.43:235-275)、特定T细胞受体启动子(Winoto及Baltimore(1989)EMBO J.8:729-733)及特定免疫球蛋白启动子(Banerji等人(1983)Cell33:729-740；Queen及Baltimore(1983)Cell33:741-748)、神经元特异性启动子(例如神经丝启动子；Byrne及Ruddle(1989)Proc Natl.Acad.Sci.USA86:5473-5477)、胰脏特异性启动子(Edlund等人(1985)Science230:912-916)，及乳腺特异性启动子(例如乳清启动子；美国专利第4,873,316号及欧洲申请公开案第264,166号)。发育调节启动子亦例如由鼠类hox启动子(Kessel及Gruss(1990)Science249:374-379)及α-胎蛋白启动子(Campes及Tilghman(1989)Genes Dev.3:537-546)所涵盖。
本文所提供之聚核苷酸序列可根据此项技术中已知之任何寡核苷酸合成法(诸如酶促合成或固相合成)来产生。进行固相合成之设备及试剂可自例如Applied Biosystems购得。亦可使用用于该合成之任何其它方式；聚核苷酸之实际合成完全处于熟习此项技术者的能力范围之内。参见例如Maniatis等人,(2001)Molecular Cloning:A Laboratory Manual[第3版]Cold SpringHarbor Laboratory Press；Swamy(2008)Laboratory Manual on BiotechnologyRastogi Publications；Herdewijn(2005)[编]Methods in Molecular Biolog:Oligonucleotide Synthesis:Methods and Applications,第288卷,HumanaPress；及Rapley(2000)[编]The Nucleic Acid Protocols Handbook HumanaPress。接着可藉由合成互补股且在适当条件下将各股黏接于一起，或藉由使用DNA聚合酶及适当引子序列添加互补股来获得双股DNA片段。
用于操作核酸，诸如在序列中产生突变、次选殖、标记探针、定序、杂交之技术充分描述于科学及专利文献中。参见例如Sambrook等人,(2001)(编)Molecular Cloning:A Laboratory Manual(第3版)Cold Spring HarborLaboratory；Ausubel等人,(2011)编,Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,Inc.,New York；Tijssen(1993)[编]LaboratoryTechniques in Biochemistry and Molecular Biology:Hybridization WithNucleic Acid Probes,Part I,Theory and Nucleic Acid Preparation,Elsevier,NY。
杂交及杂交强度(例如聚核苷酸间缔合之强度)受此项技术中熟知之多种因素影响，包括聚核苷酸之间的互补度，及所涉及之条件的严格度，其受诸如以下之条件影响：盐浓度、其它组分之存在(例如聚乙二醇存在或不存在)、杂交股之莫耳浓度及聚核苷酸股之G+C含量，所有该等条件皆产生所形成杂交物的特征性熔融温度(Tm)。核酸杂交之技术由以下参考文献所揭示：Sambrook等人,(2001)(编)Molecular Cloning:A Laboratory Manual[第3版]Cold Spring Harbor Laboratory；及Hayrnes等人,(1985)Nucleic AcidHybridization,a Practical Approach(IRL Press,DC)。杂交洗涤条件可包括0.2×SSC/0.1%SDS之洗涤溶液及在室温下在旋转下培育10分钟(低严格度洗涤)；预先升温(42℃)之0.2×SSC/0.1%SDS之洗涤溶液及在42℃下在旋转下培育15分钟(中等严格度洗涤)；及预先升温(68℃)之0.1×SSC/0.1%SDS之洗涤溶液及在68℃下在旋转下培育15分钟(高严格度洗涤)。参见Ausubel等人,(2011)[编]Current Protocols in Molecular Biology John Wiley&Sons,Inc。
可使用寡核苷酸引子来扩增编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之核酸。亦可使用扩增技术定量地选殖或量测本文所述之核酸。扩增方法在此项技术中亦为熟知的，且包括例如聚合酶链反应(PCR)(Innis(1990)[编]PCRProtocols,a Guide to Methods and Applications,Academic Press,NY.；Innis(1995)[编]PCR Strategies,Academic Press,Inc.,NY.)；连接酶链反应(LCR)(Wu(1989)Genomics4:560；Landegren(1988)Science241:1077；Barringer(1990)Gene89:117)；转录扩增(Kwoh(1989)PNAS86:1173)；自我持续序列复制(Guatelli(1990)PNAS87:1874)；Qβ复制酶扩增(Smith(1997)J.Clin.Microbiol.35:1477-91)；自动Q-β复制酶扩增分析(Burg(1996)Mol.Cell.Probes10:257-71)；及其它RNA聚合酶介导之技术(例如NASBA，Cangene,Mississauga,Ontario)。亦参见Berger(1987)Methods Enzymol.152:307-16；Sambrook等人,(2001)(编)Molecular Cloning:A Laboratory Manual(第3版)Cold Spring Harbor Laboratory；Ausubel等人,(2011)[编]CurrentProtocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,Inc.,New York；Maniatis等人,(2001)Molecular Cloning:A Laboratory Manual[第3版]Cold SpringHarbor Laboratory Press；美国专利第4,683,195号及第4,683,202号；Sooknanan(1995)Biotechnology13:563-64。
设计简并引子对之模式在此项技术中为熟知的。举例而言，共同-简并杂交寡核苷酸引子(COnsensus-DEgenerate Hybrid Oligonucleotide Primer，CODEHOP)策略计算机程序为易得的且由BlockMaker多序列比对位点直接连接以自一组相关蛋白质序列(诸如本文提供之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3序列)开始进行杂交引子预测。参见例如Rose(1998)Nucleic AcidsRes.26:1628-35；Singh(1998)Biotechniques24:318-19。
可使用上文所述之核酸探针分离与本文所揭示之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3实质上一致的多形变异体、对偶基因及种间同源物。或者，可使用表现库以藉由用针对KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3产生且亦识别并选择性结合至KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3同源物之抗血清或纯化抗体以免疫方式侦测所表现之同源物来选殖KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3以及其多形变异体、对偶基因及种间同源物。
编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之核酸可藉由使用适当(完整或简并)引子对扩增(例如PCR)适当核酸序列来产生。所扩增之核酸可为来自任何细胞或组织之基因组DNA或源自表现KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之细胞的mRNA或cDNA。在宿主细胞中表现异源序列之方法在此项技术中为熟知的。参见例如Maniatis等人,(2001)Molecular Cloning:A LaboratoryManual[第3版]Cold Spring Harbor Laboratory Press。
包含KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之融合蛋白
可建构包含编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之核酸融合至易位序列的杂交蛋白编码序列。亦提供包含基元及抗原区之杂交KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3。此等核酸序列可操作地连接至转录或转译控制组件，例如转录及转译起始序列、启动子及强化子、转录及转译终止子、聚腺苷酸化序列及其它适用于使DNA转录成RNA之序列。在建构重组表现卡匣、载体及转殖基因时，可使用启动子片段来导引所需核酸在所有所需细胞或组织中表现。
融合蛋白可包含C端或N端易位序列。此外，融合蛋白可包含例如用于蛋白质侦测、纯化或其它应用之其它组件。有助于侦测及纯化之结构域包括例如金属螯合肽，诸如聚组氨酸束、组氨酸-色氨酸模块或其它允许在固定金属上纯化的结构域；麦芽糖结合蛋白；蛋白质A结构域，其允许在固定之免疫球蛋白上纯化；或用于FLAGS延伸/亲和纯化系统(Sigma-Aldrich)中之结构域。
在易位结构域(用于高效质膜表现)与新转译之多肽的其余部分之间包括可裂解连接子序列，诸如因子Xa(参见例如Ottavi,(1998)Biochimie80:289-93)、枯草杆菌蛋白酶识别基元(参见例如Polyak(1997)Protein Eng.10:615-19)；肠激酶(Invitrogen,San Diego,CA.)可用于促成纯化。举例而言，一种构筑体可包括编码多肽之核酸序列，其连接至6个组氨酸残基，继而为硫氧还原蛋白、肠激酶裂解位点(参见例如Williams(1995)Biochemistry34:1787-97)及C端易位结构域。组氨酸残基有助于侦测及纯化，而肠激酶裂解位点提供自融合蛋白之其余部分纯化所需蛋白质的方式。关于编码融合蛋白之载体的技术以及融合蛋白之应用充分描述于科学及专利文献中。参见例如Kroll(1993)DNA Cell.Biol.12:441-53。
重组表现KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽以及抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体的系统
可藉由科学及专利文献中充分描述之多种习知技术将包含配体结合区编码序列之表现载体(呈个别表现载体形式或呈表现载体库形式)引入基因组中或引入细胞质或细胞核中且使其表现。参见例如Sambrook等人,(2001)[编]Molecular Cloning:A Laboratory Manual(第3版)Cold Spring HarborLaboratory；Ausubel等人,(2011)[编]Current Protocols in Molecular BiologyJohn Wiley&Sons,Inc。
核酸可在可稳定或短暂表现于细胞中之表现卡匣、载体或病毒(例如游离型表现系统)中表现。可将选择标记并入表现卡匣及载体中以赋予转型之细胞及序列以可选表型。举例而言，选择标记可编码用于游离型维持及复制，从而不需要整合至宿主基因组中。举例而言，标记可编码抗生素抗性(例如氯霉素(chloramphenicol)、卡那霉素(kanamycin)、G418、博莱霉素(bleomycin)、潮霉素(hygromycin))或除草剂抗性(例如氯磺隆(chlorosulfurone)或巴斯特(Basta))以允许选择彼等经所需DNA序列转型之细胞。参见例如Ausubel等人,(2011)[编]Current Protocols in Molecular Biology John Wiley&Sons,Inc.；以及Walker及Papley(2009)Molecular Biology and Biotechnology[第5版]Royal Society of Chemistry。由于赋予对基质(如新霉素(neomycin)或潮霉素)之抗性的可选标记基因仅可用于组织培养物中，所以亦在活体外及活体内使用化学抗性基因作为可选标记。
为了可实现本发明聚核苷酸之细胞表现，可使用本发明之核酸构筑体，其至少包括上述核酸序列之一的编码区且进一步包括至少一个顺式作用调节组件。较佳的是，由本发明之核酸构筑体利用之启动子在转型之特定细胞群体中具有活性。细胞类型特异性及/或组织特异性启动子之实例在此项技术中为熟知的。参见Bernardi(2003)[编]Gene Transfer and Expression inMammalian Cells,第38卷Elsevier Science B.V。本发明之核酸构筑体可进一步包括强化子，其可邻近或远离启动子序列且可发挥上调自启动子序列转录之程度的功能。
本发明之核酸构筑体较佳进一步包括适当之可选标记及/或复制起点。较佳，所用之核酸构筑体为转运载体(shuttle vector)，其可在大肠杆菌中繁殖(其中构筑体包含适当之可选标记及复制起点)且对于在细胞中繁殖或整合于所选基因及组织中而言为兼容的。本发明之构筑体可为例如质体、穿梭载体、噬菌粒、黏质体、噬菌体、病毒或人工染色体。
适合构筑体之实例包括(但不限于)pcDNA3、pcDNA3.1(+/-)、pGL3、PzeoSV2(+/-)、pDisplay、pEF/myc/cyto、pCMV/myc/cyto，其各自可购自Invitrogen Co.(Carlsbad,CA.)。反转录病毒载体及封装系统之实例为由Clontech(San Diego,CA.)出售者，包括Retro-X载体pLNCX及pLXSN，其允许选殖至多个选殖位点中且转殖基因自CMV启动子转录。亦包括源自Mo-MuLV之载体，诸如pBabe，其中转殖基因将自5'LTR启动子转录。
本发明之重组表现载体包含呈适于核酸在宿主细胞中表现之形式的本发明核酸，此意谓重组表现载体包括一或多个调节序列，其基于用于表现之宿主细胞来选择且可操作地连接至欲表现之核酸序列。在重组表现载体内，「可操作地连接」意欲意谓相关核苷酸序列以一定方式连接至调节序列以允许核苷酸序列表现(例如，在活体外转录/转译系统中或当将载体引入宿主细胞中时在宿主细胞中)。
术语「调节序列」意欲包括启动子、强化子及其它表现控制组件(例如聚腺苷酸化信号)。该等调节序列描述于例如Goeddel(1990)Gene ExpressionTechnology:Methods in Enzymology185,Academic Press,San Diego,CA中。调节序列包括导引核苷酸序列在多种类型之宿主细胞中进行组成性表现的调节序列以及导引核苷酸序列仅在某些宿主细胞中表现的调节序列(例如组织特异性调节序列)。熟习此项技术者应了解，表现载体之设计可视诸如待转型宿主细胞之选择、所需蛋白质之表现量之因素而定。本发明之表现载体可引入宿主细胞中，从而产生由如本文所述之核酸所编码的蛋白质或肽，包括融合蛋白或肽。
本发明之重组表现载体可经设计以在原核或真核细胞中产生变异蛋白质。举例而言，本发明之蛋白质可在细菌细胞(诸如大肠杆菌)、昆虫细胞(例如使用杆状病毒表现载体)、酵母细胞或哺乳动物细胞中表现。适合之宿主细胞进一步论述于Goeddel(1990)Gene Expression Technology:Methods inEnzymology185,Academic Press,San Diego,CA中。或者，重组表现载体可在活体外例如使用T7启动子调节序列及T7聚合酶来转录及转译。
最常在大肠杆菌中用含有导引融合蛋白或非融合蛋白表现之组成性或诱导性启动子之载体使蛋白质在原核生物中表现。融合载体将多种氨基酸添加至其中所编码之蛋白质中，添加至重组蛋白之胺基端或C端。该等融合载体通常用于以下三个目的：(i)提高重组蛋白表现；(ii)增加重组蛋白之溶解度；及(iii)藉由在亲和纯化中充当配体而有助于纯化重组蛋白。通常，在融合表现载体中，可在融合部分与重组蛋白之接合点处引入蛋白水解裂解位点以在纯化融合蛋白之后能够自融合部分分离重组蛋白。该等酶及其同源识别序列包括因子Xa、凝血酶、PreScission、TEV及肠激酶。典型融合表现载体包括pGEX(Pharmacia Biotech Inc；Smith及Johnson(1988)Gene67:31-40)、pMAL(New England Biolabs,Beverly,MA.)及pRIT5(Pharmacia,Piscataway,N.J.)，其分别使麸胱甘肽S-转移酶(GST)、麦芽糖E结合蛋白或蛋白质A融合至目标重组蛋白。
重组哺乳动物表现载体能够导引核酸表现于特定细胞类型中(例如使用组织特异性调节组件来使核酸表现)。组织特异性调节组件在此项技术中为已知的。为高效产生蛋白质，较佳在针对在所需宿主中表现而最佳化之表现控制序列的控制下置放编码本发明蛋白质之核苷酸序列。举例而言，该等序列可包括最佳化之转录及/或转译调节序列(例如改变之Kozak序列)。
一种最大化重组蛋白在大肠杆菌中之表现的策略为使蛋白质在蛋白水解裂解重组蛋白之能力受损之宿主细菌中表现。参见例如Gottesman(1990)Gene Expression Technology:Methods in Enzymology Academic Press,SanDiego,CA.185:119-128。另一策略为改变欲插入表现载体中之核酸之核酸序列以使得各氨基酸之个别密码子为大肠杆菌中优先使用之密码子。参见例如Wada等人,(1992)Nucl.Acids Res.20:2111-2118。该改变本发明之核酸序列可藉由标准DNA合成技术来进行。另一解决密码子偏性之策略为使用BL21-codon plus细菌菌株(Invitrogen)或Rosetta细菌菌株(Novagen)，此等菌株含有稀有大肠杆菌tRNA基因之额外复本。
编码本发明蛋白质之表现载体可为酵母表现载体。用于在酵母酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中表现之载体的实例包括pYepSec1(Baldari等人,(1987)EMBO J.6:229-234)、pMFa(Kurjan及Herskowitz(1982)Cell30:933-943)、pJRY88(Schultz等人,(1987)Gene54:113-123)、pYES2(InvitrogenCorporation,San Diego,CA.)及picZ(Invitrogen Corp,San Diego,CA.)。
或者，本发明之多肽可在昆虫细胞中使用杆状病毒表现载体产生。可用于在培养之昆虫细胞(例如SF9细胞)中表现蛋白质之杆状病毒载体包括pAc系列(Smith等人,(1983)Mol.Cell.Biol.3:2156-2165)及pVL系列(Lucklow及Summers(1989)Virology170:31-39)。在另一实施例中，本发明之核酸在哺乳动物细胞中使用哺乳动物表现载体来表现。哺乳动物表现载体之实例包括pCDM8(Seed(1987)Nature329:840)及pMT2PC(Kaufman等人,(1987)EMBO J.6:187-195)、pIRESpuro(Clontech)、pUB6(Invitrogen)、pCEP4(Invitrogen)、pREP4(Invitrogen)、pcDNA3(Invitrogen)。当用于哺乳动物细胞中时，表现载体之控制功能常由病毒调节组件提供。举例而言，常用之启动子源自多形瘤、腺病毒2、细胞巨大病毒、劳氏肉瘤病毒(Rous SarcomaVirus)及猿猴病毒40。对于其它适用于原核及真核细胞之表现系统，参见例如Sambrook等人,(2001)(编)Molecular Cloning:A Laboratory Manual(第3版)Cold Spring Harbor Laboratory。
宿主细胞可为任何原核或真核细胞。举例而言，本发明蛋白质可在细菌细胞(诸如大肠杆菌)、昆虫细胞、酵母、植物或哺乳动物细胞(例如中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、COS、HEK293细胞)中产生。其它适合之宿主细胞为熟习此项技术者所知。
载体DNA可经由习知转型或转染技术引入原核或真核细胞中。如本文所用之术语「转型」及「转染」意欲指多种此项技术中公认之用于将外来核酸(例如DNA)引入宿主细胞中之技术，包括磷酸钙或氯化钙共同沈淀、DEAE-聚葡萄糖介导之转染、脂质体转染或电穿孔。适用于转型或转染宿主细胞之方法可见于Sambrook等人,(2001)[编]Molecular Cloning:A LaboratoryManual(第3版)Cold Spring Harbor Laboratory及其它实验室手册中。
可使用任何熟知的用于将外来核苷酸序列引入宿主细胞中之程序。此等程序包括使用磷酸钙转染、凝聚胺、原生质体融合、电穿孔、脂质体、显微注射、质体载体、病毒载体及任何其它熟知用于将选殖之基因组DNA、cDNA、合成DNA或其它外来遗传物质引入宿主细胞中的方法。参见例如Sambrook等人,(2001)(编)Molecular Cloning:A Laboratory Manual(第3版)ColdSpring Harbor Laboratory；以及Walker及Papley(2009)Molecular Biology andBiotechnology[第5版]Royal Society of Chemistry。仅需要使用能够成功地将至少一种核酸分子引入能够表现KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3、相关片段或变异体之宿主细胞中的特定基因工程改造程序。
对于稳定转染哺乳动物细胞，已知视所用表现载体及转染技术而定，仅一小部分细胞可将外来DNA整合至其基因组中。为鉴别且选择此等整合体，一般将编码可选标记(例如抗生素抗性)之基因连同相关基因一起引入宿主细胞中。各种可选标记包括赋予抗药性之标记，诸如G418、潮霉素、嘌呤霉素(puromycin)、杀稻瘟菌素(blasticidin)及甲胺喋呤。可将编码可选标记之核酸于与编码本发明蛋白质之载体相同之载体上引入宿主细胞中或可于单独载体上引入。经引入之核酸稳定转染之细胞可藉由药物选择来鉴别(例如，并有可选标记基因之细胞将存活，而其它细胞死亡)。
本发明之宿主细胞(诸如培养物中之原核或真核宿主细胞)可用于产生(亦即表现)本发明之蛋白质。因此，本发明进一步提供使用本发明之宿主细胞产生本发明之蛋白质的方法。在一个实施例中，该方法包含在适合培养基中培养本发明之宿主细胞(其中引入有编码本发明蛋白质之重组表现载体)，从而产生本发明蛋白质。在另一实施例中，该方法进一步包含自培养基或宿主细胞分离本发明蛋白质。
在将表现载体引入细胞中之后，在有利于相关受体、片段或变异体表现的条件下培养转染之细胞，接着使用标准技术自培养物中回收该相关受体、片段或变异体。该等技术之实例在此项技术中为熟知的。参见例如WO00/06593。
举例而言，可使用允许插入重链及轻链基因之载体来制备本文所述之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3单株抗体，其中可利用对CHO细胞之转染以最佳化制备。吾人使用之质体载体pRc/CMV经设计而意欲达成吾人之嵌合单株抗体之高表现。载体具有接受重链及轻链基因(将其插入于人类CMV下游)之选殖位点。该载体允许在生物反应器培养基中产生超过1000mg/L之量的抗体，因此可传递250mg至500mg之治疗剂量。
每两周一次静脉内传递200mg至400mg剂量之展现极小HAMA之单株抗体可有效控制转移性癌症。目前，吾人已选择允许重链及轻链基因以类似方式插入，但具有在生物反应器流体中产生超过1000mg/L之潜能的新载体。两种质体载体带有由强化子缺乏性SV40早期启动子驱动之dhfr表现单位。载体可在补充有1.0μg/ml甲胺喋呤(MTX)之几乎无血清之培养基中插入CHO-D-SFM(二氢叶酸还原酶(dhfr)缺乏性中国仓鼠卵巢)细胞中。在制备结束时，可在最终纯化抗体之前使细胞适应于无血清培养基。
结合KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之抗体
本发明亦提供选择性结合KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之抗体，其包括(但不限于)单株及人类化单株抗体。选择性结合KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之抗体可在组合物中与医药载剂及其它药剂(例如一种消炎剂、镇痛剂或疾病改善性抗风湿药(DMARD))混合。
分离之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽或其部分或片段可用作免疫原以使用制备多株及单株抗体之标准技术产生结合KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之抗体。可使用全长KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽，或者，本发明提供用作免疫原之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之抗原性肽片段。在一个实施例中，KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之抗原性肽包含SEQ IDNO:7至24中任一者中所示之氨基酸序列的至少8个氨基酸残基，且涵盖KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之抗原决定基，从而针对该肽产生之抗体与KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽形成特异性免疫复合物。较佳，抗原性肽包含至少10个氨基酸残基，更佳包含至少15个氨基酸残基，甚至更佳包含至少20个氨基酸残基，且最佳包含至少30个氨基酸残基。由抗原性肽涵盖之较佳抗原决定基为KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3中位于多肽之细胞外域中的区域，例如亲水性区域，以及具有高抗原性之区域。
KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3免疫原通常用于藉由用免疫原使适合个体(例如家兔、山羊、小鼠或其它哺乳动物)免疫来制备抗体。适当免疫原性制剂可含有例如重组表现之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽或化学合成之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽。例如，其可包含KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽(例如氨基酸序列SEQ ID NO:7至24)之细胞外域。制剂可进一步包括佐剂，诸如弗氏(Freund's)完全或不完全佐剂或类似免疫刺激剂。用免疫原性KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3制剂使适合个体免疫可诱导多株抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体反应。
抗体可包含分子量为约23,000道尔顿(「轻链」)之两条相同多肽轻链及分子量为53,000至70,000(「重链」)之两条相同重链。参见Edelman(1971)Ann.NY.Acad.Sci.190:5。四条链由二硫键连接成「Y」组态，其中轻链自「Y」组态口开始支托重链。「Y」组态之「分支」部分命名为Fab区；「Y」组态之主干部分命名为FC区。氨基酸序列定向为自「Y」组态顶部之N端末端至各链底部之C端末端。N端末端具有对产生其之抗原具有特异性的可变区，且长度为约100个氨基酸，轻链与重链之间且各抗体间存在轻微变异。
可变区在各链中连接至恒定区，恒定区延伸链之剩余长度且在特定抗体类别内不随抗体特异性(亦即产生抗体之抗原)而变。存在五种已知之主要恒定区类别，其决定免疫球蛋白分子之类别(例如IgG、IgM、IgA、IgD及IgE对应于γ、μ、α、δ及ε重链恒定区)。恒定区或类别决定抗体之后继效应功能，包括补体活化(Kabat(1976)Structural Concepts in Immunology andImmunochemistry[第2版]第413-436页；Holt,Rinehart,Winston)及其它细胞反应(Andrews等人,(1980)Clinical Immunobiology1-18；Kohl等人,(1983)Immunology48:187)，而可变区决定将与其反应之抗原。轻链分类为κ或λ。各重链类别可用κ或λ轻链制备。当由融合瘤或由B细胞产生免疫球蛋白时，轻链与重链彼此共价键结，且两条重链之「尾区」部分彼此藉由共价二硫键键结。
在该等条件下特异性结合至抗体可能需要针对对特定蛋白质之特异性而选择的抗体。举例而言，针对来自特定物种(诸如大鼠、小鼠或人类)之精子碱性蛋白产生的多株抗体可经选择以仅获得对精子碱性蛋白具特异性免疫反应性而对除精子碱性蛋白之多形变异体及对偶基因以外的其它蛋白质不具特异性免疫反应性的多株抗体。此选择可藉由除去与来自其它物种之精子碱性蛋白分子交叉反应的抗体来达成。可使用多种免疫分析形式来选择对特定蛋白质具特异性免疫反应性的抗体。举例而言，常规使用固相ELISA免疫分析来选择对蛋白质具有特异性免疫反应性的抗体。对于可用于确定特异性免疫反应性之免疫分析形式及条件的描述，参见例如Harlow及Lane(1998)USING ANTIBODIES:A LABORATORY MANUAL Cold Spring HarborLaboratory。通常，特异性或选择性反应将为背景信号或噪声的至少两倍且更通常为背景的约10至100倍以上。
在另一实施例中，重组哺乳动物表现载体能够导引核酸优先表现于特定细胞类型中(例如使用组织特异性调节组件来使核酸表现)。组织特异性调节组件在此项技术中为已知的。适合之组织特异性启动子之非限制性实例包括白蛋白启动子(肝特异性；Pinkert等人(1987)Genes Dev.1:268-277)、淋巴特异性启动子(Calame及Eaton(1988)Adv.Immunol.43:235-275)、特定T细胞受体启动子(Winoto及Baltimore(1989)EMBO J.8:729-733)及特定免疫球蛋白启动子(Banerji等人(1983)Cell33:729-740；Queen及Baltimore(1983)Cell33:741-748)、神经元特异性启动子(例如神经丝启动子；Byrne及Ruddle(1989)Proc_Natl.Acad.Sci.USA86:5473-5477)、胰脏特异性启动子(Edlund等人(1985)Science230:912-916)，及乳腺特异性启动子(例如乳清启动子；美国专利第4,873,316号及欧洲申请公开案第264,166号)。发育调节启动子亦例如由鼠类hox启动子(Kessel及Gruss(1990)Science249:374-379)及α-胎蛋白启动子(Campes及Tilghman(1989)Genes Dev.3:537-546)所涵盖。
多株抗体
多株抗体为由经抗原免疫之动物之血清获得的异源抗体分子群体。选择性结合KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之多株抗体可藉由此项技术中熟知之方法制得。参见例如Howard及Kaser(2007)Making and Using Antibodies:APractical Handbook CRC Press。
单株抗体
单株抗体含有对抗原具特异性之实质上均质之抗体群体，该群体含有实质上相似之抗原决定基结合位点。单株抗体可藉由为熟习此项技术者所知之方法获得。参见例如Kohler及Milstein(1975)Nature256:495-497；美国专利第4,376,110号；Ausubel等人,[编](2011)CURRENT PROTOCOLS INMOLECULAR BIOLOGY,Greene Publishing Assoc.and Wiley Interscience,NY.；以及Harlow及Lane(1998)USING ANTIBODIES:A LABORATORYMANUAL Cold Spring Harbor Laboratory；Colligan等人,(2005)[编]CurrentProtocols in Immunology Greene Publishing Assoc.and Wiley Interscience,NY。该等抗体可具有任何免疫球蛋白类别，包括IgG、IgM、IgE、IgA、GILD及其任何子类。可在活体外、原位或活体内培养产生本发明抗体之融合瘤。
嵌合抗体
嵌合抗体为不同部分源自不同动物物种的分子，诸如具有源自鼠类抗体之可变区及人类免疫球蛋白恒定区者，其主要用于在应用中降低免疫原性且在制备中提高产率，例如，其中鼠类单株抗体由融合瘤产生之产率较高，但对人类之免疫原性较高，因此使用人类鼠类嵌合单株抗体。嵌合抗体及其制备方法在此项技术中为已知的。参见Cabilly等人,(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:3273-3277；Morrison等人,(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:6851-6855；Boulianne等人,(1984)Nature312:643-646；Neuberger等人,(1985)Nature314:268-270；欧洲专利申请案173494(1986)；WO86/01533(1986)；欧洲专利申请案184187(1986)；欧洲专利申请案73494(1986)；Sahagan等人,(1986)J.Immunol.137:1066-1074；Liu等人,(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA84:3439-3443；Sun等人,(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA84:214-218；Better等人,(1988)Science240:1041-1043；以及Harlow及Lane(1998)USING ANTIBODIES:A LABORATORY MANUAL Cold SpringHarbor Laboratory；美国专利第5,624,659号。
人类化抗体
人类化抗体经工程改造而含有甚至更类似于人类之免疫球蛋白结构域，且仅并入源自动物之抗体的互补决定区。此可藉由研究单株抗体可变区之高变环序列且使其适于人类抗体链之结构来达成。参见例如美国专利第6,187,287号。同样，产生人类化抗体之其它方法现在此项技术中为熟知的。参见例如美国专利第5,225,539号；第5,530,101号；第5,585,089号；第5,693,762号；第6,054,297号；第6,180,370号；第6,407,213号；第6,548,640号；第6,632,927号；及第6,639,055号；Jones等人,(1986)Nature321:522-525；Reichmann等人,(1988)Nature332:323-327；Verhoeyen等人,(1988)Science239:1534-36；及Zhiqiang An(2009)[编]Therapeutic Monoclonal Antibodies:From Benchto Clinic John Wiley&Sons,Inc。
抗体片段
除完整免疫球蛋白(或其重组对应物)之外，亦可合成包含抗原决定基结合位点之免疫球蛋白片段(例如Fab'、F(ab')2或其它片段)。「片段」或最小免疫球蛋白可使用重组免疫球蛋白技术来设计。举例而言，用于本发明中之「Fv」免疫球蛋白可藉由合成融合之轻链可变区及重链可变区而产生。抗体之组合亦相关，例如双功能抗体，其包含两种不同之Fv特异性。免疫球蛋白之抗原结合片段包括(但不限于)SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体(camelbody)、奈米抗体及IgNAR。
抗个体基因型抗体
抗个体基因型(抗-Id)抗体为识别一般与抗体之抗原结合位点有关之独特决定子的抗体。Id抗体可藉由用产生抗-Id抗体之抗体使与抗体之来源相同之物种及遗传类型(例如小鼠品系)的动物免疫来制备。免疫之动物将藉由产生针对致免疫抗体之个体基因型决定子之抗体(抗-Id抗体)而识别此等个体基因型决定子且对其有反应。参见例如美国专利第4,699,880号。抗-Id抗体亦可用作「免疫原」以在另一动物体内诱导免疫反应，产生所谓之抗-抗-Id抗体。抗-抗-Id抗体与诱导抗-Id抗体之原始抗体具有抗原决定基一致性。因此，藉由使用针对抗体之个体基因型决定子的抗体，有可能鉴别表现具有相同特异性之抗体的其它纯系。
经工程改造及修饰之抗体
本发明之抗体可进一步使用具有一或多个源自抗体起始物质之VH及/或VL序列的抗体以工程改造经修饰之抗体来制备，该经修饰之抗体之特性相较于起始抗体可已有改变。抗体可藉由修饰一或两个可变区(亦即VH及/或VL)内，例如一或多个CDR区及/或一或多个构架区内之一或多个残基来工程改造。或者或另外，抗体可藉由修饰恒定区内之残基以例如改变抗体之效应功能来工程改造。
可执行之一类可变区工程改造为CDR移植。抗体主要经由位于6个重链及轻链互补决定区(CDR)中之氨基酸残基与目标抗原相互作用。出于此原因，个别抗体之间CDR内之氨基酸序列的相异性比CDR以外之序列大。由于CDR序列负责大部分抗体-抗原相互作用，所以有可能表现模拟天然存在之特异性抗体之特性的重组抗体，此系藉由建构包括来自天然存在之特异性抗体且移植至来自具有不同特性之不同抗体之构架序列上的CDR序列之表现载体来达成。参见例如Riechmann等人,(1998)Nature332:323-327；Jones等人,(1986)Nature321:522-525；Queen等人,(1989)Proc.Natl.Acad.U.S.A.86:10029-10033；美国专利第5,225,539号；第5,530,101号；第5,585,089号；第5,693,762号；及第6,180,370号。
适合之构架序列可自包括生殖系抗体基因序列的公开之DNA数据库或发表之参考文献获得。举例而言，人类重链及轻链可变区基因之生殖系DNA序列可见于「VBase」人类生殖系序列数据库(可在因特网上得到)以及Kabat,E.A.等人,(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest[第5版]U.S.Department of Health and Human Services,NIH出版物编号91-3242；Tomlinson等人,(1992)「The Repertoire of Human Germline VH SequencesReveals about Fifty Groups of VH Segments with Different HypervariableLoops」J.Mol.Biol.227:776-798；及Cox等人,(1994)Eur.J Immunol.24:827-836中。
另一类可变区修饰为使VH及/或VL CDR1、CDR2及/或CDR3区内之氨基酸残基突变，从而改良相关抗体之一或多种结合特性(例如亲和力)。可进行定点突变诱发或PCR介导之突变诱发以引入突变，且可在适当活体外或活体内分析中评估对抗体结合或其它相关功能特性的影响。较佳可引入保守性修饰(如本文所论述)。突变可为氨基酸取代、添加或缺失，但较佳为取代。此外，通常改变CDR区内至多一个、两个、三个、四个或五个残基。
