MX2013013635A - Anticuerpos anti-receptores tipo inmunoglobulina citoliticos (kir) para el tratamiento de transtornos inflamatorios. - Google Patents

Abstract

Se describen compuestos que inhiben el polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 que comprende los compuestos (por ejemplo, anticuerpos anti-KIR2DL1, 2, y/o 3) que neutralizan los receptores inhibitorios de las células NK y métodos de usar tales compuestos y composiciones que los contienen en el tratamiento y prevención del trastorno inflamatorio o autoinmunes.

Description

ANTICUERPOS ANTI -RECEPTORES TIPO INMÜNOGLOBULINA CITOLITICOS (KIR) PARA EL TRATAMIENTO DE TRASTORNOS INFLAMATORIOS Campo de la Invención Esta invención se refiere a la modulación de la actividad de las células NK usando anticuerpos anti-KIR inmunomoduladores para tratar o prevenir las enfermedades inflamatorias y las enfermedades autoinmunes, en particular enfermedades mediadas, al menos en parte, por células T proinflamatorias .

Antecedentes de la Invención Las células citolíticas naturales (NK, por sus siglas en inglés) son un subconjunto de linfocitos granulares grandes que actúan como células imnunitarias citotóxicas. La actividad citotóxica mediada por las células NK naturalmente contra las células blanco (por ejemplo, células cancerosas, células infectadas viralmente) se expresa generalmente como el resultado de un "equilibrio" de las señales positivas y negativas transmitidas respectivamente por receptores de la superficie celular activadores e inhibidores.

Las células NK se pueden identificar por numerosos etiquetadores de la superficie celular conocidos que varían entre las especies (por ejemplo, en los seres humanos a menudo se usan CD56, CD16, NKp4 , NKp46, y NKp30; en los ratones a menudo se usan NKl.l, Ly49A-w, CD49b) . En un estado Ref. 244693 activo, las células NK son capaces de destruir ciertas células tumorales antologas, alogeneicas, e incluso xenogeneicas , células infectadas con virus, ciertas bacterias (por ejemplo, Salmonella typhi) , y otras células blanco. Las células NK parecen destruir con preferencia células blanco que expresan poco o ninguna de las moléculas de histocompatibilidad mayor de Clase I (MHCI o MHC-I) sobre su superficie. Las células NK también destruyen células blanco a las que se han unido las moléculas de anticuerpo, un mecanismo conocido como citotoxicidad dependiente de anticuerpo (ADCC, por sus siglas en inglés) . En la acción contra las células blanco, las células NK pueden liberar proteínas formadoras de poro llamadas perforinas, enzimas proteolíticas llamadas granzimas y citoquinas/quimoquinas (por ejemplo, TNF , IFNy) que llevan directamente a la apoptosis o lisis de las células blanco, o que regulan otras respuestas inmunológicas .. Después de la activación, . las células NK también pueden expresar el ligando Fas (FasL) , que permite que estas células induzcan apoptosis en las células que expresan Fas.

Normalmente se necesitan suficiente actividad de las células NK y recuento celular de NK para montar una adecuada respuesta inmunológica mediada por células NK. Las células NK pueden estar presentes en cantidades normales en un individuo, pero si no se activan estas células no serán efectivas para realizar las funciones vitales del sistema inmunitario, tal como eliminar las células anormales. La disminución de la actividad de las células NK se vincula al desarrollo y progresión de muchas enfermedades. Por ejemplo, la investigación ha demostrado que la baja actividad de las cé^las NK causa mayor susceptibilidad a enfermedades tales como síndrome de fatiga crónica (CFS, por sus siglas en inglés), infecciones virales y el desarrollo de los cánceres.

La actividad de las células NK está regulada por los receptores de modulan la actividad de las células NK (NKCAMR, por sus siglas en inglés) , que pueden ser específicos para diversos ligandos tales como moléculas MHC-I, homólogos MHC-I, u otras moléculas biológicas expresadas en las células blanco. Las células NK en un individuo normalmente presentan numerosos receptores activadores e inhibidores. La actividad de las células NK está regulada por un equilibrio de las señales transducidas a través de estos receptores activadores e inhibidores. La mayor parte de los receptores que modulan la actividad de las células NK parecen pertenecer a una de dos clases de proteínas: la superfamilia del receptor tipo inmunoglobulina (Ig) (IgSF) o la superfamilia del receptor tipo lectina C (CTLR, por sus siglas en inglés) . Ver, por ejemplo, Radaev y Sun (2003) Annu. Rev. Biomol . Struc . 32: 93-114) . Sin embargo, se conocen otras formas de NKCAMR.

Muchos receptores activadores de las células NK pertenecen a la superfamilia de Ig (IgSF) (tales receptores también se pueden denominar en la presente como receptores tipo Ig o "ILR") . Los receptores de NK ILR activadores (AILR) incluyen, por ejemplo, CD2 , CD16, CD69, molécula 1 accesoria DNAX (DNAM-1) , 2B4 , NK1.1 ; receptores activadores tipo (Ig) inmunoglobulina citolíticos (KAR, por sus siglas en inglés) ; ILT/LIR; y receptores de citotoxicidad naturales (NCR, por sus siglas en inglés), tales como NKp44, NKp46, y NKp30. Varios otros receptores activadores pertenecen a la superfamilia CLTR (por ejemplo, NKRP-1, CD69; heterodímeros CD94/NKG2C y CD94/NKG2E, homodímero NKG2D, y en ratones, las isoformas activadoras de Ly49, tales como Ly49A-D) . Otros receptores activadores más (por ejemplo, LFA-1 y VLA-4) pertenecen a la superfamilia de la proteína integrina y otros receptores activadores incluso pueden tener otras estructuras distinguibles. Muchos receptores activadores poseen dominios que se unen a moléculas MHC-I, y dominios citoplásmicos que son relativamente cortos y carecen de los motivos de señalización del motivo de inhibición de inmunorreceptor basado en la tirosina (ITIM, por sus siglas en inglés) característicos de los receptores de NK inhibidores. Los dominios de transmembrana de estos receptores normalmente incluyen un residuo de aminoácido cargado que facilita su asociación con las moléculas asociadas a la transducción de señales, por ejemplo, CD3zeta, FceRIy, DAP12, y DAP10 (2B4, sin embargo, parece ser una excepción a esta regla general) , que contiene secuencias de aminoácidos cortas denominadas un "motivo activador de inmunorreceptor basado en tirosina" (ITAM) que propaga las señales activadoras de las células NK. El receptor 2B4 contiene 4 motivos de cambio del inmunorreceptor basado en tirosina (ITSM) en su cola citoplasmática . Los motivos ITSM también se pueden hallar en los NKCAR CS1/CRACC y NTB-A. Los dominios citoplasmáticos de 2B4 y SLAM contienen dos o más motivos basados en tirosina únicos que se asemejan a los motivos presentes en los receptores activadores e inhibidores y pueden reclutar las proteínas SHP-2 que contienen el dominio de SH2 y proteína asociada a SLAM (SAP) .

Las moléculas inducibles por estrés, por ejemplo, MIC-A, MIC-B, y ULBP (en los seres humanos) , y Rae-1 y H-60 (en ratones) , pueden actuar como ligandos para los receptores activadores, tales como el .homodímero NKG2D. Los carbohidratos celulares, antígenos patogénicos, y anticuerpos también pueden ser ligandos de los receptores activadores. Por ejemplo, NKR-P1 puede unirse a los ligandos de carbohidrato y desencadenar la activación de las células NK, en particular contra células tumorales que exhiben patrones de glicosilación aberrante. Las hemaglutininas virales pueden servir como ligandos para receptores citotóxicos naturales (NCR), tales como los NKCAR ILR NKp30, NKp44 , NKp46 y NKp80.

Los receptores activadores pueden transducir directamente señales de activación o pueden actuar | en conexión con las moléculas adaptadoras u otros receptores, sea en el contexto de una respuesta coordinada entre los receptores que algunas veces son singularmente efectivos o en el contexto de apareamientos correceptor-receptor. Por ejemplo, los NCR normalmente carecen de ITAM y, por consiguiente, se unen a moléculas adaptadoras a través de un residuo cargado en sus dominios de transmembrana (por ejemplo, NKp30 se asocia con la cadena zeta CD3 ; NKp44 se asocia con DAP12 y/o KARAP; NKp46 se acopla con la cadena zeta CD3 y cadena FcRIy) , que su vez son capaces de reclutar proteína tirosina cinasas (PTK, por sus siglas en inglés) a fin de propagar señales activadoras de las células NK. CD16, que es un receptor activante importante para la ADCC mediada por células NK y la producción de citoquinas, se asocia con homodímeros- -o heterodímeros formados de cadenas zeta y/o gamma de CD3. NKG2D parece cumplir un papel complementario y/o sinérgico con NCR y receptores activadores en la activación de las células NK. La activación de las células NK contra blancos particulares puede requerir la activación coordinada de múltiples receptores activadores o NCR, o solo la acción de un receptor único. Otras moléculas de superficie desencadenantes que incluyen 2B4 y NKp80 parecen actuar como correceptores para la activación de las células NK.

La activación de las isoformas de los receptores tipo inmunoglobulina citolíticos humanos (KIR) j (por ejemplo, KIR2DS y KIR3DS) y las proteínas Ly-49 murinas {por ejemplo, Ly-49D y Ly-49H) son expresadas por algunas células NK. La estimulación o tolerancia de células citolíticas naturales (NK) se obtiene a través de una intercomunicación de las señales derivadas de los receptores activadores e inhibidores de la superficie celular. Los receptores tipo inmunoglobulina de la células citolítica (KIR) son una familia de receptores activadores e inhibidores altamente polimórficos de la función de las células NK humanas. Los dominios estructurales distintos en diferentes miembros de la familia KIR determinan la función por la provisión de sitios de acoplamiento para los ligandos o proteínas de señalización. Ver Campbell & Purdy (2011) Immunology 132(3) : 315-25. Estas moléculas difieren de sus contrapartes inhibidoras, que se describen a continuación, por carecer de ITIM en sus ... dominios citoplásmicos relativamente cortos, y que poseen una región de transmembrana cargada que se asocia con los polipéptidos transductores de señales, tales como dímeros ligados a disulfuro de DAP12.

Los receptores inhibidores de las células NK ILR (IgSF) incluyen numerosos KIR humanos específicos para los alotipos HLA-A, -B, o -C, los KIR pueden reconocer múltiples alelos dentro de un alotipo particular, por ejemplo, KIR2DL1 reconoce los alotipos HLA-Cw2, Cw4 , y Cw6. La superfamilia de receptores inhibidores incluyen elementos de la familia de proteína CD94/NKG2, que comprende receptores formados por CD94 tipo lectina con varios miembros de la familia NKG2 , tales como NKG2A, y reconocen las moléculas MCH-I HLA-E y Qa-1 no clásicas (en seres humanos y ratones, respectivamente) , y las moléculas de Ly49 murinas que reconocen las moléculas MHC-I clásicas en ratones. Aún con mayor contraste, NKRP1A, Nkrplf y Nkrpld son receptores inhibidores cuyos ligandos no están relacionados con MHC, pero son miembros de la familia CTLR expresados en varios tipos celulares, tales como célula dendríticas, macrófagos, y linfocitos.

Los NKCIR específicos de MHC clase I incluyen receptores Ly-49 CTLR (en ratones) ; El receptor tipo inmunoglobulina leucocitario de los receptores IgSF (LIR) (en seres humanos) , KIR (por ejemplo, receptores tipo inmunoglobulina de células citolíticas p58 y p70)„.(.en.- seres humanos) , y receptores CTLR CD94/NKG2 (en ratones y seres humanos) . Todos los NKCIR específicos para MHC-I parecen usar un mecanismo inhibitorio común que aparentemente involucra la fosforilación de los ITIM en sus dominios citoplásmicos en el curso de la unión a MHC-I y el reclutamiento de las tirosina fosfatasas (por ejemplo, SHP-1 y SHP-2) en los ITIM fosforilados , lo que produce la inhibición de las proteína tirosina cinasas (PTK) proximales involucradas en la activación NK a través de los NKCAR. Los anticuerpos contra los receptores moduladores de la actividad, tales como KIR, se han descrito previamente. También ha habido alguna sugerencia de combinar anticuerpos del receptor anti-NK, tales como anticuerpos anti-KIR, con otros agentes anticáncer en la técnica previa. Por ejemplo, WO 2004/056392 describe anticuerpos anti-NKp30 y/o anti-NKp46 usados en la mezcla con interleuquina-2 (IL-2) . WO 2008/084106 describe formulaciones anti-KIR, dosis y regímenes de dosis. WO 2005/079766 también describe combinaciones de anticuerpos (por ejemplo, anticuerpos anti-factor tisular) que incluyen anticuerpos anti-KIR para usar en las terapias de cáncer. WO 2005/003168 y WO 2005/003172 describe combinaciones de numerosos anticuerpos anti-KIR con una variedad de agentes, que incluyen IL-2 e interleuquina-21 (IL-21) . WO 2005/037306 describe de modo similar combinaciones de IL-21, derivados de IL-21, y análogos de IL-21 en combinación con los anticuerpos anti.-KIR. WO. 2005/009465 describe la combinación de un anticuerpo terapéutico (por ejemplo, Rituxan) en combinación con un compuesto que bloquea un receptor inhibitorio o estimula un receptor activante de las células NK (por ejemplo, un anticuerpo anti-KIR monoclonal, tales como el anticuerpo monoclonal DF200, o un anticuerpo monoclonal anti-NKp30) a fin de aumentar la eficiencia del tratamiento con anticuerpos terapéuticos en sujetos humanos.

Enfermedad autoinmune Un trastorno autoinmune es una afección que produce que el sistema inmunológico ataque y destruya en forma errónea el tejido corporal sano. Existen más de 80 tipos diferentes de trastornos autoinmunes. Normalmente los leucocitos del sistema inmunológico ayudan a proteger al cuerpo de las sustancias perjudiciales, llamadas antígenos. Los ejemplos de antígenos incluyen bacterias, virus, toxinas, células cancerosas, y sangre o tejidos de otra persona o especie. El sistema inmunológico produce anticuerpos que destruyen estas sustancias perjudiciales.

Sin embargo, en los pacientes con un trastorno autoinmune, el sistema inmunológico no puede distinguir entre propio y no propio (por ejemplo, tejido sano y antígenos extraños) . El resultado es una respuesta inmunológica que destruye los tej idos corporales normales . Esta respuesta es una reacción de hipersensibilidad similar , a la respuesta en las afecciones alérgicas.

En las alergias, el sistema inmunológico reacciona a una sustancia externa que normalmente debería ignorar. En los trastornos autoinmunes, el sistema inmunológico reacciona a los te idos corporales ' normales que normalmente debería ignora .

Aún se desconoce qué causa que el sistema inmunológico ya no reconozca la diferencia entre tejido sano y antígenos.

Una teoría es que algunos microorganismos (tales como bacterias o virus) o fármacos pueden desencadenar algunos de estos cambios, en especial en personas que tienen genes que los hacen más propensos a adquirir trastornos autoinmunes.

Un trastorno autoinmune puede producir la destrucción de uno o más tipos de tejido corporal, crecimiento anormal de un órgano, y cambios en la función del órgano. Un trastorno autoinmune puede afectar uno o más tipos de órgano o tejido. Los órganos y tejidos comúnmente afectados por los trastornos autoinmunes incluyen vasos sanguíneos, tejidos conectivos, glándulas endocrinas (por ejemplo, tiroides o páncreas) , articulaciones, músculos, eritrocitos, y piel. Una persona puede tener más de un trastorno autoinmune al mismo tiempo.

Los síntomas de una enfermedad autoinmune varían sobre la base de la enfermedad y ubicación de la respuesta inmunológica anormal. Los síntomas comunes que a menudo se producen en las enfermedades autoinmunes incluyen .fatiga, fiebre, y una sensación de enfermedad general (malestar) . Las pruebas que se pueden realizar para diagnosticar un trastorno autoinmune puede incluir: pruebas de anticuerpo antinuclear, pruebas de autoanticuerpo, CBC, proteína C reactiva (CRP, por sus siglas en inglés) , y velocidad de sedimentación eritrocitaria (ESR, por sus siglas en inglés) .

Los medicamentos a menudo se prescriben para controlar o reducir la respuesta del sistema inmunológico . A menudo se llaman medicamentos inmunosupresores . Tales medicamentos pueden incluir corticoides (tales como prednisona) y fármacos no ¦ esteroides tales como azatioprina, ciclofosfamida , micofenolato, sirolimus o tacrolimus.

Las complicaciones son comunes y dependen de la enfermedad. Los efectos secundarios de las medicaciones usadas para suprimir el sistema inmunológico pueden ser graves, tales como infecciones que pueden ser difíciles de controlar. "Autoimmune disorders." MedlinePlus— U.S. National Library de Medicine (April 19, 2012) .

Afecciones inflamatorias La inflamación es parte de la respuesta biológica compleja de los tejidos vasculares a los estímulos perjudiciales, tales como patógenos, células dañadas, o irritantes. La inflamación es un intento protector por parte del organismo de eliminar los estímulos lesionantes e iniciar el proceso de cura. .Si la inflamación, las heridas -, e infecciones nunca se curarían. De modo similar, la destrucción progresiva del tejido puede comprometer la supervivencia del organismo. Sin embargo, la inflamación crónica también puede llevar a un huésped de enfermedades, tales como fiebre de heno, periodontitis , aterosclerosis , artritis reumatoide, e incluso cáncer (por ejemplo, carcinoma de vesícula biliar) . Esta es la razón por la que la inflamación está normalmente rigurosamente regulada por el cuerpo .

La inflamación se puede clasificar como aguda o crónica. La inflamación aguda es la respuesta inicial del cuerpo a los estímulos perjudiciales y se obtiene por el aumento de movimiento del plasma y los leucocitos (especialmente los granulocitos ) provenientes de la sangre en los tejidos lesionados. Una cascada de eventos bioquímicos se propaga y madura la respuesta inflamatoria, que involucra el sistema vascular local, el sistema inmunológico, y varias células del tejido lesionado. La inflamación prolongada, conocida como inflamación crónica, lleva a un cambio progresivo en el tipo de células presentes en el sitio de inflamación y se caracteriza por la destrucción y cura simultánea del tejido del proceso inflamatorio. Kindt, et al. (2006) Kuby Immunology [6th Ed.] Las células T están involucradas en la promulgación de la inflamación..La di erenciación de las células T inactivas lleva a la generación de los subconjuntos de células T, cada uno posee distintos perfiles de expresión de citoquinas para cumplir diferentes funciones inmunológicas . A través de la activación de vías de señalización separadas, este proceso produce' células auxiliares T (Th) diferenciadas, denominadas Thl, Th2 y Thl7, e induce células T regulatorias , que suprimen las células Th. Estas células diferentes son importantes para combatir enfermedades infecciosas y cánceres; sin embargo, cuando son aberrantes, pueden ser responsables de las enfermedades inflamatorias crónicas. Una de estas enfermedades es la enfermedad intestinal inflamatoria (IBD) , en la que cada subconjunto de células T puede tener un papel en la enfermedad. Zenewicz, efc al. (2009) Trends en Molecular Medicine 15(5) : 199-207.

Si bien las células NK han recibido una gran parte de atención en la bibliografía científica para su potencial contribución a las respuestas anti-tumoral y anti-viral, se han dirigido pocos estudios a examinar el papel de las células NK en inflamación y autoinmunidad, en particular los subconjuntos que expresan KIR2DL1, 2 y/o 3. La estrategia respecto de estas células NK, en todo caso, ha sido buscar eliminar o inhibir las células NK sobre la base que ellos pueden contribuir a la inflamación y autoinmunidad. El efecto de la potenciación mediada por KIR2DL1, 2 y/o 3 de la citotoxicidad de las células NK . en los escenarios inflamatorios no ha sido abordado hasta la fecha.

En consecuencia, se necesitan en la técnica métodos de usar la modulación de las células NK para proporcionar mejor beneficio a los pacientes.

Breve Descripción de la Invención Los modelos in vivo (ratones transgénicos para KIR2DL3 y sus ligandos HLA) desarrollados específicamente para estudiar el bloqueo KIR2DL1, 2 y 3 humano mostraron que la administración de un anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2, o 3 es capaz de inducir las células NK para reducir o eliminar de modo | eficiente los blastos concanavalina A (con A) . La Con A actúa principalmente en los linfocitos T y produce crecimiento y división de los linfocitos y en consecuencia a menudo se ha usado como modelo de inflamación. Los resultados sugieren que más que buscar reducir o eliminar células NK positivas para KIR2DL1, 2 y/o 3 en la inflamación y autoinmunidad, puede ser beneficioso potenciar su actividad, ya que ellas contribuyen a la eliminación de las células T proinflamatorias , que incluyen pero sin limitación las células T en circulación, sin inducir toxicidad relacionada con la autorreactividad.

La presente invención proporciona métodos para tratar un individuo que tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune. Los métodos pueden comprender administrar al individuo una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. El individuo puede ..tener un trastorno inflamatorio o autoinmune mediado por las células T, por ejemplo, un trastorno que involucra las células T proinflamatorias , activadas y/o proliferantes (por ejemplo, en circulación o en un tejido enfermo o inflamado), células T CD4+, células T infiltrantes, y/o células T que expresan HLA-cw3 y/o HLA-cw4. En una modalidad, el individuo puede tener un trastorno inflamatorio o autoinmune seleccionado del grupo que consiste en lupus eritematoso sistémico, granulomatosis de Wegener, hepatitis autoinmune, enfermedad de Crohn, escleroderma, colitis ulcerativa, síndrome de | Sjógren, diabetes mellitus Tipo 1, uveítis, miocarditis, fiebre reumática, espondilitis anquilosante, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, y psoriasis.

En una modalidad, los anticuerpos anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 se pueden caracterizar sobre la base de su capacidad para bloquear o neutralizar inhibición NK mediada por KIR2DL1, 2 y/o 3 y de este modo potenciar la actividad de las células NK contra las células blanco bloqueadas de otro modo.

En una modalidad, el anticuerpo puede ser un anticuerpo anti-KIR único o combinación de anticuerpos anti-KIR. En otra modalidad, el anticuerpo puede ser una combinación de un anticuerpo anti-KIR2DLl y un anticuerpo anti -KIR2DL2 , o un anticuerpo anti-KIR2DLl y un anticuerpo anti -KIR2DL3 , o un anticuerpo anti-KIR2DLl y un anticuerpo anti-KIR2DL2 y un anticuerpo anti-KIR2DL3 , o un anticuerpo anti-KIR que ,se une al menos dos diferentes human productos génicos del receptor inhibitorio KIR seleccionado del grupo que consiste en KIR2DL1, 2 y/o 3, o un anticuerpo anti-KIR se une a cada uno de KIR2DL1, 2 y 3, donde el anticuerpo puede ser capaz de neutralizar inhibición mediada por KIR de la citotoxicidad de las células NK en las células NK que expresan los particulares receptores de KIR2DL1, 2 y/o 3.

En una modalidad, una cantidad efectiva de uno o más anticuerpos KIR2DL1, 2 y/o 3 puede ser una cantidad de tal anticuerpo que produce saturación sustancialmente completa (90%, opcionalmente 95% de ocupación del receptor) de KIR2DL1, 2 y/o 3 sobre las células NK durante un período de al menos aproximadamente 1 semana, opcionalmente aproximadamente 2 semanas, opcionalmente aproximadamente 3 semanas, opcionalmente aproximadamente un mes, después de la administración del anticuerpo.

En una modalidad, el anticuerpo se puede dosar en una cantidad y a una frecuencia que produce saturación sustancialmente completa (90%, opcionalmente 95% de ocupación del receptor) del KIR2DL1, 2 y/o 3 sobre las células NK durante un período de al menos aproximadamente 1 semana sin una "de-saturación" significativa durante el período de tratamiento. En una modalidad, una cantidad efectiva de uno o más anticuerpos KIR2DL1 , 2 y/o 3 puede ser una cantidad de tal' anticuerpo que produce saturación . sustancialmente completa de KIR2DL1, 2 y/o 3 (90% de ocupación de KIR2DL1, 2 y/o 3, opcionalmente 95% de ocupación de KIR2DL1, 2 y/o 3) sobre las células NK circulantes durante un período de al menos aproximadamente 2 semanas, opcionalmente aproximadamente 3 semanas, opcionalmente aproximadamente un mes, después de la administración del anticuerpo, y el anticuerpo se puede dosificar al menos dos veces, donde la administración de dosis ocurre aproximadamente una vez cada 2 semanas, una vez cada 3 semanas, o una vez por mes (las dosis posteriores se separan en aproximadamente 2 semanas, 3 semanas o un mes) .

En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2, y/o 3 se puede dosificar en cantidad y a una frecuencia que produce saturación sustancialmente completa (90%, opcionalmente 95% de ocupación del receptor) del KIR2DL1, 2 y/o 3 sobre las células NK durante un período de al menos aproximadamente 1 semana y que permite una "de-saturación" significativa durante el período de tratamiento. En una modalidad, una cantidad efectiva de uno o más anticuerpos KIR2DL1, 2 y/o 3 puede ser una cantidad de tal anticuerpo que produce saturación sustancialmente completa de KIR2DL1, 2 y/o 3 (90% de ocupación de KIR2DL1, 2 y/o 3, opcionalmente 95% de ocupación de KIR2DL1, 2 y/o 3) sobre las células NK circulantes durante un período de al menos aproximadamente 2 semanas,..¦ ·. ...opcionalmente . aproximadamente 3 semanas, opcionalmente aproximadamente un mes, después de la administración del anticuerpo, y el anticuerpo se puede dosificar al menos dos veces, donde la dosificación ocurre aproximadamente una vez cada dos meses (las dosis posteriores se separan en aproximadamente dos meses) .

En una modalidad, un método para producir un anticuerpo puede comprender: (a) inmunizar un mamífero no humano con un inmunógeno que comprende un polipéptido de KIR2DL1, 2 y/o 3; (b) seleccionar anticuerpos de el mamífero inmunizado, donde los anticuerpos unen el polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3, y (c) seleccionar anticuerpos de (b) que potencian la eliminación de células NK' de las células T, en particular células T CD4+ activadas. En otra modalidad, se puede determinar un anticuerpo seleccionado en la etapa (c) que es adecuado para el tratamiento de un trastorno inflamatorio o autoinmune. En una modalidad adicional, el método de producir un anticuerpo puede comprender proporcionar una biblioteca de anticuerpos, opcionalmente por técnicas de despliegue en fago. En una modalidad, un método para producir un anticuerpo puede comprender: (a) proporcionar una biblioteca de anticuerpos por técnicas de despliegue en fago; (b) seleccionar anticuerpos de la biblioteca, donde los anticuerpos se unen el polipéptido de IR2DL1, 2, y/o 3, y (c) seleccionar anticuerpos de (b) que potencian la eliminación de células NK' de las células T, en particular células T CD4+ activadas. Con preferencia, se determinará que un anticuerpo seleccionado en la etapa (c) es adecuado para el tratamiento de un trastorno inflamatorio o autoinmune.

En una modalidad, un método para reducir o eliminar una célula T in vitro o in vivo puede comprender poner en contacto una célula T con un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3, en presencia de las células (por ejemplo, células NK) que expresan un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En otra modalidad, las células T pueden ser células T proinflamatorias , activadas y/o proliferantes, células T CD4+, células T infiltrantes, y/o células T que expresan HLA-cw3 y/o HLA-cw4.

En una modalidad, un método para reducir o eliminar células T in vivo puede comprender administrar a un individuo que tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune, con preferencia una enfermedad mediada al menos en parte por las células T, una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En otra modalidad, las células T pueden ser células T activadas y/o proliferantes, células T CD4+, células T proinflamatorias (por ejemplo en circulación o en un tejido enfermo o inflamado), células T que expresan HLA-cw3 y/o HLA-cw4, o células T infiltrantes. En una modalidad adicional, las células T infiltrantes pueden infiltrar en los tejidos enfermos que incluyen pero sin limitación te dos articulares, sinoviales. o fluido sinovial, en el sistema nervioso central, colon, o tejido dérmico. En una modalidad, un método para reducir o eliminar células T que comprende administrar a un individuo que tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En otra modalidad, las células T son células T activadas y/o proliferantes, células T CD4+, células T proinflamatorias (por ejemplo en circulación o en un tejido enfermo o inflamado), células T infiltrantes (infiltración en tejidos | enfermos, por ejemplo tejidos articulares sinoviales o fluido sinovial, en el sistema nervioso central, colon, tejido dérmico), y/o células T que expresan HLA-cw3 y/o HLA-cw4. En otra modalidad, el paciente puede tener una enfermedad mediada al menos en parte por las células T. En una modalidad adicional, una cantidad efectiva puede ser una cantidad de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 efectiva para reducir el número de las células T.

En una modalidad, un método para células T activadas y/o proliferantes puede comprender administrar a un individuo que tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune, con preferencia una enfermedad mediada al menos en parte por las células T, una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad, un método para reducir o eliminar células T células T CD4+ que < . comprende administrar a un individuo que tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune, con preferencia una enfermedad mediada al menos en parte por las células T, una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad, un método para células T proinflamatorias (por ejemplo en circulación o en un tejido enfermo o inflamado) puede comprender administrar a un individuo que tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune, con preferencia una enfermedad mediada al menos en parte por las células T, una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad, un método para reducir o eliminar células T infiltrantes (infiltración en tejidos enfermos, por ejemplo tejidos articulares sinoviales o fluido sinovial, en el sistema nervioso central, colon, tejido dérmico) puede comprender administrar a un individuo que tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune, con preferencia una enfermedad mediada al menos en parte por las células T, una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad adicional, el compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 es un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un péptido, un glicoalcoide , un ácido nucleico antisentido, una ribozima, un retinoide, un avemir, una molécula pequeña, o cualquiera de sus combinaciones. En una modalidad adicional, el compuesto es un anticuerpo quimérico, humanizado, anti-idiotípico, cadena simple, bifuncional, o co-específico o fragmento de anticuerpo de estos.

En una modalidad, un método para reducir o eliminar células T que expresan HLA-cw3 y/o HLA-cw4, puede comprender administrar a un individuo que tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune, con preferencia una enfermedad mediada al menos en parte por las células T, una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad adicional, el compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 es un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un péptido, un glicoalcoide, un ácido nucleico antisentido, una ribozima, un retinoide, un avemir, una molécula pequeña, o cualquiera de sus combinaciones. En una modalidad adicional, el compuesto es un anticuerpo quimérico, humanizado, anti-idiotípico, cadena simple, bifuncional, o co-específico o fragmento de anticuerpo de este.

En una modalidad adicional, el compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 es un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un péptido, un glicoalcoide, un ácido nucleico antisentido, una ribozima, un retinoide, un avemir, una molécula pequeña, o cualquiera de sus combinaciones. En una modalidad adicional, el compuesto es un anticuerpo quimérico, humanizado, anti-idiotípico, cadena simple.., .,bifuncional,, . . o co-específico o fragmento de anticuerpo de este.

En una modalidad adicional, el compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1 , 2, y/o 3 es un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un péptido, un glicoalcoide, un ácido nucleico antisentido, una ribozima, un retinoide, un avemir, una molécula pequeña, o cualquiera de sus combinaciones. En una modalidad adicional, el compuesto es un anticuerpo quimérico, humanizado, anti-idiotípico, cadena simple, bifuncional, o co-específico o fragmento de anticuerpo de este.

En una modalidad, un método para tratar un trastorno inflamatorio puede comprender: (a) determinar si un individuo tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune ; y (b) si el individuo tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune, tratar el individuo con una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En otra modalidad, un método para tratar un trastorno autoinmune puede comprender: (a) determinar si un individuo tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune; y (b) si el individuo tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune, tratar el individuo con una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad adicional, el compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 es un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un péptido, un glicoalcoide , un ácido nucleico antisentido,, una ribozima, un retinoide, un avemir, una molécula pequeña, o cualquiera de sus combinaciones. En una modalidad adicional, el compuesto es un anticuerpo quimérico, humanizado, anti-idiotípico, cadena simple, bifuncional, o co-específico o fragmento de anticuerpo de este.

En una modalidad, un método para tratar un trastorno inflamatorio puede comprender: (a) determinar si un individuo tiene un trastorno inflamatorio mediado al menos en parte por células T, por ejemplo, células T proinflamatorias , activadas y/o proliferantes (por ejemplo en circulación o en un tejido enfermo o inflamado), células T CD4+, células T infiltrantes, y/o células T que expresan HLA-cw3 y/o HLA-cw4; y (b) si el individuo tiene un trastorno inflamatorio mediado al menos en parte por las células T, tratar el individuo con una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad adicional, el compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 es un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un péptido, un glicoalcoide , un ácido nucleico antisentido, una ribozima, un retinoide, un avemir, una molécula pequeña, o cualquiera de sus combinaciones. En una modalidad adicional, el compuesto es un anticuerpo quimérico, humanizado, anti-idiotípico, cadena simple, bifuncional, o co-específico o fragmento de anticuerpo de este.

. En una modalidad, un .método para tratar un trastorno autoinmune puede comprender: (a) determinar si un individuo tiene un trastorno autoinmune mediado al menos en parte por células T, por ejemplo, células T proinflamatorias , activadas y/o proliferantes (por ejemplo en circulación o en un tejido enfermo o inflamado), células T CD4+, células T infiltrantes, y/o células T que expresan HLA-cw3 y/o HLA-c 4; y (b) si el individuo tiene un trastorno autoinmune mediado al menos en parte por las células T, tratar el individuo con una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad adibional, el compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 es un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un péptido, un glicoalcoide , un ácido nucleico antisentido, una ribozima, un retinoide, un avemir, una molécula pequeña, o cualquiera de sus combinaciones. En una modalidad adicional, el compuesto es un anticuerpo quimérico, humanizado, anti-idiotípico, cadena simple, bifuncional, o co-específico o fragmento de anticuerpo de este.

En una modalidad, un método para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un individuo puede comprender: (a) evaluar la presencia, etapa y/o evolución de la enfermedad inflamatoria en un individuo; y (b) administrar a el individuo una dosis efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. Opcionalmente , ^evaluar la presencia, etapa, y/o evolución de la. : enfermedad en un individuo puede comprender analizar los niveles de autoanticuerpos , CRP, o cualquier enzima proteolítica, mediador inflamatorio o etiquetador de la inflamación en curso. Si se determina que el individuo es adecuado para el tratamiento con un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 (por ejemplo el individuo tiene una exacerbación de artritis, ) , administrar a el individuo una dosis efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad adicional, el compuesto que inhibe un polipéptido ¿le KIR2DL1, 2, y/o 3 es un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un péptido, un glicoalcoide , un ácido nucleico antisentido, una ribozima, un retinoide, un avemir, una molécula pequeña, o cualquiera de sus combinaciones. En una modalidad adicional, el compuesto es un anticuerpo quimérico, humanizado, anti-idiotípico, cadena simple, bifuncional, o co-específico o fragmento de anticuerpo de este.

En una modalidad, un método para el tratamiento de una enfermedad autoinmune en un individuo puede comprender: (a) evaluar la presencia, etapa y/o evolución de la enfermedad autoinmune en un individuo; y (b) administrar a el individuo una dosis efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. Opcionalmente ,· ...evaluar la presencia, etapa y/o evolución de la enfermedad en un individuo puede comprender, analizar los niveles de autoanticuerpos , CRP, o ... cualquier enzima . proteolítica , mediador inflamatorio o etiquetador de la inflamación en curso. Si se determina que el individuo es adecuado para el tratamiento con un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 (por ejemplo • el individual tiene una exacerbación de artritis) , administrar a el individuo una dosis efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad adicional, el compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 es un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un péptido, un glicoalcoide, un ácido nucleico antisentido, una ribozima, un retinoide, un avemir, una molécula pequeña, o cualquiera de sus combinaciones. En una modalidad adicional, el compuesto es un anticuerpo quimérico, humanizado, anti-idiotípico, cadena simple, bifuncional, o co-específico o fragmento de anticuerpo de este.

En una modalidad, un método para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un individuo puede comprender: (a) determinar si el individuo tiene una enfermedad inflamatoria establecida; y (b) si el individuo tiene una enfermedad inflamatoria establecida, administrar a el paciente una dosis efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad, un método para el tratamiento de una enfermedad autoinmune en un individuo puede comprender: (a) determinar si el individuo tiene una enfermedad autoinmune establecida; y (b) si el individuo tiene una enfermedad autoinmune establecida, administrar a el paciente una dosis efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad, el compuesto es un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3.

En una modalidad, un método para el tratamiento de üna enfermedad inflamatoria en un individuo puede comprender: (a) determinar si el individuo tiene una enfermedad inflamatoria establecida; y (b) si el individuo tiene una enfermedad inflamatoria establecida, administrar a el paciente una dosis efectiva| de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad, un método para el tratamiento de una enfermedad autoinmune en un individuo puede comprender: (a) determinar si el individuo tiene una enfermedad autoinmune establecida; y (b) si el individuo tiene una enfermedad autoinmune establecida, administrar a el paciente una dosis efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad, el compuesto es un anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3.

En una modalidad, un método para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un individuo puede comprender (a) determinar si el individuo está experimentando un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad inflamatoria; y (b) si el individuo experimenta un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad inflamatoria, administrar a el individuo una .dosis efectiva de un compuesto que; inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad, el compuesto es un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3. En una modalidad, un método para el tratamiento de una enfermedad autoinmune en un individuo puede comprender (a) determinar si el individuo está experimentando un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad autoinmune; y (b) si el individuo experimenta un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad autoinmune, administrar a el individuo una dosis efectiva de un compuesto I que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad, el compuesto es un anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3.

En una modalidad, un método para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un individuo puede comprender (a) determinar si el individuo tiene una enfermedad inflamatoria caracterizada por la presencia de células T; y (b) si el individuo tiene una enfermedad inflamatoria caracterizada por la presencia de las células T, administrar a el paciente una dosis efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En otra modalidad, las células T pueden ser células T activadas y/o proliferantes, células T CD4+, células T proinflamatorias , células T infiltrantes, y/o células T que expresan HLA-cw3 y/o HLA-cw4. En una modalidad, el compuesto es un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3. En una - modalidad, un método para el tratamiento de una enfermedad autoinmune en un individuo puede comprender (a) determinar si el individuo tiene la enfermedad autoinmune que tiene la presencia de células T; y (b) si el individuo tiene una enfermedad autoinmune caracterizada por la presencia de las células T, administrar a el paciente una dosis efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En otra modalidad, las células T pueden ser células T activadas y/o proliferantes, células T CD4+, células T proinflamatorias , células T infiltrantes, y/o células T que expresan HLA-cw3 y/o HLA-cw4. En una modalidad, el compuesto es un anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3.

En una modalidad, un método para el tratamiento de un individuo que tiene una enfermedad inflamatoria, en particular una enfermedad inflamatoria establecida, o está experimentando un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad inflamatoria, puede comprender administrar al individuo a compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad, un método para el tratamiento de un individuo que tiene una enfermedad autoinmune, en particular una enfermedad autoinmune establecida, o está experimentando un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad autoinmune, comprende administrar al individuo a compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad, el compuesto es un anticuerpo antÍ-KIR2DL1 , 2 y/o 3. .· , ., . . ,· ...·¦·, ...

En una modalidad, un método para tratar una enfermedad inflamatoria puede comprender administrar un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad, el compuesto es un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3. En una modalidad, un método para tratar una enfermedad autoinmune puede comprender administrar un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad, el compuesto es un anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3.

En una modalidad, un método de tratar un individuo puede comprender: (a) determinar si un individuo tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune; y (b) si el individuo tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune, tratar el individuo con una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1 , 2, y/o 3.

En una modalidad, un método de tratar un individuo puede comprender: (a) determinar si un individuo tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune mediado al menos en parte por células T; y (b) si el individuo tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune mediado al menos en parte por las células T, tratar el individuo con una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

En una modalidad, un método de tratar un individuo puede comprender: (a) evaluar la presencia, etapa y/o evolución de la enfermedad inflamatoria o autoinmune en un individuo; y (b) administrar a . el . individuo una dosis efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

En una modalidad, un método de tratar un individuo puede comprender: (a) determinar si el individuo tiene una enfermedad inflamatoria o autoinmune establecida; y (b) si el individuo tiene una enfermedad inflamatoria o autoinmune establecida, administrar a el paciente una dosis efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

En una modalidad, un método de tratar un individuo puede comprender: (a) determinar si el individuo está experimentando un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad inflamatoria o autoinmune; y (b) si el individuo experimenta un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad inflamatoria o autoinmune, administrar a el individuo una dosis efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

En una modalidad, el compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 se administra como una monoterapia, es decir, se usa en el tratamiento como un agente único. Por ejemplo, el medicamento puede comprender el compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 está libre de algún otro agente farmacéuticamente activos y/o no se usar agentes farmacéuticamente activos adicionales para tratar el individuo para la condición de enfermedad particular. En métodos in vitro, el compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 se puede usar sin la adición o presencia .de. otros agentes activos.

En una modalidad de los métodos de tratamiento de la invención, los compuestos que inhiben un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 se pueden administrar en combinación con, es decir, antes, en forma concomitante con o después, un segundo agente terapéutico.

En una modalidad, el compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 se puede administrar en combinación con un segundo agente terapéutico, opcionalraente cualquier agente usado normalmente en el contexto de la condición | de enfermedad particular. Con preferencia, el segundo, agente puede ser un agente diferente de un anticuerpo terapéutico que induce por medio de ADCC, la muerte de una célula que expresa un antígeno al que se une el segundo agente. Con preferencia, el segundo agente terapéutico puede ser un agente diferente de un anticuerpo que tiene un isotipo IgGl o IgG3 , cuyo modo de acción involucra la inducción de ADCC hacia una célula a la que se une el anticuerpo. En una modalidad, el segundo agente puede ser un anticuerpo que tiene una región constante del isotipo IgG4 o un fragmento de anticuerpo (por ejemplo, fragmento de Fab o F(ab)'2). En una modalidad, el segundo agente puede ser un anticuerpo ligado a un resto citotóxico. En una modalidad, el segundo agente puede ser un polipéptido no anticuerpo. En una modalidad, el segundo agente terapéutico...puede ser un agente sintético de molécula pequeña. En otra modalidad, el segundo agente terapéutico puede ser un agente quimioterapéutico de molécula pequeña. En aún otra modalidad, el segundo agente terapéutico puede ser un DMARD. En una modalidad adicional, el segundo agente terapéutico es Opcionalmente , en alguno de los métodos de tratamiento, los métodos también pueden comprender administrar al individuo un DMARD. En una modalidad, puede ser un método de tratar un individuo que tiene una enfermedad autoinmune . o inflamatoria puede comprender administrar al| individuo (a) una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3, y (b) un DMARD.

Con preferencia el compuesto inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 y modula la citotoxicidad de las células NK como resultado de inhibir el polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. Con preferencia el compuesto puede comprender un anticuerpo que une un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

En una modalidad, un método para determinar la adecuación del tratamiento con un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 para un paciente, puede comprender determinar si el paciente tiene una enfermedad inflamatoria establecida, si el paciente puede estar experimentando un ataque, crisis, exacerbación o brote, y/o si el paciente tiene una enfermedad caracterizada por la presencia de células T, por ejemplo, células T activadas y/o proliferantes, células T CD4+, células T proinflamatorias , células T infiltrantes, y/o células T que expresan HLA-cw3 y/o HLA-cw4. En una modalidad, un método para determinar la adecuación del tratamiento con un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 para un paciente, puede comprender determinar si el paciente tiene una enfermedad autoinmune establecida, si el paciente puede estar experimentando un ataque, crisis, exacerbación o brote, y/o si el paciente tiene una enfermedad caracterizada por la presencia de células T, por ejemplo^ células T activadas y/o proliferantes, células T CD4+, células T proinflamatorias , células T infiltrantes, y/o células T que expresan HLA-cw3 y/o HLA-cw4.

En una modalidad, un método para tratar un trastorno autoinmune puede comprender la administración de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En otra modalidad, el compuesto es un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un péptido, un glicoalcoide , un ácido nucleico antisentido, una ribozima, un retinoide, un avemir, una molécula pequeña, o cualquiera de sus combinaciones. En otra modalidad, el compuesto es un anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3. En una modalidad, el individuo está padeciendo un trastorno autoinmune mediado por las células T. En una modalidad adicional, el trastorno autoinmune es el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) , . atrofia .... esplénica adquirida, uveítis anterior aguda, encefalomielitis diseminada aguda (ADE , por sus siglas en inglés) , artritis gotosa aguda, leucoencefalitis hemorrágica necrotizante aguda, sinusitis aguda o crónica, meningitis purulenta aguda (u otros trastornos inflamatorios del sistema nervioso central) , inflamación grave aguda, enfermedad de Addison, adrenalitis, diabetes mellitus de comienzo adulto (diabetes Tipo II), hipoparatiroidismo idiopático de comienzo adulto (AOIH, por sus siglas en inglés) , Agammaglobulinemia, agranulocitosis , vasculitíides , que incluye a vasculitis (que incluye vasculitis de grandes vasos (que incluye polimialgia reumática y células gigantes (Takayasu) artritis) , afecciones alérgicas, dermatitis por contacto, dermatitis alérgica, angíitis granulomatosa alérgica, trastornos de hipersensibilidad alérgica, neuritis alérgica, reacción alérgica, alopecia areata, alopecia totalis, Síndrome de Alport (por ejemplo, alveolitis alérgica y alveolitos fibrosante) , enfermedad de Alzheimer, amiloidosis, esclerosis lateral amilotrófica (ALS, enfermedad de Lou Gehrig) , un trastorno relacionado con eosinófilo (por ejemplo, eosinofilia) , anafilaxis, espondilitis anquilosante, angiectasia, nefritis mediada por anticuerpo, nefritis anti-GBM/anti-TBM, enfermedades mediadas por el complejo de antigeno-anticuerpo, enfermedad de la membrana basal antdglomerular síndrome de anticuerpos anti-fosfolípido., síndrome antifosfolípido (APS), aftas, estomatitis aftosa, anemia aplásica, arritmia, arteriosclerosis , trastornos arterioscleróticos , artritis (por ejemplo, artritis reumatoide tales como artritis aguda, artritis reumatoide crónica), artritis crónica progrediente , artritis deformante, ascariasis, aspergiloma (o granulomas que contienen eosinófilos) , aspergilosis , aspermiogenesia , asma (por ejemplo, asma bronquia y asma autoinmune, telangiectasia ataxia, angiectasia, esclerosis atáxica, aterosclerosis, autismo, angioedema autoinmune, anemia aplásica autoinmune, gastritis atrófica autoinmune, diabetes autoinmune, enfermedad autoinmune del testículo y ovario que incluye orquitis autoinmunes y ooforitis, trastornos autoinmunes asociados con enfermedad del colágeno, disautonomía autoinmune, enfermedad auditiva autoinmune (por ejemplo, enfermedad de oído interno autoinmune (AGED, por sus siglas en inglés) ) , enfermedades endocrinas autoinmunes que incluyen tiroiditis tales como tiroiditis autoinmune, síndrome enteropático autoinmune, falla gonadal autoinmune, pérdida auditiva autoinmune, hemolisis autoinmune, hepatitis autoinmune, trastorno hepatológico autoinmune, hiperlipidemia autoinmune, inmunodeficiencia autoinmune, enfermedad del oído interno autoinmune (AIED, por sus siglas en inglés) , miocarditis autoinmune, neutropenia autoinmune, pancreatitis autoinmune, polinedocrinopatías autoinmunes, . síndrome poliglandular autoinmune tipo I, retinopatía autoinmune, púrpura trombocitopenia autoinmune (ATP, por sus siglas en inglés) , enfermedad tiroidea autoinmune, urticaria autoinmune, enfermedades gastrointestinales mediadas autoinmunes, neuropatía axonal & neuronal, enfermedad de Balo, enfermedad de Behcet, lesión por reperfusión- isquemia y familiar, angiítis linfocítica benigna, enfermedad de Berger (neuropatía por IgA) , pulmón del cuidador de palomas, ceguera, enfermedad de Boeck, bronquiolitis obliterante (no-trajsplante) vs NSIP, bronquitis, aspergilosis bronconeumónica , síndrome de Bruton, penfigoide bulloso, síndrome de Caplan, cardiomiopatía, isquemia cardiovascular, síndrome de Castleman, enfermedad celíaca, sprue celíaco (enteropatía de gluten) , degeneración cerebelar, isquemia cerebral, y enfermedad acompañante de la vascularización, enfermedad de Chagas, canalopatías (por ejemplo, epilepsia), canalopatías del SNC, coriorretinitis , coroiditis, un trastorno hematológico autoinmune, hepatitis crónica activa o hepatitis crónica activa autoinmune, dermatitis por contacto crónica, neumonía eosinofilia crónica, síndrome de fatiga crónica, hepatitis crónica, neumonitis hipersensible crónica, artritis inflamatoria crónicas, polineuropatías desmielinizante inflamatoria crónica (CIDP, por sus siglas en inglés) , inflamación intratable crónica, candidiasis mucocutánea crónica, ...neuropatía crónica (por ejemplo, polineuropatía Ig o neuropatías mediadas por IgM) , enfermedad respiratoria obstructiva crónica, enfermedad inflamatoria pulmonar crónica, osteomielitis multifocal recurrente crónica (CRMO, por sus siglas en inglés) , tiroiditis crónica (tiroiditis de Hashimoto) o tiroiditis subaguda, síndrome de Churg-Strauss , penfigoide cicatricial/penfigoide mucoso benigno, trastornos inflamatorios del SNC, vasculitis de SNC, enfermedad celíaca, síndrome de Cogan, enfermedad de aglutinina fría, colitis poliposa, colitis tales como colitis ulcerativa, colitis ulcerosa, colitis colagenosa, afecciones que involucran la infiltración de células T y respuestas inflamatorias crónicas, bloqueo cardíaco congénita, infección de rubéola congénita, anemia anemia positiva a Coomb, enfermedad arterial coronaria, miocarditis de Coxsackie, síndrome CREST (calcinosis, fenómeno de Raynaud) , enfermedad de Crohn, crioglobulinemia, síndrome de Cushing, ciclitis (por ejemplo, ciclitis crónica, ciclitis heterocrónica , iridociclitis , o ciclitis de Fuch) , fibrosis tóxica, toxicidad inducida por citoquina, sordera, artritis degenerativa, enfermedades desmielinizantes (por ejemplo, enfermedades desmielinizantes autoinmunes) , neuropatías desmielinizantes, dengue, dermatitis herpetiforme y dermatitis atópica, dermatitis que incluye dermatitis por contacto, dermatomiositis , dermatosis con componentes agudos inflamtorios., enfermedad de Devic (neüromielitis óptica) , trastorno de arterias grandes diabético, neuropatía diabética, retinopatía diabética, anemia de Diamond Blackfan, fibrosis pulmonar intersticial difusa, cardiomiopatía difusa, lupus discoide, enfermedades que involucran diapédesis leucocitaria , síndrome de Dressler, contractura de Dupuytren, infección con echovirus, eczema que incluye eczema alérgico o atópico, encefalitis tal como encefalitis de Rasmussen y encefalitis límbico y/o tronco del encéfalo, encefalimielitis (por ejemplo, encefalomielitis alérgica o encefalomielitis alérgica y experimental (EAE) ) , hiperplasia endoarterial , endocarditis, oftalmopatía endocrina, endometriosis , fibrosis endomiocárdica , endoftalmia facoanafiláctica, endoftalmitis , enteritis alérgica, síndrome eosinofilia-mialgia, faciítis eosinofílica, queratoconjuntivitis epidémica, epidermolisis bullosa adquirida (EBA, por sus siglas en inglés) , episclera, episcleritis , infección con virus de Epstein-Barr, , eritema elevatum et diutinum, eritema multiforme, eritema nodosum leprosum, eritema nodosum, eritroblastosis fetal, dismotilidad esofágica, crioglobulinemia mixta esencial, etmoide, síndrome de Evan, encefalomielitis alérgica experimental (EAE, por sus siglas en inglés) , deficiencia del Factor VIII, pulmón de granjero, fiebre reumática, síndrome de Felty, fibromialgia , alveolitos fibrosante, filariasis, glomerulosclerosis segmentaria focal (FS.GS, por sus siglas en inglés), intoxicación alimentaria, atrofia gástrica frontal, artritis de células gigantes (artritis temporal) , hepatitis de células gigantes, polimialgia de células gigantes, glomerulonefritis , glomerulonefritis (GN) con y sin síndrome nefrótico glomerulonefritis aguda o crónica (por ejemplo, GN primaria) , síndrome de Goodpasture, artritis gotosa, síndromes asociados con transfusión de granulocitos , granulomatosis que incluye granulomatosis linfomatoide, granulomatosis con poliangiítis (GPA, por sus siglas en inglés) , uveítis granulomatosa, enfermedad de Grave, síndrome de Guillain-Barre , psoriasis guttata, hemoglobinuria paroxística, enfermedad de Hamman-Rich, enfermedad de Hashimoto, encefalitis de Hashimoto, tiroiditis de Hashimoto, hemocromatosis , anemia hemolítica o anemia hemolítica inmune que incluye anemia hemolítica autoinmune (AIHA, por sus siglas en inglés) , anemia hemolítica, hemofilia A, púrpura de Henóch-Schonlein, Herpes gestacional, infección con el virus de inmunodeficiencia humana (VIH) , hiperalgesia , hipogammaglobulinemia, hipogonadismo, hipoparatiroidismo, diabetes insípida idiopática, parálisis facial idiomática, hipotiroidismo idiopático, nefropatía IgA idiopática, GN membranosa idiomática o neuropatía membranosa idiopática, síndrome nefrítico idiopático, fibrosis pulmonar idiopática, sprue idiopático, púrpura trombocitopénica idiopática (ITP, por sus, siglas en inglés) , nefropatía IgA, enfermedades, mediadas por IgE (por ejemplo, anafilaxis y rinitis alérgica y atópica) , enfermedad esclerosante IgG4 , ileítis regional, por complejo inmune, respuestas inmunes asociadas con hipersensibilidad aguda y retardada mediada por citoquinas y linfocitos T, GN inmunomediada , lipoproteínas inmunorregulatoria, que incluye síndrome de distrés respiratorio adulto agudo (ARDS, por sus siglas en inglés), miositis con cuerpo de inclusión, artritis infecciosa, infertilidad debido a los anticuerpos anti-espermatozoides , inflamación del total o parte de uvea, enfermedad intestinal inflamatoria (IBD, por sus siglas en inglés) enfermedades cutáneas hiperproliferativas inflamatorias, miopatía inflamatoria, diabetes insulinodependiente (tipo 1) , insulitis, cistitis intersticial, enfermedad pulmonar intersticial, fibrosis pulmonar intersticial, iritis, trastorno de reprofusión isquémica, inflamación de articulaciones, artritis juvenil, dermatomiositis juvenil, diabetes juvenil, diabetes mellitus de inicio juvenil (Tipo I) , que incluye diabetes insulinodependiente pediátrica (IDDM), artritis reumatoide de inicio juvenil, síndrome de Kawasaki, queratoconjuntivitis seca, quipanosomiasis , síndrome de Lambert-Eaton, leishmaniasis , lepra, leucopenia, deficiencia de adhesión leucocitaria, vasculitis leucocitoclástica, leucopenia, liquen plano, liquen escleroso, conjuntivitis - leñosa, dermatosis IgA .lineal:.. (LAD,-por sus siglas en inglés) , síndrome de Loffler, hepatitis lupoide, lupus (que incluye nefritis, cerebritis, pediátrico, no renal, extrarrenal, discoide, alopecia), Lupus (SLE) , lupus eritematoso diseminado, artritis de Lyme, enfermedad de Lyme, neumonitis intersticial linfoide, malaria, infertilidad autoinmune masculina y femenina, vasculitis de vaso medio maxilar (que incluye enfermedad de Kawasaki y poliarteritis nodosa) , GN GN proliferativa membrano o membranosa (MPGN, por sus siglas en inglés) , que incluye Tipo I y Tipo II, y GN rápidamente progresiva, GN membranosa (neuropatía membranosa), enfermedad de Meniere, meningitis, colitis microscópica, poliangiítis microscópica, migraña, neuropatía de cambios mínimos, enfermedad del tejido conectivo mixto (MCTD, por sus siglas en inglés) , mononucleosis infecciosa, úlcera de Mooren, enfermedad de Mucha-Habermann, neuropatía motora multifocal, falla endocrina múltiple, síndrome de lesión orgánica múltiple tal como los secundarios a septicemia, trauma o hemorragia, síndrome de lesión orgánica múltiple, esclerosis múltiple (MS, por sus siglas en inglés) tales como MS espino-óptica, esclerosis múltiple, paperas, trastornos musculares, miastenia gravis tal como miastenia gravis asociada a timoma, miastenia gravis, miocarditis, miositis, narcolepsia, enterocolitis necrotizante, y colitis transmural y enfermedad intestinal inflamatoria autoinmune, vasculitis necrotizante,, . cutánea o por hipersensibilidad, síndrome lúpico neonatal (NLE, por sus siglas en inglés) , nefrosis, síndrome nefrótico, enfermedad neurológica, neuromielitis óptica (Devic) , neuromielitis óptica, neuromiotonía, neutropenia, lifocitosis no cancerosa, uveítis no granulómatosa, timoma no maligno, trastornos inflamatorios ocular y orbital, penfigoide cicatrizal ocular, ooforitis, oftalmía simpática, síndrome opsoclonus mioclonus (OMS, por sus siglas en inglés) , opsoclonus o síndrome opsoclonus mioclonus (OMS) , y neuropatía sensorial, neuritis óptica, orquitis granulomatosa, osteoartrjitis, reumatismo palindrómico, pancreatitis, pancitopenia , PANDAS (trastornos neuropsiquiátricos autoinmunes pediátricos con 5 estreptococos) , degeneración paraneoplásica, síndrome paraneoplásico, síndromes paraneoplásicos , que incluyen síndromes paraneoplásicos neurológicos (por ejemplo, síndrome de Lambert -Eaton miasténico o síndrome de Eaton-Lambert ) , enfermedades parasitarias s tales como leishmaniasis, 0 hemoglobinuria paroxística nocturna (PNH, por sus siglas en inglés) , síndrome de Parry Romberg, pars planitis (uveítis periférica) , síndrome de Parsonnage-Turner, infección con parvovirus, penfigoide hulloso y penfigoide de la piel, pénfigos que incluye pénfigo vulgar) , pénfigo eritematoso, 5 pénfigo foliáceo, pénfigo mucus-menmbranoso penfigoide, pénfigos, úlcera péptica, parálisis periódica, neuropatía ¦..·".¦ periférica, encefalomielitis periyanosa, .. anemia perniciosa (anemia perniciosa) , anemia perniciosa, uveítis fagoantigénica . pneumonocirrosis , síndrome de POEMS, 0 poliarteritis nodosa, Tipo I, II, & III, poliartritis crónica primaria, policondritis (por ejemplo, policondritis refractaria o recidivante) , enfermedad autoinmune poliendocrina, falla poliendocrina , síndromes poliglandulares (por ejemplo, síndromes poliglandulares autoinmunes (o 5 síndromes de endocrinopatía poliglandular) ) , polimialgia reumática, polimiositis , polimiositis/dermatomiositis, polineuropatías , poliradiculitis aguda, síndrome pos-cardiotomía, uveítis posterior, o uveítis autoinmune, síndrome de infarto posmiocárdico, síndrome pospericardiotomía , nefritis pos-estreptocócica, síndromes pos-vacunación, demencia presenil, cirrosis biliar primaria, hipotiroidismo primario, mixedema idiopático primario, linfocitosis primaria, que incluyen linocitosis de células B monoclonales (por ejemplo, gamopatía monoclonal benigno y gammopatía monoclonal de significación no determinado, MGUS) , mixedema primario, MS progresiva primaria (PPMS, por sus siglas en inglés) , y MS remitente-recidivante (RRMS) , colangitis esclerosante primaria, dermatitis por progesterona , esclerosis sistémica progresiva, artritis proliferativa , psoriasis tales como psoriasis en placa, psoriasis, artritis psoriática, proteinosis alveolar pulmonar, eosinofilia por . infiltración pulmonar, anemia o aplasia de hematíes pura (PRCA, por sus siglas en inglés) , aplasia de hematíes pura, sinusitis purulenta o no purulenta, psoriasis pustular y psoriasis de las uñas, pielitis, pioderma gangrenosa, tiroiditis de Quervain, fenómeno de Raynaud, artritis reactiva, aborto recurrente, reducción de la respuesta a la presión arterial, distrofia simpática refleja, sprue refractaria, enfermedad o síndrome de Reiter, policondritis recidivante, lesión por repercusión de tejidos miocárdicos u otros, lesión por reperfusión, síndrome de distrés respiratorio, síndrome de piernas inquietas, autoinmunidad retiniana, fibrosis retroperitoneal , síndrome de Reynaud, enfermedades reumáticas, fiebre reumática, reumatismo, artritis reumatoide, espondilitis reumatoide, infección con el virus de rubéola, síndrome de Sampter, sarcoidosis, esquistosomiasis , síndrome de Schmidt, SCID y enfermedades asociadas al virus Epstein-Barr, esclera, escleritis, esclerodactilia, escleroderma (que incluye escleroderma sistémica) , colangitis esclerosante, esclerosis diseminada, esclerosis tal como esclerosis sistémica, pérdida de audición sensoneural, espondiloartritis seronegativa, síndrome de Sheehan, síndrome de Shulman, silicosis, síndrome de Sjogren, autoinmunidad espermática & testicular, sinusitis esfenoide, síndrome de Stevens-Johnson, síndrome del hombre rígido (o persona rígida) , endocarditis bacteriana subaguda (SBE, por sus siglas en inglés), lupus eritematoso cutáneo subágudo, pérdida auditiva súbita, síndrome de Susac, corea de Sydenham, oftalmía simpática, lupus eritematoso sistémica (SLE, por sus siglas en inglés) o lupus eritematoso sistémica (por ejemplo, SLE cutáneo) , vasculitis necrotizante sistémica, y vasculitis asociada ANCA, tales como vasculitis o síndrome de Churg-Strauss (CSS, por sus siglas en inglés) ) , tabes dorsal, arteritis de Takayasu, telangiectasia , arteritis temporal/arteritis de células gigantes, tromboangitis ubiterans, trombocitopenia (desarrollado por ejemplo, | por pacientes de infarto miocárdico) , que incluyen púrpura trombocitopénica trombótica (TTP, por sus siglas en inglés) y trombocitopenia autoinmune o inmunomediada tales como púrpura trombocitopénica idiopática (ITP, por sus siglas en inglés) que incluyen ITP crónica o aguda, púrpura trombocitopénica (TTP), tirotoxicosis , lesión tisular, síndrome de Tolosa-Hunt, necrólisis epidérmico tóxico, síndrome del shock tóxico, reacción de transfusión, hipogammaglobulinemia transitoria de infancia, mielitis transversa, mielitis transversa, eosinofilia pulmonar tropical, tuberculosis, colitis ulcerativa, enfermedad del tejido conectivo no diferenciado (UCTD, por sus siglas en inglés) , urticaria (por ejemplo, urticaria alérgica crónica y urticaria idiopática crónica, que incluye urticaria autoinmune crónica) , uveítis (por ejemplo, uveítis anterior) , uveorretinitis , valvulitis, disfunción vascular,, vasculitis,. artritis vertebral, dermatosis vesiculobullosa, vitíligo, granulomatosis de Wegener (actualmente denominada granulomatosis con poliangiítis (GPA, por sus siglas en inglés) , síndrome de Wiskott-Aldrich, o síndrome de hiper IgM ligada a x.

En una modalidad, un método para tratar un trastorno inflamatorio puede comprender la administración de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En otra modalidad, el compuesto es un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un péptido, un glicoalcoide, un ácido nucleico antisentido, una ribozima, un retinoide, un avemir, una molécula pequeña, o cualquiera de sus combinaciones. En otra modalidad, el compuesto es un anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3. En una modalidad, el individuo está padeciendo un trastorno inflamatorio mediado por las células T.

En una modalidad adicional, el trastorno inflamatorio es enférmedades reumáticas (por ejemplo, artritis reumatoide, osteoartritis , artritis psoriática) espondiloartropatías (por ejemplo, espondilitis anquilosante, artritis reactiva, síndrome de Reiter) , artropatías cristalinas (por ejemplo, gota, pseudogota, enfermedad de depósito de pirofosfato de calcio), esclerosis múltiple, enfermedad de Lyme, polimialgia reumática; enfermedades del tejido conectivo (por ejemplo, lupus eritematoso sistémico, esclerosis sistémica, polimiositis , ... dermatomiositis , síndrome de Sjogren) vasculitis (por ejemplo, poliarteritis nodosa, granulomatosis de Wegener, síndrome de Churg-Strauss) ; afecciones inflamatorias que incluyen consecuencias de trauma o isquemia, sarcoidosis ; enfermedades vasculares que incluyen enfermedad vascular aterosclerótica , aterosclerosis, y enfermedad oclusiva vascular (por ejemplo, aterosclerosis, enfermedad cardíaca isquémica, infarto miocárdico, accidente cerebrovascular , enfermedad vascular periférica) , restenosis del stent vascular; enfermedades oculares que incluyen uveítis, enfermedad corneana, iritis, iridociclitis, cataratas, reflujo ácido/acidez, acné, acné vulgar, alergias y sensibilidades, enfermedad de Alzheimer, asma, aterosclerosis y enfermedad oclusiva vascular (por ejemplo, ateroesclerosis , enfermedad cardíaca isquémica, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular , enfermedad vascular periférica) y restenosis del stent vascular, enfermedades autoinmunes, bronquitis, cáncer, carditis, cataratas, enfermedad celíaca, dolor crónico, prostatitis crónica, cirrosis, colitis, enfermedades del tejido conectivo (por ejemplo, lupus eritematoso sistémico, esclerosis sistémica, polimiositis , dermatomiositis , síndrome de Sjogren) , enfermedad corneana, enfermedad de Crohn, artropatías cristalinas (por ejemplo, gota, pseudogota, enfermedad del depósito de pirofosfato de calcio), demencia, dermatitis, diabetes, ojos secos, eczema, edema, .enfisema, fibromialgia , gastroenteritis, gingivitis, glomerulonefritis , enfermedad cardíaca, hepatitis, presión arterial alta, hipersensibilidades , enfermedades intestinales inflamatorias, afecciones inflamatorias que incluyen consecuencias de trauma o isquemia, resistencia a la insulina, cistitis intersticial, iridociclitis, iritis, dolor articular/artritis/artritis reumatoide, enfermedad de Lyme, síndrome metabólico (síndrome x) esclerosis múltiple, miositis, nefritis, obesidad, enfermedades oculares que incluyen uveítis, osteopenia, osteoporosis , enfermedad de Parkinson, enfermedad inflamatoria pélvica, enfermedad periodbntal, poliarteritis , policondritis , polimialgia reumática, psoriasis, lesión por reperfusión, artritis reumática, enfermedades reumáticas (por ejemplo, artritis reumatoide, osteoartritis , artritis psoriáticas) , artritis reumatoide, sarcoidosis, escleroderma, sinusitis, síndrome de Sjógren, colon espástico, espondiloartropatías (por ejemplo, espondilitis anquilosante, artritis reactiva, síndrome de Reiter) , candidiasis sistémica, tendonitis, rechazo del transplante, UTI, vaginitis, enfermedades vasculares que incluyen enfermedad vascular ateroesclerótica, vasculitis (por ejemplo, poliarteritis nodosa, granulomatosis de Wegener, síndrome de Churg-Strauss) , y vasculitis. -..

En otra modalidad, el compuesto puede ser un anticuerpo ant:i-KIR2DLl, :2. y/o 3. En una modalidad, el anticuerpo puede ser quimérico, humanizado, anti-idiotípico, cadena simple, bifuncional, o coespecífico. En una modalidad, el anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos de la VL de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, 3, o 5. En una modalidad, los residuos 3, 4, 9, 24, 32, 41, 47, 50, 55, 71, y 74 de la SEQ ID NO: 3 pueden ser Q, L, S, R, A, G, L, D, E, F, y A, respectivamente. En una modalidad, el anticuerpo puede comprender una secuencia dé aminoácidos de la VH de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, 4, o 6. En otra modalidad, los residuos 3, .4, 9, 24, 32, 41, 47, 50, 55, 71, y 74 de la SEQ ID NO: 3 puede ser R, M, F, W, Y, A, F, Y, Q, Y, y T, respectivamente.

En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 puede comprender la secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena ligera corresponde a los residuos 24-34 de la SEQ ID NO: 1; la secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena ligera corresponde a los residuos 50-56 de la SEQ ID NO: 1; la secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena ligera corresponde a los residuos 89-97 de la SEQ ID NO: 1; la secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena pesada corresponde a los residuos 31-35 de la SEQ ID NO: 2; la secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena pesada corresponde a los residuos 50-65 de la SEQ ID NO: 2; o la secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena pesada corresponde a los residuos 99-112 de la SEQ ID NO: 2. ,. ¦ En una modalidad, el anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 puede comprender la secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena ligera corresponde a los residuos 24-34 de la SEQ ID NO: 3; la secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena ligera corresponde a los residuos 50-56 de - la SEQ ID NO : 3 ; la secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena ligera corresponde a los residuos 89-97 de la SEQ ID NO : 3 ; la secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena pesada corresponde a los residuos 31-35 de la SEQ ID NO: 4; la secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena pesada corresponde a los residuos 50-66 de la SEQ ID NO : 4 ; o la secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena pesada corresponde a los residuos 99-113 de la SEQ ID NO : 4.

En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 puede comprender una secuencia VL y VH que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO : 1 y SEQ ID NO : 2 , respectivamente, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO:4, respectivamente, o SEQ ID NO: 5 y 6, respectivamente.

En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 usado en los métodos de tratamiento de la invención puede comprender las siguientes regiones CDR: una secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena ligera correspondiente a aproximadamente los residuos 24-34 de la SEQ ID NO : 1 ; la secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena ligera correspondiente · a aproximadamente los residuos 50-56 de la SEQ ID NO:l; la secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena ligera correspondiente a aproximadamente los residuos 89-97 de la SEQ ID NO : 1 ; la secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena pesada correspondiente a aproximadamente los residuos 31-35 de la SEQ ID NO : 2 ; la secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena pesada correspondiente a aproximadamente a los residuos 50-65 de la SEQ ID NO : 2 ; o la secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena pesada correspondiente a aproximadamente los residuos 99-112 de la SEQ ID NO : 2.

En una modalidad, el anticuerpo aríti-KIR2DLl, 2 y/o 3 usado en los métodos de tratamiento de la invención puede comprender las siguientes regiones de CDR: una secuencia de 5 aminoácidos de CDR1 de cadena ligera correspondiente a aproximadamente los residuos 24-34 de la SEQ ID NO : 3 ; una secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena ligera correspondiente a aproximadamente los residuos 50-56 de la SEQ ID NO: 3; una secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena 0 ligera correspondiente a aproximadamente los residuos 89-97 de la SEQ ID NO : 3 ; una secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena pesada correspondiente a aproximadamente los residuos 31-35 de la SEQ ID NO: 4; una secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena pesada correspondiente a aproximadamente los 5 residuos 50-66 de la SEQ ID NO : 4 ; o una secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena pesada correspondiente a ·.¦¦.-.. aproximadamente los residuos 99-113 de la SEQ ID NO : 4. . .

En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 usado en los métodos de tratamiento de la invención puede 0 comprender una secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena ligera que consiste esencialmente en los residuos 24-34 de la SEQ ID NO:l; una secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena ligera que consiste esencialmente en los residuos 50-56 de la SEQ ID NO:l; una secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena 5 ligera que consiste esencialmente en los residuos 89-97 de la SEQ ID N0:1; una secuencia de aminoácidos de CDRl de cadena pesada que consiste esencialmente en los residuos 31-35 de la SEQ ID NO: 2; una secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena pesada que consiste esencialmente en los residuos 50-65 de la SEQ ID NO : 2 ; o una secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena pesada que consiste esencialmente en los residuos 99-112 de la SEQ ID NO: 2.

En una modalidad, el anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 usado en los métodos de tratamiento de la invención puede comprender las siguientes regiones de CDR: una secuencia de aminoácidos de CDRl de cadena ligera que consiste esencialmente en los residuos 24-34 de la SEQ ID NO: 3; una secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena ligera que consiste esencialmente en los residuos 50-56 de la SEQ ID NO : 3 ; una secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena ligera que consiste esencialmente en los residuos 89-97 de la SEQ ID NO:3; una secuencia, de aminoácidos -de CDRl de cadena pesada que consiste esencialmente en los residuos 31-35 de la SEQ ID NO: 4; una secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena pesada que consiste esencialmente en los residuos 50-66 de la SEQ ID NO:4; o una secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena pesada que consiste esencialmente en los residuos 99-113 de la SEQ ID NO: 4.

En una modalidad, el anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 usado en los métodos de tratamiento de la invención puede unirse a un epitopo dentro de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7, 8, 9, o 10. En una modalidad, el anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 puede unir KIR2DL1 dentro de una región definida por al menos uno de los residuos de aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 127, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 181, y 192. En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 puede unir KIR2DL1 y KIR2DL2/3 dentro de una región definida por al menos uno de los residuos de aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 127, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 181, y 192.

En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 o fragmento de anticuerpo de este usado en los métodos de tratamiento de la invención se puede conjugar en forma directa o- indirecta a una etiqueta, agente citotóxico, agente terapéutico, o un agente inmunosupresor . En una modalidad, la etiqueta pude ser una etiqueta quimioluminiscente , etiqueta paramagnética, un agente de contraste MRI , etiqueta fluorescente, etiqueta bioluminiscente , o etiqueta radioactiva. En una modalidad, la etiqueta paramagnética puede ser aluminio, manganeso, platino, oxígeno, lantano, lutecio, escandio, itrio, o galio. En una modalidad, el agente citotóxico puede ser un resto que inhibe ADN, ARN o síntesis de proteína, un radionucleido, o proteína inhibidora ribosómica. En una modalidad, el agente citotóxico puede ser 12Bi , 131I, 188Re, 90Y, vindesina, metotrexato, metotrexato, adriamicina, cisplatino, proteína antiviral de phytolaca, exotoxina de Pseudomonas A, ricina, toxina de difteria, cadena A de ricina o enzima fosfolipasa citotóxica.

En una modalidad, el anticuerpo an i -KIR2DL1 , 2, o 3 usado en los métodos de tratamiento de la invención bloquea o neutraliza la inhibición de NK. En una modalidad, el anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2, o 3 puede unirse a al menos uno de KIR2DL1, 2 o 3 y neutralizar la inhibición mediada por KIR2DL1 , 2 y/o 3 de la citotoxicidad de las células NK. En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2, o 3 puede neutralizar al menos aproximadamente 20% de aumento en la lisis específica mediadas por las células NK de la células NK blanco .

En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR2DLl , . 2, o 3 usado en los métodos de tratamiento de la invención puede competir por la unión con la misma región determinante antigénica del anticuerpo monoclonal 1-7F9, DF200, y/o NKVSF1. En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2, o 3 usado en los métodos de tratamiento de la invención puede unir a al menos dos receptores inhibitorios KIR en la superficie de las células NK. En una modalidad, el anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2, o 3 usado en los métodos de tratamiento de la invención puede unir una región determinante antigénica común de los receptores de KIR2DL humanos. En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2, o 3 usado en los métodos de tratamiento de la invención puede unirse a los receptores de KIR2DL1, 2 y/o 3. En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR2DL1, 2, o 3 usado en los métodos de tratamiento de la invención tiene una afinidad por KIR2DL1, 2 y/o 3 de al menos aproximadamente 104 a aproximadamente 1010 M"1. En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2, o 3 usado en los métodos de tratamiento de la invención puede tener una afinidad por KIR2DL1, 2 y/o 3 de al menos aproximadamente 107 a aproximadamente 109 M"1. En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2, o 3 usado en los métodos de tratamiento de la invención puede exhibir unión con KIR con una constante de disociación de menos de aproximadamente 100 nM. En una modalidad, el anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2, o 3 puede reaccionar . en.- forma cruzada con los KIR 2DL1 más 2DL2/3, 3DL1 más 3DL2, 2DL1 (y 2DL2/3) más 2DS4, y 2DL1 (y 2DL2/3) pero no 2D24. En una modalidad, el anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2, o 3 puede ser anticuerpo DF200, 1-7F9, o NKVSF1.

En una modalidad, el compuesto que inhibe un polipéptido de ' KIR2DL1 , 2, y/o 3 usado en los métodos de tratamiento de la invención se puede administrar como una monoterapia. En una modalidad, el compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 usado en los métodos de tratamiento de la invención se puede administrar en combinación con a segundo agente terapéutico. En una modalidad, el segundo agente terapéutico puede ser un agente que disminuye la inflamación. En una modalidad, el segundo agente terapéutico puede ser un agente químico de molécula pequeña. En una modalidad, el segundo agente terapéutico puede ser un DMARD, opcionalmente un anticuerpo anti-TNFa, un inhibidor de tirosina cinasa de molécula pequeña, o metotrexato (MTX) . En una modalidad, el segundo agente terapéutico puede ser un agente diferente de un anticuerpo que tiene un isotipo IgGl o IgG3.

En una modalidad, el compuesto que inhibe a KIR2DL1, 2 y/o 3 usado en los métodos de tratamiento de la invención puede ser un anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 que tiene la capacidad de bloquear o neutralizar la inhibición NK mediada por KIR2DL1, 2 y/o 3 y de este modo potenciar la actividad de las células NK contra las células blanco bloqueadas de otro modo. En una modalidad, el anticuerpo puede ser un anticuerpo ant,i-KIR que se puede unir KIR2DL1 y KIR2DL2/3. En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR puede competir con 1-7F9 por la unión a KIR2DL1, 2 y/o 3.

En una modalidad, el anticuerpo puede ser 1-7F9. En una modalidad, el anticuerpo puede comprender los dominios de VL y VH de 1-7F9. En una modalidad, el anticuerpo puede comprender las CDR de VL y VH de 1-7F9. En una modalidad, el anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 se puede administrar como una composición farmacéuticamente aceptable puede comprender una cantidad efectiva del anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3. En una modalidad, la composición puede estar libre de cualquier otro agente farmacéuticamente activo.

En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 se puede administrar en una cantidad que produce saturación sustancialmente completa del KIR2DL1, 2 y/o 3 sobre las células NK durante un período de al menos aproximadamente 1 semana. En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2, y/o 3 sé puede administrar en una cantidad que produce saturación sustancialmente completa del KIR2DL1, 2 y/o 3 sobre las células NK durante un período de al menos aproximadamente 2 semanas. En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2, y/o 3 se puede administrar en una cantidad que produce saturación sustancialmente completa del KIR2DL1, 2, y/o 3 sobre las células NK durante un período de al menos aproximadamente 1 mes. En una modalidad, el anticuerpo, antÍ-KIR2DL1 , 2, y/o 3 se puede administrar varias veces con una frecuencia de dosis de una vez aproximadamente cada 2 semanas. En una modalidad, el anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2, y/o 3 se puede administrar varias veces con una frecuencia de dosis de una vez aproximadamente cada ' 1 mes. En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 se puede administrar varias veces con una frecuencia de dosis de una vez aproximadamente cada 2 meses o una vez cada período de más de 2 meses.

En una modalidad, la invención proporciona una composición para el tratamiento de un trastorno autoinmune o inflamatorio que puede comprender un anticuerpo anti-KIR2DLl y opcionalmente otro agente activo. En otra modalidad, una composición puede comprender un anticuerpo anti-KIR2DL2. En otra modalidad, una composición para usar en la invención puede comprender un anticuerpo anti- IR2DL3 y opcionalmente otro agente activo. En una modalidad adicional, una composición puede comprender un anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2, y/o 3 y opcionalmente otro agente activo.

En una modalidad, una composición para usar en el tratamiento de un trastorno autoinmune puede comprender una cantidad efectiva de un anticuerpo anti-KIR2DLl . En una modalidad, una composición para usar en el tratamiento de un trastorno autoinmune de acuerdo con la invención puede comprender una cantidad efectiva de un anticuerpo anti-KIR2DL2. En una modalidad, una composición para, usar en el tratamiento de un trastorno autoinmune de acuerdo con la invención puede comprender administrar una cantidad efectiva de un anticuerpo antÍ-KIR2DL3. En una modalidad adicional, una composición para usar en el tratamiento de un trastorno autoinmune puede comprender administrar una cantidad efectiva de un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3.

En una modalidad, una composición para usar en el tratamiento de un trastorno inflamatorio de acuerdo con la invención puede comprender un anticuerpo antÍ-KIR2DL1. En una modalidad, una composición para usar en el tratamiento dé un trastorno inflamatorio de acuerdo con la invención puede comprender un anticuerpo anti-KIR2DL2. En una modalidad, una composición para usar en el tratamiento de un trastorno inflamatorio de acuerdo con la invención puede comprender un anticuerpo anti-KlR2DL3. En una modalidad adicional, una composición para usar en el tratamiento de un trastorno inflamatorio de acuerdo con la invención puede comprender un anticuerpo antÍ-KIR2DL1 , 2 y/o 3.

En una modalidad, la invención proporciona un método de obtener anticuerpos que comprende (a) inmunizar un animal con un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3; (b) extirpar el bazo del animal y preparar una suspensión celular única; (c) fusionar una célula del bazo con una célula de mieloma; (d) cultivar células pos-fusión en el medio de selección del hibridoma; (e) cultivar los hibridomas resultantes; ,(f) ..analizar la producción de anticuerpo específico; y (g) seleccionar hibridomas que producen el anticuerpo deseado.

En una modalidad, la invención proporciona un método para producir un anticuerpo para el tratamiento de un trastorno inflamatorio o autoinmune que comprende (a) inmunizar un mamífero no humano con un inmunógeno que comprende un polipéptido de KIR2DL1, 2 y/o 3; (b) seleccionar anticuerpos de el mamífero inmunizado, donde los anticuerpos se unen a el polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3, y (c) seleccionar anticuerpos de (b) que potencian |la eliminación de células NK de las células T.

En una modalidad, la invención proporciona un método para producir un anticuerpo para el tratamiento de un trastorno inflamatorio o autoinmune que comprende (a) proporcionar una biblioteca de anticuerpos por la tecnología de despliegue en fago; (b) biblioteca, donde los anticuerpos se unen a el polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3, y (c) seleccionar anticuerpos de (b) que potencian la eliminación de células NK de las células T.

En otra modalidad, cualquiera de los diversos métodos descritos anteriormente opcionalmente también se pueden modificar por la aplicación de un tratamiento con uno o más agentes terapéuticos adicionales, por ejemplo agentes de molécula pequeña, DMARDS (con preferencia diferentes de anticuerpos cuyo. modo.. de acción primario pueden, inducir la ADCC) .

En una modalidad la invención proporciona un método para tratar un trastorno autoinmune puede comprender administrar una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En otra modalidad, un método para tratar un trastorno inflamatorio puede comprender administrar una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En otra modalidad, un método para eliminar o reducir el número de células T involucrados en una condición de enfermedad puede comprender poner en contacto con las células T con un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3, en presencia de células que expresar un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad, las células que expresan un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 son células NK. En una modalidad, esto se efectúa ex vivo. En una modalidad, esto se efectúa in vivo. En una modalidad, las células T incluyen una o más de las-células T proinflamatorias , activadas y/o proliferantes, células T CD4+, células T infiltrantes, y/o células T que expresa HLA-cw3 y/o HLA-cw4.

En otra modalidad, un método para eliminar o reducir el número de células T que están involucradas en la patología de un trastorno inflamatorio puede comprender administrar a un individuo que tiene un trastorno inflamatorio, una cantidad de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 efectiva para reducir el número de las células T. En otra modalidad, un método para eliminar o reducir el número de células T que están involucradas en la patología de un trastorno autoinmune puede comprender administrar a un individuo que tiene un trastorno autoinmune una- cantidad de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 efectiva para reducir el número de las células T. En una modalidad, las células T comprenden células T activadas y/o proliferantes, células T CD4+, células T proinflamatorias , y/o células T que expresan HLA-cw3 y/o HLA-cw4. En una modalidad, las células T incluyen una o más de los siguientes: están en circulación, están compuestos en un tejido enfermo o inflamado, son células T infiltrantes, son células T que se han infiltrado en tejidos enfermos, están compuestos en los tejidos articulares sinoviales o fluido sinóvial, o están compuestos en el sistema nervioso central, colon, o tejido dérmico. En una modalidad, el individuo tiene una enfermedad mediada al menos en parte por las células T.

En otra modalidad, un método para eliminar o reducir el número de células T activadas y/o proliferantes que están involucradas en la patología de un trastorno inflamatorio o autoinmune in vivo puede comprender administrar a un individuo que tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune una cantidad de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 efectiva para reducir el número de las células T. En otra modalidad, un método para eliminar o reducir el número de células T CD4+ que están involucradas en la patología de un trastorno inflamatorio o autoinmune puede comprender administrar a un individuo que tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune una cantidad de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 efectiva para reducir el número de las células T. En otra modalidad, un método para eliminar o reducir el número de células T proinflamatorias puede comprender administrar a un individuo que tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune, una cantidad de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 efectiva para reducir el número de las células T. En una modalidad, la enfermedad está mediada al menos en parte por las células T.

En otra modalidad, .un método para eliminar o reducir el número de células T infiltrantes puede comprender administrar a un individuo que tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune una cantidad de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 efectiva para reducir el número de las células T. En una modalidad, la enfermedad está mediada al menos en parte por las células T. En una modalidad, las células T infiltrantes incluyen una o más de los siguientes: células que se han infiltrado en tejidos enfermos, células que se han infiltrado en tejidos • . articulares sinoviales o fluido sinovial, o células que se han infiltrado en el sistema nervioso central, colon, o tejido dérmico.

En otra modalidad, un método para eliminar o reducir el número de células T que expresan HLA-cw3 y/o HLA-cw4 puede comprender administrar a un individuo que tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune una cantidad de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 efectiva para reducir el número de las células T. En una modalidad, las células T, al menos en parte, median el trastorno.

I En otra modalidad, un método para tratar un trastorno inflamatorio puede comprender: (a) determinar si un individuo tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune; y (b) si el individuo tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune, tratar el individuo con una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

En otra modalidad, un método para tratar un trastorno autoinmune puede comprender: (a), determinar si un individuo tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune; y (b) si el individuo tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune, tratar el individuo con una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

En otra modalidad, un método para tratar un trastorno inflamatorio puede comprender: (a) determinar si un individuo tiene un trastorno inflamatorio mediado al menos en parte por células T, y (b) si el individuo tiene .un trastorno inflamatorio mediado al menos en parte por las células T, tratar el individuo con una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad, las células T incluyen una o más de los siguientes: son células T proinflamatorias , activadas y/o proliferantes, están en circulación o en un tejido enfermo o inflamado, células T CD4+, son células T infiltrantes, y/o expresa HLA-cw3 y/o HLA-cw4.

En otra modalidad, un método para tratar un trastorno autoinmune puede comprender: (a) determinar si un individuo tiene un trastorno autoinmune mediado al menos en parte por células T; y (b) si el individuo tiene un trastorno autoinmune mediado al menos en parte por las células T, tratar el individuo con una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad, las células T incluyen una o más de los siguientes, son células T proinflamatorias , activadas y/o proliferantes, están en circulación o están en un tejido enfermo o inflamado, son células T CD4+, son células T infiltrantes, y/o expresan HLA-cw3 y/o HLA-cw4.

En otra modalidad, un método para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un individuo puede comprender: (a) evaluar la presencia, etapa y/o evolución de la enfermedad inflamatoria en un individuo; y (b) administrar a el individuo . una- -cantidad efectiva de a compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En otra modalidad, un método para el tratamiento de una enfermedad autoinmune en un individuo puede comprender: (a) evaluar la presencia, etapa y/o evolución de la enfermedad autoinmune en un individuo; y (b) administrar a el individuo una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad, el método puede comprender evaluar la presencia, etapa y/o evolución de la enfermedad en un individuo puede comprender analizar los niveles de autoanticuerpos , CRP, cualquier enzima proteolítica, mediador inflamatorio, o etiquetador de la inflamación en curso . En una modalidad, se determina que el individuo es adecuado para el tratamiento con un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1 , 2, y/o 3, administrar a el individuo una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En otra modalidad, un método para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un individuo puede comprender: (a) determinar si el individuo tiene una enfermedad inflamatoria establecida; y (b) si el individuo tiene una enfermedad inflamatoria establecida, administrar a el paciente una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En otra modalidad, un método para el tratamiento de una enfermedad autoinmune en un individuo puede comprender: (a) determinar si el individuo tiene una enfermedad autoinmune establecida; y (b) .si. el individuo tiene una enfermedad autoinmune establecida, administrar a el paciente una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En otra modalidad, un método para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un individuo puede comprender (a) determinar si el individuo está experimentando un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad inflamatoria; y (b) si el individuo experimenta un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad inflamatoria, administrar a el individuo una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En otra modalidad, un método para el tratamiento de una enfermedad autoinmune en un individuo puede comprender (a) determinar si el individuo está experimentando un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad autoinmune; y (b) si el individuo experimenta un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad autoinmune, administrar a el individuo una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En otra modalidad, un método para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un individuo puede comprender (a) determinar si el individuo tiene una enfermedad inflamatoria caracterizada por la presencia de células T; y (b) si el individuo tiene una enfermedad inflamatoria caracterizada por la presencia de. las células. T, administrar a el paciente una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En otra modalidad, un método para el tratamiento de una enfermedad autoinmune en un individuo puede comprender (a) determinar si el individuo tiene la enfermedad autoinmune que tiene la presencia de células T; y (b). si el individuo tiene una enfermedad autoinmune caracterizada por la presencia de las células T, administrar a el paciente una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

En una modalidad, las células T pueden ser células T activadas y/o proliferantes, células T CD4+, células T proinflamatorias , células T infiltrantes, y/o células T que expresan HLA-cw3 y/o HLA-cw4.

En una modalidad, la invención proporciona un método para el tratamiento de un individuo está experimentando un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad inflamatoria, puede comprender administrar al individuo una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KI 2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad, el individuo tiene una enfermedad inflamatoria establecida. En otra modalidad, un método para el tratamiento de un individuo está experimentando un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad autoinmune, puede comprender administrar al individuo una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad, el individuo tiene una enfermedad inflamatoria autoinmune. En otra modalidad, un método de tratar un individuo puede comprender: (a) determinar si un individuo tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune; y (b) si el individuo tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune, tratar el individuo con una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En otra modalidad, un método de tratar un individuo puede comprender: (a) determinar si un individuo tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune mediado al menos en parte por células T; jy (b) si el individuo tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune mediado al menos en parte por las células T, tratar el individuo con una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En otra modalidad, un método de tratar un individuo puede comprender: (a) evaluar la presencia, etapa y/o evolución de la enfermedad inflamatoria o autoinmune . en un individuo; y (b) administrar a el individuo una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En otra modalidad, un método de tratar un individuo puede comprender: (a) determinar si el individuo tiene una enfermedad inflamatoria o autoinmune establecida; y (b) si el individuo tiene una enfermedad inflamatoria o autoinmune establecida, administrar a el paciente una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe .un polipéptido de . KIR2DL1 , .2 , y/o 3.

En otra modalidad, un método de tratar un individuo puede comprender: (a) determinar si el individuo está experimentando un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad inflamatoria o autoinmune; y (b) si el individuo experimenta un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad inflamatoria o autoinmune, administrar a el individuo una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. En una modalidad, el compuesto es un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un péptido, un glicoalcoide , un ácido nucleico antisentido, una ribozima, un retinoide, un avemir, una molécula pequeña, o cualquiera de sus combinaciones. En una modalidad, el individuo tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune mediado por las células T. En una modalidad, el trastorno autoinmune es síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) , atrofia esplénica adquirida, uveítis anterior aguda, encéfalomielitis diseminada aguda (ADEM) , artritis gotosa aguda, leucoencefalitis hemorrágica necrotizante aguda, sinusitis aguda o crónica, meningitis purulenta aguda (u otros trastornos inflamatorios del sistema nervioso central) , inflamación grave aguda, enfermedad de Addison, adrenalitis, diabetes mellitus de comienzo adulto (diabetes Tipo II) , hipoparatiroidismo idiopático de comienzo adulto (AOIH) , Agammaglobulinemia,:' agranulocitosis , vasculitides , que incluye a vasculitis (que incluye vasculitis de grandes vasos (que incluye polimialgia reumática y células gigantes (Takayasu) artritis), afecciones alérgicas, dermatitis por contacto, dermatitis alérgica, angíitis granulomatosa alérgica, trastornos de hipersensibilidad alérgica, neuritis alérgica, reacción alérgica, alopecia areata, alopecia totalis, Síndrome de Alport (por ejemplo, alveolitis alérgica y alveolitos fibrosante) , enfermedad de Alzheimer, amiloidosis , esclerosis lateral amilotrófica (ALS, enfermedad de Lou Gehrig) , un trastorno relacionado con eosinófilo (por ejemplo, eosinofilia) , anafilaxis, espondilitis anquilosante, angiectasia, nefritis mediada por anticuerpo, nefritis anti-GBM/anti-TBM, enfermedades mediadas por el complejo de antigeno-anticuerpo, enfermedad de la membrana basal antiglomerular , síndrome de anticuerpos anti-fosfolípido, síndrome antifosfolípido (APS) , aftas, estomatitis aftosa, anemia aplásica, arritmia, arteriosclerosis , trastornos arterioscleróticos , artritis (por ejemplo, artritis reumatoide tales como artritis aguda, artritis reumatoide crónica) , artritis crónica progrediente, artritis deformante, ascariasis, aspergiloma (o granulomas que contienen eosinófilos) , aspergilosis , aspermiogenesia, asma (por ejemplo, asma bronquia y asma autoinmune, telangiectasia ataxia, angiectasia, esclerosis atáxica, aterosclerosis , autismo, angioedema autoinmune, .anemia aplásica autoinmune, gastritis atrófica autoinmune, diabetes autoinmune, enfermedad autoinmune del testículo y ovario que incluye orquitis autoinmunes y ooforitis, trastornos autoinmunes asociados con enfermedad del colágeno, disautonomía autoinmune, enfermedad auditiva autoinmune (por ejemplo, enfermedad de oído interno autoinmune (AGED) ) , enfermedades endocrinas autoinmunes que incluyen tiroiditis tales como tiroiditis autoinmune, síndrome enteropático autoinmune, falla gonadal autoinmune, pérdida auditiva autoinmune, hemolisis autoinmune, hepatitis autoinmune, trastorno hepatológico autoinmune, hiperlipidemia autoinmune, inmunodeficiencia autoinmune, enfermedad del oído interno autoinmune (AIED) , miocarditis autoinmune, neutropenia autoinmune, pancreatitis autoinmune, polinedocrinopatías autoinmunes, síndrome poliglandular autoinmune tipo I, retinopatía autoinmune, púrpura trombocitopenia autoinmune (ATP) , enfermedad tiroidea autoinmune, urticaria autoinmune, enfermedades gastrointestinales mediadas autoinmunes, neuropatía axonal & neuronal, enfermedad de Balo, enfermedad de Behcet, lesión por reperfusión- isquemia y familiar, angiítis linfocítica benigna, enfermedad de Berger (neuropatía por IgA) , pulmón del cuidador de palomas, ceguera, enfermedad de Boeck, bronquiolitis obliterante (no-trasplante) vs NSIP, bronquitis, aspergilosis bronconeumónica, . .síndrome;.... de -¦ Bruton, penfigoide bulloso, síndrome de Caplan, cardiomiopatía , isquemia cardiovascular, síndrome de Castleman, enfermedad celíaca, sprue celíaco (enteropatía de gluten) , degeneración cerebelar, isquemia cerebral, y enfermedad acompañante de la vascularización, enfermedad de Chagas, canalopatías (por ejemplo, epilepsia), canalopatías del SNC, coriorretinitis , coroiditis, un trastorno hematológico autoinmune, hepatitis crónica activa o hepatitis crónica activa autoinmune, dermatitis por contacto crónica, neumonía eosinofilia crónica, síndrome de fatiga crónica, hepatitis crónica, neumonitis hipersensible crónica, artritis inflamatoria crónicas, polineuropatías desmielinizante inflamatoria crónica (CIDP) , inflamación intratable crónica, candidiasis mucocutánea crónica, neuropatía crónica (por ejemplo, polineuropatía IgM o neuropatías mediadas por IgM) , enfermedad respiratoria obstructiva crónica, enfermedad inflamatoria pulmonar crónica, osteomielitis multifocal recurrente crónica (CRMO) , tiroiditis crónica (tiroiditis de Hashimoto) o tiroiditis subaguda, síndrome de Churg-Strauss , penfigoide cicatricial/penfigoide mucoso benigno, trastornos inflamatorios del SNC, vasculitis de SNC, enfermedad celíaca, síndrome de Cogan, enfermedad de aglutinina fría, colitis poliposa, colitis tales como colitis ulcerativa, colitis ulcerosa, colitis colagenosa, afecciones que involucran la infiltración de células T y . respuestas , inflamatorias crónicas, bloqueo cardíaco congénita, infección de rubéola congénita, anemia anemia positiva a Coomb, enfermedad arterial coronaria, miocarditis de Coxsackie, síndrome CREST (calcinosis, fenómeno de Raynaud) , enfermedad de Crohn, crioglobulinemia, síndrome de Cushing, ciclitis (por ejemplo, ciclitis crónica, ciclitis heterocrónica, iridociclitis , o ciclitis de Fuch) , fibrosis tóxica, toxicidad inducida por citoquina, sordera, artritis degenerativa, enfermedades desmielinizantes (por ejemplo, enfermedades desmielinizantes autoinmunes) , neuropatías desmielinizantes, dengue, dermatitis herpetiforme y dermatitis atópica, dermatitis que incluye dermatitis por contacto, dermatomiositis , dermatosis con componentes agudos inflamtorios , enfermedad de Devic (neuromielitis óptica) , trastorno de arterias grandes diabético, neuropatía diabética, retinopatía diabética, anemia de Diamond Blackfan, fibrosis pulmonar intersticial difusa, cardiomiopatía difusa, lupus discoide, enfermedades que involucran diapédesis leucocitaria , síndrome de Dressler, contractura de Dupuytren, infección con echovirus, eczema que incluye eczema alérgico o atópico, encefalitis tal como encefalitis de Rasmussen y encefalitis límbico y/o tronco del encéfalo, encefalimielitis (por ejemplo, encefalomielitis alérgica o encefalomielitis alérgica y experimental (EAE) ) , hiperplasia endoarterial , endocarditis, oftalmopatía endocrina-, ........ endometriosis , fibrosis endomiocárdica , . endoftalmia facoanafiláctica, endoftalmitis , enteritis alérgica, síndrome eosinofilia-mialgia , faciítis eosinofílica , queratoconjuntivitis epidémica, epidermolisis bul'losa adquirida (EBA) , episclera, episcleritis , infección con virus de Epstein-Barr , , eritema elevatum et diutinum, eritema multiforme, eritema nodosum leprosum, eritema nodosum, eritroblastosis fetal, dismotilidad esofágica, crioglobulinemia mixta esencial, etmoide, síndrome de Evan, encefalomielitis alérgica experimental (EAE) , deficiencia del Factor VIII, pulmón de granjero, fiebre reumática, síndrome de Felty, fibromialgia, alveolitos fibrosante, filariasis, glomerulosclerosis segmentaria focal (FSGS) , intoxicación alimentaria, atrofia gástrica frontal, artritis de células gigantes (artritis temporal) , hepatitis de células gigantes, polimialgia de células gigantes, glomerulonefritis , glomerulonefritis (GN) con y sin síndrome nefrótico glomerulonefritis aguda o crónica (por ejemplo, GN primaria) , síndrome de Goodpasture, artritis gotosa, síndromes asociados con transfusión de granulocitos , granulomatosis que incluye granulomatosis linfomatoide, granulomatosis con poliangiítis (GPA) , uveítis granulomatosa, enfermedad de Grave, síndrome de Guillain-Barre, psoriasis guttata, hemoglobinuria paroxística, enfermedad de Hamman-Rich, enfermedad de Hashimoto, encefalitis de Hashimoto, tiroiditis de Hashimoto, hemocromatosis , anemia hemolítica o anemia hemolítica inmune que incluye anemia hemolítica autoinmune (AIHA) , anemia hemolítica, hemofilia A, púrpura de Henoch-Schonlein, Herpes gestacional, infección con el virus de inmunodeficiencia humana (VIH) , hiperalgesia, hipogammaglobulinemia , hipogonadismo, hipoparatiroidismo, diabetes insípida idiopática, parálisis facial idiomática, hipotiroidismo idiopático, nefropatía IgA idiopática, GN membranosa idiomática o neuropatía membranosa idiopática, síndrome nefrítico idiopático, fibrosis pulmonar idiopática, sprue idiopático, púrpura trombocitopénica idiopática (ITP) , nefropatía IgA, enfermedades mediadas por IgE (por ejemplo, anafilaxis y rinitis alérgica y atópica) , enfermedad esclerosante IgG4 , ileítis regional, por complejo inmune, respuestas inmunes asociadas con hipersensibilidad aguda y retardada mediada por citoquinas y linfocitos T, GN inmunomediada , lipoproteínas inmunorregulatoria, que incluye síndrome de distrés respiratorio adulto o agud (ARDS) , miositis con cuerpo de inclusión, artritis infecciosa, infertilidad debido a los anticuerpos anti -espermatozoides, inflamación del total o parte de uvea, enfermedad intestinal inflamatoria (IBD) enfermedades cutáneas hiperproliferativas inflamatorias, miopatía inflamatoria, diabetes insulinodependiente (tipo 1), insulitis, cistitis intersticial, enfermedad pulmonar intersticial, fibrosis pulmonar intersticial,, ... iritis, trastorno de reprofusión isquémica, inflamación de articulaciones, artritis juvenil, dermatomiositis juvenil, diabetes juvenil, diabetes mellitus de inicio juvenil (Tipo I) , que incluye diabetes insulinodependiente pediátrica (IDDM), artritis reumatoide de inicio juvenil, síndrome de Kawasaki, queratoconjuntivitis seca, quipanosomiasis , síndrome de Lambert-Eaton, leishmaniasis , lepra, leucopenia, deficiencia de adhesión leucocitaria , vasculitis leucocitoclástica , leucopenia, liquen plano, liquen escleroso, conjuntivitis leñosa, dermatosis IgA lineal (LAD) , síndrome de Loffler, hepatitis lupoide, lupus (que incluye nefritis, cerebritis, pediátrico, no renal, extrarrenal, discoide, alopecia), Lupus (SLE) , lupus eritematoso diseminado, artritis de Lyme, enfermedad de Lyme, neumonitis intersticial linfoide, malaria, infertilidad autoinmune masculina y femenina, vasculitis de vaso medio maxilar (que incluye enfermedad de Kawasaki y poliarteritis nodosa) , GN GN proliferativa membrano o membranosa (MPGN) , que incluye Tipo I y Tipo II, y GN rápidamente progresiva, GN membranosa (neuropatía membranosa) , enfermedad de Meniere, meningitis, colitis microscópica, poliangiítis microscópica, migraña, neuropatía de cambios mínimos, enfermedad del tejido conectivo mixto (MCTD) , mononucleosis infecciosa, úlcera de Mooren, enfermedad de Mucha-Habermann, neuropatía motora multifocal, falla endocrina múltiple, síndrome de lesión orgánica múltiple tal como los secundarios a ..septicemia, trauma o hemorragia, síndrome de lesión orgánica múltiple, esclerosis múltiple (MS) tales como MS espino-óptica, esclerosis múltiple, paperas, trastornos musculares, miastenia gravis tal como miastenia gravis asociada a timoma, miastenia gravis, miocarditis, miositis, narcolepsia; enterocolitis necrotizante , y colitis transmural y enfermedad intestinal inflamatoria autoinmune, vasculitis necrotizante, cutánea o por hipersensibilidad, síndrome lúpico neonatal (NLE) , nefrosis, síndrome nefrótico, enfermedad neurológica, neuromielitis óptica (Devic) , neuromielitis | óptica, neuromiotonía , neutropenia, lifocitosis no cancerosa, uveítis no granulomatosa , timoma no maligno, trastornos inflamatorios ocular y orbital, penfigoide cicatrizal ocular, ooforitis, oftalmía simpática, síndrome opsoclonus mioclonus (OMS) , opsoclonus o síndrome opsoclonus mioclonus (OMS) , y neuropatía sensorial, neuritis óptica, orquitis granulomatosa, osteoartritis , reumatismo palindrómico, pancreatitis, pancitopenia, PANDAS (trastornos neuropsiquiátricos autoinmunes pediátricos con estreptococos) , degeneración paraneoplásica, síndrome paraneoplásico, síndromes paraneoplásicos, que incluyen síndromes paraneoplásicos neurológicos (por ejemplo, síndrome de Lambert-Eaton miasténico o síndrome de Eaton-Lambert ) , enfermedades parasitarias s tales como leishmaniasis , hemoglobinuria paroxística nocturna (PNH),. síndrome de Parry Romberg, pars planitis (uveítis periférica) , síndrome de Parsonnage-Turner, infección con parvovirus, penfigoide bulloso y penfigoide de la piel, pénfigos que incluye pénfigo vulgar) , pénfigo eritematoso, pénfigo foliáceo, pénfigo mucus-menmbranoso penfigoide, pénfigos, úlcera péptica, parálisis periódica, neuropatía periférica, encefalomielitis perivanosa, anemia perniciosa (anemia perniciosa) , anemia perniciosa, uveítis fagoantigénica . pneumonocirrosis , síndrome de POEMS, poliarteritis nodosa, Tipo I, II, & III, poliartritis crónica primaria, policondiritis (por ejemplo, policondritis refractaria o recidivante) , enfermedad autoinmune poliendocrina , falla poliendocrina , síndromes poliglandulares (por ejemplo, síndromes poliglandulares autoinmunes (o síndromes de endocrinopatía poliglandular) ) , polimialgia reumática, polimiositis , polimiositis/dermatomiositis , polineuropatías , poliradiculitis aguda, síndrome pos-cardiotomía, uveítis posterior, o uveítis autoinmune, síndrome de infarto posmiocárdico, síndrome pospericardiotomía , nefritis pos-estreptocócica, síndromes pos-vacunación, demencia presenil, cirrosis biliar primaria, hipotiroidismo primario, mixedema idiopático primario, linfocitosis primaria, que incluyen linocitosis de células B monoclonales (por ejemplo, gamopatía monoclonal benigno y gammopatía monoclonal de significación no. determinado, MGUS) , mixedema primario, MS progresiva primaria (PPMS) , y MS remitente-recidivante (RRMS) , colangitis esclerosante primaria, dermatitis por progesterona , esclerosis sistémica progresiva, artritis proliferativa, psoriasis tales como psoriasis en placa, psoriasis, artritis psoriática, proteinosis alveolar pulmonar, eosinofilia por infiltración pulmonar, anemia o aplasia de hematíes pura (PRCA) , aplasia de hematíes pura, sinusitis purulenta o no purulenta, psoriasis pustular y psoriasis de las uñas, pielitis, pioderma gangrenosa, tiroiditis de Quervain, fenómeno de Raynaud, artritis reactiva, aborto recurrente, reducción de la respuesta a la presión arterial, distrofia simpática refleja, sprue refractaria, enfermedad o síndrome de Reiter, policondritis recidivante, lesión por repercusión de tejidos miocárdicos u otros, lesión por reperfusión, síndrome de distrés respiratorio, síndrome de piernas inquietas, autoinmunidad retiniana, fibrosis retroperitoneal , síndrome de Reynaud, enfermedades reumáticas, fiebre reumática, reumatismo, artritis reumatoide, espondilitis reumatoide, infección con el virus de rubéola, síndrome de Sampter, sarcoidosis, esquistosomiasis , síndrome de Schmidt, SCID y enfermedades asociadas al virus Epstein-Barr, esclera, escleritis, esclerodactilia, escleroderma (que incluye escleroderma sistémica), colangitis esclerosante, esclerosis diseminada, esclerosis tal como esclerosis sistémica, pérdida de audición sensoneural, espondiloartritis seronegativa , síndrome de Sheehan, síndrome de Shulman, silicosis, síndrome de Sjogren, autoinmunidad espermática & testicular, sinusitis esfenoide, síndrome de Stevens-Johnson, síndrome del hombre rígido (o persona rígida) , endocarditis bacteriana subaguda (SBE) , lupus eritematoso cutáneo subagudo, pérdida auditiva súbita, síndrome de Susac, corea de Sydenham, oftalmía simpática, lupus eritematoso sistémica (SLE) o lupus eritematoso sistémica (por ejemplo, SLE cutáneo) , vasculitis necrotizante sistémica, y vasculjitis asociada ANCA, tales como vasculitis o síndrome de Churg-Strauss (CSS) ) , tabes dorsal, arteritis de Takayasu, telangiectasia, arteritis temporal/arteritis de células gigantes, tromboangitis ubiterans, trombocitopenia (desarrollado por ejemplo, por pacientes de infarto miocárdico) , que incluyen púrpura trombocitopénica trombótica (TTP) y trombocitopenia autoinmune o inmunomediada tales como púrpura trombocitopénica idiopática (ITP) que incluyen ITP crónica o aguda, púrpura trombocitopénica (TTP) , tirotoxicosis , lesión tisular, síndrome de Tolosa-Hunt, necrólisis epidérmico tóxico, síndrome del shock tóxico, reacción de transfusión, hipogammaglobulinemia transitoria de infancia, mielitis tranversa, mielitis transversa, eosinofilia pulmonar tropical, tuberculosis, colitis ulcerativa, enfermedad del tejido conectivo no diferenciado (UCTD) , urticaria (por ejemplo, urticaria alérgica crónica y urticaria idiopática crónica, que incluye urticaria autoinmune crónica) , uveítis (por ejemplo, uveítis anterior) , uveorretinitis , valvulitis, disfunción vascular, vasculitis, artritis vertebral, dermatosis vesiculobullosa , vitíligo, granulomatosis de Wegener (actualmente denominada granulomatosis con poliangiítis (GPA) , síndrome de Wiskott-Aldrich, o síndrome de hiper IgM ligada a x.

En una modalidad, el trastorno" inflamatorio es enfermedades reumáticas (por ejemplo, artritis reumatoide, osteoartiritis , artritis psoriática) espondiloartropatías (por ejemplo, espondilitis anquilosante, artritis reactiva, síndrome de Reiter) , artropatías cristalinas (por ejemplo, gota, pseudogota, enfermedad de depósito de pirofosfato de calcio) , esclerosis múltiple, enfermedad de Lyme, polimialgia reumática; enfermedades del tejido conectivo (por ejemplo, lupus eritematoso sistémico, esclerosis sistémica, polimiositis , dermatomiositis , síndrome de Sjogren) vasculitis (por ejemplo, poliarteritis nodosa, granulomatosis de Wegener, síndrome de Churg-Strauss) ; afecciones inflamatorias que incluyen consecuencias de trauma o isquemia, sarcoidosis ; enfermedades vasculares que incluyen enfermedad vascular aterosclerótica , aterosclerosis , y enfermedad oclusiva vascular (por ejemplo, aterosclerosis, enfermedad cardíaca isquémica, infarto miocárdico, accidente cerebrovascular, enfermedad vascular periférica), restenosis del stent vascular; enfermedades oculares que incluyen uveítis, enfermedad corneana, iritis, iridociclitis , cataratas, reflujo ácido/acidez , acné, acné vulgar, alergias y sensibilidades, enfermedad de Alzheimer, asma, aterosclerosis y enfermedad oclusiva vascular (por ejemplo, ateroesclerosis , enfermedad cardíaca isquémica, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular, enfermedad vascular periférica) y restenosis del stent vascular, enfermedades autoinmunes, bronquitis, cáncer, carditis, cataratas, enfermedad celíaca, dolor crónico, prostatitis crónica, cirrosis, colitis, enfermedades del tejido conectivo (por ejemplo, lupus eritematoso sistémico, esclerosis sistémica, polimiositis , dermatomiositis , síndrome de Sjogren) , enfermedad corneana, enfermedad de Crohn, artropatías cristalinas (por ejemplo, gota, pseudogota, enfermedad del depósito de pirofosfato de calcio), demencia, dermatitis, diabetes, ojos secos, eczema, edema, enfisema, fibromialgia, gastroenteritis, gingivitis, glomerulonefritis , enfermedad cardíaca, hepatitis, presión arterial alta, hipersensibilidades , enfermedades intestinales inflamatorias, afecciones inflamatorias que incluyen consecuencias de trauma o isquemia, resistencia a la insulina, cistitis intersticial, iridociclitis , iritis, dolor articular/artritis/artritis reumatoide, enfermedad de Lyme, síndrome metabólico (síndrome x) , esclerosis múltiple, miositis,.. , nefritis,.. obesidad, enfermedades oculares que incluyen uveítis, osteopenia, osteoporosis , enfermedad de Parkinson, enfermedad inflamatoria pélvica, enfermedad periodontal, poliarteritis , policondritis , polimialgia reumática, psoriasis, lesión por reperfusión, artritis reumática, enfermedades reumáticas (por ejemplo, artritis reumatoide, osteoartritis , artritis psoriáticas) , artritis reumatoide, sarcoidosis, escleroderma , sinusitis, síndrome de Sjogren, colon espástico, espondiloartropatías {por ejemplo, espondilitis anquilosante, artritis reactiva, síndrome de Reiter) , candidiasis sistémica, tendonitis, rechazo del transplante, UTI, vaginitis, enfermedades vasculares que incluyen enfermedad vascular ateroesclerótica, vasculitis (por ejemplo, poliarteritis nodosa, granulomatosis de Wegener, síndrome de Churg-Strauss) , y vasculitis.

En una modalidad, el compuesto puede ser un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3. En una modalidad, el anticuerpo puede ser quimérico, humanizado, anti-idiotípico, cadena simple, bifuncional, o coespecífico.

En una modalidad, la cadena ligera de el anticuerpo puede comprender la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, 3, o 5. En una modalidad, los residuos 3, 4, 9, 24, 32, 41, 47, 50, 55, 71, y 74 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 son Q, L, S, R, A, G, L, D, E, F, y A, respectivamente. -En una modalidad, los residuos 3, 4, 9, 24, 32, 41, 47, 5.0, 55, 71, y 74 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO : 3 son R, M, F, W, Y, A, F, Y, Q, Y, y T, respectivamente. En una modalidad, la cadena pesada del anticuerpo puede comprender la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, 4, o 6. , En una modalidad, el anticuerpo puede comprender la secuencia de aminoácidos de CDRl de cadena ligera corresponde a los residuos 24-34 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1; la secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena ligera corresponde a los residuos 50-56 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO : 1; o la secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena ligera corresponde a los residuos 89-97 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1. En una modalidad, el anticuerpo puede comprender la secuencia de aminoácidos de CDRl de cadena ligera corresponde a los residuos 24-34 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3; la secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena ligera corresponde a los residuos 50-56 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 ; o la secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena ligera corresponde a los residuos 89-97 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO : 3.

En una modalidad, el anticuerpo puede comprender la secuencia de aminoácidos de CDRl de cadena pesada corresponde a los residuos 31-35 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, la secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena pesada corresponde a los residuos 50-65 de la secuencia - de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, o la secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena pesada corresponde a los residuos 99-112 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2. En una modalidad, el anticuerpo puede comprender la secuencia de aminoácidos de CDRl de cadena pesada corresponde a los residuos 31-35 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO : 4, la secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena pesada corresponde a los residuos 50-66 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, o la secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena pesada corresponde a los residuos 99-113 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4.

En una modalidad, el anticuerpo puede comprender una secuencia de la cadena ligera variable y una de cadena pesada variable puede comprender SEQ ID NO : 1 y SEQ ID NO : 2 , respectivamente. En una modalidad, el anticuerpo puede comprender una secuencia de la cadena ligera variable y una de cadena pesada variable puede comprender la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO : 3 y SEQ ID NO : 4 , respectivamente. En una modalidad, el anticuerpo puede comprender una secuencia de la cadena ligera variable y una de cadena pesada variable puede comprender la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 y SEQ ID NO: 6, respectivamente. En una modalidad, el anticuerpo se une a un epitopo dentro de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, o .,24..En una modalidad, el anticuerpo puede unir KIR2DL1 dentro de una región definida por al menos uno de los residuos de aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 127, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 181, y 192. En una modalidad, el ' anticuerpo puede unir KIR2DL1 y KIR2DL2/3 dentro de una región definida por al menos uno de los residuos de aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 127, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 152, 153, 154, 155, 156,. 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 181, y 192.

En una modalidad, el anticuerpo o fragmento puede estar directa o indirectamente conjugado a una etiqueta, agente citotóxico, agente terapéutico, o un agente inmunosupresor . En una modalidad, la etiqueta puede ser una etiqueta quimioluminiscente , etiqueta paramagnética, un agente de contraste MRI, etiqueta fluorescente, etiqueta bioluminiscente , o etiqueta radioactiva. En una modalidad, la etiqueta paramagnética puede ser aluminio, manganeso, platino, oxígeno, lantano, lutecio, escandio, itrio, o galio. En una modalidad, el agente citotóxico puede ser un resto que inhibe ADN, ARN, o síntesis de proteína, un radionucleido, o proteína inhibidora ribosómica. En una modalidad, el agente citotóxico puede ser 212Bi, 131I, 188Re, 90Y, vindesina, metptrexato, metotrexato, adriamicina, cisplatino, proteína antiviral de phytolaca, exotoxina A de Pseudomonas, ricina, toxina de difteria, cadena A de ricina o enzima fosfolipasa citotóxica.

En una modalidad, el anticuerpo bloquea o neutraliza la inhibición de NK. En una modalidad, el anticuerpo se une a al menos uno de KIR2DL1, 2 o 3 y neutraliza la inhibición mediada por KIR2DL1, 2 y/o 3 de citotoxicidad de las células NK. En una modalidad, el anticuerpo neutralizante puede comprender al menos aproximadamente 20% de aumento en la lisis específica mediada por las células NK | de células NK blanco .

En una modalidad, el anticuerpo compite por la unión con la misma región determinante antigénica de anticuerpo monoclonal 1-7F9, DF200, y/o NKVSF1. En una modalidad, el anticuerpo se une a al menos dos receptores inhibitorios KIR en la superficie de células NK. En una modalidad, el anticuerpo se une a una región determinante antigénica común de receptores de KIR2DL humanos. En una modalidad, el anticuerpo se une a los receptores de KIR2DL1, 2 y/o 3.

En una modalidad, el anticuerpo tiene una afinidad por KIR2DL1, 2 y/o 3 de al menos aproximadamente 104 a aproximadamente 1010 M"1. En una modalidad, el anticuerpo tiene una afinidad por KIR2DL1, 2 y/o 3 de al menos aproximadamente 107 a aproximadamente 109 M_1. En una modalidad, el anticuerpo exhibe la unión con KIR con una constante de disociación menores de aproximadamente 100 nM.

En una modalidad, el anticuerpo reacciona en forma cruzada con los KIR 2DL1 más 2DL2/3, 3DL1 más 3DL2 , 2DL1 (y 2DL2/3) más 2DS4 , y 2DL1 (y 2DL2/3) pero no 2D24.

En una modalidad, el anticuerpo puede ser anticuerpo DF200, 1-7F9, o NKVSF1.

En una modalidad, el compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 se puede administrar como una monoterapia. En una modalidad, el compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 | se puede administrar en combinación con un segundo agente terapéutico. En una modalidad, el segundo agente terapéutico puede ser un agente que disminuye la inflamación. En una modalidad, el segundo agente terapéutico puede ser a molécula pequeña agente químico. En una modalidad, el segundo agente terapéutico puede ser un D ARD, opcionalmente un anticuerpo anti-TNFa, un inhibidor de tirosina cinasa de molécula pequeña, o metotrexato (MTX) . En una modalidad, el segundo agente terapéutico puede ser un agente diferente de un anticuerpo que tiene un isotipo IgGl o IgG3.

En una modalidad, el compuesto que inhibe a KIR2DL1, 2 y/o 3 puede ser un anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 que tiene la capacidad de bloquear o neutralizar la inhibición NK mediada por KIR2DL1, 2 y/o 3 y de este modo potenciar la actividad- de- las células NK contra las células- blanco bloqueadas de otro modo. En una modalidad, el anticuerpo puede ser un anticuerpo anti-KIR que se une a KIR2DL1 y KIR2DL2/3. En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR compite con 1-7F9 por la unión a KIR2DL1, 2 y/o 3. En una modalidad, el . anticuerpo puede ser 1-7F9. En una modalidad, el anticuerpo puede comprender los dominios de VL y VH de 1-7F9. En una modalidad, el anticuerpo puede comprender las CDR de VL y VH de 1-7F9.

En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 se puede administrar como | una composición farmacéuticamente aceptable puede comprender una cantidad efectiva del anticuerpo anti-KIR2DLl, 2 y/o 3. En una modalidad, la composición puede estar libre de cualquier otro agente farmacéuticamente activo.

En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR2DL1 , 2 y/o 3 se puede administrar en una cantidad que produce saturación sustancialmente completa del KIR2DL1, 2 y/o 3 sobre las células NK durante un período de al menos aproximadamente 1 semana. En una modalidad, el anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 se puede administrar en una cantidad que produce saturación sustancialmente completa del KIR2DL1, 2 y/o 3 sobre las células NK durante un período de al menos aproximadamente 2 semanas. En una modalidad, el anticuerpo anti -KIR2DL1 > 2 y/o 3 se puede administrar en una cantidad que produce saturación sustancialmente completa del KIR2DL1, 2 y/o .3 sobre las células NK durante un período de al menos aproximadamente 1 mes. En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 se puede administrar varias veces con una frecuencia de dosis de una vez aproximadamente cada 2 semanas. En una modalidad, el anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 se puede administrar varias veces con una frecuencia de dosis de una vez aproximadamente cada 1 mes. En una modalidad, el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 se puede administrar varias veces con una frecuencia de dosis de una vez aproximadamente cada 2 meses o una vez cada período de más| de 2 meses.

La invención también proporciona un uso de la composición para el tratamiento de un trastorno autoinmune que puede comprender un anticuerpo anti-KIR2DLl . En otra modalidad, un uso de la composición para el tratamiento de un trastorno autoinmune puede comprender un anticuerpo anti-KIR2DL2. En otra modalidad, una composición para usar en el tratamiento de un trastorno autoinmune puede comprender un anticuerpo anti-KIR2DL3. En otra modalidad, una composición para usar en el tratamiento de un trastorno inflamatorio puede comprender un anticuerpo anti-KIR2DLl . En otra modalidad, una composición para usar en el tratamiento de un trastorno inflamatorio puede comprender un anticuerpo anti-KIR2DL2. En otra modalidad, una composición para usar en el tratamiento de un trastorno inflamatorio puede comprender un anticuerpo anti-KIR2E)L3. . . ... .