本发明之经工程改造之抗体包括已对VH及/或VL内之构架残基进行修饰以例如改良抗体特性的抗体。通常，进行该等构架修饰以降低抗体之免疫原性。举例而言，一种方法为使一或多个构架残基「回复突变」成相应生殖系序列。更特定而言，已进行体细胞突变之抗体可含有不同于产生抗体之生殖系序列的构架残基。该等残基可藉由比较抗体构架序列与抗体所源自之生殖系序列来鉴别。
除在构架或CDR区内进行修饰之外或替代在构架或CDR区内进行修饰，本发明之抗体可经工程改造以在Fc区内包括修饰，通常以改变抗体之一或多种功能特性，诸如血清半衰期、补体固定、Fc受体结合及/或抗原依赖性细胞毒性。此外，本发明之抗体可经化学修饰(例如可将一或多个化学部分连接至抗体)或经修饰以改变其糖基化，再次改变抗体之一或多种功能特性。该等实施例进一步描述于下文中。Fc区中残基之编号为Kabat之EU索引之编号。
CH1之绞链区可经修饰以使绞链区中半胱氨酸残基之数目有所改变，例如增加或减少。参见美国专利第5,677,425号。CH1之绞链区中半胱氨酸残基之数目可经改变以例如有助于轻链与重链组装或增加或降低抗体之稳定性。
抗体之Fc绞链区可经突变以缩短抗体之生物半衰期。更特定而言，可将一或多处氨基酸突变引入Fc铰链片段之CH2-CH3域界面区中，以使抗体对葡萄球菌蛋白A(SpA)之结合性相对于原生Fc铰链域对SpA之结合性有所削弱。参见例如美国专利第6,165,745号。
抗体可经修饰以延长其生物半衰期。各种方法为可能的。举例而言，可引入以下一或多处突变：T252L、T254S、T256F。参见美国专利第6,277,375号。或者，为延长生物半衰期，抗体可在CH1或CL区内经改变以含有获自IgG之Fc区之CH2域之两个环的救助受体结合抗原决定基。参见美国专利第5,869,046号及第6,121,022号。
Fc区可藉由用不同氨基酸残基置换至少一个氨基酸残基以改变抗体之效应功能来改变。举例而言，选自氨基酸残基234、235、236、237、297、318、320及322之一或多个氨基酸可经不同氨基酸残基置换，以使抗体对效应配体之亲和力改变，但保留亲本抗体之抗原结合能力。亲和力可能有所改变之效应配体可为例如Fc受体或补体之C1组分。参见美国专利第5,624,821号及第5,648,260号。
抗体之糖基化可经修饰。举例而言，可产生去糖基化抗体(亦即抗体缺乏糖基化)。糖基化可经改变以例如增强抗体对抗原之亲和力。该等碳水化合物修饰可藉由例如改变抗体序列内一或多个糖基化位点来达成。举例而言，可进行一或多处氨基酸取代以消除一或多个可变区构架糖基化位点，从而消除彼位点处之糖基化。该去糖基化可增强抗体对抗原之亲和力。参见例如美国专利第5,714,350号及第6,350,861号。
或者或另外，可制备糖基化类型有改变的抗体，诸如岩藻糖基残基之量有所降低之低岩藻糖基化抗体或平分型GlcNac结构有所增加之抗体。该等改变之糖基化型态已经表明可增强抗体之ADCC能力。该等碳水化合物修饰可藉由例如使抗体在糖基化机构有所改变之宿主细胞中表现来达成。糖基化机构有所改变之细胞已在此项技术中加以描述且可用作宿主细胞以表现本发明之重组抗体，从而产生糖基化有所改变之抗体。参见美国专利申请公开案第2004/0110704号及Yamane-Ohnuki等人,(2004)Biotechnol Bioeng.87:614-22；EP1,176,195；WO2003/035835；Shields等人,(2002)J.Biol.Chem.277:26733-26740；WO99/54342；Umana等人,(1999)Nat.Biotech.17:176-180；及Tarentino等人,(1975)Biochem.14:5516-23。
抗体可经聚乙二醇化以例如延长抗体之生物(例如血清)半衰期。为聚乙二醇化抗体，通常使抗体或其片段与聚乙二醇(PEG)(诸如PEG之反应性酯或醛衍生物)在可使一或多个PEG基团连接至抗体或抗体片段的条件下反应。较佳的是，以反应性PEG分子(或类似反应性水溶性聚合物)经由酰化反应或烷基化反应进行聚乙二醇化。
本发明亦提供实质上与本文所述之抗体、抗体片段、双功能抗体、SMIP、骆驼抗体、奈米抗体、IgNAR、多肽、可变区及CDR同源的变异体及等效物。此等变异体及等效物可含有例如保守性取代突变(亦即一或多个氨基酸经相似氨基酸取代)。举例而言，保守性取代系指氨基酸经同一一般类别中之另一氨基酸取代，例如一个酸性氨基酸经另一酸性氨基酸取代、一个碱性氨基酸经另一碱性氨基酸取代，或一个中性氨基酸经另一中性氨基酸取代。
抗体产生
单株抗体尤其可使用首先由Kohler等人,Nature,256:495(1975)描述之融合瘤方法，或藉由其它熟知之随后研发之方法(参见例如Goding,MonoclonalAntibodies:Principles and Practice,第59-103页(Academic Press,1986))来制备。可藉由化学融合、电融合或任何其它适合技术，用任何适合类型之骨髓瘤、异源骨髓瘤、淋巴母细胞样细胞(phoblastoid cell)、浆细胞瘤或类似永生化细胞及任何适合类型之抗体表现细胞形成融合瘤及其它融合细胞。
转型之永生化B细胞亦可用于高效地产生抗体。转型之B细胞可藉由标准技术，诸如用艾伯斯坦-巴尔病毒(Epstein Barr Virus)或转型基因转型而产生。(参见例如「Continuously Proliferating Human Cell Lines SynthesizingAntibody of Predetermined Specificity,」Zurawaki,V.R.等人,MonoclonalAntibodies,Kennett R.H.等人编,Plenum Press,N.Y.1980,第19-33页)。由此，稳定且持续及/或永生化的表现抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体之细胞及细胞株为本发明之另一特征。产生抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体之方法的步骤可包括例如以下步骤：产生可产生抗体之永生化B细胞，使其与适当搭配物融合以产生抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体，或对其进行定序且使用该等序列产生重组抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。
可用作用于重组蛋白质表现之宿主的细胞株在此项技术中为熟知的且包括多种可自美国菌种中心(American Type Culture Collection，ATCC)获得的永生化细胞株。此等细胞株尤其包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、NSO细胞、SP2细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人类肝细胞癌细胞(例如Hep G2)、A549细胞及多种其它细胞株。其它可使用之细胞株为昆虫细胞株，诸如Sf9细胞。当将编码抗体基因之核酸(或含有核酸之载体)引入哺乳动物宿主细胞中时，可藉由培养宿主细胞足以允许抗体在宿主细胞中表现或更佳使抗体分泌至培养宿主细胞之培养基中的一段时间以产生抗体。可使用标准蛋白质纯化方法自培养基中回收抗体。抗体在被直接表现而无分泌信号时亦可自宿主细胞溶胞物中回收。
可藉由应用多种此项技术中已知之适合技术(包括例如免疫亲和管柱纯化；硫酸盐沈淀；层析聚焦；制备型SDS-PAGE及其类似技术)纯化来自细胞培养物、细胞溶胞物及转殖基因动物或由其获得之生物材料(例如，来自产生抗体之转殖基因动物之腹水)的抗体。
抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体亦可在细菌细胞及真核单细胞微生物(诸如酵母)中产生。细菌细胞产生之抗体缺乏正常糖基化且因此就ADCC功能及可能另外与在哺乳动物细胞及/或动物中产生之基本上相同抗体有关之免疫反应的其它态样而言可能有缺陷。
可使用适用于纯化、筛选及选择抗体之方法，包括WO2006/072625中所述之方法。可藉由任何适合技术或技术组合筛选及选择抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。举例而言，可使用多种免疫分析形式来选择与特定蛋白质、变异体或片段选择性结合的抗体。举例而言，常规使用固相ELISA免疫分析来选择对蛋白质、蛋白质变异体或其片段具选择性免疫反应性的抗体。参见Harlow及Lane(同上)。单株抗体之结合亲和力可例如藉由Munson等人,Anal.Biochem.,107:220(1980)之斯卡查德分析来测定。
通常针对诸如藉由抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3介导之信号，促进NK细胞经由NK活化受体介导之信号活化来调节NK细胞活性的能力来筛选抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。已研发多种适用于该等情况之NK细胞分析法，包括例如流动式细胞量测术筛选法。参见例如McGinnes等人,(1984)J Immunol Methods801984:70-85。与培养NK细胞、评估NK细胞及其类似方面有关之方法在此项技术中为已知的。参见例如Campbell及Colonna,Natural Killer Cell Protocols(Methods in MolecularBiology Series第121卷)(2000)。
在抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体之情况下，NK细胞中和活性可藉由抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体复原由KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3阳性NK细胞引起之标靶细胞溶解的能力来表明。亦可藉由各种基于细胞之细胞毒性分析法来评估抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体相关NK细胞调节(例如KIR抑制)。重导向杀伤实验(Redirected killing)为一种用于确定NK细胞受体诱导细胞毒性之能力的实验系统。评估涂布有对候选受体具特异性之抗体的NK细胞杀死表现抗体所结合之Fc受体之标靶细胞的能力。在另一变体中，可在细胞激素释放分析法中评估与抗-KIR抗体有关之NK细胞活性调节作用。亦可使用与各种抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体有关之其它生物活性来评估抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。
抗体结合物
抗体(或其片段)可结合至治疗性部分，诸如细胞毒素、治疗剂或放射性金属离子。细胞毒素或细胞毒性剂包括任何有害于细胞之药剂。实例包括(但不限于)紫杉醇(taxol)、细胞迟缓素B、短杆菌素D、溴化乙锭、吐根素、丝裂霉素(mitomycin)、依托泊苷(etoposide)、特诺波赛(tenoposide)、长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、秋水仙碱、小红莓(doxorubicin)、道诺霉素(daunorubicin)、二羟基炭疽菌素二酮、米托蒽醌(mitoxantrone)、光神霉素(mithramycin)、放线菌素D(actinomycin D)、1-去氢睾固酮、糖皮质激素、普鲁卡因(procaine)、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛尔(propranolol)及嘌呤霉素以及其类似物或同源物。治疗剂包括(但不限于)抗代谢物(例如甲胺喋呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷(cytarabine)、5-氟尿嘧啶、胺烯咪胺(decarbazine))、烷基化剂(例如氮芥(mechlorethamine)、硫替派(thioepa)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、美法仑(melphalan)、卡莫司汀(carmustine，BSNU)及洛莫司汀(lomustine，CCNU)、环硫磷酰胺(cyclothosphamide)、白消安(busulfan)、二溴甘露醇、链脲菌素(streptozotocin)、丝裂霉素C及顺二氯二胺铂(II)(DDP)、顺铂)、蒽环霉素(anthracycline)(例如道诺霉素(原先为柔红霉素(daunomycin))及小红莓)、抗生素(例如更生霉素(dactinomycin)(原先为放线菌素)、博莱霉素、光神霉素以及安曲霉素(anthramycin，AMC))，以及抗有丝分裂剂(例如长春新碱及长春碱)。
工程改造抗体之方法
具有本文揭示之VH及VL序列的抗体可用于藉由修饰VH及/或VL序列或其所连接之恒定区来形成新变异型抗体。因此，使用本发明之变异型抗体之结构特征来形成保留本发明抗体之至少一种功能特性(诸如结合至KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3)的结构相关变异型抗体。举例而言，一种抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3变异型抗体或其突变体之一或多个CDR区可与已知构架区及/或其它CDR以重组方式组合，从而形成本发明之其它经重组工程改造之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体(例如结合KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3之抗体)，如本文所论述。工程改造方法之起始物质可为本文提供之一或多个VH及/或VK序列或其一或多个CDR区。为形成经工程改造之抗体，不需要实际制备(亦即表现成蛋白质)具有本文提供之一或多个VH及/或VK序列或其一或多个CDR区的抗体。而是，使用序列中所含之信息作为起始物质来形成源自原始序列之「第二代」序列且接着制备「第二代」序列且使其表现成蛋白质。可使用标准分子生物学技术来制备及表现改变之抗体序列。
由改变之抗体序列编码之抗体可保留由本文提供之方法及序列产生之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体之一种、一些或所有功能特性，该等功能特性包括以特定KD值或更低之值结合至变异KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3或变异KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合物及/或调节免疫细胞活性及/或选择性结合至所需标靶细胞，诸如结肠直肠癌、肺癌、前列腺癌、胰脏癌、卵巢癌、胃癌及肝癌。改变之抗体的功能特性可使用此项技术中可利用及/或本文所述之标准分析来评定。
可沿整个或部分抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体编码序列随机或选择性引入突变且可针对结合活性及/或其它所需功能特性来筛选所得到之经修饰抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体。参见WO2011/120013。
编码选择性结合KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之抗体的核酸
本发明之另一态样关于编码结合KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之本发明抗体的核酸分子。核酸可存在于全细胞中、细胞溶胞物中或以部分纯化或实质上纯形式存在。核酸可藉由标准技术纯化分离而远离其它细胞组分或其它污染物(例如其它细胞核酸或蛋白质)，该等标准技术包括碱/SDS处理、CsCl条带法、管柱层析、琼脂糖凝胶电泳及此项技术中熟知之其它技术。参见Ausubel等人,(2011)Current Protocols in Molecular Biology John Wiley&Sons,Inc。本发明之核酸可为例如DNA或RNA且可能含有或可能不含内含子序列。核酸可为cDNA分子。
本发明之核酸可使用标准分子生物学技术获得。对于藉由融合瘤(例如如下文所进一步描述由带有人类免疫球蛋白基因之转殖基因小鼠制备之融合瘤)表现之抗体，编码由融合瘤产生之抗体之轻链及重链的cDNA可藉由标准PCR扩增或cDNA选殖技术获得。对于自免疫球蛋白基因库(例如使用噬菌体呈现技术)获得之抗体，编码该抗体之核酸可自库回收。
特定而言，简并密码子取代可藉由产生例如一或多个所选密码子之第三个位置经混合碱基及/或脱氧肌苷残基取代的序列来达成。Batzer等人,(1991)Nucleic Acid Res.19:5081；Ohtsuka等人,(1985)J.Biol.Chem.260:2605-08；Rossolini等人,(1994)Mol.Cell.Probes8:91-98。
一旦获得编码VH及VL段之DNA片段，即可进一步藉由标准重组DNA技术操作该等DNA片段，以例如使该等可变区基因转化为全长抗体链基因、转化为Fab片段基因或scFv基因。在此等操作中，使编码VL或VH之DNA片段可操作地连接至另一编码另一蛋白质(诸如抗体恒定区或可挠性连接子)之DNA片段。
编码VH区的分离之DNA可藉由使该编码VH之DNA可操作地连接至另一编码重链恒定区(CH1、CH2及CH3)之DNA分子而转化成全长重链基因。人类重链恒定区基因之序列在此项技术中已知(参见例如Kabat等人,(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,U.S.Department ofHealth and Human Services,NIH出版物编号91-3242)且涵盖此等区域之DNA片段可藉由标准PCR扩增获得。重链恒定区可为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区，但最佳为IgG1或IgG4恒定区。对于Fab片段重链基因而言，可使编码VH之DNA可操作地连接至另一仅编码重链CH1恒定区之DNA分子。
分离之编码VL区之DNA可藉由使该编码VL之DNA可操作地连接至另一编码轻链恒定区CL之DNA分子而转化为全长轻链基因(以及Fab轻链基因)。人类轻链恒定区基因之序列在此项技术中已知(参见例如Kabat等人,(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,U.S.Department of Health and Human Services,NIH出版物编号91-3242)且涵盖此等区域之DNA片段可藉由标准PCR扩增获得。轻链恒定区可为κ或λ恒定区，但最佳为κ恒定区。
为形成scFv基因，使编码VH之DNA片段及编码VL之DNA片段可操作地连接至另一编码可挠性连接子(例如编码氨基酸序列(Gly4-Ser)3)之片段，以使VH序列及VL序列可表现为相邻单链蛋白质，其中VL与VH区藉由可挠性连接子连接。参见例如Bird等人,(1988)Science242:423-426；Huston等人,(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-5883；McCafferty等人,(1990)Nature348:552-554。
产生抗体及其片段的方法
本发明亦提供产生抗体及其片段之方法。产生抗体之方法为一般技术者所熟知。举例而言，产生嵌合抗体之方法现在此项技术中为熟知的。参见例如美国专利第4,816,567号；Morrison等人,(1984)PNAS USA81:8651-55；Neuberger等人,(1985)Nature314:268-270；Boulianne等人,(1984)Nature312:643-46。
举例而言，抗体或抗原结合片段可藉由基因工程改造而产生。在此技术中，如同其它方法，使抗体产生细胞对所需抗原或免疫原敏感。使用自抗体产生细胞分离之信使RNA作为模板以使用PCR扩增制得cDNA。藉由将扩增之免疫球蛋白cDNA之适当部分插入表现载体中产生各自含有保留初始抗原特异性之一个重链基因及一个轻链基因的载体之库。藉由将重链基因库与轻链基因库组合来建构组合库。此得到共表现重链及轻链(类似于抗体分子之Fab片段或抗原结合片段)之纯系的库。将带有此等基因之载体共转染至宿主细胞中。当在转染之宿主中诱导抗体基因合成时，重链与轻链蛋白质自行组装，从而产生活性抗体，其可藉由用抗原或免疫原筛选而侦测。
本发明之抗体及其片段亦可藉由使用为一般技术者所熟知之习知技术建构含有操纵子及编码抗体重链之DNA序列的表现载体来制备，其中编码抗体特异性所需之CDR的DNA序列源自非人类细胞来源，而编码抗体链之其余部分的DNA序列源自人类细胞来源。此外，本发明系关于载体，尤其质体、黏质体、病毒、噬菌体及其它在基因工程改造中常见之载体，其含有本发明之上述核酸分子。载体中所含之核酸分子可连接至调节组件，其确保在原核及真核细胞中进行转录。
载体含有有助于操作之组件以使外来蛋白质表现在目标宿主细胞中。宜首先在细菌宿主(例如大肠杆菌)中操作序列及产生用于转型之DNA，且载体通常包括有助于该等操作之序列，包括细菌复制起点及适当之细菌选择标记。选择标记编码为选择性培养基中培育的转型之宿主细胞存活或生长所需的蛋白质。未经含有选择基因之载体转型的宿主细胞不会在培养基中存活。典型选择基因编码赋予对抗生素或其它毒素之抗性，补充营养缺陷性缺乏或提供不可自复合培养基得到之关键营养素的蛋白质。用于转型酵母之例示性载体及方法在此项技术中有所描述。参见例如Burke等人,(2000)Methods inYeast Genetics Cold Spring Harbor Laboratory Press。
相关多肽编码序列可操作地连接至使得多肽在酵母细胞中表现之转录及转译调节序列。此等载体组分可包括(但不限于)以下一或多者：强化子组件、启动子及转录终止序列。亦可包括使多肽分泌之序列(例如信号序列)。
核酸在经置放而与另一核酸序列呈功能关系时为「可操作地连接的」。举例而言，若信号序列之DNA表现成参与多肽分泌之蛋白质前体，则其可操作地连接至多肽之DNA；若启动子或强化子影响序列转录，则其可操作地连接至编码序列。一般而言，「可操作地连接」广泛地指连续连接之DNA序列，且在分泌性前导序列的状况下，指连续且处于阅读框架中之DNA序列。然而，强化子未必为连续的。
启动子为位于结构基因之起始密码子上游(5')(一般在约100bp至1000bp范围内)且控制其可操作地连接之特定核酸序列转录及转译的非转译序列。该等启动子属于多种类别：诱导性、组成性及阻遏型启动子(例如，其响应于不存在阻遏子而提高转录量)。诱导性启动子可响应于培养条件之某种改变(例如存在或不存在营养素或温度改变)而引起DNA在其控制下之转录量有所提高。
第二表现载体可使用为一般技术者所熟知之相同习知方式产生，该表现载体含有操纵子及编码抗体轻链之DNA序列，其中编码为抗体特异性所需之CDR的DNA序列源自非人类细胞来源，较佳源自家兔B细胞来源，而编码抗体链之其余部分的DNA序列源自人类细胞来源。
藉由为一般技术者所熟知之习知技术将表现载体转染至宿主细胞中，产生转染之宿主细胞，藉由为一般技术者所熟知之习知技术培养该转染之宿主细胞，产生该等抗体多肽。
可用上文所述之两种表现载体共转染宿主细胞，第一表现载体含有编码操纵子及源自轻链之多肽的DNA且第二载体含有编码操纵子及源自重链之多肽的DNA。两种载体含有不同之可选标记，但较佳使得重链与轻链多肽达成实质上相等之表现。或者，可使用单个载体，该载体包括编码重链及轻链多肽之DNA。重链及轻链之编码序列可包含cDNA、基因组DNA或两者。
用于表现抗体及其片段之宿主细胞可为细菌细胞(诸如大肠杆菌)或真核细胞。可使用用于此目的之明确类型之哺乳动物细胞，诸如骨髓瘤细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)、NSO或HEK293细胞株。
可建构载体之一般方法、产生宿主细胞所需之转染方法以及由该等宿主细胞产生抗体及其片段所需之培养方法皆包括习知技术。虽然用于产生抗体之细胞株较佳为哺乳动物细胞株，但可使用任何其它适合之细胞株，诸如细菌细胞株，诸如源自大肠杆菌之细菌菌株，或酵母细胞株。
同样，在产生后，可根据此项技术中之标准程序，诸如交叉流过滤、硫酸铵沈淀及亲和管柱层析来纯化抗体。
使用动物产生抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体
本发明之选择性结合KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之抗体可为人类单株抗体。该等针对KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之人类单株抗体可使用带有人类免疫系统而非小鼠系统之部分的转殖基因或转染色体小鼠来产生。此等转殖基因及转染色体小鼠包括本文中分别称作HuMAb
Figure BDA0000462467460001251
及KM
Figure BDA0000462467460001252
之小鼠，且在本文中统称为「人类Ig小鼠」。HuMAb
Figure BDA0000462467460001253
(Medarex.Inc.)含有人类免疫球蛋白基因微卫星基因座(miniloci)，其编码非重排人类重链(μ及γ)以及κ轻链免疫球蛋白序列以及使内源μ及κ链基因座不活化的目标突变。参见例如Lonberg等人,(1994)Nature368(6474):856-859。因此，小鼠的小鼠IgM或κ之表现减少，且回应于免疫，引入之人类重链及轻链转殖基因进行类别转换及体细胞突变而产生高亲和力人类IgGκ单株抗体。Lonberg(1994)Handbook of Experimental Pharmacology113:49-101；Lonberg及Huszar(1995)Intern.Rev.Immunol.13:65-93；以及Harding及Lonberg(1995)Ann.NY.Acad.Sci.764:536-546。HuMab
Figure BDA0000462467460001254
之制备及使用以及该等小鼠所带有之基因组修饰进一步描述于Taylor等人,(1992)Nucleic AcidsResearch20:6287-6295；Chen等人,(1993)International Immunology5:647-656；Tuaillon等人,(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:3720-3724；Choi等人,(1993)Nature Genetics4:117-123；Chen等人,(1993)EMBO J.12:821-830；Tuaillon等人,(1994)J.Immunol.152:2912-2920；Taylor等人,(1994)International Immunology6:579-591；及Fishwild等人,(1996)NatureBiotechnology14:845-851中。进一步参见美国专利第5,545,806号；第5,569,825号；第5,625,126号；第5,633,425号；第5,789,650号；第5,877,397号；第5,661,016号；第5,814,318号；第5,874,299号；第5,770,429号；及第5,545,807号；第WO92/03918号；第WO93/12227号；第WO94/25585号；第WO97/13852号；第WO98/24884号；第WO99/45962号；及第WO01/14424号。
本发明之人类抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体(例如选择性结合KIR2DL1、KIR2DL2或KIR2DL3之抗体)可使用在转殖基因及转染色体上带有人类免疫球蛋白序列的小鼠(诸如带有人类重链转殖基因及人类轻链转染色体之小鼠)产生。该等在本文中称作「KM 」之小鼠详细描述于WO02/43478中。
此外，表现人类免疫球蛋白基因之替代转殖基因动物系统可用于此项技术中且可用于产生本发明之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体。举例而言，可使用称为Xenomouse(Abgenix,Inc.)之替代转殖基因系统；该等小鼠描述于例如美国专利第5,939,598号；第6,075,181号；第6,114,598号；第6,150,584；及第6,162,963号中。
此外，表现人类免疫球蛋白基因之替代转染色体动物系统可用于此项技术中且可用于产生本发明之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体。举例而言，可使用带有人类重链转染色体及人类轻链转染色体之称为「TC小鼠」之小鼠。参见Tomizuka等人,(2000)Proc.Natl.Acad.Sci.USA97:722-727。此外，带有人类重链及轻链转染色体之牛已在此项技术中有所描述(Kuroiwa等人,(2002)Nature Biotechnology20:889-894)且可用于产生本发明之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。
本发明之人类单株抗体亦可使用噬菌体呈现方法筛选人类免疫球蛋白基因库来制备。该等用于分离人类抗体之噬菌体呈现方法在此项技术中已确立。参见例如美国专利第5,223,409号；第5,403,484号；第5,571,698号；第5,427,908号；第5,580,717号；第5,969,108号；第6,172,197号；第5,885,793号；第6,521,404号；第6,544,731号；第6,555,313号；第6,582,915号；及第6,593,081号。
本发明之人类单株抗体亦可使用SCID小鼠制备，在该等SCID小鼠中，人类免疫细胞已经复原，从而在免疫后可产生人类抗体反应。参见例如美国专利第5,476,996号及第5,698,767号。
当使用人类Ig小鼠产生本发明之人类抗体时，可用纯化或增浓之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽制剂使该等小鼠免疫，如由Lonberg等人,(1994)Nature368(6474):856-859；Fishwild等人,(1996)NatureBiotechnology14:845-851；WO98/24884及WO01/14424所述。较佳，小鼠在首次输注时为6至16周大。举例而言，可使用纯化或重组KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3制剂(5至50μg)以腹膜内方式使人类Ig小鼠免疫。
其它人在使用各种抗原方面的先前经验已展示，当最初用于完全弗氏佐剂中之抗原进行腹膜内(IP)免疫，继而每隔一周用于不完全弗氏佐剂中之抗原进行IP免疫一次(达总共6次)时，转殖基因小鼠起反应。然而，亦发现除弗氏佐剂以外的佐剂为有效的。另外，发现全细胞在不存在佐剂下具高免疫原性。可在免疫方案过程期间藉由由后眼眶取血获得血浆样品来监测免疫反应。可藉由ELISA(如下文所述)筛选血浆，且可将具有足够力价之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3人类免疫球蛋白的小鼠用于融合。可在处死且移出脾前3天用抗原以静脉内方式使小鼠增强免疫。预期各次免疫可能需要进行2-3次融合。对于各抗原，通常使6至24只小鼠免疫。通常使用HCo7及HCo12品系。另外，HCo7及HCo12转殖基因可在具有两种不同人类重链转殖基因(HCo7/HCo12)之单个小鼠体内共同繁殖。或者或另外，可使用KM 
Figure BDA0000462467460001271
品系。
产生可产生本发明之人类单株抗体的融合瘤
为产生可产生本发明之人类单株抗体的融合瘤，可分离来自免疫之小鼠的脾细胞及/或淋巴结细胞且使其融合至适当之永生化细胞株，诸如小鼠骨髓瘤细胞株。可针对抗原特异性抗体之产生筛选所得之融合瘤。举例而言，可用50%PEG使来自免疫之小鼠的脾淋巴球之单细胞悬浮液融合至六分之一数目之P3X63-Ag8.653非分泌型小鼠骨髓瘤细胞(ATCC，CRL1580)。可将约2×10-5个细胞接种于平底微量滴定盘中，继而在含有以下之选择性培养基中培育两周：20%胎牛血清、18%「653」条件培养基、5%origen(IGEN)、4mML-麸酰氨酸、1mM丙酮酸钠、5mM HEPES、0.055mM2-巯基乙醇、50单位/毫升青霉素(penicillin)、50mg/ml链霉素(streptomycin)、50mg/ml庆大霉素(gentamycin)及1×HAT(Sigma；HAT在融合后24小时添加)。在约两周后，可在用HT替换HAT之培养基中培养细胞。接着可藉由ELISA针对人类单株IgM及IgG抗体筛选个别孔。在出现广泛融合瘤生长后，通常可在10至14天后观测培养基。可重接种分泌抗体之融合瘤，再筛选，且若针对人类IgG仍呈阳性，则可藉由限制稀释法次选殖单株抗体至少两次。接着可在活体外培养稳定之次纯系以在组织培养基中产生少量抗体以供表征。
为纯化人类单株抗体，可在两公升旋转烧瓶中培养所选融合瘤以纯化单株抗体。可过滤上清液且浓缩，随后用蛋白质A-琼脂糖(Pharmacia,Piscataway,N.J.)进行亲和层析。可藉由凝胶电泳及高效液相层析检验溶离之IgG以确保纯度。可将缓冲溶液交换成PBS，且可使用1.43消光系数藉由OD280测定浓度。可等分单株抗体且储存于-80℃下。
标记
本文所述之抗原、抗体及其片段可经转译后修饰以添加效应部分，诸如化学连接子；可侦测部分，诸如荧光染料；酶；基质；生物发光物质；放射性物质；化学发光部分；细胞毒性剂；放射性物质；或功能性部分。
多种实体(例如配体)如此项技术中所知可偶合至寡核苷酸。配体可包括天然存在之分子抑或重组或合成分子。例示性配体包括(但不限于)亲合素(avadin)、生物素、肽、肽模拟物、聚离氨酸(PLL)、聚乙二醇(PEG)、mPEG、阳离子基、精胺、亚精胺、聚胺、促甲状腺素、促黑素、凝集素、醣蛋白、界面活性蛋白A、黏蛋白、糖基化聚氨基酸、转铁蛋白、适体、免疫球蛋白(例如抗体)、胰岛素、转铁蛋白、白蛋白、糖、亲脂性分子(例如类固醇、胆汁酸、胆固醇、胆酸及脂肪酸)、维生素A、维生素E、维生素K、维生素B、叶酸、B12、核黄素、生物素、吡哆醛、维生素辅因子、脂多醣、激素及激素受体、凝集素、碳水化合物、多价碳水化合物、放射性标记之标记、荧光染料及其衍生物。参见例如美国专利第6,153,737号；第6,172,208号；第6,300,319号；第6,335,434号；第6,335,437号；第6,395,437号；第6,444,806号；第6,486,308号；第6,525,031号；第6,528,631号；及第6,559,279号。
另外，可将部分添加至抗原或抗原决定基以延长活体内半衰期(例如，藉由延长自血流清除之时间)。该等技术包括例如添加PEG部分(亦称作聚乙二醇化)，且在此项技术中为熟知的。参见美国专利申请公开案第2003/0031671号。
本文所述之抗原、抗体或其抗原结合片段在其经由非随机化学或物理相互作用与固体标记缔合时可「连接」至基质。可经由共价键连接。然而，连接无须为共价或永久性连接。物质可经由「间隔分子」或「连接基团」连接至标记。该等间隔分子为具有连接至生物物质之第一部分以及连接至标记之第二部分的分子。因此，当连接至标记时，间隔分子分离标记与生物物质，但连接至两者。将生物物质(例如标记)连接至标记的方法在此项技术中为熟知的，且包括(但不限于)化学偶合。
可侦测标记
本文所述之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体可经转译后修饰以添加效应标记，诸如化学连接子；可侦测标记，诸如荧光染料；酶；基质；生物发光物质；放射性物质；及化学发光标记；或功能标记，诸如抗生蛋白链菌素、抗生物素蛋白、生物素、细胞毒素、细胞毒性剂及放射性物质。其它例示性酶包括(但不限于)辣根过氧化酶、乙酰胆碱酯酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶及荧光素酶。其它例示性荧光物质包括(但不限于)若丹明(rhodamine)、荧光素、异硫氰酸荧光素、伞酮、二氯三嗪基胺、藻红素及丹酰氯。其它例示性化学发光标记包括(但不限于)鲁米诺(luminol)。其它例示性生物发光物质包括(但不限于)发光素、荧光素酶及水母发光蛋白。其它例示性放射性物质包括(但不限于)铋-213(213Bs)、碳-14(14C)、碳-11(11C)、氯-18(Cl18)、铬-51(51Cr)、钴-57(57Co)、钴-60(60Co)、铜-64(64Cu)、铜-67(67Cu)、镝-165(165Dy)、铒-169(169Er)、氟-18(18F)、镓-67(67Ga)、镓-68(68Ga)、锗-68(68Ge)、钬-166(166Ho)、铟-111(111In)、碘-125(125I)、碘-123(124I)、碘-124(124I)、碘-131(131I)、铱-192(192Ir)、铁-59(59Fe)、氪-81(81Kr)、铅-212(212Pb)、镏-177(177Lu)、钼-99(99Mo)、氮-13(13N)、氧-15(15O)、钯-103(103Pd)、磷-32(32P)、钾-42(42K)、铼-186(186Re)、铼-188(188Re)、铷-81(81Rb)、铷-82(82Rb)、钐-153(153Sm)、金西-75(75Se)、钠-24(24Na)、锶-82(82Sr)、锶-89(89Sr)、硫35(35S)、鎝-99m(99Tc)、铊-201(201Tl)、氚(3H)、氙-133(133Xe)、镱-169(169Yb)、镱-177(177Yb)及钇-90(90Y)。
细胞毒性剂
本文所述之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体可结合至细胞毒性剂，包括(但不限于)甲胺喋呤、胺基蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、胺烯咪胺；烷基化剂，诸如氮芥、硫替派、苯丁酸氮芥、美法仑、卡莫司汀(BSNU)、丝裂霉素C、洛莫司汀(CCNU)、1-甲基亚硝基脲、环硫磷酰胺、氮芥、白消安、二溴甘露醇、链脲菌素、丝裂霉素C、顺-二氯二胺铂(II)(DDP)、顺铂及卡铂(carboplatin)(伯尔定(paraplatin))；蒽环霉素，包括道诺霉素(原先为柔红霉素)、小红莓(阿霉素)、地托比星(detorubicin)、洋红霉素(carminomycin)、黄胆素(idarubicin)、表柔比星(epirubicin)、米托蒽醌及比生群(bisantrene)；抗生素，包括更生霉素(放线菌素D)、博莱霉素、刺孢霉素(calicheamicin)、光神霉素及安曲霉素(AMC)；及抗有丝分裂剂，诸如长春花生物碱、长春新碱及长春碱。其它细胞毒性剂包括太平洋紫杉醇(paclitaxel)
Figure BDA0000462467460001301
蓖麻毒素、假单胞菌外毒素、吉西他滨(gemcitabine)、细胞迟缓素B、短杆菌素D、溴化乙锭、吐根素、依托泊苷、特诺波赛、秋水仙碱、二羟基炭疽菌素二酮、1-去氢睾固酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔、嘌呤霉素、丙卡巴肼(procarbazine)、羟脲、天冬酰胺酶、皮质类固醇、米托坦(mytotane)(O,P'-(DDD))、干扰素及此等细胞毒性剂之混合物。
其它细胞毒性剂包括(但不限于)化学治疗剂，诸如卡铂、顺铂、太平洋紫杉醇、吉西他滨、刺孢霉素、小红莓、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素C、放线菌素D、环磷酰胺、长春新碱、博莱霉素、VEGF拮抗剂、EGFR拮抗剂、铂类、紫杉醇、伊立替康(irinotecan)、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、甲酰四氢叶酸(leucovorine)、类固醇、环磷酰胺、美法仑、长春花生物碱(例如长春碱、长春新碱、长春地辛及长春瑞滨(vinorelbine))、氮芥类(mustine)、酪氨酸激酶抑制剂、放射疗法、性激素拮抗剂、选择性雄激素受体调节剂、选择性雌激素受体调节剂、PDGF拮抗剂、TNF拮抗剂、IL-1拮抗剂、介白素(例如IL-12或IL-2)、IL-12R拮抗剂、
Figure BDA0000462467460001302
帕妥珠单抗(Pertuzumab)、抗-CD20抗体、
Figure BDA0000462467460001303
奥克丽珠单抗(ocrelizumab)、奥法木单抗(ofatumumab)、DXL625、
Figure BDA0000462467460001304
或其任何组合。来自植物及细菌之毒性酶(诸如蓖麻毒素、白喉毒素及假单胞菌毒素)可结合至人类化抗体或其结合片段以产生细胞类型特异性杀死试剂。Youle等人,(1980)Proc.Nat'l Acad.Sci.USA77:5483；Gilliland等人,(1980)Proc.Nat'l Acad.Sci.USA77:4539；Krolick等人,(1980)Proc.Nat'l Acad.Sci.USA77:5419。其它细胞毒性剂包括细胞毒性核糖核酸酶。参见美国专利第6,653,104号。
本文所述之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体可结合至发射α或β粒子之放射性核种(例如放射性免疫结合物)。该等放射性同位素包括(但不限于)β-发射体，诸如磷-32(32P)、钪-47(47Sc)、铜-67(67Cu)、镓-67(67Ga)、钇-88(88Y)、钇-90(90Y)、碘-125(125I)、碘-131(131I)、钐-153(153Sm)、镏-177(177Lu)、铼-186(186Re)、铼-188(188Re)；及α-发射体，诸如砈-211(211At)、铅-212(212Pb)、铋-212(212Bi)、铋-213(213Bi)或锕-225(225Ac)。
使本文所述之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合至标记的方法在此项技术中为已知的，诸如由Hunter等人,(1962)Nature144:945；David等人,(1974)Biochemistry13:1014；Pain等人,(1981)J.Immunol.Meth.40:219；及Nygren(1982)Histochem and Cytochem,30:407所述之方法。
基质
本文所述之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体可连接至基质。此项技术中已知之多种基质(例如固体支撑物)适用于本文所述之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体。该基质可经改质而含有通道或其它组态。参见Fung(2004)[编]Protein Arrays:Methods and ProtocolsHumana Press；及Kambhampati(2004)[编]Protein Microarray TechnologyJohn Wiley&Sons。
基质材料包括(但不限于)丙烯酸系物质、琼脂糖、硼硅酸盐玻璃、碳(例如碳奈米纤维薄片或小球)、乙酸纤维素、纤维素、陶瓷、凝胶、玻璃(例如无机、受控微孔、经改质、钠钙或官能化玻璃)、乳胶、磁性珠粒、膜、金属、类金属、硝化纤维、
Figure BDA0000462467460001311
光学纤维束、有机聚合物、纸、塑料、聚丙烯酰基吗啉、聚(4-甲基丁烯)、聚(对苯二甲酸伸乙酯)、聚(丁酸乙烯酯)、聚丙烯酰胺、聚丁烯、聚碳酸酯、聚乙烯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚甲醛、聚甲基丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚丙烯、多醣、聚苯乙烯、聚胺基甲酸酯、聚乙酸乙烯酯、聚氯乙烯、聚偏二氟乙烯(PVDF)、聚乙烯基吡咯啶酮、人造丝、树脂、橡胶、半导体材料、
Figure BDA0000462467460001312
二氧化硅、硅、苯乙烯共聚物、
Figure BDA0000462467460001313
及多种其它聚合物。
基质无须为平坦的且可包括任何类型之形状，包括球形形状(例如珠粒)或圆柱形形状(例如纤维)。连接至固体支撑物之物质可连接至固体支撑物之任何部分(例如，可连接至多孔固体支撑物材料之内部部分)。
基质主体可呈珠粒、盒、管柱、圆柱体、圆盘、器皿(例如玻璃皿、皮氏培养皿(PETRI dish))、纤维、膜、过滤器、微量滴定盘(例如96孔微量滴定盘)、多刃棒状物、网状物、小球、培养盘、环、杆状物、圆筒、薄片、载片、条状物、托盘、管或小瓶形式。基质可为单一个别主体(例如单个管、单个珠粒)、大量复数个基质主体(例如具有10个管之试管架、若干珠粒)，或其组合(例如包含复数个微量滴定盘的托盘、经珠粒填充之管柱、经珠粒填充之微量滴定盘)。
抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体在其经由非随机化学或物理相互作用与固体基质缔合时可「连接」至基质。可经由共价键连接。然而，连接无须为共价或永久性连接。物质可经由「间隔分子」或「连接基团」连接至基质。该等间隔分子为具有连接至生物物质之第一部分以及连接至基质之第二部分的分子。因此，当连接至基质时，间隔分子分离基质与生物物质，但连接至两者。将生物物质(例如标记)连接至基质的方法在此项技术中为熟知的，且包括(但不限于)化学偶合。
可使用支撑且含有用于固相合成反应之固相的培养盘(诸如微量滴定盘)。微量滴定盘可容纳用作固相之珠粒。「粒子」或「微粒」或「奈米粒子」或「珠粒」或「微珠粒」或「微球体」在本文中意谓具有任何多种形状或尺寸之微粒物质。形状一般可为球形，但并非必需为球形，可为例如圆柱形或多面体。如由熟习此项技术者所了解，粒子可包含多种材料，视其用途而定，包括(但不限于)交联淀粉；聚葡萄糖；纤维素；蛋白质；有机聚合物，包括苯乙烯聚合物，诸如聚苯乙烯及甲基苯乙烯以及其它苯乙烯共聚物；塑料；玻璃；陶瓷；丙烯酸聚合物；磁性反应性材料；胶体；(梭立亚索)thoriasol；碳石墨；二氧化钛；耐纶；乳胶；及参见例如「Microsphere DetectionGuide」,Bangs Laboratories,Fishers,IN。
本文所述之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体可连接至本文所述之任何形式之基质上(例如珠粒、盒、管柱、圆柱体、圆盘、器皿(例如玻璃皿、皮氏培养皿)、纤维、膜、过滤器、微量滴定盘(例如96孔微量滴定盘)、多刃棒状物、网状物、小球、培养盘、环、杆状物、圆筒、薄片、载片、条状物、托盘、管或小瓶)。特定而言，粒子或珠粒可为胶凝材料之组分或可为各别组分，诸如由多种合成塑料(例如聚苯乙烯)制成之乳胶珠粒。标记(例如抗生蛋白链菌素)可结合至基质(例如珠粒)。
医药组合物
「医药组合物」系指适于投与哺乳动物之化学或生物组合物。该等组合物可经特定调配以经由多种途径中之一或多种途径投与，该等途径包括(但不限于)经颊、表皮、硬膜外、吸入、动脉内、心内、脑室内、皮内、肌肉内、鼻内、眼内、腹膜内、脊柱内、鞘内腔、静脉内、经口、非经肠、经由灌肠剂或栓剂经直肠、皮下、真皮下、舌下、经皮及经黏膜。另外，可藉助于注射剂、粉末、液体、凝胶、滴剂或其它投药方式进行投药。
「医药赋形剂」或「医药学上可接受之赋形剂」为当中调配有活性治疗剂之载剂，通常为液体。在本发明之一个实施例中，活性治疗剂为本文所述之人类化抗体或其一或多个片段。赋形剂一般不向调配物提供任何药理学活性，但其可提供化学及/或生物稳定性及释放特征。例示性调配物可见于例如Grennaro(2005)[编]Remington:The Science and Practice of Pharmacy[第21版]中。
医药组合物在制造及储存条件下通常须为无菌且稳定的。本发明预期医药组合物以冻干形式存在。组合物可调配成溶液、微乳液、脂质体或适于高药物浓度之其它有序结构。载剂可为含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇及液体聚乙二醇)及其适合混合物之溶剂或分散介质。本发明进一步涵盖在医药组合物中包括稳定剂。
本文所述之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体可调配成各种剂型之医药组合物。为制备本发明之医药组合物，可根据为熟习医药调配技术者所熟知之技术将至少一种KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3作为活性成分与适当载剂及添加剂紧密混合。参见Grennaro(2005)[编]Remington:TheScience and Practice of Pharmacy[第21版]。举例而言，可在磷酸盐缓冲生理食盐水(pH7.2)中调配本文所述之抗体且以5.0mg/mL澄清无色液体溶液形式提供。
同样，液体制剂之组合物包括溶液、乳液、分散液、悬浮液、糖浆及酏剂，其中适合载剂及添加剂包括(但不限于)水、醇、油、二醇、防腐剂、调味剂、着色剂及悬浮剂。非经肠投与之典型制剂包含活性成分，其中载剂为诸如无菌水或非经肠可接受之油，包括(但不限于)聚乙二醇、聚乙烯吡咯啶酮、卵磷脂、花生油或芝麻油，其中亦可包括其它有助于溶解或防腐之添加剂。在溶液之状况下，可将其冻干成粉末且接着在临用前复原。对于分散液及悬浮液，适当载剂及添加剂包括水性树胶、纤维素、硅酸盐或油。
对于所述之各实施例，本文所述之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体可藉由多种剂型投与。涵盖任何为一般技术者所知之生物学上可接受之剂型及其组合。该等剂型之实例包括(不限于)可复原粉末、酏剂、液体、溶液、悬浮液、乳液、散剂、颗粒、粒子、微粒、可分散颗粒、扁胶剂、吸入剂、气溶胶吸入剂、贴片、粒子吸入剂、植入物、储槽式植入物、可注射剂(包括皮下、肌肉内、静脉内及皮内)、输注剂及其组合。
在多种状况下，在组合物中较佳包括例如糖、多元醇(诸如甘露糖醇、山梨糖醇)或氯化钠之等张剂。可藉由在组合物中包括延缓吸收剂(例如单硬脂酸盐及明胶)来达成可注射组合物之延长吸收。此外，本文所述之化合物可调配成延时释放调配物，例如包括缓慢释放聚合物之组合物。本文所述之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体可用针对快速释放保护化合物之载剂来制备，诸如控制释放调配物，包括植入物及微囊封传递系统。可使用生物可降解之生物兼容性聚合物，诸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯、聚乳酸及聚乳酸系、聚乙醇酸共聚物(PLG)。许多制备该等调配物之方法为熟习此项技术者所知。
亦可在组合物中并入辅助性活性化合物。
如所指示，该等组合物可另外包含所需抗原，例如肿瘤抗原或另一免疫调节化合物，诸如Toll样受体促效剂；第1型干扰素，诸如α及β干扰素；及CD40促效剂，诸如促效性CD40抗体及抗体片段，较佳抗-人类CD40促效抗体及抗体片段，或其它免疫增强剂或抑制剂，诸如PD-L1、PD-L2、CTLA4融合蛋白及对其具特异性之抗体。
包含本文所述之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体之组合物可进一步包含抗原或其它免疫促效剂。抗原可以与组合之其它组分组合可有效针对抗原产生免疫反应的量投与。举例而言，抗原可以约100μg/kg至约100mg/kg之量投与。在一些实施例中，抗原可以约10μg/kg至约10mg/kg之量投与。在一些实施例中，抗原可以约1mg/kg至约5mg/kg之量投与。然而，构成有效产生免疫反应之量的抗原之特定量在某种程度上视某些因素而定，诸如所投与之特定抗原；所投与之特定促效剂及其量；所投与之特定促效剂及其量；免疫系统之状态；投与促效剂及抗原之方法及次序；投与调配物之物种；及所需治疗结果。因此，一般阐述构成抗原之有效量的量并非切实可行。然而，一般技术者可在适当考虑该等因素的情况下容易地确定适当量。
医药学上可接受之载剂
抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可与一或多种适于一或多种预期投药途径之载剂(稀释剂、赋形剂及其类似物)及/或佐剂组合以提供医药学上可接受之组合物。
抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可例如与以下混合：乳糖、蔗糖、粉末(例如淀粉粉末)、烷酸之纤维素酯、硬脂酸、滑石、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸及硫酸之钠盐及钙盐、阿拉伯胶、明胶、海藻酸钠、聚乙烯吡咯啶及/或聚乙烯醇，且视情况进一步制锭或囊封以用于习知投药。或者，可将抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体溶解于生理食盐水、水、聚乙二醇、丙二醇、羧甲基纤维素胶体溶液、乙醇、玉米油、花生油、棉籽油、芝麻油、黄蓍胶及/或各种缓冲剂中。其它载剂、佐剂及投药方式在医药技术中为熟知的。载剂或稀释剂可包括时间延迟物质，诸如单独单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯或连同蜡，或其它功能上相似之物质。
医药学上可接受之载剂一般包括生理学上与抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体兼容之任何及所有适合之溶剂、分散介质、涂布剂、抗细菌剂及抗真菌剂、等张剂及吸收延迟剂及其类似物。医药学上可接受之载剂之实例包括水、生理食盐水、磷酸盐缓冲生理食盐水、右旋糖、甘油、乙醇及其类似物，以及其任何组合。在多种状况下，在该种组合物中可能需要包括例如糖、多元醇(诸如甘露糖醇、山梨糖醇)或氯化钠之等张剂。医药学上可接受之物质(诸如湿润剂)或少量之助剂物质(诸如湿润剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂)可合乎需要地延长抗-KIR抗体、相关组合物或组合之存放期或增强其有效性。载剂及医药组合物之其它组分的适合性系基于对抗体之所需生物学特性无显著负面影响来确定。
本发明之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体组合物、相关组合物及组合可呈多种适合形式。该等形式包括例如液体、半固体及固体剂型，诸如液体溶液(例如可注射及可输注溶液)、分散液或悬浮液、乳液、微乳液、锭剂、丸剂、散剂、脂质体、树状体及其它奈米粒子(参见例如Baek等人,Methods Enzymol.2003;362:240-9；Nigavekar等人,Pharm Res.2004年3月;21(3):476-83)、微粒及栓剂。调配物、盐进一步描述于WO2006/072625中。
通常，呈可注射或可输注溶液形式之组合物，诸如类似于用于以其它抗体使人类被动免疫之组合物的组合物可用于传递本发明之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。传递抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体组合物之典型模式为非经肠投药(例如静脉内、皮下、腹膜内及/或肌肉内投药)。在一个态样中，藉由静脉内输注或注射向人类患者投与抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。
用于医药用途之组合物亦可包括各种稀释剂、填充剂、盐、缓冲剂、清洁剂(例如非离子型清洁剂，诸如Tween-80)、稳定剂(例如糖或无蛋白质氨基酸)、防腐剂、组织固定剂、增溶剂及/或其它适于包括于用于医药用途之组合物中之物质。适合组分之实例亦描述于例如Berge等人,J.Pharm.Sci.,6661),1-19(1977)；Wang及Hanson,J.Parenteral.Sci.Tech:42,S4-S6(1988)；美国专利第6,165,779号及第6,225,289号中。该种医药组合物亦可包括防腐剂、抗氧化剂或其它为熟习此项技术者所知之添加剂。其它医药学上可接受之载剂在此项技术中为已知的。参见例如WO2006/072625中之参考文献。
熟习此项技术者将能经由例如由本文中之揭示内容及以下参考文献中之教示所指导的常规实验来确定有效剂量及投药频率：Goodman等人,(2011)Goodman&Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics[第12版]；Howland等人,(2005)Lippincott's Illustrated Reviews:Pharmacology[第2版]；及Golan,(2008)Principles of Pharmacology:The Pathophysiologic Basisof Drug Therapy[第2版]。亦参见Grennaro(2005)[编]Remington:TheScience and Practice of Pharmacy[第21版]。
投药途径
本文所述之组合物可以以下任何途径投与：经颊、表皮、硬膜外、输注、吸入、动脉内、心内、脑室内、皮内、肌肉内、鼻内、眼内、腹膜内、脊柱内、鞘内腔、静脉内、经口、非经肠、肺部、经由灌肠剂或栓剂经直肠、皮下、真皮下、舌下、经皮及经黏膜。较佳之投药途径为静脉内注射或输注。投药可为局部投药，其中组合物直接在接近于疾病部位处、在疾病部位局部、附近、疾病部位处、周围或四周投与，例如局部化；或全身投药，其中给与患者组合物且组合物广泛地通过全身，从而达到疾病部位。局部投药(例如注射)可藉由向患有疾病及/或受疾病影响及/或疾病体征及/或症状具活动性或有可能出现(例如肿瘤部位)之细胞、组织、器官及/或器官系统投药来达成。投药可为表面投药而具有局部作用，将组合物直接施与需要其作用处(例如炎症或疼痛部位)。
对于所述之各实施例，化合物可藉由如此项技术中所知之多种剂型投与。涵盖任何为一般技术者所知之生物学上可接受之剂型及其组合。该等剂型之实例包括(不限于)可咀嚼锭剂、快速溶解锭剂、起泡锭剂、可复原粉末、酏剂、液体、溶液、悬浮液、乳液、锭剂、多层锭剂、双层锭剂、胶囊、软明胶胶囊、硬明胶胶囊、囊片、口含锭、可咀嚼口含锭、珠粒、散剂、胶状物、颗粒、粒子、微粒、可分散颗粒、扁胶剂、灌洗剂、栓剂、乳膏剂、表面剂、吸入剂、气溶胶吸入剂、贴片、粒子吸入剂、植入物、储槽式植入物、可摄取剂、可注射剂(包括皮下、肌肉内、静脉内及皮内)、输注剂及其组合。
混合物可包括之其它化合物为例如医药惰性成分(例如固体及液体稀释剂)，诸如乳糖、右旋糖、蔗糖、纤维素、淀粉或磷酸钙(对于锭剂或胶囊)、橄榄油或油酸乙酯(对于软胶囊)及水或植物油(对于悬浮液或乳液)；润滑剂，诸如二氧化硅、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁或硬脂酸钙及/或聚乙二醇；胶凝剂，诸如胶态黏土；增稠剂，诸如黄蓍树胶或海藻酸钠；黏合剂，诸如淀粉、阿拉伯树胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素或聚乙烯吡咯啶酮；崩解剂，诸如淀粉、海藻酸、海藻酸盐或羟基乙酸淀粉钠；起泡混合物；染料；甜味剂；湿润剂，诸如卵磷脂、聚山梨醇酯或硫酸月桂酯；及其它治疗上可接受之辅助成分，诸如保湿剂、防腐剂、缓冲剂及抗氧化剂，其为已知用于该等调配物之添加剂。
用于经口投药之液体分散液可为糖浆、乳液、溶液或悬浮液。糖浆可含有例如蔗糖或蔗糖以及甘油及/或甘露糖醇及/或山梨糖醇作为载剂。悬浮液及乳液可含有载剂，例如天然树胶、琼脂、海藻酸钠、果胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素或聚乙烯醇。
在其它实施例中，本发明提供套组，其包括一或多个包含药物剂量单位之容器，该等药物剂量单位包含有效量之一或多种本发明抗体及其片段。套组可包括说明书、用法说明书、卷标、销售信息、警告或信息小册子。
剂量
在根据本发明之任何实施例之治疗组合物中本文所述之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体之量可视诸如以下之因素而变化：疾病病况、年龄、性别、体重、患者病史、风险因素、疾病易感性、投药途径、既有治疗疗程(例如可能与其它药物相互作用)及个体体重。给药方案可经调整以提供最佳治疗反应。举例而言，可投与单次快速给药(bolus)，可随时间推移投与若干分次剂量，或可按治疗情况之紧急需要指示按比例减小或增加剂量。
出于投药简便性及剂量均一性考虑，将非经肠组合物调配成单位剂型尤其有利。如本文所用之单位剂型系指适合作为单一剂量用于所治疗哺乳动物个体的物理个别单元；各单元含有经计算以产生所需治疗作用之预定量的抗体及其片段以及所需医药载剂。本发明之单位剂型的规格由以下因素支配且直接视以下因素而定：抗体及其片段之独特特征及欲达成之特定治疗作用，及混配该等抗体及其片段以治疗个体之敏感性之技术内所固有之限制因素。在治疗本发明之抗体及其片段或其适当医药组合物可具有效性之哺乳动物(例如人类)之病状的治疗性使用中，可投与有效量之本发明抗体及其片段。适用于本发明之剂量可为组合物、医药组合物或任何其它本文所述之组合物。
剂量可以单次剂量、两次剂量、三次剂量、四次剂量及/或五次剂量投与。该等剂量可单独、同时及依序投与。
剂型可为为一般技术者所知之任何释放形式。本发明之组合物可经调配以提供活性成分之立即释放或活性成分之持续或控制释放。在持续释放或控制释放制剂中，活性成分可以一定速率进行释放以使得血液含量在延长时段(例如4至24小时)内维持在治疗范围内，但低于毒性含量。较佳剂型包括立即释放、延长释放、脉冲式释放、可变释放、控制释放、定时释放、持续释放、延迟释放、长效剂型及其组合，且在此项技术中为已知的。
如本文所定义，蛋白质或多肽之治疗有效量(亦即有效剂量)处于每公斤体重约0.001至30mg，较佳每公斤体重约0.01至25mg，更佳每公斤体重约0.1至20mg，及甚至更佳每公斤体重约1至10mg、每公斤体重2至9mg、每公斤体重3至8mg、每公斤体重4至7mg，或每公斤体重5至6mg范围内。熟练技术人员应了解，某些因素可能影响有效治疗个体所需之剂量，包括(但不限于)疾病或病症之严重度、先前治疗、个体一般健康状况及/或年龄及存在之其它疾病。此外，用治疗有效量之蛋白质、多肽或抗体治疗个体可包括单一治疗或较佳可包括一系列治疗。
在一个较佳实例中，每周一次用每公斤体重约0.1至20mg范围内之抗体、蛋白质或多肽治疗个体，持续约1至10周，较佳2至8周，更佳约3至7周，及甚至更佳约4、5或6周。亦应了解，用于治疗之抗体、蛋白质或多肽之有效剂量在特定治疗过程中可增加或降低。剂量改变可因如本文所述之诊断分析之结果而出现且变得显而易见。
应了解，组合物之药理学活性可使用此项技术中已知之标准药理学模型来监测。此外，应了解包含抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体或其抗原结合片段之组合物可并入或囊封于适合聚合物基质或膜中以用于部位特异性传递，或可用能够达成部位特异性传递之特定靶向剂官能化。此等技术以及其它药物传递技术在此项技术中为熟知的。确定特定情形之最佳剂量处于熟习此项技术者之能力范围内。参见例如Grennaro(2005)[编]Remington:The Science and Practice of Pharmacy[第21版]。
治疗发炎及自体免疫病症
本发明提供治疗或预防患有或易患发炎或自体免疫病症之个体之发炎或自体免疫病症的治疗方法，其中治疗涉及抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体组合物及/或相关组合物。
举例而言，已报导在患有发炎性肠病(IBD)及克罗恩氏病之患者体内KIR2DL2表现量升高。参见Wilson等人,(2010)Human Immunol.71(3):293-7。
本文所述之KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3抗体可用于治疗T细胞介导之发炎及自体免疫病症之组合物、用途及方法中，该等病症为诸如全身性红斑狼疮、韦格纳氏肉芽肿病、自体免疫肝炎、克罗恩氏病、硬皮病、溃疡性结肠炎、休格连氏症候群、葡萄膜炎、第1型糖尿病、心肌炎、风湿热、僵直性脊椎炎、类风湿性关节炎、多发性硬化症或牛皮癣。
本文所述之KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3抗体可用于治疗自体免疫疾病或病症之组合物、用途及方法中。自体免疫疾病或病症之实例包括(但不限于)后天免疫缺乏症候群(AIDS)、后天脾萎缩、急性前葡萄膜炎、急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、急性痛风性关节炎、急性坏死性出血性脑白质炎、急性或慢性窦炎、急性化脓性脑膜炎(或其它中枢神经系统发炎病症)、急性严重炎症、艾迪森氏病、肾上腺炎、成人发作型糖尿病(第II型糖尿病)、成人发作型特发性副甲状腺低能症(AOIH)、无γ球蛋白血症、颗粒球缺乏症、血管炎病(包括血管炎(包括大血管血管炎(包括风湿性多肌痛及巨细胞性(高安氏)关节炎))、过敏病状、过敏性接触性皮炎、过敏性皮炎、过敏性肉芽肿性血管炎、过敏病症、过敏性神经炎、过敏反应、斑形脱发、全秃、阿尔波特氏症候群、肺泡炎(例如过敏性肺泡炎及纤维化肺泡炎)、阿兹海默氏病、淀粉样变性、肌萎缩性侧索硬化(ALS；葛雷克氏病)、嗜伊红血球相关病症(例如嗜伊红血球增多)、全身性过敏反应、僵直性脊椎炎、血管扩张、抗体介导之肾炎、抗-GBM/抗-TBM肾炎、抗原-抗体复合物介导之疾病、抗丝球体基底膜病、抗-磷脂抗体症候群、抗磷脂症候群(APS)、口疮、口疮性口炎、再生不能性贫血、心律不整、动脉硬化、动脉硬化病症、关节炎(例如类风湿性关节炎，诸如急性关节炎、慢性类风湿性关节炎)、慢性渐进性关节炎、变形性关节炎、蛔虫病、曲霉肿(或含有嗜伊红血球之肉芽肿)、曲菌病、无精液症、哮喘(例如支气管哮喘及自体免疫哮喘)、共济失调毛细管扩张症、共济失调硬化、动脉粥样硬化、自闭症、自体免疫血管性水肿、自体免疫再生不能性贫血、自体免疫萎缩性胃炎、自体免疫糖尿病、睾丸及卵巢之自体免疫疾病(包括自体免疫睾丸炎及卵巢炎)、与胶原病有关之自体免疫病症、自体免疫自主神经障碍、自体免疫耳部疾病(例如自体免疫内耳疾病(AGED))、自体免疫内分泌疾病(包括甲状腺炎，诸如自体免疫甲状腺炎)、自体免疫肠病症候群、自体免疫性腺衰竭、自体免疫听力丧失、自体免疫溶血、自体免疫肝炎、自体免疫肝脏病症、自体免疫高脂质血症、自体免疫免疫缺乏症、自体免疫内耳疾病(AIED)、自体免疫心肌炎、自体免疫嗜中性球减少症、自体免疫胰脏炎、自体免疫多内分泌病、第I型自体免疫多腺体症候群、自体免疫视网膜病、自体免疫血小板减少性紫癜(ATP)、自体免疫甲状腺病、自体免疫荨麻疹、自体免疫介导之胃肠疾病、轴突及神经元神经病、巴娄病、白塞氏病、良性家族性及缺血再灌注损伤、良性淋巴球性血管炎、伯格氏病(IgA肾病)、养鸟者肺、失明、伯克氏病、阻塞性细支气管炎(非移植)伴有NSIP、支气管炎、支气管肺炎曲菌病、布鲁顿氏症候群、大疱性类天疱疮、卡普兰氏症候群、心肌病、心血管缺血、卡斯曼氏症候群、乳糜泻、脂肪便症(麸质性肠病)、小脑退化、大脑缺血及伴有血管形成之疾病、恰加斯氏病、通道病(例如癫痫症)、CNS通道病、脉络膜视网膜炎、脉络膜炎、自体免疫血液学病症、慢性活动性肝炎或自体免疫慢性活动性肝炎、慢性接触性皮炎、慢性嗜伊红血球肺炎、慢性疲劳症候群、慢性肝炎、慢性过敏性肺炎、慢性发炎性关节炎、慢性发炎性髓鞘脱失多神经病(CIDP)、慢性难治炎症、慢性黏膜与皮肤性念珠菌病、慢性神经病(例如IgM多神经病或IgM介导之神经病)、慢性阻塞性气管疾病、慢性肺部发炎疾病、慢性复发性多灶性骨髓炎(CRMO)、慢性甲状腺炎(桥本氏甲状腺炎)或亚急性甲状腺炎、彻奇-斯全司症候群、瘢痕性类天疱疮/良性黏膜类天疱疮、CNS发炎病症、CNS血管炎、腹腔病、柯刚氏症侯群、冷凝集素病、息肉状结肠炎、结肠炎(诸如溃疡性结肠炎、胶原性结肠炎)、涉及T细胞浸润及慢性发炎反应之病状、先天性心脏传导阻滞、先天性风疹感染、库姆氏阳性贫血、冠状动脉疾病、科沙奇病毒性心肌炎、CREST症候群(钙质沉着、雷诺氏现象)、克罗恩氏病、冷球蛋白血症、库欣氏症候群、睫状体炎(例如慢性睫状体炎、异时性睫状体炎、虹膜睫状体炎或福斯氏睫状体炎)、囊肿性纤维化、细胞激素诱发之毒性、聋症、退化性关节炎、髓鞘脱失疾病(例如自体免疫髓鞘脱失疾病)、髓鞘脱失神经病、登革热、疱疹样皮炎及异位性皮炎、皮炎(包括接触性皮炎)、皮肌炎、具有急性发炎组分之皮肤病、德维克氏病(视神经脊髓炎)、糖尿病性大动脉病症、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、戴-布二氏贫血、弥漫性间质性肺纤维化、扩张型心肌病、盘状狼疮、涉及白血球渗出之疾病、卓斯勒症候群、杜普伊特伦氏挛缩、埃可病毒感染、湿疹(包括过敏性或异位性湿疹)、脑炎(诸如罗氏脑炎及边缘叶及/或脑干脑炎)、脑脊髓炎(例如过敏性脑脊髓炎及实验性过敏性脑脊髓炎(EAE))、动脉内膜增生、心内膜炎、内分泌性眼病、子宫内膜异位症、心内膜心肌纤维化、晶状体过敏性眼内炎、眼内炎、过敏性肠炎、嗜伊红血球增多-肌痛症候群、嗜伊红血球性筋膜炎、流行性角膜结膜炎、后天性大疱性表皮松懈(EBA)、巩膜外层、巩膜外层炎、埃-巴二氏病毒感染、持久性隆起性红斑、多形红斑、麻风结节性红斑、结节性红斑、胎儿红血球母细胞增多症、食道运动功能障碍、原发性混合型冷球蛋白血症、筛骨、伊文氏症候群、实验性过敏性脑脊髓炎(EAE)、因子VIII缺乏症、农民肺、风湿热、费尔提氏症候群、肌肉纤维疼痛、纤维化肺泡炎、丝虫病、局部区段性丝球体硬化症(FSGS)、食物中毒、额叶萎缩、胃萎缩、巨细胞性关节炎(颞关节炎)、巨细胞性肝炎、巨细胞性多肌痛、丝球体肾炎、伴有及不伴有肾病症候群之丝球体肾炎(GN)(诸如慢性或急性丝球体肾炎(例如原发性GN))、古德帕斯彻氏症候群、痛风性关节炎、颗粒球输注相关症候群、肉芽肿病(包括淋巴瘤样肉芽肿病)、伴有多血管炎之肉芽肿病(GPA)、肉芽肿性葡萄膜炎、格雷氏病、古立安-白瑞症候群、点状牛皮癣、阵发性血红素尿、黑-里二氏病、桥本氏病、桥本氏脑炎、桥本氏甲状腺炎、血色病、溶血性贫血或免疫性溶血性贫血(包括自体免疫溶血性贫血(AIHA))、溶血性贫血、A型血友病、亨-舍二氏紫癜、妊娠疱疹、人类免疫缺乏病毒(HIV)感染、痛觉过敏、低γ球蛋白血症、性腺低能症、副甲状腺低能症、特发性尿崩症、特发性面瘫、特发性甲状腺功能低下、特发性IgA肾病、特发性膜性GN或特发性膜性肾病、特发性肾病症候群、特发性肺纤维化、特发性口炎性腹泻、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、IgA肾病、IgE介导之疾病(例如全身性过敏反应以及过敏性及异位性鼻炎)、IgG4相关硬化性疾病、局部回肠炎、免疫复合物肾炎、与由细胞激素及T-淋巴球介导之急性及迟发型过敏症有关之免疫反应、免疫介导之GN、免疫调节性脂蛋白(包括成人或急性呼吸窘迫症候群(ARDS))、包涵体肌炎、感染性关节炎、由抗精原细胞抗体所致之不孕症、全部或部分葡萄膜炎症、发炎性肠病(IBD)、发炎性过度增殖性皮肤疾病、发炎性肌病、胰岛素依赖型糖尿病(第1型)、胰岛炎、间质性膀胱炎、间质性肺病、间质肺纤维化、虹膜炎、缺血再灌注病症、关节炎症、青少年关节炎、青少年皮肌炎、青少年糖尿病、青少年发作型(第I型)糖尿病(包括儿童胰岛素依赖型糖尿病(IDDM))、青少年发作型类风湿性关节炎、川崎氏症候群、干燥性角膜结膜炎、锥虫病、蓝伯-伊顿症候群、利什曼体病、麻风病、白血球减少症、白血球黏附缺乏症、白血球破碎性血管炎、白血球减少症、扁平苔癣、硬化性苔癣、木质性结膜炎、线性IgA皮肤病、线性IgA疾病(LAD)、吕弗勒氏症候群、类狼疮性肝炎、狼疮(包括肾炎、大脑炎、儿童、非肾、肾外、盘状、脱发)、狼疮(SLE)、播散性红斑狼疮、莱姆关节炎、莱姆病、淋巴间质性肺炎、疟疾、男性及女性自体免疫不孕症、上颌骨病、中血管血管炎(包括川崎氏病及结节性多动脉炎)、膜状增生性或膜增生性GN(MPGN)(包括第I型及第II型)及快速进行性GN、膜性GN(膜性肾病)、美尼尔氏病、脑膜炎、显微性结肠炎、显微性多血管炎、偏头痛、微小肾病变、混合型结缔组织病(MCTD)、感染性单核细胞增多症、莫伦氏溃疡、穆-哈二氏病、多灶性运动神经病、多发性内分泌衰竭、多器官损伤症候群(诸如继发于败血症、创伤或出血之多器官损伤症候群)、多器官损伤症候群、多发性硬化症(MS)(诸如脊髓-眼MS)、多发性硬化症、流行性腮腺炎、肌肉病症、重症肌无力(诸如胸腺瘤相关重症肌无力)、重症肌无力、心肌炎、肌炎、发作性睡病、坏死性小肠结肠炎及透壁性结肠炎，及自体免疫发炎性肠病；坏死性、皮肤或过敏性血管炎；新生儿狼疮症候群(NLE)、肾病、肾病症候群、神经疾病、视神经脊髓炎(德维克氏)、视神经脊髓炎、神经性肌强直、嗜中性球减少症、非癌性淋巴球增多症、非肉芽肿性葡萄膜炎、非恶性胸腺瘤、眼部及眼眶发炎病症、眼部瘢痕性类天疱疮、卵巢炎、交感神经性眼炎、眼阵挛肌阵挛症候群(OMS)、眼阵挛或眼阵挛肌阵挛症候群(OMS)，及感觉神经病、视神经炎、肉芽肿性睾丸炎、骨关节炎、复发性风湿病、胰脏炎、全部血球减少症、PANDAS(与链球菌有关之儿童自体免疫神经精神病症)、肿瘤相关小脑退化、肿瘤相关症候群；肿瘤相关症候群，包括神经肿瘤相关症候群(例如蓝伯-伊顿肌无力症候群或伊顿-蓝伯症候群)；寄生物疾病，诸如利什曼原虫属；阵发性夜间血红素尿(PNH)、帕-罗二氏症候群、睫状体平坦部炎(周边葡萄膜炎)、帕-特二氏症候群、小病毒感染；类天疱疮，诸如大疱性类天疱疮及皮肤类天疱疮；天疱疮(包括寻常天疱疮)、红斑性天疱疮、落叶状天疱疮、天疱疮黏膜类天疱疮、天疱疮、消化性溃疡、周期性麻痹、周边神经病、静脉周边性脑脊髓炎、恶性贫血、恶性贫血、晶状体抗原性葡萄膜炎、肺硬化、POEMS症候群；结节性多动脉炎，第I型、第II型及第III型；原发性慢性多发性关节炎、多软骨炎(例如难治或复发性多软骨炎)、多内分泌腺自体免疫疾病、多内分泌异常、多腺体症候群(例如自体免疫多腺体症候群(或多腺体内分泌病症候群))、风湿性多肌痛、多发性肌炎、多发性肌炎/皮肌炎、多神经病、急性多神经根炎、心切开术后症候群、后葡萄膜炎或自体免疫葡萄膜炎、心肌梗塞后症候群、心包切开术后症候群、链球菌感染后肾炎、疫苗接种后症候群、早老性痴呆、原发性胆汁性肝硬化、原发性甲状腺功能低下、原发性特发性黏液水肿；原发性淋巴球增多症，其包括单株B细胞淋巴球增多症(例如良性单株γ球蛋白病及意义未明之单株γ球蛋白病MGUS)；原发性黏液水肿、原发性进行性MS(PPMS)及复发-缓解型MS(RRMS)、原发性硬化性胆管炎、孕酮皮炎、进行性全身性硬化、增生性关节炎；牛皮癣，诸如斑块型牛皮癣；牛皮癣、牛皮癣性关节炎、肺泡蛋白沈积症、肺部浸润性嗜伊红血球增多、纯红血球贫血或再生不良(PRCA)、纯红血球再生不良、化脓性或非化脓性窦炎、脓疱性牛皮癣及指甲牛皮癣、肾盂炎、坏疽性脓皮病、奎汶氏甲状腺炎、雷诺氏现象、反应性关节炎、反复流产、血压反应降低、反射性交感神经失养症、难治型口炎性腹泻、莱特尔氏病或症候群、复发性多软骨炎、心肌或其它组织再灌注损伤、再灌注损伤、呼吸窘迫症候群、腿不宁症候群、视网膜自体免疫、腹膜后纤维化、雷诺氏症候群、风湿性疾病、风湿热、风湿病、类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎、风疹病毒感染、塞氏症候群、类肉瘤病、血吸虫病、施密特症候群、SCID及埃-巴二氏病毒相关疾病、巩膜、巩膜炎、指硬皮病、硬皮病(包括全身性硬皮病)、硬化性胆管炎、播散性硬化；硬化，诸如全身性硬化；感觉神经性听力丧失、血清反应阴性脊椎关节炎、席汉氏症候群、夏尔曼氏症候群、硅肺病、休格连氏症候群、精子及睾丸自体免疫、蝶窦炎、斯-约二氏症候群、僵人症候群、亚急性细菌性心内膜炎(SBE)、亚急性皮肤红斑狼疮、突发性听力丧失、苏萨克氏症候群、西登哈姆氏舞蹈病、交感神经性眼炎、全身性红斑狼疮(SLE)(例如皮肤SLE)、全身性坏死性血管炎及ANCA相关血管炎，诸如彻奇-斯全司血管炎或症候群(CSS)；脊髓痨、高安氏动脉炎、毛细血管扩张、颞动脉炎/巨细胞性动脉炎、血栓闭塞性脉管炎；血小板减少症(例如如由心肌梗塞患者所显现)，包括血栓性血小板减少性紫癜(TTP)，及自体免疫或免疫介导之血小板减少症，诸如特发性血小板减少性紫癜(ITP)，包括慢性或急性ITP；血小板减少性紫癜(TTP)、甲状腺中毒症、组织损伤、托-享二氏症候群、中毒性表皮坏死溶解、中毒性休克症候群、输血反应、婴儿期短暂性低γ球蛋白血症、横贯性脊髓炎、热带肺性嗜伊红血球增多、结核病、溃疡性结肠炎、未分化型结缔组织病(UCTD)、荨麻疹(例如慢性过敏性荨麻疹及慢性特发性荨麻疹，包括慢性自体免疫荨麻疹)、葡萄膜炎(例如前葡萄膜炎)、葡萄膜视网膜炎、瓣膜炎、血管功能障碍、血管炎、脊椎关节炎、水疱性皮肤病、白斑病、韦格纳氏肉芽肿病(现称作伴有多血管炎之肉芽肿病(GPA))、维斯科特-奥尔德里奇症候群及X性联高IgM症候群
本文所述之KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3抗体可用于治疗发炎病状及发炎疾病之组合物、用途及方法中。
发炎病状及发炎疾病包括(但不限于)风湿性疾病(例如类风湿性关节炎、骨关节炎、牛皮癣性关节炎)、脊椎关节病(例如僵直性脊椎炎、反应性关节炎、莱特尔氏症候群)、结晶性关节病(例如痛风、假性痛风、焦磷酸钙沈积病)、多发性硬化症、莱姆病、风湿性多肌痛；结缔组织疾病(例如全身性红斑狼疮、全身性硬化、多发性肌炎、皮肌炎、休格连氏症候群)；血管炎病(例如结节性多动脉炎、韦格纳氏肉芽肿病、彻奇-斯全司症候群)；发炎病状，包括创伤或缺血之后果、类肉瘤病；血管疾病，包括动脉粥样硬化性血管疾病、动脉粥样硬化及血管阻塞性疾病(例如动脉粥样硬化、缺血性心脏病、心肌梗塞、中风、周边血管疾病)及血管支架再狭窄；眼部疾病，包括葡萄膜炎、角膜病、虹膜炎、虹膜睫状体炎及白内障。
发炎病状亦包括(但不限于)酸逆流/胃灼热、痤疮、寻常痤疮、过敏及敏感、阿兹海默氏病、哮喘、动脉粥样硬化及血管阻塞性疾病(例如动脉粥样硬化、缺血性心脏病、心肌梗塞、中风、周边血管疾病)及血管支架再狭窄、自体免疫疾病、支气管炎、癌症、心脏炎、白内障、乳糜泻、慢性疼痛、慢性前列腺炎、肝硬化、结肠炎、结缔组织病(例如全身性红斑狼疮、全身性硬化、多发性肌炎、皮肌炎、休格连氏症候群)、角膜病、克罗恩氏病、结晶性关节病(例如痛风、假性痛风、焦磷酸钙沈积病)、痴呆、皮炎、糖尿病、干眼症、湿疹、水肿、气肿、肌肉纤维疼痛、胃肠炎、齿龈炎、丝球体肾炎、心脏病、肝炎、高血压、过敏、发炎性肠病；发炎病状，包括创伤或缺血之后果；胰岛素抗性、间质性膀胱炎、虹膜睫状体炎、虹膜炎、关节疼痛/关节炎/类风湿性关节炎、莱姆病、代谢症候群(症候群X)、多发性硬化症、肌炎、肾炎、肥胖症；眼部疾病，包括葡萄膜炎；骨质减少、骨质疏松症、帕金森氏症、骨盆发炎性疾病、牙周病、多动脉炎、多软骨炎、风湿性多肌痛、牛皮癣、再灌注损伤、风湿性关节炎、风湿性疾病(例如类风湿性关节炎、骨关节炎、牛皮癣性关节炎)、类风湿性关节炎、类肉瘤病、硬皮病、窦炎、休格连氏症候群、结肠痉挛、脊椎关节病(例如僵直性脊椎炎、反应性关节炎、莱特尔氏症候群)、全身性念珠菌病、腱炎、移植排斥反应、UTI、阴道炎；血管疾病，包括动脉粥样硬化性血管疾病；血管炎病(例如结节性多动脉炎、韦格纳氏肉芽肿病、彻奇-斯全司症候群)及血管炎。
本文中之术语「治疗」系指传递有效量之该种调配物以达成预防任何症状或疾病病况显现之目的或以达成预防(例如预防或延迟进展)、减轻、改善或消除(治愈)已显现之该等症状或疾病病况的目的。术语「治疗」因此意欲包括治疗例如已在首次治疗后经历治疗反应之个体的轻微或不可侦测之疾病，或治疗确诊及/或急性期疾病。
向个体传递抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体(藉由直接投药或由其中核酸表现，诸如由包含抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体编码核酸序列之痘病毒基因转移载体表现)及实施本发明之其它方法可用于达成预防(例如预防或延迟进展)、减轻、改善或消除(治愈)已显现之该等症状或疾病病况的目的。