En una modalidad adicional, la invención proporciona un uso de un anticuerpo anti-KIR2DLl en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno autoinmune. En : una modalidad, la invención proporciona un uso de un anticuerpo anti-KIR2DL2 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno autoinmune. En una modalidad, la invención proporciona un uso de un anticuerpo anti -KIR2DL3 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno autoinmune . En una modalidad, la invención proporciona un uso de un anticuerpo anti-KIR2DLl en la preparación de .un medicamento para el tratamiento de un trastorno inflamatorio. En una modalidad, la invención proporciona un uso de un anticuerpo anti-KIR2DL2 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno inflamatorio. En una modalidad, . la invención proporciona un uso de un anticuerpo anti-KIR2DL3 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno inflamatorio.

En una modalidad, la invención proporciona un método para producir un anticuerpo para el tratamiento de un trastorno inflamatorio o autoinmune, el método puede comprender las etapas de: (a) inmunizar un mamífero no humano con un inmunógeno puede comprender un polipéptido de KIR2DL1, 2 y/o 3; (b) seleccionar anticuerpos de el mamífero inmunizado, donde los anticuerpos se unen. a el polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3, y (c) seleccionar anticuerpos de (b) que potencian la eliminación de células NK' de células T.

En una modalidad, la invención proporciona un método para producir un anticuerpo para el tratamiento de un trastorno inflamatorio o autoinmune puede comprender proporcionar una biblioteca de anticuerpos por la tecnología de despliegue en fago, donde los anticuerpos se unen a el polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3, y seleccionar anticuerpos que potencial la eliminación o reducción de las células T por parte de las células NK.

Estos aspectos se describen más plenamente y los aspectos, rasgos y ventajas adicionales de la invención serán evidentes a partir de la descripción de la invención provista en la presente.

Breve Descripción de las Figuras La Figura 1A ilustra una disminución del porcentaje de células etiquetadas CSFE (blastos Con A) en PBMC en ratones KIR2DL3tg B6 cuando se trata con anticuerpo 1-7F9, en comparación con ratones KIR2DL3tg B6 no tratados y ratones C57B16 tratados y no tratados.

La Figura IB ilustra una disminución del porcentaje de células del bazo etiquetada con CSFE en ratones KIR2DL3tg B6 cuando se trata con el anticuerpo 1-7F9, en comparación con los ratones KIR2DL3tg B6 no tratados y ratones C57B16 tratados y no tratados.

La Figura 2 ilustra una disminución de la supervivencia de , blastos ConA KbDb-/-cw3 en PBMC y bazo en ratones KIR2DL3tg B6 cuando se tratan con anticuerpo 1-7F9, en comparación con los ratones KbDb KO cw3 tg no tratados.

Descripción Detallada de la Invención A fin de que la invención de la presente descripta se pueda comprender más completamente, se expone la siguiente descripción detallada. Varias formas de modalidad de la invención se describen en detalle y se pueden ilustrar adicionalmente con los ejemplos provistos.

Definiciones A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente tienen el mismo significado que el comúnmente entendido por los expertos en la técnica a la que pertenece esta invención. Si bien los métodos y materiales similares o equivalentes a los descritos en la presente se pueden usar en la invención o analizar en la presente invención, se describen en la presente métodos y materiales adecuados. Los materiales, métodos y ejemplos son solo ilustrativos, y no están destinados a limitación.

Como se usa en la descripción en la presente y a lo largo de las siguientes reivindicaciones, el significado de "un", "una" y "el/la" incluye referencia plural a menos que el contexto exprese claramente lo contrario.

"Célula, que presenta antígeno" como se usa en la presente, se refiere en términos generales a profesionales a células que presentan antígenos (por ejemplo, linfocitos B, monocitos, células dendríticas, y células de Langerhans) así como otras células que presentan antígenos (por ejemplo, queratinocitos , células endoteliales , astrocitos, fibroblastos, y oligodendrocitos) .

"Aminoácido," como se usa en la presente se refiere en términos generales a aminoácidos naturales y sintéticos, así como análogos de aminoácido y miméticos de aminoácido que actúan de modo similar a los aminoácidos naturales. Los aminoácidos naturales son los codificados por el código genético, así como los aminoácidos que se modificaron posteriormente (por ejemplo, hidroxiprolina, ?-carboxiglutamato, y 0- fosfoserina . ) Los análogos de aminoácidos se refieren a compuestos que tienen la misma estructura básica que un aminoácido natural (es decir, un carbono que está unido a un hidrógeno, un grupo carboxilo, un grupo amino) , y un grupo R (por ejemplo, homoserina, norleucina, sulfóxido de metionina, metionina metil sulfonio) . Tales análogos tiene grupo R modificados (por ejemplo, norleucina) o esqueletos peptídicos modificados, pero retienen la estructura química básica como un aminoácido natural. Los miméticos de aminoácido se refieren a compuestos químicos que tienen una estructura que es diferente de la estructura química , general de un aminoácido, pero que actúa de una manera similar a un aminoácido natural.

"Anergia" o "tolerancias" como se usa en la presente, se refiere en términos generales a la refractividad para activar la estimulación mediada por el receptor. Tal refractividad es generalmente específico del antígeno y persiste después de la exposición que ha cesado la tolerancia del antígeno.

"Anticuerpo", como se usa en la presente, se refiere en términos generales a una "porción de unión al antígeno" de un anticuerpo (también usado en forma indistinta con la "porción del anticuerpo", "fragmento de unión al antígeno", "fragmento de anticuerpo"), así como moléculas de anticuerpo completo. El término "porción de unión al antígeno", como se usa en la presente, se refiere a uno o más fragmentos de un anticuerpo que retiene la capacidad de unirse específicamente a un antígeno {por ejemplo, KIR2DL1, 2 y/o 3). Se ha demostrado que la función de unión al antígeno de un anticuerpo se puede realizar con fragmentos un anticuerpo de longitud completa. Los ejemplos de fragmentos de unión al antígeno abarcados dentro del término "porción de unión al antígeno" de un anticuerpo incluyen (a) un fragmento Fab, un fragmento monovalente que consiste en los dominios VL, VH, CL y CH1 ; (b) un fragmento F(ab')2, un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab ligados por un puente disulfuro en :la región de bisagra; (c) un fragmento Fd que consiste en los dominios VH y CH1; (d) un fragmento Fv que consiste en los dominios de VL y VH de una rama única de un anticuerpo; (e) un fragmento dAb (Ward, et al. (1989) Nature 341: 544-546) , que consiste en un dominio VH; y (f) una región determinante de complementariedad aislada (CDR, por sus siglas en inglés) . Además, si bien los dos dominios del fragmento Fv, VL y VH, están codificados por genes separados, estos se pueden unir, mediante métodos recombinantes , con un ligador sintético que les permite obtenerlos como una cadena de proteína única en que las regiones de VL y VH se aparean para formar moléculas monovalentes (conocidas como Fv de cadena simple (scFv) ; Ver por ejemplo, Bird, et al. (1988) Science 242: 423-426; Huston, et al. (1988) Proc Nati. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883; y Osbourn, et al. (1998) Nat . Biotechnol . 16: 778. Los anticuerpos de cadena simple también están abarcados dentro del término "porción de unión al antígeno" de un anticuerpo. Cualquiera de las secuencias VH y VL del scFv específico se pueden ligar a secuencias de ADNC o genómicas de la región constante de inmunoglobulina humana, a fin de generar los vectores de expresión que codifican las moléculas de IgG completas u otros isotipos. Las VH y VL también se pueden usar en la generación de Fab, Fv, u otros fragmentos de inmunoglobulinas usando tecnología de química de proteína o ADN recombinante . También están comprendidas otras formas de anticuerpos de cadena simple, tales como diacuerpos. Los diacuerpos son anticuerpos biespecífieos bivalentes en los que los dominios VH y VL se expresan sobre una cadena de polipéptido simple, pero usando un ligador que es demasiado corto para permitir el apareamiento entre los dos' dominios de la misma cadena, de este modo se fuerza el apareamiento de dominios con los dominios complementarios de otra cadena y se crean dos sitios de unión al antígeno. Ver por ejemplo, Holliger, et al. (1993) Proc Nati. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448; Poljak, et al. (1994) Structure 2: 1121- 1123.

Aún más, un anticuerpo o porción de unión al lantígeno de este (fragmentos de unión al antígeno, fragmento de anticuerpo, porción del anticuerpo) pueden ser parte de una molécula de inmunoadhesión más grandes, formada por la asociación covalente o no covalente del anticuerpo o porción del anticuerpo con una o más proteínas o péptidos diferentes. Los ejemplos de tales moléculas de inmunoadhesión incluyen el uso de la región central de la estreptavidina para obtener una molécula scFv tetramérica (Kipriyanov, et al. (1995) Hum. Antibodies Hybridomas 6: 93-101) y el uso de un residuo de cisteína, un péptido etiquetador y una etiqueta de polihistidina C-terminal para obtener moléculas de scFv bivalentes y biotiniladas . Kipriyanov, et al. (1994) Mol Immunol . 31: 1047-1058. Las porciones de anticuerpo, tales como los fragmentos Fab y F(ab')2, se pueden preparar a partir de anticuerpos enteros usando técnicas. convencionales , tales como digestión con papaína o pepsina, respectivamente, de los anticuerpos enteros. Más aún, los anticuerpos, porciones de anticuerpo y moléculas de inmunoadhesión se pueden obtener usando técnicas de ADN recombinante estándares, como se describe en la presente.

Los anticuerpos pueden ser policlonales , monoclonales , xenogeneicos , alogeneicos, singeneicos o formas modificadas de estos, por ejemplo, humanizado, quimérico. Con preferencia, los anticuerpos de la invención se unen en forma específica o sustancialmente específica! a los polipéptidos de KIR2DL1, 2, y/o 3. Los términos "anticuerpos monoclonales" y "composición de anticuerpo monoclonal" , como se usa en la presente, se refieren a una población de moléculas del anticuerpo que contienen solo una especie de una sitio de unión al antígeno capaz de inmunorreacionar con un epitopo particular de un antígeno, mientras que el término "anticuerpos policlonales" y "composición de anticuerpo policlonal" se refiere a una población de moléculas de anticuerpo que contienen múltiples especies de sitios de unión al antígeno capaces de interactuar con un antígeno particular. Una composición de anticuerpo monoclonal, normalmente presenta una afinidad de unión única por un antígeno particular con el que inmunorreaciona .

"Antígeno" como se usa en la presente, se refiere en términos .generales a una molécula o una porción de una molécula capaz de unirse con un anticuerpo que es adicionalmente capaz de inducir un animal para producir un anticuerpo capaz de unirse a un epitopo de este antígeno. Un antígeno puede tener un epitopo, o tener más de un epitopo. La razón específica mencionada en la presente indica que el antígeno reaccionará, de una manera muy selectiva, con su correspondiente anticuerpo y no con la multitud de otros anticuerpos que pueden ser inducidos por otros antígenos. En el caso de un aumento de la respuesta inmunológica deseada a los antígenos particulares de interés, tales antígenos incluyen, pero sin limitación, como ejemplo los antígenos de enfermedades infecciosas para las cuales se puede inducir una respuesta inmune protectora.

"Molécula de ácido nucleico antisentido" como se usa en la presente, se refiere en términos generales a una secuencia de nucleótidos que es complementaria con un ácido nucleico "sentido" que codifica una proteína (por ej'emp2o, complementaria la cadena codificadora de una molécula de ADNc de cadena doble) complementaria a una secuencia de ARNm o complementaria a la secuencia codificadora de un gen. Por consiguiente, una molécula de ácido nucleico antisentido pueden unir hidrógeno a una molécula de ácido nucleico de sentido.

"Apoptosis," como se usa en la presente, se refiere en términos generales a muerte celular programada que. se. puede caracterizar usando técnicas que son conocidas en la materia. La muerte celular apoptótica se puede caracterizar por contracción celular, ampollado de la membrana, y condensación de : cromatina en la fragmentación celular. Las células que experimentan apoptosis también presentan un patrón característico de escisión del ADN internucleosómico.

"Autoinmunidad" o "enfermedad o afección autoinmune" como se usa en la presente, se refiere en términos generales a una enfermedad o trastorno proveniente y dirigido contra los tejidos del propio individuo o un cosegregado o manifestación de este o afección resultante de este.

"Anticuerpo quimérico" como se usa en la presente, se refiere en términos generales a una molécula de anticuerpo en que la región constante, o una porción de este, se altera, reemplaza o intercambia de modo que el sitio de unión del antígeno (región variable) se liga a una región constante de una clase diferente o alterada, función efectora y/o especie, o una molécula completamente diferente que confiere nuevas propiedades al anticuerpo quimérico, por ejemplo, una enzima, toxina, hormona, factor de crecimiento, fármaco, la región variable o una porción de este, se altera, reemplaza o intercambia con una región variable que tiene una especificidad por el antígeno diferente o alterada.

"Región codificadora" como se usa en la presente, se refiere en términos generales a regiones de una secuencia de nucleótidos que comprende codones que se traducen en residuos de aminoácido, mientras que el término "región no codificadora" se refiere a regiones de una secuencia de nucleótidos que no se traduce en aminoácidos (por ejemplo, regiones no traducidas 5' y 3') .

"Variantes modificadas en forma conservadora" como se usa en la presente, se aplica en secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos, y con respecto a las particular secuencias de ácidos nucleicos, se refiere en términos generales a variantes modificadas en forma conservadora que se refieren a los ácidos nucleicos que codifican secuencias de aminoácidos idénticas o esencialmente idénticas, o donde el ácido nucleico no codifica una secuencia de aminoácidos, a secuencias esencialmente idénticas. Debido a la degeneración del código genético, un gran número de ácidos nucleicos funcionalmente idénticos codifican cualquier proteína dada.

Tales variaciones de ácido nucleico son variaciones "silentes", que son una especie de variaciones modificada en forma conservadora. Cada secuencia de ácido nucleico de la presente que codifica un polipéptido también describe cada posible variación silente del ácido nucleico. Los expertos reconocerán que cada codón de un ácido nucleico (excepto AUG, que es comúnmente el único codón para la metionina, y TGG, que es comúnmente el único codón para triptofano) se pueden modificar para producir una molécula funcionalmente idéntica. ¦ "Región determinante de complementariedad" , "región hipervariable" o "CDR" como se usa en la presente, se refiere en términos generales a una o más de las regiones hipervariables o determinantes de complementariedad (CDR) halladas en las regiones variables de cadena ligera o pesada de un anticuerpo. Ver Kabat, efc al. (1987) "Sequences of Proteins of Immunological Interest" National Institutes of Health, Bethesda, MD. Estas expresiones incluyen las regiones hipervariables definidas por Kabat, et al. (1983) "Sequences of Proteins of Immunological Interest" U.S. Dept . de Health y Human Services o los bucles hipervariables en las estructuras tridimensionales de los anticuerpos. Chothia y Lesk (1987) J Mol. Biol . 196: 901-917. Las CDR de cada cadena se mantienen en proximidad cercana por las regiones estructurales y, con las CDR de la otra cadena, contribuyen a la formación del sitio de unión del antígeno. Dentro de las CDR existen aminoácidos seleccionados que se han descrito como las regiones determinantes de selectividad (SDR, por sus siglas en inglés) que representan los residuos de contacto crítico usados por la CDR en la interacción anticuerpo-.antígeno . Kashmiri (2005) Methods 36: 25-34.

"Cantidad de control" como se usa en la presente, en términos generales con referencia a un etiquetador, puede ser cualquier cantidad o un intervalo de cantidades para comparar frente a una cantidad de ,:ensayo de un. etiquetador. Por ejemplo, una cantidad de control de un etiquetador puede ser la cantidad de un etiquetador en un paciente con una enfermedad o afección particular o una persona sin tal enfermedad o afección. Una cantidad de control puede ser en una cantidad absoluta (por ejemplo, microgramo/ml) o una cantidad relativa (por ejemplo, intensidad relativa de señales) .

"Diagnóstico" como se usa en la presente, se refiere en términos generales a identificar la presencia o naturaleza de una afección patológica. Los métodos diagnósticos difieren en su sensibilidad y especificidad. La "sensibilidad" de un ensayo diagnóstico es el porcentaje de individuos enfermos que son positivos para la prueba (por ciento de "positivos verdaderos"). Los individuos enfermos no detectados por el ensayo son "falsos negativos" . Los sujetos que no están enfermos y son positivos para la prueba en el ensayo se denominan "negativos verdaderos" . La "especificidad" de un ensayo diagnóstico 1 menos la tasa de falsos positivos, donde la tasa de "falsos positivos" se define como la proporción de aquellos sin enfermedad que son positivos para la prueba. Si bien un método diagnóstico particular puede no proporcionar un diagnóstico definitivo de una afección, es suficiente si el método proporciona una indicación positiva que ayuda al diagnóstico .

"Diagnosticar" como se usa en la presente, se refiere en términos generales a clasificar una enfermedad o síntoma, determinar la gravedad de la enfermedad, controlar la progresión de la enfermedad, pronosticar una evolución de la una; enfermedad y/o perspectivas de recuperación. El término "detección" opcionalmente también puede abarcar alguno de los precedentes. El diagnóstico de una enfermedad de acuerdo con la presente invención, en algunas formas de modalidad, puede ser afectado por la determinación de un nivel de nivel de un polinucleótido o a polipéptido de la presente invención en una muestra biológica obtenida del sujeto, donde el nivel determinado se puede correlacionar con la predisposición, o presencia o ausencia de la enfermedad. Cabe mencionar que una "muestra biológica obtenida del sujeto" opcionalmente también puede comprender una muestra que no se ha extraído físicamente del sujeto.

"Cantidad efectiva" como se usa en la presente, se refiere en términos generales a la cantidad de un compuesto, anticuerpo, antígeno o células que, cuando se administran a un paciente para tratar una enfermedad, es suficiente para efectuar tal tratamiento para la enfermedad. La cantidad efectiva puede ser una cantidad efectiva para profilaxis, y/o una cantidad efectiva para la prevención. La cantidad efectiva puede ser una cantidad efectiva para reducir, una cantidad efectiva para prevenir la incidencia de signos/síntomas, .para reducir la gravedad de la incidencia, de signos/síntomas, para eliminar la incidencia de signos/síntomas, para lentificar el desarrollo de la incidencia de signos/síntomas, para prevenir el desarrollo de la incidencia de signos/síntomas, y/o efectuar la profilaxis de la incidencia de signos/síntomas. La "cantidad efectiva" puede variar de acuerdo con la enfermedad y su gravedad y la edad, peso, antecedentes médicos, susceptibilidad, y afecciones preexistentes, del paciente para tratar. El término "cantidad efectiva" es sinónimo con "cantidad terapéuticamente efectiva" para los fines de esta invención.

"Dominio extracelular" como se usa en la presente se refiere en términos generales a la porción de una proteína que se extiende desde la superficie de una célula.

"Vector de expresión" como se usa en la presente, se refiere en términos generales a cualquier sistema de expresión recombinante para el fin de expresar una secuencia de ácidos nucleicos de la invención in vitro o in vivo, en forma constitutiva o inducible, en cualquier célula, que incluye células procariótica , levadura, fúngica, planta, insecto o mamífero. El término incluye sistemas de expresión lineal o circular. El término incluye sistemas de expresión que permanecen en el episoma o se integran en el genoma de la célula huésped. Los sistemas de expresión pueden tener la capacidad de auto-replicarse o no, es decir, dirigir solo la expresión · transitorio en una célula. El término incluye los casetes de expresión recombinante que contienen solo los elementos mínimos necesarios para la transcripción del ácido nucleico recombinante.

"Receptor Fe" (FcR) como se usa en la presente, se refiere en términos generales a los receptores de la superficie celular para la porción Fe de las moléculas de inmunoglobulina (Ig) . Los receptores de Fe se hallan en muchas células que participan en las respuestas inmunológicas . Entre los FcR humanos que se han identificado hasta ahora están los que reconocen IgG (denominadas Fe | ? R) , IgE (Fe e Rl) , IgA (Fe a R) , y polimerizan IgM/A (Fc a R) . Los FcR se hallan en los siguientes tipos celulares: Fes R I (mastocitos) , Fce RII (muchos leucocitos) , Fe a R (neutróf ilos) , y FcpDa R (epitelio glandular, hepatocitos) . Hogg (1988) Immunol . Today 9: 185-86. Los Fcy R ampliamente estudiados son centrales en las defensas inmunitarias celulares y son responsables para estimular la liberación de mediadores de la inflamación y enzimas hidrolíticas involucradas en la patogénesis de la enfermedad autoinmune. Unkeless (1988) Annu. Rev. Immunol. 6: 251-87. Los Fe ? R proporcionan una unión crucial entre las células efectoras y los linfocitos que secretan Ig, ya que los Fe gamma R de macrófagos/monocitos , leucocitos polimorfonucleares y células citolíticas naturales (NK) confieren un elemento de reconocimiento específico mediado por IgG. Los leucocitos humanos tienen al menos tres receptores diferentes para IgG: hFcy RI (hallado en monocitos/macrófagos) , hFc gamma RII (en monocitos, neutrófilos, eosinófilos, plaquetas, posiblemente i células B, y la línea celular K562) , y FcgammalII (sobre las células NK, neutrófilos, eosinófilos y macrofagos) .

Con respecto a las células T, la transmisión de una señal coest imulatoria para una célula T involucra una vía de señalización que no es inhibida por la ciclosporina A.

Además, una señal coestimuladora puede inducir la secreción de citoquina (por ejemplo, IL-2 y/o IL-10) | en una célula T y/o puede prevenir la inducción de falta de respuesta al antígeno, la inducción de anergia o la inducción de muerte celular en la célula T.

"Región estructural" o "FR" como se usa en la presente, se refiere en términos generales a una o más de las regiones estructurales dentro de las regiones variables de las cadenas ligera y pesada de un anticuerpo. Ver Kabat, et al. (1987) "Sequences of Proteins of Immunological Interest" National Institutes of Health, Bethesda, MD. Estas expresiones incluyen . las regiones de la secuencia de aminoácidos interpuesta entre las CDR dentro de las regiones variables de las cadenas ligera y pesada de un anticuerpo.

"Heterólogo" como se usa en la presente, se refiere en términos generales a porciones de un ácido nucleico e indica que. el ácido nucleico .comprende -dos o- más subsecuencias que no se hallan en la misma relación entre sí en la naturaleza. Por ejemplo, el ácido nucleico normalmente se produce en forma recombinante , tiene dos o más secuencias de los genes no relacionados dispuestos para obtener un nuevo ácido nucleico funcional (por ejemplo, un promotor de una fuente y una región codificadora de otra fuente) . De modo similar, una proteína a heteróloga indica que la proteína comprende dos o más subsecuencias que no se hallan en la misma relación entre sí en la naturaleza (por ejemplo, una proteína de fusión) .

"Afinidad alta" como se usa | en la presente, se refiere en términos generales a un anticuerpo que tiene una KD de al menos 10"8 M, con más preferencia al menos 10~9 M y aun con más preferencia al menos 10~10 M para un antígeno blanco. Sin embargo, la unión de "afinidad alta" puede variar para otros isotipos de anticuerpo. Por ejemplo, unión de "afinidad alta" para un isotipo IgM se refiere a un anticuerpo que tiene una KD de al menos 1CT7 M, con más preferencia al menos 10"8 M.

"Homología" como se usa en la presente, se refiere en términos generales a un grado de semejanza entre una secuencia de ácidos nucleicos y una secuencia de ácidos nucleicos de referencia o entre una secuencia de polipéptidos y una secuencia de polipéptidos de referencia. La homología puede ser parcial o completa. La homología completa indica que las secuencias de ácidos nucleicos o aminoácidos son idénticas. Una secuencia de ácidos nucleicos o aminoácidos parcialmente homologa es una que no idéntica a la secuencia de ácidos nucleicos o aminoácidos de referencia. El grado de homología se puede determinar por la comparación de secuencia. El término "identidad de secuencia" se puede usar en forma indistinta con "homología" .

"Célula huésped", como se usa en la presente, se refiere en términos generales a una célula en que se ha introducido una molécula de ácido nucleico de la invención, tal como un vector de expresión de la invención. Las células huésped pueden ser células euca'rióticas tales como E. coli, o células eucarióticas tales como células de levaduras, insectos (por ejemplo, SF9) , anfibias o mamíferas tales como CHO, HeLa, HEK-293, por ejemplo, células cultivadas, explantes, y células in vivo. Los términos "célula huésped" y "célula huésped recombinante" se usan en forma indistinta en la presente. Se debe mencionar que tales términos se refieren no solo a la célula particular sino a la progenie o potencial progenie de tal célula. Debido a que ciertas modificaciones pueden ocurrir en generaciones sucesivas debido a mutación o influencias ambientales, tal progenie en efecto, no puede ser idéntica a la célula progenitora, pero aún se incluyen dentro del alcance del término que se usa en la presente.

"Anticuerpo humanizado", como se usa en la presente, se refiere en términos generales a que incluye anticuerpos obtenidos por una célula no humana .que tiene. . regiones variables y constantes que se han alterado para asemejarse más estrechamente a anticuerpos que pueden ser obtenidos por una célula humana. Por ejemplo, por la alteración de la secuencia de aminoácidos del anticuerpo no humano para incorporar aminoácidos hallados en las secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana. Los anticuerpos humanizados de la invención pueden incluir residuos de aminoácido no codificados por las secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana (por ejemplo, mutaciones | introducidas por mutagénesis aleatorias o específicas del sitio in vítro o por mutación somática in vivo) , por ejemplo en las CDR. El término "anticuerpo humanizado", como se usa en la presente, también incluye anticuerpos en que las secuencias de CDR de la línea germinal de otra especie de mamífero, tales como un ratón, se han injertado en las secuencias estructurales humanas.

"Hibridación", como se usa en la presente, se refiere en términos generales a la interacción física de cadenas de polinucleótidos complementarios (que incluye parcialmente complementario) por la formación de enlaces hidrógeno entre los nucleótidos complementarios cuando las cadenas se disponen en forma antiparalela entre sí.

"Célula inmunitaria" , como se usa en la presente, se refiere en términos generales a células que son de origen hematopoyético y que cumplen un papel en la respuesta inmunitaria. Las células inmunitarias incluyen linfocitos, tales como células B y células T; células citolíticas ; y células mieloides, tales como monocitos, macrófagos, eosinófilos, mastocitos, basófilos y granulocitos.

"Inmunoensayo" , como se usa en la presente, se refiere en términos generales a un ensayo que usa un anticuerpo para unirse específicamente a un antígeno. El inmunoensayo se puede caracterizar por el uso de propiedades de unión específica de un anticuerpo particular para aislar, dirigir, yi/o cuantificar el antígeno.

"Respuesta inmunológica" , como se usa en la presente, se refiere en términos generales a las respuestas inmunológicas mediadas por las células T y/o mediadas por células B que están influidas por la modulación de la coestimulación de la célula T. Los ejemplos de respuestas inmunológicas incluyen respuestas de células B (por ejemplo, producción de anticuerpo) respuestas de células T (por ejemplo, producción de citoquina, y citotoxicidad celular) y activación de las células receptivas para citoquina, por ejemplo, macrófagos . Como se usa en la presente, el término "modulación por disminución" con referencia a la respuesta inmunológica incluye una disminución en una o más respuestas inmunológicas, mientras que el término "modulación por aumento" con referencia a la respuesta inmunológica incluye un aumento de de alguna o más respuestas inmunológicas . Se entenderá que la modulación por aumento de un tipo de respuesta inmunológica puede llevar a una correspondiente modulación por disminución en otro tipo de respuesta inmunológica. Por ejemplo, la modulación por aumento de la producción de ciertas citoquinas (por ejemplo, IL-10) puede llévar a la modulación por disminución de las respuestas inmunológicas celulares .

"Afecciones inflamatorias o enfermedad inflamatoria", como se usa en la presente, se refiere en términos generales a enfermedades inflamatorias agudas o crónicas.

"Aislado", como se usa en la presente, se refiere en términos generales al material retirado de su ambiente original en que se produce naturalmente, y de este modo es alterado por la mano del hombre de su ambiente natural . El material aislado se puede purificar de modo que esté sustancialmente libre de otros componentes celulares u otros contaminantes, por ejemplo, otros ácidos nucleicos o proteínas celulares, usando técnicas estándares bien conocidas en la materia. El material aislado puede ser, por ejemplo, ácido nucleico exógeno incluido en un sistema vector, ácido nucleico exógeno contenido dentro de una célula huésped, o cualquier material que se ha extraído de ambiente original y de este modo es alterado por la mano del hombre de su ambiente natural (por ejemplo, "anticuerpo aislado"). Por ejemplo, "aislado"., o -/'purificado", como se usa en la presente, se refiere en términos generales a una proteína, ADN<, anticuerpo, AR , o porción biológicamente activo de este, que está sustancialmente libre de material celular u otras proteínas contaminante de la fuente celular o tisular de la cual deriva la sustancia biológica, o sustancialmente libre de precursores químicos u otros productos químicos cuando se sintetizan químicamente. La frase "sustancialmente libre de material celular" incluye preparaciones de proteínas KIR2DL1, 2 y/o 3 en que la proteína se separa de los componentes celulares de las células de la cual se aisla o produce en forma recombinante .

"K-asoc" o "Ka", como se usa en la presente, se refiere en términos generales a la tasa de asociación de una interacción anticuerpo-antígeno particular, mientras que el término "Kdis" o "Kd". , como se usa en la presente, se refiere a la tasa de disociación de una interacción anticuerpo-antígeno particular. El término "KD" , como se usa en la presente, se considera que se refiere a la constante de disociación, que se obtiene de la relación de ¾ a Ka (es decir, Kd/Ka) y se expresa como una concentración molar (M) . Los valores de KD para los anticuerpos se pueden determinar usando métodos bien establecidos en la técnica.

"Etiqueta" o un "resto detectable" como se usa en la presente, se refiere en términos generales a una composición detectable por medios espectroscópicos, . fotoquímicos , bioquímicos, inmunoquímicos , químicos, u otro físico.

"Rigurosidad baja", "rigurosidad media", "rigurosidad alta", o "condiciones de rigurosidad muy alta", como se usa en la presente, se refiere en términos generales a las condiciones para hibridación y lavado del ácido nucleico. Las pautas para la modalidad de reacciones de hibridación se pueden hallar en Ausubel, et al. (2002) Short Protocols en Molecular Biology (5th Ed.) John iley & Sons, NY. Los ejemplos de condiciones de hibridación específicas incluyen pero sin limitación: (1) condiciones de hibridación de rigurosidad baja en 6X cloruro de sodio/citrato de sodio (SSC) a aproximadamente 45°C, seguido por dos lavados en 0,2XSSC, -0,1% de SDS al menos a 50°C (la temperatura de los lavados puede aumentar a 55°C para las condiciones de rigurosidad baja); (2) condiciones de hibridación de rigurosidad media en 6XSSC a aproximadamente 45°C, seguido por uno o más lavados en 0,2XSSC, 0,1% de SDS a 60°C; (3) condiciones de hibridación de rigurosidad alta en 6XSSC a aproximadamente 45°C, seguido por uno o más lavados en 0,2XSSC, 0,1% de SDS a 65°C; y (4) condiciones de hibridación de rigurosidad muy alta son 0,5 M de fosfato de sodio, 7% de SDS a 65°C, seguido por uno o más lavados a 0,2XSSC, 1% de SDS a 65°C.

"Mamífero", como se usa en la presente, se refiere en términos generales a alguno, y todos los animales .vertebrados de sangre caliente de la clase mamífera, que incluye seres humanos, caracterizados por un recubrimiento de vello sobre la piel y, en la hembra, glándulas productoras de leche para nutrición juvenil. Los ejemplos de mamíferos incluyen pero sin limitación alpacas, armadillos, carpinchos, gatos, camellos, chimpancés, chinchillas, ganado, perros, cabras, gorilas, hámsters, caballos, seres humanos, lémures, llamas, ratones, primates no humanos, cerdos, ratas, oveja, musarañas, ardillas, y tapires. Los mamíferos incluyen pero sin limitación especies bovina, canina, equina, felina, | murina, ovina, porcina, primate, y roedor. El mamífero también incluye alguna y todos los listados en las especies de mamífero del mundo mantenidas por el National Museum of Natural History, Smithsonian Institution en Washington DC.

"Molécula de ácido nucleico natural", como se usa en la presente, se refiere en términos generales a una molécula de ARN o ADN que tiene una secuencia de nucleótidos que produce en la naturaleza (por ejemplo, codifica una proteína natural) . "Ácido nucleico" o "secuencia de ácidos nucleicos", como se usa en la presente, se refiere en términos generales a un desoxirribonucleótido o ribonucleótido oligonucleótido en forma de cadena simple o doble. El término abarca ácidos nucleicos, es decir, oligonucleótidos, que contienen análogos de nucleótidos. -naturales. El término también abarca estructuras tipo ácido nucleico con esqueletos sintéticos. A menos que se indique de otro modo, una secuencia de ácidos nucleicos particular también abarca implícitamente sus variantes modificadas en forma conservadora (por ejemplo, sustituciones de codón degeneradas) y secuencias complementarias, así como la secuencia explícitamente indicada. El término ácido nucleico se usa en forma indistinta con gen, ADNc, ARNm, oligonucleótido y polinucleótido .

"Unido operativamente", como se usa en la presente, se refiere en términos generales a cuando dos fragmentos de ADN se unen de modo tal que las secuencias de aminoácidos codificadas por los fragmentos de ADN permanecen en marco.

"Paratopo" , como se usa en la presente, se refiere en términos generales a la parte de un anticuerpo que reconoce un antígeno (por ejemplo, el sitio de unión del antígeno de un anticuerpo) . Los paratopos pueden ser una región pequeña (por ejemplo, 15-22 aminoácidos) de la región Fv del anticuerpo y pueden contener partes de las cadenas pesada y ligeras del anticuerpo. Ver Goldsby, et al. Antigens (Chapter 3) Immunology (5th Ed.) New York: W.H. Freeman y Company, páginas 57-75.

"Paciente", como se usa en la presente, se refiere en términos generales a cualquier animal que necesita tratamiento para aliviar un estado de enfermedad o. para prevenir la aparición o reaparición de un estado · de enfermedad. Asimismo, "paciente" como se usa en la presente, se refiere en términos generales a cualquier animal que tiene factores de riesgo, una historia de enfermedad, susceptibilidad, síntomas, signos, fue diagnosticado previamente, tiene riesgo para, o es un miembro de una población del paciente para una enfermedad. El paciente puede ser un paciente clínico tal como un paciente humano o veterinario tal como un animal de compañía, domesticado, ganado, exótico, o zoo. El término "sujleto" se puede usar en forma indistinta con el término "paciente" .

"Polipéptido", "péptido" y "proteína" , se usan en forma indistinta y se refieren en términos generales a un polímero de residuos de aminoácido. Los términos se aplican a polímeros de aminoácidos en que uno o más residuos aminoácido es un análogo o mimético de un correspondiente aminoácido natural, así como a los polímeros de aminoácido naturales. Los términos se aplican los polímeros de aminoácido en que uno o más residuo de aminoácido es un mimético químico artificial de un aminoácido correspondiente, así como a los polímeros de aminoácido naturales y polímeros de aminoácido no naturales. Los polipéptidos se pueden modificar, por ejemplo, por la adición de residuos de carbohidratos para formar glicoproteínas . Los términos "polipéptido", "péptido" y "proteína" .. incluyen glicoproteínas, así como no glicoproteínas .

"Promotor", como se usa en la presente, se refiere en términos generales a una disposición de las secuencias de ácidos nucleicos que dirigen la transcripción de un ácido nucleico. Como se usa en la presente, un promotor incluye secuencias de ácidos nucleicos necesarias cerca del sitio de inicio de transcripción, tales como, en el caso de un promotor tipo polimerasa II, un elemento TATA. Un promotor opcionalmente también incluye elementos potenciadores o represores distales, que puede localizar hasta varios miles de pares de bases desde el sitio de inicio de transcripción. Un promotor "constitutivo" es un promotor que es activo en condiciones ambientales y de desarrollo. Un promotor "inducible" es un promotor que es activo en la regulación ambiental o del desarrollo.

"Cantidad profilácticamente efectiva", como se usa en la presente, se refiere en términos generales a la cantidad de un compuesto que, cuando se administra a un paciente para la profilaxis de una enfermedad o prevención de la recurrencia de una enfermedad, es suficiente para efectuar tal profilaxis por la enfermedad o recurrencia. La cantidad profilácticamente efectiva puede ser una cantidad efectiva para prevenir la incidencia de signos y/o síntomas. La "cantidad profilácticamente efectiva" puede variar de acuerdo con la enfermedad y su gravedad y la edad, peso, antecedentes médicos, predisposición a las afecciones, afecciones preexistentes, del paciente para tratar.

¦ "Profilaxis", como se usa en la presente, se refiere en términos generales a un curso de terapia donde los signos y/o síntomas no están presentes en el paciente, están remisión o estuvieron previamente presentes en un paciente. La profilaxis incluye prevenir la enfermedad que se produce posterior al tratamiento de una enfermedad en un paciente.

Además, la prevención incluye tratar pacientes que pueden desarrollar potenjcialmente la enfermedad, en especial los pacientes que son susceptibles a la enfermedad (por ejemplo, miembros de una población de la patente, los que tienen factores de riesgo, o en riesgo de desarrollar la enfermedad) .

"Recombinante" como se usa en la presente, se refiere en términos generales a un producto, por ejemplo, a una célula o ácido nucleico, proteína, o vector, indica que la célula, ácido nucleico, proteína. _o vector, se ha modificado por la introducción de una ácido nucleico o proteína heterologo o la alteración de un ácido nucleico o proteína nativa, o que la célula se deriva de una célula así modificada. En consecuencia, por ejemplo, las células recombinantes expresan genes que no se hallan en la forma nativa (no recombinante) de la célula o expresan genes nativos que están anormalmente expresados de otro modo,, subexpresados, o no expresados en absoluto .

"Se une específicamente (o selectivamente)" a un anticuerpo o "específicamente (o selectivamente) inmunorreactivo con", o "interactúa o se une específicamente", como se usa en la presente, se refiere en términos generales a una proteína o péptido (u otro epitopo) , en algunas formas de modalidad, se refiere a una reacción de unión que es determinante de la presencia de la proteína en una población heterogénea de proteínas y otros productos biológicos . Por ejemplo, en condiciones de inmunoensayo denominadas, los anticuerpos especificados se unen a una proteína particular de al menos dos veces mayor que el umbral (señal no específica) y no se une sustancialmente en una cantidad significativa a otras proteínas presentes en la muestra. Normalmente una reacción específica o selectiva será al menos dos veces la señal o ruido umbral y más normalmente más de aproximadamente 10 a 100 veces el umbral.

"Específicamente hibridable" y "complementario" como se usa en la presente, se refieren en general a un ácido nucleico que pueden formar enlaces hidrógeno con otra secuencia de ácidos nucleicos por atson-Crick tradicional u otros tipos no tradicionales. La energía libre de unión para una molécula de ácido nucleico con su secuencia complementaria es suficiente para permitir la función relevante del; ácido nucleico para proceder, por ejemplo, a la actividad de ARNi . La determinación de las energías libres de unión para las moléculas de ácido nucleico es bien conoció en la técnica. Ver, por ejemplo, Turner, et al. (1987) CSH S mp . Quant. Biol. LII : 123-33; Frier, et al. (1986) PNAS 83: 9373-77; Turner, et al. (1987) J. Am. Chem. Soc . 109: 3783-85. Un por ciento de complementariedad indica el porcentaje de residuos contiguos en una molécula de ácido nucleico que puede formar enlaces hidrógeno (por ejemplo, apareamiento de bases Watson-Crick) con una segunda secuencia de ácidos nucleicos (por ejemplo, aproximadamente al menos 5, 6, 7, 8, 9, 10 de 10 es aproximadamente al menos 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, y 100% complementaria, inclusive). "Perfectamente complementario" o 100% de complementariedad se refiere en términos generales al total de los residuos contiguos de un enlace hidrógeno de la secuencia de ácidos nucleicos con el mismo número de residuos contiguos en una segunda secuencia de ácidos nucleicos. "Complementariedad sustancial" se refiere a cadenas de polinucleótido que exhiben aproximadamente al menos 90% de complementariedad, que excluye regiones de las cadenas de polinucleótidos , tales como proyecciones, que se seleccionan de modo de ser no complementarias. La unión específica requiere un grado suficiente de complementariedad para evitar la unión no específica del compuesto oligomérico a las secuencias no blanco en condiciones en que., se desea- la unión, específ ca, es decir, en condiciones fisiológicas en el caso de los ensayos in vivo o tratamiento terapéutico, o en el caso de ensayos in vitro, en condiciones en que se realizan los ensayos. Las secuencias no blanco normalmente pueden diferir en al menos 5 nucleótidos .

"Signos" de enfermedad, como se usa en la presente, se refiere en ' términos generales a cualquier anormalidad indicativa de enfermedad, detectable en el examen del paciente; una indicación objetiva de enfermedad, en contraste con un síntoma, que es una indicación de enfermedad subjetiva.

"Soporte sólido", "soporte" y "sustrato", como se usa en la presente, se refiere en términos generales a cualquier material que proporciona una estructura sólida o semisólida con el cual se puede unir otro material, que incluyen pero sin limitación, soportes lisos (por ejemplo, superficies de metal, vidrio, plástico, silicio y cerámica) así como materiales texturados y porosos.

"Sujetos" como se usa en la presente, se refiere en términos generales a alguien adecuado para tratar de acuerdo con la presente invención incluyen, pero sin limitación, sujetos aviares y mamíferos, y con preferencia son mamíferos. Los mamíferos de-- la presente invención incluyen, pero sin limitación, caninos, felinos, bovinos, caprinos, equinos, ovinos, porcinos, roedores (por ejemplo, ratas y ratones), lagomorfos, primates y seres humanos. Cualquier sujeto mamífero que necesita tratarse de acuerdo con la presente invención es adecuada. Los sujetos humanos de ambos géneros y e cualquier etapa de desarrollo (es decir, neonato, lactante, juvenil, adolescente, adulto) se pueden tratar de acuerdo con la presente invención. La presente invención también se puede llevar a cabo en sujetos animales, en particular sujetos mamíferos tales como ratones, ratas, perros, gatos, ganado vacuno, cabras, oveja, y caballos para fines veterinarios, y para la selección de fármacos y los fines del desarrollo de fármacos. "Sujetos" se usa en forma indistinta con "pacientes" .

"Síntomas" de enfermedad como se usa en la presente, se refiere en términos generales a cualquier fenómeno mórbido o desviación de lo normal en estructura, función, o sensación, experimentado por el paciente e indicativa de enfermedad. "célula T" , como se usa en la presente, se refiere en términos generales a las células T CD4+ y células T CD8+. El término célula T también incluye células T auxiliares tipo 1 y células T auxiliares tipo 2.

"Terapia", "terapéutica", "tratar", o "tratamiento", como se usa en la presente, se refiere en términos generales a tratar una enfermedad, detener o reducir el desarrollo de la enfermedad o sus síntomas clínicos, y/o aliviar la enfermedad,-, causar la . regresión de -la enfermedad o sus síntomas clínicos. La terapia abarca profilaxis, tratamiento, remedio, reducción, alivio, y/o provisión de alivio de una enfermedad, signos, y/o síntomas de una enfermedad. La terapia abarca un alivio de signos y/o síntomas en pacientes con signos y/o síntomas de la enfermedad en curso (por ejemplo, inflamación, dolor) . La terapia también abarca "profilaxis". El término "reducido", para fines de terapia, se refiere en términos generales a la reducción significativa clínica en signos y/o síntomas. La terapia incluye tratar recaídas o signos y/o síntomas recurrentes (por ejemplo), inflamación, dolor) . La terapia abarca . ero sin limitación a impedir la aparición de signos y/o síntomas en cualquier momento así como la reducción de los signos y/o síntomas existentes y reducir o eliminar signos y/o síntomas existentes. La terapia incluye tratar la enfermedad crónica ("mantenimiento") y enfermedad aguda. Por ejemplo, el tratamiento incluye tratar o prevenir recaídas o la recurrencia de signos y/o síntomas (por ejemplo, inflamación, dolor) .

"Región variable" o "VR, por sus siglas en inglés", como se usa en la presente, se refiere en términos generales a los dominios de cada par de cadenas ligera y pesada en un anticuerpo que están involucrados directamente en la unión del anticuerpo al antígeno. Cada cadena pesada tiene un extremo en un -dominio variable (VH) ' seguido por numerosos dominios constantes. Cada cadena ligera tiene un dominio variable (VL) en un extremo y un dominio constante en su otro extremo; el dominio constante de la cadena ligera se alinea con el primer dominio constante de la cadena pesada, y el dominio variable de la cadena ligera variable se alinea con el dominio variable de la cadena pesada.

"Vector", como se usa en la presente, se refiere en términos generales a una molécula de ácido nucleico capaz de transportar otra molécula de ácido nucleico a la que se ha unido. Un tipo de vector es un "plásmido" , que se refiere a un bucle de ADN de cadena doble circular en que se pueden ligar segmentos de ADN adicionales. Otro tipo de vector es un vector viral, donde los segmentos de ADN adicionales se pueden ligar en el genoma viral. Ciertos vectores son capaces de la replicación autónoma en una célula huésped en que se introducen (por ejemplo, vectores bacterianos que tienen un origen de replicación bacteriano y vectores de mamífero episómicos) . Otros vectores (por ejemplo, vectores de mamífero no episómicos) se integran en el genoma de una célula huésped después de la introducción en la célula huésped, y de este modo se replican junto con el genoma huésped. Además, ciertos vectores son capaces de dirigir la expresión de genes a los que están unidos operativamente. Tales vectores se denominan en la presente como "vectores de expresión recombinante" ,. o simplemente "vectores .de expresión". En general, los vectores de expresión de utilidad en las técnicas de ADN recombinante a menudo están en la forma de plásmidos. En la presente memoria descriptiva presente, "plásmido" y "vector" se pueden usar en forma indistinta ya que el plásmido es la forma más comúnmente usada de vector. Sin embargo, se considera que la invención incluye otras formas de vectores de expresión, tales como vectores virales (por ejemplo, retrovirus, adenovirus y virus adenoasociados de replicación defectuosa) , que cumplen funciones equivalentes. Las técnicas y| los procedimientos se realizan generalmente de acuerdo con métodos convencionales bien conocidos en la técnica y como se describe en varias referencias generales y más específicas que se mencionan y comentan a lo largo de la presente memoria descriptiva. Ver, por ejemplo, Sambrook, et al. (2001) Molec. Cloning : Lab. Manual [3rd Ed] Cold Spring Harbor Laboratory Press. Las técnicas estándares se pueden usar para ADN recombinante , síntesis -de oligonucleótido y cultivo de tejido, y transformación (por ejemplo, electroporación, lipofección) . Las reacciones enzimáticas y técnicas de purificación se pueden realizar de acuerdo con las especificaciones del fabricante o como se obtienen comúnmente en la técnica o se describen en la presente. Las nomenclaturas utilizadas en relación con y los procedimientos y técnicas de laboratorio de de, química analítica, química de síntesis orgánica, y química medicinal y farmacéutica descriptas en la presente son bien conocidos y comúnmente usados en la técnica. Las técnicas estándares se pueden usar para la síntesis química, análisis químico, preparación farmacéutica, formulación, y administración y tratamiento de pacientes.

Los receptores inhibitorios de las células NK KIR2DL1, 2, y 3 Los KIR son glicoproteínas de la superficie celular, que comprende uno de los tres dominios tipo inmunoglobulina extracelulares , que se expresan en algunas células T así como en la mayor parte de las células NK humanas. Numerosos KIR están bien caracterizados (Ver, por ejemplo, Carrington y Norman, The KIR Gene Cluster, May 28, 2003, disponibles en el sitio web National Center for Biotechnology Information (NCBI)). Los KIR humanos incluyen KIR2DL y KIR3DL (KIR también se puede denominar con otros diversos nombres tales como CD158el, CD158k, CD158z, p58 KIR CD158el (p70) , CD24 . ) Ver, por ejemplo, Publicación de solicitud de patente U.S. No. 2004/0038894, Radaev et al., Annu. Rev. Biophys . Biomol. Struct., 32:93-114 (2003), Cerweknka et al., Nat . Rev. Immunol. 1:41-49 (2001); Farag et al., Expert Opin. Biol . Ther., 3(2):237-250 (2003); Biassoni et al., J. Cell. Mol. Med., 7(4):376-387 (2003); y arren et al., British J. Haematology, 121:793-804 (2003), cada uno de las cuales se -•.incorpora en la presente en su totalidad) . La estructura .de numerosos KIR se ha dilucidado y revela una semejanza estructural etiquetada entre estas proteínas. Ver, por ejemplo, Radaev et al., supra.

Los KIR se pueden clasificar después del punto de vista estructural así como también funcional. Por ejemplo, la mayor parte de los KIR tiene dos dominios Ig (KIR de 58 kDa KIR2D) , mientras que otros tienen tres dominios Ig (KIR de 70 kDa KIR3D) (algunas veces respectivamente denominados como moléculas p58 y p70) . Los KIR también varían en la longitud de la cola citopljasmática . Normalmente, los KIR con una cola citoplasmática relativamente larga (L) liberan una señal inhibitoria adicional, mientras que KIR con una citoplasmática relativamente corta (S) pueden activar respuestas de las células NK o T. La nomenclatura para los KIR por consiguiente se puede basar en el número de dominios extracelulares (KIR2D o KIR3D) y si la cola citoplásmica es larga (KIR2DL o KIR3DL) o corta (KIR2DS o KIR3DS) . La información de nomenclatura adicional para los KIR se proporciona en la siguiente descripción detallada de la invención. Algunos miembros de la "familia KIR" son NKCAR, o más en particular "KAR" (por ejemplo, KIR2DS2 y KIR2DS4); normalmente comprenden uno o más residuos de transmembrana cargados (por ejemplo, Lys) que se asocian con una molécula adaptadora que tiene un motivo inmunoestimulador (ITAM) (por ejemplo, DAP12) . La . porción . intracitoplásmica de los KIR inhibitorios normalmente comprenden uno o más ITIM que reclutan fosfatasas. Los KIR inhibitorios se unen a dominios alphal/alpha2 de las moléculas HLA. Los KIR inhibitorios no parecen requerir normalmente la asociación de adaptador-molécula para la actividad. A menos que se indique lo contrario, los términos tales como "KIR", "KIRs" , y similares se refieren a KIR2DL1, 2 y/o 3 elementos de la "familia KIR" y términos tales como "KAR", "KARs" , y similares se refieren a miembros NKCAR de la "familia KIR" .

Los KIR pueden unir moléculas de MHC-I {por ejemplo, ciertos alotipo de HLA clase I) , que normalmente producen la transmisión de una señal activa que contrarresta, y puede anular las señales activadoras, estimulantes para las células NK, de este modo se evita que las células NK destruyan el reclutamiento de la célula blanco potencial asociada (aparentemente por medio de la fosforilación ITIM y tirosina fosfatasa (por ejemplo, proteína tirosina fosfatasas que contienen el dominio SH2 tales como SHP-1 y SHP-2), lo que lleva a la desfosforilación PTK (por ejemplo, Syk, TcR y/o ZAP70) y/o inhibición de la formación del complejo LAT/PLC y la alteración asociada de la cascada ITAM) . Debido a que los virus a menudo suprimen la expresión de MHC clase I en las células que infectan, tales células infectadas con virus son susceptibles para destruir las células NK. Debido a que las células . cancerosas a menudo también ' tienen expresión, de MHC clase I reducida o ausente, estas células, también pueden ser sensibles a la destrucción por parte de las células NK. Las células infectadas también pueden cambiar las proteínas unidas en la MHC en términos de glicosilación. Si esto produce, el complejo MHC-I :proteína, se alterará la expresión de la célula. Si los KIR asociados con NK no se pueden unir a estos complejos "extraños", no se puede generar señal inhibitoria y procederá la lisis.

Todos los KIR inhibitorios confirmados parecen interactuar con diferentes subconjuntos de antígenos HLA/MHC de acuerdo con el subtipo de KIR. En los seres humanos, los KIR que tienen dos dominios Ig (KIR2D) reconocen alotipos HLA-C: KIR2DL2 (antiguamente denominado p58.2) y el producto génico estrechamente relacionado KIR2DL3 reconoce un epitopo compartido por el grupo 1 de alotipos HLA-C (Cwl, 3, 7, y 8) , mientras que KIR2DL1 (p58.1) reconoce un epitopo compartido po el grupo 2 recíproco de alotipos HLA-C (Cw2, 4, 5, y 6) . La especificidad de KIR2DL1 parece estar regida por la presencia de un residuo de Lys en la posición 80 del grupo 2 de alelos HLA-C. El reconocimiento KIR2DL2 y KIR2DL3 parece regido por la presencia de un residuo Asn en la posición 80. Una sustancial mayoría de alelos HLA-C tienen un residuo Asn o un residuo Lys en la posición 80. Un KIR con tres dominios Ig, KIR3DL1 (p70) , reconoce un epitopo compartido por los alelos HLA-Bw4. Finalmente,, un homodímero de. moléculas, con tres dominios Ig, KIR3DL2 (pl40) , reconoce HLA-A3 y -All.

Los receptores de células NK específicos de MHC-I individuales cualquier tipo (activador o inhibitorio) normalmente no interactúa con todas las moléculas de MHC clase I, pero específicamente se unen a ciertos alotipos (proteínas codificadas por diferentes variantes de un solo locus genético) . Asimismo, las células NK individuales pueden expresar varios receptores inhibitorios y/o activadores diferentes que actúan independientemente entre sí. Por ejemplo, en los seres humanos la presencia o ausencia de un KIR dado es variable de una célula NK a otra en un individuo solo. También existe un nivel relativamente alto de polimorfismo de los KIR en los seres humanos, ciertas moléculas KIR están presentes en algunos, pero no todos los individuos. Si bien los KIRs y otros receptores inhibitorios que reconocen MHC pueden ser coexpresados por las células NK, en cualquier repertorio de la NK de un individuo dado donde existen normalmente células que expresa un solo KIR; por consiguiente, la correspondiente actividad de las células NK en este último tipo de células NK es inhibido solo por las células que expresan un grupo de alelo específico de MHC-I. En efecto, recientes estimaciones del grado de la diversidad del genotipo de KIR dentro de la población sugieren que <0,24% de los individuos no relacionados pueden esperar tener genotipos idénticos. El haplotipo caucásico más común, el haplotipo "A" (frecuencia de ~ 47-59%) , contiene solo un gen activador KIR (KIR2DS4) y seis locus inhibidores . KIR (KIR3DL3, -2DL3, -2DL1, -2DL4, -3DL1, y -3DL2). Los restantes haplotipos "B" son my diversos y contienen 2-5 locus KIR activadores (que incluyen KIR2DS1, -2DS2, -2DS3, y-2DS5) .

Cabe mencionar que los KIR son conocidos por varias aliasas, como se refleja en la Tabla 1 y Tabla 2: Tabla 1 -Nomenclatura KIR I KIR Nombre completo Aliasas Acceso ID SEQ ID NO KIR3DS1 receptor tipo nkatlO, L76661 24 inmunoglobulina de 1 CD158e2 célula citolítica, t dominios , citoplasmática relativamente corta, KIRX, receptor tipo AF204919, KIR48, inmunoglobulina de AF204915 KIR3DP1 KIR2DS6 , célula citolítica, KIR3DS2P, dominios, pseudogen AF204917 CD158C Obtenida del sitio web de Hugo Gene Nomenclature Committee .

Tabla 2 - Nomenclatura CD de KIR Andre, et al . Nature Immunol . 2(8):661 (2001).

Los ejemplos de moléculas de KIR2DL1 , KIR2DL2 , KIR2DL3 , y KIR2DS4 comprenden las siguientes secuencias de aminoácidos respectivas : KIR2DL1 dominio extracelular : HEGVHRKPSLLAHPGXLVKSEETVILQCWSDVMFEHFLLHREGMFNDTLRLIGEHH DGVSKA FSISRMTQDLAGTYRCYGSVTHSPYQVSAPSDPLDIVIIGLYEKPSLSAQXGPT VLAGENVTLSCSSRSSYD YHLSREGEAHERRLPAGPKVNGTFQADFPLGPATHGGTYRCF GSFHDSPYEWSKSSDPLLVSVTGNPSNSWPSPTEPSSKTGNPRHLH (SEQ ID NO: 7) , donde "X" en la posición 16 es P o R, y donde "X" en la posición 114 es P o L, representando variantes alélicas.

KIR2DL2 dominio extracelular: HEGVHRKPSLLAHPGRLVKSEETVILQC SDVRFEHFLLHREGKFKDTLHLIGEHH DGYSKANFSIGPMMQDLAGTYRCYGSVTHSPYQLSAPSDPLDIVITGLYEKPSLSAQPGPT VLAGES TLSCSSRSSYDMYHLSREGEAHECRFSAGPKVNGTFQADFPLGPATHGGTYRCF GSFRDSPYEWSNSSDPLLVSVIGNPSNS PSPTEPSSKTGNPRHLH (SEQ ID NO : 8 ) .

IR2DL3 dominio extracelular: HEGVHRKPSLLAHPGPLVKSEETVILQCWSDVRFQHFLLHREGKFKDTLHLIGEHH DGVSKANFSIGPMMQDLAGTYRCYGSVTHSPYQLSAPSDPLDIVITGLYEKPSLSAQPGPT VLAGESVTLSCSSRSSYDMYHLSREGEAHERRFSAGPKVNGTFQADFPLGPATHGGTYRCF GSFRDSPYEWSNSSDPLLVSVTGNPSNSWPSPTEPSSETGNPRHLH (SEQ ID NO : 9 ) .

KIR2DS4 dominio extracelular : QEGVHRKPSFLALPGHLVKSEETVILQC SDVMFEHFLLHREGKFNNTLHLIGEHH DGVSKANFSIGPMMPVLAGTYRCYGSVPHSPYQLSAPSDPLDMV (SEQ ID NO: 10) .

Neutralización de la inhibición de las células NK asociadas a KIR2DL1, 2, y/o 3 Los anticuerpos anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 se pueden caracterizar sobre la base de su capacidad de bloquear o neutralizar la inhibición de NK y de este modo potenciar la actividad de las células NK contra las células blanco bloqueadas de otro modo (por ejemplo, células T, células T CD4+ ) . Como se indicó anteriormente, los anticuerpos anti-KIR2DL1, 2 y/o 3 que se unen a al menos un KIR2DL1, 2 y/o 3 durante una cantidad suficiente de tiempo para neutralizar la inhibición de citotoxicidad de las células NK mediada por KIR2DL1 , 2 y/o 3 en las células NK se puede usar en el contexto de esta invención. Tales anticuerpos anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 se pueden usar directamente como agentes terapéuticos en forma nativa. Una característica ventajosa más particular de la invención es los anticuerpos anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 que reaccionan en forma cruzada con dos o más KIR2DL1, 2 y/o 3 y neutralizan la actividad inhibitoria asociada con alguno o todos (normalmente, con preferencia todo) los asociados con KIR2DL1, 2 y/o 3.

Los anticuerpos neutralizantes anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 pueden neutralizar en forma parcial o total la inhibición de citotoxicidad de las células NK mediada por KIR2DL1, 2 y/o 3. La neutralización se refiere a cualquier bloqueo sustancial de las señales inhibitorias presentes de otro modo. La neutralización se puede medir por cualquier método. En un aspecto, la neutralización de la inhibición se refleja en que el anticuerpo neutralizante anti-KIR produce al menos aproximadamente 20%, con preferencia al menos aproximadamente 30%, al menos aproximadamente 40%, al menos aproximadamente 50%, al menos aproximadamente 60%, al menos aproximadamente 75% o más (por ejemplo, aproximadamente 25-100%) de aumento en la lisis específica mediada por las células NK en una mezcla particular de células NK y NK blanco en comparación con la cantidad de lisis específica que normalmente produce en íun . escenario sustancialmente idéntico sin la presencia, del anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 (ies) . El por ciento de aumento en este aspecto se puede determinar cuando se consideran anticuerpos anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 u otros, por ejemplo, por comparación con los resultados los ensayos de análisis de toxicidad por liberación de cromo obtenidos de una mezcla de células NK blanco (por ejemplo, células T, cualquier línea celular adecuada) y las células NK no bloquearon sus KIR2DL1, 2 y/o 3 (100%) asociados y una mezcla de células NK y células NK blanco, en que las células NK blanco presentan un ligando para el KIR2DL1, 2 y/o 3 (0%) . En el caso de los anticuerpos anti-KIR, la comparación puede ser con los resultados de los ensayos de análisis de toxicidad por liberación de cromo obtenidos de una mezcla de células NK blanco y las células NK no bloquearon su KIR asociado (100%) y una mezcla de células NK y células NK blanco, en que la células NK blanco presentan la molécula de MHC clase I cognada para el KIR inhibitorio sobre las células NK (0%) . En un aspecto ventajoso, la invención proporciona anticuerpos anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 que inducen la lisis de células que no se pueden lisar efectivamente sin la presencia . de tal anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3. De modo alternativo, la neutralización de la actividad inhibitoria de KIR2DL1, 2 y/o 3 se puede indicar, por ejemplo, con los resultados de un ensayo de cromo usando un clon de células NK o transfectante que expresa uno o varios KIR2DL1,. .2 y/o 3. inhibitorios_ - (por ejemplo, KIR, NKG2 , NKG2A, LIR (por ejemplo LILRB1, LILRB5) y una célula blanco que expresa solo un ligando (por ejemplo polipéptido o alelo de HLA, HLA-E) que es reconocido por uno de los KIR2DL1, 2 y/o 3 sobre las células NK, donde el nivel de citotoxicidad obtenido con el anticuerpo es al menos aproximadamente 20%, tales como al menos aproximadamente 30%, al menos aproximadamente 40%, al menos aproximadamente 50%, al menos aproximadamente 60%, al menos aproximadamente 70% o más (por ejemplo, aproximadamente 25-100%) de la citotoxicidad observada con un anticuerpo bloqueante conocido al ligando del KIR2DL1, 2 y/o 3. Por ejemplo, cuando se analizan un anticuerpo anti-KIR, anti-molécula MHC clase I se administra en un escenario sustancialmente idéntico, tal como anticuerpo anti-MHC clase I 6/32 (que está actualmente disponible en, por ejemplo, Research Diagnostics, Flanders, NJ, USA y se describen en, por ejemplo, Shields et al., Tissue Antigens. 1998 May; 51 (5) : 567-70) .