本发明之方法尤其可适用于降低及/或改善T细胞活性、增殖或数目(例如循环中或炎症部位处之已活化的促发炎T细胞(例如CD4+T细胞、HLA-cw3及/或HLA-cw4阳性T细胞)的数目)及与其相关之任何参数或症状(例如炎症标记含量)。独立地及共同地减轻、预防或以其它方式改善发炎或自体免疫病症之该等态样的方法为本发明之有利特征。如本文所用之「T细胞」系指淋巴球之子群，其在胸腺中成熟且在其表面上呈现T细胞受体以及其它分子。T细胞可因某些特征及生物学特性而得以鉴别，诸如表现特异性表面抗原，包括TCR、CD4或CD8；某些T细胞杀死肿瘤或感染细胞之能力；某些T细胞活化免疫系统之其它细胞的能力；及释放称为细胞激素之刺激或抑制免疫反应之蛋白质分子的能力。此等任何特征及活性可用于使用此项技术中熟知之方法来鉴别T细胞。在本发明之上下文中，「活性」或「活化」T细胞指生物活性T细胞，更尤其指具有细胞溶解或藉由例如分泌细胞激素来刺激免疫反应之能力的T细胞。活性细胞可在任何多种熟知方法(包括功能分析及基于表现之分析，诸如细胞激素(诸如TNF-α)表现)中侦测。
治疗患有自体免疫或发炎疾病之个体的方法可包含投与该个体抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。在一个实施例中，个体患有已确诊之自体免疫或发炎疾病(例如已诊断出延长时段，例如一年以上)、有进行性或活动性炎症之体征、有疾病之身体体征(例如关节肿胀、病变、神经症状)、患有慢性疾病、患有重度疾病(如由适当准则所评定，例如类风湿性关节炎之DAS或ACR准则)或患有进展性疾病。
治疗确诊有自体免疫或发炎疾病之个体的方法可包含投与该个体抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。本发明提供使用抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体(或相关组合物)治疗自体免疫或发炎疾病之急性期或发作、危象、恶化或突发的方法，较佳其中在急性期期间或在自体免疫或发炎疾病发作、危象、恶化或突发期间投与个体抗体。疾病可选自由以下组成之群：类风湿性关节炎、青少年特发性关节炎、多发性硬化症、克罗恩氏病或直肠结肠炎、红斑狼疮、僵直性脊椎炎及相关疾病。在一个实施例中，疾病特征在于存在表现抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3配体(例如HLA-cw3或HLA-cw4)之细胞，较佳特征在于存在表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之CD4+T细胞。该疾病特征在于存在可侦测含量之蛋白水解酶、发炎介体、进行性炎症标记或促发炎细胞激素(例如TNF-α及/或介白素-1(IL-1))。
疾病诊断、进展及分级(或分期)可由针对特定类型之疾病的标准医学准则来定义以确定个体是否确诊有疾病、处于急性期之疾病、进展性疾病、慢性疾病、有身体症状或某种严重度之疾病。同样，发作、危象、恶化或突发可由任何适合之医学准则来鉴别。
抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可有利地用于治疗确诊之疾病。「确诊之疾病」系指已在延长之时段(例如超过一年)内诊断出有自体免疫或发炎疾病。视特定疾病而定，确诊之疾病亦意谓未得到控制，例如仍有进展或患者在治疗存在或不存在下未经历缓解的疾病。在一个态样中，本发明提供治疗患者之自体免疫或发炎疾病之方法，其包含：(a)确定该患者是否确诊有疾病；及(b)若该患者确诊有疾病，则投与该患者有效剂量之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。
抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体亦可有利地用于治疗慢性疾病。「慢性疾病」系指持续延长时段之疾病。举例而言，慢性疾病可为持续3个月或3个月以上之疾病，如由美国国家健康统计中心(U.S.NationalCenter for Health Statistics)所定义。在一个态样中，本发明提供治疗患者之自体免疫或发炎疾病之方法，其包含：(a)确定该患者是否患有慢性疾病；及(b)若该患者患有慢性疾病，则投与该患者有效剂量之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。
抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体亦可有利地用于治疗有发作、危象、恶化或突发之个体。术语「发作」、「危象」、「恶化」及「突发」表示与发炎或自体免疫疾病有关之新症状较快速地进展或先前症状恶化。与疾病经数月及数年缓慢进展相反，该等阶段持续数小时或数天时段。在该等发作期间，患者遭受发热、疼痛、发炎症候群(流感样症候群)。在RA中，患者之关节肿胀及疼痛。患者可能遭受流感样症候群。危象可能持续几小时至数周。在多发性硬化症中，突发特征在于新症状或现有症状恶化，但须持续至少24小时以视为真正恶化，突发表示脑或脊髓中形成破坏神经传递之新病变。大部分突发持续几天或几周，但可持续数月。影响可为例如：运动困难或痉挛、平衡及协调问题；视力问题、不协调眼球运动、视觉模糊或复视(double vision)、在突发期间部分失明；膀胱及肠症状；性功能问题、心理功能改变：记忆丧失、注意力不集中及判断力不良或抑郁症。在克罗恩氏病或直肠结肠炎中，突发主要为常见克罗恩氏病症状恶化：腹泻、腹部绞痛、发热、缺乏食欲。在一个态样中，本发明提供治疗患者之自体免疫或发炎疾病之方法，其包含：(a)确定该患者是否正经历发作、危象、恶化或突发；(b)若该患者经历发作、危象、恶化或突发，则投与该患者有效剂量之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。
抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体亦可有利地用于治疗有复发之个体。术语「复发」系指患者症状改善或稳定化。疾病在患者之健康状况或病状改善时复发。在一个态样中，本发明提供治疗患者之自体免疫或发炎疾病之方法，其包含：(a)确定该患者是否正经历复发、危象、恶化或突发；(b)若该患者经历复发，则投与该患者有效剂量之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。
视情况而定，可进行HLA-cw3及/或HLA-cw4侦测步骤，其包含在用抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体治疗之前侦测患者体内HLA-cw3及/或HLA-cw4之存在。一般而言，在此步骤中，自患者获取生物样品，例如患有类风湿性关节炎之患者的例如滑液样品。评定生物样品中HLA-cw3及/或HLA-cw4多肽或核酸之存在。若生物样品对于HLA-cw3及/或HLA-cw4之存在呈阳性，则接着可有利地用抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体治疗该患者。
抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体以单疗法(单一治疗剂)形式使用。本发明之治疗方法可进一步包含用抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体以及第二治疗剂治疗个体，该第二治疗剂包括通常用于达成投与抗体所达成之特定治疗目的之药剂。抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体与第二治疗剂可单独、共同或依序投与，或以混合液形式投与。第二治疗剂通常以该药剂在单疗法中用于所治疗之特定疾病或病状通常所用的量投与。在一个实施例中，投与剂量小于普遍接受之有效剂量的第二治疗剂；例如，在各种实施例中，投与包含普遍接受之有效剂量之约10%至75%以下之剂量的组合物。较佳，第二治疗剂为降低蛋白水解酶、发炎介体或促发炎细胞激素(诸如TNF-α及/或介白素-1(IL-1))之药剂。较佳，第二治疗剂为DMARD或DMD，视情况进一步其中第二治疗剂为甲胺喋呤
Figure BDA0000462467460001481
羟基氯喹
Figure BDA0000462467460001482
柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)来氟米特(leflunomide)肿瘤坏死因子抑制剂(例如可溶性TNFα受体，诸如依那西普(etanercept)
Figure BDA0000462467460001485
中和性(较佳非消耗性)抗-TNFα抗体，诸如阿达木单抗(adalimumab)
Figure BDA0000462467460001486
或塞妥珠单抗(Certolizumab pegol
Figure BDA0000462467460001487
)、T细胞共刺激阻断剂(例如阿巴西普(abatacept)
Figure BDA0000462467460001488
)、介白素-1(IL-1)受体拮抗剂疗法(阿那白滞素(anakinra)
Figure BDA0000462467460001489
)、抗-BlyS抗体蛋白体抑制剂(例如波普单抗(bortezomib))、酪氨酸激酶抑制剂、肌肉内金剂或另一免疫调节性或细胞毒性剂(例如硫唑嘌呤
Figure BDA0000462467460001491
环磷酰胺、环孢素A(cyclosporineA)
Figure BDA0000462467460001492
，或激酶抑制剂(例如SYK激酶抑制剂，诸如氟斯替尼(fostimatinib)(R788)或JAK1、JAK2抑制剂，诸如INCB28050、坦组单抗(tanezumab)或塔索替尼(tasocitinib)(CP-690,550))。
抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体在投与第二治疗剂之前投与。举例而言，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可在投与第二治疗剂之前约0至30天投与。在一些实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体在投与第二治疗剂之前约30分钟至约2周、约30分钟至约1周、约1小时至约2小时、约2小时至约4小时、约4小时至约6小时、约6小时至约8小时、约8小时至1天或约1至5天投与。在一些实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体与投与治疗剂并行投与。抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体在投与第二治疗剂之后投与。举例而言，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可在投与第二治疗剂之后约0至30天投与。在一些实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体在投与第二治疗剂之后约30分钟至约2周、约30分钟至约1周、约1小时至约2小时、约2小时至约4小时、约4小时至约6小时、约6小时至约8小时、约8小时至1天或约1至5天投与。
组合物可进一步包含至少一种消炎剂、镇痛剂或疾病改善性抗风湿药(DMARD)。
消炎剂可选自由以下组成之群：类固醇、皮质酮、糖皮质激素、强的松、泼尼松龙(prednisolone)、氢化可的松(Hydrocortisone)(皮质醇)、醋酸皮质酮、甲泼尼龙(Methylprednisolone)、地塞米松(Dexamethasone)、倍他米松(Betamethasone)、曲安西龙(Triamcinolone)、倍氯米松(Beclometasone)及醋酸氟氢可的松(Fludrocortisone acetate)、非类固醇消炎药(NSAID)、布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、美侬西康(meloxicam)、依托度酸(etodolac)、萘丁美酮(nabumetone)、舒林酸(sulindac)、托来美汀(tolementin)、胆碱、水杨酸镁、双氯芬酸(diclofenac)、地夫西纳(diflusinal)、吲哚美辛(indomethicin)、酮洛芬(Ketoprofen)、奥沙普嗪(Oxaprozin)、吡罗昔康(piroxicam)及尼美舒利(nimesulide)、水杨酸盐、阿司匹灵(Aspirin)(乙酰水杨酸)、双氟尼酸(Diflunisal)、双水杨酯(Salsalate)、对胺基苯酚衍生物、扑热息痛(Paracetamol)、非那西汀(phenacetin)、丙酸衍生物、布洛芬、萘普生、非诺洛芬(Fenoprofen)、酮洛芬、氟比洛芬(Flurbiprofen)、奥沙普嗪、洛索洛芬(Loxoprofen)、乙酸衍生物、吲哚美辛、舒林酸、依托度酸、酮咯酸(Ketorolac)、双氯芬酸(Diclofenac)、萘丁美酮、烯醇酸(昔康(Oxicam))衍生物、吡罗昔康、美侬西康、替诺昔康(Tenoxicam)、屈恶昔康(Droxicam)、氯诺昔康(Lornoxicam)、伊索昔康(Isoxicam)、芬那酸(Fenamic acid)衍生物(芬那酸酯)、甲灭酸(Mefenamic acid)、甲氯灭酸(Meclofenamic acid)、氟灭酸(Flufenamic acid)、托芬那酸(Tolfenamicacid)、选择性COX-2抑制剂(考昔(Coxib))、赛利克西(Celecoxib)、罗非考昔(Rofecoxib)、伐地考昔(Valdecoxib)、帕瑞考昔(Parecoxib)、卢米罗可(Lumiracoxib)、依托考昔(Etoricoxib)、非罗考昔(Firocoxib)、磺酰替苯胺(Sulphonanilides)、尼美舒利及利克飞龙(Licofelone)。
类风湿性关节炎
类风湿性关节炎(RA)为一种慢性且通常为进行性的发炎疾病，其中滑膜为主要炎症部位。骨破坏在炎症进展同时出现，使得骨及软骨变形或损伤。类风湿性关节炎(RA)分阶段进展。第一阶段为滑液内层肿胀，引起疼痛、变暖、僵硬、发红及关节周围肿胀。第二阶段为细胞快速分裂及生长或血管翳，引起滑膜变厚。在第三阶段中，发炎细胞释放可消化骨及软骨之酶，常引起所累及之关节丧失其形状及对齐，更疼痛且丧失运动功能。受该疾病影响之患者可经历无疼痛之缓解期，且接着经历疼痛加重之类风湿性关节炎危象(亦称为突发或发作)。本发明之方法建议治疗该经历危象之患者以协助其对付疼痛。
RA疾病之程度可使用不同准则来评估。最知名之准则已由ACR(美国风湿病学院(American College of Rheumatology))设立。ACR准则系以ACR20、ACR50及ACR70指示。ACR准则衡量压痛或肿胀关节计数之改善及以下五个参数中之三个参数的改善：急性期反应物(诸如沈降率)、患者评定、医师评定、疼痛量表及功能障碍/功能问卷。
疾病严重度亦可用称作DAS(疾病活动度得分)之得分来量度。DAS为由EULAR(欧洲抗风湿病联盟(European League Against Rheumatism))拟定之最初针对患有滑膜炎之关节数目为44个关节及53个里奇(Ritchie)指数部位而开发的RA活动度复合指数。DAS系根据下式来计算：
DAS=[0.553938√里奇指数]+[0.06465√(患有滑膜炎之关节数目)]+[0.330Ln(红血球沈降率)]+0.024
里奇指数涉及53个关节：颞下颌、肩峰锁骨、胸肋锁骨、肩、肘、腕、掌指(MCP)、手指之近端指节间(PIP)、髋、膝、踝、距骨下、跗横及跖趾(MTP)关节。
三种活动度已根据DAS之值来定义：具有低活动度之RA(DAS≤2.4)；中度活动性RA(2.4＜DAS≤3.7)；活动性RA(DAS＞3.7)。针对DAS定义之缓解临限值为＜1.6。
本发明之治疗方法之主要目的为控制疾病之活动度，以及缓解、减轻疼痛、防止及控制关节破坏、防止日常活动及工作之功能丧失，及最佳化患者之生活质量。
当前治疗可选方案
当前关于治疗RA之推荐包括在确定诊断之后用疾病改善性抗风湿药(DMARD)早期治疗。非类固醇消炎药(NSAID)且直至最近，COX-2抑制剂已广泛地在等待确定诊断同时或随后在疾病过程中连同DMARD一起使用。甲胺喋呤为最广泛使用之DMARD，但亦可开立其它药剂(包括羟基氯喹、柳氮磺胺吡啶、金剂、二甲胺四环素(minocycline)及来氟米特)。皮质类固醇可与DMARD组合使用，但一般仅使用低剂量以使不利事件减至最少(O'Dell,NewEngl.J.Med.350:2591-2603,2004)。近年来，靶向发炎细胞激素之抗细胞激素疗法已受到关注，且已研发具有有效抗风湿作用之新颖生物药物，诸如英利昔单抗(infliximab)、依那西普、阿那白滞素及阿利珠单抗(atlizumab)。然而，当前无完全有效之治疗且仍需要有效治疗疾病及改善患者之舒适感及减轻疼痛且需要替代疗法来改善患者日常生活。一些主要治疗评述于下文中。
非类固醇消炎剂(NSAID)。此等药物藉由阻断环加氧酶COX-1及COX-2来抑制前列腺素产生。前列腺素为炎症及疼痛之介体，而在维持正常身体功能方面亦具有重要作用，包括针对胃酸之保护作用、维持肾血流及促进血小板黏性及血管功能。COX-2选择性抑制剂选择性阻断经由COX-2产生之在炎症中具有显著作用之前列腺素。许多不同NSAIDS为可得到的，一些非处方药包括阿司匹灵、布洛芬
Figure BDA0000462467460001511
及萘普生
Figure BDA0000462467460001512
且多种其它药物可藉由开立处方得到，包括美侬西康
Figure BDA0000462467460001513
依托度酸
Figure BDA0000462467460001514
萘丁美酮
Figure BDA0000462467460001515
舒林酸
Figure BDA0000462467460001516
托来美汀胆碱、水杨酸镁
Figure BDA0000462467460001518
双氯芬酸
Figure BDA0000462467460001519
地夫西纳
Figure BDA00004624674600015110
吲哚美辛
Figure BDA00004624674600015111
酮洛芬
Figure BDA00004624674600015112
奥沙普嗪及吡罗昔康
Figure BDA0000462467460001522
允许每天一次或每天两次给药之长效NSAID可改善顺应性。NSAID类亦包括称作COX-2抑制剂之药物，其亦有效控制炎症(赛利克西，
Figure BDA0000462467460001523
依托考昔，
Figure BDA0000462467460001524
卢米罗可，
Figure BDA0000462467460001525
)。
皮质类固醇(强的松；甲泼尼龙，
Figure BDA0000462467460001526
)具有消炎及免疫调节活性。其可经口、静脉内、肌肉内给与或可直接注射至关节中。皮质类固醇适于在等待DMARD发挥其消炎作用时作为临时辅助疗法用于早期疾病。皮质类固醇亦适用作长期辅助疗法用于患有NSAID及DMARD未完全控制之重度疾病的患者。强的松之常用剂量为每天5至10mg。虽然强的松可起始于较高剂量(每天15至20mg)，但应试图经数周逐渐减少剂量至每天10mg以下。在开始后，皮质类固醇疗法可能极难中止及甚至处于低剂量。一些患者对逐渐减少强的松极为敏感，该逐渐减少强的松一般经数周缓慢进行。
疾病改善性抗风湿药(DMARD)：虽然NSAID及DMARD药剂均改善活动性类风湿性关节炎之症状，但仅DMARD药剂已经展示可改变疾病过程且改善放射照相结果。相较于NSAID或皮质类固醇，DMARD对类风湿性关节炎之作用不同且可较大程度延迟发病。在大多数状况下，当确定类风湿性关节炎之诊断时，应开始DMARD药剂。所累及之关节的X射线照片上存在侵蚀或关节间隙变窄为进行DMARD疗法之明确指示，然而不应等待X射线照片出现改变。当前可用之药物包括：甲胺喋呤
Figure BDA0000462467460001527
羟基氯喹柳氮磺胺吡啶来氟米特
Figure BDA00004624674600015210
肿瘤坏死因子抑制剂-依那西普
Figure BDA00004624674600015211
阿达木单抗
Figure BDA00004624674600015212
及英利昔单抗
Figure BDA00004624674600015213
T细胞共刺激阻断剂-阿巴西普
Figure BDA00004624674600015214
B细胞消耗剂-利妥昔单抗(rituximab)
Figure BDA00004624674600015215
介白素-1(IL-1)受体拮抗剂疗法-阿那白滞素
Figure BDA00004624674600015216
肌肉内金剂、其它免疫调节性及细胞毒性剂-硫唑嘌呤
Figure BDA00004624674600015217
环磷酰胺及环孢素A
Figure BDA00004624674600015218
甲胺喋呤现在视作用于大部分RA患者之第一线DMARD药剂。其在治疗剂量下具有相对快速之起始作用时间(6至8周)、良好功效、有利毒性型态、投药简便且成本相对较低。甲胺喋呤有效减少RA之体征及症状以及减缓或停止放射照相损伤。甲胺喋呤亦有效用于许多其它形式之发炎性关节炎，包括牛皮癣性关节炎及其它脊柱关节病，且用于许多其它自体免疫疾病。剂量：在对于早期RA比较甲胺喋呤与依那西普之研究中，甲胺喋呤起始于每周10mg之剂量，且每周增加，到第8周时增加至20mg。此起始于甚至更高之剂量(高达每周15mg)且在前三个月内剂量逐步增加至20mg的给药方案现在临床实践中已完全接受。最大剂量通常为每周25mg，但有时可进一步增加。甲胺喋呤可经口或藉由皮下注射给与。后者投药途径对于患有甲胺喋呤相关性恶心之患者为有利的。应针对肾机能不全、急性或慢性肝病、显著酒精摄入或酒精滥用、白血球减少症(低白血球计数)、血小板减少症(低血小板计数)或未经治疗之叶酸缺乏仔细评估开始甲胺喋呤之患者。NSAIDS与甲胺喋呤常规共同投与患有类风湿性关节炎之患者且由风湿病学家视作安全的，只要密切监测肝功能测试即可。甲胺喋呤可安全地与几乎所有其它经FDA批准用于RA之DMARD组合，包括柳氮磺胺吡啶、羟基氯喹、TNF抑制剂、阿巴西普、利妥昔单抗、阿那白滞素及来氟米特。在所有组合甲胺喋呤与此等DMARD中之一者的临床试验中，未观测到意外之毒性或协同毒性，例外为在与来氟米特组合的情况下因其亦由肝脏代谢而使得肝脏毒性较高。
羟基氯喹及氯喹为抗疟药，其为用于治疗类风湿性关节炎之相对安全且良好耐受之药剂。由于此等药物单独防止关节损伤之能力有限，所有其有可能仅限用于具有极轻度及非侵蚀性疾病的患者。羟基氯喹有时与甲胺喋呤组合以提供针对体征及症状之迭加益处，或作为与甲胺喋呤及柳氮磺胺吡啶之「三重疗法」之方案的一部分。
柳氮磺胺吡啶为可有效治疗RA之DMARD。其连同甲胺喋呤及羟基氯喹一起给与而作为「三重疗法」之方案的一部分，该「三重疗法」已经展示可向对单独甲胺喋呤反应不足之患者提供益处。柳氮磺胺吡啶亦用于治疗发炎性肠病及脊椎关节病。其对RA之作用机制尚未知。其一些作用可归因于叶酸消耗。剂量：常用剂量为以每天两次给药方案每天2至3公克。剂量可起始于每天1公克且可根据耐受性增加。
来氟米特
Figure BDA0000462467460001532
亦为有效之DMARD。其功效就体征及症状而言类似于甲胺喋呤，且对于甲胺喋呤无效或不耐受之患者而言为可行之替代物。来氟米特已经表明可减缓放射照相进展。研究已表明其亦可谨慎地与甲胺喋呤组合用于无既有肝脏疾病之患者，只要仔细监测肝功能测试即可。亦已针对牛皮癣性关节炎研究来氟米特，其中展现某种功效。剂量：来氟米特之活性代谢物之半衰期极长。来氟米特及其代谢物具广泛蛋白质结合性且在排泄之前进行进一步代谢。在最初批准时，使用每天100mg之起始剂量并维持三天，接着继而每天20mg来给与药物。由于GI副作用及腹泻之发病率显著，所以大部分专业人员现使用较低剂量维持较短起始时段，或以每天10至20mg开始治疗而无起始剂量。若在20mg剂量下不耐受，则剂量可减少至每天10mg。
肿瘤坏死因子(TNF)抑制剂。发现有大量TNF存在于类风湿性关节中且在关节中由浸润关节滑膜之滑液巨噬细胞及淋巴球局部产生。TNF为一种关键之细胞激素，其因对关节中之多种细胞的活性而介导关节损伤及破坏且介导对其他器官及身体系统之影响。TNF拮抗剂为首先批准用于治疗RA之生物学DMARD且亦已称为生物反应调节剂或「生物制剂」以将其与诸如甲胺喋呤、来氟米特或柳氮磺胺吡啶之其它DMARD相区分。三种TNF拮抗剂批准用于治疗RA且其它药剂正在研究中。此等药物在其减少RA之体征及症状、减缓或停止放射照相损伤及改善功能及生活质量方面的功效为相似的。此等药剂现在亦批准用于治疗其它形式之发炎性关节炎，包括牛皮癣性关节炎、青少年特发性关节炎及僵直性脊椎炎。当前存在三种TNF抑制剂经FDA批准用于治疗RA(按其批准用于RA之次序列出)：依那西普
Figure BDA0000462467460001541
英利昔单抗
Figure BDA0000462467460001542
及阿达木单抗
Figure BDA0000462467460001543
依那西普
Figure BDA0000462467460001544
当以单疗法形式或与甲胺喋呤组合使用时可有效减少RA之体征及症状，以及减缓或停止放射照相损伤。依那西普亦批准用于治疗牛皮癣性关节炎及僵直性脊椎炎以及牛皮癣。依那西普为组合TNF受体之p75形式之两个细胞外结合域与人类IgG1抗体分子之Fc部分的融合蛋白。蛋白质之组分为完全人类组分，且抗依那西普抗体相对罕见。剂量：当前使用之最常见剂量为每周一次藉由皮下注射自行投与50mg。预装药品之注射器及自动注射系统
Figure BDA0000462467460001545
为可得到的。依那西普亦可以25mg剂量使用，以此剂量每周两次投与。未研究间歇或偶尔给药。存在有限之关于每周超过50mg剂量之安全性或功效的信息。依那西普在25mg剂量后之半衰期为70小时。
英利昔单抗
Figure BDA0000462467460001546
与甲胺喋呤组合已批准用于治疗RA，且用于治疗牛皮癣性关节炎及僵直性脊椎炎以及牛皮癣及克罗恩氏病。英利昔单抗为以高亲和力及特异性结合TNF之嵌合单株抗体。抗体之TNF结合位点源自小鼠，英利昔单抗抗体之其余75%源自人类IgG1抗体序列。英利昔单抗作为单疗法可有效减少RA之体征及症状，但可能产生抗英利昔单抗抗体，随后反应之耐久性可能降低。与甲胺喋呤共同治疗可降低此等抗体之频率且因此建议与英利昔单抗一起使用。英利昔单抗与甲胺喋呤之组合在减少疾病之临床表现以及减缓或停止RA疾病之放射照相进展方面极为有效。剂量：英利昔单抗经由静脉内途径投与。输注通常花费2至3时间。所建议之英利昔单抗用于RA之起始剂量为3mg/kg，以静脉内输注形式给与，继而在第2周及第6周另外给药，接着之后每8周一次给药。英利昔单抗应与甲胺喋呤组合给与。若在起始剂量下临床反应不足，则英利昔单抗可逐渐增加至10mg/kg之最大剂量且输注频率增加至每4至6周一次。
阿达木单抗
Figure BDA0000462467460001551
为对TNF具高特异性之完全人类抗-TNF单株抗体。如同其它TNF拮抗剂，其可作为单疗法及与甲胺喋呤组合而有效减少RA之体征及症状且减缓或停止疾病之放射照相进展。其系藉由皮下注射每两周一次投与，但必要时可增加至每周一次投与。阿达木单抗有效用于RA、牛皮癣性关节炎及僵直性脊椎炎以及克罗恩氏病。剂量：阿达木单抗当前可以40mg剂量使用，且藉由自行投与之皮下(SC)注射每隔一周给与一次。预装药品之注射器以及自动注射器系统(Huimira)为可得到的。若对此剂量之反应不足，则注射频率可增加至每周一次。阿达木单抗在标准40mg剂量后之半衰期为约2周(处于10天至20天范围内)。
T细胞共刺激阻断：阿巴西普
Figure BDA0000462467460001553
阿巴西普为称作T细胞共刺激阻断剂之第一类药剂。此等药剂干扰抗原呈现细胞与T淋巴球之间的相互作用且影响类风湿性关节炎中之事件之致病级联之早期阶段。T淋巴球因未知刺激物而活化，但可能涉及抗原呈现细胞表面上在第II类主要组织兼容性复合物分子之情况下呈现之抗原之间的相互作用。T细胞将抗原识别为外来的，且若其接受第二刺激物，则变得具有活性、增殖、移行至发炎部位，且分泌促发炎细胞激素，包括TNF。一种对于T细胞活化重要之第二信号由抗原呈现细胞上存在之分子CD80及CD86以及T细胞表面上之CD28分子介导。剂量：阿巴西普经由静脉内输注在基线时、第2周及第4周投与初始剂量之后每月一次投与。剂量系基于体重，其中<60kg之患者接受500mg，60kg至100kg之患者接受750mg，且>100kg之患者接受1000mg。经约30分钟至1小时之时段投与药物。
B细胞消耗：利妥昔单抗
Figure BDA0000462467460001554
B细胞为在免疫反应中具有多种功能之重要发炎性细胞。其用作抗原呈现细胞，可分泌细胞激素，且分化成抗体形成浆细胞。消耗B细胞已经展示可有效减少RA之体征及症状且减缓放射照相进展。一种B细胞消耗剂利妥昔单抗当前可用于治疗类风湿性关节炎。利妥昔单抗
Figure BDA0000462467460001561
最初研发用于治疗非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin'slymphoma)且多年来已用于治疗此淋巴球及淋巴结恶性病状。对类风湿性关节炎患者之早期研究展示利妥昔单抗可使得循环中之循环B细胞快速及持续消耗，且许多患者得到临床改善。其它临床研究现已表明利妥昔单抗可有效减少其它DMARD疗法无效之RA患者的体征及症状且减缓其放射照相进展。然而，该药剂当前在美国仅批准用于TNF拮抗剂无效之患者。剂量：当前批准之剂量为1000mg，经3至4小时静脉内投与，两次剂量相隔2周给与。患者通常在各次输注时接受静脉内皮质类固醇且接受苯海拉明(diphenhydramine)及乙酰胺苯酚(acetaminophen)之预先给药。再投药之最佳时间尚不明确。一些人主张每6个月一次之固定给药方案，而其它人主张在再治疗之前等待直至患者开始突发为止。评估再给药时程之研究在进行中。B细胞消耗之程度及持续时间未明确地与功效有关。B细胞之正常含量的复原亦未与功效丧失充分相关。
介白素-1(IL-1)为另一与RA发病有关之促发炎细胞激素。IL-1受体拮抗剂(IL1ra)为该细胞激素之内源性阻断剂。支持IL-1ra在活体内之消炎作用的证据由如下观测结果表明：IL-1ra缺乏性小鼠自发地产生类似于类风湿性关节炎之自体免疫疾病以及血管炎。IL1对软骨降解有影响，引起损伤以及抑制修复，且为破骨细胞之有效刺激物，从而引起骨骼侵蚀。一种IL1拮抗剂阿那白滞素
Figure BDA0000462467460001562
当前批准用于治疗RA。其它药剂亦已针对RA加以研究。
阿那白滞素
Figure BDA0000462467460001563
为人类重组IL-1受体拮抗剂(hu rIL-1ra)，其经批准用于治疗RA。阿那白滞素可单独使用或与除TNF阻断剂(依那西普、英利昔单抗、阿达木单抗)以外的DMARD组合使用。阿那白滞素不建议与TNF抑制剂组合使用，因为研究已展示感染有所增加而无迭加临床益处。剂量：阿那白滞素之建议剂量为100毫克/天，由皮下注射每天一次投与。剂量应在每天大致相同时间投与。自动注射系统可用于该药物。
肌肉内金剂可有效治疗类风湿性关节炎。肌肉内金盐直至20世纪90年代为止为最常使用之DMARD药剂，但已由甲胺喋呤及其它DMARD替换为较佳治疗RA之药剂。两种可注射化合物可得(
Figure BDA0000462467460001564
及)。金化合物现在因其许多副作用及监测要求、其有限功效以及极缓慢起始作用时间而很少使用。口服金化合物
Figure BDA0000462467460001571
亦可得到，但其功效甚至比可注射化合物更有限。剂量：金硫基代丁二酸钠(Myochrysine)或硫代葡萄糖金(Solganal)疗法起始于10mg(肌肉内)，接着第二周给与25mg，接着每周一次给与50mg直至出现反应为止或直至给与总共1g为止。若存在有利反应，则将疗法逐渐减少至每2周一次50mg并维持3个月，接着每3周一次并维持3个月且接着最终每月一次维持剂量。在总共1g之后无反应则应考虑治疗无效。应无限期持续每月一次金剂。
其它免疫调节性及细胞毒性剂：最常使用之细胞毒性药物为硫唑嘌呤
Figure BDA0000462467460001572
环孢素A
Figure BDA0000462467460001573
环磷酰胺
Figure BDA0000462467460001574
及d-青霉胺。由于存在高毒性之可能性，所以此等药剂通常用于RA之危急生命之关节外表现症状，诸如全身性血管炎或其它疗法难治之重度关节疾病。
硫唑嘌呤
Figure BDA0000462467460001575
对类风湿性关节炎具有某种活性，但可能需花费8至12周才能看到作用。其为一种嘌呤类似物，其尤其在患有肾机能不全之患者中或当与别嘌呤醇(allopurinol)或ACE抑制剂一起使用时可引起骨髓抑制且降低血球计数(白血球、红血球及血小板)。因硫唑嘌呤引起继发性恶性病之风险增加存在争议。在用硫唑嘌呤开始疗法之前建议针对酶硫代嘌呤甲基转移酶(TPMT)之含量进行筛选。某些个体缺乏此代谢硫唑嘌呤之酶而随之使得该药物之毒性风险增加。副作用包括恶心及脱发。需要对服用硫唑嘌呤之患者进行监测血球计数之血液测试及肝功能测试。
环孢素
Figure BDA0000462467460001576
对类风湿性关节炎具有作为疾病改善性疗法之某种活性。研究已表明环孢素可与甲胺喋呤组合用于RA患者以获得临床反应。其为批准用于预防肾脏及肝脏移植排斥反应之免疫抑制剂且亦对牛皮癣及其它自体免疫疾病具有活性。环孢素藉由抑制介白素-2转录来抑制T细胞功能。主要毒性包括感染及肾机能不全。血压升高为常见的且可能需要治疗。在患者服用环孢素之整个时段内需要仔细监测肾脏功能及血压。许多药物相互作用可能影响环孢素之血液含量且引起较大毒性。药品说明书含有关于此等药物相互作用的重要信息。环孢素增加感染风险且亦可能增加恶性病(包括淋巴瘤)风险。
环磷酰胺
Figure BDA0000462467460001577
为备用于难治类风湿性关节炎之重度状况以及具有诸如血管炎之表现症状者的有效免疫抑制剂。其用于治疗其它自体免疫病状，包括狼疮及血管炎。环磷酰胺为烷基化剂，其具有严重毒性，包括骨髓抑制、出血性膀胱炎、卵巢早衰、感染及继发性恶性病，尤其使膀胱癌之风险增加。在服用此药物的情况下须仔细监测血球计数。
d-青霉胺
Figure BDA0000462467460001581
在历史上具有作为类风湿性关节炎之治疗的某种活性。其主要指定用于不能用其它可用DMARD治疗之患有持续侵袭性疾病的患者。如同金剂，其为具相对毒性之药物，其因可耐受性及功效之问题而具有有限效用，其功效不如其它当前可用药剂一般稳固。主要副作用包括重度皮疹及对肾脏功能之影响。在服用此药物的情况下需要仔细监测肾功能。患者在服用d-青霉胺时可能产生狼疮样疾病或其它自体免疫疾病。
当前处于研发中之其它DMARD化合物亦适用于本发明之治疗方法之组合中，诸如VX-702、奥克丽珠单抗、靶向SYK激酶之化合物(诸如氟斯替尼(R788))及JAK1、JAK2抑制剂(诸如INCB28050、坦组单抗或塔索替尼(CP-690,550))。
DMARD可选自由以下组成之群：霉酚酸吗啉乙酯(mycophenolatemofetil)(CellCept)、钙调神经磷酸酶抑制剂、环孢素、西罗莫司、依维莫司(everolimus)、口服类视黄素、硫唑嘌呤、反丁烯二酸酯、D-青霉胺、环磷酰胺、免疫吸附管柱、Prosorba(r)管柱、金盐、金诺芬、硫代苹果酸钠(硫代苯酸金钠)、羟基氯喹、氯喹、来氟米特、甲胺喋呤(MTX)、二甲胺四环素、柳氮磺胺吡啶(SSZ)、肿瘤坏死因子α(TNFa)阻断剂、依那西普(Enbrel)、英利昔单抗(Remicade)、阿达木单抗(Humira)、塞妥珠单抗(Cimzia)、戈利木单抗(Simponi))、介白素1(IL-1)阻断剂(例如阿那白滞素(Kineret))、针对B细胞之单株抗体、利妥昔单抗(Rituxan))、T细胞共刺激阻断剂、阿巴西普(Orencia)、介白素6(IL-6)阻断剂、托珠单抗(tocilizumab)、罗埃克马(RoActemra)及埃克马(Actemra)。
用抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体治疗
可评估患有RA之患者以评定疾病之存在、阶段、进展或分级。视情况而定，获得生物样品(例如滑液)且评定促发炎介体或活动性炎症之其它标记的存在及/或T细胞(例如CD4+T细胞)之存在。在一个实施例中，侦测自体抗体之存在，例如侦测类风湿因子(RhF)、抗-环状瓜氨酸化肽抗体、抗-ssRNA、抗-dsRNA、抗-Smith、抗-磷脂、抗-核及/或抗-肌动蛋白抗体。在一个实施例中，该等方法包含评定蛋白水解酶、发炎介体、进行性炎症之标记或促发炎细胞激素之含量。在一个实施例中，该等方法包含测定c-反应蛋白(CRP)含量及/或红血球沈降率。确定患者患有RA，或促发炎介体或活动性炎症之其它标记及/或T细胞(例如浸润性T细胞、HLA-cw3及/或cw4阳性T细胞)存在(例如在发炎组织中)，疾病为急性、慢性，经历突发或进展可指示患者可用抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体治疗。
患有RA，且视情况患有活动性炎症及/或确诊或慢性RA及/或经历突发之患者可用抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体治疗。较佳，确诊RA特征为进展超过一年，或进展一年以下但对第一疾病改善性抗风湿药(DMARD)无反应的RA。确诊之RA亦可使用DAS或CAS准则来评定。「RA及相关疾病」系指可能引起或来源于类风湿性关节炎发作或进展的疾病，诸如例如巩膜外层炎、气胸、栓塞及缺血性皮肤溃疡。
本发明之抗体与另一RA治疗(诸如上列者)组合投与。
抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可经由皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑液内、胸骨内、鞘内腔、肝内、病变内及颅内途径注射或输注。在一实施例中，抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体关节内投与，较佳投与炎症部位处。
多发性硬化
多发性硬化症(MS)为一种中枢神经系统(CNS)之慢性发炎疾病，其中脑及脊髓之轴突周围之脂肪髓鞘损伤，引起髓鞘脱失及疤痕以及广泛范围之体征及症状。病生理学原因仍未知，但不同理论归罪于遗传学或感染。亦已提出不同环境风险因素。临床表现与中枢神经系统由免疫胜任细胞浸润有关。针对神经抗原(诸如髓鞘碱性蛋白)之特异性T细胞群体可展现于周边中。几乎任何神经症状看似伴随该疾病，且常进展而导致身体及认知功能障碍。MS以两种形式进展：新症状以各别发病形式出现(复发形式)或随时间推移缓慢积聚(进行性形式)。在各次发病之间，可完全无症状，但尤其随着疾病进展，常出现永久性神经问题。
疾病评估及分级
已描述若干亚型或进展模式。亚型使用既往疾病过程以试图预测未来过程。其不仅对于预后为重要的且对于治疗决策亦为重要的。在1996年，美国国家多发性硬化症学会(United States National Multiple Sclerosis Society)标准化四种亚型定义：复发缓解型、继发进行性、原发进行性及进行性复发型。
复发-缓解亚型特征在于不可预知之复发，继而缓解数月至数年之时段而无新疾病活动体征。此描述80%患有MS之个体的初始过程。继发进行性MS描述约65%患有初始复发-缓解型MS者，其接着开始在急性发作之间有进行性神经衰退而无任何明确的缓解时段。可能看似偶尔复发与较小程度缓解。疾病发作与自复发-缓解型向继发进行性MS转化之间的中值时间为19年。原发进行性亚型描述约10%至15%在其初始MS症状之后从未有所缓解之个体。其特征在于功能障碍自发作不断进展而无或仅偶尔及较小程度缓解及改善。原发进行性亚型之发病年龄晚于复发-缓解型，但类似于复发-缓解型与继发进行性亚型之间进展的平均年龄。在两种状况下，其约为40岁。进行性复发型MS描述自发病开始有稳定神经衰退且亦遭受显然重迭发病之个体。此为所有亚型中最不常见之亚型。多发性硬化症因进行性神经衰退或因急性发作或因两者之组合而进展，视MS类型而定。MS之症状包括：疲劳、视觉问题(诸如模糊或双视)、麻刺感、麻木或烧灼感、肌肉虚弱、僵硬、震颤及痉挛、步行及步态问题、膀胱及肠功能障碍、性功能障碍、认知及记忆力问题、吞咽及言语问题、疼痛或抑郁症。彼等症状在发病期间恶化，而患者之一般状况衰退。具有非标准特性之MS的典型变体已经描述；此等包括德维克氏病、巴娄同心圆硬化、希尔逗氏弥漫性硬化症(Schilder's diffuse sclerosis)及马堡多发性硬化症(Marburg multiple sclerosis)。
可使用不同准则确诊多发性硬化症诊断。在历史上，广泛使用Schumacher及Poser准则。当前，由美国国家多发性硬化症学会(NMSS)使用IMR影像确立之McDonald准则趋于替代先前准则。(McDonald WI,CompstonA,Edan G等人,(2001),Ann.Neurol.50(1):121-7)。
当前治疗可选方案
对于患者及医师在治疗多发性硬化症方面存在许多问题需要考虑。目标可包括：改善自发病恢复之速度(例如用类固醇药物治疗)；减少发病次数或MRI病变数；试图减缓疾病进展(用疾病改善性药物或DMD治疗)，一个额外目标为减轻因受影响器官之功能丧失所致之并发症。
大部分神经病学家将考虑在确定复发-缓解型多发性硬化症之诊断后用DMD治疗。许多人在首次多发性硬化症发病时开始治疗，因为临床试验已表明延迟治疗之患者所得的之益处不如早期治疗之患者。
患者接受免疫抑制疗法，包括硫唑嘌呤及皮质类固醇，以限制发炎过程之程度。然而，多发性硬化症之免疫抑制疗法仅部分有效，且在大多数状况下，虽然进行消炎及免疫抑制治疗，但仅提供疾病进展之延迟。当前用于MS之疾病改善性治疗尤其为：IFNβ-1a(
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)、
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)、乙酸格拉替美(glatirameracetate)
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(其为一种非干扰素、非类固醇免疫调节剂)、米托蒽醌、免疫抑制剂、那他珠单抗(natalizumab)
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芬戈莫德(fingolimod)
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多种治疗在研究中。涌现之在2期试验中已展示希望之用于RRMS之药剂包括阿来组单抗(alemtuzumab)
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达利珠单抗(daclizumab)利妥昔单抗、德芮寇德(dirucotide)、BHT-3009、克拉曲滨(cladribine)、反丁烯二酸二甲酯、雌三醇、芬戈莫德(fingolimod)、拉喹莫德(laquinimod)、二甲胺四环素、他汀(statin)、西罗莫司脂化物(temsirolimus)及特立氟胺(teriflunomide)。
用抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体治疗
视情况而定，在第一步骤中，可评估患者之疾病。接着以适当方式用抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体治疗患者。可评估患有MS之患者以评定疾病之存在、阶段、进展或分级。在一个有利态样中，确定患有活动性炎症及/或确诊或慢性MS及/或经历突发之患者可用抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体治疗。较佳，确诊之MS特征在于有进行性神经衰退(诸如继发进行性、原发进行性或进行复发型疾病)之MS，或者，「确诊之MS」系指已进展超过一年，或已进展一年以下但对第一线治疗无反应的MS。较佳，突发视情况定义为与多发性硬化症有关之症状恶化；该突发引起患者一般状况衰退。本发明之另一态样提供能够治疗确诊MS或减少或中止MS发病，从而引起患者健康及舒适感改善的组合物。
在一个实施例中，本发明之抗体与另一MS治疗(诸如上列者)组合投与。
抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可经由皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑液内、胸骨内、鞘内腔、肝内、病变内及颅内途径注射或输注。
慢性发炎肠病(CIDI)-克罗恩氏病-直肠结肠炎
慢性发炎肠病为影响胃肠道之一系列疾病。最常见CIDI为溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、发炎性肠病、局部回肠炎、直肠结肠炎及肉芽肿性回肠结肠炎。
疾病评估及分级
诊断测试包括：非侵入性实验室测试(贫血及感染、筛选肝脏及胆管问题之肝功能测试及排除细菌性、病毒及寄生物感染之大便研究)、内窥镜检查、内窥镜超音波(EUS)、胶囊内窥镜检查、放射学，诸如多相CT肠动描记法、MR肠动描记法(MRE)。
慢性发炎肠病相当难于评分。在直肠结肠炎中，结肠镜可提供对结肠中之创口的相当完全概述，但在克罗恩氏病中，由于伤口可能看似处于食道至直肠之任何处，所以获得对患者之评估难得多。一种评分系统已经设立以评估克罗恩氏病：克罗恩氏病活动指数(CDAI，关于评述参见Sandborn WJ等人,Gastroenterology2002;112:512)。得分处于0至600分范围内。低于150分，患者评为「极好」。介于150分与219分之间，疾病具轻度活动性，介于220与449分之间，疾病具中等活动性。高于450分，疾病评为极重度。然而，该得分可能具患者依赖性且新近，另一评分系统(克罗恩氏病消化道损伤得分(CD3S)或Lémann得分)已经确立以经由较准确之科学值对患者疾病进行评分，诸如由断层密度量测术(tomodensitometry)确定之得分。(Pariente B.等人,Development of the Crohn's Disease Digestive Damage score,the Lémann scoreInnflamm Bowel Dis2010年;11月28日)。
克罗恩氏病进展而出现危象，亦称为突发。突发可为轻度或重度，短暂或长期。该等突发或发病可能与超过150分、超过219分、超过449分之CDAI得分有关。重度突发可能引起强烈疼痛、脱水及失血。复发性炎症趋于出现于肠之相同区域，但其在手术去除患病段之后可能波及邻接区。当克罗恩氏病引起胃肠道症状突发时，人员亦可能遭受关节炎症(关节炎)、眼白炎症(巩膜外层炎)、口疮(口疮性口炎)、手臂及腿上之发炎皮肤结节(结节性红斑)及含脓之蓝红色皮肤疮(坏疽性脓皮病)。即使在克罗恩氏病不引起胃肠道症状突发时，人员仍可能遭受坏疽性脓皮病，同时脊椎炎症(僵直性脊椎炎)、骨盆关节炎症(骶髂关节炎)、眼睛内部炎症(葡萄膜炎)或胆管炎症(原发性硬化性胆管炎)易于出现而与肠病之临床活动度完全无关。
当前治疗可选方案
当前治疗可选方案限于控制症状、维持缓解及预防复发。克罗恩氏病之治疗涉及首先治疗疾病之急性症状，接着维持缓解。治疗最初涉及使用消除感染之药物(一般为抗生素)及减轻炎症之药物(一般为胺基水杨酸盐消炎药及皮质类固醇)。诸如梗阻或脓肿之并发症或在疾病在相当长时间内对药物无反应的情况下可能需要手术。
胺基水杨酸盐消炎药：美色拉嗪(Mesalazine)或美色拉明(mesalamine)(LialdaTM、AsacolTM、PentasaTM、SalofalkTM、DipentumTM及RowasaTM)、柳氮磺胺吡啶，其由肠道细菌转化成5-ASA及磺胺吡啶。磺胺吡啶对类风湿性关节炎可能具有某种治疗作用。然而，磺胺吡啶组分常因高副作用型态而为治疗克罗恩氏病之限制因素。5-ASA化合物已经展示适用于治疗轻度至中度克罗恩氏病。其通常尤其因其相较于皮质类固醇较低之副作用型态而被视为用于回肠及结肠右侧之疾病的第一线疗法。
皮质类固醇消炎药：类固醇灌肠剂可用于治疗直肠疾病症状。皮质类固醇为主要用于治疗中度至重度克罗恩氏病突发或发病之一类消炎药。其因具有副作用较小之有效治疗的可实现性而可较节制地使用。最常开立之口服类固醇为强的松，其通常以0.5mg/kg给药以诱导缓解。静脉内类固醇用于口服类固醇难治之状况，或不能服用口服类固醇之状况。由于皮质类固醇降低对抗感染之能力，所以在开始类固醇之前须注意确保不存在活动性感染，尤其腹腔内脓肿。布地奈德(budesonide)为吸收有限且首次通过代谢度高(意谓较少量类固醇进入血流)之口服皮质类固醇。其已经展示适用于治疗轻度至中度克罗恩氏病且维持克罗恩氏病缓解。调配成
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之布地奈德在回肠及右结肠中释放，且因此针对彼区域中之疾病具有表面作用。布地奈德在与抗生素组合使用时亦适用于活动性克罗恩氏病。
巯基嘌呤免疫抑制性药物：此处以锭剂形式展示之硫唑嘌呤为第一线类固醇减量(steroid-sparing)免疫抑制剂。硫唑嘌呤及6-巯基嘌呤(6-MP)为最常用于克罗恩氏病之维持疗法的免疫抑制剂。其为嘌呤抗代谢物，意谓其干扰发炎细胞所需之嘌呤合成。其具有数月之作用持续时间，使得难使用其诱导缓解。两种药物以1.5至2.5mg/kg给药，文献支持使用较高剂量。硫唑嘌呤及6-MP已经发现适用于以下适应症：依赖于类固醇之人员的维持疗法、瘘管性疾病、诱导类固醇难治疾病缓解、维持克罗恩氏病在手术后缓解。然而，硫唑嘌呤为特别危险之药物，其引起大量潜在致命感染之可能性较大，且亦由FDA列为人类致癌剂。
以
Figure BDA0000462467460001632
出售之英利昔单抗为靶向肿瘤坏死因子(发炎反应中之一种细胞激素)的小鼠-人类嵌合抗体。其为抑制促发炎细胞激素肿瘤坏死因子α之单株抗体。其经静脉内投与且以每公斤体重5mg开始给药且根据疾病特征不断增加。英利昔单抗已发现有如下效用：维持克罗恩氏病患者缓解；诱使克罗恩氏病患者缓解；维持瘘管性克罗恩氏病；英利昔单抗之副作用如同TNF类别之其它免疫抑制剂一般可为严重的且可能致命，且英利昔单抗在标签上带有FDA黑盒警告。所列之副作用包括过敏性及过敏反应、结核病、血清病再活动之风险以及多发性硬化症之风险。
以HumiraTM出售之阿达木单抗如同英利昔单抗为靶向肿瘤坏死因子之抗体。阿达木单抗已显示减少对习知治疗反应不佳以及对英利昔单抗丧失反应或不能耐受英利昔单抗之成人的中度至重度克罗恩氏病(CD)之体征及症状，且批准用于治疗中度至重度克罗恩氏病。
以出售之那他珠单抗为抗整合素单株抗体，其已展示作为中度至重度克罗恩氏病之诱导及维持治疗的效用。那他珠单抗对于对阻断肿瘤坏死因子-α之药物(诸如英利昔单抗)无反应之患者可为适当的。
用抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体治疗
本发明之一个态样提供能够治疗克罗恩氏病，视情况治疗确诊之克罗恩氏病的组合物。在本发明中，「确诊之克罗恩氏病」系指已在超过一年内诊断出有克罗恩氏病。
本发明之另一态样提供一种减少或中止克罗恩氏病发病，从而引起患者健康及舒适感改善之治疗方法。疾病发病可能指CDAI得分超过150分、超过219分、超过449分之患者。因此，本发明亦提供治疗患有慢性发炎肠病之患者的方法，其包含以下步骤：评定该患者是否正经历突发或发病，及若该患者正经历发病，则用有效量之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体治疗该患者。
本发明之另一态样提供预防性治疗患有克罗恩氏病之患者，从而避免突发之方法。
在一实施例中，本发明之抗体与另一克罗恩氏病治疗(诸如上列者)组合投与。
红斑狼疮
存在四种主要类型之狼疮-全身性红斑狼疮、盘状红斑狼疮、药物诱发之红斑狼疮及新生儿红斑狼疮。其中，全身性红斑狼疮为最常见且严重形式之狼疮。
盘状红斑狼疮(DLE)为一种慢性皮肤疮病状，其中炎症及疤痕偏向脸、耳部及头皮，且有时处于其它身体区域上。此等病变以具有鳞屑及硬壳外形之红色发炎斑块形式产生。中心区域的颜色看似较浅，边缘比正常皮肤深。
药物诱发之红斑狼疮(DIL或DILE)为由长期使用某些药物所引起之自体免疫病症。此等药物引起产生类似于SLE之症状的自身免疫反应。已知存在38种药物会引起DIL，但有三种药物被报导有最多数目之病例：肼苯哒嗪(hydralazine)、普鲁卡因酰胺(procainamide)及异烟肼(isoniazid)。虽然诊断DIL之准则尚未完全确立，但DIL之症状通常以肌痛及关节痛形式呈现。一般而言，在中止使用药物后症状消退。
新生儿红斑狼疮出现于婴儿，最常出现于女孩，由携带Ro/SSA抗体之母亲所生。婴儿在出生时无皮肤病变，但在生命第一周期间产生皮肤病变。
全身性红斑狼疮为可能影响身体任何部分之慢性全身性自体免疫疾病。随着在其它自体免疫疾病中出现，免疫系统侵袭身体细胞及组织，引起炎症及组织损伤。SLE最常危害心脏、关节、皮肤、肺、血管、肝脏、肾及神经系统。疾病过程不可预知，疾病(突发)时段与缓解交替。疾病在女性中之发病率更经常为男性的九倍，尤其对于年龄15至35之育龄期女性，且亦在非欧洲血统者中较常见。SLE可经由主要用环磷酰胺、皮质类固醇及免疫抑制剂针对其症状来治疗；当前不存在治愈例子。SLE可为致命的，虽然随着新近医药发展，死亡率逐渐变得日益罕见。SLE系视作不可治愈的，但高度可治疗。在20世纪50年代，大多数经诊断患有SLE之人活不到五年。诊断及治疗方面之发展使得存活率改善达以下程度：现在90%以上存活期超过十年，且许多人可相对无症状地活着。
疾病评估及分级
类固醇应以最低剂量使用最短可能的时段以降低心血管问题之可能性，且只要有可能应使用可减少症状之其它药物。高血清肌酸酐、高血压、肾病症候群、贫血及低清蛋白血为不良预后因素。ANA为用于评估之最灵敏的筛选测试，而抗-Sm(抗-Smith)最具特异性。dsDNA抗体亦相当具特异性且常随疾病活动度波动；因而，dsDNA力价有时可用于监测疾病突发或治疗反应。
某些医师基于美国风湿病学院(ACR)分类准则作出诊断。然而，该等准则经确立而主要用于科学研究，包括用于需要较高信赖度之随机化对照试验，因此有些患有SLE之人可能不通过全部准则。
美国风湿病学院在1982年确立11条准则，在1997年修订为分类工具以在临床试验中实施SLE之定义。为鉴别患者以供临床研究之用的目的，若在两个各别时刻同时或连续存在11种症状中之任何4种症状，则人员患有SLE：浆膜炎：胸膜炎或心包炎、口腔溃疡、关节炎：两个或两个以上周边关节之非侵蚀性关节炎，有压痛、肿胀或渗出、光敏感性、血液(血液学病症、溶血性贫血(低红血球计数)或白血球减少症(白血球计数<4000个/微升)，淋巴球减少症(<1500个/微升)或血小板减少症(<100000个/微升)，不存在损伤性药物；肾脏病症；抗核抗体测试阳性；免疫学病症：阳性抗-Smith、抗-ds DNA、抗磷脂抗体及/或假阳性梅毒血清学测试；在70%病例中存在抗-ss DNA；神经病症：癫痫发作或精神病、颊皮疹、盘状皮疹。
当前治疗可选方案
SLE之治疗涉及预防突发及降低其严重度及减少其出现时之持续时间。治疗可包括皮质类固醇及抗疟药。某些类型之狼疮肾炎(诸如弥漫性增殖性丝球体肾炎)需要多番细胞毒性药物。此等药物包括环磷酰胺及霉酚酸酯。
疾病改善性抗风湿药(DMARD)预防性用于降低突发发生率、减缓疾病过程且降低类固醇使用之需要；在出现突发时，其可用皮质类固醇治疗。通常使用之DMARD为抗疟药，诸如必赖克瘘(plaquenil)，及免疫抑制剂(例如甲胺喋呤及硫唑嘌呤)。羟基氯喹(HCQ)为在1955年经FDA批准用于狼疮之最后一种药物。抗-BlyS抗体(
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Human Genomce Science,Inc.)亦可用作DMARD。羟基氯喹为一种用于组成性、皮肤及关节表现之抗疟剂。羟基氯喹副作用相对少，且有证据说明其改善患有SLE之人的存活率。环磷酰胺用于重度丝球体肾炎或其它器官损伤并发症。某些被批准用于其它疾病之药物以『仿单核准适应症外』的方式用于SLE；免疫抑制药物亦用于控制该疾病且防止症状反复(称作突发)。视剂量而定，需要类固醇之人可能显现库欣氏症候群，其副作用可包括肥胖、浮肿圆脸、糖尿病、大食欲、睡眠困难及骨质疏松。若且在降低较大初始剂量时，彼等副作用可减退，但长期使用更低剂量会引起血压升高及白内障。许多新免疫抑制药物正有关治疗SLE被积极地测试。不同于如皮质类固醇所显示般非特异性抑制免疫系统，其靶向个体免疫细胞之反应；若非处方药(主要为非类固醇消炎药)未提供有效缓解，则可使用诸如吲哚美辛及双氯芬酸之镇痛剂。通常用处方药治疗疼痛。归因于多种症状及器官系统受SLE累及，其在个体中之严重度须被评定以成功地治疗SLE。轻度或缓解性疾病有时可安全地保持不进行治疗。
用抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体治疗
抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可用于治疗狼疮，包括(但不限于)确诊之狼疮，或减少或中止狼疮突发，从而引起患者健康及舒适度改善。「确诊之狼疮」系指已进展超过一年或已经诊断出超过一年的狼疮疾病。在一个实施例中，本发明之抗体与另一狼疮治疗(诸如上列者)组合投与。
其它自体免疫及发炎病症
抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可用于治疗适合之自体免疫及发炎病症，较佳为涉及T细胞之病症。自体免疫及发炎疾病可为(但不限于)：胃酸缺乏、自体免疫活动性慢性肝炎、急性播散性脑脊髓炎、急性出血性白质脑炎、艾迪森氏病、无γ球蛋白血症、斑形脱发、肌萎缩性侧索硬化、僵直性脊椎炎、抗-GBM/TBM肾炎、抗磷脂症候群、抗合成酶症候群、关节炎、异位性过敏、异位性皮炎、自体免疫再生不能性贫血、自体免疫心肌病、自体免疫溶血性贫血、自体免疫肝炎、自体免疫内耳疾病、自体免疫淋巴组织增生症候群、自体免疫周边神经病、自体免疫胰脏炎、自体免疫多内分泌腺症候群、未知或多发性自体免疫孕酮皮炎、自体免疫血小板减少性紫癜、自体免疫葡萄膜炎、巴娄病/巴娄同心圆硬化、白塞氏症候群、伯格氏病、毕氏脑炎(Bickerstaff's encephalitis)、布劳症候群(Blau syndrome)、大疱性类天疱疮、卡斯曼氏症候群、恰加斯氏病、慢性疲劳免疫功能障碍症候群、慢性发炎髓鞘脱失多神经病、慢性复发性多灶骨髓炎、慢性莱姆病、慢性阻塞性肺病、彻奇-斯全司症候群、瘢痕性类天疱疮、腹腔病、柯刚氏症侯群、冷凝集素病、补体组分2缺乏症、颅动脉炎、CREST症候群、克罗恩氏病(两类特发性发炎性肠病「IBD」中之一者)、库欣氏症候群、皮肤白血球破碎性血管炎、德氏病(Dego's disease)、德尔肯氏病(Dercum's disease)、疱疹样皮炎、皮肌炎、第1型糖尿病、弥漫性皮肤全身性硬化、卓斯勒症候群、盘状红斑狼疮、湿疹、子宫内膜异位症、肌腱端炎相关关节炎、嗜伊红血球性筋膜炎、后天性大疱性表皮松解、结节性红斑、原发性混合型冷球蛋白血症、伊文氏症候群、进行性骨化性纤维发育不良、肌肉纤维疼痛、纤维肌炎、纤维化肺泡炎、胃炎、胃肠类天疱疮、巨细胞性动脉炎、丝球体肾炎、古德帕斯彻氏症候群、格雷夫斯氏病、古立安-白瑞症候群(GBS)、桥本氏脑炎、桥本氏甲状腺炎、溶血性贫血、亨-舍二氏紫癜、妊娠疱疹、化脓性汗腺炎、休斯氏症候群(Hughes syndrome)、低γ球蛋白血症、特发性发炎性髓鞘脱失疾病、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜、IgA肾病、包涵体肌炎、发炎性髓鞘脱失多神经病、间质性膀胱炎、大肠急躁症候群(IBS)、青少年特发性关节炎、青少年类风湿性关节炎、川崎氏病、蓝伯-伊顿肌无力症候群、白血球破碎性血管炎、扁平苔癣、硬化性苔癣、线性IgA病(LAD)、葛雷克氏病、类狼疮性肝炎、红斑狼疮、马氏症候群(Majeed syndrome)、梅尼埃病(Ménière's disease)、显微性多血管炎、米勒-费雪氏症候群(Miller-Fishersyndrome)、混合型结缔组织病、硬斑病、穆-哈二氏病、马克尔-维尔斯症候群(Muckle-Wells syndrome)、多发性骨髓瘤、多发性硬化症、重症肌无力、肌炎、发作性睡病、视神经脊髓炎、神经性肌强直、眼睛瘢痕性类天疱疮、眼阵挛肌阵挛症候群、Ord甲状腺炎、复发性风湿病、PANDAS(与链球菌有关之儿童自体免疫神经精神病症)、肿瘤相关小脑退化、阵发性夜间血红素尿(PNH)、帕-罗二氏症候群、帕-特二氏症候群、睫状体平坦部炎、天疱疮、寻常天疱疮、恶性贫血、静脉周边性脑脊髓炎、POEMS症候群、结节性多动脉炎、风湿性多肌痛、多发性肌炎、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、进行性发炎性神经病、牛皮癣、牛皮癣性关节炎、坏疽性脓皮病、纯红血球再生不良、罗氏脑炎、雷诺氏现象、复发性多软骨炎、莱特尔氏症候群、腿不宁征候群、腹膜后纤维化、类风湿性关节炎、类风湿性发热、类肉瘤病、精神分裂症、施密特症候群、施尼茨勒症候群(Schnitzler syndrome)、巩膜炎、硬皮病、休格连氏症候群、脊椎关节病、黏性血液症候群、斯蒂尔氏病(Still's Disease)、僵人症候群、亚急性细菌性心内膜炎(SBE)、苏萨克氏症候群、思维特症候群(Sweet syndrome)、席登罕氏舞蹈症、交感神经性眼炎、高安氏动脉炎、颞动脉炎、托-享二氏症候群、横贯性脊髓炎、溃疡性结肠炎、未分化型结缔组织病、未分化型脊椎关节病、血管炎、白斑病、韦格纳氏肉芽肿病、威尔逊氏症候群及维斯科特-奥尔德里奇症候群。
抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体之给药及给药方案
在一个态样中，本发明提供之治疗方法包含投与个体包含治疗有效量之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体之组合物。治疗有效量可为例如约0.0003mg(抗体)/kg(患者体重)至约3mg/kg之剂量(例如约0.003mg/kg至约3mg/kg，诸如约0.015mg/kg至约3mg/kg，例如约0.075mg/kg至约3mg/kg、约0.3mg/kg至约3mg/kg及约1mg/kg至约3mg/kg中之任一者，或约0.0003mg/kg、约0.003mg/kg、约0.015mg/kg、约0.075mg/kg、约0.3mg/kg、约1mg/kg及约3mg/kg中之任一者)。抗-KIR抗体之剂量及调配物系描述于WO2008/084106中，该申请案之揭示内容以引用方式并入本文中。在一个实施例中，该方法包含例如以每天3次至每2个月一次之范围内的给药频率重复投药至少一次。亦可投与剂量例如至少3次、至少6次或至少10次。在一个实施例中，静脉内投与抗体。在另一实施例中，抗体结合至NK细胞表面上之抑制性KIR可增强NK细胞之细胞毒性活性。在另一实施例中，抗体为交叉反应性抗-KIR抗体。举例而言，抗体可为如WO2008/084106中所述的调配物中之抗体1-7F9。
在一个较佳实施例中，剂量经选择以在人类患者体内提供完全饱和作用(所靶向之KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3之至少90%占有率)。该方法视情况包括评估患者之NK细胞增强及/或抗发炎(或抗T细胞)活性(其可藉由使用任何适合技术进行，其中若干技术在此项技术中已知，包括例如KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3占有度、CD107a标记，如本文所述)。通常藉由经合适时间(诸如约1小时)静脉内投药来投与调配物。
举例而言，可以一定剂量及一定给药频率投与抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体以在血浆内达成NK细胞上至少约90%、较佳至少约95%KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3占有率达至少约一个月、两个月、三个月或六个月，从而使饱和持续一段延长之时段(例如至少3个月、6个月)。在各别实施例中，剂量处于约0.1mg/kg至约3mg/kg、约0.3mg/kg至约3mg/kg、约0.1mg/kg至约1mg/kg及约1mg/kg至约3mg/kg之范围内，进一步较佳其中该抗体为抗-KIR抗体，进一步较佳其中抗体为1-7F9。给药频率可处于每天一次至每2个月一次、约每周一次至约每2个月一次之范围内；或可为约每月一次。或者，给药频率可选自每天约三次、约两次及约一次；每周约五次、约四次、约三次及约二次；及约每两周、每四周及每六周一次。
在一个较佳实施例中，约每周2次至约每月一次、或约每月一次至约每2个月一次投与使得受体实质上完全饱和(例如至少约90%或95%受体占有率)之剂量的抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。剂量可例如投与至少3次、至少6次或6次以上。举例而言，该方法可包含以一定剂量及一定给药频率投与抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体以达成NK细胞上至少约90%或95%KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3占有率达至少约2周、1个月、6个月、9个月或12个月。
在一个较佳实施例中，方案引起持续性实质上完全的受体饱和。投与使得受体实质上完全饱和达至少约1周、2周或1个月之时间之剂量的抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。当剂量使得受体实质上完全饱和(例如至少约90%或95%受体占有率)达约一周时，可例如每周一次至每两周一次投与该剂量；当剂量使得受体实质上完全饱和达约两周时，可例如每两周一次至每月一次投与该剂量。当剂量使得受体实质上完全饱和达约两周至约一个月时，可例如约每月一次投与该剂量。在各方案中，剂量可例如投与至少3次、至少6次或6次以上。举例而言，该方法可包含以一定剂量及一定给药频率投与抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体以达成NK细胞上至少约95%KIR占有率达至少约6个月、9个月或12个月。
在另一较佳实施例中，方案引起间歇性实质上完全的受体饱和。投与使得受体实质上完全饱和(例如至少约90%或95%受体占有率)达至少约1周、2周或1个月之时间之剂量的抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。当剂量使得受体实质上完全饱和约一周至两周时，可例如约每月一次或每至少两个月之时间一次(例如每两个月一次)投与该剂量。当剂量使得受体实质上完全饱和约两周至约一个月时，可例如约每至少两个月之时间一次(例如每两个月一次)投与该剂量。在各别实施例中，剂量处于约0.1mg/kg至约0.3mg/kg范围内，约每月一次投与；在一个实施例中，剂量处于约0.1mg/kg至约3mg/kg之范围内，较佳处于1mg/kg至约3mg/kg之范围内，约每约两个月一次(或每两个月以上之时间一次，即每两个月之时间少于一次)投与，进一步较佳其中该抗体为抗-KIR抗体，进一步较佳其中该抗体为1-7F9。可重复治疗，以使治疗方案引起间歇性实质上完全的受体饱和达至少6个月、9个月或12个月之时间。
虽然通常经静脉内投与抗体，但其它适合投药方式为已知的且亦描述于例如WO2008/084106中。
虽然抗-KIR抗体(1-7F9)或其S241P变异体为用于调节NK细胞活性及/或治疗疾病之较佳抗体，但其它抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3及抗-KIR抗体亦可用于本发明方法中。然而，该等抗体应与抗-KIR抗体(1-7F9)具有相似之Kd值，在患者体内具有相似清除率，且具有相似之分布体积，其中「相似」意谓在相应抗-KIR抗体(1-7F9)参数之约50%以内，较佳约30%以内。抗-KIR抗体(1-7F9)在达0.015mg/kg之剂量下具有约4ng/ml之高亲和力Kd且具有约20ng/ml之低亲和力Kd；其清除率为约0.5ml/h/kg，且分布体积为约115ml/kg(参见WO2008/084106)。适用于一或多种本发明方法中之例示性抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体可具有以下特性：(a)减少或阻断NK细胞上之抑制性KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3之信号传导；(b)高亲和力Kd为约2ng/ml至约6ng/ml；(c)低亲和力Kd为约10ng/ml至约30ng/ml；(d)清除率为约0.25ml/h/kg至约0.75ml/h/kg；(e)分布体积为约50ml/kg至约175ml/kg。抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体之受体占有率可使用如本发明中所述适于由抗体结合之特定KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3的分析法来测定。参见例如实例2。抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体之药物动力学特性可使用如本发明中所述适于特定抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体的分析法来测定。参见例如实例1。
自体免疫疾病
本文所述之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体可用于治疗自体免疫疾病之组合物、用途及方法中。
自体免疫疾病或病症之实例包括(但不限于)后天免疫缺乏症候群(AIDS)、后天脾萎缩、急性前葡萄膜炎、急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、急性痛风性关节炎、急性坏死性出血性脑白质炎、急性或慢性窦炎、急性化脓性脑膜炎(或其它中枢神经系统发炎病症)、急性严重炎症、艾迪森氏病、肾上腺炎、成人发作型糖尿病(第II型糖尿病)、成人发作型特发性副甲状腺低能症(AOIH)、无γ球蛋白血症、颗粒球缺乏症、血管炎病(包括血管炎(包括大血管血管炎(包括风湿性多肌痛及巨细胞性(高安氏)关节炎))、过敏病状、过敏性接触性皮炎、过敏性皮炎、过敏性肉芽肿性血管炎、过敏病症、过敏性神经炎、过敏反应、斑形脱发、全秃、阿尔波特氏症候群、肺泡炎(例如过敏性肺泡炎及纤维化肺泡炎)、阿兹海默氏病、淀粉样变性、肌萎缩性侧索硬化(ALS；葛雷克氏病)、嗜伊红血球相关病症(例如嗜伊红血球增多)、全身性过敏反应、僵直性脊椎炎、血管扩张、抗体介导之肾炎、抗-GBM/抗-TBM肾炎、抗原-抗体复合物介导之疾病、抗丝球体基底膜病、抗-磷脂抗体症候群、抗磷脂症候群(APS)、口疮、口疮性口炎、再生不能性贫血、心律不整、动脉硬化、动脉硬化病症、关节炎(例如类风湿性关节炎，诸如急性关节炎、慢性类风湿性关节炎)、慢性渐进性关节炎、变形性关节炎、蛔虫病、曲霉肿(或含有嗜伊红血球之肉芽肿)、曲菌病、无精液症、哮喘(例如支气管哮喘及自体免疫哮喘)、共济失调毛细管扩张症、共济失调硬化、动脉粥样硬化、自闭症、自体免疫血管性水肿、自体免疫再生不能性贫血、自体免疫萎缩性胃炎、自体免疫糖尿病、睾丸及卵巢之自体免疫疾病(包括自体免疫睾丸炎及卵巢炎)、与胶原病有关之自体免疫病症、自体免疫自主神经障碍、自体免疫耳部疾病(例如自体免疫内耳疾病(AGED))、自体免疫内分泌疾病(包括甲状腺炎，诸如自体免疫甲状腺炎)、自体免疫肠病症候群、自体免疫性腺衰竭、自体免疫听力丧失、自体免疫溶血、自体免疫肝炎、自体免疫肝脏病症、自体免疫高脂质血症、自体免疫免疫缺乏症、自体免疫内耳疾病(AIED)、自体免疫心肌炎、自体免疫嗜中性球减少症、自体免疫胰脏炎、自体免疫多内分泌病、第I型自体免疫多腺体症候群、自体免疫视网膜病、自体免疫血小板减少性紫癜(ATP)、自体免疫甲状腺病、自体免疫荨麻疹、自体免疫介导之胃肠疾病、轴突及神经元神经病、巴娄病、白塞氏病、良性家族性及缺血再灌注损伤、良性淋巴球性血管炎、伯格氏病(IgA肾病)、养鸟者肺、失明、伯克氏病、阻塞性细支气管炎(非移植)伴有NSIP、支气管炎、支气管肺炎曲菌病、布鲁顿氏症候群、大疱性类天疱疮、卡普兰氏症候群、心肌病、心血管缺血、卡斯曼氏症候群、乳糜泻、脂肪便症(麸质性肠病)、小脑退化、大脑缺血及伴有血管形成之疾病、恰加斯氏病、通道病(例如癫痫症)、CNS通道病、脉络膜视网膜炎、脉络膜炎、自体免疫血液学病症、慢性活动性肝炎或自体免疫慢性活动性肝炎、慢性接触性皮炎、慢性嗜伊红血球肺炎、慢性疲劳症候群、慢性肝炎、慢性过敏性肺炎、慢性发炎性关节炎、慢性发炎性髓鞘脱失多神经病(CIDP)、慢性难治炎症、慢性黏膜与皮肤性念珠菌病、慢性神经病(例如IgM多神经病或IgM介导之神经病)、慢性阻塞性气管疾病、慢性肺部发炎疾病、慢性复发性多灶性骨髓炎(CRMO)、慢性甲状腺炎(桥本氏甲状腺炎)或亚急性甲状腺炎、彻奇-斯全司症候群、瘢痕性类天疱疮/良性黏膜类天疱疮、CNS发炎病症、CNS血管炎、腹腔病、柯刚氏症侯群、冷凝集素病、息肉状结肠炎、结肠炎(诸如溃疡性结肠炎、胶原性结肠炎)、涉及T细胞浸润及慢性发炎反应之病状、先天性心脏传导阻滞、先天性风疹感染、库姆氏阳性贫血、冠状动脉疾病、科沙奇病毒性心肌炎、CREST症候群(钙质沉着、雷诺氏现象)、克罗恩氏病、冷球蛋白血症、库欣氏症候群、睫状体炎(例如慢性睫状体炎、异时性睫状体炎、虹膜睫状体炎或福斯氏睫状体炎)、囊肿性纤维化、细胞激素诱发之毒性、聋症、退化性关节炎、髓鞘脱失疾病(例如自体免疫髓鞘脱失疾病)、髓鞘脱失神经病、登革热、疱疹样皮炎及异位性皮炎、皮炎(包括接触性皮炎)、皮肌炎、具有急性发炎组分之皮肤病、德维克氏病(视神经脊髓炎)、糖尿病性大动脉病症、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、戴-布二氏贫血、弥漫性间质性肺纤维化、扩张型心肌病、盘状狼疮、涉及白血球渗出之疾病、卓斯勒症候群、杜普伊特伦氏挛缩、埃可病毒感染、湿疹(包括过敏性或异位性湿疹)、脑炎(诸如罗氏脑炎及边缘叶及/或脑干脑炎)、脑脊髓炎(例如过敏性脑脊髓炎及实验性过敏性脑脊髓炎(EAE))、动脉内膜增生、心内膜炎、内分泌性眼病、子宫内膜异位症、心内膜心肌纤维化、晶状体过敏性眼内炎、眼内炎、过敏性肠炎、嗜伊红血球增多-肌痛症候群、嗜伊红血球性筋膜炎、流行性角膜结膜炎、后天性大疱性表皮松懈(EBA)、巩膜外层、巩膜外层炎、埃-巴二氏病毒感染、持久性隆起性红斑、多形红斑、麻风结节性红斑、结节性红斑、胎儿红血球母细胞增多症、食道运动功能障碍、原发性混合型冷球蛋白血症、筛骨、伊文氏症候群、实验性过敏性脑脊髓炎(EAE)、因子VIII缺乏症、农民肺、风湿热、费尔提氏症候群、肌肉纤维疼痛、纤维化肺泡炎、丝虫病、局部区段性丝球体硬化症(FSGS)、食物中毒、额叶萎缩、胃萎缩、巨细胞性关节炎(颞关节炎)、巨细胞性肝炎、巨细胞性多肌痛、丝球体肾炎、伴有及不伴有肾病症候群之丝球体肾炎(GN)(诸如慢性或急性丝球体肾炎(例如原发性GN))、古德帕斯彻氏症候群、痛风性关节炎、颗粒球输注相关症候群、肉芽肿病(包括淋巴瘤样肉芽肿病)、伴有多血管炎之肉芽肿病(GPA)、肉芽肿性葡萄膜炎、格雷氏病、古立安-白瑞症候群、点状牛皮癣、阵发性血红素尿、黑-里二氏病、桥本氏病、桥本氏脑炎、桥本氏甲状腺炎、血色病、溶血性贫血或免疫性溶血性贫血(包括自体免疫溶血性贫血(AIHA))、溶血性贫血、A型血友病、亨-舍二氏紫癜、妊娠疱疹、人类免疫缺乏病毒(HIV)感染、痛觉过敏、低γ球蛋白血症、性腺低能症、副甲状腺低能症、特发性尿崩症、特发性面瘫、特发性甲状腺功能低下、特发性IgA肾病、特发性膜性GN或特发性膜性肾病、特发性肾病症候群、特发性肺纤维化、特发性口炎性腹泻、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、IgA肾病、IgE介导之疾病(例如全身性过敏反应以及过敏性及异位性鼻炎)、IgG4相关硬化性疾病、局部回肠炎、免疫复合物肾炎、与由细胞激素及T-淋巴球介导之急性及迟发型过敏症有关之免疫反应、免疫介导之GN、免疫调节性脂蛋白(包括成人或急性呼吸窘迫症候群(ARDS))、包涵体肌炎、感染性关节炎、由抗精原细胞抗体所致之不孕症、全部或部分葡萄膜炎症、发炎性肠病(IBD)、发炎性过度增殖性皮肤疾病、发炎性肌病、胰岛素依赖型糖尿病(第1型)、胰岛炎、间质性膀胱炎、间质性肺病、间质肺纤维化、虹膜炎、缺血再灌注病症、关节炎症、青少年关节炎、青少年皮肌炎、青少年糖尿病、青少年发作型(第I型)糖尿病(包括儿童胰岛素依赖型糖尿病(IDDM))、青少年发作型类风湿性关节炎、川崎氏症候群、干燥性角膜结膜炎、锥虫病、蓝伯-伊顿症候群、利什曼体病、麻风病、白血球减少症、白血球黏附缺乏症、白血球破碎性血管炎、白血球减少症、扁平苔癣、硬化性苔癣、木质性结膜炎、线性IgA皮肤病、线性IgA疾病(LAD)、吕弗勒氏症候群、类狼疮性肝炎、狼疮(包括肾炎、大脑炎、儿童、非肾、肾外、盘状、脱发)、狼疮(SLE)、播散性红斑狼疮、莱姆关节炎、莱姆病、淋巴间质性肺炎、疟疾、男性及女性自体免疫不孕症、上颌骨病、中血管血管炎(包括川崎氏病及结节性多动脉炎)、膜状增生性或膜增生性GN(MPGN)(包括第I型及第II型)及快速进行性GN、膜性GN(膜性肾病)、美尼尔氏病、脑膜炎、显微性结肠炎、显微性多血管炎、偏头痛、微小肾病变、混合型结缔组织病(MCTD)、感染性单核细胞增多症、莫伦氏溃疡、穆-哈二氏病、多灶性运动神经病、多发性内分泌衰竭、多器官损伤症候群(诸如继发于败血症、创伤或出血之多器官损伤症候群)、多器官损伤症候群、多发性硬化症(MS)(诸如脊髓-眼MS)、多发性硬化症、流行性腮腺炎、肌肉病症、重症肌无力(诸如胸腺瘤相关重症肌无力)、重症肌无力、心肌炎、肌炎、发作性睡病、坏死性小肠结肠炎及透壁性结肠炎，及自体免疫发炎性肠病；坏死性、皮肤或过敏性血管炎；新生儿狼疮症候群(NLE)、肾病、肾病症候群、神经疾病、视神经脊髓炎(德维克氏)、视神经脊髓炎、神经性肌强直、嗜中性球减少症、非癌性淋巴球增多症、非肉芽肿性葡萄膜炎、非恶性胸腺瘤、眼部及眼眶发炎病症、眼部瘢痕性类天疱疮、卵巢炎、交感神经性眼炎、眼阵挛肌阵挛症候群(OMS)、眼阵挛或眼阵挛肌阵挛症候群(OMS)，及感觉神经病、视神经炎、肉芽肿性睾丸炎、骨关节炎、复发性风湿病、胰脏炎、全部血球减少症、PANDAS(与链球菌有关之儿童自体免疫神经精神病症)、肿瘤相关小脑退化、肿瘤相关症候群；肿瘤相关症候群，包括神经肿瘤相关症候群(例如蓝伯-伊顿肌无力症候群或伊顿-蓝伯症候群)；寄生物疾病，诸如利什曼原虫属；阵发性夜间血红素尿(PNH)、帕-罗二氏症候群、睫状体平坦部炎(周边葡萄膜炎)、帕-特二氏症候群、小病毒感染；类天疱疮，诸如大疱性类天疱疮及皮肤类天疱疮；天疱疮(包括寻常天疱疮)、红斑性天疱疮、落叶状天疱疮、天疱疮黏膜类天疱疮、天疱疮、消化性溃疡、周期性麻痹、周边神经病、静脉周边性脑脊髓炎、恶性贫血、恶性贫血、晶状体抗原性葡萄膜炎、肺硬化、POEMS症候群；结节性多动脉炎，第I型、第II型及第III型；原发性慢性多发性关节炎、多软骨炎(例如难治或复发性多软骨炎)、多内分泌腺自体免疫疾病、多内分泌异常、多腺体症候群(例如自体免疫多腺体症候群(或多腺体内分泌病症候群))、风湿性多肌痛、多发性肌炎、多发性肌炎/皮肌炎、多神经病、急性多神经根炎、心切开术后症候群、后葡萄膜炎或自体免疫葡萄膜炎、心肌梗塞后症候群、心包切开术后症候群、链球菌感染后肾炎、疫苗接种后症候群、早老性痴呆、原发性胆汁性肝硬化、原发性甲状腺功能低下、原发性特发性黏液水肿；原发性淋巴球增多症，其包括单株B细胞淋巴球增多症(例如良性单株γ球蛋白病及意义未明之单株γ球蛋白病MGUS)；原发性黏液水肿、原发性进行性MS(PPMS)及复发-缓解型MS(RRMS)、原发性硬化性胆管炎、孕酮皮炎、进行性全身性硬化、增生性关节炎；牛皮癣，诸如斑块型牛皮癣；牛皮癣、牛皮癣性关节炎、肺泡蛋白沈积症、肺部浸润性嗜伊红血球增多、纯红血球贫血或再生不良(PRCA)、纯红血球再生不良、化脓性或非化脓性窦炎、脓疱性牛皮癣及指甲牛皮癣、肾盂炎、坏疽性脓皮病、奎汶氏甲状腺炎、雷诺氏现象、反应性关节炎、反复流产、血压反应降低、反射性交感神经失养症、难治型口炎性腹泻、莱特尔氏病或症候群、复发性多软骨炎、心肌或其它组织再灌注损伤、再灌注损伤、呼吸窘迫症候群、腿不宁症候群、视网膜自体免疫、腹膜后纤维化、雷诺氏症候群、风湿性疾病、风湿热、风湿病、类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎、风疹病毒感染、塞氏症候群、类肉瘤病、血吸虫病、施密特症候群、SCID及埃-巴二氏病毒相关疾病、巩膜、巩膜炎、指硬皮病、硬皮病(包括全身性硬皮病)、硬化性胆管炎、播散性硬化；硬化，诸如全身性硬化；感觉神经性听力丧失、血清反应阴性脊椎关节炎、席汉氏症候群、夏尔曼氏症候群、硅肺病、休格连氏症候群、精子及睾丸自体免疫、蝶窦炎、斯-约二氏症候群、僵人症候群、亚急性细菌性心内膜炎(SBE)、亚急性皮肤红斑狼疮、突发性听力丧失、苏萨克氏症候群、西登哈姆氏舞蹈病、交感神经性眼炎、全身性红斑狼疮(SLE)(例如皮肤SLE)、全身性坏死性血管炎及ANCA相关血管炎，诸如彻奇-斯全司血管炎或症候群(CSS)；脊髓痨、高安氏动脉炎、毛细血管扩张、颞动脉炎/巨细胞性动脉炎、血栓闭塞性脉管炎；血小板减少症(例如如由心肌梗塞患者所显现)，包括血栓性血小板减少性紫癜(TTP)，及自体免疫或免疫介导之血小板减少症，诸如特发性血小板减少性紫癜(ITP)，包括慢性或急性ITP；血小板减少性紫癜(TTP)、甲状腺中毒症、组织损伤、托-享二氏症候群、中毒性表皮坏死溶解、中毒性休克症候群、输血反应、婴儿期短暂性低γ球蛋白血症、横贯性脊髓炎、热带肺性嗜伊红血球增多、结核病、溃疡性结肠炎、未分化型结缔组织病(UCTD)、荨麻疹(例如慢性过敏性荨麻疹及慢性特发性荨麻疹，包括慢性自体免疫荨麻疹)、葡萄膜炎(例如前葡萄膜炎)、葡萄膜视网膜炎、瓣膜炎、血管功能障碍、血管炎、脊椎关节炎、水疱性皮肤病、白斑病、韦格纳氏肉芽肿病(现称作伴有多血管炎之肉芽肿病(GPA))、维斯科特-奥尔德里奇症候群及X性联高IgM症候群。