Los ensayos de liberación de cromo y otros métodos de evaluar la actividad citolítica de las células NK son conocidas en la técnica. Las condiciones adecuadas para tales ensayos también son bien conocidos. Un ensayo de liberación de cromo típico se realiza por la etiquetación de las células blanco (por ejemplo, líneas celulares positivas Cw3 y/o Cw4 -a aproximadamente, por ejemplo, 5000 células por pocilio en una placa de. , microtitulación) con Na251Cr04 (de modo que se absorbe 51Cr y es retenido por las células viables blanco) , lavado para eliminar el exceso de radiactividad, a partir de este momento exposición a las células NK durante un período de aproximadamente 4 horas en presencia o ausencia de anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 (s) en una relación de eféctor: blanco adecuado (por ejemplo, aproximadamente 4:1), y medición de los niveles de 51Cr posteriores que reflejan la muerte y lisis de las células blanco. Un ejemplo de tal ensayo se describe en, por ejemplo, Moretta et al. (1993) J Exp Med 178: 597-604. En un ensayo| similar, las células blanco proliferantes se pueden etiquetar con 3H-timidina, que se incorpora en el ADN replicante. Después de la acción citolítica por parte de las células NK, el ADN de las células blanco se fragmenta rápidamente y se retiene en un filtrado, si bien el ADN no fragmentado grande se puede recolectar en un filtro, de modo que se puede medir tanto la liberación de estos fragmentos como la retención de 3H-timidina en el ADN celular. Otros ejemplos y la descripción relevante relacionada con tales ensayos se pueden hallar en, por ejemplo, WO 2006/072625.

En otro aspecto, la invención proporciona anticuerpos anti-KIR2DLl, 2 y/o 3 caracterizados por la capacidad de competir con anticuerpos de reacción cruzada y/o neutralizantes anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 por la unión con KIR2DL1, 2 y/o 3 cognados y/o unirse a la misma región determinante antigénica/epitopo como tales anticuerpos conocidos. La frase "compite con" cuando se refieren a un anticuerpo monoclonal particular (por ejemplo 1-7F9) significa que el anticuerpo anti-KIR2DLl, 2 y/o 3 compite con el anticuerpo de referencia u otra molécula en un ensayo de unión usando moléculas recombinantes KIR2DL1, 2 y/o 3 o moléculas KIR2DL1, 2 y/o 3 expresados en superficie. Por ejemplo, si un anticuerpo anti-KIR reduce en forma detectable la unión de 1-7F9 a una molécula KIR normalmente unido por 1-7F9 en un ensayo de unión, | se puede decir que el anticuerpo anti-KIR "compite" con 1-7F9. Un anticuerpo anti-KIR que "compite" con 1-7F9 puede competir con 1-7F9 por la unión al receptor KIR2DL1 humano, el receptor KIR2DL2/3 humano, o ambos receptores KIR2DL1 y KIR2DL2/3 humanos.

Aunque a menudo está relacionado, la descripción de una proteína en términos de competición con una proteína de unión de referencia versus la capacidad de la proteína de unirse al mismo epitopo o sustancialmente similar que una proteína de referencia en algunos casos implica propiedades biológicas y fisicoquímicas significativamente diferentes. La competición entre las propiedades de unión implica que el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 de ensayo se une a un epitopo que al menos se superpone parcialmente con un epitopo unido por un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 o se ubica suficientemente cerca de tal epitopo. de .modo. que. tal anticuerpo anti-KIR compite con anticuerpos anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 conocidos debido al impedimento estérico. Un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 puede competir con un anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 de i referencia, sin unirse al mismo epitopo o similar debido al gran tamaño de los anticuerpos. Tal anticuerpo anti-KIR2DL1, 2 y/o 3 competidor puede ser útil para bloquear las interacciones asociada con la misma región determinante antigénica que el anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 de referencia aun cuando se una a un determinante antigénico diferente. | En otro ejemplo de aspecto, la invención proporciona un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 que se une a sustancialmente la misma región determinante antigénica que un anticuerpo anti-KIR disponible, tal como 1-7F9, DF200 y/o NKVSF1. Ver, por ejemplo, WO 2006/003179.

La competición se refiere a cualquier reducción significativa de la propensión de una molécula particular a unirse a un compañero de unión particular en presencia de otra molécula que se une al compañero de unión. Normalmente, la competición significa al menos aproximadamente 15% de reducción la unión, tales como al menos aproximadamente 20% de reducción de la unión (por ejemplo, una reducción de la unión de aproximadamente 25% o más, aproximadamente 30% o más, aproximadamente 15-35%) entre, por ejemplo, un anticuerpo anti-KIR y al menos un KIR en presencia de la molécula competidora, por ejemplo, un anticuerpo anti-KIR. En ciertas situaciones, tal como en casos en que los Epitopos pertenecientes a los anticuerpos competidores están ubicados cerca en un antígeno, la competición puede ser etiquetado por mas de aproximadamente 40% de inhibición relativa de la unión al receptor (por ejemplo, KIR), al menos aproximadamente 50% de inhibición, al menos aproximadamente 55% de inhibición, al menos aproximadamente 60% de inhibición, al menos aproximadamente 75% de inhibición, o nivel más alto de inhibi|ción (tal como un nivel de inhibición de aproximadamente 45-95%) .

La evaluación de la competición normalmente involucra una evaluación de unión inhibitoria relativa usando una primera cantidad de una primera molécula (por ejemplo, un anticuerpo anti-KIR) ; una segunda cantidad de una segunda molécula (por ejemplo, un anticuerpo anti-KIR conocido) ; y una tercera cantidad de una tercera molécula (por ejemplo, un KIR) , donde la primera, segunda y tercera cantidades son suficientes para realizar una comparación que imparte información acerca de la selectividad y/o especificidad de la moléculas en cuestión con respecto a las otras moléculas presentes. Usualmente, para los ensayos de competición ELISA, aproximadamente 5-50 µg (por ejemplo, aproximadamente 10-50 ug, aproximadamente 20-50 µg, aproximadamente 5-20 ig, aproximadamente .10-20 ,/ug) de ....un anticuerpo. anti-KIR,...- un anticuerpo anti-KIR conocido, y al menos un KIR se us'an para evaluar si existe la competición. Las condiciones también deben ser adecuadas para la unión de las moléculas competidoras para su blanco putativo/conocido. Las condiciones fisiológicas o casi fisiológicas (por ejemplo, temperaturas de aproximadamente 20-40°C, pH de aproximadamente 7-8) normalmente pueden ser adecuadas para el anticuerpo anti-KIR: KIR.

La determinación de la competición (o inhibición de unión relativa) entre dos o más moléculas se puede obtener por el uso de inmunoensayos en que la molécula de unión de KIR2DL1, 2 y/o 3 control (por ejemplo, anticuerpo 1-7F9) y anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 de ensayo se mezclan (o pre-adsorben) y aplican a una muestra que contiene KIR relevantes, tales como KIR2DL1 y KIR2DL2/3 (cada uno de los cuales se sabe que se une con DF200) . Los protocolos basados en ELISA, radioinmunoensayos , Western Blot, y similares son adecuados para usar en tales estudios de competición. Los ELISA de competición normalmente se realizan en condiciones adecuadas para la unión de las moléculas (por ejemplo, condiciones fisiológicas, en particular en el caso de anticuerpos que se unen a Epitopos conformacionales/no lineales) . La competición también se puede evaluar, por ejemplo, por una prueba de citometría de flujo, análisis SPR y otras., técnicas halladas en, por ejemplo, Harlow, et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1988), Colligan et ' al., eds . , Current Protocols in Immunology, Greene Publishing Assoc . y Wiley Interscience , N.Y., (1992, 1993), Ausubel et al., Eds., Short Protocols in Molecular Biology, (5th edición) , John Wiley & Sons (2002) , y Muller, Meth. Enzymol. 92:589-601 (1983)) .

Una región determinante antigénica o epitopo se puede identificar por numerosas técnicas conocidas. Por ejemplo, una región determinante antigénica se puede identificar rápidamente por ensayos de "huella" , tal como a través de la modificación química de las aminas/carboxilos expuestos en las proteínas blanco KIR2DL1, 2, y/o 3. Un ejemplo específico de tal técnica de identificación de huella es el uso de HXMS (intercambio de hidrógeno-deuterio detectado por la espectrometría de masa) , donde se produce un intercambio de hidrógeno-deuterio de los protones de amida de proteína del receptor y ligando, unión e intercambio de nuevo, donde los grupos amida del esqueleto que participan en la unión de la proteína están protegidos del nuevo intercambio y en consecuencia quedará deuterado. Las regiones relevantes se pueden identificar en este momento por la proteólisis péptica, separación por cromatografía líquida de alto rendimiento en microbore rápido, y/o espectrometría de masa por, ionización por . electroapersion ... Ver, por ejemplo, Ehring H, Analytical Biochemistry, Vol . 267 (2) p . 252-259 (1999) y/o Engen, J.R. y Smith, D.L. (2001) Anal. Chem. 73, 256A-265A.

Otro ejemplo de una técnica de identificación de epitopo adecuada mapeo de Epitopos por resonancia magnética nuclear (NMR) , donde normalmente se comparan la posición de las señales en los espectros de RMN bidimensionales del antígeno libre y el antígeno complejado con el péptido de unión al antígeno, tal como un anticuerpo. El antígeno normalmente se etiqueta isotópicamente en forma selectiva con 15N de modo que se observan solo las señales correspondientes al antígeno y ninguna señal del péptido de unión al antígeno en el espectro RMN. Las señales del antígeno que se originan de los aminoácidos involucrados en la interacción con el péptido de unión al antígeno normalmente cambiará de posición en los espectros del complejo en comparación con los espectros del antígeno libre, y los aminoácidos involucrados en la unión se pueden identificar de esta manera. Ver, por ejemplo, Ernst Schering Res Found orkshop. 2004 ; (44) : 149-67 ; Huang, efc al, Journal de Molecular Biology 281(1): 61-67 (1998); y Saito y Patterson, Methods . 1996 Jun; (3 ) : 516-24.

También se puede realizan el mapeo/caracterización epitópico usando métodos de espectrometría de masa. Ver, por ejemplo, Downward, J Mass Spectrom. 2000 Apr; 35 (4) : 493-503 y Kiselar y.Downard, Anal Chem. 1999 May 1; 71 (9) : 1792-801.

Las técnicas de digestión de proteasa también pueden ser útiles en el contexto de mapeo e identificación de epitopo. Las regiones/secuencias determinante antigénicos se pueden determinar por la digestión de proteasa, por ejemplo por medio de tripsina en una relación de aproximadamente 1:50 a KIR2DL1, 2 y/o 3 o/n digestión a 37 °C y pH 7-8, seguido por análisis de espectrometría de masa (MS) para la identificación del péptido. Los péptidos protegidos de la escisión con tripsina por el agente de unión antÍ-KIR2DL1 , 2 y/o 3 se puede identificar posteriormente por comparación de las muestras sometidas digestión con tripsina y las muestras se incuban con el anticuerpo y luego se someten a digestión por ejemplo, con tripsina (de este modo se revela huella para el agente de unión) . Otras enzimas como quimotripsina , pepsina, se puede usar también o de modo alternativo en los métodos de caracterización de Epitopos similares. Más aún, la digestión enzimática puede proporcionar un método rápido para analizar si una secuencia del determinante antigénico potencial está dentro de una región del KIR2DL1, 2 y/o 3 en el contexto de un polipéptido de anti -KIR2DL1 , 2, y/o 3 que no están expuesto en la superficie y, por consiguiente, es más probable que son sea relevante en términos de antigenicidad . Ver, por ejemplo, Manca, Ann Ist Super Sanita. 1991 ; 27 (1) : 15-9 para una descripción de técnicas similares.

También se pueden usar varias técnicas de despliegue en fago para identificar los Epitopos. Ver, por ejemplo, Wang y Yu, Curr Drug Targets. 2004 Jan; 5 ( 1) : 1-15 ; Burton, Immunotechnology . 1995 Aug ; 1 ( 2 ) : 87-94 ; Córtese et al., Immunotechnology. 1995 Aug; 1 (2 ) : 87-94 ; y Irving et al., Curr Opin Chem Biol . 2001 Jun ; 5 ( 3 ) : 314-24. Los Epitopos de consenso también se pueden identificar a través de técnicas relacionadas con el despliegue en fago modificadas {Ver, Mumey et al., J. Compu . Biol. 10:555-567 y Mumey, Proceedings de the Sixth Annual International Conf rence on Computational Molecular Biology (RECOMB-02) , pp. ¡233-240 (ACM Press, New York)) para la descripción (Ver also Bailey et al., Protein Science (2003), 12:2453-2475; Dromey et al., J Immunol. 2004 Apr 1 ; 172 ( 7) : 4084-90 ; Parker et -al., Mol Biotechnol. 2002 Jan; 20 ( 1 ): 49-62 ; y Czompoli et al., Biochem Biophys Res Commun. 2003 Aug 8 ; 307 (4 ) : 791-6 ) .

El mapeo de epitopo por unión competitiva a un KIR con dos moléculas de unión a KIR donde una está biotinilada (por ejemplo, un anticuerpo anti-KIR conocido) o etiquetado de modo similar de otro modo es otro método para identificar regiones determinantes antigénicas relevantes.

Otros métodos potencialmente útiles para mapear Epitopos incluyen técnicas de cristalografía, técnicas de difracción de rayos X (tales como las técnicas de difracción de rayos X/estudio de secuencia desarrolladas por Poljak y otros en los 1970^-1980) y la aplicación de Multipin Peptide Synthesis Technology.

Los métodos basados en computadora tales como análisis de secuencia y análisis de estructura tridimensional y acoplamiento también se pueden usar para identificar determinantes antigénicos. Por ejemplo, un epitopo también se puede determinar por modelado molecular usando una estructura de un KIR2DL1, 2 y/o 3 o porción de este con acoplamiento de la estructura de los fragmentos Fab de mAb del individuo.

Cuando sea necesario, se pueden producir modelos de KIR2DL1, 2 y/o 3 por modelado por homología | con KIR2DL1, 2 y/o 3 caracterizados por estructura usando programas tales como MOE (Molecular Operating Environment) , que está disponible en Chemical Computing Group (Montreal, Quebec, Canadá www.chemcomp.com) . Estos y otros métodos de mapeo se describen en Epitopo Mapping A Practical Approach ( estwood y Hay Eds . ) 2001 Oxford University Press (Ver también Cason (1994) J Virol Methods . 49(2): 209-19).

Características de los anticuerpos anti-KIR .

Los anticuerpos anti-KIR ventajosos se pueden clasificar sobre la base de características funcionales, en particular con respecto a su capacidad de reaccionar en forma cruzada o unir en forma cruzada más que un KIR, tal como más de un tipo de KIR inhibitorio, y/o la capacidad de neutralizar efectivamente las señales inhibitorias de NK.

Los anticuerpos anti-KIR que se unen efec ivamente a -más-de un tipo de KIR son un rasgo particularmente ventajoso de la , invención. En un ejemplo del aspecto particular, la invención proporciona anticuerpos anti-KIR que se unen a al menos dos receptores inhibitorios KIR en la superficie de las células NK. En un aspecto ilustrativo aun más particular, la invención proporciona anticuerpos anti-KIR que se unen a una región determinante antigénica común de los receptores de KIR2DL humanos. En aún otro aspecto específico adicional, la invención proporciona un anticuerpo anti-KIR que se une a los receptores de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3.

El término "KIR2DL2/3" se puede usar para referir a alguno o ambos receptores KIR2DL2 y KIR2DL3. Estos dos receptores presentan una muy alta homología, son formas alélicas del mismo gen, y son consideradas por la técnica como intercambiables en muchos aspectos. Por consiguiente, KIR2DL2/3 se puede considerar en ciertos aspectos como una molécula KIR inhibitoria única. Si bien los anticuerpos anti-KIR que reaccionan en forma cruzada con KIR2DL2/3 están dentro de la invención, los anticuerpos anti-KIR que tienen un perfil de unión KIR que solo incluyó KIR2DL2 y KIR2DL3 no se consideran "de reacción cruzada".

Debido a que al menos uno de KIR2DL1 o KID2DL2/3 está presente en al menos aproximadamente 90% de la población humana, los anticuerpos anti-KIR KIR2DL1 - KIR2DL2/3 con reactividad cruzada- pueden promover · o aumentar la actividad NK contra la mayor parte de las células asociadas al alotipo HLA-C, respectivamente los alotipos HLA-C del grupo 2 y los alotipos HLA-C del grupo 1. Una composición que comprende un anticuerpo KIR con reacción cruzada única que tiene tal reactividad cruzada se puede usar en el tratamiento y/o diagnóstico de la mayor parte de los sujetos humanos, de este modo se elimina la necesidad del perfil genético del paciente y la reducción de la cantidad de diferentes anticuerpos que se necesitan administrar a un paciente para asegurar un resultado efectiyo.

Los anticuerpos anti-KIR con reactividad cruzada pueden tener cualquier composición adecuada y se pueden obtener por numerosas técnicas adecuadas. Por ejemplo, un anticuerpo anti-KIR de reactividad cruzada puede comprender numerosas secuencias del ligando KIR y/o anticuerpo. anti-Anti-KIR que se unen a diferentes KIR, que se pueden asociar por conjugación, multimerización, o (en el caso de ligandos del péptido) por estar comprendidas en una proteína de fusión. En otro aspecto, se proporciona un anticuerpo anti-KIR que comprende las secuencias del anticuerpo anti -anti -KIR de un anticuerpo anti-Anti-KIR con reactividad cruzada.

Se conocen anticuerpos anti-Anti-KIR con reactividad cruzada, de los cuales se ueden obtener o derivar secuencias de unión a KIR. Un ejemplo de tal anticuerpo es anticuerpo NKVSFl- · (.también denominado como pan2D mAb; que reconoce un epitopo común de CD158a (KIR2DL1) , CD158b (KIR2DL2) y p50.3 (KIR2DS4)) que tiene las secuencias de la región variable y CDR mostradas en, por ejemplo la Figura 15, de WO2006/003179 (Innate Pharma; Novo Nordisk; University de Genoa) . El anticuerpo monoclonal DF200, que reacciona con varios miembros de la familia KIR que incluye KIR2DL1 y KIR2DL2/3 es otro ejemplo de tal anticuerpo de reacción cruzada. Un hibridoma que produce DF200 se ha depositado en la colección de cultivo CNCM, como Identificación no. "DF200", registro no. tNCM 1-3224, registrado el 10 de junio de 2004, Collection Nationale of Cultures de Microorganismes, Institut Pasteur, 25, Rué du Docteur Roux, F-75724 París Cedex 15, Francia. Se pueden generar varios anticuerpos monoclonales adicionales y demostrar que son anticuerpos anti-Anti-KIR de reactividad cruzadas. Aún otros ejemplos son los anticuerpos 1-7F9 y 1-4F1, descritos en WO2006/003179.

Un anticuerpo anti-KIR de reactividad cruzada puede tener una afinidad y/o avidez adecuada para los dos o más KIR a los que se une. La afinidad se refiere a la fuerza de unión de un anticuerpo anti-KIR u otra proteína de unión al antígeno a un epitopo o determinante antigénico. Normalmente, la afinidad se mide en términos de una constante de disociación ¾, definida como [Ab] x [Ag] / [Ab-Ag] donde [Ab-Ag] es la concentración molar del complejo anticuerpo-antígeno, [Ab] es la. concentración molar del . anticuerpo no unido y [Ag] es la concentración molar del antígeno no unido. La constante de afinidad Ka se define con ?/¾. Los métodos adecuados para determinar especificidad y afinidad del péptido de unión por inhibición competitiva, diálisis de equilibrio y similares se pueden hallar en, por ejemplo, Harlow, et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1988); Colligan et al., eds . , Current Protocols in Immunology, Greene Publishing Assoc. y Wiley Interscience , N.Y., (1992, 1993), y Muller, Meth. Enzymol . 92:589-601 (1983).

Normalmente, un anticuerpo anti-KIR provisto por la invención tiene una afinidad por al menos un KIR en el intervalo de aproximadamente 104 a aproximadamente 1010 M"1 (por ejemplo, aproximadamente 107 a aproximadamente 109 M"1) . El término inmunoreaccionar en la presente normalmente se refiere a la unión de un anticuerpo anti-KIR a un KIR con una constante de disociación ¾ menor de aproximadamente 10"4 M. Por ejemplo, en un efecto particular la invención proporciona el anticuerpo anti-KIR que tiene una constante de disociación (KD) promedio de aproximadamente 7 x 10"9 M o más con respecto a KIR2DL1 y KIR2DL2/3, determinado, por ejemplo, por la prueba resonancia del plasmón superficial (SPR) (tal como por análisis con un dispositivo analítico BIAcore® SPR) . En un ejemplo de aspecto más particular, la invención proporciona anticuerpos anti-KIR ; que . tienen una KD de aproximadamente 2 x 10"9 M (por ejemplo, aproximadamente 0,l-4xl0"9 M) o más para KIR2DL2/3 y aproximadamente 11 x 10"9 M (por ejemplo, aproximadamente 7-15 x 10"9 M) o más para KIR2DL1.

La afinidad se puede determinar por cualquiera de los métodos descritos en otra parte de la presente o sus equivalentes conocidos en la técnica. Un ejemplo de un método que se puede usar para determinar la afinidad se proporciona en el análisis de Scatchard de Munson & Pollard, Anal.

Biochem. 107:220 (1980). La afinidad de unión se puede determinar por métodos de equilibrio (por ejemplo ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) o radioinmunoensayo (RIA) ) o análisis cinético {por ejemplo, análisis BIAcore®) .

Los anticuerpos anti-KIR de modo similar o alternativo se pueden caracterizar por la exhibición de la unión con KIR con una constante de disociación de menos de aproximadamente 100 nM, menos de aproximadamente 50 nM, menos de aproximadamente 10 nM, aproximadamente 5 nM o menos, aproximadamente 1 nM o menos, aproximadamente 0,5 nM o menos, aproximadamente 0,1 nM o menos, aproximadamente 0,01 nM o menos, o incluso aproximadamente 0,001 nM o menos.

La avidez se refiere a la fuerza total de las interacciones totales entre una proteína de unión y antígeno (por ejemplo, la fuerza total de las interacciones entre un anticuerpo anti-KIR y un KIR) . La afinidad es la fuerza de las interacciones no covalentes totales entre un sitio de unión de antígeno único sobre un anticuerpo u otro péptido de unión y un epitopo o determinante antigénico único. La avidez normalmente está gobernada por tres factores importantes: la afinidad intrínseca de la proteína de unión para el epitopo o determinante antigénico a la que se une, la valencia del anticuerpo o proteína de unión y antígeno {por ejemplo, un anticuerpo anti-KIR con una valencia de tres, cuatro, o más normalmente exhibirá niveles más altos de avidez por un antígeno que un anticuerpo bivalente y un anticuerpo bivalente tendrá una mayor avidez por un antígeno que un anticuerpo univalente, en especial cuando existen Epitopos repetidos en el antígeno) , y/o la disposición geométrica de los componentes interactuantes . La avidez normalmente se mide con el mismo tipo de técnicas usadas para evaluar la afinidad.

En otro aspecto, la invención proporciona un anticuerpo anti-KIR que reacciona en forma cruzada con KIR de dos o más especies. Por ejemplo, en un aspecto, la invención proporciona un anticuerpo anti-KIR que reacciona en forma cruzada con KIR humanos y monos cynomolgus. En un aspecto particular, la invención proporciona un anticuerpo anti-KIR que reacciona en forma cruzada con al menos dos KIR humanos y también se une a células NK de monos cynomolgus. Tal anticuerpo anti-KIR puede comprender secuencias de o que se derivan del .anticuerpo .. NKVSFL, que exhibe tal perfil de reactividad cruzada. Tales anticuerpos Anti-KIR se puede someter a prueba de toxicidad y otros estudios útiles en los monos cynomolgus, si fuera necesario.

Los anticuerpos que tienen reactividad cruzada con una variedad de KIR se pueden usar en las composiciones de combinación y métodos de la invención. Los ejemplos de perfiles de reactividad cruzada de tales anticuerpos incluyen anticuerpos que reaccionan en forma cruzada con KIR 2DL1 más 2DL2/3, 3DL1 más 3DL2 , 2DL1 (y 2DL2/3) más 2DS4 , y 2DL1 (y 2DL2/3) pero no 2DS4.

En consecuencia, po ejemplo, los métodos o composiciones de la invención pueden comprender un anticuerpo anti-KIR que se une a KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 y reduce o bloquea la inhibición de citotoxicidad mediada por KIR de las células NK, como se describe en, por ejemplo, WO2005003168.

Los ejemplos de anticuerpos anti-KIR útiles en los métodos de combinación y composiciones de la invención incluyen anticuerpos anti-KIR que comprende una región VL que corresponde a la de un anticuerpo anti-KIR DF200, o consiste esencialmente en tal región VL (al ser sustancialmente similar y retener un perfil de unión y afinidad similar) , o una secuencia/dominio de VL que es muy similar (por ejemplo, al menos aproximadamente 90% idéntica o 95% idéntica) a la secuencia de VL de DF200. La secuencia de VL de DF200 se muestra en O2006/3179. Tales anticuerpos anti-KIR también se pueden definir de modo alternativo por comprender el conjunto de CDR variable ligera de DF200 (también mostrado en WO2006/3179) . Tal anticuerpo normalmente también comprenderá el dominio de VH de DF200 o una secuencia muy similar (por ejémplo, una secuencia que tiene alta identidad con el dominio VH DF200 o que de otro modo consiste esencialmente en tal secuencia) o al menos las CDR variables pesada de DF200 (mostrado en O2006/3179) .

En otro ejemplo de aspecto, la composición de la combinación o método de la invención incluye un anticuerpo anti-KIR que comprende las secuencias de VH y VL que corresponden a o son muy similares (por ejemplo, consiste esencialmente en) a las secuencias de VH y VL del anticuerpo 1-7F9 (mostrado en WO2006/3179) o al menos comprende las CDR de la VL y VH de 1-7F9.

Competición con anticuerpos anti-KIR con reactividad cruzada y/o neutralizante En otro aspecto, los métodos o las composiciones de la invención se caracterizan por comprender un anticuerpo anti-KIR que compite con uno de estos anticuerpos o uno de los otros anticuerpos anti-KIR descritos en las referencias incorporadas en la presente (por ejemplo, 1-7F9) .

Los anticuerpos que compiten con ejemplos de anticuerpos anti-KIR, tales como DF200, 1-7F9, y/o NKVSF1, se pueden identificar usando ensayos de .detección conocidos. Varios de estos ensayos se practican de rutina y son bien conocidos en la técnica (Ver, por ejemplo, Patente U.S. No. 5.660.827, que se incorpora específicamente en la presente por referencia) . Los protocolos basados en, por ejemplo, ELISA, radio-inmunoensayos , Western Blot, y el uso de análisis BIACORE son adecuados para uso en tales estudios de competición.

Se puede, por ejemplo, pre-mezclar el anticuerpo control (por ejemplo, DF200, NKVSF1, o 1-7F9) con cantidades variadas del anticuerpo de ensayo (por ejemplo, en relaciones de aproximadamente 1:1, 1:2, 1:10 o aproximadamente 1:100) durante un período de tiempo antes de aplicar a una muestra de antígeno KIR. De modo alternativo, las cantidades control y variadas del anticuerpo de ensayo se pueden añadir simplemente por separado y mezclar durante la exposición a la muestra de antígeno KIR. Siempre que se pueda distinguir anticuerpos unidos de libres {por ejemplo, por medio de técnicas de separación o lavado para eliminar anticuerpos no unidos) y anticuerpo control del anticuerpo de ensayo (por ejemplo, por medio de anticuerpos secundarios específicos de especie o específicos de isotipo o por etiquetación específica del anticuerpo control con una etiqueta detectable) se podrá determinar si el anticuerpo de ensayo reduce la unión del anticuerpo control a los antígenos de KIR2DL diferentes, lo que indica que el anticuerpo de ensayo reconoce sustancialmente. el mismo epitopo que el control. La. unión del anticuerpo control (etiquetado) en presencia de un anticuerpo completamente irrelevante (que no se une a KIR) pueden actuar como el valor alto de control. El valor bajo de control se puede obtener por la incubación del anticuerpo control etiquetado con el mismo anticuerpo control pero no etiquetado, cuando la competición puede ocurrir y reducir la unión del anticuerpo etiquetado. En un ensayo de prueba, una reducción significativa de la reactividad del anticuerpo etiquetado en presencia de un anticuerpo de ensayo es indicativa de un anticuerpo | de ensayo que reconoce sustancialmente el mismo epitopo, es decir, uno que compite con el anticuerpo control etiquetado. Por ejemplo, cualquier anticuerpo de ensayo que reduce la unión del anticuerpo control a uno o ambos antígenos KIR2DL1 y KIR2DL3 en al menos aproximadamente 50%, tales como al menos aproximadamente 60%, o con más preferencia al menos aproximadamente 70% (por ejemplo, aproximadamente 65-100%) , en cualquier relación de control: anticuerpo de ensayo entre aproximadamente 1:1 o 1:10 y aproximadamente 1:100 se considera que es un anticuerpo que compite con el control.

La competición también se puede evaluar, por ejemplo, por citometría de flujo. En tal ensayo, las células portadoras de un KIR dado se pueden incubar con un anticuerpo control, y luego con el anticuerpo de ensayo etiquetado con un fluorocromo o biotina. Se dice que el anticuerpo compite, con el anticuerpo control si la unión obtenida después de la pre- incubación con cantidad saturante de anticuerpo control es aproximadamente 80%, con preferencia aproximadamente 50%, aproximadamente 40% o menos {por ejemplo, aproximadamente 30%) de la unión (medida por medio de fluorescencia) obtenida por el anticuerpo de ensayo sin preincubación con anticuerpo control. De modo alternativo, se dice que un anticuerpo compite con el anticuerpo control si la unión obtenida con un anticuerpo control etiquetado (con un fluorocromo o biotina) sobre las células p eincubadas con cantidad saturante de anticuerpo de ensayo es aproximadamente 80%, con preferencia aproximadamente 50%, aproximadamente 40%, o menos (por ejemplo, aproximadamente 30%) de la unión obtenida sin preincubación con el anticuerpo de ensayo.

También se puede emplear venta osamente un ensayo de competición simple en que un anticuerpo de ensayo se pre-adsorbe y aplica en concentración saturante en una superficie sobre la cual se inmovilizan KIR2DL1 o KIR2DL2/3, o ambos. La superficie en el ensayo de competición simple es con preferencia un chip de BIACORE (u otro medio adecuado para el análisis de resonancia del plasmón superficial) . Se mide la unión de un anticuerpo control a la superficie recubierta con KIR. Esta unión a la superficie que contiene KIR del anticuerpo control solo se compara con la unión del anticuerpo control. e?· presencia de un anticuerpo de ensayo. Una reducción significativa de la unión a la superficie que contiene KIR2DL1 y KIR2DL2/3 por el anticuerpo control en presencia de un anticuerpo de ensayo indica que el anticuerpo de ensayo reconoce sustancialmente el mismo epitopo que el anticuerpo control de modo que el anticuerpo de ensayo "compite" con el anticuerpo control. Cualquier anticuerpo de ensayo que reduce la unión del anticuerpo control a los antígenos de KIR2DL1 y KIR2DL2/3 en al menos aproximadamente 20% o más, al menos aproximadamente 40%, al menos aproximadamente 50%, al menos aproximadamente 70%, o más, se puede considerar un anticuerpo que compite con el anticuerpo control. Con preferencia, tal anticuerpo de ensayo reducirá la unión del anticuerpo control a cada uno de al menos los antígenos KIR2DL1, 2, y 3 en al menos aproximadamente 50% (por ejemplo, al menos aproximadamente 60%, al menos aproximadamente 70%, o más) . Se apreciará que se puede invertir el orden de los anticuerpos control y de ensayo es decir el anticuerpo control primero se puede unir a la superficie y luego el anticuerpo de ensayo se pone en contacto con la superficie a partir de este momento en un ensayo de competición. Con preferencia, el anticuerpo que tiene afinidad más alta por los antígenos KIR2DL1 y KIR2DL2/3 se une a la primera superficie que contiene KIR2DL1 y KIR2DL2/3, ya que se espera que la disminución de la unión • observada para el segundo anticuerpo (asumiendo que los anticuerpos están compitiendo) será de mayor magnitud. Otros ejemplos de tales ensayos son provistos en los Ejemplos de la presente, y en por ejemplo, Saunal y Regenmortel, (1995) J. Immunol . Métodos 183: 33-41, cuya descripción se incorpora en la presente por referencia.

En otro aspecto, el método o la composición de la invención se caracteriza por la inclusión de solo anticuerpos que no tienen reacción cruzada con más de un KIR. Por ejemplo, se ha demostrado que los anticuerpos monoclonales ¡específicos solo para KIR2DL1 bloquean las interacciones entre los alotipos KIR2DL1 y HLA-Cw4, así como los alotipos HLA-C similares pertenecientes al mismo grupo que Cw4 (Moretta efc al., J Exp Med. 1993 ; 178 (2) : 597-604 ; cuya descripción se incorpora en la presente por referencia) . En otro ejemplo, también se ha descrito que los anticuerpos monoclonales contra KIR2DL2/3 bloquean las interacciones de KIR2DL2/3 con los alotipos HLAC 3 (o similares) (Moretta et al., 1993, supra) . Opcionalmente , el anticuerpo se puede seleccionar del grupo que consiste en GL183 (específico para KIR2DL2/3/S2 , disponible en Immunotech, Francia y Beckton Dickinson, USA); EB6 (KIR2DLl/sl-specific , disponible en Immunotech, Francia y Beckton Dickinson, USA) .

Epitopos En aspectos adicionales, la invención proporciona anticuerpos anti-KIR que se dirigen a regiones y/o . Epitopos antigénicos particulares presentados en varios KIR. En un ejemplo de aspecto, la invención proporciona anticuerpos anti-KIR que se unen específicamente a KIR2DL1 dentro de una región definida por uno o más (o el total) de los residuos de aminoácidos seleccionados de 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 127, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 181, y 192. En otra modalidad la invención proporciona anticuerpos anti-KIR que se unen específicamente a KIR2DL1 y KIR 2DL2/3 en una región definida por uno o más (o el total) de los residuos de aminoácidos 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 127, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 181, y 192 de estos.

En un aspecto adicional, la invención proporciona anticuerpos anti-KIR que se unen a KIR2DL1, pero que se unen a una mutante de KIR2DL1 en que R131 es Ala con afinidad de unión significativamente reducida respecto a la misma (aproximadamente 20% o menos, aproximadamente 30% o menos, aproximadamente 40% o menos, aproximadamente 50% o menos, aproximadamente 60% o menos, aproximadamente 70% o menos, de la afinidad exhibida por KIR2DL1) . En otro aspecto, la invención proporciona anticuerpos anti-KIR que se unen a KIR2DL1, pero los cuales se unen a una mutante de KIR2DL1 en que R157 es Ala con afinidad de unión relativamente reducida (aproximadamente 20%-. o menos, aproximadamente 30% o menos, aproximadamente 40% o menos, aproximadamente 50% o menos, aproximadamente 60% o menos, aproximadamente 70% o menos, de la . afinidad exhibida por KIR2DL1) . En otro aspecto, la invención proporciona anticuerpos anti-KIR que se unen a KIR2DL1 y que se unen a una mutante de KIR2DL1 en que R158 es Ala con afinidad de unión relativamente reducida (aproximadamente 20% o menos, aproximadamente 30% o menos, aproximadamente 40% o menos, aproximadamente 50% o menos, aproximadamente 60% o menos, aproximadamente 70% o menos, de la afinidad exhibida por KIR2DL1) .

La invención proporciona anticuerpos anti-KIR que se unen a los residuos 131, 157, y 158 de KIR2DL1.

La invención proporciona anticuerpos anti-KIR que se unen a KIR2DS3 (R131W) , pero no a KIR2DS3 tipo salvaje. En aún otro aspecto, la invención proporciona anticuerpos anti-KIR que se unen a KIR2DL1 y KIR2DL2/3 así como a KIR2DS4. En otro aspecto más, la invención proporciona anticuerpos anti-KIR que se unen a KIR2DL1 y KIR2DL2/3, pero no a KIR2DS4.

Para ilustrar el uso de las secuencias de anticuerpo anti-KIR en la composición y construcción de anticuerpos anti-KIR, los ejemplos de secuencias de anticuerpo anti-KIR y variantes de secuencias de anticuerpo se describirán en la presente. Las secuencias de aminoácido y de ácidos nucleicos de las regiones variables y CDR de ejemplos de anticuerpos KIR DF200 y 1-7F9 también se describen en WO 2006/003179.. , Los ejemplos de mAb anti-KIR incluyen mAb 1-7F9 y 1-4F1 que tienen varias ventajas respecto de otros anticuerpos anti-KIR. Por ejemplo, 1-7F9 y 1-4F1 son completamente humanos, de este modo se reduce o minimiza cualquier respuesta inmunológica contra el anticuerpo una vez administrado a un sujeto. Además, ambos 1-7F9 y 1-4F1 son de isotipos adecuados para los anticuerpos terapéuticos anti-KIR (IgG4 e IgG2 , respectivamente), como se describe a continuación. 1-7F9 también es más efectiva para inducir la destrucción por parte de las células NK que expresan KIR2DL1, -2, y/o -3 que los mAb EB6, GL183, DF200, y NKVSF1 (Pan2D) murinos . 1-7F9 también tiene afinidad más alta por KIR en comparación con los mAb anti-KIR conocidos. Por ejemplo, 1- 7F9 se une a KIR2DL1 y KIR2DL3 con constantes de disociación (Kd) de 0,43 nM y 0,025 nM, respectivamente, lo que representa una mayor afinidad para ambos antígenos que, por ejemplo, DF200. En particular los anticuerpos preferidos de acuerdo con la invención en consecuencia tiene las mismas o similares especificidades de antígeno que 1-7F9 y/o 1-4F1. Por ejemplo, los anticuerpos que comprenden las mismas o similares regiones VH y VL que 1-7F9 pueden tener las mismas o similares propiedades de unión al antígeno y/o estimuladoras de NK que 1-7F9; y los anticuerpos que comprende las mismas o similares regiones VH y VL que 1-4F1 - pueden tener las mismas o, similares . propiedades de unión al antígeno que 1-4F1.

Un anticuerpo puede comprender las siguientes secuencias de aminoácidos de las regiones VL y/o VH de 1-7F9: 1-7F9 región VL (SEQ ID NO : 1) : EIVLTQSPVTLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLA YQQKPGQAPRLLIYDASNRAT GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWMYTFGQGTKLEIKRT Región VH 1-7F9 (SEQ ID NO: 2) : QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSFYAISWVRQAPGQGLEWMGGFIPIFG AANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSDDTAVYYCARIPSGSYYYDYDMDVWGQGT TVTVSS . | Las secuencias de aminoácidos de las regiones VL y VH 1-4F1 se proporciona en las SEQ ID NOS: 3 y 4, respectivamente. En una modalidad particular, los residuos 3, 4, 9, 24, 32, 41, 47, 50, 55, 71, y 74 de la SEQ ID NO: 3 son Q, L, S, R, A, G, L, D, E, F, y A, respectivamente. En otra modalidad particular, los residuos 3, 4, 9, 24, 32, 41, 47, 50, 55, 71, y 74 de la SEQ ID NO: 3 son R, M, F, W, Y, A, F, Y, Q, Y, y T, respectivamente.

Las secuencias de aminoácidos de las CDR de 1-7F9 son las siguientes: la secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena ligera corresponde a los residuos 24-34 de la SEQ ID NO: 1 ; la secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena ligera corresponde a los residuos 50-56 de la SEQ ID NO: 1; la secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena ligera corresponde a los residuos 89-97 de la SEQ ID NO: 1;. la. secuencia, de, aminoácidos de CDR1 de cadena pesada corresponde a los residuos 31-35 de la SEQ ID NO: 2; la secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena pesada corresponde a los residuos 50-65 de la SEQ ID NO: 2; y la secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena pesada corresponde a los residuos 99-112 de la SEQ ID NO: 2. Las secuencias de aminoácidos de las CDR de 1-4F1 se han identificado son las siguientes: la secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena ligera corresponde a los residuos 24-34 de la SEQ ID NO: 3; la secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena ligera| corresponde a los residuos 50-56 de la SEQ ID NO : 3 ; la secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena ligera corresponde a los residuos 89-97 de la SEQ ID NO : 3 ; la secuencia de aminoácidos de CDRl de cadena pesada corresponde a los residuos 31-35 de la SEQ ID NO: 4; la secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena pesada corresponde a los residuos 50-66 de la SEQ ID NO: 4; y la secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena pesada corresponde a los residuos 99-113 de la SEQ ID NO : 4.

Las secuencias de aminoácidos para las cadenas ligera y pesada completa de 1-7F9 se proporcionan en las SEQ ID NOS : 5 y 6, respectivamente.

Por consiguiente, los anticuerpos adicionales de, por ejemplo, varias subclases de anticuerpo humano; fragmentos de anticuerpos, derivados de anticuerpo y otros péptidos de unión a ,KIR, se pueden producir fácilmente por ejemplo, por técnicas recombinantes , basadas en esta información. Por ejemplo, en un aspecto, la invención proporciona un anticuerpo que tiene una secuencia VL y VH que consiste esencialmente en la SEQ ID NO:l y SEQ ID NO : 2 , respectivamente, y/o un anticuerpo que tiene una secuencia VL y VH que consiste esencialmente en la SEQ ID NO : 3 y SEQ ID NO : 4 , respectivamente. En otro aspecto, la invención proporciona un anticuerpo que comprende regiones de CDR que consisten esencialmente en CDR1-3 VH y CDR1-3 VH de 1-7F9 o 1-4F1 descritos anteriormente ,o un j anticuerpo que tiene cadenas ligeras y pesadas que consisten esencialmente en las cadenas ligeras y pesadas 1-7F9 de las SEQ ID NOS 5 y 6, respectivamente. En otro aspecto, la invención proporciona un anticuerpo que comprende las siguientes regiones de CDR: una secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena ligera correspondiente a aproximadamente los residuos 24-34 de la SEQ ID N0:1; la secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena ligera correspondiente a aproximadamente los residuos 50-56 de la SEQ ID NO:l; la secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena ligera correspondiente a aproximadamente los residuos 89-97 de la SEQ ID N0:1; la secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena pesada correspondiente a aproximadamente los residuos 31-35 de la SEQ ID NO : 2 ; la secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena pesada correspondiente a aproximadamente a •los residuos 50-65 de la SEQ ID NO : 2 ; y la secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena pesada correspondiente a aproximadamente los residuos 99-112 de la SEQ ID NO: 2. En otro aspecto, la invención proporciona un anticuerpo que comprende las siguientes regiones de CDR: una secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena ligera correspondiente a aproximadamente los residuos 24-34 de la SEQ ID NO : 3 una secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena ligera correspondiente a aproximadamente los residuos 50-56 de la SEQ ID NO : 3 ; una secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena ligera correspondiente a aproximadamente los residuos 89-97 de la SEQ ID NO : 3 ; una secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena pesada correspondiente a aproximadamente los residuos 31-35 de la SEQ ID NO : 4 ; una secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena pesada correspondiente a aproximadamente los residuos 50-66 de la SEQ ID NO : 4 ; y una secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena pesada correspondiente a aproximadamente los residuos 99-113 de la SEQ ID NO: 4. En otro aspecto, la invención proporciona un anticuerpo que comprende una secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena ligera que consiste esencialmente en los residuos 24-34 de la SEQ ID N0:1; una secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena ligera que consiste esencialmente en los residuos 50-56 de la SEQ ID NO:l; una secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena ligera que consiste esencialmente en los residuos 89-97 de la SEQ ID NO:l; una secuencia de aminoácidos de CDR1 de. cadena pesada que consiste esencialmente en los residuos 31-35 de la SEQ ID NO: 2; una secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena pesada que consiste esencialmente en los residuos 50-65 de la SEQ ID NO : 2 ; y una secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena pesada que consiste esencialmente en los residuos 99-112 de la SEQ ID NO:2. En otro aspecto, la invención proporciona un anticuerpo que comprende las siguientes regiones de CDR: una secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena ligera que consiste esencialmente en los residuos 24-34 de la SEQ ID NO: 3; una |secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena ligera que consiste esencialmente en los residuos 50-56 de la SEQ ID NO: 3; una secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena ligera que consiste esencialmente en los residuos 89-97 de la SEQ ID NO: 3; una secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena pesada que consiste esencialmente en los residuos 31-35 de la SEQ ID NO: 4; una secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena pesada que consiste esencialmente en los residuos 50-66 de la SEQ ID NO: 4; y una secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena pesada que consiste esencialmente en los residuos 99-113 de la SEQ ID NO: 4.

La invención también abarca el uso de un anticuerpo anti-KIR, fragmento de anticuerpo, o derivado de anticuerpo, o un polipéptido de, unión a KIR, que comprende al menos una variante de secuencia de aminoácido sustancialmente idéntica a la secuencia de VH o VL de 1-7F9 o 1-4F1, . o a una región. CDR- de esta. Una variante de la secuencia de aminoácidos puede comprender o consistir esencialmente en una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50, 80, 90, 95, 98, o 99 (por ejemplo, aproximadamente 50-99, aproximadamente 65-99, aproximadamente 75-99, o aproximadamente 85-99) por ciento idéntico a una secuencia CDR, VH, o región VL, o cadena pesada o ligera de 1-7F9 o 1-4F1. Un anticuerpo por ejemplo puede comprender cadenas ligera y pesada de 1-7F9, cada una que tiene una secuencia | que es al menos aproximadamente 50, 80, 90, 95, 98, o 99 (por ejemplo, aproximadamente 50-99, aproximadamente 65-99, aproximadamente 75-99, o aproximadamente 85-99) por ciento idéntica a las SEQ ID NOS : 5 y 6, respectivamente. Una variante de la secuencia de aminoácidos por ejemplo puede comprender 1, 2, o 3 CDR que comprenden o consisten en las secuencias de aminoácidos que son al menos aproximadamente 80%,! al menos aproximadamente 90%, o al menos aproximadamente 95% idénticas a las CDR de 1-7F9 o 1-4F1. Una variante de la secuencia de aminoácidos de modo similar o alternativo puede comprender 1, 2, o 3 CDR que comprenden o consisten en las secuencias de aminoácidos que son al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 90%, o al menos aproximadamente 95% idéntica a las CDR de 1-7F9 o 1-4F1. En consecuencia, en un aspecto, la invención proporciona un anticuerpo humano que comprende una secuencia .de aminoácidos de CDR1 de cadena ligera al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 90%, o al menos aproximadamente 95% idéntica a los residuos 24-34 de la SEQ ID NO : 1 o SEQ ID NO : 3 ; una secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena ligera al menos aproximadamente 80%·, al menos aproximadamente 90%, o al menos aproximadamente 95% idéntica a los residuos 50-56 de la SEQ ID NO:l o SEQ ID NO : 3 ; una secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena ligera al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 90%, o al menos aproximadamente 95% idéntica a los residuos 89-97 de la SEQ ID N0:1 o SEQ ID NO : 3 ; una secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena pesada al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 90%, o al menos aproximadamente 95% idéntica a los residuos 31-35 de la SEQ ID NO : 2 o SEQ ID NO: 4; una secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena pesada al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 90%, o al menos aproximadamente 95% idéntica a los residuos 50-65 de la SEQ ID NO: 2 o a los residuos 50 a 66 de la SEQ ID NO: 4; y una secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena pesada al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 90%, o al menos aproximadamente 95% idéntica a los residuos 99-112 de la SEQ ID NO: 2 o a los residuos 99 a 113 de la SEQ ID NO : 4. Las propiedades básicas de las secuencias de aminoácidos de unión a KIR derivadas de 1-7F9- o 1-4F1 que están retenidas en tales variantes de secuencia de aminoácidos incluyen de modo conveniente la especificidad y/o avidez de la secuencia 1-7F9. o 1-4F1 para uno o más KIR, y de modo similar o alternativo puede incluir la capacidad de 1-7F9 de bloquear la interacción de KIR/HLA-C potenciación de la actividad lítica de las células NK.

En otro aspecto, la invención proporciona el uso de un anticuerpo anti-KIR, fragmento de anticuerpo, o derivado de anticuerpo, o un polipéptido de unión a KIR, que comprende una secuencias de aminoácidos de unión a KIR que difiere en una secuencia de unión a KIR de 1-7F9 o 1-4F1 en uno o más residuos de aminoácidos (por ejemplo, al menos 2, 3, 5, al menos aproximadamente 10, al menos aproximadamente 15, al menos aproximadamente 20, al menos aproximadamente 25, al menos aproximadamente 30, al menos aproximadamente 35, al menos aproximadamente 40, al menos aproximadamente 50, o más los residuos de aminoácidos) por medio de una o más inserciones, supresiones, y/o sustituciones de residuos. Tal variante secuencia de unión KIR confiere mayor afinidad; mayor o diferente especificidad; menos inmunogenicidad (en términos de respuesta del huésped a la secuencia) ; mayor estabilidad in vivo; y/u otras propiedades beneficiosas para la variante de la secuencia respecto de una secuencia de aminoácidos esencialmente idéntica que comprende la secuencia de 1-7F9 o 1-4F1 nativa. Las variaciones de secuencia adecuadas también se describen en otra parte de la presente. Una porción de unión de KIR de un anticuerpo , anti-KIR, fragmento de anticuerpo, o derivado de anticuerpo, o un polipéptido de unión a KIR, también puede comprender cualquier número adecuad de componentes o sustituyentes no aminoácido, tales como residuos orgánicos no aminoácidos, que facilitan la unión con KIR y/o proporcionan otras propiedades fisicoquímicas o inmunológicas ventajosas.

Como ya se mencionó antes, las variantes de secuencia adecuada de las secuencias del anticuerpo de unión al antígeno, tales como las secuencias del anticuerpo anti-KIR, se pueden incorporar en los anticuerpos de la invención. Las variaciones en la mayor parte de la secuencia del anticuerpo pueden ser adecuados. En consecuencia, por ejemplo, un anticuerpo anti-KIR puede comprender variantes de la secuencias constantes y/o variantes de las secuencias estructurales.

La invención proporciona un anticuerpo anti-KIR que comprende una o más variantes de secuencias de CDR (es decir, una secuencia de CDR que difiere en la secuencia de CDR tipo salvaje en una o más inserciones, supresiones, adiciones, y/o sustituciones de aminoácidos que imparten las propiedades biológicas y/o fisicoquímicas de la secuencia con respecto a su secuencia relativa tipo salvaje) . Ver por ejemplo, técnicas descriptas en WO 2006/072625. Las variantes de la secuencia de CDR, VH, y VL pueden exhibir cualquier nivel adecuado.de identidad ,a una o más secuencias de CDR, VH,- y VL "original", de VL de mAb anti-KIR DF200 y/o mAb anti-KIR NKVSF1. Normalmente, una variante de secuencia que se une a una región determinante antigénica esencialmente idéntica como una secuencia original retendrá al menos aproximadamente 40% de identidad de secuencia de aminoácidos a la original, tales como aproximadamente 50% o más, aproximadamente 60% o más, aproximadamente 70% o más, aproximadamente 75% o más, aproximadamente 80% o más, aproximadamente 85% o más, aproximadamente 90% o más, o al menos aproximadamente 95% (por ejemplo, aproximadamente 45-99%, aproximadamente 55-99¡%, o aproximadamente 65-99%) de identidad a la secuencia original. Sin embargo, en algunos casos, en particular con respecto a las secuencias de CDR dirigidas a un epitopo esencialmente idéntico, pueden ser adecuadas las variantes con niveles de identidad aun menores.

Las variantes de la secuencia de CDR, VH, y VL que se unen a diferentes regiones determinantes antigénicas o un diferente conjunto (o "perfil") de las regiones determinantes antigénicas también se pueden generar por alguna de las técnicas descriptas en otra parte de la presente (diseño racional, mutagénesis, evolución dirigida). En tales casos, se pueden esperar niveles significativamente más bajos de identidad de secuencia de aminoácidos con una secuencia original. Por ejemplo, en el contexto de una variante de CDR-Li, CDR-H1, CDR-H2, o CDR H3 que tiene un perfil de unión al epitopo diferente de una secuencia original, se puede exhibir tan poco como aproximadamente 20-30% de identidad de secuencia de aminoácidos con una secuencia de CDR original en las variantes que contribuyen a la unión de los NKCAMR, tales como KIR.

WO 2006/072625 también proporciona variantes de secuencias del anticuerpo anti-KIR, que incluyen fórmulas específicas para las secuencias de CDR y región variable, cuyas descripciones se incorporan en la presente por referencia. | Normalmente, las variantes difieren de las secuencias "originales" en mayor parte a través de las sustituciones conservadoras ; por ejemplo, al menos aproximadamente 35%, aproximadamente 50% o más , aproximadamente 60% o más , aproximadamente 70% o más , aproximadamente 75% o más , aproximadamente 80% o más , aproximadamente 85% o más , aproximadamente 90% o más , aproximadamente 95% o más {por ejemplo, aproximadamente 65-99%) de las sustituciones de la variante son reemplazos de residuos de aminoácido conservadores. En el contexto de esta invención, las sustituciones conservadoras se pueden definir por las sustituciones dentro de las clases de aminoácidos reflejadas en una o más tablas 4, 5 y 6 de WO 2006/072625 (Novo Nordisk AS e Innate Pharma SA) . WO 2006/072625 también describe agrupamientos de sustituciones -conservadoras ¦ adicionales ; modalidad de cambios sustanciales de la función por la selección de sustituciones que son menos conservadoras; principios útiles en el diseño y selección de variantes de péptido; conservación en términos de propiedades hidropática/hidrofílica ; mantenimiento de una estructura de la variante del péptido sustancialmente similar a la estructura del péptido original, que incluyen métodos para evaluar la semejanza de péptidos en términos de sustituciones conservadoras, propiedades hidropáticas , conservación del peso, comparaciones de estructuras secundarias o semejanza de puntuación, determinada por el uso de un programa de BLAST; otros puntos de variación/divergencia entre una variante y una original pueden ser aceptables; cambios de secuencia ventajosa en las CDR; variaciones de secuencia que producen en una glicosilación alterada; inserciones de la región hipervariable y para generar una variante del anticuerpo y más generalmente, las variantes de CDR.

La identidad en el contexto de las secuencias de I aminoácidos de la invención se puede determinar con cualquier técnica adecuada, normalmente por un análisis de alineamiento de Needleman-Wunsch (Ver Needleman y Wunsch, J. Mol. Biol . (1970) 48:443-453), tal como se proporciona por medio del análisis con ALIGN 2.0 usando la matriz de puntuación BLOSUM50 con una penalización de brecha inicial -12 y una penalización ¦ de .. extensión de brecha de -2 (Ver Myers y Miller, CABIOS (1989) 4:11-17 para la discusión de las técnicas de alineamiento global incorporadas en el programa ALIGN) . Una copia del programa ALIGN 2.0 está disponible, por ejemplo, a través de San Diego Supercomputer (SDSC) Biology Workbench. Debido a que el alineamiento de Needleman-Wunsch proporciona una medición de identidad total o global entre dos secuencias, se debe reconocer que las secuencias blanco que pueden ser porciones o subsecuencias de secuencias de péptidos más grandes se pueden usar de una manera análoga a las secuencias completas o, de modo alternativo, se pueden usar valores de alineamiento local para evaluar las relaciones entre las subsecuencias , determinado, por ejemplo, un alineamiento de Smith- aterman (J". Mol. Biol . (1981) 147:195-197), que se pueden obtener mediante programas disponibles (otros métodos de alineamiento local que pueden ser adecuados para analizar la identidad incluyen programas que, aplican los algoritmos de alineamiento local heurístico tales como los programas de FastA y BLAST) . Otros métodos relacionados para evaluar la identidad se describen en, por ejemplo, Solicitud de patente internacional WO 2003/048185. El algoritmo Gotoh, que busca trata de mejorar. el algoritmo de Needleman-Wunsch, de modo alternativo se puede usar para alineamientos de secuencia global. Ver, por ejemplo, Gotoh, J. Mol. Biol. 162: 705-708 (1982).

Los compuestos que incluyen anticuerpos que inhiben un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 pueden aumentar la eliminación de las células T que pueden contribuir activamente a la inflamación, lo que hace a estos compuestos qué incluyen anticuerpos, adecuados para usar en escenarios crónicos y de inflamación aguda, así como para usar en combinación con un segundo agente terapéutico usado en los escenarios inflamatorios. En particular, el segundo agente terapéutico reduce la inflamación, por ejemplo, los agentes usados en los escenarios crónicos y agudos, tales como fármacos antirireumáticos modificadores de la enfermedad (DMARD, por sus siglas en inglés) , tales como anti-TNFa y MTX, en el caso de la artritis reumatoide y otras afecciones en que se usan tales fármacos. Debido a que los mecanismos que dirigen la inflamación — en particular inflamación aguda y crónica — a menudo se consideran redundantes, los anticuerpos de la invención serán particularmente útiles para usar en combinación con agentes que actúan sobre un mecanismo de inflamación diferente de la destrucción directa (por ejemplo, por medio de ADCC) de células T, pero tienen un objetivo biológico similar, tal como la reducción de la producción o acción de citoquinas pro- inflamatoria , notablemente la reducción o inhibición de TNFa .

Producción de anticuerpos Los anticuerpos monoclonales en particular se pueden preparar usando el método, de. hibridoma descrito primero por Kohler et al., Nature, 256:495 (1975), o por otros métodos bien conocidos, desarrollado posteriormente (Ver, por ejémplo, Goding, Monoclonal Antibodies: Principies and Practice, páginas 59-103 (Academic Press, 1986)). Los hibridomas y otras células de fusión se pueden formar por fusión química, fusión eléctrica o cualquier otra técnica adecuada, con cualquier tipo adecuado de mielomas, heteromielomas , células linfoblastoides , plasmacitomas o células inmortalizadas similares y cualquier tipo adecuado de células que expresan el anticuerpo.

Las células B inmortalizadas transformadas también se pueden usar para producir eficientemente anticuerpos. Las células B transformada se pueden producir por técnicas estándares, tales como transformación con un virus de Epstein Barr o un gen transformante. (Ver, por ejemplo, "Continuously Proliferating Human Cell Lines Synthesizing Antibody of etermined Specificity" , Zurawaki, V. R. et al, en Monoclonal Anticuerpos, ed. by Kennett R. H. et al, Plenum Press, N.Y. 1980, páginas 19-33.) . En consecuencia, las células y líneas celulares que expresan anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 estable y continua y/o inmortalizada son otro rasgo de la invención. Una etapa de un método para producir anticuerpos anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 pueden incluir, por ejemplo, una etapa de producir células B inmortalizadas productoras de un anticuerpo que se fusionan a compañeros apropiados . para producir el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 (s) o que se secuencian y tales secuencias se usan para producir un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 recombinante .

Las líneas celulares disponibles como huéspedes para la expresión de proteína recombinante son bien conocidos en la técnica e incluyen muchas líneas celulares inmortalizadas disponibles en la American Type Culture Collection (ATCC) . Estas incluyen, entre otras, células de ovario de hámster chino (CHO, por sus siglas en inglés), NSO, células SP2 , células HeLa, células de riñon de hámster bebé (BHK, por sus siglas en inglés) , células de riñon de mono (COS) , células de carcinoma hepatocelular humano (por ejemplo, Hep G2), células A549, y numerosas otras líneas celulares. Otras líneas celulares que se pueden usar son líneas celulares de insectos, tales como células Sf9. Cuando los ácidos nucleicos (o vectores que contienen ácido nucleico) que codifican los genes del anticuerpo se introducen en células huésped de mamífero, los anticuerpos se pueden producir por el cultivo de las células huésped durante un período de tiempo suficiente para permitir la expresión del anticuerpo- en las células huésped o, con más preferencia, la secreción del anticuerpo en el medio e cultivo en que se cultivan las células huésped. Los anticuerpos se pueden recuperar del medio de cultivo usando métodos de purificación de proteína estándares.. Los anticuerpos también , se....pueden recuperar de los lisados de la célula huésped cuando se expresan directamente sin una señal secretora.

La purificación de anticuerpos de los cultivos celulares, lisados celulares, y animales transgénicos o materiales biológicos obtenidos de ellos (por ejemplo, del líquido ascítico de un animal transgénico para producir anticuerpos) se puede obtener por la aplicación de numerosas técnicas adecuadas conocidas en la materia que incluyen, por ejemplo, purificación en columna de inmunoafinidad; precipitación con sulfato; cromatoenfoque ; SDS-PAGE preparativa, y similares.

Los anticuerpos anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 también se pueden producir en células bacterianas y microorganismos unicelulares eucarióticas , tales como levadura. Las células bacterianas produjeron anticuerpos que carecen de glicosilación normal y por consiguiente pueden ser deficientes en términos de funciones de ADCC y otros aspectos de la respuesta inmunológica que se pueden asociar de otro modo con anticuerpos esencialmente idénticos producidos en células y/o animales de mamífero.

Se pueden usar métodos adecuados para purificación, detección y selección de anticuerpos, que incluyen los descritos en WO 2006/072625. El análisis y la selección de anticuerpos anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 se pueden lograr por la técnica o combinación de técnicas adecuadas. Por ejemplo, se puede usar una variedad de formatos de inmunoensayo para seleccionar anticuerpos que se unen selectivamente con una proteina, variante, o fragmento particular. Por ejemplo, Los inmunoensayos de ELISA de fase sólida se usan de rutina para seleccionar anticuerpos selectivamente inmunorreactivos con una proteína, variante de proteína, o fragmento de este. Ver Harlow y Lañe, supra. La afinidad de unión de un anticuerpo monoclonal, por ejemplo, se puede determinar por el análisis de Scatchard de Munson et al., Anal. Biochem. , 107:220 (1980) .

Los anticuerpos anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 normalmente se analizan la capacidad de modular la actividad de las células NK, tales como inhibir las señales mediadas por KIR2DL1, 2 y/o 3, promover la activación de células NK a través de las señales mediadas por el receptor activador de NK. Se han desarrollado numerosos ensayos de células NK que pueden ser útiles en tales contextos que incluyen, por ejemplo, métodos de análisis citométrico de flujo. Ver, por ejemplo, McGinnes, et al. (1984) J Immunol Methods 80: 70-85. Los métodos relevantes para cultivar las células NK, evaluar células NK, y similares son conocidas en la técnica. Ver, por ejemplo, Campbell y Colonna, Natural Killer Cell Protocols (Methods in Molecular Biology Series vol . 121) (2000).

En el contexto de los anticuerpos anti -KIR2DL1 , 2, y/o 3s,, se puede demostrar ,1a actividad neutralizante de..las., células NK por la capacidad de un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 para reconstituir la lisis de las células blanco por parte de células NK positivas a KIR2DL1, 2, y/o 3. La modulación de las células NK asociadas al anticuerpo anti-KIR2DL1, 2 y/o 3 (por ejemplo, inhibición' de KIR) también se puede evaluar por varios ensayos de citotoxicidad basados en células. La destrucción redirigida es un sistema experimental para determinar la capacidad un receptor de células NK para inducir citotoxicidad . Las células NK recubiertas con un anticuerpo específico para un receptor candidato se evalúan para determinar su capacidad de destruir células blanco que expresan un receptor de Fe al que se une el anticuerpo. En otra variante, la modulación de la actividad de las células NK asociadas con un anticuerpo anti-KIR se puede evaluar en un ensayo de liberación de citoquina. Otras actividades biológicas asociadas con varios anticuerpos anti-KIR2DLl, 2 y/o 3 también se pueden usar para evaluar anticuerpos anti-KIR2DL1, 2 y/o 3.

Los anticuerpos anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 normalmente se usan y proporcionan en una forma sustancialmente pura. Una molécula sustancialmente pura es una molécula que es la especie predominante en la composición donde se halla con respecto a la clase de moléculas a las que pertenece (por ejemplo, un anticuerpo sustancialmente puro es la especie de proteína predominante en -la composición donde se halla. Una especie sustancialmente pura constituye al menos aproximadamente 50% del tipo de molécula en la composición y normalmente constituirá al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 85%, al menos aproximadamente 90%, al menos aproximadamente 95%, o mayor porcentaje de la especie en la composición en peso. Comúnmente, una composición que comprende un anticuerpo anti-KIR2DL1, 2 y/o 3 exhibirá al menos aproximadamente 98%, 98%, o 99% de homogeneidad por el anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 en el contexto de todas las especies de péptidos presentes en la composición o al menos con respecto a las especies de péptido sustancialmente activas en el contexto del uso propuesto. Por ejemplo, un estabilizador del péptido/amortiguador tal como una albúmina se puede incluir intencionadamente en una formulación farmacéutica final, sin impedir la actividad de los anticuerpos anti-KIR2DLl , 2 y/o 3, y, por consiguiente, se puede excluir de tales cálculos de pureza. La presencia de impurezas que no interfieren en la actividad fundamental también pueden ser aceptables en el contexto de una composición sustancialmente pura. La pureza se puede medir por métodos apropiados para el compuesto dado (por ejemplo, métodos cromatográficos ; agarosa y/o electroforesis de gel de poliacrilamida ; análisis de HPLC; etc . ) .

Una molécula aislada se refiere- a una molécula que no está asociada con niveles significantes (por ejemplo, más de aproximadamente 1%, más de aproximadamente 2%, más de aproximadamente 3%, o más de aproximadamente 5%) de cualquier molécula biológica extraña y no deseables, tales como moléculas biológicas de anticuerpo no anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 contenido dentro de una célula, cultivo celular, medio químico o animal en que se produjo el anticuerpo anti-KIR2DL1, 2 y/o 3. Una molécula aislada también se refiere a cualquier molécula que ha pasado a través de una etapa de pureza debido a la intervención humana | (sea automática, manual, o ambos) durante una cantidad significativa de tiempo (por ejemplo, al menos aproximadamente 10 minutos, al menos aproximadamente 20 minutos, al menos aproximadamente una hora, o más tiempo) . En muchas de las diversas composiciones provistas por la invención, tal como en una composición que comprende uno o más portadores farmacéuticamente aceptables, un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 puede estar presente en cantidades relativamente pequeñas en términos de cantidades de especies moleculares totales en la composición (por ejemplo, en caso de una composición que comprende una gran cantidad de un portador, estabilizador y/o conservante farmacéuticamente aceptable) . En algunos casos adicionales los péptidos, tales como BSA, se pueden incluir en tal composición con un anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 previamente purificado. Sin embargo,, con la condición de que tales constituyentes adicionales de la composición sean aceptables para la aplicación deseada del anticuerpo anti-KIR2DL1, 2 y/o 3, tal composición aun se puede describir como que comprende un anticuerpo aislado anti-KIR2DLl , 2 y/o 3. En otras palabras, el término "aislado" no significa que excluye las mezclas artificiales o sintéticas con otros compuestos o materiales, tales como pueden formar parte de una preparación rmacéuticamente aceptable.

Portadores farmacéuticamente aceptables Un anticuerpo anti-KIR2DLl ,| 2 y/o 3 se puede combinar con uno o más portadores (diluyentes, excipientes, y similares) y/o adyuvantes apropiados para una o más vías de administración deseadas para proporcionar composiciones que sean farmacéuticamente aceptables.

Los anticuerpos anti-KIR2DLl , 2 y/o 3, por ejemplo, se pueden mezclar con lactosa, sacarosa, polvos (por ejemplo, polvo de almidón) , ésteres de celulosa de ácidos alcanoicos, ácido esteárico, talco, estearato de magnesio, óxido de magnesio, sales de sodio y calcio de ácidos fosfórico y sulfúrico, acacia, gelatina, alginato de sodio, polivinilpirrolidina, y/o alcohol polivinílico, y opcionalmente también formado en comprimidos o encapsulado para la administración convencional. De modo alternativo, un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 se puede disolver en ¦ solución salina, agua, polietilenglicol , propilenglicol , soluciones de carboximetil celulosa coloidal, etanol, aceite de .maíz, aceite de maní, aceite de semilla de algodón, aceite de sésamo, goma de tragacanto, y/o varios amortiguador. Otros portadores, adyuvantes y modos de administración son bien conocidos en las técnicas farmacéuticas. Un portador o diluyente puede incluir material de retardo de tiempo, tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo solo o con una cera u otros materiales funcionalmente similares .

Los portadores farmacéuticamente aceptables generalmente incluyen alguno y todos los solventes, medios de dispersión, cubiertas, agentes antibacterianos y antifúngicos , agentes isotónicos y de retardo de absorción, y similares que son fisiológicamente compatibles con un anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3. Los ejemplos de portadores farmacéuticamente aceptables incluyen agua, solución salina, solución salina tamponada con foafato, dextrosa, glicerol, etanol, y similares, así como las combinaciones' de alguno de ellos. En muchos casos, puede ser conveniente incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol, o cloruro de sodio en tal composición. Las sustancias farmacéuticamente aceptables tales como agentes humectantes o cantidades menores de sustancias auxiliares tales como agentes humectantes o agentes emulsionantes, conservantes o amortiguador, que de modo conveniente pueden aumentar la vida media o efectividad del anticuerpo anti-KIR, composición, o combinación relacionada. La adecuación para los portadores y otros componentes de las composiciones farmacéuticas se determina sobre la base de la carencia de impacto negativo significativo sobre las propiedades biológicas deseadas del anticuerpo.

Las composiciones de anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3, composiciones y combinaciones relacionadas de acuerdo con la invención pueden estar en una variedad de formas adecuadas. Tales formas incluyen, por ejemplo, formas de dosis liquida, semisólida y sólidas, tales como soluciones líquidas (por ejemplo, soluciones inyectables e infusibles) , dispersiones o suspensiones, emulsiones, microemulsiones , comprimidos, pastillas, polvos, liposomas, dendrímeros y otras nanopartículas (ver, por ejemplo, Baek et. al., ethods Enzymol. 2003;362:240-9; Nigavekar et al., Pharm Res. 2004 Mar ; 21 (3 ) :476-83 ) , micropartículas , y supositorios. Las formulaciones y sales también se describen en WO2006/072625.

Normalmente, las composiciones en la forma de soluciones inyectables o infusibles, tales como las composiciones similares a los usadas para la inmunización pasiva de los seres humanos con otros anticuerpos, se usan para la administración de anticuerpos anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 de la invención. Un modo típico para la administración de las composiciones - de ¦ anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 es por administración parenteral (por ejemplo, administración intravenosa, subcutánea, intraperitoneal , y/o intramuscular) . En un aspecto, un anticuerpo antÍ-KIR2DL1 , 2 y/o 3 se administra a un paciente humano por infusión o inyección intravenosa .

Una composición para uso farmacéutico también puede incluir varios diluyentes, rellenos, sales, amortiguador, detergentes (por ejemplo, un detergente no iónico, tal como Tween-80) , estabilizadores (por ejemplo, azúcares o laminoácidos libres de proteína) , conservantes, fijadores de tejido, solubilizadores , y/o otros materiales adecuados para la inclusión en una composición para uso farmacéutico. Los ejemplos de componentes adecuados también se describen en, por ejemplo, Berge et al., J. Pharm. Sci., 6661), 1-19 (1977); Wang y Hanson, J. Parenteral . Sci. Tech: 42, S4-S6 (1988) ;U.S. Patent Nos. 6,165,779 y 6,225,289. Tal composición farmacéutica también puede incluir conservantes, antioxidantes, u otros aditivos conocidos por los expertos en la técnica. Los portadores farmacéuticamente aceptables adicionales son conocidos en la técnica. Ver por ejemplo las referencias en WO2006/072625.

POLIPÉPTIDOS KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 La invención proporciona polipéptidos de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 y composiciones que contienen compuestos que inhiben tales polipéptidos para usar en el . tratamiento o prevención de trastornos autoinmunes e inflamatorios. Los ejemplos de polipéptidos de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 se exponen en las secuencias de aminoácidos de la SEQ ID NOs : 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24. Ver Tabla 1.

Los ácidos nucleicos que codifican polipéptidos KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 se pueden modificar usando técnicas biológicas moleculares estándares que producen variantes de polipéptidos que comprende al menos un KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 que incluyen pero sin limitación supresiones, adiciones y sustituciones en la secuencia de aminoácidos, que retiene la antigenicidad específica KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 (por ejemplo, los polipéptidos de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 se unen con un anticuerpo anti-KIR2DLl , KIR2DL2, y KIR2DL3) . En forma adicional, las variantes de polipéptidos que comprenden al menos un polipéptido de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 también puede retener la antigenicidad del polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 (por ejemplo, originar una respuesta inmunológica específica contra el polipéptido de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 y la variante del polipéptido de KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 , respectivamente, después de la inmunización en un sujeto) . Los polipéptidos de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 se pueden formular con un portador farmacéutico para fabricar una composición de antígeno útil como una "vacuna del cáncer", (por ejemplo, una composición farmacéutica que induce una respuesta inmunológica específica contra los KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 (por ejemplo, las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs: 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24), que produce anticuerpos anti -KIRD2L1 , 2, y/o 3 después de la inmunización en un sujeto) .

Derivados y análogos del polipéptido Se apreciará que los polipéptidos descritos en la presente pueden ser productos de degradación, péptidos sintéticos o péptidos recombinantes así como peptidomiméticos , péptidos sintéticos, peptoides, y semipeptoides (por ejemplo, análogos de péptidos, que pueden tener, por ejemplo, modificaciones que vuelven los péptidos más estables en el cuerpo o más capaces de penetrar en las células) . Las modificaciones de los polipéptidos KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 descritos en la presente incluyen, pero sin limitación modificación del extremo N-terminal, modificación del extremo C-terminal, modificación del enlace péptido (por ejemplo, CH2-NH, CH2-S, CH2-S=0, 0=C-NH, CH2-0, CH2-CH2, S=C-NH, CH=CH o CF=CH) , modificaciones en el esqueleto, y modificación del residuo. Los métodos para preparar compuestos peptidomiméticos son bien conocidos en la técnica. Martin, (2010) Quantitative Drug Design: A Critical Introduction [2nd Ed.] CRC Press.

Los- enlaces de péptidos (-CO-NH-) dentro del péptido se pueden sustituir, por ejemplo, por enlaces N-metilados (-N(CH3)-C0-), enlaces éster ( -C (R) H-C-0-O-C (R) -N- ) , enlaces de cetometileno (-CO-CH2-), enlaces ###-aza (-NH-N(R) -C0-) , donde R es cualquier alquilo, por ejemplo, metilo, enlaces carba (-CH2-NH-), enlaces hidroxietileno ( -CH (OH) -CH2- ) , enlaces tioamida (-CS-NH-) , enlaces dobles olefínicos (-CH=CH-), enlaces retro amida (-NH-CO-), derivados del péptido (-N(R) -CH2-CO-) , donde R es la cadena lateral "normal", presentada naturalmente sobre el átomo de carbono. Estas modificaciones pueden ocurrir en cualquiera de los enlaces a lo largo de la cadena de péptido e incluso varias (2-3) al mismo tiempo.

Los aminoácidos aromáticos naturales, Trp, Tyr y Phe, se pueden sustituir con ácido no natural sintético tal como fenilglicina , TIC, naftilelanina (Nol) , derivados metilados en el anillo de fenilalanina , derivados halogenados de fenilalanina u o-metil- tirosina . Además de lo anterior, los polipéptidos de la presente invención también pueden incluir uno o más aminoácidos modificados o uno o más monómeros de no aminoácido (por ejemplo, ácidos grasos, carbohidratos complejos) , por ejemplo, hidroxiprolina, fosfoserina y fosfotreonina; y otros aminoácidos inusuales que incluyen, pero sin limitación, ácido 2 -aminoadípico, hidroxilisina, isodesmosin, nor-valina, nor-leucina y ornitina. Además, el término "aminoácido", incluye los aminoácidos, D- y L.

Debido a que los polipéptidos de la presente invención con preferencia se utilizan en agentes terapéuticos que requieren que los péptidos estén en forma soluble, los polipéptidos de la presente invención pueden comprender uno o más aminoácidos polares no naturales o naturales, que incluyen pero sin limitación serina y treonina que son capaces de aumentar la solubilidad del péptido debido a su cadena lateral que contiene hidroxilo.

Los polipéptidos de la presente invención pueden estar en una forma lineal, si bien se apreciará que en algunos casos también se pueden utilizar.

Los polipéptidos KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 descritos en la presente se pueden purificar a partir de las células que se han alterado para expresarlo (por ejemplo, recombinante) . Las secuencias de ADN que codifican los polipéptidos de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 se pueden insértar en un vector de expresión y luego transformar (o transfectar) en una célula huésped apropiada y/o expresar en un animal transgénico. Los polipéptidos de KIR2DL1 , KIR2DL2, y KIR2DL3 (por ejemplo, las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs: 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24) así expresados luego se pueden aislar por métodos conocidos en la técnica. Ver, por ejemplo, Maniatis, et al. (2001) .Molecular Cloning: A Laboratory Manual [3rd Ed.] Cold Spring Harbor Laboratory Press.

Los polipéptidos de la presente invención se pueden sintetizar en forma bioquímica tal como por el uso de técnicas de fase sólida estándares. Estos métodos incluyen síntesis en fase sólida exclusiva, métodos de síntesis en fase sólida parcial, condensación de fragmentos, síntesis en solución clásica. Estos métodos con preferencia se usan cuando el péptido es relativamente corto (es decir, 10 kDa) y/o cuando no se puede producir por técnicas recombinantes (es decir, no codificado por una secuencia de ácidos nucleicos) y en consecuencia involucra diferentes reacciones químicas. Los procedimientos de síntesis en fase sólida son bien conocidos en la técnica y son descritos adicionalmente por Stewart (1984) Solid Phase Peptide Syntheses [2nd Ed.] Pierce Chemical Company and Benoiton (2005) Chemistry of Peptide Synthesis CRC Press. Los péptidos sintéticos se pueden purificar por cromatografía líquida de alto rendimiento preparativa y cuya composición se puede confirmar por secuenciación de aminoácidos. Ver Creighton (1992) [2nd Ed.] Proteins, Structures and Molecular Principies .H. Freeman y Company; Aguilar (2004) [Ed.] HPLC de Peptide and Proteins: Methods and Protocols Humana Press; Simpson (2002) Protein Sequencing Protocols [2nd Ed.] Humana Press.

En casos en que se desean grandes cantidades de los polipéptidos de la presente invención, los polipéptidos de la presente invención se pueden generar . usando técnicas recombinantes tales como las descriptas por Invitrogen (2002) Guide to Baculovirus Expression Vector Systems (BEVs) and Insect Culture Techniques" Instruction Manual; Hatti-Kaul and Mattiasson (2003) [Eds] Isolation and Purification of Proteins; Ahmed (2004) Principies and Reactions of Protein Extraction, Purification and Characterization CRC Press. Otras técnicas recombinantes tales como las descriptas, por ejemplo, por Bitter, et al. (1987) Methods in Enzymol . 153: 516-544, Studier, et al. (1990) Methods in Enzymol . 185: 60-89, Brisson, et al . (1984) Nature 310: 511-514, Takamatsu, et al. (1987) EMBO J. 6: 307-311, Coruzzi, et al . (1984) EMBO J. 3: 1671-1680 and Brogli, et al . (1984) Science 224: 838-843, Gurley, et al . (1986) Mol. Cell. Biol . 6: 559-565 and eissbach & eissbach (1988) Methods for Plant Molecular Biology, Academic Press, NY, Section VIII, pages 421-463.

Variantes de la secuencia de polipéptidos Para cualquier secuencia de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 de las secuencias de aminoácidos de la SEQ ID NOs : 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24, se puede lograr mayor caracterización u optimización por la adición o eliminación en forma sistemática de los residuos de aminoácidos para generar péptidos más largos o más cortos, y analizarlos y las secuencias generadas por el paso a una ventana de tamaño más largo o más corto hacia arriba o abajo del antígeno desde ese punto. El acoplamiento de. esta estrategia para generar nuevos blancos candidatos con análisis de la efectividad de las moléculas antigénicas basadas en estas secuencias en un ensayo de inmunogenicidad, como es conocido en la técnica o se describe en la presente, puede llevar a la manipulación adicional del antígeno. Más aún, tales secuencias optimizadas se pueden ajustar con, por ejemplo, la adición, supresiones, u otras mutaciones conocidas en la técnica y/o se describen en la presente para optimizar adicionalmente KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 (por ejemplo, aumento de| la estabilidad sérica o vida media circulante, aumento de estabilidad térmica, aumento de la administración, aumento de la inmunogenicidad, aumento de la solubilidad, direccionamiento a una localización o tipo celular particular in vivo) .

Los polipéptidos de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 descritos en la presente pueden comprender mutaciones por sustitución conservadoras, (es decir, la sustitución de uno o más aminoácidos con aminoácidos similares) . Por ejemplo, la sustitución conservadora se refiere a la sustitución de un aminoácido con otro dentro de la misma clase general, por ejemplo, un aminoácido ácido con otro aminoácido ácido, un aminoácido básico con otro aminoácido básico, o un aminoácido neutro con otro aminoácido neutro.

Las secuencias de polipéptidos de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 pueden tener- al menos aproximadamente 60, 65, 70, '75, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, o 100% de homología de secuencia a cualquiera o más de las secuencias de aminoácidos de la SEQ ID NOs: 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24. Con más preferencia, la invención contempla las secuencias de polipéptidos que tienen al menos aproximadamente 95% de homología de secuencia, aun con más preferencia al menos aproximadamente 98% de homología de secuencia, y aún con más preferencia al menos aproximadamente 99% de homología de secuencia con alguno o más de las secuencias de polipéptidos de KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 de las secuencias de aminoácidos de la SEQ ID NOs : 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24. Los métodos para determinar homología entre las secuencias de aminoácidos, así como las secuencias de ácidos nucleicos, son bien conocidas por los expertos en la técnica. Ver, por ejemplo, Nedelkov & Nelson (2006) New y Emerging Proteomic Techniques Humana Press.

En consecuencia, un polipéptido de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 puede tener al menos aproximadamente 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% de homología de secuencia con una secuencia de polipéptidos. Por ejemplo, un polipéptido de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 puede tener al menos aproximadamente -80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% de homología de secuencia con las secuencias de aminoácidos de la SEQ ID NOs: 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24.

El término homología, o identidad, se entiende que significa el número de aminoácidos concordantes (identidad) con otras proteínas, expresadas en por ciento. La identidad con preferencia se determina por la comparación de una secuencia dada con otras proteínas con la ayuda de programas I de computación. Si las secuencias que se comparan entre sí son de longitud diferente, la identidad se determina de modo que el número de aminoácidos que comparte la secuencia corta con la secuencia más larga determina el porcentaje de identidad. La identidad se puede determinar de rutina por medio de programas de computación que son públicamente disponibles tales como, por ejemplo, ClustalW. Thompson, et al. (1994) Nucleic Acids Research 22: 4673-4680. ClustalW está públicamente disponible en el European Molecular Biology Laboratory y se puede descargar de varias páginas de Internet, entre otras el IGBMC (Institut de Génétique et de Biologie Moléculaire et Cellulaire) y el EBI y todas las páginas de internet EBI en espejo (European Bioinformatics Institute) . Si le programa de computadora ClustalW Versión 1.8 se usa para determinar la identidad entre, por ejemplo, la proteína de referencia de la presente solicitud y otras; proteínas, se establecen los siguientes parámetros: KTUPLE=1, TOPDIAG=5, WIND0W=5, PAIRGAP=3 , GAPOPEM=10, GAPEXTEND=0.05 , GAPDIST=8, MAXDIV=40, MATRIX=GONNET , ENDGAPS (OFF) , NOPGAP, NOHGAP . Ver also European Bioinformatics Institute (EBI) toolbox available on-line y Smith (2002) Protein Sequencing Protocole [2nd Ed.] Humana Press.

Una posibilidad de hallar secuencias similares es llevar a cabo investigaciones de la base de datos de secuencias. En la presente, se pueden ingresar una o más secuencias en lo que se conoce como una incógnita. Esta secuencia incógnita luego se compara con las secuencias presentes en las bases de datos seleccionadas usando programas de computadora estadística. Tales incógnitas de la base de datos (búsqueda de blast) son conocidos por el profesional experto y se puede realizar con diferentes suministros. Si, por ejemplo, tal pregunta a la base de datos se realiza en el NCBI (National Center for Biotechnology Information) , se deberían usar escenarios estándares para la comparación respectiva de la incógnita. Para las comparaciones de secuencia de proteína (blastp) , esos ajustes son: Límite entrez = no activado; Filtro = conplej idasd baja activada; Valor esperado = 10; tamaño de palabra = 3; Matriz = BLOSUM62 ; Costos de brecha: Existencia = 11, Extensión = 1. El resultado de tal pregunta es, entre otros parámetros, el grado de identidad entre la secuencia incógnita y .las ·· .secuencias similares halladas en las bases de datos.

Los polipéptidos de KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 incluyen fragmentos funcionales de los polipéptidos. Un "fragmento funcional" de el polipéptido incluye un fragmento del gen o ADNc que codifica el KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3, tal fragmento es capaz de inducir una respuesta inmunológica (por ejemplo, respuesta inmunológica humoral o celular) . En consecuencia, por ejemplo, los fragmentos de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 de acuerdo con la invención que corresponden a los residuos de aminoácidos que contribuyen a la inmunogenicidad del antígeno y tales fragmentos pueden servir para funcionar como antígenos para inducir una respuesta inmunológica (por ejemplo, respuesta inmunológica humoral o celular) . Esté aspecto de la invención también incluye isoformas empalmadas en forma diferencial e inicios de transcripción de los polipéptidos de acuerdo con la invención. Los polipéptidos de acuerdo con la invención también pueden comprender fragmentos, derivados y variantes alélicas de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3. Los métodos y materiales para obtener fragmentos de polipéptidos de KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 son bien conocidos en la técnica. Ver, por ejemplo, Maniatis, et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual [3rd Ed.] Cold Spring Harbor Laboratory Press .

Las variantes de polipéptidos de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 pueden retener su especificidad antigénica para unirse a sus respectivos anticuerpos (por ejemplo, una variante de polipéptido de KIR2DL1 , KIR2DL2 , o KIR2DL3 se unirá con un anticuerpo anti-KIR2DLl , KIR2DL2 , o KIR2DL3). Las variantes completamente antigénicas pueden contener solo variaciones conservadoras o variaciones en residuos no críticos o en regiones no críticas. Las variantes antigénicas también pueden contener la sustitución de aminoácidos similares que no producen cambio o un cambio insignificante en la antigenicidad . De modo alternativo, tales sustituciones pueden afectar en forma positiva o negativa la antigenicidad en algún grado. Las variantes no antigénicas normalmente contienen una o más sustituciones conservadoras de aminoácido, supresiones, inserciones, inversiones, o truncamientos o una sustitución, inserción, inversión, o supresión en un residuo crítico o región crítica de un epitopo. Las técnicas de biología molecular y bioquímica para modificar polipéptidos de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 a la vez que conserva la antigenicidad específica de los polipéptidos para sus respectivos anticuerpos son bien conocidos en la técnica. Ver, por ejemplo, Ho, et al. (1989) Gene 77(1): 51-59; Landt, et al. (1990) Gene 96(1) : 125-128; Hopp & Woods (1991) Proc . Nati. Acad. Sci. USA 78(6) : 3824-3828; Kolaskar & Tongaonkar (1990) FEBS Letters 276(1-2): 172-174; y Welling, .. et al . (1985) FEBS Letters 188(2) : 215-218.

Las variantes de los polipéptidos de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 qu actúan como agonistas KIR2DL1, KIR2DL2, o KIR2DL3 (miméticos) o como antagonistas KIR2DL1, KIR2DL2, o KIR2DL3. Las variantes de los polipéptidos de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 se pueden generar por mutagénesis, por ejemplo, mutación o truncamiento de puntual diferenciado de un polipéptido de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3. Un agonista de los polipéptidos de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 pueden retener sustancialmente la misma o un subconjunto de las actividades biológicas de forma natural de un polipéptido de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3. Un antagonista de un polipéptido de KIR2DL1 , KIR2DL2, y KIR2DL3 puede inhibir una o más actividades de la forma natural del polipéptido de KIR2DL1 , KIR2DL2, y KIR2DL3 , por ejemplo, por modulación competitiva de la actividad mediada por KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 de un polipéptido de KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3. En consecuencia, se pueden inducir efectos biológicos específicos por el tratamiento con una variante de función limitada. Por ejemplo, un sujeto puede tratar con una variante que tiene un subconjunto de las actividades biológicas de la forma natural del polipéptido tiene menos efectos secundarios en un sujeto respecto del tratamiento con la forma natural del polipéptido de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3. . ··.·· Las variantes de un polipéptido de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 que actúan como agonistas de KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 (miméticos) o como antagonistas KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 se pueden identificar por el análisis de bibliotecas combinatorias de mutantes, por ejemplo, mutantes de truncamiento, de un polipéptido de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 para la actividad agonista o antagonista del polipéptido de KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3.

Peptidomiméticos Además de los polipéptidos de KIR2DL1,| KIR2DL2 , y KIR2DL3 que consisten solo en aminoácidos naturales, también se proporcionan peptidomiméticos de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3. Los análogos de péptidos se usan comúnmente en la industria farmacéutica como fármacos no peptídicos con propiedades análogas a los del péptido molde. Estos tipos de compuestos no peptídicos se denominan "miméticos de péptidos" o "peptidomiméticos" (Fauchere (1986) Adv. Drug Res. 15: 29; Advances in Aminoacids Mimetics and Peptidomimetics (Volumen 2) Andrew Abe11 (Ed. ) (1999) JAI Press, Inc. y Evans et al. (1987) J. Med. Chem 30: 1229) y se desarrollan usualmente con la ayuda de modelado molecular computado. Los péptidomiméticos que son estructuralmente similares a los péptidos terapéuticamente útiles se pueden usar para producir un .efecto terapéutico o profiláctico equivalente. En general, los peptidomiméticos son estructuralmente similares., a un polipéptido paradigmático (es decir, un polipéptido que tiene actividad biológica o farmacológica) , tal como KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 humana o ratón, pero tienen una o más ligaduras peptídicas opcionalmente reemplazadas por una unión seleccionada del grupo que consiste en: —CH2NH—, —CH2S—, —CH2— CH2-, -CH=CH- (cis y trans) , -C0CH2-, -CH(0H)CH2-, y -CH2SO-, pr métodos conocidos en la técnica y también se describen en las siguientes referencias: Spatola in Chemistry and Biochemistry of Amino Acids, Peptides, and Proteins einstein, B. , ed. , Marcel Dekker, New York, p. 267 (1983); Spatola, Vega Data (March 1983), Vol . 1, Issue 3, "Peptide Backbone Modifications" ; Morley (1980) Trends . Pharm. Sci . pp. 63-468; Hudson, et al . (1979) Int . J. Pept . Prot . Res. 14:177-185 (—CH2NH—, CH2CH2-) ; Spatola, et al . (1986) Life. Sci. 38:1243-1249 (-CH2-S) ; Hann, (1982) J. Chem. SoC Perkin. Trans. I 307-314 (-CH-CH—, cis y trans) ; Alraquist, et al . (1980) J. ed. Chem. 23:1392-1398 (-COCH2-) ; Jennings -White , et al. (1982) Tetrahedron Lett. 23:2533 (-COCH2-) ; (-CH(OH) CH2-) ; Holladay, efc al . (1983) Tetrahedron. Lett. 24:4401-4404 (-C (OH) CH2-) ; y Hruby (1982) Life Sci. 31:189-199 (—CH2—S—) . Una unión no peptídica particularmente preferida es —CH2NH—. Tales péptidomiméticos pueden tener ventajas significativas para las formas de modalidad del polipéptido, que incluyen, por ejemplo: producción más económica, mayor estabilidad química, mejores propiedades farmacológicas (vida media, absorción, potencia, eficacia) , alteración de la especificidad (por ejemplo, un amplio espectro de actividades biológicas) , reducción de antigenicidad, y otros. La etiquetación de peptidomiméticos usualmente involucra la unión covalente de una o más etiquetas, en forma directa o a través de un espaciador (por ejemplo, un grupo amida) , a la posición no interferente sobre el peptidomimético que son prelas por los datos de estructura -actividad cuantitativos y/o modelado molecular. Tales posiciones no interferentes generalmente son posiciones no forman contactos directos con las macromoléculas a las que se une el peptidomimético para producir el efecto terapéutico. La derivatización (por ejemplo, etiquetación) de los peptidomiméticos no debería interferir sustancialmente en la actividad biológica o farmacológica deseada del peptidomimético .

La sustitución sistemática de uno o más aminoácidos de una secuencia de aminoácidos de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 con un D-aminoácido del mismo tipo (por ejemplo, D-lisina en lugar de L-lisina) se puede usar para generar péptidos más estables. Además, los péptidos restringidos que comprenden una secuencia de aminoácidos de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 una variación de secuencia sustancialmente idéntica se puede generar por métodos conocidos en la técnica (Rizo y Gierasch (1992) Annu. Rev. Biochem. 61:387) ; por ejemplo, por la adición de residuos de cisteína internos capaces de formar puentes disulfuro intramoleculares que ciclan el péptido. Las secuencias de aminoácidos de los polipéptidos de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 identificadas en la presente permitirán a los expertos en la técnica producir polipéptidos correspondientes a las secuencias de péptidos de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 y sus variantes de secuencia. Tales polipéptidos se pueden producir en células huésped procarióticas o eucarióticas por la expresión de polinucleótidos | que codifican una secuencia de péptidos de KIR2DL1 , KIR2DL2, y KIR2DL3 , con frecuencia como parte de un polipéptido más grande. De modo alternativo, tales péptidos se pueden sintetizar por métodos químicos. Los métodos para la expresión de los polipéptidos heterólogos en huéspedes recombinantes , síntesis química de polipéptidos, y traducción in vitro son bien conocidos en la técnica. Ciertas modificaciones en amino-terminal y/o carboxi-terminal modificaciones y/o extensiones del péptido en la secuencia central pueden proporcionar propiedades físicas, químicas, bioquímicas y farmacológicas ventajosas, tales como: aumento de estabilidad, aumento de potencia y/o eficacia, resistencia a las proteasas séricas, propiedades farmacocinéticas deseables, y otros. Los péptidos se pueden usar terapéuticamente para tratar la enfermedad, por ejemplo, por alteración de coestimulación, en un paciente. ¦ : .· Los aminoácidos que son esenciales para la función se pueden identificar por métodos bien conocidos en la técnica, tales como mutagénesis dirigida al sitio o mutagénesis por barrido de alanina. Cunningham, et al. (1989) Sci. 244: 1081-85. Este último procedimiento introduce mutaciones de alanina únicas en cada residuo de la molécula. Las moléculas mutantes resultantes luego se analizan para la actividad biológica tal como unión al epitopo o actividad ADCC in vitro. Los sitios que son críticas para la unión del ligando-receptor también se pueden determinar por análisis estructural tales como cristalografía, resonancia magnética nuclear, o etiquetación por fotoaf inidad. Smith, et al. (1992) J. Mol. Biol . 224: 899-904; de Vos, et al. (1992) Sci . 255: 306-12.

Por ejemplo, una clase de sustituciones es las sustituciones conservadoras de aminoácidos. Tales sustituciones son las que sustituyen un aminoácido dado de un polipéptido de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 con otro aminoácido de características similares. Normalmente se consideran como sustituciones conservadoras los reemplazos, uno por otro, entre los aminoácidos alifáticos Ala, Val, Leu, y lie; intercambio de los residuos hidroxilo Ser y Thr, intercambio de los residuos ácidos Asp y Glu, sustitución entre los residuos amida Asn y Gln, intercambio de los residuos básicos Lys y Arg, reemplazos entre los residuos aromáticos. -Phe,. Tyr . Las pautas con referencia a cuáles cambios de ácidos son probablemente silentes se halla en, por ejemplo, Bowie, et al. (1990) Sci. 247: 1306-10. En consecuencia, los expertos en la técnica aprecian que los inventores poseen las variantes de péptido sin la delineación de todas las variantes; específicas . En cuanto a las secuencias de aminoácidos, los expertos reconocerán que las sustituciones, supresiones o adiciones individuales en una secuencia de ácidos nucleicos, péptidos, polipéptidos , o proteínas que altera, añade o suprime un solo aminoácido o un pequeño porcentaje de aminoácidos de la secuencia codificada es una "variante modificada en forma conservadora" donde la alteración produce la sustitución de un aminoácido con un aminoácido químicamente similar. Las tablas de sustitución conservadora que proporcionan aminoácidos funcionalmente similares son bien conocidos en la técnica. Tales variantes modificadas en forma conservadora son adicionales y no excluyen las variantes polimórficas , homólogos interespecie , y alelos de la invención. Ver, por ejemplo, Creighton (1992) Proteins: Structures and Molecular Properties [2nd Ed.] W.H. Freeman.

Más aún, los polipéptidos a menudo contienen aminoácidos diferentes de los veinte aminoácidos "naturales". Además, muchos aminoácidos, que los aminoácidos terminales, se pueden modificar por procesos naturales, tales como procesamiento y otras modificaciones pos-traducción, o por técnicas, de modificación química bien conocidas en la técnica. Las modificaciones conocidas incluyen, pero sin limitación, acetilación, acilación, ADP-ribosilación, amidación, unión covalente de flavina, unión covalente de un residuo de hemo, unión covalente de un nucleótido o derivado de nucleótido, unión covalente de un lípido o derivado de lípido, unión covalente de fosfotidilinositol , entrecruzamiento, ciclización, formación de puente disulfuro, demetilación, formación de entrecruzamientos covalentes, formación de cistina, formación de piroglutamato, formilación, g-carboxilación, glicosilación, formación del ancla GPI , hidroxilación, yodación, metilación, miristoilación, oxidación, procesamiento proteolítico, fosforilación, prenilación, racemización, selenilación, sulfatación, adición de aminoácidos mediada por ARN de trasferencia a las proteínas tales como arginilación, y ubiquitinación . Ver Creighton (1992) Proteins : Structure and Molecular Properties [2nd Ed.] and Lundblad (1995) Techniques in Protein Modification [Ist Ed.] Muchas revisiones detalladas son disponibles en este sujeto. Ver, por ejemplo, Wold (1983) Posttranslational Covalent Modification of Proteins Acad. Press, NY; Seifter, et al. (1990) Meth. Enzymol. 182: 626-46; y Rattan, et al. (1992) Ann. NY Acad. Sci . 663: 48-62.

Fragmentos Una porción biológicamente activa de un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 incluye un fragmento de un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 que participa en una interacción entre una molécula de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 y una molécula no de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3, por ej . , un ligando natural de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3. Las porciones biológicamente activas de un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 incluyen péptidos que comprenden secuencias de aminoácidos lo suficientemente idénticas a o derivadas de la secuencia de aminoácidos del polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3, por ej . , la secuencia de aminoácidos que se muestra en la SEQ ID NO: 2, 4 o 5, que incluye menos aminoácidos que los polipéptidos KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 de longitud completa, y exhiben al menos una actividad de un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3. En forma típica, las porciones biológicamente activas comprenden un dominio o motivo con al menos una actividad del polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 , por ej . , modulación (supresión) de respuestas proliferativas de células CD4 T a anti-CD3, supresión de la respuesta proliferativa de células CD4 T cognadas de una manera específica a antígenos, efectos sobre la expresión de citoquinas específicas. Una porción biológicamente activa de un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 puede ser un polipéptido que tiene, por ejemplo, 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225 o más aminoácidos de longitud de las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs : 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, o 24. Las porciones biológicamente activas de un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 se pueden utilizar como blancos para desarrollar agentes que modulan una actividad mediada por KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 , por ej . , activación de células inmunes.

Una porción biológicamente activa de un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 puede comprender al menos una porción de un dominio extracelular . Una porción biológicamente activa de un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 puede contener al menos una porción de un dominio extracelular y uno o más de los siguientes dominios: un dominio de péptido de señal, un dominio de transmembrana, y un dominio citoplásmico . Además, se pueden preparar otras porciones biológicamente activas, en las que otras regiones del polipéptido se eliminan, por medio de técnicas recombinantes y evaluar por una o más de las actividades funcionales de un polipéptido IR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 nativo .

El polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 puede tener la secuencia de aminoácidos que se muestra en las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs : 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24. El polipéptido KIR2DL1 , KIR2DL2, y KIR2DL3 puede ser .sustancialmente idéntico a las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs : 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24, y retiene la actividad funcional del polipéptido de las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs: 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y'24, si bien difiere en la secuencia de aminoácidos debido a una variación alélica natural o mutagénesis, de acuerdo con lo descrito en la presente.

Proteínas de Fusión Las fusiones que comprenden los polipéptidos KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 también se encuentran dentro del alcance de la presente invención. Por ejemplo, la proteína de fusión puede estar unida a una proteína de fusión GST en la que las secuencias de polipéptido KIR2DL1 , KIR2DL2, y KIR2DL3 están fundidas a la C-terminal de las secuencias GST. Tales proteínas de fusión pueden facilitar la purificación de los polipéptidos KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 recombinantes . En forma alternativa, los polipéptidos KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 se pueden fundir con una proteína que une Folículos de células B, iniciando de ese modo tanto una respuesta inmune humoral como la activación de células T. Berney, et al. (1999) J. Exp. Med. 190: 851-60. En forma alternativa, por ejemplo, los polipéptidos KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 pueden estar genéticamente acoplados con un anticuerpo celular- anti -dendrítico para administrar el antígeno al sistema inmune y estimular una respuesta inmune celular. He, et al. (2004) Clin. Cáncer Res. 10: 1920-27. Una proteína quimérica o de fusión de la invención se puede producir por medio de técnicas estándares de ADN recombinante . Por ejemplo, los fragmentos de ADN que codifican las diferentes secuencias de polipéptidos están vinculados entre sí dentro del marco de acuerdo con técnicas convencionales, por ej . , por el empleo de terminales romas o escalonadas para vinculación, digestión de enzimas de restricción para proporcionar terminales apropiadas, relleno de extremos cohesivos de acuerdo con lo apropiado, tratamiento de fosfatasa alcalina para evitar una unión no deseada, y vinculación enzimática. El gen de fusión puede estar sintetizado por medio de técnicas convencionales que incluyen sintetizadores de ADN automatizados.

Las proteínas de fusión pueden incluir secuencias de translocación del C-terminal o N-terminal. Además, las proteínas de fusión pueden comprender elementos adicionales, por ej . , para la detección o purificación de proteínas, u otras aplicaciones. Los dominios de facilitación de detección y purificación incluyen, pero sin limitación, péptidos de quelación de metales tales como tractos de polihistidina, módulos de histidina-triptofán, u otros dominios que permiten la purificación en metales inmovilizados; proteína de unión a maltosa,- dominios de proteína A que permiten la purificación en inmunoglobulina inmovilizada; o el dominio utilizado en el sistema de purificación por extensión/afinidad FLAG (Sigma-Aldrich, S . Louis MO) .

Una proteína de fusión se puede preparar a partir de una proteína de la invención por medio de la fusión con una porción de una inmunoglobulina que comprende una región constante of una inmunoglobulina. Con mayor preferencia, la porción de la inmunoglobulina comprende una región constante de cadena pesada y en forma opcional y con mayor preferencia es una región constante de cadena pesada humana. La región constante de cadena pesada es con la mayor de- las preferencias una región constante de cadena pesada IgG, y en forma opcional y con la mayor de las preferencias es una cadena Fe, con la mayor de las preferencias es un fragmento IgG Fe que comprende dominios de CH2 y CH3. Si bien se puede utilizar cualquier subtipo de IgG en forma opcional, se prefiere el subtipo de IgGl . La cadena Fe en forma opcional puede ser una cadena Fe conocida o de "tipo salvaje", o en forma alternativa puede estar mutada. Véase, por ej . , La Publicación de Solicitud de Patente de los Estados Unidos Núm. 2006/0034852. El término "cadena Fe" también en forma opcional comprende cualquier tipo de fragmento Fe. Se han identificado varios de los residuos de aminoácidos específicos que están implicados en la actividad mediada por la región constante de anticuerpos en la subclase de IgG. Por lo tanto, la inclusión, sustitución o exclusión de estos aminoácidos específicos permite la inclusión o exclusión de la actividad mediada por la región constante de inmunoglobulinas específicas. Además, los cambios específicos pueden dar lugar a aglicosilación por ejemplo y/o otros cambios deseados para la cadena Fe. Al menos algunos cambios se pueden llevar a cabo en forma opcional para bloquear una función de Fe que se considera indeseable, tal como un efecto del sistema inmune no deseable. Véase McCafferty, et al. (2002) Antibody Engjineering : A Practical Approach (Eds.) Oxford University Press.

La inclusión de secuencias de vinculación escindibles tales como Factor Xa {Véase, por ej . , Ottavi, (1998) Biochimie 80: 289-93), motivo de reconocimiento de subtilisina proteasa (Véase, por ej., Polyak (1997) Protein Eng. 10: 615-19); enterocinasa (Invitrogen, San Diego, CA. ) , entre el dominio de translocación (para una expresión eficiente de la membrana plasmática) y el resto del polipéptido recientemente trasladado puede ser útil para facilitar la purificación. Por ejemplo, un constructo puede incluir un polipéptido que codifica una secuencia de ácido nucleico vinculada a seis residuos de histidina seguidos por una tioredoxina, un sitio de escisión de enterocinasa {Véase, por ej., Williams (1995) Biochemistry 34: 1787-97), y un dominio de translocación de la C-terminal.. Los residuos de histidina facilitan la detección y purificación mientras que el 'sitio de escisión de enterocinasa proporciona un medio para purificar las proteínas deseadas del resto de la proteína de fusión. La tecnología referente a vectores que codifican proteínas de fusión y la aplicación de proteínas de fusión se describen en la literatura científica y de patentes. Véase, por ej . , Kroll (1993) DNA Cell. Biol . 12: 441-53.

Una proteína de fusión puede ser una proteína de fusión GST-KIR2DLÍ, KIR2DL2 , y KIR2DL3 en la que secuencias KIR2DL1, KIR2DL2, y IR2DL3 están fundidas a la C-terminal de las secuencias GST. Tales proteínas de fusión pueden facilitar la purificación de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 recombinantes . En otra modalidad, la proteína de fusión es un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 que contiene una secuencia de señal heteróloga en su N-terminal. En ciertas células huésped (por ej . , células huésped de mamíferos), la expresión y/o secreción de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 se puede aumentar a través del uso de una secuencia de señal heteróloga. En una modalidad, la proteína de fusión es una proteína de fusión Ig-KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 en la que las secuencias KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 están fundidas a una porción de una molécula de Ig. La porción Ig de la proteína de fusión puede incluir una región constante de inmunoglobulina, por ej .., un dominio C gammal humano o. un dominio C gamma4 (por ej .;, las regiones de articulación, CH2 , y CH3 de IgC gammal humano o IgC gamma4 humano (Véanse, por ej., las Patentes de los Estados Unidos Núms . 5.116.964; 5.580.756; 5.844.095). Una proteína de fusión resultante puede tener la solubilidad, afinidad de unión, estabilidad y/o valencia de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 alteradas, (es decir, el número de sitios de unión por molécula) y puede aumentar la eficacia de la purificación de las proteínas.

Las proteínas de fusión Ig-KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 Ipreferidas en particular incluyen una porción de dominio extracelular de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 acoplada a una región constante de inmunoglobulina (por ej . , la región Fe). 5 La región constante de inmunoglob linuna puede contener modificaciones genéticas que reducen o eliminan la actividad efectora inherente en la estructura de la inmunoglobulina. Por ejemplo, el ADN que codifica una porción extracelular de un polipéptido KIR2DL1, IR2DL2 , y KIR2DL3 se puede unir al 0 ADN que codifica las regiones de articulación, CH2 , y CH3 de IgG gamma1 humano y/o IgG gamma4 modificado por mutagénesis dirigida al sitio, por ej . , de acuerdo con lo enseñado en WO 97/28267. Las proteínas de fusión KIR2DL1 , KIR2DL2, y KIR2DL3 de la invención se pueden incorporar en composiciones 5 farmacéuticas y administrarse a un sujeto in vivo. Las proteínas de fusión KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 se pueden • . . utilizar, para afectar la biodisponibilidad de un elemento de unión a KIR2DL1 , KIR2DL2, y KIR2DL3. El uso de las proteínas de fusión KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 puede ser 0 terapéuticamente útil para el tratamiento de afecciones o trastornos que se beneficiarían por la modulación de la respuesta inmune. Además, las proteínas de fusión KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 de la invención se pueden utilizar como inmunógenos para producir anticuerpos anti-KIR2DLl , KIR2DL2, 5 y KIR2DL3 en un sujeto, para purificar Las proteínas de unión a KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 , y para ensayos de observación para identificar moléculas que inhiben la interacción de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 con su elemento de unión natural.

Conjugados Los polipéptidos KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 pueden estar conjugados a otros restos. Tales conjugados a menudo se utilizan en la preparación de vacunas. El polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 puede estar conjugado a un carbohidrato (por ej . , mañosa, fucosa, glucosa, GlcNA, maltosa) , que se reconoce por el receptor mañosa presente en las células dendríticas y macrófagos. Las funciones de unión subsiguiente, agregación, y endocitosis y fagocitosis mediada por receptores proporcionan una inmunidad innata y adaptativa. Véanse Mahnke, et al. (2000) J. Cell Biol . 151: 673-84; Dong, et al. (1999) J. Immonol . 163: 5427-34. Otros restos adecuados para una conjugación para obtener una respuesta inmune incluyen pero sin limitación Hemocianina de Lapa Californiana (KLH, por sus siglas en inglés) , toxoide diftérico, toxoide colérico, exoproteína A de pseudomonas, y proteínas microbianas de la membrana externa (OMPS) .

Aislación de Polipéptidos La presente invención también proporciona métodos para la aislación de los polipéptidos KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 (por ej . , las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs : 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24) . Por ejemplo, se pueden obtener líneas celulares relevantes de un paciente que sufre de un trastorno autoinmune o inflamatorio. Después de la homogeneización y solubilización en un detergente, el antígeno se purifica cromatográficamente . Se puede utilizar cromatografía por exclusión de tamaño o afinidad para esto, y se puede utilizar en conjunción con anticuerpos anti-KIR2DLl , KIR2DL2 , y KIR2DL3. Por ejemplo, se puede inmovilizar un anticuerpo anti KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 sobre un soporte sólido (por ej . , acoplado a resinas, perlas magnéticas) para una adsorción de antígeno simple, lavado, y elución del soporte sólido. La proteína eluída luego se estudia en forma adicional por la presencia, caracterización, e identificación de antígenos. Véanse alker (2002) Protein Protocols Handbook [2da Ed.] Humana Press and Culture (2003) [Ed.] Protein Purification Protocols Humana Press .

El antígeno aislado de este modo se, puede utilizar .para preparar un farmacéutico por el uso del excipiente farmacéutico convencional y la sustancia portadora. Por ejemplo, la administración in-vivo del antígeno purificado en una solución fisiológica de NaCl .

En forma adicional, los polipéptidos KIR2DL1, IR2DL2, y KIR2DL3 de acuerdo con la invención pueden servir como un antígeno en la identificación de actividades como parte de una observación de alto rendimiento. Los métodos de observación de alto rendimiento son conocidos para aquellos con experiencia en la técnica. Wells (2002) High Throughout Bioanalytical Sample Preparation Elsevier Health Sciences.

POLINUCLEÓTIDOS QUE CODIFICAN KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 La presente invención también proporciona nucleótidos que codifican KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3. La presente invención también proporciona polinucleótidos que codifican polipéptidos KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 de las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs : 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24. La presente invención también proporciona fragmentos, secuencias hibridables con, y secuencias homologas a las secuencias de polinucleótidos descriptas en la presente que son al menos aproximadamente 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100%.

La invención también, proporciona polinucleótidos que comprenden al menos una secuencia de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 que codifica el uso de polipéptidos similares con codones diferentes, secuencias alteradas caracterizadas por mutaciones, tales como eliminación, inserción o sustitución de uno o más nucleótidos, ya sea naturales o inducidos por el hombre, en forma aleatoria o dirigida. La presente invención también abarca secuencias de ácido nucleico homologas (por ej . , que forman una parte de una secuencia de polinucleótido de la presente invención) , que incluye regiones de secuencia única para los polinucleótidos de la presente invención.

La presente invención también abarca ácidos nucleicos que codifican homólogos de polipéptidos KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 , tales homólogos pueden ser al menos aproximadamente 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100% homólogos idénticos a las secuencias de aminoácidos expuestas en la presente, de acuerdo con lo que se puede determinar por el uso del software BlastP del Centro Nacional de Información Biotecnológica (NCBI) por el uso de parámetros por defecto. La presente invención también abarca fragmentos de los polinucleótidos y polipéptidos descritos con anterioridad que tienen mutaciones, tales como eliminaciones, inserciones o sustituciones de uno o más ácidos nucleicos, ya sea naturales o inducidos por el hombre, en forma aleatoria o dirigida.

. ¦ · Las -moléculas . de ácido nucleico pueden codificar un KIR2DL1 , KIR2DL2, y KIR2DL3, o un fragmento funcional de la molécula de ácido nucleico. Un "fragmento funcional" de el ácido nucleico incluye un fragmento del gen o ADNc que codifica el KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 , donde el fragmento es capaz se expresado para producir un KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 capaz de obtener una respuesta inmune (por ej . , anticuerpos que unen en forma selectiva el KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3) . Por lo tanto, por ejemplo, los fragmentos del KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 de acuerdo con la invención que corresponden a residuos de aminoácidos que contribuyen a la inmunogenicidad del antígeno y los fragmentos pueden servir para funcionar como antígenos para obtener una respuesta inmune (por ej . , respuesta inmune humoral o celular) . Este aspecto de la invención también incluye isoformas empalmadas en forma diferencial e inicios transcripcionales los ácidos nucleicos de acuerdo con la invención. Las moléculas de ácido nucleico de acuerdo con la invención también comprenden fragmentos, derivados y variantes alélicas de las moléculas de ácido nucleico descriptas con anterioridad que codifican un KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 de acuerdo con la invención. Los métodos y materiales para fabricar ácidos nucleicos que codifican fragmentos de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 son muy conocidos en la técnica. Véase, por ej . , Maniatis, et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual [3ra Ed.] Cold Spring Harbor Laboratory Press. .... , Una molécula de ácido nucleico que abarca toda o una porción de un polinucleótido que codifica las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs : 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24, o un ortólogo o variante se puede aislar por la reacción en cadena de polimerasa (PCR) por el uso de cebadores de oligonucleótidos sintéticos diseñados con base en la secuencia de un polinucleótido que codifica las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs : 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24. | Una molécula de ácido nucleico de la invención se puede amplificar por el uso de ADNc, ARNm o, en forma alternativa, ADN genómico como u patrón/plantillas y cebadores de oligonucleótidos apropiados de acuerdo con técnicas de amplificación PCR estándar. La molécula de ácido nucleico amplificada de ese modo se puede clonar sobre un vector apropiado y caracterizarse por medio de un análisis de secuencia de ADN. Además, se pueden preparar los oligonucleótidos correspondientes a secuencias de nucleótido KIR2DL1 , KIR2DL2 , y IR2DL3 por medio de técnicas sintéticas estándares, por ej . , por el uso de un sintetizador de ADN automatizado .

En una modalidad, un KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 aislado que codifica una molécula de ácido nucleico de la invención comprende la secuencia de.. nucleótidos que se muestra en la SEQ ID NO: 1, o 3, o un fragmento de la misma. En otra modalidad la molécula de ácido nucleico de la invención comprende una molécula de ácido nucleico que es un complemento de la secuencia de nucleótidos que se muestra en la SEQ ID NO: 1, o 3, o una porción de cualquiera de estas secuencias de nucleótidos. Una molécula de ácido nucleico que es . complementaria al polinucleótido que codifica las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs : 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24, es aquella que es suficientemente complementaria a la secuencia de nucleótidos de un polinucleótido que codifica las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs : 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24 de manera tal que puede hibridar a la secuencia de nucleótidos de un polinucleótido que codifica las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs : 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24 respectivamente, formando de ese modo un duplicado estable.

Incluso en otra modalidad, una molécula de ácido nucleico aislada de la presente invención comprende una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 99,5% idéntica a la longitud completa de un polinucleótido que codifica las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs : 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, .14, 15, 16, 17,. 18, 19, ; 20, 21, 22, 23, y 24, o una porción de cualquiera de estas secuencias de nucleótidos.

Además, la molécula de ácido nucleico de la invención puede comprender únicamente una porción de un polinucleótido que codifica las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs : 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24, por ejemplo, un fragmento que se puede utilizar como una sonda o cebador o un fragmento que codifica un porción de un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 , por ej . , una (porción biológicamente activa de un polipéptido KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3. Las secuencias de nucleótidos determinadas a partir de la clonación del gen PD-L2 humano permiten la generación de sondas y cebadores diseñados para utilizar en la identificación y/o clonación de otros miembros de la familia de PD-L2, así como también KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 homólogos de otras especies . La sonda/cebador en forma típica comprende sustancialmente oligonucleótido purificado. El oligonucleótido en forma típica comprende una región de una secuencia de nucleótidos que se híbrida bajo condiciones rigurosas a al menos aproximadamente 12 o 15, con preferencia aproximadamente 20 o 25, con mayor preferencia aproximadamente 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, o 75 nucleótidos consecutivos de una secuencia sentido de la SEQ ID NO: 1, o. 3; de un secuencia anti-sentido de un polinucleótido que codifica las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOS: 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24, o una variante alélica natural o mutante de un polinucleótido que codifica las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs : 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 21, 22, 23, y 24.

En una modalidad, una molécula de ácido nucleico de la presente invención comprende una secuencia de nucleótidos que es mayor que aproximadamente 50-100, 100-150, 150-200, 200- 250, 250-300, 300-350, 350-400, 400-450, 450-500, 500-550, I 550-600, 600-650, 650-700, 700-750, 750-800, 800-850, 850- 900, 900-950 o más nucleótidos de longitud y se híbrida bajo condiciones de hibridación rigurosas a un polinucleótido que 5 codifica las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs : 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24, o el complemento del mismo. En una modalidad adicional, una molécula de ácido nucleico de la presente invención comprende una secuencia de nucleótidos que es mayor que 10 aproximadamente 880-900, 900-950, 950-1000, 1000-1050, 1050- 1100, 1100-1150 o más nucleótidos de longitud y se híbrida bajo condiciones de hibridación rigurosas a un polinucleótido que codifica las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs : 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 15 23, y 24, o el complemento del mismo. Aún en otra modalidad, una molécula de ácido nucleico de la presente invención ¦¦ - 'comprende una secuencia de nucleótidos que es mayor que 50- 100, 100-150, 150-200, 200-250, 250-300 o más nucleótidos de longitud y se híbrida bajo condiciones de hibridación 20 rigurosas a una molécula de ácido nucleico que comprende la región de codificación de un polinucleótido que codifica las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs : 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24, o un complemento del mismo. Aún en otra modalidad adicional, una 25 molécula de ácido nucleico de la presente invención comprende una secuencia de nucleótidos que es mayor que aproximadamente 50-100, 100-150, 150-200, 200-250, 250-300, 300-350, 350-400, 400-450, 450-500, 500-550, 550-600, 600-650, 650-700, 700-750, 750-800, 850-900, 900-950, o más nucleótidos de longitud, incluye al menos aproximadamente 15 nucleótidos (es decir, 15 nucleótidos contiguos) de la secuencia que comprende la región de codificación de un polinucleótido que codifica las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs : 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24, o un complemento del mismo, y se híbrida bajo condiciones rigurosas a una molécula de ácido nucleico que comprende un polinucleótido que codifica las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs: 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24, o un complemento del mismo.

Las sondas basadas en las secuencias de nucleótidos de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 se pueden utilizar para detectar, transcriptos o secuencias genómicas que codifican el mismo o polipéptidos homólogos. En las modalidades, la sonda además comprende un grupo de etiqueta adjunto al mismo, por ej . , el grupo de etiqueta puede ser un radioisótopo, un compuesto fluorescente, una enzima, o un co-factor de enzima. Tales sondas se pueden utilizar como parte de un kit de pruebas de diagnóstico para identificar células o tejido que expresa en forma incorrecta un polipéptido KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3, tal como por medio de la medición de un nivel de un ácido nucleico que codifica KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 en una muestra de células de un sujeto, por ej . , por medio de la detección de los niveles de ARNm de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 o por medio de la determinación de si un gen KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 genómico ha sido mutado o eliminado.

En adición a las secuencias de nucleótidos de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 de un polinucleótido que codifica las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs : 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24, aquellos con experiencia en la técnica podrán apreciar que los polimorfismos de la secuencia de ADN que conducen a cambios en las secuencias de aminoácidos de los polipéptidos KIR2DL1 , KIR2DL2, y KIR2DL3 pueden existir dentro de una población (por ej . , la población humana) . Tal polimorfismo genético en los genes KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 pueden existir entre individuos- dentro, de una población debido a la variación alélica natural. De acuerdo con lo utilizado en la presente, los términos "gen" y "gen recombinante" se refieren a moléculas de ácido nucleico que incluyen un marco de lectura abierto que codifica un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 , con preferencia un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 de un mamífero, y puede además incluir secuencias regulatorias de no codificación, e intrones .

Las variantes alélicas de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 humano o de ratón incluyen tanto polipéptidos KIR2DL1 , KIR2DL2, y KIR2DL3 funcional como no funcionales. Las variantes alélicas funcionales son variantes de secuencias de aminoácidos naturales del polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 humano o de ratón que mantienen la capacidad para unirse a elementos de unión a KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 naturales y/o modular la proliferación de células T CD4+ y CD8+ y la producción de citoquinas y activación de linfocitos. Las variantes alélicas funcionales en forma típica únicamente contendrán una sustitución conservadora de uno o más aminoácidos de las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs: 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24, o una sustitución, eliminación o inserción de residuos no críticos en regiones no críticas del polipéptido.

Las variantes alélicas no funcionales son variantes de secuencias de aminoácidos naturales del polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 humano o de ratón que no tienen la capacidad ya sea de para unirse a elementos de unión a KIR2DL1 , KIR2DL2, y KIR2DL3 naturales, y/o modular cualquiera de las actividades de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 descriptas en la presente. Las variantes alélicas no funcionales en forma típica contendrán una sustitución, eliminación, o inserción no conservadora o una truncamiento prematuro de las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs : 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, y 24, o una sustitución, inserción o eliminación en residuos críticos' o regiones críticas del polipéptido.

La presente invención además proporciona ortólogos no humanos, no de ratón del polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 humano o de ratón. Los ortólogos del polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 humano son polipéptidos que se encuentran aislados de organismos no humanos, no de ratón y poseen la misma actividad de unión y/o actividad de activación-modulación de linfocitos, y la capacidad de modular la proliferación de células T CD4+ y CD8+ y la producción de citoquinas al igual que los polipéptidos KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 humanos y murinos revelados en la presente.