治疗癌症
本文所述之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体可用于治疗癌症(例如肿瘤)之组合物、用途及方法中。
癌症之实例包括(但不限于)癌瘤、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤及白血病。该等癌症之更特定的实例包括鳞状细胞癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌及肺鳞状细胞癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(包括胃肠癌)、胰脏癌、神经胶母细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌及各种类型之头颈癌，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)；小淋巴球(SL)NHL；中级/滤泡性NHL；中级弥漫性NHL；高级免疫母细胞性NHL；高级淋巴母细胞NHL；高级小无核裂细胞NHL；巨大肿块(bulky disease)NHL；套细胞淋巴瘤；AIDS相关淋巴瘤；及瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(Waldenstrom'sMacroglobulinemia))；慢性淋巴球性白血病(CLL)；急性淋巴母细胞性白血病(ALL)；毛细胞白血病；慢性骨髓母细胞性白血病；多发性骨髓瘤及移植后淋巴组织增生病症(PTLD)。
术语可用本发明治疗之癌症包括(但不限于)癌瘤、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤及白血病或淋巴恶性病。该等癌症之更特定的实例包括膀胱癌、卵巢癌、黑素瘤、鳞状细胞癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌及肺鳞状细胞癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(包括胃肠癌)、胰脏癌、神经胶母细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌及各种类型之头颈癌，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)；小淋巴球(SL)NHL；中级/滤泡性NHL；中级弥漫性NHL；高级免疫母细胞性NHL；高级淋巴母细胞NHL；高级小无核裂细胞NHL；巨大肿块NHL；套细胞淋巴瘤；AIDS相关淋巴瘤；及瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症)；慢性淋巴球性白血病(CLL)；急性淋巴母细胞性白血病(ALL)；毛细胞白血病；慢性骨髓母细胞性白血病；及移植后淋巴组织增生病症(PTLD)，以及与母斑病有关之异常血管增生、水肿(诸如与脑肿瘤有关)及梅格斯氏症候群(Meigs'syndrome)。较佳的是，癌症选自由以下组成之群：乳癌、结肠直肠癌、直肠癌、非小细胞肺癌、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、肾细胞癌、前列腺癌、肝癌、胰脏癌、软组织肉瘤、卡波西氏肉瘤(kaposi'ssarcoma)、类癌瘤癌、头颈癌、黑素瘤、卵巢癌、间皮瘤及多发性骨髓瘤。在一个例示性实施例(参见工作实例)中，癌症为早期进展型(包括转移性)膀胱癌、卵巢癌或黑素瘤。在另一实施例中，癌症为结肠直肠癌。可用本发明治疗之癌症病状包括转移性癌症，其中骨髓源性抑制细胞表现KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3会抑制抗肿瘤反应及抗侵袭性免疫反应。本发明之方法尤其适用于治疗已形成血管之肿瘤。
本发明亦适用于与化学疗法或放射疗法或其它生物制剂组合治疗癌症且用于增强其活性，亦即，在骨髓源性抑制细胞表现KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3会抑制抗肿瘤反应及化学疗法或放射疗法或生物制剂之功效的个体中。根据本发明可使用展现抗癌活性之任何化学治疗剂。较佳的是，化学治疗剂可选自由以下组成之群：烷基化剂、抗代谢物、叶酸类似物、嘧啶类似物、嘌呤类似物及相关抑制剂、长春花生物碱、表鬼臼毒素、抗生素、L-天冬酰胺酶、拓扑异构酶抑制剂、干扰素、铂配位错合物、经蒽二酮取代之脲、甲基肼衍生物、肾上腺皮质抑制剂、肾上腺类固醇、孕酮、雌激素、抗雌激素剂、雄激素、抗雄激素剂及促性腺激素释放激素类似物。更佳的是，化学治疗剂可选自由以下组成之群：5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸(LV)、伊立替康、奥赛力铂(oxaliplatin)、卡培他滨(capecitabine)、太平洋紫杉醇及多烯紫杉醇(doxetaxel)。两种或两种以上化学治疗剂可呈混合液形式用于与抗-VEGF抗体之投药组合投与。一种较佳组合化学疗法为基于氟尿嘧啶之组合化学疗法，包含5-FU及一或多种其它化学治疗剂。组合化学疗法之适合给药方案在此项技术中为已知的且描述于例如Saltz等人,(1999)Proc ASCO18:233a及Douillard等人,(2000)Lancet355:1041-7中。生物制剂可为另一免疫增强剂，诸如PD-L1、PD-L2、CTLA-4及PD-L1、PD-L2、CTLA-4融合蛋白之抗体以及细胞激素、生长因子拮抗剂及促效剂、激素及抗细胞激素抗体。
过敏
本文所述之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体可用于治疗过敏(例如对过敏原之过敏性反应)之组合物、用途及方法中。
过敏原之实例包括螨抗原及花粉抗原。
代表性过敏性疾病包括支气管哮喘、过敏性鼻炎、异位性皮炎以及花粉及昆虫过敏。过敏素质为可由过敏父母之子女遗传之遗传因子。家族性过敏性疾病亦称为异位性疾病，且遗传传递之病因性因素为异位性素质。「异位性皮炎」为异位性疾病之一般术语，尤其伴随有皮炎症状之疾病。较佳实例包括选自由以下组成之群的过敏性病状：湿疹、过敏性鼻炎、枯草热、荨麻疹及食物过敏。过敏性病状包括湿疹、过敏性鼻炎或鼻伤风、枯草热、支气管哮喘、荨麻疹(麻疹)及食物过敏以及其它异位性病状。
发炎病状及发炎疾病
本文所述之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体可用于治疗发炎病状及发炎疾病之组合物、用途及方法中。
发炎病状及发炎疾病包括(但不限于)风湿性疾病(例如类风湿性关节炎、骨关节炎、牛皮癣性关节炎)、脊椎关节病(例如僵直性脊椎炎、反应性关节炎、莱特尔氏症候群)、结晶性关节病(例如痛风、假性痛风、焦磷酸钙沈积病)、多发性硬化症、莱姆病、风湿性多肌痛；结缔组织疾病(例如全身性红斑狼疮、全身性硬化、多发性肌炎、皮肌炎、休格连氏症候群)；血管炎病(例如结节性多动脉炎、韦格纳氏肉芽肿病、彻奇-斯全司症候群)；发炎病状，包括创伤或缺血之后果、类肉瘤病；血管疾病，包括动脉粥样硬化性血管疾病、动脉粥样硬化及血管阻塞性疾病(例如动脉粥样硬化、缺血性心脏病、心肌梗塞、中风、周边血管疾病)及血管支架再狭窄；眼部疾病，包括葡萄膜炎、角膜病、虹膜炎、虹膜睫状体炎及白内障。
发炎病状亦包括(但不限于)酸逆流/胃灼热、痤疮、寻常痤疮、过敏及敏感、阿兹海默氏病、哮喘、动脉粥样硬化及血管阻塞性疾病(例如动脉粥样硬化、缺血性心脏病、心肌梗塞、中风、周边血管疾病)及血管支架再狭窄、自体免疫疾病、支气管炎、癌症、心脏炎、白内障、乳糜泻、慢性疼痛、慢性前列腺炎、肝硬化、结肠炎、结缔组织病(例如全身性红斑狼疮、全身性硬化、多发性肌炎、皮肌炎、休格连氏症候群)、角膜病、克罗恩氏病、结晶性关节病(例如痛风、假性痛风、焦磷酸钙沈积病)、痴呆、皮炎、糖尿病、干眼症、湿疹、水肿、气肿、肌肉纤维疼痛、胃肠炎、齿龈炎、丝球体肾炎、心脏病、肝炎、高血压、过敏、发炎性肠病；发炎病状，包括创伤或缺血之后果；胰岛素抗性、间质性膀胱炎、虹膜睫状体炎、虹膜炎、关节疼痛/关节炎/类风湿性关节炎、莱姆病、代谢症候群(症候群X)、多发性硬化症、肌炎、肾炎、肥胖症；眼部疾病，包括葡萄膜炎；骨质减少、骨质疏松症、帕金森氏症、骨盆发炎性疾病、牙周病、多动脉炎、多软骨炎、风湿性多肌痛、牛皮癣、再灌注损伤、风湿性关节炎、风湿性疾病(例如类风湿性关节炎、骨关节炎、牛皮癣性关节炎)、类风湿性关节炎、类肉瘤病、硬皮病、窦炎、休格连氏症候群、结肠痉挛、脊椎关节病(例如僵直性脊椎炎、反应性关节炎、莱特尔氏症候群)、全身性念珠菌病、腱炎、移植排斥反应、UTI、阴道炎；血管疾病，包括动脉粥样硬化性血管疾病；血管炎病(例如结节性多动脉炎、韦格纳氏肉芽肿病、彻奇-斯全司症候群)及血管炎。
诊断方法
选择性结合KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3以及抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体以及其抗原结合片段可用于侦测KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽存在或不存在的诊断方法中。抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3以及抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体可用于包含以下之方法中：(a)使测试样品与结合KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3或KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之抗体或其片段接触，及(b)分析抗体-抗原决定基复合物。抗体-抗原决定基复合物可藉由西方墨点法、放射免疫分析、ELISA(酶联结免疫吸附剂分析)、「夹心」免疫分析、免测沈淀分析、沈淀反应、凝胶扩散沈淀反应、免疫扩散分析、凝集分析、补体固定分析、免疫组织化学分析、荧光免疫分析及蛋白质A免疫分析来侦测。样品可为组织生物检体、淋巴、尿、脑脊髓液、羊水、发炎性渗出物、血液、血清、大便或自结肠直肠道收集之液体。
选择性结合KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之抗体可为重组抗体。选择性结合KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之抗体片段可为Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、CDR、互补位或抗体能够结合抗原之部分。选择性结合KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之抗体可为嵌合、人类化、抗个体基因型、单链、双功能或共特异性抗体。选择性结合KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之抗体或片段可结合至标记，包括(但不限于)化学发光标记、顺磁性标记(例如铝、锰、铂、氧、镧、镏、钪、钇或镓)、MRI对比剂、荧光标记、生物发光标记或放射性标记。
另外，选择性结合KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3抗体及其抗原结合片段可连接至固体支撑物(例如珠粒、试管、薄片、培养皿或试条)，诸如数组。
方法可包含藉由正电子发射断层摄影法(PET)、CCD微光监测系统、X射线、CT扫描、闪烁摄影术、光声学成像、单光子放射计算机断层摄影术(SPECT)、磁共振成像(MRI)、超音波、顺磁性成像及内窥镜光学相干断层摄影术使KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽成像。
本发明可包含执行评估或测试步骤以评定疾病之存在、阶段、进展或分级的步骤。因此，治疗患者之自体免疫或发炎疾病之方法可包含：(a)对患者之疾病进行评估；及(b)若该患者患有适于用本发明之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体治疗之疾病，则投与该患者有效剂量之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。视情况而定，该评估步骤可涉及自怀疑患有自体免疫或发炎疾病之患者获得生物样品。举例而言，类风湿性关节炎患者之KIR及HLA-C基因型可提供有关对抗-TNF-α疗法之反应的预测性信息。参见McGeough等人,(2011)Rheumatology International。并且，表现KIR2DL同功异型物与易患发炎性肠病有关。Zhang等人,(2008)LifeScience Journal5(4):17-22。评估疾病之方法(例如诊断、分期)可藉由此项技术中已知之任何适合技术，例如藉由进行基于实验室之测试来达成。适合技术之实例包括进行基于PCR或RT-PCR之分析(例如以侦测常称为「标记」或「生物标记」之疾病相关核酸或基因)、生检、内窥镜检查、大便研究、任何非侵入性实验室测试(例如贫血及感染、筛选肝脏及胆管问题之肝功能测试、细菌、病毒及寄生物感染之测试)、超音波、CT、MRE、MRI及其它成像技术、染色体分析、免疫分析/免疫细胞化学侦测技术(例如存在自体抗体)、组织学及/或组织病理学分析、血清蛋白电泳、流动式细胞量测术(例如侦测免疫细胞、T细胞)、动脉血气(ABG)分析(在哮喘或COPD中)及身体检查技术(例如对于身体症状、有滑膜炎之关节数)。
此外，具有活化KIR2DS1及/或KIR2DS2基因之个体易于患上牛皮癣性关节炎，但只有在其同源抑制性受体KIR2DL1及KIR2DL2/3之HLA配体缺少时。抑制性KIR之配体不存在可能潜在地降低经由活化受体介导之NK(及/或T)细胞活化的临限值，从而促进牛皮癣性关节炎发病。Martin等人,(2002)TheJournal of Immunology169:2818-2822。该等方法包含侦测自体抗体之存在，例如侦测类风湿因子(RhF)、抗-环状瓜氨酸化肽抗体、抗-ssRNA、抗-dsRNA、抗-Smith、抗-磷脂、抗-核及/或抗-肌动蛋白抗体。在一个实施例中，该等方法包含评定蛋白水解酶、发炎介体、进行性炎症之标记或促发炎细胞激素之含量。在一个实施例中，该等方法包含测定c-反应蛋白(CRP)含量及/或红血球沈降率。确定个体有异常结果(指示疾病、恶化、进行性炎症)，例如异常ABG、自体抗体、CRP、任何蛋白水解酶、发炎介体或进行性炎症标记含量，指示该个体适于用抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体治疗。评估来自患者之生物样品中T细胞，较佳为CD4+T细胞及/或活化及/或增殖T细胞之存在。
筛选分析
本发明提供鉴别调节剂之方法(「筛选分析」)，该等调节剂亦即候选或测试化合物或药剂(例如肽、肽模拟物、小分子或其它药物)，其结合至KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽，对例如KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3表现或KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3活性具有刺激或抑制作用，或对KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3与其天然结合搭配物之间的相互作用具有刺激或抑制作用。
本发明提供筛选结合至KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3蛋白质或多肽或其生物活性部分，例如调节KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽与其天然结合搭配物相互作用之能力之候选或测试化合物的分析。在另一实施例中，本发明提供筛选结合至KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3蛋白质或多肽或其生物活性部分或调节其活性之候选或测试化合物的分析。在一实施例中，本发明提供筛选对由KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3负向调节之免疫功能(诸如本文中所鉴别者)具有刺激或抑制作用之候选或测试化合物或基于对KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3与其天然结合搭配物之间相互作用之影响来筛选候选或测试化合物的分析。此等KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3相关功能包括例如抑制T细胞产生细胞激素(例如Il-2、γ干扰素)、抑制适度CD28共刺激、抑制CD4+及CD8+T细胞增殖、抑制初始及记忆性CD4+T细胞增殖及抑制TCR活化而不诱导细胞凋亡。本发明之测试化合物可使用此项技术中已知之组合库方法中之多种途径中之任一者获得，包括：生物库；可空间寻址平行固相或溶液相库；需要解回旋之合成库方法；「一珠粒一化合物」库方法；及使用亲和层析选择之合成库方法。生物库途径限于肽库，而其它四种途径适用于肽、非肽寡聚物或化合物之小分子库。Lam(1997)AnticancerDrug Des.12:145。
在一个实施例中，分析为基于细胞之分析，其中使表现KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽或其生物活性部分之细胞与测试化合物接触，且测定测试化合物调节KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3活性之能力。测定测试化合物调节KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3活性之能力可藉由监测例如KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合至其天然结合搭配物及调节免疫细胞活性之能力来达成。免疫细胞可为T细胞、B细胞或骨髓细胞。测定测试化合物调节KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3与其反受体(counter-receptor)之结合的能力可例如藉由使KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3与放射性同位素或酶标记偶合以监测测试化合物调节KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3与表现KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3反受体之T细胞之结合的能力来达成。测定测试化合物结合KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之能力可例如藉由使化合物与放射性同位素或酶标记偶合，从而可藉由侦测复合物中标记之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3化合物来测定化合物与KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之结合来达成。
在未标记任何相互作用物的情况下测定化合物与KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3相互作用的能力亦处于本发明范畴内。举例而言，微生理记录仪(microphysiometer)可用于在未标记化合物或KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3的情况下侦测化合物与KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之相互作用。McConnell,H.M.等人,(1992)Science257:1906-1912。微生理记录仪(例如细胞感应器(Cytosensor))为使用光可寻址电位测定传感器(LAPS)量测细胞酸化其环境之速率的分析仪器。此酸化速率之改变可用作化合物与KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之间相互作用的指标。
分析可为基于细胞之分析，其包含使表现KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合搭配物之T细胞与测试化合物接触及测定测试化合物调节(例如刺激或抑制)KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合搭配物之活性的能力。测定测试化合物调节KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合搭配物之活性的能力可例如藉由测定KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽结合至KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合搭配物或与其相互作用之能力来达成。
测定KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽或其生物活性片段结合至KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合搭配物或与其相互作用之能力可藉由上文所述之用于测定直接结合之一种方法来达成。在一实施例中，测定KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽结合至KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合搭配物或与其相互作用之能力可藉由测定结合搭配物之活性来达成。举例而言，结合搭配物之活性可藉由侦测细胞第二信使(例如酪氨酸激酶或磷酸酶活性)之诱导、侦测适当基质之催化/酶活性、侦测报导基因(包含可操作地连接至编码可侦测标记(例如荧光素酶)之核酸的标靶反应性调节组件)之诱导或侦测标靶调节细胞反应来测定。举例而言，测定KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽结合至天然KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合搭配物或与其相互作用之能力可藉由量测化合物在增殖分析中调节免疫细胞共刺激或抑制之能力，或藉由干扰KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽结合至识别一部分KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之抗体的能力来达成。在一个实施例中，调节T细胞活化之化合物可藉由测定化合物调节T细胞增殖或细胞激素产生之能力来鉴别。在一实施例中，调节T细胞活化之化合物可藉由测定化合物在超过一种抗原浓度下调节T细胞增殖或细胞激素产生之能力来鉴别。
分析可为无细胞分析，其中使KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽或其生物活性部分与测试化合物接触，且测定测试化合物结合至KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽或其生物活性部分之能力。用于本发明分析中之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之较佳生物活性部分包括参与与非KIR2DL1、非KIR2DL2及非KIR2DL3分子相互作用之片段，例如结合至KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合搭配物之至少一部分细胞外域。测试化合物与KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之结合可如上文所述直接或间接测定。
分析可为无细胞分析，其中使KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽或其生物活性部分与测试化合物接触且测定测试化合物调节(例如刺激或抑制)KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽或其生物活性部分之活性的能力。测定测试化合物调节KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之活性的能力可例如藉由以上文所述之用于测定直接结合之一种方法测定KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽结合至KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合搭配物之能力来达成。本发明之无细胞分析可使用多肽之可溶性及/或膜结合形式(例如KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽或其生物活性部分，或结合KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之结合搭配物)在使用膜结合形式之多肽(例如细胞表面KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3)之无细胞分析的状况下，可能需要使用增溶剂，从而维持多肽之膜结合形式处于溶液中。该等增溶剂之实例包括非离子型清洁剂，诸如正辛基葡糖苷、正十二烷基葡糖苷、正十二烷基麦芽糖苷、辛酰基-N-甲基葡糖酰胺、癸酰基-N-甲基葡糖酰胺、
Figure BDA0000462467460001841
X-100、
Figure BDA0000462467460001842
X-114、Thesit、异十三烷基聚(乙二醇醚)n、3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲基铵基]-1-丙烷磺酸酯(CHAPS)、3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲基铵基]-2-羟基-1-丙烷磺酸酯(CHAPSO)或N-十二烷基.dbd.N,N-二甲基-3-铵基-1-丙烷磺酸酯。
在分析方法中，可能需要固定KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3或其结合搭配物以有助于自一种或两种多肽之未复合形式分离复合之形式，以及以提供分析自动化。测试化合物与KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之结合，或KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽与其结合搭配物在候选化合物存在及不存在下之相互作用可在任何适用于容纳反应物之容器中达成。该等容器之实例包括微量滴定盘、试管及微量离心管。可提供添加有允许一种或两种多肽结合至基质之结构域的融合蛋白。举例而言，可将麸胱甘肽-S-转移酶/KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3融合蛋白或麸胱甘肽-S-转移酶/结合搭配物融合蛋白吸附至麸胱甘肽
Figure BDA0000462467460001843
珠粒(Sigma Chemical,St.Louis,Mo.)或麸胱甘肽衍生化微量滴定盘上，接着与测试化合物或测试化合物及未吸附之结合搭配物多肽或KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽组合，且在有助于复合物形成之条件下培育混合物(例如在盐及pH值之生理条件下)。在培育后，洗涤珠粒或微量滴定盘孔以移除任何未结合之组分，在珠粒之状况下固定基质，且例如如上文所述直接或间接测定复合物形成。或者，可使复合物自基质解离，且使用标准技术测定KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合或活性水平。其它将多肽固定于基质上之技术亦可用于本发明之筛选分析中。在一替代实施例中，测定测试化合物调节KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之活性的能力可藉由测定测试化合物调节在KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3下游，例如藉由与KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合搭配物之细胞质域相互作用而起作用之分子之活性的能力来达成。举例而言，可如先前所述测定第二信使之含量、相互作用分子对适当标靶之活性或相互作用子与适当标靶之结合。
KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3表现之调节剂可用如下一种方法鉴别，在该方法中，使细胞与候选化合物接触且测定细胞中KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3mRNA或多肽之表现。将KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3mRNA或多肽在候选化合物存在下之表现量与KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3mRNA或多肽在不存在候选化合物下之表现量相比较。接着若改变具统计显著性，则可基于此比较将候选化合物鉴别为KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3表现之调节剂。
KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽可在双杂交分析或三杂交分析中用作「诱饵蛋白」(参见例如美国专利第5,283,317号；Zervos等人,(1993)Cell72:223-232；Madura等人,(1993)J.Biol.Chem.268:12046-12054；Bartel等人,(1993)Biotechniques14:920-924；Iwabuchi等人,(1993)Oncogene8:1693-1696；及WO94/10300)，以鉴别结合至KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3或与其相互作用(「KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合蛋白」、「KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合搭配物」或「KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3-bp」)且涉及KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3活性之其它多肽。该等KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合蛋白亦可能涉及由KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽或作为例如KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3介导之信号传导路径之下游组件的KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3标靶进行信号传播。或者，该等KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合多肽可为KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3抑制剂。双杂交系统系基于大部分转录因子之模块化性质，其由可分离DNA结合及活化域组成。简言之，该分析使用两种不同之DNA构筑体。在一种构筑体中，将编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之基因融合至编码已知转录因子(例如GAL-4)之DNA结合域之基因。在另一构筑体中，将来自DNA序列库之编码未鉴别多肽(「捕食物」或「样品」)之DNA序列融合至编码已知转录因子之活化域之基因。若「诱饵」多肽与「捕食」多肽能够在活体内相互作用，形成KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3依赖性复合物，则使得转录因子之DNA结合域与活化域紧密接近。此接近允许可操作地连接至对转录因子有反应之转录调节位点之报导基因(例如LacZ)转录。可侦测报导基因之表现且可分离含有功能转录因子之细胞群落且用于获得编码与KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽相互作用之多肽的选殖之基因。
两种或两种以上分析之组合描述于本文中。举例而言，调节剂可使用基于细胞或无细胞分析来鉴别，且该调节剂调节KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之活性的能力可在活体内，例如在动物(诸如细胞转型及/或肿瘤形成之动物模型)中加以证实。
本发明进一步关于由上述筛选分析鉴别之新颖药剂。如在本文所述之方法中于适当动物模型中所鉴别之药剂。举例而言，如本文所述鉴别之药剂(例如KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3调节剂、反义KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3核酸分子、KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3特异性抗体或KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合搭配物)可用于在动物模型中测定用该种药剂治疗之功效、毒性或副作用。或者，如本文所述鉴别之药剂可用于在动物模型中确定该药剂之作用机制。此外，本发明关于由上述筛选分析所鉴别之新颖药剂的用途，其用于如本文所述之治疗。
侦测分析
本文所鉴别之cDNA序列之部分或片段(及相应完全基因序列)可以多种方式用作聚核苷酸试剂。举例而言，此等序列可用于：(i)定位染色体上之其各别基因；且因此定位与遗传性疾病有关之基因区域；(ii)自微小生物样品鉴别个体(组织分型)；及(iii)有助于法医鉴别生物样品。此等应用描述于以下子部分中。
染色体定位
在分离基因之序列(或一部分序列)后，此序列可用于定位染色体上基因之位置。此方法称为染色体定位。因此，本文所述之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3核苷酸序列之部分或片段可用于定位染色体上KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3基因之位置。在染色体上定位KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3序列为使此等序列与与疾病有关之基因相关中重要之第一步骤。简言之，可藉由自KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3核苷酸序列制备PCR引子(长度较佳为15至25bp)将KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3基因定位至染色体。可利用计算机分析KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3序列以预测不跨越基因组DNA中之一个以上外显子，从而使扩增过程复杂的引子。此等引子接着可用于对含有个别人类染色体之体细胞杂交物进行PCR筛选。唯独彼等含有对应于KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3序列之人类基因之杂交物将产生扩增片段。藉由融合来自不同哺乳动物之体细胞(例如人类及小鼠细胞)来制备体细胞杂交物。随着人类及小鼠细胞之杂交物生长及分裂，其逐渐以随机顺序丧失人类染色体，但保留小鼠染色体。藉由使用因缺乏特定酶而不能培养小鼠细胞，但可培养人类细胞之培养基，将保留一种含有编码该所需酶之基因的人类染色体。藉由使用各种培养基，可确立杂交细胞株组。一组中之各细胞株含有单个人类染色体或少数人类染色体及全组小鼠染色体，使得可容易地将个别基因定位至特定人类染色体。D'Eustachio等人,(1983)Science220:919-924。仅含有人类染色体片段之体细胞杂交物亦可藉由使用具有易位及缺失之人类染色体而产生。
体细胞杂交物之PCR定位为将特定序列指定至特定染色体之快速程序。每天可使用单个热循环器指定三个或三个以上序列。使用KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3核苷酸序列设计寡核苷酸引子，可在特定染色体之片段组中达成次定位(sublocalization)。可类似用于将KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3序列定位至其染色体之其它定位策略包括原位杂交(描述于Fan等人,(1990)Proc Natl.Acad.Sci.USA87:6223-27中)、用标记之流式分选染色体预筛选，及藉由与染色体特异性cDNA库杂交进行预先选择。
DNA序列与中期染色体涂片(spread)之荧光原位杂交(FISH)可进一步用于以单步提供准确染色体位置。可使用分裂由化学物质(诸如破坏有丝分裂纺锤体之乙酰甲基秋水仙素(colcemid))在中期阻断之细胞制成染色体涂片。可用胰蛋白酶短暂处理染色体，且接着用Giemsa染色。在各染色体上产生浅色及深色条带之图案，因此可个别地鉴别染色体。FISH技术可用于短达500或600个碱基之DNA序列。然而，大于1,000个碱基之纯系以足以简单侦测之信号强度结合至独特染色体位置的可能性较大。较佳，1,000个碱基，且更佳2,000个碱基将足以在合理时间内获得良好结果。关于对此技术之评述，参见Verma等人,Human Chromosomes:A Manual of basic Techniques(PergamonPress,New York1988)。可个别地使用用于染色体定位之试剂来标记彼染色体上之单个染色体或单个位点，或可使用试剂组以标记多个位点及/或多个染色体。对应于基因之非编码区之试剂实际上较佳用于定位目的。编码序列在基因家族内很可能为保守的，因此增加在染色体定位期间交叉杂交之可能性。
在将序列定位至准确染色体位置后，序列在染色体上之物理位置可与基因图数据相关。最终，可对来自若干个体之基因进行完全定序以确定突变之存在及区分突变与多形现象。
组织分型
本发明之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3序列亦可用于自微小生物样品鉴别个体。此外，本发明之序列可用于提供一种替代技术，该技术确定个体基因组之所选部分之实际逐个碱基DNA序列。因此，本文所述之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3核苷酸序列可用于制备序列之5'及3'端之两个PCR引子。此等引子接着可用于扩增个体之DNA且随后对其进行定序。
以此方式制备之个体之相应DNA序列组可提供独特之个体鉴别，因为各个体因对偶基因差异而具有一组独特之该等DNA序列。本发明之序列可用于自个体及组织获得该等鉴别序列。本发明之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3核苷酸序列独特地代表人类基因组之部分。对偶基因变异以某种程度出现于此等序列之编码区中，且以更大程度出现于非编码区中。据估计个别人类之间对偶基因变异以每各500个碱基约一次之频率出现。本文所述之各序列在某种程度上可用作可出于达成鉴别目的与来自个体之DNA相比较之标准。由于在非编码区中存在较大量之多形现象，所以需要较少序列来区分个体。SEQ ID NO:1或4之非编码序列可方便地以大概10至1,000个引子组提供阳性个体鉴别，该等引子各自产生具有100个碱基之非编码扩增序列。若使用预测之编码序列，诸如SEQ ID NO:3或6中之编码序列，则用于阳性个体鉴别之引子之较适当数目为500至2000个。
若使用本文所述之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3核苷酸序列之试剂组产生个体之独特鉴别数据库，则该等相同试剂随后可用于鉴别来自彼个体之组织。使用独特鉴别数据库，可由极小组织样品对存活或死亡之个体进行阳性鉴别。
KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3序列在法医生物学中之用途
基于DNA之鉴别技术亦可用于法医生物学中。本发明之序列可用于提供靶向人类基因组中之特定基因座之聚核苷酸试剂，例如PCR引子，其可藉由例如提供另一「鉴别标记」(亦即特定个体独有之另一DNA序列)来增强基于DNA之法医鉴别的可靠度。如上所述，实际碱基序列信息可用于鉴别而作为由限制酶产生之片段形成之图案的准确替代形式。靶向SEQ ID NO:1或3之非编码区之序列尤其适于此用途，因为较大量之多形现象存在于非编码区中，使得较易于使用此技术区分个体。聚核苷酸试剂之实例包括KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3核苷酸序列或其部分，例如源自SEQ ID NO:1或3之非编码区且长度为至少20个碱基，较佳为至少30个碱基的片段。本文所述之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3核苷酸序列可进一步用于提供聚核苷酸试剂，例如标记或可标记探针，其可用于例如原位杂交技术中以鉴别特定组织，例如淋巴球。此在向法医病理学家提供未知起源之组织的状况下极适用。该等KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3探针组可用于藉由物种及/或藉由器官类型鉴别组织。以类似方式，此等试剂(例如KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3引子或探针)可用于针对污染筛选组织培养物(亦即，针对培养物中不同类型之细胞之混合物的存在进行筛选)。
诊断分析
侦测生物样品中KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽或核酸存在或不存在的例示性方法涉及自测试个体获得生物样品及使生物样品与能够侦测KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽或编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之核酸(例如mRNA或基因组DNA)的化合物或试剂接触，从而在生物样品中侦测KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽或核酸之存在。较佳用于侦测KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3mRNA或基因组DNA之试剂为能够与KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3mRNA或基因组DNA杂交之标记之核酸探针。核酸探针可为例如SEQ ID NO:1或3中所述之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3核酸或其部分，诸如长度为至少15个、30个、50个、100个、250个或500个核苷酸且足以在严格条件下与KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3mRNA或基因组DNA特异性杂交的寡核苷酸。其它适用于本发明之诊断分析中之探针描述于本文中。较佳用于侦测KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之试剂为能够结合至KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之抗体，较佳为具有可侦测标记之抗体。抗体可为多株抗体，或更佳为单株抗体。可使用完整抗体，或其片段(例如Fab或F(ab')2)。术语「标记」对于探针或抗体而言意欲涵盖藉由使可侦测物质偶合(亦即物理连接)至探针或抗体来直接标记探针或抗体，以及藉由与直接标记之另一试剂的反应性间接标记探针或抗体。间接标记之实例包括使用荧光标记之二次抗体侦测一次抗体及用生物素末端标记DNA探针以使其可用荧光标记之抗生蛋白链菌素侦测。术语「生物样品」意欲包括自个体分离之组织、细胞及生物体液以及个体体内存在之组织、细胞及体液。即，本发明之侦测方法可用于在活体外以及活体内侦测生物样品中之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3mRNA、多肽或基因组DNA。举例而言，侦测PD-L2mRNA之活体外技术包括北方杂交及原位杂交。侦测KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之活体外技术包括酶联结免疫吸附剂分析(ELISA)、西方墨点法、免测沈淀法及免疫荧光。侦测KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3基因组DNA之活体外技术包括南方杂交。此外，侦测KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之活体内技术包括将标记之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体引入个体。举例而言，该抗体可用放射性标记来标记，该放射性标记在个体体内之存在及位置可藉由标准成像技术来侦测。生物样品含有测试个体之多肽分子。或者，生物样品可含有来自测试个体之mRNA分子或来自测试个体之基因组DNA分子。较佳之生物样品为藉由习知方式自个体分离之血清样品。在另一实施例中，该等方法进一步涉及自对照个体获得对照生物样品，使对照样品与能够侦测KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽、mRNA或基因组DNA之化合物或试剂接触，从而侦测生物样品中KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽、mRNA或基因组DNA之存在，及比较对照样品中KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽、mRNA或基因组DNA之存在与测试样品中KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽、mRNA或基因组DNA之存在。
本发明亦涵盖用于侦测生物样品中KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之存在的套组。举例而言，该套组可包含能够侦测生物样品中之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽或mRNA之标记化合物或试剂；测定样品中KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之量的构件；及用于比较样品中KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之量与标准量之构件。化合物或试剂可封装于适合容器中。该套组可进一步包含关于使用该套组侦测KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽或核酸的说明书。
预后分析
本文所述之诊断方法此外可用于鉴别患有与异常或不想要的KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3表现或活性有关之疾病或病症或有产生该疾病或病症之风险的个体。如本文所用之术语「异常」包括KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3表现或活性与野生型KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3表现或活性不同。异常表现或活性包括表现或活性增加或降低，以及表现或活性不遵循野生型发育表现模式或次细胞表现模式。举例而言，异常KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3表现或活性意欲包括KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3基因中之突变引起KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3基因低表现或过度表现的状况及该等突变产生无功能KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽或不以野生型方式起作用之多肽，例如不与KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3结合搭配物相互作用之多肽或与非KIR2DL1、非KIR2DL2及非KIR2DL3结合搭配物相互作用之多肽的情况。如本文所用之术语「不想要」包括与生物反应(诸如免疫细胞活化)有关之不想要的现象。举例而言，术语不想要包括KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3表现或活性在个体体内不合需要。
本文所述之分析(诸如前述诊断分析或以下分析)可用于鉴别患有与KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽活性或核酸表现失调有关之病症或有产生该病症之风险的个体，该病症为诸如自体免疫病症、免疫缺乏症、免疫系统病症，诸如自体免疫、过敏性或发炎病症或癌症。因此，本发明提供鉴别与异常或不想要的KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3表现或活性有关之疾病或病症的方法，其中自个体获得测试样品且侦测KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽或核酸(例如mRNA或基因组DNA)，其中KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽或核酸之存在可诊断个体患有与异常或不想要的KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3表现或活性有关之疾病或病症或有产生该疾病或病症之风险。如本文所用之「测试样品」系指自相关个体获得之生物样品。举例而言，测试样品可为生物体液(例如脑脊髓液或血清)、细胞样品或组织。
此外，本文所述之预后分析可用于确定是否可投与个体药剂(例如促效剂、拮抗剂、肽模拟物、多肽、肽、核酸、小分子或其它药物候选者)来治疗与异常或不想要的KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3表现或活性有关之疾病或病症。举例而言，该等方法可用于确定个体是否可有效地用用于自体免疫病症、免疫缺乏症、免疫系统癌症或过敏性或发炎病症之药剂治疗。因此，本发明提供确定个体是否可有效地用用于与异常或不想要的KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3表现或活性有关之病症的药剂治疗的方法，其中获得测试样品且侦测KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽或核酸表现或活性(例如其中KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽或核酸表现或活性之量可诊断个体可投与治疗与异常或不想要的KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3表现或活性有关之病症的药剂)。本发明之方法亦可用于侦测KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3基因中之遗传改变，从而确定具有改变之基因的个体是否有特征在于KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽活性或核酸表现失调之病症的风险，诸如自体免疫病症、免疫缺乏症、免疫系统癌症、过敏性病症或发炎病症。本文所述之方法可例如藉由使用预先封装之诊断套组来进行，该等套组包含本文所述之至少一种探针核酸或抗体试剂，其宜用于例如临床配置中以诊断展现涉及KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3基因之疾病或病患之症状或家族史的患者。此外，表现KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之任何细胞类型或组织可用于本文所述之预后分析中。
免疫分析
结合KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3抗体及抗原结合片段可用于免疫分析中以定性或定量侦测及分析样品中之标记。此方法包含提供特异性结合至KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之抗体；使样品与抗体接触；及侦测样品中抗体结合至标记之复合物的存在。
KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3可使用多种公认之免疫结合分析中之任一者来侦测及/或定量。适用分析包括例如酶免疫分析(EIA)，诸如酶联结免疫吸附剂分析(ELISA)、放射免疫分析(RIA)、西方墨点分析或狭缝墨点分析(slot blot assay)。参见例如美国专利第4,366,241号；第4,376,110号；第4,517,288号；及第4,837,168号。一般而言，可使自个体获得之样品与特异性结合KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之抗体接触。
视情况而定，在使抗体与样品接触之前可将抗体固定至固体支撑物以有助于洗涤及后继分离复合物。固体支撑物之实例包括(但不限于)呈例如微量滴定盘、条状物、珠粒或微珠粒形式之玻璃或塑料。抗体可连接至固体支撑物。
在将样品与抗体一起培育后，洗涤混合物且可侦测形成之抗体-标记复合物。此可藉由将洗涤之混合物与侦测试剂一起培育来达成。或者，样品中之标记可使用间接分析(其中例如使用二次标记抗体侦测结合之标记-特异性抗体)及/或竞争或抑制分析(其中例如将结合至标记之不同抗原决定基之单株抗体与混合物一起同时培育)来侦测。
在整个分析中，在试剂之各次组合后需要培育及/或洗涤步骤。培育步骤可自约5秒变化至几小时，较佳自约5分钟变化至约24小时。然而，培育时间将视分析形式、标记、溶液体积、浓度而定。通常，分析将在环境温度下进行，但其可在一定范围之温度(例如10℃至40℃)下进行。
免疫分析可用于测定来自个体之样品中标记之测试量。首先，可使用上文所述之免疫分析方法侦测样品中标记之测试量。若样品中存在标记，则其将与特异性结合标记之抗体在上文所述之适合培育条件下形成抗体-标记复合物。抗体-标记复合物之量可视情况藉由与标准比较来确定。如上文所述，标记之测试量无须以绝对单位量度，只要量度单位可与对照量及/或信号相比较即可。若干免疫分析在此项技术中为已知的且本文所述之KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽可用于该等免疫分析中，包括(但不限于)放射免疫分析(RIA)、酶联结免疫吸附剂分析(ELISA)、磁性免疫分析、免疫墨点法、西方墨点法、免测沈淀分析、免疫组织化学分析及荧光活化细胞分选(FACS)。参见Wild,(2008)[编]The Immunoassay Handbook[第3版]Elsevier。
放射成像方法
抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体可用于放射成像方法中以诊断癌症(包括胰脏癌及结肠直肠癌)或监测肿瘤进展。此等方法包括(但不限于)正电子发射断层摄影法(PET)、单光子放射计算机断层摄影法(SPECT)。此等技术两者皆为非侵袭性的，且可用于侦测及/或量测多种组织事件及/或功能，诸如侦测例如癌细胞。SPECT可视情况同时与两种标记一起使用。参见美国专利第6,696,686号。
商业应用及方法
本发明进一步提供产生抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体以达到商业量之方法。抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体可大规模产生，必要时加以储存，且向医院、临床医师或其它健康照护设施供应。
抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体之制备、储存及分布方法可藉由本文所揭示之方法而产生。在产生后，在治疗患者之前，可收集、纯化且视情况储存抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体。举例而言，在患者呈现适应症，诸如癌症、自体免疫疾病或发炎病状时，可定制抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体且以适时方式提供。因此，本发明系关于制备KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3而以商业规模获得抗体的方法、包含选择性结合至KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3之抗体及其抗原结合片段的医药组合物，以及向医院及临床医师提供(亦即制备、视情况储存及出售)抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体的方法。抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体之制备可按比例扩大以达成商业用途。
本发明亦提供管理医药商业之方法，其包含建立分配出售之制剂的分配系统，或可包括建立出售医药制剂之销售团队。
核酸库
KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3变异体之多样化库可藉由在核酸层面上组合突变诱发而产生且由多样化基因库编码。KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3变异体之多样化库可藉由例如将合成寡核苷酸之混合物酶促接合至基因序列中以使可能性KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3序列之简并集合可表现为个别多肽，或者可表现为当中含有KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3序列之集合的较大融合蛋白之集合(例如用于噬菌体呈现)而产生。存在多种可用于自简并寡核苷酸序列产生可能性KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3变异体之库的方法。简并基因序列之化学合成可在自动DNA合成器中进行，且接着将合成基因接合至适当表现载体中。使用基因之简并集合允许在一种混合物中提供编码可能性KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3序列之所需集合的所有序列。合成简并寡核苷酸之方法在此项技术中为已知的。参见例如Narang(1983)Tetrahedron39:3；Itakura等人,(1984)Annu.Rev.Biochem.53:323；Itakura等人,(1984)Science198:1056；Ike等人,(1983)Nucleic Acids Res.11:477。
另外，KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽编码序列之片段的库可用于产生KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3片段之多样化群体以筛选及后继选择KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之变异体。编码序列片段之库可藉由用核酸酶在每个分子仅出现约一次切割的条件下处理KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3编码序列之双股PCR片段，使双股DNA变性，使DNA复性形成可包括来自不同切割产物之有义/反义对的双股DNA，藉由用S1核酸酶处理自重新形成之双螺旋体移除单股部分，且将所得片段库接合至表现载体中而产生。藉由此方法，可获得编码KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之各种尺寸之N端、C端及内部片段的表现库。
若干技术在此项技术中已知用于筛选由点突变或截短所产生之组合库之基因产物，及用于筛选具有所选特性之基因产物的cDNA库。该等技术可适用于快速筛选由KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3多肽之组合突变诱发所产生之基因库。用于筛选大型基因库之可实现高通量分析之最广泛使用的技术通常包括将基因库选殖至可复制表现载体中，用所得载体库使适当细胞转型，及在侦测所需活性可有助于分离编码基因(其产物得到侦测)之载体的条件下表现组合基因。递归式整体突变诱发(recursive ensemble mutagenesis，REM)为一种增加库中功能性突变体之出现频率的新技术，其可与筛选分析组合用于鉴别KIR2DL1、KIR2DL2及KIR2DL3变异体。Arkin及Youvan(1992)Proc Natl.Acad.Sci.USA89:7811-7815；Delagrave等人(1993)Protein Eng.6(3):327-331。
本说明书中所提及之所有公开案(例如非专利文献)、专利、专利申请公开案及专利申请案皆指示熟习本发明所属技术者之技能水平。所有该等公开案(例如非专利文献)、专利、专利申请公开案及专利申请案以引用方式并入本文中，其引用程度就如同特定且个别地指示各个别公开案、专利、专利申请公开案或专利申请案以引用方式并入本文中一般。
实施例
现已大体地描述了本发明，藉由参考以下实例将更易于理解本发明，包括该等实例仅用于说明本发明之某些态样及实施例的目的而不意欲限制本发明。
实施例
实施例1
在患者体内之药物动力学
藉由ELISA测定抗-KIR抗体(1-7F9)之血浆浓度，如下文所简要描述。
用KIR2DL3涂布溶液(100微升/孔)涂布培养盘且在约+4℃下培育隔夜。接着使用自动培养盘洗涤器用洗涤缓冲液(400微升/孔)洗涤培养盘3次。添加阻断缓冲液(200微升/孔)且在室温下于培养盘震荡器上培育培养盘约2小时。此后，用洗涤缓冲液(400微升/孔)再次洗涤培养盘3次。
将标准物、质量对照物及样品添加至培养盘中(100微升/孔)，随后在室温下于培养盘震荡器上培育约2小时。再洗涤培养盘3次(如上)，随后添加小鼠抗人类IgG4:过氧化酶工作溶液(100微升/孔)。接着在室温下于培养盘震荡器上再培育培养盘约2小时，随后再次将其洗涤。
将TMB添加至培养盘中(100微升/孔)，接着在室温下于培养盘震荡器上将其培育约30分钟。藉由添加停止溶液(50微升/孔)终止酶促反应。在450nm下(基准滤波器650nm)读取吸光度。此研究之定量下限为5.000ng/mL且此研究之定量上限为110.0ng/mL。
实施例2
KIR占有率分析法
藉由四色荧光分析对人类全血样品评估受体占有率。简言之，评估经EDTA抗凝之周边血液中之T及NK淋巴球上游离及结合KIR2D受体量。游离位点分析法将藉由以结合PE之1-7F9(其结合至KIR2D分子)染色来评估未结合之KIR2D。结合位点分析法将藉由以结合PE之小鼠抗人类IgG4单株抗体(其识别结合至KIR2D受体之1-7F9)染色来评估由1-7F9占有之KIR2D受体。游离及结合分析法将允许评估1-7F9-PE或抗hIgG4-PE之阳性染色百分比以及荧光强度[MESF]。在以下两个分析法中使用以下结合抗体组合：
游离位点分析法：CD3/1-7F9/CD45/CD56
结合分析法：CD3/hIgG4/CD45/CD56
在Becton Dickinson FACScalibur上使用Becton Dickinson Cellquest软件分析样品。T细胞系定义为CD45+CD3+淋巴球且NK细胞系定义为CD45+CD3-CD56+细胞。
实施例3
临床安全性及自体反应性
对年长急性骨髓白血病(AML)患者(>60岁)进行单一剂量递增试验，该等患者在诱导及巩固化学疗法之后最初完全缓解，但不适于骨髓移植。应用标准3+3设计，且总共研究7个剂量：0.0003mg/kg至3mg/kg之剂量范围。在给药之后，针对安全性、PK及KIR占有率监测患者直至KIR占有率不再可侦测为止。
亦进行扩展试验。完成剂量递增试验且仍完全缓解之AML患者可参与扩展试验，其中以每月计对患者进行给药至多6次。以与患者在先前试验中所接受之剂量相同之剂量对患者进行给药。
患者、材料及方法
在两个试验中，首先完全缓解(CR)且不适于移植之年长AML患者(>60岁)适于该等研究。AML符合WHO准则。(Brunning RD,Matutes E,Harris NL等人:Acute myeloid leukaemia:Introduction.Jaffe ES,Harris NL,Stein H等人编:Pathology and Genetics of Tumors of Haematopoietic and Lymphoid Tissues.Lyon,France:IARC Press,2001.World Health Organization Classification ofTumors,3,第77-80页)。缓解为根据NCI准则所定义之形态完全缓解(CR)(Cheson等人,JCO,21(24):4642-4649(2003))，或仅在1或2个诱导化学疗法循环及至少1个且最多6个巩固化学疗法循环后血小板计数不完全恢复之CRi。
在剂量递增试验中筛选时，自最后一次施与化学疗法起之时间为至少30天且至多120天。其它合格准则包括(但不限于)NK细胞上KIR2DL1及KIR2DL2/3之表现、ECOG(Oken等人,Toxicity And Response Criteria Of TheEastern Cooperative Oncology Group.Am J Clin Oncol5:649-655,1982)状态0分至2分及来自先前治疗之全部毒性皆已恢复。
在扩展试验中，在可接受之安全性型态下完成剂量递增试验为另一合格准则。
其它准则包括绝对嗜中性白血球计数>1×109个/公升；血小板>80×109个/公升；无疾病症状；所有先前抗白血病疗法之急性毒性皆已恢复；患者NK细胞上表现KIR(能够结合抗-KIR抗体(1-7F9))；如由研究者所判定无严重相关器官功能障碍；及临床实验室值如下：(a)血清肌酸酐≤2mg/dL，(b)总胆红素≤1.5×正常值上限，及(c)AST≤3×正常值上限。
研究设计
剂量递增试验为一项多中心、开放标签、单剂量递增安全性及可耐受性试验。研究七个剂量：0.0003mg/kg、0.003mg/kg、0.015mg/kg、0.075mg/kg、0.3mg/kg、1mg/kg及3mg/kg。一般(3+3)设计系选用于此试验。各患者分配一个剂量，且监测安全性、药物动力学及药效学直至患者NK细胞上之KIR占有率不可侦测为止。持续不断地分析安全性、PK及KIR占有率，且在给药后前4周期间自各剂量组获得之数据一般形成剂量递增决策之基础。
扩展试验系设计为重复给药、多中心、开放标签、安全性及可耐受性试验。给与个别患者之剂量与患者在单剂量试验中所接受之剂量相同。患者可以4周时间间隔接受6次投药，亦即6个给药循环，最长持续6个月时间。各给药循环由给药访视及安全性监测访视组成。在最后一次给药后，针对安全性监测患者直至患者NK细胞上之KIR占有率不可侦测为止。此安全性追踪期之持续时间可能视所接受之剂量而定，且预期最长为最后一次给药后24周。
使用美国国家癌症学会不良事件常见术语准则(US National CancerInstitute Common Terminology Criteria for Adverse Events，CTCAE)第3.0版评估抗-KIR抗体(1-7F9)投药之安全性(亦即任何观测到之毒性)。亦评估药物动力学终点、KIR占有率、NK及T细胞活化之标记、WT-1肿瘤标记、无进展存活期及总存活期。
结果
在剂量递增试验中在接受0.0003mg/kg、0.003mg/kg、0.015mg/kg、0.075mg/kg、0.3mg/kg、1mg/kg及3mg/kg之各剂量之患者中评估受体饱和。总而言之，剂量0.0003mg/kg使得KIR部分饱和(50%占有率)达约2小时时间；剂量0.003mg/kg使得KIR完全饱和(90%占有率)达不到24小时之时间；剂量0.015mg/kg使得KIR完全饱和达不到7天之时间；剂量0.075mg/kg使得KIR完全饱和达将近7天时间；剂量0.3mg/kg使得KIR完全饱和达7天以上且不到14天之时间；剂量1mg/kg使得KIR完全饱和达不到3周之时间(介于约2周与3周之间)；剂量3mg/kg使得KIR完全饱和达超过4周之时间。
未出现与自体反应性(诸如皮疹及胃肠道症状)、输注(诸如皮疹、搔痒症、红斑、疲劳、头痛、发热)或细胞激素释放(诸如发热、疲劳、不适及头痛)有关之不利事件达引起任何安全性关注之程度。
实施例4
在转殖基因小鼠模型中消除CONA母细胞之活体内功效
在接受抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3抗体1-7F9之KIR2DL3转殖基因小鼠中评估对NK介导之表现cw3之conA母细胞之活体内杀死作用的诱导作用。
材料及方法
抗体：完全人类抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及抗-KIR2DL3单株抗体1-7F9系藉由如WO2006/003179中所述用以KIR2DL1稳定转染之BW5417细胞使带有人类基因组IgG基因座之小鼠(Medarex,Inc.)免疫，继而用在大肠杆菌中产生之KIR2DL3之可溶性细胞外部分3次增强免疫而产生。藉由酶联结免疫吸附剂分析针对与重组可溶性KIR之结合筛选抗体，且藉由流动式细胞量测术针对与YTS-KIR2DL1细胞之结合测试阳性纯系。次选殖所选融合瘤直至获得稳定细胞株为止。
转殖基因小鼠：使Rag-/-小鼠与KIR2DL3转殖基因(tg)小鼠交配，得到KIR2DL3tg,Rag-/-小鼠。使HLA-Cw3转殖基因小鼠与KbDb-/-小鼠交配，得到Cw3tg,KbDb-/-小鼠。该等小鼠描述于Romagne等人,(2009)Blood114:2667-2677及Sola等人,(2009)P.N.A.S.U.S.A106(31):12879-12884中。
基于荧光之排斥反应分析：根据K.Karr实验室所述之方法(Oberg等人,Eur.J.Immunol(2004)34:1646；S.Johansson等人,J.Exp.Med(2005)201:1145)进行分析。注射CFSE标记之标靶细胞(标靶细胞测试物与同基因/对照标靶细胞比率1:1)，继之以在1或2天后分析不同器官。标靶细胞为新鲜分离之脾细胞、肿瘤细胞或ConA母细胞(48小时，ConA2μg/ml)。
结果
实验之目的在于测试1-7F9是否在KIR2DL3tg小鼠中诱导NK杀死cw3-标靶ConA母细胞。简言之，接受者小鼠及供体细胞如下：
(1)接受者小鼠：KIR2DL3tg B6、KIR2DL3tg Rag-/-及C57/BL6小鼠。
(2)供体细胞：
(a)来自KbDb KO小鼠、KbDb KO cw3tg小鼠、C57/BL6小鼠之未处理脾细胞，及
(b)来自KbDb KO小鼠、KbDb KO cw3tg小鼠、C57/BL6小鼠之ConA母细胞。
用ConA(2微克/107个细胞/毫升)刺激来自C57/BL6及KbDb-/--cw3tg小鼠之脾细胞2天。用0.5μM(B6)及3μM(KbDb-/--cw3)CFSE标记细胞，以1:1之比率混合，且接着注射于先前注射(或未注射)1-7F9mAb(300μg)之KIR2DL3tg B6小鼠体内。因此在细胞注射前约6小时投与抗体1-7F9以诱导cw3标靶细胞溶解。在细胞注射前24小时投与之抗-NK1.1抗体PK136(BDBiosciences)用作诱导NK细胞消耗之对照。
结果展示于图1A、1B及2中。图1A及1B研究在注射细胞后第40小时CSFE标记之细胞的百分比。获得类似结果或注射后第20小时CSFE标记之细胞。图1A展示相较于未经处理之KIR2DL3tg B6小鼠以及经处理及未经处理之C57Bl6小鼠，KIR2DL3tg B6小鼠在用抗体1-7F9处理时PBMC中经CSFE标记之细胞的百分比显著降低。图1B展示相较于未经处理之KIR2DL3tg B6小鼠以及经处理及未经处理之C57Bl6小鼠，KIR2DL3tg B6小鼠在用抗体1-7F9处理时脾中经CSFE标记之脾细胞的百分比显著降低。图2研究在注射细胞后第40小时CSFE标记之细胞的相对细胞存活率。图2展示相较于未经处理之KbDb KO cw3tg小鼠，KIR2DL3tg B6小鼠在用抗体1-7F9处理时PBMC及脾脏中KbDb-/-cw3ConA母细胞之存活率显著降低。
NK细胞一般已知具有确保自身耐受性之机制。参见Raulet及Vance(2006)Nature Immuno.Rev.6:520-531。特定而言，所有NK细胞表现抑制性KIR或抑制性CD94/NKG2A分子。如在当前抗-KIR抗体1-7F9之肿瘤学I期临床试验中所观测，阻断KIR受体指示该抗体不会诱导除一般对于单株抗体所观测到之炎症或自体免疫以外的特定炎症或自体免疫。然而，对于阻断KIR2DL1、KIR2DL2或KIR2DL3对活体内消除活化或增殖性T细胞之影响一直没有研究。本发明结果指示表现KIR2DL3之NK细胞在活体内能够减少或消除已由HLA-cw3配体以其它方式阻断之活化T细胞，只要阻断KIR2DL3即可。因此，细胞KIR2DL1、2及/或细胞群体在活体内阻断KIR时有消除自体性活化促发炎细胞的潜能。
本文引用之所有参考文献(包括公开案、专利申请案及专利)以全文引用之方式并入本文中，其引用程度就如同个别且特定地指示将各参考文献以引用方式并入本文中且阐述其全文一般(达法律允许之最大程度)，而与本文别处对特定文献所作的任何各别提供之并入无关。
除非另外说明，否则本文所提供之所有精确值表示相应近似值(例如，关于特定因素或量测值所提供之所有例示性精确值可视为亦提供适当时用「约」修饰之相应近似量测值)。
除非另外说明或上下文明显相矛盾，否则本文关于某一或某些要素使用诸如「包含」、「具有」、「包括」或「含有」之术语对本发明之任何态样或实施例的描述意欲对「由」彼或彼等特定要素「组成」、「基本上由」彼或彼等特定要素「组成」或「实质上包含」彼或彼等特定要素的本发明之相似态样或实施例提供支持(例如，除非另外说明或上下文明显相矛盾，否则本文描述组合物包含特定要素应理解为亦描述组合物由彼要素组成)。
除非另外主张，否则使用本文所提供之任何及所有实例或例示性语言(例如「诸如」)仅意欲较好地阐述本发明而不对本发明范畴构成限制。本说明书中之语言不应视作指示任何未主张之要素对于实践本发明而言必不可少。
所有公开案、专利及专利申请案以全文引用方式并入本文中，其引用程度就如同特定且个别地指示各个别公开案、专利或专利申请案以全文引用方式并入本文中一般。
熟习此项技术者将认识到或能够仅仅使用常规实验来确定众多本文中所述之本发明特定实施例的等效形式。该等等效形式意欲由以下申请专利范围涵盖。
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Claims (118)

1.一种治疗自体免疫病症的方法，其包含投与有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
2.一种治疗发炎病症的方法，其包含投与有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
3.一种消除或减少与疾病病状有关之T细胞数目的方法，其包含在表现KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之细胞存在下使该等T细胞与抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物接触。
4.如权利要求3的方法，其中该等表现KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之细胞为NK细胞。
5.如权利要求3的方法，其系离体达成。
6.如权利要求3的方法，其在活体内达成。
7.如权利要求3的方法，其中该等T细胞包括促发炎、活化及/或增殖性T细胞、CD4+T细胞、浸润性T细胞及/或表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞中之一或多者。
8.一种消除或减少与发炎病症病理有关之T细胞数目的方法，其包含投与患有发炎病症之个体可有效减少该等T细胞数目之量的抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
9.一种消除或减少与自体免疫病症病理有关之T细胞数目的方法，其包含投与患有自体免疫病症之个体可有效减少该等T细胞数目之量的抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
10.如权利要求8或9的方法，其中该等T细胞包含活化及/或增殖性T细胞、CD4+T细胞、促发炎T细胞及/或表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞。
11.如权利要求8、9或10的方法，其中该等T细胞包括以下一或多者：循环中之T细胞；患病或发炎组织中所包含之T细胞；浸润性T细胞；已浸润于疾病组织中之T细胞；滑膜关节组织或滑液中所包含之T细胞；或中枢神经系统、结肠或皮肤组织中所包含之T细胞。
12.如权利要求8至11中任一项之方法，其中该个体患有至少部分由该等T细胞介导之疾病。
13.一种活体内消除或减少与发炎或自体免疫病症病理有关之活化及/或增殖性T细胞数目的方法，其包含投与患有发炎或自体免疫病症之个体可有效减少该等T细胞数目之量的抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
14.一种消除或减少与发炎或自体免疫病症病理有关之CD4+T细胞数目的方法，其包含投与患有发炎或自体免疫病症之个体可有效减少该等T细胞数目之量的抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