Un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 mutante se puede ensayar por la capacidad de unirse a y/o modular la actividad de un .elemento de unión .a KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 natural, para modular la señalización intra- o intercelular, modular la activación de linfocitos T, y/o modular la respuesta inmune de un organismo.

Moléculas de ácido nucleico aisladas que codifican un KIR2DL1, KIR2DL2, y IR2DL3 o proteínas de fusión KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3. Se pueden preparar tales moléculas de ácido nucleico, que comprenden al menos una primera secuencia de nucleótidos que codifica un KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 o proteína, polipéptido o péptido KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 operativamente vinculado a una segunda secuencia de nucleótidos que codifica una proteína, polipéptido o péptido no KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3, por medio de técnicas estándares de ADN recombinante .

Además, la identidad se refiere en general a aquella' equivalencia funcional y/o estructural que existe entre las moléculas de ácido nucleico concernientes o las proteínas codificadas por ellas. Las moléculas de ácido nucleico, que son homologas a las moléculas descriptas con anterioridad y constituyen derivados de estas moléculas, por lo general son variaciones de estas moléculas, que constituyen modificaciones, que ejecutan la misma función biológica. Al mismo tiempo, las variaciones pueden suceder en forma natural, por ejemplo puede ser secuencias de otras especies, o pueden ser mutantes, donde estos mutantes pueden haber sucedido de manera natural o haber sido introducidos . · por mutagénesis objetiva. Las variaciones también pueden ser secuencias fabricadas sintéticamente. Las variantes alélicas pueden ser tanto variantes naturales como también variantes fabricadas sintéticamente o variantes producidas por técnicas de ADN recombinante. Las moléculas de ácido nucleico, que se desvían de las moléculas de ácido nucleico de acuerdo con la invención debido a la degeneración del código genético, constituyen una forma especial de derivados.

También está incluida dentro del alcance de la invención cualquier secuencia de nucleótidos que codifica la secuencia de ' aminoácidos de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 de la misma. Dado que el código genético está degenerado, se puede utilizar más de un codón para codificar un aminoácido particular. Por el uso del código genético, se pueden identificar uno o más nucleótidos diferentes, cada uno de los cuales sería capaz de codificar el aminoácido. La probabilidad de que un nucleótido particular constituya, de hecho, la secuencia de codificación del codón real se puede estimar al considerar las relaciones de apareamiento de base anormales y la frecuencia con la que un codón particular se utiliza actualmente (para codificar un aminoácido particular) en células eucariotas o procariotas que expresan un KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 del mismo.- Tales "reglas de uso de codones" fueron reveladas por Lathe, et al. (1985) J. Molec. Biol . 183: 1-12. . . ... .: .,... ,..,· . ·,.· .

Polinucleótidos KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 modificados Los nucleótidos de la presente invención pueden ser polinucleótidos modificados. Los nucleótidos no modificados a menudo no son tan óptimos en algunas aplicaciones, por ej . , son propensos a la degradación por nucleasas celulares. Las modificaciones químicas a uno o más de las subunidades de oligonucleót ido pueden conferirle propiedades mejoradas, por ej.,' pueden tornar los polinucleótidos más estables a nucleasas . Las modificaciones de oligonucleótidos típicas son muy conocidas en la técni¡ca y pueden incluir uno o más de: (i) alteración, por ej . , reemplazo, de uno o ambos de los oxígenos de fosfato no de vinculación y/o de uno o más de los oxígenos de fosfato de vinculación en la ligamiento de intra azúcar de fosfodiéster; (ii) alteración, por ej . , reemplazo, de un constituyente de azúcar ribosa, por ej . , de la modificación o reemplazo del 2' hidroxilo en el azúcar ribosa; (iii) reemplazo completo del resto de fosfato; (iv) modificación o reemplazo de una base natural con una base no natural; (v) reemplazo o modificación de la estructura de ribosa-fosfato, por ej., con ácido péptido-nucleico (APN) ; (vi) modificación del extremo 3' o el extremo 5' del oligonucleótido; y (vii) modificación del azúcar, por ej . , anillos de seis miembros. Los polinucleótidos utilizados de acuerdo con esta invención pueden estar sintetizados por cualquier número de medios muy conocidos en la técnica, o adquirirse a partir de una variedad de vendedores comerciales (LC Sciences, Houston, TX; Promega, Madison, WI ; Invitrogen, Carlsbad, CA) .

Antisentido En adición a las moléculas de ácido nucleico que codifican los polipéptidos KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 descritos con anterioridad, otro aspecto de la invención pertenece a moléculas de ácido nucleico aisladas que son antisentido a las mismas. Un ácido nucleico "antisentido" comprende una sfecuencia de nucleótidos que es complementaria a un ácido nucleico "sentido" qúe codifica un polipéptido, por ej . , complementaria a la cadena de codificación de una molécula de ADNc de cadena doble o complementaria a una secuencia de ARNm. Por consiguiente, un ácido nucleico antisentido puede unirse por medio de hidrógeno a un ácido nucleico sentido. El ácido nucleico antisentido puede ser complementario a una cadena de codificación de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 completa, o sólo a una porción de la misma. En una modalidad, una molécula de ácido nucleico antisentido es antisentido a una "región de codificación" de la cadena de codificación de una secuencia de nucleótidos que codifica un KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3. El término "región de codificación" se refiere a la región de la secuencia de nucleótidos que comprende codones que se trasladan a residuos de aminoácidos. En otra modalidad, la molécula .de ácido nucleico antisentido es antisentido a una "región de no codificación" de la cadena de codificación de una secuencia de nucleótidos que codifica PD-L. El término "región de no codificación" se refiere a las secuencias 5' y 3' que flanquean la región de codificación que no se trasladan a aminoácidos (también denominadas regiones no trasladadas 5' y3 ' ) . Dadas las secuencias de cadenas de codificación que codifican los KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 humanos o de ratón revelados en la presente, los ácidos nucleicos antisentido de la invención se pueden diseñar de acuerdo con las reglas de apareamiento de bases de Watson y Crick. La molécula de ácido nucleico antisentido puede ser complementaria a la región de codificación completa de ARNm de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 , pero con mayor preferencia es un oligonucleótido que es antisentido a sólo una porción de la región de codificación o no codificación de ARNm de KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3. Por ejemplo, el oligonucleótido antisentido puede ser complementario a la región que rodea el sitio de inicio de traducción de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 o ARNm de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3. Un oligonucleótido antisentido puede tener, por ejemplo, aproximadamente 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 o 50 nucleótidos de longitud. Una molécula de ácido nucleico antisentido de la invención se puede construir por el uso de reacciones de síntesis química y vinculación enzimática por el uso de.... procedimientos., conocidos en la técnica. Por ejemplo, una molécula de ácido nucleico antisentido (por ej . , un oligonucleótido antisentido) se pueden sintetizar químicamente por el uso de nucleótidos naturales o nucleótidos modificados en forma variada diseñados para' aumentar la estabilidad biológica de las moléculas o para aumentar la estabilidad física de los duplicados formados entre los ácidos nucleicos antisentido y sentido, por ej . , se pueden utilizar derivados de fosforotioato y nucleótidos sustituidos por acridina. Los ejemplos de nucleótidos modificados que se pueden utilizar para generar el ácido nucleico antisentido incluyen 5-fluorouracil , 5 -bromouracil , 5 -clorouracil , 5 - iodouracil , hipoxantina, xantina, 4 -acetilcitosina , 5- (carboxihidroxilmetil) uracil, 5-carboximetilaminometil-2-tiouridin-e, 5-carboximetilaminometiluracil , dihidrouracil , beta-D-galactosilqueosina, inosina, N6 - isopenteniladenina , 1-metilguanina, 1-metilinosina, 2 , 2 -dimetilguanina , 2-metiladenina, 2 -metilguanina, 3 -metilcitosina, 5-metilcitosina, ?ß-adenina, 7-metilguanina, 5-metilaminometiluracil , 5-metoxiaminometil-2-tiour- acil, beta-D-manosilqueosina, 5 ' -metoxicarboximetiluracil , 5-metoxiuracil , 2-metiltio-N6-isopenteniladenina, ácido uracil-5-oxiacético (v) , wibutoxosina, pseudouracil , queosina, 2-tiocitosina, 5-metil-2-tiouracil , 2-tiouracil, 4-tiouracil, 5 -metiluracil , metiléster del ácido uracil-5-oxiacético, ácido uracil-5-oxiacético (v) , 5 -metil -2 -tiouracil , 3-(3-amino-3 -N-2 -carboxipropil) uracil, (acp3) , y 2,6-diaminopurina . En forma alternativa, el ácido nucleico antisentido se puede producir biológicamente por el uso de un vector de expresión dentro del cual se ha subclonado un ácido nucleico en una orientación antisentido (es decir, el AR transcripto a partir del ácido nucleico insertado será de una orientación antisentido hacia un ácido nucleico blanco de interés, descrito en forma adicional en la siguiente subsección) .

Las moléculas de ácido nucleico antisentido de la invención en forma típica se administran a un sujeto o se generan in si tu de manera tal que se hibridan con o unen a ARNm celular y/o ADN genómico que codifica un polipéptido KIR2DL1 , KÍR2DL2, y KIR2DL3 para inhibir de ese modo la expresión del polipéptido, por ej . , por medio de la inhibición de la transcripción y/o traducción. La hibridación puede ser por complementariedad convencional de nucleótidos para formar un duplicado estable, o, por ejemplo, en el caso de una molécula de ácido nucleico antisentido que se une a duplicados de ADN, a través de interacciones específicas en el surco principal de la hélice doble. Un ejemplo de una vía de administración de moléculas de ácido nucleico antisentido de la invención incluye la inyección directa en un sitio del tejido. En forma alternativa, las moléculas de . ácido nucleico antisentido se pueden modificar para dirigir células seleccionadas y luego administrarlas en forma sistémica. Por ejemplo, para la administración sistémica, las moléculas antisentido se pueden modificar de manera tal que se unan específicamente a receptores o antígenos expresados en una superficie celular seleccionada, por e j . , por medio de la vinculación de las moléculas de ácido nucleico antisentido a péptidos o anticuerpos que se unen a receptores o antígenos de la superficie celular. Las moléculas de ácido nucleico antisentido también se pueden administrar a las células por el uso de los vectores descritos en la presente. Para lograr concentraciones intracelulares suficientes de las moléculas antisentido, se prefieren constructos de vectores en los que la molécula de ácido nucleico antisentido está puesta bajo el control de un promotor pol II o pol III fuerte.

La molécula de ácido nucleico antisentido de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 puede ser una molécula de ácido nucleico oc-anomérica . Una molécula de ácido nucleico oc-anomérica forma híbridos de cadena doble específicos con AR complementario en el que, por el contrario a las ß-unidades normales, las cadenas se desplazan en forma paralela entre sí. Gaultier, et al. (1987) Nucleic Acids Res. 15: 6625-6641. La molécula de ácido nucleico antisentido también puede comprender un 2'-0-metilribonucleótido (Inoue, et al. (1987) Nucleic Acids Res. 15: .6131-6148) o -un -análogo de ARN-ADN quimérico (Inoue, efc al. (1987) FEBS Lett . 215: 327-330).

Un ácido nucleico antisentido de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 puede ser una ribozima. Las ribozimas son moléculas de ARN catalíticas con actividad ribonucleasa que son capaces de escindir un ácido nucleico de cadena simple, tal como un ARNm, para el que tienen una región complementaria. Por lo tanto, las ribozimas (por ej . , ribozimas de cabeza de martillo (descriptas en Haseloff y Gerlach (1988) Nature 334:585-591)) se pueden utilizar para escindir en forma catalítica transcriptos de ARNm de KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 para inhibir de ese modo la traducción de ARNm de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3. Una ribozima que tiene especificidad para un ácido nucleico que codifica KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 se puede diseñar con base en la secuencia de nucleótidos de un ADNc de KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 revelado en la presente. Por ejemplo, se puede construir un derivado de un ARN Tetrahimena L-19 IVS en el que la secuencia de nucleótidos del sitio activo es complementaria a la secuencia de nucleótidos a escindirse en un ARNm que codifica KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3. Véanse, por ej., la Patente de los Estados Unidos Núm. 4.987.071 y la Patente de los Estados Unidos Núm. 5.116.742. En forma alternativa, el ARNm de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 se puede utilizar para seleccionar un ARN catalítico que tiene una actividad específica de ribonucleasa a partir de un grupo de moléculas de' ARN. Véase, por ej., Bartel y Szostak (1993) Science 261:1411-1418.

En forma alternativa, la expresión de genes de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 se puede inhibir por medio de la localización de las secuencias de nucleótidos complementarias a la región regulatoria del KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 (por ej . , el promotor y/o los mej oradores de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 ; para formar estructuras de triple hélice que previenen la transcripción del gen KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 en células blanco. Véanse generalmente, Helené (1991) Anticancer Drug Des. 6 ( 6 ) : 569-84 ; Helene, et al. (1992) Ann. N.Y. Acad. Sci. 660:27-36; y Maher, L. J. (1992) Bioessays 14 (12) : 807-15. Ácido Péptido Nucleico Aún en otra modalidad, las moléculas de ácido nucleico de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 de la presente invención se puede modificar en el resto base, el resto de azúcar o la columna de fosfato para mejorar, por ej . , la estabilidad, hibridación, o solubilidad de la molécula. Por ejemplo, la columna de fosfato deoxiribosa de las moléculas de ácido nucleico se puede modificar para generar ácidos péptido nucleicos. Véase Hyrup y Nielsen (1996) Bioorg. Med. Chem. 4(1) : 5-23. De acuerdo con lo utilizado en la presente, los términos "ácidos péptido nucleicos" o "APN" se refieren a miméticos del ácido nucleico, por ej . , miméticos de ADN, en los que la estructura de fosfato deoxiribosa es reemplazada por una columna de pseudopéptido y únicamente se retienen las cuatro nucleobases naturales. Se ha demostrado que la columna neutral de los APN permite la hibridación específica a ADN y AR bajo condiciones de baja potencia iónica. La síntesis de oligómeros APN se puede llevar a cabo por el uso de protocolos de síntesis de péptidos en fase sólida estándar de acuerdo con lo descrito en Hyrup y Nielsen (1996) supra y Perry-O' Keefe, et al . (1996) Proc Nati. Acad. Sci. USA 93:14670-675. | Los APN de moléculas de ácido nucleico de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 se pueden utilizar en aplicaciones terapéuticas y diagnósticas. Por ejemplo, los APN se pueden utilizar como agentes antisentido o antígeno para la modulación específica de secuencia de expresión de genes por medio de, por ejemplo, la inducción de la detención de la trascripción o traducción o por la inhibición de la replicación. Los APN de moléculas de ácido nucleico de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 también se pueden utilizar en el análisis de mutaciones de par de base única en un gen (por ej . , por medio de fijación de PCR dirigida por APN); como 'enzimas de restricción artificial' cuando se utilizan en combinación con otras enzimas (por ej., nucleasas SI (Hyrup y Nielsen (1996) supra) ) ; o como sondas o cebadores para secúencíación o hibridación de ADN (Hyrup y Nielsen (1996) supra; Perry-O' Keefe et al. (1996) supra).

; Los APN de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 se pueden modificar (por ej . , para potenciar su estabilidad o captación celular) , por medio de la adjunción de grupos lipofíilicos u otros ayudadores al APN, por medio de la formación de quimeras de APN-ADN, o por el uso de liposomas u otras técnicas de administración de fármacos conocidas en la técnica. Por ejemplo, se pueden generar quimeras de APN-ADN de moléculas de ácido nucleico de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 que pueden combinar las propiedades ventajosas del APN y el ADN. Tales quimeras permiten que las enzimas de reconocimiento de ADN (por ej . , ARNse H y ADN polimerasas) , interactúen con la porción de ADN mientras que la porción de APN proporciona una alta afinidad y especificidad de unión. Las quimeras de APN-ADN pueden estar vinculadas por el uso de vinculadores de longitudes apropiadas seleccionados en términos del apilamiento de bases, número de enlaces entre las nucleobases, y orientación (Hyrup y Nielsen (1996) supra) . La síntesis de las quimeras de APN-ADN se puede llevar a cabo de acuerdo con lo descrito en Hyrup y Nielsen (1996) supra y Finn P. J. et al. (1996) Nucleic Acids Res. 24 (17) : 3357-63. Por ejemplo, una cadena de ADN se puede sintetizar sobre un soporte sólido por el uso de química de acoplamiento de fosforamidita estándar y se pueden utilizar análogos nucleósidos modificados, .-. por ej .., . 5 ' - (4-metoxitritil ) amino-5' -deoxi -thymidina fosforamidita, como un puente entre el APN y el extremo 5' del ADN (Mag, M. et al . (1989) Nucleic Acids Res. 17:5973-88) . Los monómeros de APN se acoplan luego paso a paso para producir una molécula quimérica con un segmento de APN 5' y un segmento de ADN 3' (Finn P. J. et al. (1996) supra) . En forma alternativa, las moléculas quiméricas se pueden sintetizar con un segmento de ADN 5' y un segmento de APN 3' (Peterser, et al. (1975) Bioorganic Med. Chem. Lett . 5:1119-11124) .

Oligonucleótido | El oligonucleótido puede incluir otros grupos adjuntos tales como péptidos (por ej . , para dirigir los receptores de la célula huésped in vivo) , o agentes que facilitan el transporte a través de la membrana celular (Véanse, por ej . , Letsinger et al. (1989) Proc Nati. Acad. Sci. USA 86:6553-6556; Lemaitre et al. (1987) Proc Nati. Acad. Sci. USA 84:648-652; Publicación PCT Núm. WO 88/09810) o la barrera hematoencefálica (Véase, por ej . , Publicación PCT No. WO 89/10134) . En adición, los oligonucleótidos se pueden modificar con agentes de escisión activados por hibridación (Véase, por ej., Krol et al. (1988) Biotechniques 6:958-976) o agentes de intercalación (Véase, por ej., Zon (1988) Pharm. Res. 5:539-549). Con este fin, el oligonucleótido puede estar conjugado a otra molécula (por ej., un péptido, un agente reticulante activado por hibridación, un agente de transporte, o un agente de escisión activados por hibridación) .

Expresión La aislación y expresión del KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 dé la invención se puede llevar a cabo por medio de procedimientos de clonación bien establecidos por el uso de sondas o cebadores construidos en base a las secuencias de ácidos nucleicos de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 reveladas en la aplicación. Las secuencias KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 relacionadas también se pueden identificar a partir de bases de datos genómicas humanas o de otras especies por el uso de las secuencias reveladas en la presente y tecnologías de búsqueda basadas en computadoras conocidas, por ej . , una búsqueda de secuencias BLAST. Los pseudogens revelados en la presente se pueden utilizar para identificar alelos funcionales o genes relacionados.

Luego, se pueden utilizar vectores de expresión para infectar o transfectar células huésped para la expresión funcional de estas secuencias. Estos genes y vectores se pueden fabricar y expresar in vitro o in vivo. Aquellos con experiencia reconocerán que se pueden obtener los fenotipos deseados para alterar y controlar la expresión de ácido nucleico por medio de la modulación de la expresión o actividad de los genes y ácidos nucleicos (por ej . , promotores, potenciadores) ,; entre los. , vectores de la invención. Se pueden utilizar cualquiera de los métodos conocidos descritos para aumentar o disminuir la expresión o actividad.

En otra modalidad, el vector de expresión mamífero recombinante es capaz de dirigir la expresión del ácido nucleico con preferencia en un tipo de célula particular (por ej . , los elementos reguladores específicos de tejido se pueden utilizar para expresar el ácido nucleico) . Los elementos reguladores específicos de tejido son conocidos en la técnica. Los ejemplos no limitantes de adecuados promotores específicos de tejido incluyen el promotor de albúmina (específico del hígado; Pinkert et al. (1987) Genes Dev. 1:268-277), promotores específicos linfoides (Caíame y Eaton (1988) Adv. Immunol . 43:235-275), promotores particulares de receptores de células T ( inoto y Baltimore (1989) EMBO J. 8:729-733) e inmunoglobulinas (Banerji et al. (1983) Cell 33:729-740; Queen y Baltimore (1983) Cell 33:741-748), promotores específicos de neuronas (por ej . , el promotor neurofilamentoso; Byrne and Ruddle (1989) Proc Nati . Acad. Sei. USA 86:5473-5477), promotores específicos del páncreas (Edlund et al. (1985) Science 230:912-916), y promotores específicos de glándulas mamarias (por ej . , promotor del suero de la leche; la Patente de los Estados Unidos Núm. 4.873.316 y la Publicación de Solicitud Europea Núm. 264,-166) . También están abarcados promotores regulados por desarrollo, por ejemplo por medio de los promotores hox murinos (Kessel and Gruss (1990) Science 249:374-379) y el promotor de a-fetoproteína (Campes y Tilghman (1989) Genes Dev. 3 : 537-546) .

Las secuencias de polinucleótidos proporcionadas en la presente se pueden generar de acuerdo con cualquier método de síntesis de oligonucleótidos conocido en la técnica tal como síntesis enzimática o síntesis en fase sólida. El equipamiento y los reactivos para ejecutar la síntesis en fase sólida están comercialmente disponibles a partir de, por ejemplo, Applied Biosystems . También se puede emplear cualquier otro medio para tal síntesis, la síntesis efectiva de los polinucleótidos se encuentra dentro de las capacidades de aquellos con experiencia en la técnica. Véanse, por ej . , Maniatis, et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual [3ra Ed.] Cold Spring Harbor Laboratory Press; Swamy (2008) Laboratory Manual on Biotechnology Rastogi Publications ; Herdewijn (2005) [Ed Methods in Molecular Biolog: Oligonucleotide Synthesis: Methods and Applications Volume 288 Humana Press; y Rapley (2000) [Ed.] The Nucleic Acid Protocols Handbook Humana Press. Luego, se pueden obtener los fragmentos de ADN de cadena doble ya sea por medio de la síntesis de la cadena complementaria y el recocido de las cadenas entre sí bajo condiciones apropiadas, o por medio de la., adición de la cadena complementaria, .por el uso de polimerasa de ADN con una secuencia de cebadores apropiada.

Las técnicas para la manipulación de ácidos nucleicos, tales como, por ejemplo, para la generación de mutaciones en secuencias, subclonación, etiquetado de sondas, secuenciación, e hibridación están ampliamente descriptas en la literatura científica y de patentes. Véanse, por ej . , Sambrook, et al. (2001) (Eds.) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3ra Ed.) Cold Spring Harbor Laboratory; Ausubel, et al. (2011) Ed. , Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., New York; Tijssen (1993) [Ed.] Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology: Hybridization With Nucleic Acid Probes, Part I, Theory and Nucleic Acid Preparation, Elsevier, NY.

La hibridación y la potencia de la hibridación (por ej . , la potencia de la asociación entre polinucleótidos) se ve impactada por varios factores muy conocidos en la técnica, incluyendo el grado de complementariedad entre los polinucleótidos, y la rigurosidad de las condiciones implicadas, que se ve afectada por tales condiciones como la concentración de sales, la presencia de otros componentes (por ej., la presencia o ausencia de polietilen glicol), la molaridad de las cadenas hibridación y el contenido G+C de las cadenas de polinucleótidos, todo esto da lugar a una temperatura : . de. - ^µß??? .. característica (Tra) del híbrido formado. Las técnicas de hibridación de ácidos nucleicos se revelan en Sambrook, et al. (2001) (Eds.) Molecular Cloning: A Laboratory Manual [3ra Ed . ] Cold Spring Harbor Laboratory, y en Haymes, et al. (1985) en Nucleic Acid Hybridization, a Practical Approach (IRL Press, DC) . Las condiciones de lavado de hibridación pueden incluir la solución lavada de 0,2 x SSC/0,1% SDS y la incubación con rotación durante 10 minutos a temperatura ambiente, (lavado de baja rigurosidad), la solución lavada de precalentado (42 °C) 0,2 x SSC/0,1% SDS y la incubación con rotación durante 15 minutos a 42 °C (lavado de mediana rigurosidad) y la solución lavada de precalentado (68°C) 0,1 x SSC/0,1% SDS y la incubación con rotación durante 15 minutos a 68°C (lavado de alta rigurosidad) . Véase Ausubel, et al. (2011) [Ed. ] Current Protocols in Molecular Biology John Wiley & Sons, Inc.

Se pueden utilizar cebadores de oligonucleótidos para amplificar los ácidos nucleicos que codifican a KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3. Los ácidos nucleicos descritos en la presente también se pueden clonar o medir en forma cuantitativa por el uso de técnicas de amplificación. Los métodos de amplificación también son muy conocidos en la técnica, e incluyen, por ej . , reacción en cadena de la polimerasa (PCR) (Innis (1990) [Ed.] PCR Protocols, a Guide to ethods and Applications, Academic Press, NY. ; Innis (1995) [Ed.] PCR Strategies, Academic Press, Inc.,, NY...) ; ,1.a. reacción en cadena de la ligasa (LCR) (Wu (1989) Genomics 4: 560; Landegren (1988) Science 241: 1077; Barringer (1990) Gene 89: 117) ; la amplificación mediada por transcripción (Kwoh (1989) PNAS 86: 1173); la replicación de secuencia autosostenida (Guatelli (1990) PNAS 87: 1874); la amplificación mediada por replicasas Beta Q (Smith (1997) J . Clin. Microbiol . 35: 1477-91)); el ensayo de amplificación mediada por replicasas Beta Q automatizada (Burg (1996) Mol .

Cell. Probes 10: 257-71); y otras técnicas mediadas por polimerasas de ARN (por ej . , NASBA, Cangene, Mississauga, Ontario) . Véanse también Berger (1987) Methods Enzymol . 152:' 307-16; Sambrook, et al. (2001) (Eds.) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3ra Ed.) Cold Spring Harbor Laboratory; Ausubel, et al. (2011) [Ed.] Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., New York; Maniatis, et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual [3ra Ed.] Cold Spring Harbor Laboratory Press; las Patentes de los Estados Unidos Núms. 4.683.195 y 4.683.202; Sooknanan (1995) Biotechnology 13: 563-64.

Los paradigmas para diseñar pares de cebadores degenerados son muy conocidos en la técnica. Por ejemplo, el programa de computación de estrategia Consensus-Degenerate Hybrid Oligonucleotide Primer (CODEHOP) es fácilmente accesible y está directamente vinculado a partir del sitio de alineación de ... secuencia... múltiple ; BlockMaker para la predicción de cebadores híbridos comenzando con un grupo de secuencias de proteínas relacionadas, tales como las secuencias KIR2DL1 , KIR2DL2, y KIR2DL3 proporcionadas en la presente. Véanse, por ej., Rose (1998) Nucleic Acids Res. 26: 1628-35; Singh (1998) Biotechniques 24: 318-19.

Las variantes polimórficas , alelos, e interespecies homologas que son sustancialmente idénticas a los KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 revelados en la presente se pueden aislar por el uso de las sondas de ácido nucleico descriptas con anterioridad. En forma alternativa, las bibliotecas de expresión se pueden utilizar para clonar los KIR2DL1 , KIR2DL2, y KIR2DL3 y las variantes polimórficas , alelos, e interespecies homologas de los mismos, por medio de la detección de homólogos expresados inmunológicamente con antisuero o anticuerpos purificados hechos contra un KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 , que también reconocen y se unen selectivamente al homólogo de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3.

Los ácidos nucleicos que codifican KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 se pueden generar por medio de la amplificación (por ej . , PCR) de secuencias de ácido nucleico apropiadas por el uso de pares de cebadores (perfectos o degenerados) apropiados. El ácido nucleico amplificado puede ser el ADN genómico de cualquier célula o tejido o ARNm o ADNc derivado de células de expresión de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3. Los métodos para la expresión de secuencias heterológas en células huésped son muy conocidos en la técnica. Véase, por ej . , aniatis, et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual [3ra Ed.] Cold Spring Harbor Laboratory Press.

Proteínas de fusión que comprenden un KIR2DL1, KIR2DL2, y IR2DL3 Se pueden construir secuencias que codifican proteínas híbridas que comprenden ácidos nucleicos que codifican KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 fusionados a una secuencia de translocación. También se proporcionan KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 híbridos que comprenden los motivos y las regiones antigénicas. Estas secuencias de ácido nucleico pueden estar operativamente vinculadas a elementos de control transcripcionales o traducibles, por ej . , secuencias, promotores y potenciadores de iniciación de transcripción y traducción, terminadores de transcripción y traducción, secuencias de poliadenilación, y otras secuencias útiles para la transcripción de ADN en AR . En la construcción de cintas, vectores, y transgénicos de expresión recombinante , se puede emplear un fragmento promotor para dirigir la expresión del ácido nucleico deseado en todas las células o tejidos deseados .

Las proteínas de fusión pueden comprender secuencias de translocación de C-terminal o N-terminal . Además, las proteínas de fusión pueden comprender elementos adicionales, por ej., para detección, purificación .de proteínas , -u otras aplicaciones. Los dominios de facilitación de la detección y purificación incluyen, por ej., péptidos de quelación de metales tales como tractos de polihis idina, módulos de histidina-triptofán, u otros dominios que permiten la purificación sobre metales inmovilizados; proteína de unión a maltosa; dominios de proteína A que permiten la purificación sobre inmunoglobulina inmovilizada; o el dominio utilizado en el 1 sistema de purificación por extensión/afinidad FLAGS (Sigma-Aldrich) .

La inclusión de secuencias de vinculación escindibles tales como Factor Xa {Véase, por ej . , Ottavi, (1998) Biochimie 80: 289-93), motivo de reconocimiento de subtilisina proteasa (Véase, por ej . , Poliak (1997) Protein Eng . 10: 615-19) ; enterocinasa (Invitrogen, San Diego, CA. ) , entre el dominio de translocación (para una expresión eficiente de la membrana plasmática) y el resto del polipéptido recientemente trasladado puede ser útil para facilitar la purificación. Por ejemplo, un constructo puede incluir un polipéptido que codifica una secuencia de ácido nucleico vinculada a seis residuos de histidina seguidos por una tioredoxina, un sitio de escisión de enterocinasa (Véase, por ej., Williams (1995) Biochemistry 34: 1787-97), y un dominio de translocación de C-terminal . Los residuos de histidina facilitan la detección y purificación mientras que el sitio de escisión de enterocinasa proporciona un medio para purificar las proteínas deseadas del resto de la proteína de fusión. La tecnología referente a vectores que codifican proteínas de fusión y la aplicación de proteínas de fusión se describen ampliamente en la literatura científica y de patentes. Véase, por ej., Kroll (1993) DNA Cell . Biol . 12: 441-53.

Sistemas para la Expresión Recombinante de los polipéptidos KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 y los anticuerpos anti-KIR2DLl, KIR2DL2 , y KIR2DL3 Se pueden introducir vectores de expresión, ya sea como, vectores de expresión individuales o como bibliotecas de vectores de expresión, que comprenden la región de unión a ligandos que codifican secuencias en un genoma o en el citoplasma o un núcleo de una célula y se pueden expresar por medio de una variedad de técnicas convencionales, bien descriptas en la literatura científica y de patentes. Véanse, por ' ej . , Sambrook, et al. (2001) [Eds.] Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3ra Ed.) Cold Spring Harbor Laboratory; Ausubel, et al. (2011) [Ed.] Current Protocols in Molecular Biology John Wiley & Sons, Inc.

Los ácidos nucleicos se pueden expresar en cintas, vectores o virus de expresión que se expresan en forma estable o transitoria en células (por ej., sistemas de expresión episomal) . Se pueden incorporar etiquetadores de selección en las cintas y vectores de expresión para .conferir un fenotipo seleccionable en células y secuencias transformadas. Por ejemplo, los etiquetadores de selección pueden codificar el mantenimiento y la replicación episomal de manera tal que no se requiera la integración en el genoma huésped. Por ejemplo, el etiquetador puede codificar la resistencia antibiótica (por ej . , cloramfenicol , canamicina, G418, bleomicina, higromicina) o la resistencia herbicida (por ej., clorosulfurona o Basta) para permitir la selección de aquellas células transformadas con las secuencias de ADN | deseadas. Véanse, por ej . , Ausubel, et al. (2011) [Ed.] Current Protocols in Molecular Biology John iley & Sons, Inc.; y Walker & Papley (2009) Molecular Biology and Biotechnology [5ta Ed.] Royal Society of Chemistry. Dado que los genes de etiquetadores seleccionables que confieren resistencia a sustratos tales como neomicina o higromicina únicamente se pueden utilizar en cultivos de tejidos, los genes de quimioresistencia también se utilizan como etiquetadores seleccionables in vitro e in vivo.

Para permitir la expresión celular de los polinucleótidos de la presente invención, se puede utilizar un constructo de ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, que incluye al menos una región de codificación de una de las secuencias de ácido nucleico anteriores, y además incluye al menos un elemento regulatorio que actúa en cis. .Con preferencia, el ..promotor utilizado por el constructo de ácido nucleico de la presente invención es activo en la población celular específica transformada. Los ejemplos de promotores de específicos de tipo celular y/o de tejido son muy conocidos en la técnica. Véase Bernardi (2003) [Ed.] Gene Transfer and Expression in Mammalian Cells Volumen 38 Elsevier Science B.V. El constructo de ácido nucleico de la presente invención puede incluir además un potenciador, que puede ser adyacente o distante a la secuencia promotora y puede funcionar en la regulación por aumento de la transcripción a partir de ese entonces.

El constructo de ácido nucleico de la presente invención con preferencia además incluye un etiquetador seleccionable apropiado y/o un origen de replicación. Con preferencia, el constructo de ácido nucleico utilizado es un vector transbordador, que se puede propagar tanto en E. coli (donde el constructo comprende un etiquetador seleccionable apropiado y en origen de la replicación) y puede ser compatible para la propagación en células, o la integración en un gen y un tejido a elección. El constructo de acuerdo con la presente invención puede ser, por ejemplo, un plásmido, bácmido, u fagémido, un cósmido, un bacteriófago, un virus o un cromosoma artificial.

Los ejemplos de constructos adecuados incluyen, pero sin limitación, pcDNA3 , pcDNA3.1 (+/-), pGL3 , PzeoSV2 (+/-), - . : pDrsplay, pEF/mic/cito, pCMV/mic/cito cada uno de los cuales está comercialmente disponible de Invitrogen Co. (Carlsbad, CA) . Los ejemplos del vector retroviral y los sistemas de empaquetado son aquellos comercializados por Clontech (San Diego, CA.), que incluyen vectores Retro-X, pLNCX y pLXSN, que permiten la clonación en múltiples sitios de clonación y el trasgén se transcribe a partir del promotor de C V. Los derivados de vectores o-MuLV también están incluidos, tales como pBabe, donde el trasgén transcribirá del promotor 5' LTR.

Los vectores de expresión recombinantes de la invención comprenden un ácido nucleico de la invención en una forma adecuada para la expresión del ácido nucleico en una célula huésped, lo que significa que los vectores de expresión recombinantes incluyen una o más secuencias regulatorias , seleccionadas en base a las células huésped a utilizarse para la expresión, que están operativamente vinculadas a la secuencia de ácido nucleico a expresarse. Dentro de un vector de expresión recombinante , "operativamente vinculadas" pretende significar que la secuencia de nucleótidos de interés está vinculada a las secuencias regulatoria de manera tal que permite la expresión de la secuencia de nucleótidos (por ej . , en un sistema de transcripción/traducción in vitro o en una célula huésped cuando el vector se introduce en la célula huésped) .

El término. "secuencia regulatoria-'.'- pretende incluir promotores, potenciadores y otros elementos de control de expresión (por ej . , señales de poliadenilación) . Tales secuencias regulatorias se describen, por ejemplo, en Goeddel (1990) Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA. Las secuencias regulatorias incluyen aquellas que dirigen la expresión constitutiva de una secuencia de nucleótidos en muchos tipos de célula huésped y aquellos que dirigen la expresión de la secuencia de nucleótidos únicamente en ciertas células huésped (por ej . , secuencias regulatorias específicas de tejido) . Aquellos con experiencia en la técnica podrán apreciar que el diseño del vector de expresión puede depender en factores tales como la elección de la célula huésped a transformarse, el nivel de expresión de la proteína deseada. Los vectores de expresión de la invención se pueden introducir en células huésped para producir de ese modo proteínas o péptidos, que incluyen proteínas de fusión o péptidos, codificados por ácidos nucleicos de acuerdo con lo descrito en la presente.

Los vectores de expresión recombinantes de la invención se pueden diseñar para la producción de proteínas variantes en células procariotas o eucariotas . Por ejemplo, las proteínas de la invención se pueden expresar en células bacterianas tales como Escherichia coli, células de insectos (por ej . , por el uso de vectores de expresión de baculovirus)., -células de levadura, o células de mamíferos. Las células huésped adecuadas se discuten en forma adicional en Goeddel (1990) Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA. En forma alternativa, el vector de expresión recombinante se pueden transcribir y trasladar in vitro, por ejemplo por el uso de secuencias regulatorias promotoras T7 y T7 polimerasa.

La expresión de proteínas en procariotas muy a menudo se lleva a cabo en Escherichia coli con vectores que contienen promotores constitutivos o inducibles que dirigen la expresión de cualquier proteína de fusión o de no fusión. L¡os vectores de fusión agregan un número de aminoácidos a una proteína codificada en los mismos, a la terminal amino o C de la proteína recombinante. Tales vectores de fusión en forma típica cumplen tres propósitos: (i) aumentar la expresión de la proteína recombinante; (ii) aumentar la solubilidad de la proteína recombinante; y (iii) ayudar en la purificación de la proteína recombinante actuando como un ligando en la purificación por afinidad. A menudo, en los vectores de expresión de fusión, se introduce un sitio de escisión proteolítica en la unión entre el resto de fusión y la proteína recombinante para permitir la separación de la proteína recombinante del resto de fusión posterior a la purificación de la proteína de fusión. Tales enzimas, y sus secuencias de reconocimiento cognadas, incluyen Factor Xa, trombina, PreScission, TEV y enterocinasa . Los vectores de expresión de fusión típicos incluyen pGEX (Pharmacia Biotech Inc; Smith y Johnson (1988) Gene 67: 31-40), pMAL (New England Biolabs, Beverly, MA.) y pRIT5 (Pharmacia, Piscataway, N.J.) que fusionan glutation-S-transíerasa (GST) , proteína de unión a maltosa E, o proteína A, respectivamente, a la proteína recombinante blanco.

El vector de expresión mamífero recombinante es capaz de dirigir la expresión del ácido nucleico preferentemente en un tipo celular particular (por ej . , se utilizan elementos reguladores específicos de tejido para expresar el ácido nucleico) . Los elementos reguladores específicos de tejido son conocidos en la técnica. Para una producción eficiente de la proteína, se prefiere colocar las secuencias de nucleótidos que codifican la proteína de la invención bajo el control de secuencias de control de expresión optimizadas para la expresión en un huésped deseado. Por ejemplo, las secuencias pueden incluir secuencias regulatorias transcripcionales y/o traducibles optimizadas (por ej . , secuencias Kozak alteradas) .

Una estrategia para maximizar la expresión de proteína recombinante en E. coli es expresar la proteína en una bacteria huésped con una capacidad disminuida para escindir proteolíticamente la proteína recombinante. Véase, por ej . , Gottesman (1990) Gene Expression Technology: Methods in Enzymology. Academic Press, San Diego, CA. 185: 119-128. Otra estrategia es alterar la secuencia de ácido nucleico del ácido nucleico a insertarse en un vector de expresión de manera tal que los codones individuales para cada aminoácido sean aquellos utilizados preferentemente en E. coli. Véase, por ej., Wada, et al. (1992) Nucí. Acids Res. 20: 2111-2118. Tal alteración de las secuencias de ácido nucleico de la invención se pueden llevar a cabo por medio de técnicas estándares de síntesis de ADN . Otra estrategia para resolver el desvío de codones es por el uso del codón-BL21 más cadenas bacterianas (Invitrogen) o las cadena bacteriana Rosetta (Novagen) , estas cadenas contienen copias extras de genes de tARN de E.coli raros.

El vector de expresión que codifica la proteína de la invención puede ser un vector de expresión de levaduras. Los ejemplos de vectores de expresión en levaduras Saccharomyces cerevisiae incluyen pYepSecl (Baldari, et al. (1987) EMBO J . 6: 229-234), pMFa (Kurjan y Herskowitz (1982) Cell 30: 933-943), pJRY88 (Schultz, et al. (1987) Gene 54: 113-123), pYES2 (Invitrogen Corporation, San Diego, CA. ) , y picZ (Invitrogen Corp, San Diego, CA.) .

En forma alternativa, los polipéptidos de la presente invención se pueden producir en células de insectos por el uso de vectores de expresión de baculovirus. Los vectores de baculovirus disponibles para la expresión de proteínas en células de insectos cultivadas (por . ej . , células, SF9) incluyen la serie pAc (Smith, et al. (1983) Mol. Cell. Biol . 3: 2156-2165) y la serie pVL (Lucklow y Summers (1989) Virology 170: 31-39) . Aún en otra modalidad, un ácido nucleico de la invención se expresa en células de mamíferos por el uso de un vector de expresión de mamíferos. Los ejemplos de vectores de expresión de mamíferos incluyen pCDM8 (Seed (1987) Nature 329: 840) y pMT2PC (Kaufman, et al. (1987) EMBO J . 6: 187-195), pIRESpuro (Clontech) , pUB6 (Invitrogen) , pCEP4 (Invitrogen) pREP4 ( Invitrogen) , pcDNA3 (Invitrogen) . Cuando se utilizan en células de mamíferos, las funciones de control del vector de expresión a menudo son proporcionadas por elementos reguladores virales. Por ejemplo, los promotores utilizados comúnmente se derivan de polioma, adenovirus 2, citomegalovirus , Virus Sarcoma de Rous, y virus 40 de los simios. Para otros sistemas de expresión adecuados tanto para células procariotas como para células eucariotas Véase, por ej . , Sambrook, efc al. (2001) (Eds.) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3ra Ed.) Cold Spring Harbor Laboratory.

Una célula huésped puede ser cualquier célula procariota o eucariota. Por ejemplo, se pueden producir la proteína de la invención en células bacterianas tales como E. coli, células de insectos, levaduras, células de plantas o mamíferos (por ej . , células de ovario de hámster chino (CHO) , células COS,. células HEK293). Otras células, huésped adecuadas son conocidas para aquellos con experiencia en la técnica.

El vector de ADN se puede introducir en células procariotas o eucariotas por medio de técnicas convencionales de transformación o transíección . De acuerdo con lo utilizado en la presente, los términos "transformación" y "transíección" pretenden referirse a una variedad de técnicas reconocidas en la técnica para introducir ácido nucleico foráneo (por ej . , ADN) en una célula huésped, que incluyen coprecipitación con fosfato de calcio o cloruro de calcio, transfección mediada por DEAE-dextrano, lipofección, o electroporación . Los métodos adecuados para la transformación o transfección de células huésped se puede hallar en Sambrook, et al. (2001) [Eds . ] Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3ra Ed.) Cold Spring Harbor Laboratory y otros manuales de laboratorio.

Se puede utilizar cualquiera de los procedimientos muy conocidos para introducir secuencias de nucleótidos foráneos en las células huésped. Estos incluyen el uso de transfección por fosfato de calcio, polibreno, fusión protoplástica , electroporación, liposomas, microinyección, vectores de plasma, vectores virales y cualquiera de los métodos muy conocidos para introducir ADN genómico clonado, ADNc, ADN sintético u otro material genético foráneo en la célula huésped. Véanse, por ej . , Sambrook, et al. (2001) (Eds.) , Molecular Cloning:, A Laboratory Manual (3ra Ed.) Cold Spring, Harbor Laboratory y Walker & Papley (2009) Molecular Biology and Biotechnology [5ta Ed.] Royal Society of Chemistry. Únicamente es necesario que el procedimiento de ingeniería genética particular utilizado sea capaz de introducir en forma exitosa al menos una molécula de ácido nucleico en la célula huésped capaz de expresar el KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 , el fragmento, o la variante de interés.

Para la transfección estable de células de mamífero, se sabe que dependiendo del vector de expresión y la técnica de transfeccion únicamente una pequeña fracción de células puede integrar el ADN foráneo en su genoma. Con el fin de identificar y seleccionar estos integrantes, por lo general se introduce un gen que codifica un etiquetador seleccionable (por ej . , resistencia a antibióticos) en las células huésped junto con el gen de interés. Varios etiquetadores seleccionables incluyen aquellos que confieren resistencia a fármacos, tales como G418, higromicina, puromicina, blasticidina y metotrexato. Los ácidos nucleicos que codifican un etiquetador seleccionable se pueden introducir en una célula huésped en el mismo vector que el que codifica una proteína de la invención se pueden introducir en vector separado. Las células transíectadas en forma estable con el ácido nucleico introducido se pueden identificar por medio de una selección de fármacos (por ej . , las células que han incorporado el gen etiquetador seleccionable , sobrevivirán, . mientras que las otras células morirán) .

Se puede utilizar una célula huésped de la invención, tal como una célula huésped procariota o eucariota en cultivo, para producir (es decir, expresar) la proteína de la invención. Por consiguiente, la invención además proporciona métodos para producir proteínas de la invención por el uso de las células huésped de la invención. En una modalidad, el método comprende cultivar la célula huésped de la presente invención (en la cual se ha introducido un vector de expresión recombinante que codifica proteínas de la invención) en un medio adecuado de manera tal que se produce la proteína de la invención. En otra modalidad, el método además comprende aislar la proteína de la invención del medio o de la célula huésped.

Después de que se introduce el vector de ,expresión en las células, se cultivan bajo condiciones que favorecen la expresión del receptor, fragmento, o variante de interés, que luego se recupera del cultivo por el uso de técnicas estándar. Los ejemplos de tales técnicas son muy conocidos en la técnica. Véase, por ej . , WO 00/06593.

Por ejemplo, la producción de anticuerpos monoclonales anti-KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 descritos en la presente se puede llevar a cabo por el uso de un vector que permite la inserción tanto, de genes de cadena pesada como ligera, se pudiendo utilizarse la . transfección a células CHO para optimizar la producción. El vector plásmido pRc/CMV que se empleó fue diseñado con la pretensión de lograr la alta expresión de los anticuerpos monoclonales quiméricos. El vector tiene un sitio de clonación que aceptó los genes de cadena pesada y ligera, insertándolos dirección 3' desde el CMV humano. El vector permite que el anticuerpo se produzca a niveles mayores a 1000 mg/L en medios de biorreactores , de manera tal que se puede administrar dosis terapéuticas de 250-500 mg.

Los anticuerpos monoclonales que demuestran un HA A mínimo en las dosis de -200 mg a 400 mg administradas cada dos semanas por vía intravenosa podría ser efectivo para controlar cáncer metastásico. En la actualidad se ha elegido un vector más nuevo que permite una inserción similar de genes de cadena pesada y ligera, pero tiene un potencial para la producción en exceso de 1000mg/L de fluido de biorreactor. Ambos vectores plásmidos portan una unidad de expresión dhfr conducida por un promotor temprano SV40 deficiente de potenciación. El vector se puede insertar en células CHO-D-SFM (dihidrofolato reductasa (dhfr) -ovario de hámster chino deficiente) en un medio casi libre de suero suplementado con 1,0 g/ml de metotrexato (MTX) . Al final de la producción, las células se pueden adaptar a los medios libres de suero antes de la purificación final del anticuerpo.

ANTICUERPOS QUE UNEN KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 La presente invención también proporciona anticuerpos que unen en forma selectiva el KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 que incluyen pero sin limitación anticuerpos monoclonales y monoclonales humanizados. Los anticuerpos que unen en forma selectiva el KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 se pueden mezclar en composiciones con portadores farmacéuticos y agentes adicionales (por ej . , un agente anti-inflamatorio, un agente analgésico, o un fármaco antireumático modificador de la enfermedad (DMARD) ) .

Se pueden utilizar un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 aislado, o una porción o fragmento del mismo, como un inmunógeno para generar anticuerpos que unen KIR2DL1 , KIR2DL2, y KIR2DL3 por el uso de técnicas estándares para la preparación de anticuerpos policlonales y monoclonales . Se puede utilizar un polipéptido KIR2DL1 , KIR2DL2, y KIR2DL3 de longitud completa o, en forma alternativa, la invención proporciona fragmentos de péptido antigénicos de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 para su uso como inmunógenos . En una modalidad, un péptido antigénico de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 comprende al menos 8 residuos de aminoácidos de la secuencia de aminoácidos que se muestra en cualquiera de de la SEQ ID NO: 7-24 y abarca un epitopo de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 de manera tal que un anticuerpo creado contra el péptido forma un complejo inmune específico con el polipéptido , KIR2DL1 , KIR2DL2 ,. y KIR2DL3. Con preferencia, el péptido antigénico comprende al menos 10 residuos de aminoácidos, con mayor preferencia al menos 15 residuos de aminoácidos, incluso con mayor preferencia al menos 20 residuos de aminoácidos, y con la mayor de las preferencias al menos 30 residuos de aminoácidos. Los Epitopos preferidos abarcados por el péptido antigénico son regiones de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 que están ubicadas en el dominio extracelular del polipéptido, por ej . , regiones hidrofílicas , así como también regiones con alta antigenicidad.

Un inmunógeno KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 en forma típica se utiliza para preparar anticuerpos por medio de la inmunización de un sujeto adecuado (por ej., conejo, cabra, 5 ratón, u otro mamífero) con el inmunógeno. Una preparación inmunogénica apropiada puede contener, por ejemplo, un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 expresado en forma recombinante o un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 sintetizado químicamente. Por ejemplo, puede comprender el 0 dominio extracelular de un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 (por ej., la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 7-24) . La preparación puede incluir además un adyuvante, tal como un adyuvante de Freund completo o incompleto, o un agente inmunoestimulador similar. La inmunización de un 5 sujeto adecuado con una preparación inmunogénica KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 induce una respuesta policlonal del , .. · anticuerpo anti KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3.

Los anticuerpos pueden estar compuestos por dos cadenas de polipéptidos ligeras idénticas de un peso molecular de 0 aproximadamente 23.000 daltons ("cadena ligera"), y dos cadenas pesadas idénticas de peso molecular entre 53.000 y 70.000 ("cadena pesada"). Véase Edelman (1971) Ann. NY. Acad. Sci . 190: 5. Las cuatro cadenas están unidas por enlaces de disulfuro en una configuración en forma de "Y" donde las 5 cadenas ligeras encierran las cadenas pesadas comenzando por la boca de la configuración en forma de "Y" . La porción "ramificada" de la configuración en forma de "Y" se ¡designa la región Fab la porción de raíz de la configuración en forma de "Y" se designa la región Fe. La orientación de la secuencia de aminoácidos va desde el extremo de la N-terminal en la parte superior de la configuración en forma de "Y" hasta el extremo de la C-terminal en la parte inferior de cada cadena. El extremo de la N-terminal posee la región variable que tiene especificidad por el antígeno que lo provocó, y tiene aproximadamente 100 aminoácidos de longitud, aunque existen ligeras variaciones entre la cadena ligera y pesada y desde anticuerpo a anticuerpo.

La región variable está vinculada en cada cadena a una región constante que extiende la longitud restante de la cadena y que dentro de una clase particular de anticuerpo no varía con la especificidad del anticuerpo (es decir, el antígeno que lo provoca). Existen cinco clases .principales conocidas de regiones constantes que determinan la clase de la molécula de inmunoglobulina (por ej . , IgG, IgM, IgA, IgD, e IgE correspondientes a las regiones constante de cadenas pesadas ?, µ, a, d, y e) . La región constante o clase determina la función efectora subsecuente del anticuerpo, que incluye la activación de complemento (Kabat (1976) Structural Concepts in Immunology and Immunochemistry [2da Ed.] páginas 413-436; Holt, Rinehart , Winston) y otras respuestas celulares (Andrews, et al. (1980) Clinical Immunobiology 1- 18; Kohl, et al. (1983) Immunology 48: 187) mientras que la región variable determina el antígeno con el que reaccionará. Las cadenas ligeras se clasifican ya sea como ? (kappa) o ? (lambda) . Cada clase de cadena pesada se puede preparar ya sea con cadena ligera kappa o lambda. Las cadenas ligeras y pesadas están enlazadas en forma covalente entre sí, y las porciones de "cola" de las dos cadenas pesadas están enlazadas entre sí por medio ligamientos de disulfuro covalentes cuando las inmunoglobulinas se generan ya sea por hibridomas o por células B.

La unión específica a un anticuerpo bajo tales condiciones puede requerir un anticuerpo que se selecciona por su especificidad para una proteína particular. Por ejemplo, se pueden seleccionar anticuerpos policlonales creados para proteínas básicas seminales de especies " especificas tales como rata, ratón, o .humanos para obtener únicamente aquellos anticuerpos policlonales que son específicamente inmunoreactivos con proteínas básicas seminales y no con otras proteínas, excepto por variantes polimórficas y alelos de proteínas básicas seminales. Esta selección se puede lograr por medio de la sustracción de anticuerpos que reaccionan en forma cruzada con moléculas de proteínas básicas seminales de otras especies. Se puede utilizar una variedad de formatos de inmunoensayos para seleccionar anticuerpos específicamente inmunoreactivos con una proteína particular. Pbr ejemplo, los inmunoensayos ELISA de fase sólida se utilizan en forma rutinaria para seleccionar anticuerpos específicamente inmunoreactivos con una proteína. Véase, por ej . , Harlow & Lañe (1998) USING ANTIBODIES: A LABORATORY MANUAL Cold Spring Harbor Laboratory, para una descripción de formatos de inmunoensayos y condiciones que se pueden utilizar para determinar la inmunoreactividad específica. En forma típica una reacción específica o selectiva será de al menos dos veces la señal o ruido de fondo y más típicamente de más que aproximadamente 10 a 100 veces la señal o ruido de fondo.

En otra modalidad, el vector de expresión mamífero recombinante es capaz de dirigir la expresión del ácido nucleico con preferencia en un tipo de célula particular {por ej . , los elementos reguladores específicos de tejido se pueden ... utilizar para expresar . ·. el ácido nucleico) . Los elementos reguladores específicos de tejido son conocidos en la técnica. Los ejemplos no limitantes de adecuados promotores específicos de tejido incluyen el promotor de albúmina (específico del hígado Pinkert et al. (1987) Genes Dev. 1:268-277), promotores específicos linfoides (Caíame y Eaton (1988) Adv. Immunol . 43:235-275), promotores particulares de receptores de células T (Winoto y Baltimore (1989) EMBO J. 8:729-733) e inmunoglobulinas (Banerji et al. (1983) Cell 33:729-740; Queen y Baltimore (1983) Cell 33:741-748), promotoras específicos de neuronas (por ej . , el promotor neurofilamentoso; Byrne y Ruddle (1989) Proc Nati. Acad. Sci. USA 86:5473-5477), promotores específicos del páncreas (Edlund et al. (1985) 'Science 230:912-916), y promotores específicos de glándulas mamarias (por ej., promotor del suero de la leche; la Patente de los Estados Unidos Núm. 4.873.316 y la Publicación de Solicitud Europea Núm. 264.166). También están abarcados promotores regulados en desarrollo, por ejemplo por medio de los promotores hox murinos ( essel y Gruss (1990) Science 249:374-379) y el promotor de OC-fetoproteína (Campes y Tilghman (1989) Genes Dev. 3 : 537-546) .

Anticuerpo Policlonal Los anticuerpos policlonales son poblaciones heterogéneas de moléculas de anticuerpos derivadas del suero de ,'animales inmunizados con un antígeno. Los anticuerpos policlonales que unen en forma selectiva el KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 se pueden fabricar por medio de métodos muy conocidos en la técnica. Véase, por ej . , Howard & Kaser (2007) Making and using Antibodies: A Practical Handbook CRC Press .

Anticuerpo Monoclonal Un anticuerpo monoclonal contiene una población sustancialmente homogénea de anticuerpos específicos a antígenos, la población contiene sustancialmente sitios de unión a Epitopos similares. Los anticuerpos monoclonales se pueden obtener por medio de métodos conocidos para aquellos con experiencia en la técnica. Véanse, por ej . , Kohler y Milstein (1975) Nature 256: 495-497; la Patente de los Estados Unidos Núm. 4.376.110; Ausubel, et al. [Eds . ] (2011) CUR ENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, Greene Publishing Assoc. y Wiley Interscience , NY. ; y Harlow & Lañe (1998) USING A TIBODIES: A LABORATORY MANUAL Cold Spring Harbor Laboratory; Colligan, et al. (2005) [Eds.] Current Protocols in Immunology Greene Publishing Assoc. y Wiley Interscience, NY. Tales anticuerpos pueden ser de cualquier clase de inmunoglobulina que incluyen IgG, IgM, IgE, IgA, GILD y cualquier subclase de las mismas. Un hibridoma que produce un anticuerpo de la presente invención se puede cultivar in vi tro, in situ, o in vivo.

Anticuerpo Quimérico Los anticuerpos quiméricos son moléculas de las que se derivan porciones diferentes de diferentes especies animales, tales como aquellas que tienen la región variable derivada de un anticuerpo murino y una región constante de inmunoglobulinuna humana, que se utilizan principalmente para reducir la inmunogenicidad en la aplicación y para aumentar las levaduras en la producción, por ejemplo, donde los anticuerpos monoclonales murinos tienen rendimientos más altos de hibridomas pero una mayor inmunogenicidad en humanos, de manera tal que se utilizan anticuerpos quiméricos monoclonales murinos humanos. Los anticuerpos quiméricos y los métodos para su producción son conocidos en la técnica. Véanse Cabilly, et al. (1984) Proc . Nati. Acad. Sci. USA 81: 3273-3277; Morrison, et al. (1994) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855, Boulianne, et al. (1984) Mature 312 :- 643-646 ; Neuberger, et al. (1985) Nature 314: 268-270; Solicitud de Patente Europea 173494 (1986); WO 86/01533 (1986); Solicitud de Patente Europea 184187 (1986) ; Solicitud de Patente Europea 73494 (1986); Sahagan, et al. (1986) J . Immunol . 137: 1066-1074; Liu, et al. (1987) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 84: 3439-3443; Sun, et al. (1987) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 84: 214-213; Better, et al. (1988) Science 240: 1041-1043; y Harlow & Lañe (1998) USING ANTIBODIES : A LABORATORY MANUAL Cold Spring Harbor Laboratory; la Patente de los Estados Unidos Núm. 5.624.659. .

Anticuerpo Humanizado Los anticuerpos humanizados se manipulan para contener dominios de inmunoglobulina incluso más similares a los humanos, e incorporan únicamente las regiones de determinación de complementariedad del anticuerpo derivado de animales. Esto se puede lograr por medio de la examinación de la secuencia de los rizos híper-variables de las regiones variables del anticuerpo monoclonal, y por medio del ajuste de la estructura de las cadenas de anticuerpo humanas. Véase, por ej., la Patente de los Estados Unidos Núm. 6.187-287. Asimismo, otros métodos para producir anticuerpos humanizados en la actualidad son muy conocidos en la técnica. Véanse, por ej . , las Patentes de los Estados Unidos Núms . 5.225.539; 5.530.101; 5.585.089; 5.693.762; 6.054.297; 6.180.370; 6.407.213; 6.548.640; 6.632.927; y 6.639.055; Jones, et al. (1986) Nature 321: 522-525; Reichmann, et al. (1988) Nature 332': 323-327; Verhoeyen, et al. (1988) Science 239: 1534-36; y Zhiqiang An (2009) [Ed.] Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic John Wiley & Sons, Inc.

Fragmentos de Anticuerpos En adición a las inmunoglobulinas completas (o sus homólogos recombinantes) , se pueden sintetizar los fragmentos de inmunoglobulina que comprenden el sitio de unión a Epitopos (por ej . , Fab' , F(ab' )2/ u otros fragmentos). Los "fragmentos" o inmunoglobulinas mínimas se. ueden diseñar po el uso de técnicas de inmunoglobulina recombinante . Por ejemplo, las inmunoglobulinas "Fv" para su uso en la presente invención se pueden producir por medio de la síntesis de una región de cadena ligera variable fundida y una región de cadena pesada variable. Las combinaciones de anticuerpos también son de interés, por ej . , diacuerpos, que comprenden dos especificidades Fv distintas. Los fragmentos de unión a antígenos de inmunoglobulinas incluyen, pero sin limitación, SMIP ( inmunofarmacéuticos de moléculas pequeñas) , cuerpos carne1, nanocuerpos, e IgNA .

Anticuerpo Anti-idiotípico Un anticuerpo anti-idiotípico (anti-Id) es un anticuerpo que reconoce determinantes únicos generalmente asociados con el sitio de unión a antígeno de un anticuerpo. Un anticuerpo Id se puede preparar por medio de la inmunización de un animal de la misma especie y tipo genético (por ej . , cepa de ratón) como la fuente del anticuerpo con el anticuerpo para el cual se prepara un anti-Id. El animal inmunizado reconocerá y responderá a los determinantes idiotípicos del anticuerpo inmunizador por medio de la producción de un anticuerpo para estos determinantes idiotípicos (el antianticuerpo Id) . Véase por ej . , la Patente de los Estados Unidos Núm. 4.699.880. El anti-anticuerpo Id también se puede utilizar como un "inmunógeno" para inducir una respuesta inmune aún en otro animal, lo que produce un denominado anti-anti -anticuerpo Id. El anti-anti-Id puede ser epitópicamente idéntico al anticuerpo original que indujo el anti-Id. Por lo tanto, por el uso de anticuerpos en los determinantes idiotípicos de un anticuerpo es posible identificar otros clones que expresan anticuerpos de idéntica especificidad.

Anticuerpos Manipulados y Modificados Un anticuerpo de la invención además se puede preparar por el uso de un anticuerpo que tienen una o más de las secuencias VH y/o VL derivadas de un material de inicio de anticuerpo para manipular un anticuerpo modificado, el anticuerpo modificado puede tener propiedades alteradas del anticuerpo de inicio. Un anticuerpo se puede manipular por medio de la modificación de uno o más residuos con una o ambas regiones variables (es decir, VH y/o VL) , por ejemplo en una o más regiones CDR y/o en una o más regiones de estructura. En forma adicional o en forma alternativa, un anticuerpo se puede manipular por medio de la modificación de residuos en las regiones constantes, por ejemplo para alterar las funciones efectoras del anticuerpo.

Un tipo de manipulación de región variable que se puede llevar a cabo es el injerto CDR. Los anticuerpos interactúan con antígenos blanco predominantemente a través de residuos de aminoácidos que están ubicados en las seis regiones de determinación de complementariedad de cadena pesada y ligera (CDR) . Por esta razón, las secuencias de aminoácidos sobre las CDR son más diversas entre anticuerpos individuales que las secuencias fuera de las CDR. Dado que las secuencias de CDR son responsable de la mayor parte de las interacciones anticuerpo-antígeno, es posible expresar los anticuerpos recombinantes que imitan las propiedades de los anticuerpos naturales específicos por medio de la construcción de vectores de expresión que incluyen secuencias de CDR a partir de los anticuerpos naturales específicos injertados en secuencias de estructura de un anticuerpo diferente con propiedades diferentes. Véanse, por ej . , Riechmann, | et al. (1998) Nature 332: 323-327; Jones, et al. (1986) Nature 321: 522-525; Queen, et al. (1989) Proc . Nati. Acad. U.S. A. 86: 10029-10033; las Patentes de los Estados Unidos Núms . 5.225.539; 5.530.101; 5.585.089; 5.693.762; y 6.180.370.

Se pueden obtener secuencias de estructura adecuadas a partir de bases de datos de ADN públicas o referencias publicadas que incluyen secuencias de genes de anticuerpos de la línea germinal. Por ejemplo, las secuencias de ADN de la línea germinal para genes de región variable de cadena pesada y ligera humanas se puede hallar en la base de datos de secuencias de la línea germinal humana "VBase" (disponible en Internet), así como también en Kabat, E. A., efc al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest [5ta Ed.]U.S. Department of Health and Human Services, Publicación NIH Núm. 91-3242; Tomlinson, et al. (1992) "The Repertoire . of Human Germline VH Sequences Reveáis about Fifty Groups of VH Segments ith Different Hypervariable Loops" J. Mol. Biol . 227: 776-798; y Cox, et al. (1994) Eur . J Immunol . 24: 827-836.

Otro tipo de modificación de región variable es mutar residuos de aminoácidos en las regiones VH y/o VL CDR 1, CDR2 y/o CDR3 para mejorar de ese modo una o más propiedades de unión (por ej . , afinidad) del anticuerpo de interés. Se puede llevar a cabo mutagénesis dirigida al sitio o mutagénesis mediada por PCR para introducir las mutaciones y el efecto en la unión del anticuerpo, o se puede evaluar otra propiedad funcional de interés, en ensayos in vitro o in vivo apropiados. Con preferencia, se pueden introducir modificaciones conservadoras (de acuerdo con lo discutido en la presente) . Las mutaciones pueden ser sustituciones, adiciones o eliminaciones de aminoácidos, pero con preferencia son sustituciones. Además, en forma típica no se alteran más de uno, dos, tres, cuatro o cinco residuos en una región de CDR.

Los anticuerpos manipulados de la invención incluyen aquellos en los que se han hecho modificaciones a residuos de estructura dentro de VH y/o VL, por ej . , para mejorar las propiedades del anticuerpo. En forma típica, tales modificaciones de estructura se realizan para disminuir la inmunogenicidad del anticuerpo. Por ejemplo, un enfoque es "retromutar" uno o más residuos de estructura en la secuencia de la línea germinal correspondiente. En forma más específica, un anticuerpo que se ha sometido a una mutación somática puede contener residuos de estructura que difieren de la secuencia de la línea germinal de la cual se deriva el anticuerpo. Tales residuos se pueden identificar por medio de la comparación de las secuencias de estructura del anticuerpo con las secuencias de la línea germinal de la cual se deriva el anticuerpo.

En forma adicional o alternativa a las modificaciones realizadas dentro de las regiones de estructura o CDR, los anticuerpos de la invención se pueden manipular para incluir modificaciones dentro de la región Fe, en forma típica para alterar una o más propiedades funcionales del anticuerpo, tales como la vida media del suero, la fijación de complementos, la unión de receptores Fe, y/o la citotoxicidad celular dependiente de antígenos. Además, un anticuerpo de la invención se puede modificar químicamente (por ej . , se pueden adjuntar uno o más restos químicos al anticuerpo) o se puede modificar para alterar su glicosilación, nuevamente para alterar una o más propiedades funcionales del anticuerpo. Tales modalidades se describen en forma adicional a continuación. La numeración de los residuos en la región Fe es aquella del índice EU de Kaba .

La región de articulación del CHl se puede modificar de.-. · manera tal que se altere el número de residuos de cisteína en la región de articulación, por ej . , que aumente o disminuya. Véase la Patente de los Estados Unidos Núm. 5.677.425. El número de residuos de cisteína en la región de articulación de CHl se puede alterar para facilitar, por ejemplo, el montaje de las cadenas ligeras y pesadas o para aumentar o disminuir la estabilidad del anticuerpo.

La región de articulación Fe de un anticuerpo puede estar mutada para disminuir la vida media biológica del anticuerpo. En forma |más específica, se pueden introducir una o más mutaciones de aminoácidos en la región de interfaz de dominio CH2-CH3 del fragmento de articulación Fe de manera tal que el anticuerpo tenga una unión de la proteína A STAPH (SpA) dañada con relación a la unión SpA de dominio de articulación Fe nativa. Véase, por ej . , la Patente de los Estados Unidos Núm. 6.165.745.

El anticuerpo se puede modificar para aumentar su vida media biológica. Sen posibles varios enfoques. Por ejemplo, se pueden introducir una o más de las siguientes mutaciones: T252L, T254S, T256F. Véase la Patente de los Estados Unidos Núm. 6.277.375. En forma alternativa, para aumentar la vida media biológica, el anticuerpo se puede alterar dentro de la región CHl o CL para contener un epitopo de unión al receptor recuperado tomado de dos rizos de un dominio CH2 de una región Fe de una- IgG.. Véanse, las Patentes de los Estados Unidos Núms. 5.869.046 y 6.121.022.

La región Fe se puede alterar por medio del reemplazo de al menos un residuo de aminoácido con un residuo de aminoácido diferente para alterar las funciones efectoras del anticuerpo. Por ejemplo, uno o más aminoácidos seleccionados de los residuos de aminoácidos 234, 235, 236, 237, 297, 318, 320 y 322 se puede reemplazar con un residuo de aminoácido diferente de manera tal que el anticuerpo tenga una afinidad alterada por un ligando efector pero retenga la capacidad de unión a antígeno del anticuerpo patrón. El ligando efector cuya afinidad se puede alterar puede ser, por ejemplo, un receptor Fe o el componente Cl del complemento. Véanse las Patentes de los Estados Unidos Núms . 5.624.821 y 5.648.260.

Se puede modificar la glicosilación de un anticuerpo. Por ejemplo, se puede realizar un anticuerpo aglicosilado (es decir, el anticuerpo carece de glicosilación) . La glicosilación se puede alterar para aumentar, por ejemplo, la afinidad del anticuerpo por el antígeno. Tales modificaciones de carbohidrato se pueden lograr, por ejemplo, por medio de la alteración de uno o más sitios de glicosilación dentro de la secuencia de anticuerpos. Por ejemplo, se pueden realizar una o más sustituciones de aminoácidos que dan lugar a la eliminación de uno o más sitios de glicosilación de estructura de región variable para eliminar de ese modo la glÍGosiláción en ese sitio. Tal aglicosilación puede aumentar la afinidad del anticuerpo por el antígeno. Véanse, por ej . , las Patentes de los Estados Unidos Núms. 5.714.350 y 6.350.861.

En forma adicional o en forma alternativa, se puede realizar un anticuerpo que tiene un tipo alterado de glicosilación, tal como un anticuerpo hipofucosilado que tiene cantidades reducidas de residuos de fucosil o un anticuerpo que tiene estructuras de GlcNac con bisectrices aumentadas. Tales patrones de glicosilación alterados han ¡demostrado aumentar la capacidad ADCC de los anticuerpos. Tales modificaciones de carbohidratos se pueden lograr, por ejemplo, por medio de la expresión del anticuerpo en una célula huésped con un mecanismo de glicosilación alterada. Las células con · un mecanismo de glicosilación alterada se han descrito en la técnica y se pueden utilizar como células huésped en las que expresar los anticuerpos recombinantes de la invención para producir de ese modo un anticuerpo con glicosilación alterada. Véanse la Publicación de Solicitud de Patente de los Estados Unidos Núm. 2004/0110704 y Yamane- Ohnuki, et al. (2004) Biotechnol Bioeng. 87: 614-22; EP 1,176,195; O 2003/035835; Shields, et al. (2002) J. Biol . Chem. 277: 26733-26740; WO 99/54342; Umana, efc .al. (1999) Nat. Biotech. 17: 176-180; y Tarentino, et al. (1975) Biochem. 14: 5516-23.

Un anticuerpo se puede pegilar para aumentar, -por ejemplo, la vida media biológica (por ej . , del suero) del anticuerpo. Para pegilar un anticuerpo, el anticuerpo, o un fragmento del mismo, en forma típica se hace reaccionar con polietilen glicol (PEG) , tal como un éster reactivo o un derivado aldehido de PEG, bajo condiciones en las que uno o más grupos PEG se adjuntan al anticuerpo o fragmento de anticuerpos. Con preferencia, la pegilación se lleva a cabo por medio de una reacción de acilación o una reacción de alquilación con una molécula de PEG reactiva (o un polímero soluble en agua reactivo análogo) .

La invención también proporciona variantes y equivalentes que son sustancialmente homologas a los anticuerpos, fragmentos de anticuerpos, diacuerpos, SMIP, cuerpos camel, nanocuerpos, IgNAR, polipéptidos , regiones variables y CDR expuestos en la presente. Estos pueden contener, por ej . , mutaciones de sustitución conservadoras, (es decir, la sustitución de uno o más aminoácidos por aminoácidos similares) . Por ejemplo, la sustitución conservadora se refiere a la sustitución de un aminoácido con otro dentro de la misma clase general, por ej., un aminoácido ácido con otro aminoácido ácido, un aminoácido básico con otro aminoácido básico, o un aminoácido neutral con otro aminoácido neutral .

Producción de anticuerpos Los anticuerpos- monoclonales en particular se pueden llevar a cabo por el uso del método de hibridoma que se describe primero en Kohler, et al., Nature, 256:495 (1975), o por medio de otros métodos muy conocidos, desarrollados con posterioridad (Véase, por ej . , Goding, Monoclonal Antibodies: Principies and Practice, páginas 59-103 (Academic Press, 1986) ) . Los hibridomas y otras células de fusión se pueden formar por fusión química, fusión eléctrica, o cualquier otra técnica adecuada, con cualquier tipo adecuado de mielomas, heteromielomas , células foblastoides , plasmacitomas o célula inmortalizada similar y cualquier tipo adecuado de célula que expresa anticuerpos.

También se pueden utilizar células B inmortalizadas transformadas para producir anticuerpos en forma eficiente. Las células B transformadas se pueden producir por medio de técnicas estándares, ales como la transformación con un Virus de Epstein Barr, o un gen transformador. {Véanse, por ej . , "Continuously Proliferating Human Cell Lines Synthesizing Antibody of Predetermined Specificit , " Zurawaki, V. R. et al, en Monoclonal Antibodies, ed. Por Kennett R. H. et al, Plenum Press, N.Y. 1980, páginas 19-33.) . Por lo tanto, las células y líneas celulares de expresión de anticuerpos anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 estables y continuas y/o inmortalizadas son otra característica de la invención. Un paso de un método para producir anticuerpos anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 puede incluir, por ejemplo, un paso de_ producción de células B inmortalizadas que producen un anticuerpo que está fundido a parejas apropiadas para producir anticuerpos anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 o que están en una secuencia y tales secuencias se utilizan para producir un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 recombinante .

Las líneas celulares disponibles como huéspedes para la expresión de proteínas recombinantes son muy conocidas en la técnica e incluyen varias líneas celulares inmortalizadas disponibles a partir de American Type Culture Collection (ATCC) . Estas incluyen, entre otras, células de ovario de hámster chino (CHO) , NSO, células SP2 , células HeLa, células de riñon de hámster bebé (BHK) , células de riñon de mono (COS), células de carcinoma hepatocelular humano (por ej . , Hep G2) , células A549, y un número de otras líneas celulares. Otras líneas celulares que se pueden utilizar con líneas celulares de insectos, tales como células Sf9. Cuando los ácidos nucleicos (o vectores que contienen ácidos nucleicos) que codifican genes de anticuerpos se introducen en células huésped de mamíferos, se pueden producir anticuerpos por medio del cultivo de células huésped durante un período de tiempo suficiente para permitir la expresión del anticuerpo en las células huésped o, con mayor preferencia, la secreción del anticuerpo en el medio de cultivo en el que se cultivan las células huésped. Los anticuerpos se pueden recuperar del medio-.-de- cultivo por el uso de métodos purificación de proteínas de estándar. Los anticuerpos también se pueden recuperar de los lisatos de la célula huésped cuando se expresan directamente sin una señal secretora.

La purificación de anticuerpos a partir de cultivos celulares, lisatos celulares, y animales transgénico o materiales biológicos obtenidos de los mismos (por ej., del fluido de ascitis de un animal transgénico que produce anticuerpos) se puede lograr por medio de la aplicación de cualquier número de técnicas adecuadas conocidas en la técnica que incluyen, por e j . , purificación de columna por inmunoafinidad; precipitación- de sulfato; cromatoenfoque ; SDS-PAGE preparatoria, y similares.

Los anticuerpos anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 también se pueden producir en células bacterianas y microorganismos unicelulares eucariotas, tales como levadura. Los anticuerpos producidos a partir de células bacterianas carecen de glicosilación normal y por consiguiente pueden ser deficientes en términos de ADCC funciones y otros aspectos de la respuesta inmune que de lo contrario se puede asociar con anticuerpos esencialmente idénticos producidos en células de mamíferos y/o animales.

Se pueden utilizar métodos adecuados para la purificación, observación y selección de anticuerpos, que incluyen aquellos descritos en WO 2006/072625. La observación y selección de anticuerpos anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 se puede lograr por medio de cualquier técnica o combinación de técnicas adecuadas. Por ejemplo, se puede utilizar una variedad de formatos de inmunoensayos para seleccionar anticuerpos que se unen en forma selectiva a una proteína, variante, o fragmento particular. Por ejemplo, los inmunoensayos ELISA de fase sólida se utilizan en forma rutinaria para seleccionar anticuerpos selectivamente inmunoreactivos con una proteína, variante de proteína, o un fragmento de la misma. Véase Harlow y Lañe, supra. La afinidad de unión de un anticuerpo monoclorial se puede determinar, por ejemplo, por medio del análisis Scatchard de Munson et al., Anal. Biochem. , 107:220 (1980).

Los anticuerpos anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 en forma típica se observan por la capacidad de modular la actividad celular NK, tal como por medio de la inhibición de señales mediadas por KIR2DL1, 2 y/o 3, la promoción de la activación de células NK a través de señales mediadas por el receptor de activación NK. Se ha desarrollado un número de ensayos de células NK que puede ser útil en tales contextos que incluyen, por ejemplo, métodos de observación citométrica de flujo. Véase, por ej . , McGinnes, et al. (1984) J Immunol Methods 80: 70-85. Los métodos referentes al cultivo de células NK, evaluación de células NK, y similares son conocidos en la técnica. Véase, por ej., Campbell and Colonna, Natural Killer Cell Protocols (Methods in Molecular Biology Series vol.. -121) (2000)..

En el contexto de anticuerpos anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3, la actividad neutralizante de células NK se puede demostrar por medio de la capacidad de un anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 de reconstituir la lisis de células blanco por medio de células NK positivas de KIR2DL1, 2, y/o 3. La modulación de células NK asociada con anticuerpos anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 (por ej., inhibición KIR) también se puede evaluar por medio de varios ensayos de citotoxicidad basados en células. La eliminación redirigida es un sistema experimental para determinar la capacidad de un receptor de células NK de inducir la citotoxicidad . Las células NK recubiertas con anticuerpo específico para un receptor candidato se evalúan por su capacidad de eliminar las células blanco que expresan un receptor Fe al cual se une el anticuerpo. En otra variante, la modulación de actividad de células NK asociada con un anticuerpo anti-KIR se puede evaluar en un ensayo de liberación de citoquinas. También se pueden utilizar otras actividades biológicas asociadas con varios anticuerpos anti-KIR2DL1 , 2 y/o 3 para evaluar anticuerpos anti-KIR2DLl , 2 y/o 3.

CONJUGADOS DE ANTICUERPOS Un anticuerpo (o un fragmento del mismo) puede estar conjugado a un resto terapéutico tal como una citotoxina, un agente terapéutico o un ión metálico radioactivo. Una citotoxina o . agente citotóxico incluye cualquier agente que es perjudicial para las células. Los ejemplos incluyen pero sin limitación taxol, citocalasina B, gramicidina D, bromuro de etidio, emetina, mitomicina, etoposida, tenoposida, vincristina, vinblastina, colchicina, doxorubicina, daunorubicina, dihidroxi antracin diona, mitoxantrona , mitramicina, actinomicina D, 1-dehidrotestosterona, glucocorticoides , procaína, tetracaína, lidocaína, propranolol, y puromicina y análogos u homólogos de los mismos. Los agentes terapéuticos incluye, pero sin limitación, antimetabolit¡os (por ej . , metotrexato, 6-mercaptopurina > 6-tioguanina, citarabina, 5 - fluorouracil decarbazina) , agentes alquilantes (por ej., mecloretamina, tioepa clorambucil, melfalán, carmustina (BSNU) y lomustina (CCNU) , ciclotosfamida, busulfán, dibromomanitol , estreptozotocina , mitomicina C, y cis-diclorodiamina platinum (II) (DDP) cisplatina) , antraciclinas {por ej . , daunorubicina (anteriormente daunomicina) y doxorubicina) , antibióticos (por ej . , dactinomicina (anteriormente actinomicina) , bleomicina, mitramicina, y antramicina (AMC) ) , y agentes anti-mitóticos (por ej., vincristina y vinblastina) .

Métodos de Manipulación de Anticuerpos Los anticuerpos que tienen VH y VL secuencias revelados en la presente se puede utilizar para crear nuevos anticuerpos variantes por medio de la modificación de las secuencias VH y/o VL, o las regiones constantes adjuntas a las mismas. Por lo tanto, las característica de estructura de un anticuerpo variante de la invención, se utilizan para crear anticuerpos variantes estructuralmente relacionados que retienen al menos una propiedad funcional de los anticuerpos de la invención, tales como la unión a KIR2DL1', KIR2DL2 , y KIR2DL3. Por ejemplo, se pueden combinar una o más regiones CDR de un anticuerpo variante anti-KIR2DLl , KIR2DL2 , y KIR2DL3 o mutaciones de los mismos, en forma recombinante con regiones de estructura conocidas y/o otros CDR para crear anticuerpos ant|i -KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 adicionales, manipulados en forma recombinante (por ej . , anticuerpos que unen el KIR2DL1 , KIR2DL2 , y/o KIR2DL3) de la invención, de acuerdo con lo discutido en la presente. El material de inicio para el método de manipulación puede ser una o más de las secuencias VH y/o VK proporcionadas en la presente, o una o más regiones CDR de las mismas. Para crear el anticuerpo manipulado, no es necesario preparar efectivamente (es decir, expresar como una proteína) un anticuerpo que tienen uno o más de las secuencias VH y/o VK proporcionadas en la presente, o uno o más regiones CDR de las mismas. En cambio, la información contenida en las secuencias se utiliza como el material de inicio para crear una secuencia de "segunda generación" derivada de la secuencia original y luego la secuencia de "segunda generación" se prepara y expresa como •una proteína. Se . pueden...utilizar .técnicas de biología molecular estándar para preparar y expresar secuenciad de anticuerpos alteradas.

El anticuerpo codificado por las secuencias de anticuerpos alteradas puede retener una, algunas o todas las propiedades ' funcionales de los anticuerpos anti -KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 producidos por métodos y con secuencias proporcionadas en la presente, las propiedades funcionales incluyen la unión a KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 variantes o conjugado de KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 variante con un nivel| de KD específico o menor y/o actividad celular inmuno moduladora, y/o la unión en forma selectiva a las células blanco deseadas tales como, por ejemplo, carcinoma colorectal, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer de páncreas, cáncer de ovario, cáncer gástrico, y cáncer de hígado. Las propiedades funcionales de los anticuerpos alterados se pueden evaluar por el uso de ensayos estándar disponibles en la técnica y/o descritos en la presente.

Las mutaciones se pueden introducir en forma aleatoria o selectiva junto con todo o parte de una secuencia de codificación de un anticuerpo anti KI 2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 y los anticuerpos anti-KIR2DLl , KIR2DL2 , y KIR2DL3 modificados resultantes se pueden observar por su actividad de unión y/o otras propiedades funcionales deseadas. Véase WO 2011/120013.

,. ¦ Acidos nucleicos que Codifican Anticuerpos que Unen en forma Selectiva KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 Otro aspecto de la invención pertenece a las moléculas de ácido nucleico que codifican los anticuerpos de la invención que unen los KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3. Los ácidos nucleicos pueden estar presentes en células completas, en un lisato celular, o en una forma parcialmente purificada o sustancialmente pura. Un ácido nucleico se puede aislar por medio de purificación de otros componentes celulares u otros contaminantes (por ej., otros ácidos nucleicos o proteínas celulares) por medio de técnicas estándares, que incluyen tratamiento alcalino/SDS , distribución de bandas CsCl , cromatografía de columna, electroforesis en gel de agarosa y otros muy conocidos en la técnica. Véase Ausubel, et al. (2011) Current Protocols in Molecular Biology John Wiley & Sons, Inc. Un ácido nucleico de la invención puede ser, por ejemplo, ADN o ARN y puede o no contener secuencias intrónicas. El ácido nucleico puede ser una molécula de ADNc.

Los ácidos nucleicos de la invención se pueden obtener por el uso de técnicas estándares de biología molecular. Para anticuerpos expresados por hibridomas (por ej., hibridomas preparados a partir de ratones transgénicos que portan genes de inmunoglobulina humana de acuerdo con lo descrito en forma adicional a continuación) , se pueden obtener ADNc que codifican las cadenas ligeras y pesadas del anticuerpo hechos por el hibridoma por amplificación . por PCR . estándar o técnicas de clonación de ADNc. Para anticuerpos obtenidos a partir de una biblioteca de genes de inmunoglobulina (por ej.,' por el uso de técnicas de expresión en fago), se puede recuperar de la biblioteca ácido nucleico que codifica el anticuerpo.

En forma específica, se pueden lograr sustituciones de codones degenerados por medio de la generación, por ej . , de secuencias en las que la tercera posición de uno o más codones seleccionados se sustituye con base mezclada y/o residuos de deoxiinosina . Batzer, et al. (1991) Nucl ic acid Res . 19: 5081; Ohtsuka, et al. (1985) J. Biol . Chem. 260: 2605-08; Rossolini, et al. (1994) Mol. Cell. Probes 8: 91-98.

Una vez que se obtienen los fragmentos de ADN que codifican los segmentos VH y VL, estos fragmentos de ADN se pueden manipular en forma adicional por medio de técnicas estándares de ADN recombinante , por ejemplo para convertir los genes de la región variable a genes de cadena de anticuerpo de longitud completa, a genes de fragmentos Fab o a un gen scFv. En estas manipulaciones, un fragmento de ADN que codifican VL o VH está operativamente vinculado a otro fragmento de ADN que codifica otra proteína, tal como una región constante de anticuerpo o un vinculador flexible.

El ADN aislado que codifica la., región VH se puede convertir a un gen de cadena pesada de longitud completa por medio de la vinculación en forma operativa del ADN que codifica VH a otra molécula de ADN que codifica la región constante de cadenas pesadas (CH1, CH2 y CH3) . Las secuencias de genes de región constante de cadena pesada humana son conocidas en la técnica {Véase, por ej . , Kabat, et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Quinta Edición, U.S. Department of Health and Human Services, Publicación NIH Núm. 91-3242) y se pueden obtener fragmentos de ADN que abarcan estas regiones por medio de amplificación por PCR estándar. La región constante de cadena pesada puede ser una región constante IgGl, IgG2, IgG3 , IgG4, IgA, IgE, IgM, o IgD, pero con la mayor de las preferencias es una región constante IgGl o IgG4. Para un gen de cadena pesada de fragmento Fab, el ADN que codifica VH puede estar operativamente vinculado a otra molécula de ADN que codifica únicamente la región constante CHl de cadena pesada.

El ADN aislado que codifica la región VL se puede convertir a un gen de cadena ligera de longitud completa (así como también un gen de cadena ligera Fab) por medio de la vinculación en forma operativa del ADN que codifica VL a otra molécula de ADN que codifica la región constante de cadena ligera, CL. Las secuencias de genes de región constante de cadena ligera humanos son conocidos en la técnica (Véase, por ej . , Kabat, et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest Quinta Edición, U.S. Department of Health and Human Services, Publicación NIH Núm. 91-3242) y se pueden obtener los fragmentos de ADN que abarcan estas regiones por medio de amplificación por PCR estándar. La región constante de cadena ligera puede ser una región constante kappa o lambda, pero con la mayor de las preferencias es una región constante kappa.

Para crear un gen scFv, los fragmentos de ADN que codifican VH y VL están operativamente vinculados a otro fragmento que codifica un vinculador flexible, por ej . , que codifica la secuencia de aminoácidos (Gly4-Ser)3, de manera tal que las secuencias VH y VL se puede expresar como una cadena simple contigua, con las regiones VL y VH unidas por el vinculador flexible. Véanse, por ej . , Bird, et al. (1988) Science 242: 423-426; Huston, et al. (1988) Proc . Nati. Acad. Sei. USA 85: 5879-5883; McCafferty, et al. (1990) Nature 348: 552-554.

Métodos para Producir Anticuerpos y Fragmentos de los mismos La presente invención también proporciona métodos para producir anticuerpos y fragmentos de los mismos. Los métodos para producir anticuerpos son muy conocidos para aquellos con experiencia ordinaria en la técnica. Por ejemplo, los métodos para producir anticuerpos quiméricos son en la actualidad muy conocidos en la técnica. Véanse, por ej., la Patente de los Estados Unidos Núm. 4.816.567; Morrison, et al. (1984) PNAS -·.. USA 81.: 8651-55; Neuberger, et al. (1985) Nature 314: 268- 270; Boulianne, et al. (1984) Nature 312: 643-46.

Por ejemplo, los anticuerpos o fragmentos de unión a antígenos se pueden producir por medio de manipulación genética. En esta técnica, al igual que con otros métodos, las células que producen anticuerpos se sensibilizan con el antígeno o inmunógeno deseado. El ARN mensajero aislado de las células que producen anticuerpos se utiliza como una plantilla para realizar ADNc por el uso de amplificación por PCR. Se produce una biblioteca de vectores, conteniendo cada uno un gen de| cadena pesada y un gen de cadena ligera que retienen la especificidad de antígeno inicial, por medio de la inserción de secciones apropiadas del ADNc de inmunoglobulina amplificada en los vectores de expresión. Se construye una biblioteca de combinatoria por medio de la combinación de la biblioteca de genes de cadena pesada con la biblioteca de genes de cadena ligera. Esto da lugar a una biblioteca de clones que co-expresa una cadena pesada y ligera (que se asemeja al fragmento Fab o fragmento de unión a antígeno de una molécula de anticuerpo) . Los vectores que portan estos genes se co-transfectan a una célula huésped. Cuando se induce la síntesis de genes de anticuerpo en el huésped transfectado, las proteínas de cadena pesada y ligera se auto-montan para producir anticuerpos activos que se pueden detectar por medio de la observación con el antígeno o el inmunógeno. . . . ....·.. . .-,.

Los anticuerpos, y los fragmentos de los mismos, de la invención también se pueden producir por medio de la construcción, por el uso de técnicas convencionales muy conocidas para aquellos con experiencia ordinaria en la técnica, un vector de expresión que contiene un operón y una secuencia de ADN que codifica una cadena pesada de anticuerpo en la que la secuencia de ADN que codifica los CDRsrequeridos para la especificidad del anticuerpo se deriva de una fuente celular no humana, mientras que la secuencia de ADN que codifica las partes restantes de la cadena de anticuerpo se deriva de una fuente celular humana. Además, la invención se refiere a vectores, en especial a plásmidos, cósmidos, virus, bacteriófagos y otros vectores que son comunes en manipulación genética, que contienen las moléculas de ácido nucleico de la invención mencionadas con anterioridad. Las moléculas de ácido nucleico contenidas en los vectores pueden estar unidas a elementos regulatorios que aseguran la transcripción en células procariota y eucariota.

Los vectores contienen elementos que facilitan la manipulación para la expresión de una proteína foránea dentro de la célula huésped blanco. En forma conveniente, la manipulación de secuencias y la producción de ADN para su transformación primero se lleva a cabo en un huésped bacteriano (por ej . , E. coli) y normalmente los vectores incluirán secuencias para, facilitar tales manipulaciones, que incluyen un origen de replicación bacteriano y un etiquetador de selección bacteriano apropiado. Los etiquetadores de selección codifican las proteínas necesarias para la supervivencia o crecimiento de células huésped transformadas cultivadas en un medio de cultivo selectivo. Las células huésped no transformadas con el vector que contiene el gen de selección no sobrevivirán en el medio de cultivo. Los genes de selección típicos codifican las proteínas que confieren resistencia a antibióticos u otras toxinas, deficiencias auxotróficas complementarias, o suministran nutrientes críticos no disponibles de los medios complejos. Los vectores y los métodos representativos para la transformación de levadura se describen en la técnica. Véase, por ej . , Burke, et al. (2000) Methods in Yeast Genetics Cold Spring Harbor Laboratory Press.

La secuencia de codificación de polipéptido de interés puede estar vinculada en forma operativa a las secuencias regulatorias transcripcionales y traducibles que proporcionan la expresión del polipéptido en células de levadura. Estos componentes del vector pueden incluir, pero sin limitación, uno o más de las siguientes: un elemento potenciador, un promotor, y una secuencia de terminación de la transcripción. También se pueden incluir secuencias para la secreción del polipéptido (por ej., una secuencia de señal).

Los ácidos nucleicos están "vinculados en forma operativa" cuando se colocan en una relación funcional con respecto a otra secuencia de ácido nucleico. Por ejemplo, el ADN para una secuencia de señal está vinculado en forma operativa al ADN para un polipéptido si está expresado como una pre-proteína que participa en la secreción del polipéptido; un promotor o potenciador está vinculado en forma operativa a una secuencia de codificación si afecta la transcripción de la secuencia. Por lo general, "vinculado en forma operativa" se refiere en forma amplia a secuencias de ADN vinculadas contiguas, y, en el caso de un líder secretor, contiguas y en la fase de lectura. Sin embargo, los potenciadores no están obligados a ser contiguos.

Los promotores son secuencias no traducidas ubicadas dirección 5' (5') del codón de inicio de un gen estructural (por lo general entre aproximadamente 100 a 1000 bp) que controlan la transcripción y traducción de secuencias de ácido nucleico particulares con las que están vinculadas en forma operativa. Tales promotores caen dentro de varias clases: promotores inducibles, constitutivos, y represibles (por ej . , que aumentan los niveles de transcripción en respuesta a la ausencia de un represor) . Los promotores inducibles pueden iniciar niveles aumentados de transcripción de ADN bajo su control en respuesta a alguna modificación en las condiciones de cultivo {por ej., la presencia o ausencia de .un nutriente o una modificación en- la temperatura).

Se puede producir un segundo vector de expresión por el uso del mismo medio convencional muy conocido para aquellos con experiencia ordinaria en la técnica, el vector de expresión contiene un operón y una secuencia de ADN que codifica una cadena ligera de anticuerpos en la que la secuencia de ADN que codifica los CDR requeridos para la especificidad del anticuerpo se deriva de una fuente celular no humana, con preferencia una fuente de células B de conejo, mientras que la secuencia de ADN que codifica las partes restantes de la cadena de anticuerpo se deriva de una fuente celular humana.

Los vectores de expresión se transfectan a la célula huésped por medo de técnicas convencionales muy conocidas para aquellos con experiencia ordinaria en la técnica para producir una célula huésped transfectada , la célula huésped transfectada se cultiva por medio de técnicas convencionales muy' conocidas para aquellos con experiencia ordinaria en la técnica para producir los polipéptidos de anticuerpo.

La célula huésped puede estar co-transfectada con los dos vectores de expresión descritos con anterioridad, el primer vector de expresión que contiene un ADN que codifica un operón y un polipéptido derivado de una cadena ligera y el segundo vector que contiene un ADN que codifica un operón y un polipéptido derivado de una cadena pesada. Los dos vectores, contienen diferentes etiquetadores seleccionábales , pero con preferencia logran sustancialmente la misma expresión de los polipéptidos de cadena pesada y ligera. En forma alternativa, se puede utilizar un único vector, el vector que incluye ADN que codifican los polipéptidos tanto de la cadena pesada como de la ligera. Las secuencias de codificación para las cadenas pesadas y ligeras puede comprender ADNc, ADN genómico, o ambos.

Las células huésped utilizadas para expresar los anticuerpos, y los fragmentos de los mismos, pueden ser ya sea una célula bacteriana tal como E. coli, o una célula eucariota. Se puede utilizar una célula de mamífero de un tipo bien definido para este propósito, tal como una célula de mieloma, una línea celular de ovario de hámster chino (CHO) , de NSO, o de HEK293.

Los métodos generales por medio de los cuales se pueden construir los vectores, los métodos de transfección requeridos para producir la célula huésped y los métodos de cultivo requeridos para producir los anticuerpos, y los fragmentos de los mismos, a partir de las células huésped todos incluyen técnicas convencionales. Si bien con preferencia la línea celular que se utiliza para producir el anticuerpo es una línea celular de mamífero, se puede utilizar cualquier otra línea celular adecuada, tal como una línea celular bacteriana tal como una cepa bacteriana derivada de E.. coli, o una línea celular.de levadura. .

En forma similar, una vez que se producen los anticuerpos, se pueden purificar de acuerdo con procedimientos estándares en la técnica, tales como por ejemplo filtración de flujo cruzado, precipitación de sulfato de amonio, y cromatografía de columna de afinidad.

Generación de Anticuerpos Anti-KIR2DL1, 2, y 3 por el uso de Animales ¦ Los anticuerpos de la invención que unen en forma selectiva el KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 puede ser anticuerpos monoclonales humanos. Tales anticuerpos monoclonales humanos dirigidos contra un KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 se pueden generar por el uso de ratones transgénicos o transcromosómicos que portan partes del sistema inmune humano en lugar del sistema de ratón. Estos ratones transgénicos o transcromosómicos incluyen ratones denominados en la presente como HuMAb Mouse® y KM Mouse® respectivamente, y en forma colectiva se denominan en la presente "ratones Ig humanos". El HuMAb Mouse® (Medarex. Inc.) contiene el miniloci de genes de inmunoglobulina humana que codifican secuencias de inmunoglobulina de cadena pesada (µ e ?) y ligera ? humanas no modificadas, junto con mutaciones dirigidas que inactivan loci de cadena endógena µ y ? . Véase, por ej . , Lonberg, et al. (1994) Nature 368(6474) : 856-859. Por consiguiente, los ratones exhiben una expresión reducida de IgM o ? de ..ratón, y en respuesta a la inmunización, los transgenes de cadena pesada y ligera humanos introducidos se somete a un intercambio de clase y a una mutación somática para generar IgG ? monoclonal humano de alta afinidad. Lonberg (1994) Handbook of Experimental Pharmacology 113: 49-101; Lonberg y Huszar (1995) Intern. Rev. Immunol . 13: 65-93, y Harding y Lonberg (1995) Ann. NY. Acad. Sci . 764: 536-546. La preparación y uso de los HuMab Mouse®, y las modificaciones genómica llevadas a cabo por tales ratones, se describe en forma adicional en Taylor, et al. (1992) Nucleic acids Research 20: 6287-6295; Chen,| et al. (1993) International Immunology 5 : 647-656; Tuaillon, et al. (1993) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90: 3720-3724; Choi, et al. (1993) Nature Genetics 4: 117-123; Chen, et al. (1993) EMBO J. 12: 821-830; Tuaillon, et al. (1994) J. Immunol . 152: 2912-2920; Taylor, .et al. (1994) International Immunology 6 : 579-591; y Fishwild, et al. (1996) Nature Biotechnology 14 : 845-851. Véanse además, las Patentes de los Estados Unidos Núms . 5.545.806; 5.569.825; 5.625.126; 5.633.425; 5.789.650; 5.877.397; 5.661.016; 5.814.318; 5.874.299; 5.770.429; y 5.545.807; WO 92/03918, WO 93/12227, WO 94/25585; WO 97/13852; WO 98/24884; WO 99/45962; y WO 01/14424.

Los anticuerpos anti -KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 humanos (por ej . , los anticuerpos que unen en forma selectiva KIR2DL1 , KIR2DL2, o KIR2DL3) de la invención se pueden cultivar por el uso de un ratón que porta secuencias de inmunoglobulina humana en transgenes y transcromosomas, tales como un ratón que porta un transgen de cadena pesada humana y un transcromosoma de cadena ligera humana. Tales ratones, denominados en la presente como "KM mice®" , se describen en detalle en WO 02/43478.

Incluso además, están disponibles en la técnica sistemas de animal transgénicos alternativos que expresan los genes de inmunoglobulina humana y se pueden utilizar para cultivar los anticuerpos anti -KIR2DL1 , KIR2DL2, y KIR2DL3 de la invención. Por ejemplo, se puede utilizar un sistema transgénico alternativo denominado el Xenomouse (Abgenix, Inc.); tales ratones se describen en, por ejemplo, las Patentes de los Estados Unidos Núms . 5.939.598; 6.075.181; 6.114.598; 6.150.584 y 6.162.963.

Además, los sistemas animales transcromosómicos alternativos que expresan los genes de inmunoglobulina humana están disponibles en la técnica y se pueden utilizar para cultivar anticuerpos anti -KIR2DL1 , KIR2DL2, y KIR2DL3 de la invención. Por ejemplo, se pueden utilizar ratones que portan tanto un transcromosoma de cadena pesada humana como un transcromosoma de cadena ligera humana, denominados "ratones TC" . Véase Tomizuka, et al. (2000) Proc . Nati. Acad. Sci . USA 97: 722-727. Además, se han descrito vacas que portan transcromosomas de cadena pesada y ligera humana en la -técnica (Kuroiwa, efc al. (2002). Nature Biotechnology 20: 889- 894) y se pueden utilizar para cultivar los anticuerpos anti- KIR2DL1, KIR2DL2, y/o KIR2DL3 de la invención.

Los anticuerpos monoclonales humanos de la invención también se pueden preparar por el uso de métodos de expresión en fagos para bibliotecas de observación de genes de inmunoglobulina humana. Tales métodos de expresión en fagos para aislar anticuerpos humanos están establecidos en la técnica. Véanse, por ej . , las Patentes de los Estados Unidos Núms. 5.223.409; 5.403.484; 5.571.698; 5.427.908 5.580.717; 5.969.108; 6.172.197; 5.885.793; 6.521.404; 6.544.731; 6.555.313; 6.582.915 y 6.593.081.

Los anticuerpos monoclonales humanos de la invención también se pueden preparar por el uso de ratones SCID en los cuales se han reconstituido células inmunes humanas de manera tal que se pueda generar una respuesta de anticuerpo humana ante la inmunización. Véanse, por ej . , las Patentes de los Estados Unidos Núms. 5.476.996 y 5.698.767.

Cuando se utilizan ratones Ig para cultivar anticuerpos humanos de la invención, tales ratones se pueden inmunizar con una preparación purificada o enriquecida de polipéptido KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3, de acuerdo con lo descrito por Lonberg, et al. (1994) Nature 368(6474) : 856-859; Fishwild, et al. (1996) Nature Biotechnology 14 : 845-851; O 98/24884 y WO 01/14424. Con preferencia, los ratones tendrán de 6 a 16 semanas de edad tras la primera infusión. Por ejemplo, se. puede utilizar una preparación purificada o recombinante (5-50 ]xg) de KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 para inmunizar los ratones Ig humanos por vía intraperitoneal .

La experiencia previa con varios antígenos por otros ha demostrado que los ratones transgénicos responden cuando se inmunizan por vía intraperitoneal inicialmente (IP) con antígeno en un adyuvante de Freund completo, seguidos por inmunizaciones por vía IP cada dos semanas (hasta un total de 6) con antígeno en adyuvante de Freund incompleto. Sin embargo, ¡se ha hallado que también otros adyuvantes distintos de los de Freund son efectivos. En adición, se ha hallado que las células completas en ausencia de adyuvante son altamente inmunogénicas . La respuesta inmune se puede monitorear a través del curso del protocolo de inmunización con muestras de plasma obtenidas por medio de sangrados retroorbitales . El plasma se pueden observar por medio de ELISA (de acuerdo con lo descrito a continuación) , y se pueden utilizar los ratones con suficientes títulos de inmunoglobulina humana anti-KIR2DL1, KIR2DL2, y KIR2DL3 para fusiones. Los ratones se pueden estimular por vía intravenosa con antígeno 3 días antes del sacrificio y el extirpación del bazo. Se espera que se requieran llevar a cabo de 2 a 3 fusiones para cada inmunización. En forma típica se inmunizan entre 6 y 24 ratones para cada antígeno. Normalmente se utilizan cepas tanto HCo7 como HCol2. En adición, se puede cultivar el transgen tanto HCo7 como HCol2 juntos en un único ratón que tiene dos transgenes de cadena pesada humana diferentes (HCo7/HCol2 ) . En forma alternativa o en forma adicional, se puede utilizar la cepa de KM Mouse®.

Generación de Hibridomas que Producen los Anticuerpos Monoclonales Humanos de la Invención Para generar los hibridomas que producen los anticuerpos monoclonales humanos de la invención, se pueden aislar esplenocitos y/o células del nodo linfático de ratones | inmunizados y se pueden fusionar en una línea celular inmortalizada apropiada, tal como una línea celular de mieloma de ratón. Los hibridomas resultantes se pueden observar por la producción de anticuerpos específicos a antígeno. Por ejemplo, se pueden fusionar suspensiones celulares simples de linfocitos esplénicos de ratones inmunizados a un sexto del número de células de mieloma de ratón no secretoras de P3X63-Ag8.653 (ATCC, CRL 1580) con 50% de PEG. Las células se pueden laminar a aproximadamente 2 X 10"5 en placas de microtitulación de fondo chato, seguidas de una incubación de dos semanas en un medio selectivo que contiene 20% de Suero de Clon fetal, 18% de medios acondicionados "653", 5% de origen (IGEN) , 4 mM de L- glutamina, 1 mM de piruvato de sodio, 5 mM de HEPES, 0,055 mM de 2-mercaptoetanol , 50 unidades/ml de penicilina, 50 mg/ml _ de .estreptomicina, :50 mg/ml gentamicina y IX HAT (Sigma; el HAT el HAT se añade 24 horas después de la fusión) . Después de aproximadamente dos semanas, las células se pueden cultivar en un medio en el que el HAT se reemplaza por HT. Luego, los pocilios individuales se pueden observar por ELISA para anticuerpos monoclonales IgM e IgG humanos. Una vez se produce el extenso crecimiento de, hibridomas, el medio se puede observar normalmente después de 10-14 días. Los hibridomas que secretan anticuerpo se pueden volver a laminar, observarse nuevamente y, si todavía son positivos para IgG humana, los anticuerpos monoclonales se pueden subclonar al menos dos veces por medio de una dilución limitante. Luego, os subclones estables se pueden cultivar in vitro para generar pequeñas cantidades de anticuerpo en medio de cultivo de tejido para la caracterización.

Para purificar anticuerpos monoclonales humanos, los hibridomas seleccionados se pueden cultivar en matraces de agitación de dos litros para la purificación de anticuerpos monoclonales. Los sobrenadantes se pueden filtrar y concentrar antes con cromatografía de afinidad con proteína A-Sefarosa (Pharmacia, Piscataway, N.J.). La IgG eluida se puede controlar por medio de electroforesis en gel y cromatografía líquida de alto rendimiento para asegurar la pureza. La solución amortiguador se puede intercambiar por PBS, y la concentración se puede determinar por OD280 por el uso del coeficiente de .extinción 1,43. Los anticuerpos, monoclonales se pueden alicuotar y almacenarse a -80°C.

ETIQUETAS Los antígenos, anticuerpos y los fragmentos de los mismos descritos en la presente se pueden modificar en forma posterior a la traducción para agregar restos efectores tales como vinculadores químicos, restos detectables tales como por ejemplo tintes fluorescentes, enzimas, sustratos, materiales biolüminiscentes, materials radioac ivos, restos quimioluminiscentes, un agente citotóxico, materiales radioactivos, o restos funcionales.

Se pueden acoplar una amplia variedad de entidades, por ej . , ligandos, a los oligonucleótidos de acuerdo con lo conocido en la técnica. Los ligandos pueden incluir moléculas naturales, o moléculas recombinantes o sintéticas. Los ligandos representativos incluyen, pero sin limitación, avadina, biotina, péptidos, peptidomimetics , polilisina (PLL) , polietilen glicol (PEG) , mPEG, grupos catiónicos, espermina, espermidina, poliamina, tirotropina, melanotropina , lectina, glicoproteína, proteína A tensioactiva, mucina, poliaminoácidos glicosilados , transferrina, aptámero, inmunoglobulinas (por ej . , anticuerpos) , insulina, transferrina , albúmina, azúcar, moléculas lipofíilicas (por ej . , esteroides, ácidos bliares, colesterol, ácido cólico, y ácidos grasos) , vitamina A, vitamina ,E, vitamina ,.K, ... vitamina.. B, ácido fólico, B12, riboflavina, biotina, piridoxal, cofactores de vitaminas, lipopolisacáridos , hormonas y receptores de hormonas, lectinas, carbohidratos, carbohidratos multivalentes , etiquetadores radioetiquetados, tintes fluorescentes, y derivados de los mismos. Véanse, por ej . , las Patentes de los Estados Unidos Núms . 6.153.737; 6.172.208; 6.300.319; 6.335.434; 6.335.437; 6.395.437; 6.444.806; 6.486.308; 6.525.031; 6.528.631; y 6.559. 279.

En forma adicional, los restos se pueden agregar al antígeno o epitopo para aumentar la vida media in vivo {por ej., prolongando el tiempo para la depuración del torrente sanguíneo. Tales técnicas incluyen, por ejemplo, la adición de restos PEG (también denominada pegilación) , y son muy conocidas en la técnica. Véase la Publicación de Solicitud de Patente de los Estados Unidos Núm. 2003/0031671.

Un antígeno, anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, descrito en la presente se puede "adjuntar" a un sustrato cuando está asociado a la etiqueta sólida a través de una interacción química o física no aleatoria. La adjunción puede ser a través de un enlace covalente. Sin embargo, las adjunciones no necesitan ser covalentes o permanentes. Se pueden adjuntar materiales a una etiqueta a través de una "molécula espaciadora" o "grupo vinculador" . Tales moléculas espaciadoras que tienen una primera porción que se adjunta al material biológico y una segunda porción que se adjunta a la etiqueta. Por lo tanto, cuando se adjunta a la etiqueta, la molécula espaciadora separa la etiqueta y los materiales biológicos, pero está adjunta a ambos. Los métodos para adjuntar un material biológico (por ej . , etiqueta) a una etiqueta son muy conocidos en la técnica, e incluyen, pero sin limitación, el acoplamiento químico.

Etiquetas Detectables Los anticuerpos anti-KIR2DLl , KIR2DL2 , y KIR2DL3 descritos en la presente se pueden modificar en forma posterior a la traducción para agregar etiquetas efectojras tales como vinculadores químicos, etiquetas detectables tales como por ejemplo tintes fluorescentes, enzimas, sustratos, materiales bioluminiscentes , materials radioactivos, y etiquetas quimioluminiscentes , o etiquetas funcionales tales como por ejemplo estreptavidina, avidina, biotina, una citotoxina, un agente citotóxico, y materiales radioactivos. Las enzimas representativas adicionales incluyen, pero sin limitación, peroxidasa de rábano picante, acetilcolinesterasa , fosfatasa alcalina, ß-galactosidasa y luciferasa. Los materiales fluorescentes representativos adicionales incluyen, pero sin limitación, rodamina, fluoresceína, isotiocianato de fluoresceína , umbeliferona, diclorotriazinilamina, ficoeritrina y cloruro de dansilo. Las etiquetas quimioluminescentes representativas adicionales incluyen,, pero sin limitación, luminol . Los- materiales bioluminiscentes representativos adicionales incluyen, pero sin limitación, luciferina, luciferasa, y aequorina. Los materiales radioactivos representativos adicionales incluyen, pero sin limitación, bismuto-213 (213Bs) , carbono-14 (14C) , carbono-11 ("O , cloro-18 (Cl18) , cromo-51 (51Cr) , cobalto-57 (57Co) , cobalto-60 (60Co) , cobre-64 (64Cu) , cobre-67 (67Cu) , disprosio-165 (165Dy) , erbio-169 (169Er) , flúor-18 (18F) , galio-67 (67Ga) , galio-68 (S8Ga) , germanio-68 (S8Ge) , holmio-166 (166Ho) , indio-111 (11???) , yodo-125 (1 5I), yodo-123 (124I) , yodo-124 (124I), yodo-131 (131I) , iridio-192 (192ir) , hierro-59 (59Fe) , kriptón-81 (81Kr) , plomo-212 (212Pb) , lutecio-177 (177Lu) , molibdeno-99 (99Mo) , nitrógeno-13 (13N) , oxigeno-15 (150) , paladio-103 (103Pd) , fosforo-32 (32P) , potasio-42 (42K) , renio-186 (186Re) , renio-188 (188Re) , rubidio-81 (81Rb) , rubidio-82 (82Rb) , samario-153 (153Sm) , selenio-75 (75Se) , sodio-24 ( 4Na) , estroncio-82 (82Sr) , estroncio -89 (89Sr) , sulfuro 35 (35S) , tecnecio-99m (99Tc) , talio-201 ( 01T1) , tritio (3H) , xenón- 133 (133Xe) , iterbio-169 (169Yb) , iterbio -177 (177Yb) , e itrio-90 (90Y) .

Agentes Citotoxicos Los anticuerpos anti -KIR2DL1 , IR2DL2, y IR2DL3 descritos en la presente puede estar conjugados a agentes citotoxicos que incluyen, pero sin limitación, metotrexato, aminopterina, 6-raercaptopurina, 6-tioguanina, citarabina, 5-fluorouracil ·. decarbazina; agentes alquilantes tales como mecloretamina, tioepa clorambucil, melfalán, carmustina (BSNU) , mitomicina C, lomustina (CCNU) , 1-metilnitrosourea, ciclotosfamida , mecloretamina, busulfán, dibromomanitol , estreptozotocina, mitomicina C, cis-diclorodiamino platino (II) (DDP) cisplatina y carboplatina (paraplatina) ; antraciclinas que incluyen daunorubicina (anteriormente daunomicina) , doxorubicina (adriamicina) , detorubicina , carminomicina, idarubicina, epirubicina, mitoxantrona y bisantreno; antibióticos que incluyen dactinomicina (actinomicina D) , bleomicina, calichjeamicina, mitramicina, y antramicina (AMC) ; y agentes antimitóticos tales como los vinca alcaloides, vincristina y vinblastina. Otros agentes citotóxicos incluyen paclitaxel (TAX0L°) , ricina, pseudomonas exotoxina, gemcitabina, citocalasina B, gramicidina D, bromuro de etidio, emetina, etoposida, tenoposida, colchicina, dihidroxi antracin diona, 1-dehidrotestosterona, glucocorticoides , procaína, tetracaína, lidocaína, propranolol, puromicina, procarbazina , hidroxiurea, asparaginasa, corticosteroides , mitotano (O, P' - (DDD) ) , interferones , y mezclas de estos agentes citotóxicos.

Los agentes citotóxicos adiciones incluyen, pero sin limitación, agentes quimioterapéuticos tales como carboplatina , cisplatina, paclitaxel, gemcitabina, calicheamicina, doxorubicina, 5-fluorouracil, mitomicina C, actinomicina D, ciclofosfamida, vincristina, bleomicina, antagonistas VEGF, antagonistas EGFR, platinas, taxoles, irinotecán, 5-fluorouracil , gemcitabina, leucovorina, esteroides, ciclofosfamida, melfalán, vinca alcaloides (por ej . , vinblastina, vincristina, vindesina y vinorelbina) , mustinas, inhibidores de tirosina kinasa, radioterapia, antagonistas de la hormona sexual, moduladores del receptor de androgeno selectivo, moduladores del receptor de estrógeno selectivo, antagonistas PDGF, antagonistas TNF, antagonistas IL-1, interleuquinas (por ej . , IL-12 o IL-2), antagonistas IL-12R, Erbitux , Avastm jt Pertuzumab, anticuerpos anti-CD20, Rituxan*8, ocrelizumab, ofatumumab, DXL625, Herceptin®, o cualquier combinación de los mismos. Las enzimas tóxicas de plantas y bacterias tales como ricina, toxina difteria y toxina Pseudomonas pueden estar conjugadas a los anticuerpos humanizados, o fragmentos de unión a los mismos, para generar reactivos para eliminar un tipo específico de célula. Youle, et al. (1980) Proc . Nat'l Acad. Sci . USA 77: 5483; Gilliland, et al. (1980) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77: 4539; Krolick, efc al. (1980) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77: 5419. Otros agentes citotóxicos incluyen ribonucleasas citotóxicas. Véase la Patente de los Estados Unidos Núm. 6.653.104.

Los anticuerpos anti -KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 descritos en la presente pueden estar conjugados a un radionucleido que emite partículas alfa o beta (por ej . , radioinmunocon ugados)..- Tales, isótopos radioactivos incluyen pero sin limitación emisores beta tales como fósforo-32 (32P) , escandio-47 (47Sc) , cobre-67 (67Cu) , galio-67 (67Ga) , itrio-88 (88Yh, itrio-90 (90Y) , yodo-125 (125I), yodo-131 (131I), samario-153 (153Sm) , lutecio-177 (177Lu) , renio-186 (186Re) , renio-188 (188Re) , y emisores alfa tales como astatina-211 (211At) , plomo-212 (212Pb) , bismuto-212 (212Bi) , bismuto-213 (213Bi) o actinio-225 (225Ac) .

Los métodos para conjugar un KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 descrito en la presente con una etiqueta son conocidos en la técnica, tales | como aquellos métodos que se describen en Hunter, et al (1962) Nature 144: 945; David, et al. (1974) Biochemistry 13: 1014; Pain, et al. (1981) J. Immunol . Meth. 40: 219; y Nygren (1982) Histochem and Cytochem, 30: 407.

SUSTRATOS Los anticuerpos anti -KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 descritos en la presente se pueden adjuntar a un sustrato. Un número de sustratos (por ej., soportes sólidos) conocidos en la técnica son adecuados para utilizar con los anticuerpos anti -KIR2DL1 , KIR2DL2, y KIR2DL3 descritos en la presente. El sustrato se puede modificar para contener canales u otras configuraciones. Véanse Fung (2004) [Ed.] Protein Arrays : Methods and Protocols Humana Press y Kambhampati (2004) [Ed.] Protein Microarray Technology John iley & Sons.

Los materiales de sustratos incluyen, pero sin limitación acrílicos, agarosa, vidrio .borosilicato, carbono (por ej., láminas o pelets de nanofibra de carbono), acetato de celulosa, celulosa, cerámicos, geles, vidrio (por ej . , vidrio inorgánico, de poro controlado, modificado, de soda lima,, o funcionalizado) , látex, perlas magnéticas, membranas, metales, metaloides, nitrocelulosa , NYLON , paquetes de fibras ópticas, polímeros orgánico, papel, plásticos, poliacriloilmorfolida, poli (4 -metilbuteno) , poli (etilen tereftalato) , poli (vinil butirato) , poliacrilamida, polibutileno, policarbonato, polietileno, polietilenglicol tere'ftalato, poliformaldehido, poliraetacrilato , polimetilmetacrilato , polipropileno, polisacáridos , poliestireno, poliuretanos , polivinilacetato, polivinilclorida, polivinilidenodifluoruro (PVDF) , polivinilpirrolidona, rayón, resinas, cauchos, materiales semiconductores, sepharose , sílice, silicona, copolímeros de ® estireno, TEFLON , y una variedad de otros polímeros.

Los sustratos no necesitan ser chatos y pueden incluir cualquier tipo de forma que incluyen formas esféricas (por ej . , perlas) o formas cilindricas (por ej . , fibras) . Los materiales adjuntos a los soportes sólidos se pueden adjuntar a cualquier porción del soporte sólido (por ej . , se pueden adjuntar a una porción interior de un material de soporte sólido poroso) .

El cuerpo del sustrato puede tener forma de una perla, caja, columna, cilindro, disco, placa (por ej.,. placa de vidrio, placa de PETRI) , fibra, película, filtro, placa de microtitulación (por ej . , placa de microtitulación de 96 pocilios), rasqueta de hojas múltiples, red, pelet, plato, anillo, barra, rollo, lámina, deslizador, rasqueta, bandeja, tubo, o vial. El sustrato puede ser un cuerpo separado singular (por ej . , un único tubo, una única perla) , cualquier número de una pluralidad de cuerpos de sustrato (por ej., un estante de 10 tubos, varias perlas) , o combinaciones de los mismos (por ej . , una bandeja comprende una pluralidad de placas de microtitulación, una columna llena con perlas, una placa de microtitulación llena con perlas) .

Un anticuerpo anti KIR2DL1 , KIR2DL2, y KIR2DL3 puede estar "adjunto" a un sustrato cuando está asociado con el sustrato sólido a través de una interacción química o física no aleatoria. La adjunción puede, ser a través de un enlace covalente . Sin embargo, las adjunciones no necesitan ser covalentes o permanentes. Se pueden adjuntar materiales a un sustrato a través de una "molécula espaciadora" o "grupo vinculador" . Tales moléculas espaciadoras que tienen una primera porción que se adjunta al material biológico y una segunda porción que se adjunta al sustrato. Por lo tanto, cuando se adjunta al sustrato, la molécula espaciadora separa el sustrato y los materiales biológicos, pero está adjunta a ambos. Los métodos para adjuntar un material biológico (por ej.. , etiqueta) a. un sustrato son muy conocidos en la técnica, e incluyen, pero sin limitación, el acoplamiento químico.

Se pueden utilizar placas, tales como placas de microtitulación, que sostienen y contienen la fase sólida para reacciones sintéticas de fase sólida. Las placas de microtitulación pueden albergar perlas que se utilizan como la fase sólida. Por "partícula" o "micro partícula" o "nano partícula" o "perla" o "microperla" o "microesfera" en la presente se entiende la materia de una micropartícula que tiene cualquiera de una variedad de formas o tamaños. La forma por lo general puede ser esférica pero no necesita ser esférica, puede ser, por ejemplo, cilindrica o poliédrica. Como podrán apreciar aquellos con experiencia en la técnica, las partículas pueden comprender una amplia variedad de materiales que dependen de su uso, que incluye, pero sin limitación, almidón reticulado, dextranos, celulosa, proteínas, polímeros orgánicos que incluyen polímeros de estireno tales como poliestireno y metilestireno así como también otros co-polímeros de estireno, plásticos, vidrio, cerámicos, polímeros acrílieos, materiales magnéticamente sensibles, coloides, solución de torio, grafito de carbono, dióxido de titanio, nylon, látex, y TEFLON . Véase por ej . , "Microsphere Detection Guide" de Bangs Laboratories, Fishers, IN.

Los anticuerpos anti-KIR2DLl , KIR2DL2 , y KIR2DL3 descritos en la presente- se pueden adjuntar a cualquiera de las formas de sustratos descritos en la presente (por ej . , perla, caja, columna, cilindro, disco, placa (por ej . , placa de vidrio, placa de PETRI) , fibra, película, filtro, placa de microtitulación (por ej . , placa de microtitulación de 96 pocilios), rasqueta de hojas múltiples, red, pelet, plato, anillo, barra, rollo, lámina, deslizador, rasqueta, bandeja, tubo, o vial) . En particular, las partículas o perlas pueden ser un componente de un material gelificante o pueden ser componentes separados tales como perlas de látex hechas de una variedad de plásticos sintéticos (por ej . , poliestireno) . La etiqueta (por ej., estreptavidina) puede estar unida a un sustrato (por ej . , perla).

COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS Una "composición farmacéutica" se refiere a una composición química o biológica adecuada para su administración a un mamífero. Tales composiciones pueden estar formuladas específicamente para su administración a través de una o más de un número de vías, que incluyen pero sin limitación bucal, epicutánea, epidural, inhalación, intraarterial , intracardial , intracerebroventricular, intradérmica, intramuscular, intranasal, intraocular, intraperitoneal , intraespinal , intratecal, intravenosa, oral, parenteral, rectal a través de un enema o supositorio, subcutánea, subdérmica, sublingual, transdérmica, y • transmucosal . En adición, la administración se puede llevar a cabo por medio de una inyección, polvo, líquido, gel, gotas, u otros medios de administración.