15.一种消除或减少促发炎T细胞数目的方法，其包含投与患有发炎或自体免疫病症之个体可有效减少该等T细胞数目之量的抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
16.如权利要求13、14或15中任一项的方法，其中该疾病至少部分由该等T细胞介导。
17.一种消除或减少浸润性T细胞数目的方法，其包含投与患有发炎或自体免疫病症之个体可有效减少该等T细胞数目之量的抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
18.如权利要求17之方法，其中该疾病至少部分由该等T细胞介导。
19.如权利要求17之方法，其中该等浸润性T细胞包括以下一或多者：已浸润于疾病组织中之细胞、已浸润于滑膜关节组织或滑液中之细胞，或已浸润于中枢神经系统、结肠或皮肤组织中之细胞。
20.一种消除或减少表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞数目的方法，其包含投与患有发炎或自体免疫病症之个体可有效减少该等T细胞数目之量的抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
21.如权利要求20之方法，其中该等T细胞至少部分介导该病症。
22.一种治疗发炎病症的方法，其包含：(a)确定个体是否患有发炎病症；及(b)若该个体患有发炎病症，则用有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗该个体。
23.一种治疗自体免疫病症的方法，其包含：(a)确定个体是否患有自体免疫病症；及(b)若该个体患有自体免疫病症，则用有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗该个体。
24.一种治疗发炎病症的方法，其包含：(a)确定个体是否患有至少部分由T细胞介导之发炎病症，及(b)若该个体患有至少部分由该等T细胞介导之发炎病症，则用有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗该个体。
25.如权利要求24的方法，其中该等T细胞包括以下一或多者：促发炎、活化及/或增殖性T细胞、循环中之T细胞或患病或发炎组织中之T细胞、CD4+T细胞、浸润性T细胞及/或表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞。
26.一种治疗自体免疫病症的方法，其包含：(a)确定个体是否患有至少部分由T细胞介导之自体免疫病症；及(b)若该个体患有至少部分由该等T细胞介导之自体免疫病症，则用有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗该个体。
27.如权利要求26之方法，其中该等T细胞包括以下一或多者：促发炎、活化及/或增殖性T细胞、循环中之T细胞或患病或发炎组织中之T细胞、CD4+T细胞、浸润性T细胞及/或表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞。
28.一种治疗个体之发炎疾病的方法，其包含：(a)评估个体之发炎疾病之存在、阶段及/或进展；及(b)投与该个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
29.一种治疗个体之自体免疫疾病的方法，其包含：(a)评估个体之自体免疫疾病之存在、阶段及/或进展；及(b)投与该个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
30.如权利要求28或29之方法，其中该方法包含评估个体之疾病的存在、阶段及/或进展，其包含分析自体抗体、CRP、任何蛋白水解酶、发炎介体或进行性炎症之标记的含量。
31.如权利要求28或29的方法，其中若确定该个体适于用抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗，则投与该个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
32.一种治疗个体之发炎疾病的方法，其包含：(a)确定该个体是否确诊有发炎疾病；及(b)若该个体确诊有发炎疾病，则投与该患者有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
33.一种治疗个体之自体免疫疾病的方法，其包含：(a)确定该个体是否确诊有自体免疫疾病；及(b)若该个体确诊有自体免疫疾病，则投与该患者有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
34.一种治疗个体之发炎疾病的方法，其包含(a)确定该个体是否正经历发炎疾病之发作、危象、恶化或突发；及(b)若该个体经历发炎疾病之发作、危象、恶化或突发，则投与该个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
35.一种治疗个体之自体免疫疾病的方法，其包含(a)确定该个体是否正经历自体免疫疾病之发作、危象、恶化或突发；及(b)若该个体经历自体免疫疾病之发作、危象、恶化或突发，则投与该个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
36.一种治疗个体之发炎疾病的方法，其包含(a)确定该个体是否患有特征在于存在T细胞之发炎疾病；及(b)若该个体患有特征在于存在该等T细胞之发炎疾病，则投与该患者有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
37.一种治疗个体之自体免疫疾病的方法，其包含(a)确定该个体是否患有特征在于存在T细胞之自体免疫疾病；及(b)若该个体患有特征在于存在该等T细胞之自体免疫疾病，则投与该患者有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
38.如权利要求36或37的方法，其中该等T细胞可为活化及/或增殖性T细胞、CD4+T细胞、促发炎T细胞、浸润性T细胞及/或表现HLA-cw3及/或HLA-cw4之T细胞。
39.一种治疗正经历发炎疾病之发作、危象、恶化或突发之个体的方法，其包含投与该个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
40.如权利要求39的方法，其中该个体确诊有发炎疾病。
41.一种治疗正经历自体免疫疾病之发作、危象、恶化或突发之个体的方法，其包含投与该个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
42.如权利要求41的方法，其中该个体患有自体免疫发炎疾病。
43.一种治疗个体的方法，其包含：(a)确定个体是否患有发炎或自体免疫病症；及(b)若该个体患有发炎或自体免疫病症，则用有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗该个体。
44.一种治疗个体的方法，其包含：(a)确定个体是否患有至少部分由T细胞介导之发炎或自体免疫病症；及(b)若该个体患有至少部分由该等T细胞介导之发炎或自体免疫病症，则用有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物治疗该个体。
45.一种治疗个体的方法，其包含：(a)评估个体之发炎或自体免疫疾病之存在、阶段及/或进展；及(b)投与该个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
46.一种治疗个体的方法，其包含：(a)确定该个体是否确诊有发炎或自体免疫疾病；及(b)若该个体确诊有发炎或自体免疫疾病，则投与该患者有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
47.一种治疗个体的方法，其包含：(a)确定该个体是否正经历发炎或自体免疫疾病之发作、危象、恶化或突发；及(b)若该个体经历发炎或自体免疫疾病之发作、危象、恶化或突发，则投与该个体有效量之抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物。
48.如权利要求1至47中任一项的方法，其中该化合物为抗体、抗体片段、肽、糖苷生物碱、反义核酸、核糖核酸酶、类视黄素、高亲和性多聚体(avemir)、小分子或其任何组合。
49.如权利要求1至47中任一项的方法，其中该个体患有由T细胞介导之发炎或自体免疫病症。
50.如权利要求1、9、13、14、15、17、20、23、26、29、33、35、37、41及43至47中任一项的方法，其中该自体免疫病症为后天免疫缺乏症候群(AIDS)、后天脾萎缩、急性前葡萄膜炎、急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、急性痛风性关节炎、急性坏死性出血性脑白质炎、急性或慢性窦炎、急性化脓性脑膜炎(或其它中枢神经系统发炎病症)、急性严重炎症、艾迪森氏病(Addison's disease)、肾上腺炎、成人发作型糖尿病(第II型糖尿病)、成人发作型特发性副甲状腺低能症(AOIH)、无γ球蛋白血症、颗粒球缺乏症、血管炎病(包括血管炎(包括大血管血管炎(包括风湿性多肌痛及巨细胞性(高安氏(Takayasu's))关节炎))、过敏病状、过敏性接触性皮炎、过敏性皮炎、过敏性肉芽肿性血管炎、过敏病症、过敏性神经炎、过敏反应、斑形脱发、全秃、阿尔波特氏症候群(Alport's syndrome)、肺泡炎(例如过敏性肺泡炎及纤维化肺泡炎)、阿兹海默氏病(Alzheimer's disease)、淀粉样变性、肌萎缩性侧索硬化(ALS；葛雷克氏病(Lou Gehrig's disease))、嗜伊红血球相关病症(例如嗜伊红血球增多)、全身性过敏反应、僵直性脊椎炎、血管扩张、抗体介导之肾炎、抗-GBM/抗-TBM肾炎、抗原-抗体复合物介导之疾病、抗丝球体基底膜病、抗-磷脂抗体症候群、抗磷脂症候群(APS)、口疮、口疮性口炎、再生不能性贫血、心律不整、动脉硬化、动脉硬化病症、关节炎(例如类风湿性关节炎，诸如急性关节炎、慢性类风湿性关节炎)、慢性渐进性关节炎、变形性关节炎、蛔虫病、曲霉肿(或含有嗜伊红血球之肉芽肿)、曲菌病、无精液症(aspermiogenese)、哮喘(例如支气管哮喘(asthma bronchiale/bronchialasthma)及自体免疫哮喘)、共济失调毛细管扩张症、共济失调硬化、动脉粥样硬化、自闭症、自体免疫血管性水肿、自体免疫再生不能性贫血、自体免疫萎缩性胃炎、自体免疫糖尿病、睾丸及卵巢之自体免疫疾病(包括自体免疫睾丸炎及卵巢炎)、与胶原病有关之自体免疫病症、自体免疫自主神经障碍、自体免疫耳部疾病(例如自体免疫内耳疾病(AGED))、自体免疫内分泌疾病(包括甲状腺炎，诸如自体免疫甲状腺炎)、自体免疫肠病症候群、自体免疫性腺衰竭、自体免疫听力丧失、自体免疫溶血、自体免疫肝炎、自体免疫肝脏病症、自体免疫高脂质血症、自体免疫免疫缺乏症、自体免疫内耳疾病(AIED)、自体免疫心肌炎、自体免疫嗜中性球减少症、自体免疫胰脏炎、自体免疫多内分泌病、第I型自体免疫多腺体症候群、自体免疫视网膜病、自体免疫血小板减少性紫癜(ATP)、自体免疫甲状腺病、自体免疫荨麻疹、自体免疫介导之胃肠疾病、轴突及神经元神经病、巴娄病(Balo disease)、白塞氏病(Behcet's disease)、良性家族性及缺血再灌注损伤、良性淋巴球性血管炎、伯格氏病(Berger's disease)(IgA肾病)、养鸟者肺(bird-fancier's lung)、失明、伯克氏病(Boeck's disease)、阻塞性细支气管炎(非移植)伴有NSIP(bronchiolitisobliterans(non-transplant)vs NSIP)、支气管炎、支气管肺炎曲菌病、布鲁顿氏症候群(Bruton's syndrome)、大疱性类天疱疮、卡普兰氏症候群(Caplan'ssyndrome)、心肌病、心血管缺血、卡斯曼氏症候群(Castleman's syndrome)、乳糜泻、脂肪便症(麸质性肠病)、小脑退化、大脑缺血及伴有血管形成之疾病、恰加斯氏病(Chagas disease)、通道病(例如癫痫症)、CNS通道病、脉络膜视网膜炎、脉络膜炎、自体免疫血液学病症、慢性活动性肝炎或自体免疫慢性活动性肝炎、慢性接触性皮炎、慢性嗜伊红血球肺炎、慢性疲劳症候群、慢性肝炎、慢性过敏性肺炎、慢性发炎性关节炎、慢性发炎性髓鞘脱失多神经病(CIDP)、慢性难治炎症、慢性黏膜与皮肤性念珠菌病、慢性神经病(例如IgM多神经病或IgM介导之神经病)、慢性阻塞性气管疾病、慢性肺部发炎疾病、慢性复发性多灶性骨髓炎(CRMO)、慢性甲状腺炎(桥本氏甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis))或亚急性甲状腺炎、彻奇-斯全司症候群(Churg-Strauss syndrome)、瘢痕性类天疱疮/良性黏膜类天疱疮、CNS发炎病症、CNS血管炎、腹腔病、柯刚氏症侯群(Cogans syndrome)、冷凝集素病、息肉状结肠炎、结肠炎(诸如溃疡性结肠炎(ulcerative colitis/colitis ulcerosa)、胶原性结肠炎)、涉及T细胞浸润及慢性发炎反应之病状、先天性心脏传导阻滞、先天性风疹感染、库姆氏阳性贫血(Coombs positive anemia)、冠状动脉疾病、科沙奇病毒性心肌炎(Coxsackie myocarditis)、CREST症候群(钙质沉着、雷诺氏现象(Raynaud's phenomenon))、克罗恩氏病(Crohn's disease)、冷球蛋白血症、库欣氏症候群(Cushing's syndrome)、睫状体炎(例如慢性睫状体炎、异时性睫状体炎、虹膜睫状体炎或福斯氏睫状体炎(Fuch's cyclitis))、囊肿性纤维化、细胞激素诱发之毒性、聋症、退化性关节炎、髓鞘脱失疾病(例如自体免疫髓鞘脱失疾病)、髓鞘脱失神经病、登革热(dengue)、疱疹样皮炎及异位性皮炎、皮炎(包括接触性皮炎)、皮肌炎、具有急性发炎组分之皮肤病、德维克氏病(Devic's disease)(视神经脊髓炎)、糖尿病性大动脉病症、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、戴-布二氏贫血(Diamond Blackfan anemia)、弥漫性间质性肺纤维化、扩张型心肌病、盘状狼疮、涉及白血球渗出之疾病、卓斯勒症候群(Dressler's syndrome)、杜普伊特伦氏挛缩(Dupuytren'scontracture)、埃可病毒感染(echovirus infection)、湿疹(包括过敏性或异位性湿疹)、脑炎(诸如罗氏脑炎(Rasmussen's encephalitis)及边缘叶及/或脑干脑炎)、脑脊髓炎(例如过敏性脑脊髓炎(allergicencephalomyelitis/encephalomyelitis allergica)及实验性过敏性脑脊髓炎(EAE))、动脉内膜增生、心内膜炎、内分泌性眼病、子宫内膜异位症、心内膜心肌纤维化、晶状体过敏性眼内炎(endophthalmia phacoanaphylactica)、眼内炎、过敏性肠炎、嗜伊红血球增多-肌痛症候群、嗜伊红血球性筋膜炎、流行性角膜结膜炎、后天性大疱性表皮松懈(EBA)、巩膜外层、巩膜外层炎、埃-巴二氏病毒感染(Epstein-Barr virus infection)、持久性隆起性红斑、多形红斑、麻风结节性红斑、结节性红斑、胎儿红血球母细胞增多症、食道运动功能障碍(esophageal dysmotility)、原发性混合型冷球蛋白血症、筛骨、伊文氏症候群(Evan's syndrome)、实验性过敏性脑脊髓炎(EAE)、因子VIII缺乏症、农民肺(farmer's lung)、风湿热、费尔提氏症候群(Felty's syndrome)、肌肉纤维疼痛、纤维化肺泡炎、丝虫病、局部区段性丝球体硬化症(FSGS)、食物中毒、额叶萎缩、胃萎缩、巨细胞性关节炎(颞关节炎)、巨细胞性肝炎、巨细胞性多肌痛、丝球体肾炎、伴有及不伴有肾病症候群之丝球体肾炎(GN)(诸如慢性或急性丝球体肾炎(例如原发性GN))、古德帕斯彻氏症候群(Goodpasture's syndrome)、痛风性关节炎、颗粒球输注相关症候群、肉芽肿病(包括淋巴瘤样肉芽肿病)、伴有多血管炎之肉芽肿病(GPA)、肉芽肿性葡萄膜炎、格雷氏病(Grave's disease)、古立安-白瑞症候群(Guillain-Barresyndrome)、点状牛皮癣、阵发性血红素尿、黑-里二氏病(Hamman-Rich'sdisease)、桥本氏病(Hashimoto's disease)、桥本氏脑炎、桥本氏甲状腺炎、血色病、溶血性贫血或免疫性溶血性贫血(包括自体免疫溶血性贫血(AIHA))、溶血性贫血、A型血友病、亨-舍二氏紫癜(Henoch-Schonlein purpura)、妊娠疱疹、人类免疫缺乏病毒(HIV)感染、痛觉过敏、低γ球蛋白血症、性腺低能症、副甲状腺低能症、特发性尿崩症、特发性面瘫、特发性甲状腺功能低下、特发性IgA肾病、特发性膜性GN或特发性膜性肾病、特发性肾病症候群、特发性肺纤维化、特发性口炎性腹泻、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、IgA肾病、IgE介导之疾病(例如全身性过敏反应以及过敏性及异位性鼻炎)、IgG4相关硬化性疾病、局部回肠炎、免疫复合物肾炎、与由细胞激素及T-淋巴球介导之急性及迟发型过敏症有关之免疫反应、免疫介导之GN、免疫调节性脂蛋白(包括成人或急性呼吸窘迫症候群(ARDS))、包涵体肌炎、感染性关节炎、由抗精原细胞抗体所致之不孕症、全部或部分葡萄膜炎症、发炎性肠病(IBD)、发炎性过度增殖性皮肤疾病、发炎性肌病、胰岛素依赖型糖尿病(第1型)、胰岛炎、间质性膀胱炎、间质性肺病、间质肺纤维化、虹膜炎、缺血再灌注病症、关节炎症、青少年关节炎、青少年皮肌炎、青少年糖尿病、青少年发作型(第I型)糖尿病(包括儿童胰岛素依赖型糖尿病(IDDM))、青少年发作型类风湿性关节炎、川崎氏症候群(Kawasaki syndrome)、干燥性角膜结膜炎、锥虫病(kypanosomiasis)、蓝伯-伊顿症候群(Lambert-Eaton syndrome)、利什曼体病(leishmaniasis)、麻风病、白血球减少症、白血球黏附缺乏症、白血球破碎性血管炎、白血球减少症、扁平苔癣、硬化性苔癣、木质性结膜炎、线性IgA皮肤病、线性IgA疾病(LAD)、吕弗勒氏症候群(Loffler's syndrome)、类狼疮性肝炎、狼疮(包括肾炎、大脑炎、儿童、非肾、肾外、盘状、脱发)、狼疮(SLE)、播散性红斑狼疮、莱姆关节炎(Lyme arthritis)、莱姆病、淋巴间质性肺炎、疟疾、男性及女性自体免疫不孕症、上颌骨病、中血管血管炎(包括川崎氏病及结节性多动脉炎)、膜状增生性或膜增生性GN(MPGN)(包括第I型及第II型)及快速进行性GN、膜性GN(膜性肾病)、美尼尔氏病(Meniere'sdisease)、脑膜炎、显微性结肠炎、显微性多血管炎、偏头痛、微小肾病变、混合型结缔组织病(MCTD)、感染性单核细胞增多症、莫伦氏溃疡(Mooren'sulcer)、穆-哈二氏病(Mucha-Habermann disease)、多灶性运动神经病、多发性内分泌衰竭、多器官损伤症候群(诸如继发于败血症、创伤或出血之多器官损伤症候群)、多器官损伤症候群、多发性硬化症(MS)(诸如脊髓-眼MS)、多发性硬化症、流行性腮腺炎、肌肉病症、重症肌无力(诸如胸腺瘤相关重症肌无力)、重症肌无力、心肌炎、肌炎、发作性睡病、坏死性小肠结肠炎及透壁性结肠炎，及自体免疫发炎性肠病；坏死性、皮肤或过敏性血管炎；新生儿狼疮症候群(NLE)、肾病、肾病症候群、神经疾病、视神经脊髓炎(德维克氏)、视神经脊髓炎、神经性肌强直、嗜中性球减少症、非癌性淋巴球增多症、非肉芽肿性葡萄膜炎、非恶性胸腺瘤、眼部及眼眶发炎病症、眼部瘢痕性类天疱疮、卵巢炎、交感神经性眼炎、眼阵挛肌阵挛症候群(OMS)、眼阵挛或眼阵挛肌阵挛症候群(OMS)，及感觉神经病、视神经炎、肉芽肿性睾丸炎、骨关节炎、复发性风湿病、胰脏炎、全部血球减少症、PANDAS(与链球菌(Streptococcus)有关之儿童自体免疫神经精神病症)、肿瘤相关小脑退化、肿瘤相关症候群；肿瘤相关症候群，包括神经肿瘤相关症候群(例如蓝伯-伊顿肌无力症候群或伊顿-蓝伯症候群)；寄生物疾病，诸如利什曼原虫属(Lesihmania)；阵发性夜间血红素尿(PNH)、帕-罗二氏症候群(Parry Rombergsyndrome)、睫状体平坦部炎(周边葡萄膜炎)、帕-特二氏症候群(Parsonnage-Turner syndrome)、小病毒感染；类天疱疮，诸如大疱性类天疱疮及皮肤类天疱疮；天疱疮(包括寻常天疱疮)、红斑性天疱疮、落叶状天疱疮、天疱疮黏膜类天疱疮、天疱疮、消化性溃疡、周期性麻痹、周边神经病、静脉周边性脑脊髓炎、恶性贫血(pernicious anemia/anemia perniciosa)、恶性贫血、晶状体抗原性葡萄膜炎、肺硬化、POEMS症候群；结节性多动脉炎，第I型、第II型及第III型；原发性慢性多发性关节炎、多软骨炎(例如难治或复发性多软骨炎)、多内分泌腺自体免疫疾病、多内分泌异常(polyendocrinefailure)、多腺体症候群(例如自体免疫多腺体症候群(或多腺体内分泌病症候群))、风湿性多肌痛、多发性肌炎、多发性肌炎/皮肌炎、多神经病、急性多神经根炎、心切开术后症候群、后葡萄膜炎、或自体免疫葡萄膜炎、心肌梗塞后症候群、心包切开术后症候群、链球菌感染后肾炎、疫苗接种后症候群、早老性痴呆、原发性胆汁性肝硬化、原发性甲状腺功能低下、原发性特发性黏液水肿；原发性淋巴球增多症，其包括单株B细胞淋巴球增多症(例如良性单株γ球蛋白病及意义未明之单株γ球蛋白病MGUS)；原发性黏液水肿、原发性进行性MS(PPMS)及复发-缓解型MS(RRMS)、原发性硬化性胆管炎、孕酮皮炎、进行性全身性硬化、增生性关节炎；牛皮癣，诸如斑块型牛皮癣；牛皮癣、牛皮癣性关节炎、肺泡蛋白沈积症、肺部浸润性嗜伊红血球增多、纯红血球贫血或再生不良(pure red cell anemia or aplasia，PRCA)、纯红血球再生不良、化脓性或非化脓性窦炎、脓疱性牛皮癣及指甲牛皮癣、肾盂炎、坏疽性脓皮病、奎汶氏甲状腺炎(Quervain's thyreoiditis)、雷诺氏现象、反应性关节炎、反复流产、血压反应降低、反射性交感神经失养症、难治型口炎性腹泻、莱特尔氏病(Reiter's disease)或症候群、复发性多软骨炎、心肌或其它组织再灌注损伤、再灌注损伤、呼吸窘迫症候群、腿不宁症候群、视网膜自体免疫、腹膜后纤维化、雷诺氏症候群、风湿性疾病、风湿热、风湿病、类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎、风疹病毒感染、塞氏症候群(Sampter'ssyndrome)、类肉瘤病、血吸虫病、施密特症候群(Schmidt syndrome)、SCID及埃-巴二氏病毒相关疾病(Epstein-Barr virus-associated disease)、巩膜、巩膜炎、指硬皮病、硬皮病(包括全身性硬皮病)、硬化性胆管炎、播散性硬化；硬化，诸如全身性硬化；感觉神经性听力丧失、血清反应阴性脊椎关节炎、席汉氏症候群(Sheehan's syndrome)、夏尔曼氏症候群(Shulman's syndrome)、硅肺病、休格连氏症候群、精子及睾丸自体免疫、蝶窦炎、斯-约二氏症候群(Stevens-Johnson syndrome)、僵人(stiff-man/stiff-person)症候群、亚急性细菌性心内膜炎(SBE)、亚急性皮肤红斑狼疮、突发性听力丧失、苏萨克氏症候群(Susac's syndrome)、西登哈姆氏舞蹈病(Sydenham's chorea)、交感神经性眼炎、全身性红斑狼疮(SLE)(systemic lupus erythematosus/systemic lupuserythematodes)(例如皮肤SLE)、全身性坏死性血管炎及ANCA相关血管炎，诸如彻奇-斯全司血管炎或症候群(CSS)；脊髓痨、高安氏动脉炎、毛细血管扩张、颞动脉炎/巨细胞性动脉炎、血栓闭塞性脉管炎；血小板减少症(例如如由心肌梗塞患者所显现)，包括血栓性血小板减少性紫癜(TTP)，及自体免疫或免疫介导之血小板减少症，诸如特发性血小板减少性紫癜(ITP)，包括慢性或急性ITP；血小板减少性紫癜(TTP)、甲状腺中毒症、组织损伤、托-享二氏症候群(Tolosa-Hunt syndrome)、中毒性表皮坏死溶解、中毒性休克症候群、输血反应、婴儿期短暂性低γ球蛋白血症、横贯性脊髓炎(transversemyelitis/traverse myelitis)、热带肺性嗜伊红血球增多、结核病、溃疡性结肠炎、未分化型结缔组织病(UCTD)、荨麻疹(例如慢性过敏性荨麻疹及慢性特发性荨麻疹，包括慢性自体免疫荨麻疹)、葡萄膜炎(例如前葡萄膜炎)、葡萄膜视网膜炎(uveoretinitis)、瓣膜炎、血管功能障碍、血管炎、脊椎关节炎、水疱性皮肤病、白斑病、韦格纳氏肉芽肿病(Wegener's granulomatosis)(现称作伴有多血管炎之肉芽肿病(GPA))、维斯科特-奥尔德里奇症候群(Wiskott-Aldrich syndrome)或X性联高IgM症候群。
51.如权利要求2、8、13、14、15、17、20、22、24、28、32、34、36、36、39及43至47中任一项的方法，其中该发炎病症为风湿性疾病(例如类风湿性关节炎、骨关节炎、牛皮癣性关节炎)、脊椎关节病(例如僵直性脊椎炎、反应性关节炎、莱特尔氏症候群)、结晶性关节病(例如痛风、假性痛风、焦磷酸钙沈积病)、多发性硬化症、莱姆病、风湿性多肌痛；结缔组织疾病(例如全身性红斑狼疮、全身性硬化、多发性肌炎、皮肌炎、休格连氏症候群)；血管炎病(例如结节性多动脉炎、韦格纳氏肉芽肿病、彻奇-斯全司症候群)；发炎病状，包括创伤或缺血之后果、类肉瘤病；血管疾病，包括动脉粥样硬化性血管疾病、动脉粥样硬化及血管阻塞性疾病(例如动脉粥样硬化、缺血性心脏病、心肌梗塞、中风、周边血管疾病)、血管支架再狭窄；眼部疾病，包括葡萄膜炎、角膜病、虹膜炎、虹膜睫状体炎、白内障；酸逆流/胃灼热、痤疮、寻常痤疮、过敏及敏感、阿兹海默氏病、哮喘、动脉粥样硬化及血管阻塞性疾病(例如动脉粥样硬化、缺血性心脏病、心肌梗塞、中风、周边血管疾病)及血管支架再狭窄、自体免疫疾病、支气管炎、癌症、心脏炎、白内障、乳糜泻、慢性疼痛、慢性前列腺炎、肝硬化、结肠炎、结缔组织病(例如全身性红斑狼疮、全身性硬化、多发性肌炎、皮肌炎、休格连氏症候群)、角膜病、克罗恩氏病、结晶性关节病(例如痛风、假性痛风、焦磷酸钙沈积病)、痴呆、皮炎、糖尿病、干眼症、湿疹、水肿、气肿、肌肉纤维疼痛、胃肠炎、齿龈炎、丝球体肾炎、心脏病、肝炎、高血压、过敏、发炎性肠病；发炎病状，包括创伤或缺血之后果；胰岛素抗性、间质性膀胱炎、虹膜睫状体炎、虹膜炎、关节疼痛/关节炎/类风湿性关节炎、莱姆病、代谢症候群(症候群X)、多发性硬化症、肌炎、肾炎、肥胖症；眼部疾病，包括葡萄膜炎；骨质减少、骨质疏松症、帕金森氏症(Parkinson's Disease)、骨盆发炎性疾病、牙周病、多动脉炎、多软骨炎、风湿性多肌痛、牛皮癣、再灌注损伤、风湿性关节炎、风湿性疾病(例如类风湿性关节炎、骨关节炎、牛皮癣性关节炎)、类风湿性关节炎、类肉瘤病、硬皮病、窦炎、休格连氏症候群、结肠痉挛、脊椎关节病(例如僵直性脊椎炎、反应性关节炎、莱特尔氏症候群)、全身性念珠菌病、腱炎、移植排斥反应、UTI、阴道炎；血管疾病，包括动脉粥样硬化性血管疾病；血管炎病(例如结节性多动脉炎、韦格纳氏肉芽肿病、彻奇-斯全司症候群)及血管炎。
52.如权利要求1至51中任一项的方法，其中该化合物为抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。
53.如权利要求52的方法，其中该抗体为嵌合、人类化、抗个体基因型、单链、双功能或共特异性抗体。
54.如权利要求52的方法，其中该抗体之轻链包含氨基酸序列SEQ IDNO:1、3或5。
55.如权利要求54的方法，其中该氨基酸序列SEQ ID NO:3之残基3、4、9、24、32、41、47、50、55、71及74分别为Q、L、S、R、A、G、L、D、E、F及A。
56.如权利要求54的方法，其中该氨基酸序列SEQ ID NO:3之残基3、4、9、24、32、41、47、50、55、71及74分别为R、M、F、W、Y、A、F、Y、Q、Y及T。
57.如权利要求52的方法，其中该抗体之重链包含氨基酸序列SEQ IDNO:2、4或6。
58.如权利要求52的方法，其中该抗体包含对应于该氨基酸序列SEQ IDNO:1之残基24至34的轻链CDR1氨基酸序列；对应于该氨基酸序列SEQ IDNO:1之残基50至56的轻链CDR2氨基酸序列；或对应于该氨基酸序列SEQ IDNO:1之残基89至97的轻链CDR3氨基酸序列。
59.如权利要求52的方法，其中该抗体包含对应于该氨基酸序列SEQ IDNO:3之残基24至34的轻链CDR1氨基酸序列；对应于该氨基酸序列SEQ IDNO:3之残基50至56的轻链CDR2氨基酸序列；或对应于该氨基酸序列SEQ IDNO:3之残基89至97的轻链CDR3氨基酸序列。
60.如权利要求52的方法，其中该抗体包含对应于该氨基酸序列SEQ IDNO:2之残基31至35的重链CDR1氨基酸序列；对应于该氨基酸序列SEQ IDNO:2之残基50至65的重链CDR2氨基酸序列；或对应于该氨基酸序列SEQ IDNO:2之残基99至112的重链CDR3氨基酸序列。
61.如权利要求52的方法，其中该抗体包含对应于该氨基酸序列SEQ IDNO:4之残基31至35的重链CDR1氨基酸序列；对应于该氨基酸序列SEQ IDNO:4之残基50至66的重链CDR2氨基酸序列；或对应于该氨基酸序列SEQ IDNO:4之残基99至113的重链CDR3氨基酸序列。
62.如权利要求52的方法，其中该抗体包含分别包含SEQ ID NO:1及SEQ ID NO:2之可变轻链及可变重链序列。
63.如权利要求52的方法，其中该抗体包含分别包含氨基酸序列SEQ IDNO:3及SEQ ID NO:4之可变轻链及可变重链序列。
64.如权利要求52的方法，其中该抗体包含分别包含氨基酸序列SEQ IDNO:5及SEQ ID NO:6之可变轻链及可变重链序列。
65.如权利要求52的方法，其中该抗体结合氨基酸序列SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24内之抗原决定基。
66.如权利要求52的方法，其中该抗体在由至少一个选自由以下组成之群的氨基酸残基所界定之区域内结合KIR2DL1：105、106、107、108、109、110、111、127、129、130、131、132、133、134、135、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、181及192。
67.如权利要求52的方法，其中该抗体在由至少一个选自由以下组成之群的氨基酸残基所界定之区域内结合KIR2DL1及KIR2DL2/3：105、106、107、108、109、110、111、127、129、130、131、132、133、134、135、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、181及192。
68.如权利要求52的方法，其中该抗体或片段直接或间接结合至标记、细胞毒性剂、治疗剂或免疫抑制剂。
69.如权利要求68的方法，其中该标记为化学发光标记、顺磁性标记、MRI对比剂、荧光标记、生物发光标记或放射性标记。
70.如权利要求69的方法，其中该顺磁性标记为铝、锰、铂、氧、镧、镏、钪、钇或镓。
71.如权利要求68的方法，其中该细胞毒性剂为抑制DNA、RNA或蛋白质合成之部分、放射性核种或核糖体抑制蛋白。
72.如权利要求71的方法，其中该细胞毒性剂为212Bi、131I、188Re、90Y、长春地辛(vindesine)、甲胺喋呤(methotrexate)、阿霉素(adriamycin)、顺铂(cisplatin)、商陆抗病毒蛋白(pokeweed antiviral protein)、假单胞菌(Pseudomonas)外毒素A、蓖麻毒素、白喉(diphtheria)毒素、蓖麻毒素A链或细胞毒性磷脂酶。
73.如权利要求52的方法，其中该抗体阻断或中和NK抑制作用。
74.如权利要求52的方法，其中该抗体结合至KIR2DL1、KIR2DL2或KIR2DL3中之至少一者且中和KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3介导之对NK细胞之细胞毒性的抑制作用。
75.如权利要求52的方法，其中该抗体之中和包含使得NK细胞介导之NK标靶细胞特异性溶解增加至少约20%。
76.如权利要求52的方法，其中该抗体与单株抗体1-7F9、DF200及/或NKVSF1竞争结合相同抗原决定子区。
77.如权利要求52的方法，其中该抗体结合至NK细胞表面上之至少两种抑制性KIR受体。
78.如权利要求52的方法，其中该抗体结合人类KIR2DL受体之共同抗原决定子区。
79.如权利要求52的方法，其中该抗体结合至KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3受体。
80.如权利要求52的方法，其中该抗体对KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3之亲和力为至少约104至约1010M-1。
81.如权利要求52的方法，其中该抗体对KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3之亲和力为至少约107至约109M-1。
82.如权利要求52的方法，其中该抗体展现结合KIR之解离常数小于约100nM。
83.如权利要求52的方法，其中该抗体与KIR2DL1加上2DL2/3、3DL1加上3DL2、2DL1(及2DL2/3)加上2DS4，以及2DL1(及2DL2/3)交叉反应，但不与2D24交叉反应。
84.如权利要求52的方法，其中该抗体为DF200、1-7F9或NKVSF1抗体。
85.如权利要求1至84中任一项的方法，其中该抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物以单疗法形式投与。
86.如权利要求1至84中任一项的方法，其中该抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之化合物与第二治疗剂组合投与。
87.如权利要求86的方法，其中该第二治疗剂为减轻炎症之药剂。
88.如权利要求86的方法，其中该第二治疗剂为小分子化学剂。
89.如权利要求86的方法，其中该第二治疗剂为DMARD，视情况为抗-TNFα抗体、小分子酪氨酸激酶抑制剂或甲胺喋呤(methotrexate，MTX)。
90.如权利要求86的方法，其中该第二治疗剂为除具有IgG1或IgG3同型之抗体以外的药剂。
91.如权利要求1至91中任一项的方法，其中该抑制KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3之化合物为能够阻断或中和由KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3介导之NK抑制作用且从而增强NK细胞针对以其它方式阻断之标靶细胞的活性之抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体。
92.如权利要求91的方法，其中该抗体为结合KIR2DL1及KIR2DL2/3之抗-KIR抗体。
93.如权利要求92的方法，其中该抗-KIR抗体与1-7F9竞争结合至KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3。
94.如权利要求93的方法，其中该抗体为1-7F9。
95.如权利要求52至84中任一项的方法，其中该抗体包含1-7F9之VL域及VH域。
96.如权利要求52至84中任一项的方法，其中该抗体包含1-7F9之VLCDR及VH CDR。
97.如权利要求52至84中任一项的方法，其中该抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体以包含有效量之该抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体之医药学上可接受之组合物形式投与。
98.如权利要求97的方法，其中该组合物不含任何其它医药活性剂。
99.如权利要求52至84中任一项的方法，其中该抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体以一定量投与以使得NK细胞上之该KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3实质上完全饱和达至少约1周之时段。
100.如权利要求52至84中任一项的方法，其中该抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体以一定量投与以使得NK细胞上之该KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3实质上完全饱和达至少约2周之时段。
101.如权利要求52至84中任一项的方法，其中该抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体以一定量投与以使得NK细胞上之该KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3实质上完全饱和达至少约1个月之时段。
102.如权利要求52至84中任一项的方法，其中该抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体以约每2周一次之给药频率多次投与。
103.如权利要求52至84中任一项的方法，其中该抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体以约每1个月一次之给药频率多次投与。
104.如权利要求52至84中任一项的方法，其中该抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2及/或抗-KIR2DL3抗体以约每2个月一次或每2个月以上之时段一次之给药频率多次投与。
105.一种用于治疗自体免疫病症的组合物，其包含抗-KIR2DL1抗体。
106.一种用于治疗自体免疫病症的组合物，其包含抗-KIR2DL2抗体。
107.一种用于治疗自体免疫病症的组合物，其包含抗-KIR2DL3抗体。
108.一种用于治疗发炎病症的组合物，其包含抗-KIR2DL1抗体。
109.一种用于治疗发炎病症的组合物，其包含抗-KIR2DL2抗体。
110.一种用于治疗发炎病症的组合物，其包含抗-KIR2DL3抗体。
111.一种抗-KIR2DL1抗体之用途，其用于制备治疗自体免疫病症之药物。
112.一种抗-KIR2DL2抗体之用途，其用于制备治疗自体免疫病症之药物。
113.一种抗-KIR2DL3抗体之用途，其用于制备治疗自体免疫病症之药物。
114.一种抗-KIR2DL1抗体之用途，其用于制备治疗发炎病症之药物。
115.一种抗-KIR2DL2抗体之用途，其用于制备治疗发炎病症之药物。
116.一种抗-KIR2DL3抗体之用途，其用于制备治疗发炎病症之药物。
117.一种制备用于治疗发炎或自体免疫病症之抗体的方法，该方法包含以下步骤：
(a)用包含KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽之免疫原使非人类哺乳动物免疫；
(b)选择来自该免疫之哺乳动物的抗体，其中该等抗体结合该KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽；及
(c)选择(b)中增强NK细胞对T细胞之消除作用的抗体。
118.一种制备用于治疗发炎或自体免疫病症之抗体的方法，该方法包含藉由噬菌体呈现技术库提供抗体库，其中该等抗体结合该KIR2DL1、KIR2DL2及/或KIR2DL3多肽；及选择增强NK细胞对T细胞之消除或消耗作用的抗体。
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