Un "excipiente farmacéutico" o un "excipiente aceptable para uso farmacéutico" es un portador, normalmente un líquido, en el que se formula un agente terapéutico activo. En una modalidad de la invención, el agente terapéutico activo es un anticuerpo humanizado descrito en la presente, o uno o más fragmentos del mismo. El excipiente por lo general no proporciona actividad farmacológica alguna a la formulación, si bien puede proporcionar estabilidad química y/o biológica, y características de liberación. Se pueden hallar formulaciones representativas, por ejemplo, en Grennaro (2005) [Ed.] Remington: The Science and Practice of Pharmacy [21ra Ed.] Las composiciones farmacéuticas en forma típica deben ser estériles y estables bajo las condiciones de fabricación y almacenamiento. La invención contempla que la composición farmacéutica está presente en forma liofilizada. La composición puede estar formulada como una solución, microemulsión, liposoma, u otra estructura ordenada adecuada para una alta concentración de fármaco. El portador puede ser un solvente o medio de dispersión que contenga, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilen glicol, y polietilen glicol líquido) , y mezclas . adecuadas de los mismos. La .invención además contempla .la. inclusión de un estabilizador en la composición farmacéutica.

Los anticuerpos anti -KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 descritos en la presente pueden estar formulados en composiciones farmacéuticas de varias formas de dosificación. Para preparar las composiciones farmacéuticas de la invención, se puede mezclar exhaustivamente al menos un KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 como el ingrediente activo con portadores y aditivos apropiados de acuerdo con técnicas muy conocidas para aquellos con experiencia en la técnica de formulaciones farmacéuticas. Véase Grennaro | (2005) [Ed.] Remington: The Science and Practice of Pharmacy [21ra Ed.] . Por ejemplo, los anticuerpos descritos en la presente pueden estar formulados en solución salina de fosfato tamponada con pH 7,2 y se pueden suministrar como una solución líquida incolora clara de 5,0 mg/ml.

En forma similar, las composiciones para preparaciones líquidas incluyen soluciones, emulsiones, dispersiones, suspensiones, jarabes, y elíxires, con portadores y aditivos adecuados que incluyen pero sin limitación agua, alcoholes, aceites, glicoles, conservantes, agentes saborizantes , agentes colorantes, y agentes de suspensión. Las preparaciones típicas para la administración parenteral comprenden el ingrediente activo con un portador tal como agua estéril o aceite aceptable para uso parenteral que incluye. .......pero -.·.·.¦ sin limitación polietilen glicol, polivinilpirrolidona , lecitina, aceite de maní o aceite de sésamo, también se pueden incluir otros aditivos para auxiliar la solubilidad o conservación. En el caso de una se puede liofilizar hasta un polvo y luego reconstituir inmediatamente antes del uso. Para dispersiones y suspensiones, los portadores y aditivos apropiados incluyen gomas acuosas, celulosas, silicatos, u aceites.

, Para cada una de las modalidades mencionadas, los anticuerpos anti -KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 descritos en la presente se pueden administrar por ¡medio de una variedad de formas de dosificación. Se contempla cualquier forma de dosificación aceptable para uso biológico conocida para aquellos con experiencia ordinaria en la técnica, y las combinaciones de las mismas. Los ejemplos de tales formas de dosificación incluyen, pero sin limitación, polvos reconstituibles , elíxires, líquidos, soluciones, suspensiones, emulsiones, polvos, gránulos, partículas, micropartículas , gránulos dispersables , obleas, inhaladores, inhaladores en aerosol, parches, inhaladores de partículas, implantes, implantes de depósito, inyectables (que incluyen subcutáneas, intramusculares, intravenosas, e intradérmicas) , infusiones, y combinaciones de las mismas.

En varios casos, se preferirá incluir agentes isotónicos, por ej . , azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol, o cloruro, de sodio en la composición.. La absorción prolongada de las composiciones inyectables se , uede lograr por medio de la inclusión en la composición de un agente que demora la absorción, por ej . , sales de monoestearato y gelatina. Además, los compuestos descritos en la presente pueden estar formulados en una formulación de liberación con tiempo, por ej., en una composición que incluye un polímero de liberación lenta. Los anticuerpos anti -KIR2DL1 , KIR2DL2 , y KIR2DL3 descritos en la presente se puede preparar con portadores que protegerán el compuesto contra una liberación rápida, tal como una formulación de liberación controlada, que incluye implantes y sistemas de administración microencapsulados . Se pueden utilizar polímeros biodegradables y biocompatibles , tales como etilen vinil acetato, polianhídridos , ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres , ácido poliláctico y copolímeros pplilácticos poliglicólicos (PLG) . Varios métodos para la preparación de tales formulaciones son conocidos por aquellos con experiencia en la técnica.

También se pueden incorporar en las composiciones compuestos activos suplementarios.

De acuerdo con lo señalado tales composiciones en forma adicional pueden comprender un antígeno deseado, por ej . , un antígeno tumoral u otros compuestos inmuno moduladores tales como agonistas de receptores similares a Toll, interferón de tipo 1. tas como ,-interferones alfa y beta y agonistas CD40 tales como anticuerpos CD40 y fragmentos de anticuerpos agonísticos, con preferencia anticuerpos agonísticos CD40 anti-humanos y fragmentos de anticuerpos u otros inmunopotenciadores o supresores tales como proteínas de fusión PD-L1, PD-L2 , CTLA4 y anticuerpos específicos a los mismos .

Las composiciones que comprenden los anticuerpos anti-KIR2DL1, KIR2DL2 , y KIR2DL3 descritos en la presente pueden además comprender un antígeno u otro agonista inmune. El antígeno se puede administrar en una cantidad que, en combinación con los otros componentes de la combinación, es efectivo para generar una respuesta inmune contra el 5 antígeno. Por ejemplo, el antígeno se puede administrar en una cantidad de aproximadamente 100 ug/kg a aproximadamente 100 mg/kg. En algunas modalidades, el antígeno se puede administrar en una cantidad de aproximadamente 10 ug/kg a aproximadamente 10 mg/kg. En algunas modalidades, el 10 antígeno se puede administrar en una cantidad de aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 5 mg/kg. La cantidad particular del antígeno que constituye una cantidad efectiva para generar una respuesta inmune, sin embargo, depende hasta cierto punto de ciertos factores 15 tales como, por ejemplo, el antígeno particular que se administra; el agonista particular que se administra y la ":·'"·' - cantidad del mismo; el estado del sistema, inmune; el método y el orden de administración del agonista y el antígeno; la especie en la se administra la formulación; y el resultado 20 terapéutico deseado. Por consiguiente, generalmente no es práctico exponer la cantidad que constituye una cantidad efectiva del antígeno. Aquellos con experiencia ordinaria en la técnica, sin embargo, pueden determinar fácilmente la cantidad apropiada con la debida consideración de tales 25 factores .

Portadores Aceptables para Uso Farmacéutico I Un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 se puede combinar con uno o más portadores (diluyentes, excipientes, y similares) y/o adyuvantes apropiados para una o más vías de administración pretendidas para proporcionar composiciones que son aceptable para uso farmacéutico.

Los anticuerpos anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 se pueden, por ejemplo, mezclar con lactosa, sacarosa, polvos (por ej . , polvo de almidón), ésteres de celulosa de ácidos alcanoicos, ácido esteárico, talco, estearato de magnesio, óxido de magnesio, sales de sodio y calcio de ácidos fosfórico y sulfúrico, acacia, gelatina, alginato de sodio, polivinil-pirrolidina, y/o alcohol polivinílico, y en forma opcional se puede comprimir o encapsular para su administración convencional. En forma alternativa, un anticuerpo anti-KIR2DL1, 2 y/o 3 se puede disolver en solución salina, agua, polietilen glicol, propilen glicol, soluciones- coloidales de carboximetil celulosa, etanol , aceite de maíz, aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de sésamo, goma de tragacanto, y/o varios amortiguadores. Otros portadores, adyuvantes, y modos de administración son muy conocidos en la técnica farmacéutica. Un portador o diluyente puede incluir un material de retraso de tiempo, tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo solo o con una cera, u otros materiales funcionalmente similares.

Los portadores aceptables para uso farmacéutico por lo general incluyen cualquiera y todos los solventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos , agentes isotónicos y retardadores de absorción, y similares adecuados que son fisiológicamente compatibles con un anticuerpo anti- IR2DLl , 2 y/o 3. Los ejemplos de portadores aceptables para uso farmacéutico incluyen agua, solución salina, solución salina tamponada con fosfato, dextrosa, glicerol, etanol y similares, así como también combinaciones de cualquiera de los mismos. En muchos casos, puede ser deseable incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol o cloruro de sodio en tal composición. Las sustancias aceptables para uso farmacéutico tales como agentes humectantes o cantidades menores de sustancias auxiliares tales como agentes humectantes o agentes emulsionantes, conservantes o•amor iguadores , que pueden potenciar en forma deseada la vida útil o la eficacia de anticuerpo Anti-KIR, la composición relacionada, o la combinación. La adecuación para los¦ portadores y otros componentes de composiciones farmacéuticas se determina con base en la falta de impacto negativo significativo en las propiedades biológicas deseadas del anticuerpo.

Las composiciones de anticuerpo antÍ-KIR2DL1 , 2 y/o 3, composiciones relacionadas, y combinaciones de acuerdo con la invención se pueden presentar en una variedad de formas adecuadas. Tales formas incluyen, por ejemplo, formas de dosificación líquidas, semi-sólidas y sólidas, tales como soluciones líquidas (por ej . , soluciones inyectables o de infusión), dispersiones o suspensiones, emulsiones, microemulsiones, comprimidos, pildoras, polvos, liposomas, dendrímeros y otras nanopartículas (Véase, por ej . , Baek efc al., Methods Enzymol . 2003; 362:240-9; Nigavekar et al., Pharm Res. 2004 Mar; 21 (3) : 476-83) , micropartículas , y supositorios. Las formulaciones y sales se describen en forma adicional en O2006/072625.

En forma típica, se utilizan composiciones en forma de soluciones inyectables de infusión, tales como las composiciones similares a aquellas utilizadas para la inmunización pasiva de humanos con otros anticuerpos, para la administración de anticuerpos anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 de la invención. Un modo.. típico de administración. de . l.as composiciones de anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 es por administración parenteral (por ej . , administración intravenosa, subcutánea, intraperitoneal , y/o intramuscular) . En un aspecto, un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 se administra a un paciente humano por medio de infusión o inyección intravenosa.

Una composición para uso farmacéutico también puede incluir varios diluyentes, rellenadores , sales, amortiguadores, detergentes (por ej., un detergente no iónico, tal como Tween-80) , estabilizadores (por ej . , azúcares o aminoácidos libres de proteínas), conservantes, fijadores de tejido, solubilizadores , y/o otros materiales adecuados para la inclusión en una composición para uso farmacéutico. Los ejemplos de componentes adecuados también se describen en, por ej . , Berge et al., J. Pharm. Sci., 6661), 1-19 (1977); ang and Hanson, J. Parenteral . Sci. Tech: 42, S4-S6 (1988); las Patentes de los Estados Unidos Núms . 6.165.779 y 6.225.289. Tal composición farmacéutica también puede incluir conservantes, antioxidantes, u otros aditivos para aquellos con experiencia en la técnica. Los portadores aceptables para uso farmacéutico adicionales son conocidos en la técnica. Véase, por ej., las referencias en WO 2006/072625.

Aquellos con experiencia en la técnica serían capaces de determinar una - -dosificación .efectiva y frecuencia de administración a través de experimentación rutinaria, por ejemplo por medio de la guía de la revelación de la presente y las enseñanzas en Goodman, et al. (2011) Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics [12va Ed.] ; Howland, et al. (2005) Lippincott's Illustrated Reviews : Pharmacology [2da Ed.]; y Golan, (2008) Principies of Pharmacology: The Pathophysiologic Basis of Drug Therapy [2da Ed.]. Véase, también, Grennaro (2005) [Ed.] Remington: The Science and Practice of Pharmacy [21ra Ed.] Vías de Administración Las composiciones descriptas en la presente se puede administrar en cualquiera de las siguientes vías: bucal, 5 epicutánea, epidural, infusión, inhalación, intraarterial , intracardial , intracerebroventricular, intradérmica , intramuscular, intranasal, intraocular, intraperitoneal , intraespinal , intratecal, intravenosa, oral, parenteral, pulmonar, rectal a través de un enema o supositorio, 0 subcutánea, subdérmica, sublingual, transdérm.ica , y transmucosal . En adición, la administración se puede llevar a cabo por medio de una inyección, polvo, líquido, gel, gotas, u otros medios de administración. Las vías de administración preferidas son infusión o inyección intravenosa. La 5 administración puede ser local, donde la composición se administra directamente, cerca de, en la ubicación de, en las ·.·¦ - cercanías de, en, alrededor de, o en la . proximidad de, los sitios de la enfermedad, por ej . , localizada, o sistémica, donde la composición se administra al paciente y pasas a 0 través del cuerpo en forma amplia, alcanzando de ese modo los sitios de la enfermedad. La administración local {por ej . , inyección) se puede lograr por medio de la administración a la célula, tejido, órgano, y/o sistema de órganos, que abarca y/o es afectado por la enfermedad, y/o donde los signos y/o 5 síntomas de la enfermedad son activos o es más probable que ocurran {por ej . , sitio del tumor) . La administración puede ser tópica con un efecto local, la composición sje aplica directamente donde se desea su acción {por ej., sitio de inflamación o dolor) .

Para cada una de las modalidades mencionadas, los compuestos se pueden administrar por medio de una variedad de formas de dosificación de acuerdo con lo conocido en la técnica. Se contempla cualquier forma de dosificación aceptable para uso biológico conocida para aquellos con experiencia ordinaria en la técnica, y las combinaciones de las mismas. Los ejemplos de tales formas de dosificación incluyen, pero sin limitación, comprimidos masticables, comprimidos de rápida disolución, comprimidos efervescentes, polvos reconstituibles , elíxires, líquidos, soluciones, suspensiones, emulsiones, comprimidos, comprimidos de capas múltiples, comprimidos de capa doble, cápsulas, cápsulas de gelatina .. blanda, cápsulas . de .gelatina dura, comprimidos oblongos, comprimidos para chupar, comprimidos para chupar masticables, perlas, polvos, gomas, gránulos, partículas, micropartículas , gránulos dispersables , obleas, irrigadores, supositorios, cremas, tópicos, inhaladores, inhaladores en aerosol, parches,- inhaladores de partículas, implantes, implantes de depósito, ingeribles, inyectables (que incluyen subcutáneas, intramusculares, intravenosas, e intradérmicas) , infusiones, y combinaciones de las mismas.

Otros compuestos que se pueden incluir por mezcla son, por ejemplo, ingredientes médicamente |inertes (por ej . , diluyentes sólidos y líquidos) , tales como lactosa, dextrosa, sacarosa, celulosa, fosfato de almidón o calcio para comprimidos o cápsulas, aceite de oliva u oleato de etilo para cápsulas blandas y agua o aceite vegetal para suspensiones o emulsiones; agentes lubricantes tales como sílice, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio o calcio y/o polietilen glicoles; agentes gelificantes tales como arcillas coloidales; agentes espesantes tales como goma tragacanto o alginato de sodio, agentes aglutinantes tales como almidones, gomas arábigas, gelatina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o polivinilpirrolidona; agentes desintegrantes tales como almidón, ácido algínico, alginatos o glicolato sódico de almidón; mezclas efervescentes; colorantes; edulcorantes; agentes humectantes tales como • leci.ti a, polisorbatos o laurilsulfatos ; y otros ingredientes accesorios aceptables para uso terapéutico, tales como humectantes, conservantes, amortiguadores y antioxidantes, que son aditivos conocidos para tales formulaciones.

Las dispersiones líquidas para administración oral pueden ser jarabes, emulsiones, soluciones, o suspensiones. Los jarabes pueden contener como un portador, por ejemplo, sacarosa o sacarosa con glicerol y/o manitol y/o sorbitol . Las suspensiones y las emulsiones pueden contener un portador, por ejemplo una goma natural, goma agar, alginato de sodio, pectina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa, o polivinil alcohol.

En modalidades adicionales, la presente invención proporciona kits que incluyen uno o más recipientes que comprenden unidades de dosificación farmacéutica que comprenden una cantidad efectiva de uno o más anticuerpos y los fragmentos de los mismos de la presente invención. Los kits pueden incluir instrucciones, direcciones, etiquetas, información de comercialización, advertencias, o panfletos de información.

Dosificaciones La cantidad de los anticuerpos anti -KIR2DL1 , KIR2DL2, y KIR2DL3 descritos en la presente en una composición terapéutica de acuerdo con cualquier modalidad de esta invención puede variar de acuerdo con factores tales como el estado de la enfermedad., la edad, el género, . el peso , la historia del paciente, los factores de riesgo, la predisposición a la enfermedad, la vía de administración, el régimen de tratamiento pre-existente {por ej . , interacciones posibles con otros medicamentos), y el peso del individuo. Los regímenes de dosificación se pueden ajustar para proporcionar la respuesta terapéutica óptima. Por ejemplo, se puede administrar un único bolo, se pueden administrar varias dosis divididas a lo largo del tiempo, o la dosis se puede reducir o aumentar en forma proporcional de acuerdo con lo indicado por las exijgencias de la situación terapéutica.

Es especialmente ventajoso formular composiciones parenterales en formas de unidad de dosificación para una facilidad de administración y una uniformidad de dosificación. La forma de dosificación unitaria de acuerdo con lo utilizado en la presente se refiere a unidades físicamente diferenciadas adecuadas como dosificaciones unitarias para los sujetos mamíferos a tratarse; cada unidad contiene una cantidad predeterminada de anticuerpos, y los fragmentos de los mismos, se pueden calcular para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el portador farmacéutico requerido. La descripción para las formas de dosificación unitaria de la invención son dictadas por y son directamente dependientes de las características únicas de los anticuerpos, y los fragmentos de los mismos, y el efecto terapéutico ..· particular ., a lograrse, y las limitaciones inherentes en la técnica de la composición de tales anticuerpos, y los fragmentos de los mismos, para el tratamiento de sensibilidad en individuos. En el uso terapéutico para el tratamiento de afecciones en mamíferos (por' ej . , humanos) para los cuales son efectivos los anticuerpos y los fragmentos de los mismos de la presente invención o una composición farmacéutica apropiada de los mismos, los anticuerpos y los fragmentos de los mismos de la presente invención se pueden administrar en una cantidad efectiva.| Las dosificaciones de acuerdo con lo adecuado para esta invención pueden ser una composición, una composición farmacéutica o cualquier otra composición descripta en la presente.

La dosificación se puede administrar como una dosis única, una. dosis doble, una dosis triple, una dosis cuádruple, y/o una dosis quíntuple. Las dosificaciones se pueden administrar en forma singular, simultánea, y secuencial.

La forma de dosificación puede ser cualquier forma de liberación conocida para aquellos con experiencia ordinaria en la técnica. Las composiciones de la presente invención pueden estar formuladas para proporcionar una liberación inmediata del ingrediente activo o una liberación sostenida o controlada del ingrediente activo. En una preparación de liberación sostenida o liberación controlada, la liberación del ingrediente activo puede suceder a una velocidad tal que los niveles sanguíneos se mantienen dentro un intervalo terapéutico pero por debajo de los niveles tóxicos a lo largo de un período de tiempo extendido (por e j . , 4 a 24 horas) . Las formas de dosificación preferidas incluyen liberación inmediata, liberación extendida, liberación por pulso, liberación variable, liberación controlada, liberación temporizada, liberación sostenida, liberación demorada, de larga duración, y combinaciones de las mismas, y son conocidas en la técnica.

De acuerdo con lo definido en la presente, una cantidad efectiva para uso terapéutico de proteína o polipéptido (es decir, una dosificación efectiva) oscila de aproximadamente 0,001 a 30 mg/kg de peso corporal, con preferencia de aproximadamente 0,01 a 25 mg/kg de peso corporal, con mayor preferencia de aproximadamente 0,1 a 20 mg/kg de peso corporal , e incluso con mayor preferencia de aproximadamente 1 a 10 mg/kg, 2 a 9 mg/kg, 3 a 8 mg/kg, 4 a 7 mg/kg, o 5 a 6 mg/kg de peso corporal. Aquellos con experiencia en la técnica apreciarán que ciertos factores pueden influenciar la dosificación requerida para tratar un sujeto en forma efectiva, que incluyen pero sin limitación la severidad de la enfermedad o trastorno, los tratamientos previos, el estado de salud general y/o la edad del sujeto, y otras enfermedades presentes. Además, el tratamiento de un sujeto con una cantidad efectiva para uso terapéutico de una proteína, polipéptido, o anticuerpo puede incluir un único tratamiento o, con preferencia, puede incluir una serie de tratamientos.

En un ejemplo preferido, un sujeto se trata con un anticuerpo, proteína, o polipéptido en el intervalo de aproximadamente 0,1 a 20 mg/kg de peso corporal, una vez por semana durante de aproximadamente 1 a 10 semanas, con preferencia entre 2 y 8 semanas, con mayor preferencia de aproximadamente 3 a 7 semanas, e incluso con mayor preferencia durante aproximadamente 4, 5, o 6 semanas. También se podrá apreciar que la dosificación efectiva del anticuerpo, proteína, o polipéptido utilizado para el tratamiento puede aumentar o disminuir a lo largo del transcurso de un tratamiento particular. Las modificaciones en la dosificación pueden surgir de y ser evidentes a partir de los resultados de ensayos de diagnóstico de acuerdo con lo descrito en la presente.

Se podrá apreciar que la actividad farmacológica de las composiciones se puede monitorear por el uso de modelos farmacológicos estándares que son conocidos en la técnica. Además, se apreciará que las composiciones que comprenden un anticuerpo anti -KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 , o fragmento de unión a antígeno del mismo, se pueden incorporar o encapsular en una matriz de polímeros adecuada o membrana para su administración específica a un sitio, o se .pueden funcionalizar con agentes de dirección específica capaces de su administración específica a un sitio. Estas técnicas, así como también otras técnicas de administración de fármacos son muy conocidas en la técnica. La determinación de las dosificaciones óptimas para una situación particular está dentro de las capacidades de aquellos con experiencia en la técnica. Véase, por ej . , Grennaro (2005) [Ed.] Remington: The Science and Practice of Pharmacy [21ra Ed.] TRATAMIENTO DE TRASTORNOS INFLAMATORIOS Y AUTOINMUNES La invención proporciona métodos terapéuticos para tratar o prevenir un trastorno inflamatorio o autoinmune en individuos que sufren o son susceptibles to un trastorno inflamatorio o autoinmune, donde el tratamiento involucra anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 composiciones de anticuerpo, y/o composiciones relacionadas.

Por ejemplo, se han informado niveles elevados de expresión de KIR2DL2 en pacientes que sufren de enfermedad intestinal inflamatoria (IBD) y enfermedad de Crohn. Véase ilson, et al. (2010) Human Immunol . 71(3) : 293-7.

Los anticuerpos KIR2DL1, 2 y/o 3 descritos en la presente se pueden utilizar en composiciones, usos, y métodos para el tratamiento de trastornos inflamatorios y autoinmunes mediados por las células T tales como lupus eritematoso sistémico, granulomatosis de Wegener, hepatitis autoinmune, enfermedad de . Crohn, escleroderma, colitis. ..ulcerativa, síndrome de Sjógren, uveítis, diabetes mellitus tipo 1, miocarditis, fiebre reumática, espondilitis anquilosante, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, o psoriasis.

Los anticuerpos KIR2DL1, 2 y/o 3 descritos en la presente se pueden utilizar en composiciones, usos, y métodos para el tratamiento de enfermedades o trastornos autoinmunes. Los ejemplos de enfermedades o trastornos autoinmunes incluyen, pero sin limitación Síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) , atrofia esplénica adquirida, uveítis anterior aguda, encefalomielitis diseminada aguda (ADEM) , artritis gotosa aguda, leucoencefalitis hemorrágica necrotizante aguda, sinusitis aguda o crónica, meningitis purulenta aguda (u otros trastornos inflamatorios del sistema nervioso central) , inflamación grave aguda, enfermedad de Addison, adrenalitis, diabetes mellitus de comienzo adulto (diabetes Tipo II) , hipoparatiroidismo idiopático de comienzo adulto (AOIH) , Agammaglobulinemia, agranulocitosis , vasculitides , que incluye a vasculitis (que incluye vasculitis de grandes vasos (que incluye polimialgia reumática y células gigantes (Takayasu) artritis) , afecciones alérgicas, dermatitis por contacto, dermatitis alérgica, angiítis granulomatosa alérgica, trastornos de hipersensibilidad alérgica, neuritis alérgica, reacción alérgica, alopecia areata, alopecia totalis, Síndrome de ¦ .Alport (por .·.,·ejemplo,. ¦< alveolitis alérgica y alveolitos fibrosante) , enfermedad de Alzheimer, amiloidosis, esclerosis lateral amilotrófica (ALS, enfermedad de Lou Gehrig) , un trastorno relacionado con eosinófilo (por ejemplo, eosinofilia) , anafilaxis, espondilitis anquilosante, angiectasia, nefritis mediada por anticuerpo, nefritis anti- GBM/ánti-TBM, enfermedades mediadas por el complejo de antigeno-anticuerpo, enfermedad de la membrana basal antiglomerular, síndrome de anticuerpos anti-fosfolípido, síndrome antifosfolípido (APS) , aftas, estomatitis aftosa, anemia aplásica, arritmia, arteriosclerosis , trastornos arterioscleróticos , artritis (por ejemplo, artritis reumatoide tales como artritis aguda, artritis reumatoide crónica), artritis crónica progrediente , artritis deformante, ascariasis, aspergiloma (o granulomas que contienen eosinófilos) , aspergilosis , aspermiogenesia, asma (por ejemplo, asma bronquia y asma autoinmune, telangiectasia ataxia, angiectasia, esclerosis atáxica, aterosclerosis , autismo, angioedema autoinmune, anemia aplásica autoinmune, gastritis atrófica autoinmune, diabetes autoinmune, enfermedad autoinmune del testículo y ovario que incluye orquitis autoinmunes y ooforitis, trastornos autoinmunes asociados con enfermedad del colágeno, disautonomía autoinmune, enfermedad auditiva autoinmune (por ejemplo, enfermedad de oído interno autoinmune (AGED) ) , enfermedades endocrinas autoinmunes que incluyen tiroiditis tales como tiroiditis autoinmune, síndrome enteropático autoinmune, falla gonadal autoinmune, pérdida auditiva autoinmune, hemolisis autoinmune, hepatitis autoinmune, trastorno hepatológico autoinmune, hiperlipidemia autoinmune, inmunodeficiencia autoinmune, enfermedad del oído interno autoinmune (AIED) , miocarditis autoinmune, neutropenia autoinmune, pancreatitis autoinmune, polinedocrinopatías autoinmunes, síndrome poliglandular autoinmune tipo I, retinopatía autoinmune, púrpura trombocitopenia autoinmune (ATP) , enfermedad tiroidea autoinmune, urticaria autoinmune, enfermedades gastrointestinales mediadas autoinmunes, neuropatía axonal & neuronal, enfermedad de Balo, enfermedad de Behcet, lesión por reperfusión- isquemia y familiar, angiítis linfocítica benigna, enfermedad de Berger (neuropatía por IgA) , pulmón del cuidador de palomas, ceguera, enfermedad de Boeck, bronquiolitis obliterante (no-trasplante) vs NSIP, bronquitis, aspergilosis bronconeumónica, síndrome de Bruton, penfigoide bulloso, síndrome de Caplan, cardiomiopatía, isquemia cardiovascular, síndrome de Castleman, enfermedad celíaca, sprue celíaco (enteropatía de gluten) , degeneración cerebelar, isquemia cerebral, y enfermedad acompañante de la vascularización, enfermedad de Chagas, canalopatías (por ejemplo, epilepsia), canalopatías del SNC, coriorretinitis , coroiditis, un trastorno hematológico autoinmune, hepatitis crónica activa o hepatitis crónica activa autoinmune, dermatitis por contacto crónica, neumonía eosinofilia crónica, síndrome de fatiga crónica, hepatitis crónica, neumonitis hipersensible crónica, artritis inflamatoria crónicas, polineuropatías desmielinizante inflamatoria crónica (CIDP) , inflamación intratable crónica, candidiasis mucocutánea crónica, neuropatía crónica (por ejemplo, polineuropatía IgM o neuropatías mediadas por IgM) , enfermedad respiratoria obstructiva crónica, enfermedad inflamatoria pulmonar crónica, osteomielitis multifocal recurrente crónica (CRMO) , tiroiditis crónica (tiroiditis de Hashimoto) o tiroiditis subaguda, síndrome de Churg-Strauss , penfigoide cicatricial/penfigoide mucoso benigno, trastornos inflamatorios del SNC, vasculitis de SNC, enfermedad celíaca, síndrome de Cogan, enfermedad de aglutinina fría, colitis poliposa, colitis tales como colitis ulcerativa, colitis ulcerosa, colitis colagenosa, afecciones que involucran la infiltración de células T y respuestas inflamatorias crónicas, bloqueo cardíaco congénita, infección de rubéola congénita, anemia anemia positiva a Coomb, enfermedad arterial coronaria, miocarditis de Coxsackie, síndrome CREST (calcinosis, fenómeno de Raynaud) , enfermedad de Crohn, crioglobulinemia , síndrome de Cushing, ciclitis (por ejemplo, ciclitis crónica, ciclitis heterocrónica, iridociclitis , o ciclitis de Fuch) , fibrosis tóxica, toxicidad inducida por citoquina, sordera, artritis degenerativa, enfermedades desmielinizantes (por ejemplo, enfermedades desmielinizantes autoinmunes) , neuropatías desmielinizantes, dengue, dermatitis herpetiforme y dermatitis atópica, dermatitis que incluye dermatitis por contacto, dermatomiositis , dermatosis con componentes agudos inflamtorios , enfermedad de Devic (neuromielitis óptica) , trastorno de arterias grandes diabético, neuropatía diabética, retinopatía diabética, anemia de Diamond Blackfan, fibrosis pulmonar intersticial difusa, cardiomiopatía difusa, lupus discoide, enfermedades que involucran diapédesis leucocitaria , síndrome de Dressler, contractura de Dupuytren, infección con echovirus, eczema que incluye eczema alérgico o atópico, encefalitis tal como encefalitis de Rasmussen y encefalitis límbico y/o tronco del encéfalo, encefalimielitis (por ejemplo, encefalomielitis alérgica o encefalomielitis alérgica y experimental (EAE) ) , hiperplasia endoarterial , endocarditis, oftalmopatía endocrina, endometriosis , fibrosis endomiocárdica , endoftalmia facoanafiláctica , endoftalmitis , enteritis alérgica, síndrome eosinofilia-mialgia, faciítis eosinofílica, gueratoconjuntivitis epidémica, epidermolisis bullosa adquirida (EBA) , episclera, episcleritis , infección con virus de Epstein-Barr , , eritema elevatum et diutinum, eritema multiforme, eritema nodoso leproso, eritema nodoso, eritroblastosis fetal, dismotilidad. . esofágica, crioglobulinemia mixta esencial, etmoide, síndrome de Evan, encefalomielitis alérgica experimental (EAE) , deficiencia del Factor VIII, pulmón de granjero, fiebre reumática, síndrome de Felty, fibromialgia, alveolitos fibrosante, filariasis, glomerulosclerosis segmentaria focal (FSGS) , intoxicación alimentaria, atrofia gástrica frontal, artritis de células gigantes (artritis temporal) , hepatitis de células gigantes, polimialgia de células gigantes, glomerulonefritis , glomerulonefritis (GN) con y sin síndrome nefrótico glomerulonefritlis aguda o crónica (por ejemplo, GN primaria) , síndrome de Goodpasture, artritis gotosa, síndromes asociados con transfusión de granulocitos , granulomatosis que incluye granulomatosis linfomatoide , granulomatosis con poliangiítis (GPA) , uveítis granulomatosa, enfermedad de Grave, síndrome de Guillain-Barre , psoriasis guttata, hemoglobinuria paroxística, enfermedad de Hamman-Rich, enfermedad de Hashimoto, encefalitis de Hashimoto, tiroiditis de Hashimoto, hemocromatosis , anemia hemolítica o anemia hemolítica inmune que incluye anemia hemolítica autoinmune (AIHA) , anemia hemolítica, hemofilia A, púrpura de Henoch-Schonlein, Herpes gestacional, infección con el virus de inmunodeficiencia humana (VIH) , hiperalgesia, hipogammaglobulinemia, hipogonadismo , hipoparatiroidismo , diabetes insípida idiopática, parálisis facial idiomática, hipotiroidismo idiopático, nefropatía IgA idiopática, GN membranosa idiomática o neuropatía membranosa idiopática, síndrome nefrítico idiopático, fibrosis pulmonar idiopática, sprue idiopático, púrpura trombocitopénica idiopática (ITP), nefropatía IgA, enfermedades mediadas por IgE {por ejemplo, anafilaxis y rinitis alérgica y atópica) , enfermedad esclerosante IgG4, ileítis regional, por complejo inmune, respuestas inmunes asociadas con hipersensibilidad aguda y retardada mediada por citoquinas y linfocitos T, GN inmunomediad , lipoproteínas inmunorregulatoria, que incluye síndrome de distrés respiratorio adulto o agudo (ARDS) , miositis con cuerpo de inclusión, artritis infecciosa, infertilidad debido a los anticuerpos anti-espermatozoides , inflamación del total o parte de uvea, enfermedad intestinal inflamatoria (IBD) enfermedades cutáneas hiperproliferativas inflamatorias, miopatía inflamatoria, diabetes insulinodependiente (tipo 1), insulitis, cistitis intersticial, enfermedad pulmonar intersticial, fibrosis pulmonar intersticial, iritis, trastorno de reprofusión isquémica, inflamación de articulaciones, artritis juvenil, dermatomiositis juvenil, diabetes juvenil, diabetes mellitus de inicio juvenil (Tipo I) , que incluye diabetes insulinodependiente pediátrica (IDD ) , artritis reumatoide de inicio juvenil, síndrome de Kawasaki, queratoconjuntivitis seca, quipanosomiasis , síndrome de Lambert-Eaton, leishmaniasis , lepra, leucopenia-, ...deficiencia de adhesión leucocitaria, vasculitis leucocitoclástica, leucopenia, liquen plano, liquen escleroso, conjuntivitis leñosa, dermatosis IgA lineal (LAD) , síndrome de Loffler, hepatitis lupoide, lupus (que incluye nefritis, cerebritis, pediátrico, no renal, extrarrenal, discoide, alopecia), Lupus (SLE) , lupus eritematoso diseminado, artritis de Lyme, enfermedad de Lyme, neumonitis intersticial linfoide, malaria, infertilidad autoinmune masculina y femenina, vasculitis de vaso medio maxilar (que incluye enfermedad de Kawasaki y poliarteritis nodosa) , GN GN proliferativa membrano o membranosa (MPGN) , que incluye Tipo I y Tipo II, y GN rápidamente progresiva, GN membranosa (neuropatía 5 membranosa), enfermedad de Meniere, meningitis, colitis microscópica, poliangiítis microscópica, migraña, neuropatía de cambios mínimos, enfermedad del tejido conectivo mixto (MCTD). , mononucleosis infecciosa, úlcera de Mooren, enfermedad de Mucha-Habermann, neuropatía motora multifocal, 0 falla endocrina múltiple, síndrome de lesión orgánica múltiple tal como los secundarios a septicemia, trauma o hemorragia, síndrome de lesión orgánica múltiple, esclerosis múltiple (MS) tales como MS espino-óptica, esclerosis múltiple, paperas, trastornos musculares, miastenia gravis 5 tal como miastenia gravis asociada a timoma, miastenia gravis, miocarditis, miositis, narcolepsia, enterocolitis ·.·..· necrotizante, y colitis transmural y enfermedad intestinal inflamatoria autoinmune, vasculitis necrotizante, cutánea o por hipersensibilidad, síndrome lúpico neonatal (NLE) , 0 nefrosis, síndrome nefrótico, enfermedad neurológica, neuromielitis óptica (Devic) , neuromielitis óptica, neuromiotonía , neutropenia, lifocitosis no cancerosa, uveítis no granulamatosa , timoma no maligno, trastornos inflamatorios ocular y orbital, penfigoide cicatrizal ocular, ooforitis, 5 oftalmía simpática, síndrome opsoclonus mioclonus (OMS) , opsoclonus o síndrome opsoclonus mioclonus (OMS) , y neuropatía sensorial, neuritis óptica, orquitis granulomatosa, osteoartritis , reumatismo palindrómico, pancreatitis, pancitopenia, PANDAS (trastornos neuropsiquiátricos autoinmunes pediátricos con estreptococos,) , degeneración paraneoplásica, síndrome paraneoplásico, síndromes paraneoplásicos , que incluyen síndromes paraneoplásicos neurológicos (por ejemplo, síndrome de Lambert-Eaton miasténico o síndrome de Eaton-Lambert ) , enfermedades parasitarias s tales como leishmaniasis , hemoglobinuria paroxística nocturna (PNH) , síndrome de Parry Romberg, pars planitis (uveítis periférica) , síndrome de Parsonnage-Turner , infección con parvovirus, penfigoide bulloso y penfigoide de la piel, pénfigos que incluye pénfigo vulgar) , pénfigo eritematoso, pénfigo foliáceo, pénfigo mucus-menmbranoso penfigoide, pénfigos, úlcera péptica, parálisis periódica, : neuropatía periférica, encefalomielitis perivanosa, anemia perniciosa (anemia perniciosa) , anemia perniciosa, uveítis fagoantigénica . pneumonocirrosis , síndrome de POEMS, poliarteritis nodosa, Tipo I, II, & III, poliartritis crónica primaria, policondritis (por ejemplo, policondritis refractaria o recidivante) , enfermedad autoinmune poliendocrina , falla poliendocrina, síndromes poliglandulares (por ejemplo, síndromes poliglandulares autoinmunes (o síndromes de endocrinopa ía poliglandular) ) , polimialgia reumática, polimiositis , polimiositis/dermatomiositis , polineuropatías , poliradiculitis aguda, síndrome pos-cardiotomía, uveítis posterior, o uveítis autoinmune, síndrome de infarto posmiocárdico, síndrome pospericardiotomía , nefritis pos-estreptocócica , síndromes pos-vacunación, demencia presenil, cirrosis biliar primaria, hipotiroidismo primario, mixedema idiopático primario, linfocitosis primaria, que incluyen linfocitosis de células B monoclonales (por ejemplo, gamopatía monoclonal benigno y gammopatía monoclonal de significación no determinado, MGUS) , mixedema primario, MS progresiva primaria (PPMS) , y MS remitente-recidivante' (RRMS) , colangitis esclerosante primaria, dermatitis por progesterona, esclerosis sistémica progresiva, artritis proliferativa, psoriasis tales como psoriasis en placa, psoriasis, artritis psoriática, proteinosis alveolar pulmonar,, .eosinofilia por. infiltración pulmonar, anemia o aplasia de hematíes pura (PRCA) , aplasia de hematíes pura, sinusitis purulenta o no purulenta, psoriasis pustular y psoriasis de las uñas, pielitis, pioderma gangrenosa, tiroiditis de Quervain, fenómeno de Raynaud, artritis reactiva, aborto recurrente, reducción de la respuesta a la presión arterial, distrofia simpática refleja, sprue refractaria, enfermedad o síndrome de Reiter, policondritis recidivante, lesión por repercusión de tejidos miocárdicos u otros, lesión por reperfusión, síndrome de distrés respiratorio, síndrome de piernas inquietas, autoinmunidad retiniana, fibrosis retroperitoneal , síndrome de Reynaud, enfermedades reumáticas, fiebre reumática, reumatismo, artritis reumatoide, espondilitis reumatoide, infección con el virus de rubéola, síndrome de Sampter, sarcoidosis, esquistosomiasis , síndrome de Schmidt, SCID y enfermedades asociadas al virus Epstein-Barr, esclera, escleritis, esclerodactilia, escleroderma (que incluye escleroderma sistémica) , colangitis esclerosante, esclerosis diseminada, esclerosis tal como esclerosis sistémica, pérdida de audición sensoneural, espondiloartritis seronegativa, síndrome de Sheehan, síndrome de Shulman, silicosis, síndrome de Sjogren, autoinmunidad espermática & testicular, sinusitis esfenoide, síndrome de Stevens-Johnson, síndrome del hombre rígido (o persona rígida) , endocarditis bacteriana subaguda (SBE) , lupus eritematoso cutáneo subagudo, pérdida auditiva súbita.,, síndrome de Susac, corea de Sydenham, oftalmía simpática, lupus eritematoso sistémica (SLE) o lupus eritematoso sistémica (por ejemplo, SLE cutáneo) , vasculitis necrotizante sistémica, y vasculitis asociada ANCA, tales como vasculitis o síndrome de Churg-Strauss (CSS) ) , tabes dorsal, arteritis de Takayasu, telangiectasia, arteritis temporal/arteritis de células gigantes, tromboangitis ubiterans, trombocitopenia (desarrollado por ejemplo, por pacientes de infarto miocárdico) , que incluyen púrpura trombocitopénica trombótica (TTP) y trombocitopenia autoinmune o inmunomediada tales como púrpura trombocitopénica idiopática (ITP) que incluyen ITP crónica o aguda, púrpura trombocitopénica (TTP) , tirotoxicosis , lesión tisular, síndrome de Tolosa-Hunt, necrólisis epidérmico tóxico, síndrome del shock tóxico, reacción de transfusión, hipogammaglobulinemia transitoria de infancia, mielitis transversa, mielitis transversa, eosinofilia pulmonar tropical, tuberculosis, colitis ulcerativa, enfermedad del tejido conectivo no diferenciado (UCTD) , urticaria (por ejemplo, urticaria alérgica crónica y urticaria idiopática crónica, que incluye urticaria autoinmune crónica) , uveítis (por ejemplo, uveítis anterior) , uveorretinitis , valvulitis, disfunción vascular, vasculitis, artritis vertebral, dermatosis vesiculobullosa, vitiligo, granulomatosis de egener (actualmente denominada granulomatosis con poliangiítis (GPA)-, síndrome de Wiskott-Aldrich, o síndrome de hiper IgM ligada a x.

Los anticuerpos KIR2DL1, 2 y/o 3 descritos en la presente se pueden utilizar en composiciones, usos, y métodos para el tratamiento de afecciones inflamatorias y enfermedades inflamatorias.

Las afecciones inflamatorias y enfermedades inflamatorias, incluyen pero sin limitación enfermedades reumáticas (por ejemplo, artritis reumatoide, osteoartritis , artritis psoriática) espondiloartropatías (por ejemplo, espondilitis anquilosante, artritis reactiva, síndrome de Reiter) , artropatías cristalinas (por ejemplo, gota, pseudogota, enfermedad de depósito de pirofosfato de calcio) , esclerosis múltiple, enfermedad de Lyme, polimialgia reumática; enfermedades del tejido conectivo (por ejemplo, lupus' eritematoso sistémico, esclerosis sistémica, polimiositis , dermatomiositis , síndrome de Sjogren) vasculitis (por ejemplo, poliarteritis nodosa, granulomatosis de egener, síndrome de Churg-Strauss) ; afecciones inflamatorias que incluyen consecuencias de trauma o isquemia, sarcoidosis; enfermedades vasculares que incluyen enfermedad vascular aterosclerótica, aterosclerosis , y enfermedad oclusiva vascular (por ejemplo, aterosclerosis, enfermedad cardíaca isquémica, infarto miocárdico, accidente cerebrovascular, enfermedad vascular periférica) , y restenosis del stent vascular; enfermedades, oculares que incluyen uveítis, enfermedad corneana, iritis, iridociclitis y cataratas .

Las afecciones inflamatorias también incluyen, pero sin limitación reflujo ácido/acidez, acné, acné vulgar, alergias y sensibilidades, enfermedad de Alzheimer, asma, aterosclerosis y enfermedad oclusiva vascular (por ejemplo, ateroesclerosis , enfermedad cardíaca isquémica, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular, enfermedad vascular periférica) y restenosis del stent vascular, enfermedades autoinmunes, bronquitis, cáncer, carditis, cataratas, enfermedad celíaca, dolor crónico, prostatitis crónica, cirrosis, colitis, enfermedades del tejido conectivo (por ejemplo, lupus eritematoso sistémico, esclerosis sistémica, polimiositis , dermatomiositis , síndrome de Sjogren) , enfermedad corneana, enfermedad de Crohn, artropatías cristalinas (por ejemplo, gota, pseudogota, enfermedad del depósito de pirofosfato de calcio), demencia, dermatitis, diabetes, ojos secos, eczema, edema, enfisema, fibromialgia , gastroenteritis, gingivitis, glomerulonefritis , enfermedad cardíaca, hepatitis, presión arterial alta, hipersensibilidades, enfermedades intestinales inflamatorias, afecciones inflamatorias que incluyen consecuencias de trauma o isquemia, resistencia a la insulina, cistitis intersticial, iridociclitis , iritis, dolor articular/artritis/artritis reumatoide, enfermedad de Lyme, síndrome metabólico (síndrome x) , esclerosis múltiple, miositis, nefritis, obesidad, enférmedades oculares que incluyen uveítis, osteopenia, osteoporosis , enfermedad de Parkinson, enfermedad inflamatoria pélvica, enfermedad periodontal, poliarteritis , policondritis , polimialgia reumática, psoriasis, lesión por reperfusión, artritis reumática, enfermedades reumáticas (por ejemplo, artritis reumatoide, osteoartritis , artritis psoriáticas) , artritis reumatoide, sarcoidosis, escleroderma, sinusitis, síndrome de Sjógren, colon espástico, espondiloartropatías (por ejemplo, espondilitis anquilosante, artritis reactiva, síndrome de Reiter) , candidiasis sistémica, tendonitis, rechazo del transplante, UTI, vaginitis, enfermedades vasculares que incluyen enfermedad vascular ateroesclerótica, vasculitis (por ejemplo, poliarteritis nodosa, granulomatosis de Wegener, síndrome de Churg-Strauss) , y vasculitis.

El término "tratamiento" en la presente se refiere a la administración de una cantidad efectiva de una formulación tal con el propósito de prevenir cualquier síntoma o estado de enfermedad a desarrollar o con el propósito de prevenir (por ej . , prevenir o posponer la progresión), mejorar, aliviar, o erradicar (curar) tales síntomas o estados de enfermedad ya desarrollados. El término "tratamiento" se utiliza para incluir tratamiento de enfermedades mínimas o no detectables, por. e ¦..,,.¦¦. en un individuo que haya experimentado una respuesta a tratamiento luego de un primer tratamiento, o el tratamiento de una fase establecida y/o aguda.

La administración de anticuerpos anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 a un sujeto (ya sea la administración directa o la expresión de un ácido nucleico allí, tal como de un vector de transferencia del gen viral de la viruela que comprende anti-KIR2DL1, secuencias de ácido nuecleico que codifican 2 y/o 3 anticuerpos) ) y la puesta en práctica de los otros métodos de la invención se pueden utilizar con el propósito de prevenir (por ej., prevenir o posponer la progresión), mejorar, aliviar, o' erradicar (curar) tales síntomas o estados de enfermedad ya desarrollados.

Los métodos de la invención pueden ser particularmente útiles en la reducción y/o mejora de la actividad de las células T, proliferación o número (por ej., número de células T proinflamatorias activadas (por ej., células T CD4+, células T HLA-cw3 y/o HLA-cw4 positivas) en circulación o en un sitio de inflamación) , y cualquier parámetro o síntoma asociado (por ej . , niveles marcadores de inflamación) . Los métodos que reducen, previenen, o de lo contrario mejoran tales aspectos de trastornos inflamatorios o autoinmunes, en forma independiente y colectiva, son características ventajosas de la invención. De acuerdo con lo utilizado en la presente, "células T" se refiere a una sub-población de linfocitos que maduran en el . timus, y que exhiben, .entre otras moléculas, receptores de células T sobre su superficie. Las ' células T pueden identificarse gracias a ciertas características y propiedades biológicas, tales como la expresión de antígenos de superficie específica que incluyen TCR, CD4 o CD8 , la capacidad de ciertas células T para sacrificar tumores o células infectadas, la capacidad de ciertas células T para activar otras células del sistema inmune, y la capacidad de liberar moléculas de proteína denominadas citoquinas que estimulan o inhiben la respuesta inmune. Cualquiera de estas características y actividades se pueden utilizar para identificar células T, por el uso de métodos bien conocidos en la técnica. Dentro del contexto de esta invención, las células T "activas" o "activadas" designan células T biológicamente activas, más en particular células T que tienen la capacidad de citólisis o de estimular una respuesta inmune por, por ej . , secreción de citoquinas. Pueden detectarse células activas en cualquiera de un número de métodos bien conocidos, que incluyen ensayos funcionales y ensayos basados en la expresión tal como la expresión de citoquinas tales como TNF-alfa.

Los métodos para el tratamiento de un individuo que tiene una enfermedad autoinmune o inflamatoria, pueden comprender la administración al individuo de un anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3. En una modalidad, el individuo tiene una . enfermedad autoinmune. o inflamatoria que se ha establecido (por ej., declarado por un período de tiempo extendido, por ejemplo más de un año) , tiene signos de inflamación en curso o activa, tiene signos físicos de enfermedad (por ej . , hinchazón de las articulaciones, lesiones, síntomas neurológicos) , tiene una enfermedad crónica, tiene una enfermedad severa (de acuerdo con lo evaluado según los criterios aplicables, por ej . , criterios DAS o ACR en artritis reumatoide) o tiene una enfermedad en progresión .

Los métodos para el tratamiento de un individuo que tiene una enfermedad autoinmune o inflamatoria establecida, pueden comprender la administración al individuo de un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3. La presente invención proporciona métodos para el tratamiento de fases agudas, o de un ataque, crisis, exacerbación o empeoramiento, de enfermedades autoinmunes o inflamatorias por el uso de un anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 (o composiciones relacionadas) , con preferencia donde el anticuerpo se administra a un individuo durante una fase aguda o durante un ataque, crisis, exacerbación o empeoramiento de una enfermedad autoinmune o inflamatoria. La enfermedad puede seleccionarse del grupo que consiste en artritis reumatoide, artritis idiopática juvenil, esclerosis múltiple, enfermedad de Crohn o rectocolitis , Lupus eritematoso, espondilitis anquilosante y enfermedades relacionadas. En una modalidad, la enfermedad se caracteriza por la presencia de células que expresan ligandos anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 (por ej., HLA-cw3 o HLA-cw4), con preferencia por la presencia de células T CD4+ T que expresan HLA-cw3 y/o HLA-cw4. La enfermedad se caracteriza por la presencia de niveles detectables de una enzima proteolítica , un mediador inflamatorio, un etiquetador de inflamaciones en curso o una citoquina proinflamatoria (por ej . , TNF-Ot y/o interleuquina- 1 (IL-1)).

El diagnóstico, evolución y clasificación (o división en etapas) de una enfermedad puede definirse por criterios médicos estándares para el tipo particular de enfermedad para determinar si un individuo tiene una enfermedad que se ha establecido, está en una fase aguda, está en progresión, es crónica, tiene síntomas físicos, o tiene un cierto nivel de severidad. Asimismo, los ataques, crisis, exacerbaciones o empeoramientos pueden identificarse por cualquier criterio médico adecuado.

Los anticuerpos anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 pueden utilizarse ventajosamente para tratar una enfermedad establecida. "Enfermedad establecida" se refiere a una enfermedad autoinmune o inflamatoria que se ha declarado durante un período extendido de tiempo, por ej., más de un año. Dependiendo de la enfermedad específica, enfermedad establecida también significa una enfermedad que no está controlada or ej., que aún está en progresión, o..de la . que el paciente no experimenta una remisión, en presencia o ausencia de un tratamiento. En un aspecto, la invención proporciona un método para el tratamiento de una enfermedad autoinmune o inflamatoria en un paciente, que comprende: (a) determinar si el paciente tiene una enfermedad establecida; y (b) si el paciente tiene una enfermedad establecida, administrar a el paciente una dosis efectiva de anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3.

Los anticuerpos anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 también pueden utilizarse ventajosamente para tratar enfermedades crónicas. "Enfermedad crónica" se refiere a una enfermedad que persiste durante un período extendido de tiempo. Por ejemplo, una enfermedad crónica puede ser una enfermedad que dure 3 meses o más, de acuerdo con lo definido por U.S. National Center for Health Statistics. En un aspecto, la invención proporciona un método para el tratamiento de una enfermedad autoinmune o inflamatoria en un paciente, que comprende: (a) determinar si el paciente tiene una enfermedad crónica; y (b) si el paciente tiene una enfermedad crónica, administrar a el paciente una dosis efectiva de anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3.

Los anticuerpos anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 también pueden utilizarse ventajosamente para tratar individuos que tengan un ataque, crisis, exacerbación o empeoramiento. Los términos "ataque,",.; "crisis.",. "exacerbación" y "empeoramiento", designan una evolución más rápida de nuevos síntomas o el empeoramiento de viejos síntomas relacionados con una enfermedad inflamatoria o autoinmune. Tales fases se prolongan durante un período de horas o días, en oposición a una progresión lenta de la enfermedad que ocurre durante meses y años. Durante tales ataques, el paciente experimenta fiebre, dolores, síndromes inflamatorios (síndromes similares a la gripe) . En la AR, las articulaciones del paciente están hinchadas y generan dolor. El paciente puede experimentar síndromes similares a la gripe. Una crisis puede prólongarse de unas pocas horas a muchas semanas. En Esclerosis Múltiple, los empeoramientos pueden comprender un nuevo síntoma o el empeoramiento de un síntoma existente pero debe durar al menos 24 horas para ser considerada una verdadera exacerbación, un empeoramiento denota nuevas lesiones que se forman en el cerebro o médula espinal que interrumpen la transmisión neuronal . La mayoría de los empeoramientos se prolonga por unos pocos días o semanas pero pueden prolongarse por varios meses. Los efectos pueden ser, por ejemplo: dificultados en el movimiento o espasmos, problemas en el equilibrio y coordinación; problemas de la visión, movimientos oculares no coordinados, visión borrosa o visión doble, ceguera parcial durante un empeoramiento,- síntomas en la vejiga e intestinos; problemas sexuales, cambios en la función mental: pérdida de la memoria, . desatención- . y.. malos juicios o depresión. En la enfermedad de Crohn o rectocolitis , una exacerbación es principalmente la exacerbación de los síntomas normales de la enfermedad de Crohn: diarrea, dolor abdominal cólico, fiebre, pérdida del apetito. En un aspecto, la invención proporciona un método para el tratamiento de una enfermedad autoinmune o inflamatoria en un paciente que comprende: (a) determinar si el paciente está experimentado un ataque, crisis, exacerbación o empeoramiento; (b) si el paciente está experimentando un ataque, crisis, | exacerbación o empeoramiento, administrar a el paciente una dosis efectiva de anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3.

Los anticuerpos anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 también pueden utilizarse ventajosamente para tratar individuos que tengan una recaída. El término "recaída" se refiere a una mejora o estabilización en los síntomas de un paciente. Una enfermedad es recidivante cuando la salud o condición del paciente mejora. En un aspecto, la invención proporciona un método para el tratamiento una enfermedad autoinmune o inflamatoria en un paciente que comprende: (a) determinar si el paciente está experimentado una recaída, crisis, exacerbación o empeoramiento; (b) si el paciente está experimentado una recaída, administrar a el paciente una dosis efectiva de anticuerpo antÍ-KIR2DL1 , 2 y/o 3.

En forma opcional, - puede, llevarse a cabo un paso de detección HLA-cw3 y/o HLA-cw4, que comprende detectar la presencia de un HLA-cw3 y/o HLA-cw4 en un paciente, antes del tratamiento con un anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3. En general, en este paso, se toma una muestra biológica de un paciente, por ejemplo una muestra de fluido sinovial, por ej . , en un paciente que tiene artritis reumatoide. La muestra biológica se evalúa por la presencia de polipéptido o ácido nucleico HLA-cw3 y/o HLA-cw4. Si la muestra biológica es positiva para la presencia de HLA-cw3 y/o HLA-cw4, el paciente puede tratarse venta osamente con los anticuerpos anti-KIR2DLl , 2 y/o 3.

El anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 se utiliza como monoterapia (único agente terapéutico) . Los métodos de tratamiento de esta invención pueden además comprender el tratamiento de un individuo con un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 y un segundo agente terapéutico, que incluye agentes normalmente utilizados para el propósito terapéutico particular para el que el anticuerpo está siendo administrado. El anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 y el segundo agente terapéutico pueden administrarse en forma separada, conjunta o secuencial, o en un cóctel. El segundo agente terapéutico normalmente se administrará en cantidades en forma típica utilizadas para tal agente en una monoterapia para la enfermedad o afección particular bajo tratamiento. En una modalidad, el segundo agente terapéutico se administra en. una dosis menor que la dosis eficaz generalmente aceptada; por ejemplo, en varias modalidades, la composición comprende una dosis que es menor que aproximadamente 10% a 75% de la dosis eficaz generalmente aceptada la dosis eficaz generalmente aceptada la dosis eficaz generalmente aceptada. Con preferencia, el segundo agente terapéutico es un agente que reduce las enzimas proteolíticas , un mediador inflamatorio, o una citoquina proinflamatoria tal como TNF-oc y/o interleuquina- 1 (IL-1) . Con preferencia, el segundo agente terapéutico es DMARD o D D, además, en forma opcional donde el segundo agente terapéutico es metotrexato (Rheumatrex® , Trexall®) , hidroxicloroquina (Plaquenil®) , sulfasalazina (Azulfidine®) , leflunomida (Arava®) , un inhibidor del factor de necrosis tumoral (por ej . , un receptor TNFa soluble tal como etanercept (Enbrel®) , un anticuerpo anti-TNFa neutralizante (con preferencia no reductor) tal como adalimumab (Humira®) o Certolizumab pegol (Cimzia®) ) , un agente bloqueador co-estimulante de las células T- (por ej . , abatacept (Orencia®) ) , una terapia antagonista del receptor de interleuquina- 1 (IL-1) (anakinra (Kineret®) ) , un anticuerpo anti-BlyS (Benlysta®) , un inhibidor de proteosoma (por ej . , bortezomib) , un inhibidor de la tirosina cinasa, oro intramuscular, u otro agente inmunomodulador o citotóxico (por ej., azatioprina (Imuran®) , ciclofosfamida, ciclosporina A. (N.eoral®, ..Sandimmune®) ) o un inhibidor de la cinasa (por ej . , un inhibidor de la SYK cinasa tal como fostimatinib (R788) o un inhibidor JA 1, JAK2 tal como INCB28050, tanezumab o tasocitinib (CP-690 , 550) ) .

El anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 se administra antes de la administración del segundo agente terapéutico. Por ejemplo, un anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 puede administrarse aproximadamente 0 a 30 días antes de la administración del segundo agente terapéutico. En algunas modalidades, un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 se administra de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 2 semanas, de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 1 semana, de aproximadamente 1 hora a aproximadamente 2 horas, de aproximadamente 2 horas a aproximadamente 4 horas , de aproximadamente 4 horas a aproximadamente 6 horas, de aproximadamente 6 horas a aproximadamente 8 horas, de aproximadamente 8 horas a 1 día, o de aproximadamente 1 a 5 días antes de la administración del segundo agente terapéutico. En algunas modalidades, el anticuerpo anti-KIR2DL1, 2 y/o 3 se administra en forma concurrente con la administración de los agentes terapéuticos. El anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 se administra luego de la administración del segundo agente terapéutico. Por ejemplo, un anticuerpo anti -KIR2DL1, 2 y/o 3 puede administrarse aproximadamente 0 a 30 días después de la administración del segundo, agente . -.terapéutico . En algunas modalidades, ,un anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 se administra de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 2 semanas , de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 1 semana, de aproximadamente 1 hora a aproximadamente 2 horas , de aproximadamente 2 horas a aproximadamente 4 horas , de aproximadamente 4 horas a aproximadamente 6 horas , de aproximadamente 6 horas a aproximadamente 8 horas , de aproximadamente 8 horas a 1 día, o de aproximadamente 1 a 5 días después de la administración del segundo agente terapéutico.

La composición puede además comprender al menos un agente antiinflamatorio, agente analgésico, o un fármaco antirreumático modificador de enfermedades (DMARD) .

El agente antiinflamatorio puede seleccionarse del grupo que consiste en esteroides, Cortisona, Glucocorticoides , prednisona, prednisolona, Hidrocortisona (Cortisol) , acetato de Cortisona, Metilprednisolona, Dexametasona, Betametasona, Triamcinolona, Beclometasona, y acetato de Fludrocortison , fármaco antiinflamatorio no esteroideo (NSAIDs) , ibuprofeno, naproxeno, meloxicam, etodolac, nabumetona, sulindac, tolementina, salicilato de colina y magnesio, diclofenac, diflusinal, indometicina , Cetoprofeno, Oxaprozina, piroxicam, y nimesulida, Salicilatos, Aspirina (ácido acetilsalicílico) , Diflunisal, Salsalato, derivados de p-amino fenol, Paracetamol, fenacetina, .. derivados del ácido ..propiónico., Ibuprofeno, Naproxeno, Fenoprofeno, Cetoprofeno, Flurbiprofeno, Oxaprozina, Loxoprofeno, derivados del ácido acético, Indometacina, Sulindac, Etodolac, Cetorolac, Diclofenac, Nabumetona, derivados del ácido enólico (Oxicam) , Piroxicam, Meloxicam, Tenoxicam, Droxicam, Lornoxicam, Isoxicam, Fenamic y derivados (Fenamatos) , ácido mefenámico, ácido meclofenámico, ácido flufenámico, ácido tolfenámico, inhibidores selectivos de COX-2 (Coxibs) , Celecoxib, Rofecoxib, Valdecoxib, Parecoxib, Lumiracoxib, Etoricoxib, Firocoxib, Sulfonanilidas, Nimesulida, y Licofelona.

Artritis reumatoide La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad inflamatoria crónica y típicamente progresiva donde la membrana sinovial es el sitio principal de inflamación. La destrucción de los huesos se produce con la progresión de la inflamación, que da lugar a la deformación o daño de los huesos y cartílagos. La artritis reumatoide (AR) progresa en etapas. La primera etapa es la hinchazón del tejido sinovial, que causa dolor, ardor, endurecimiento, rojez e hinchazón alrededor de la articulación. La segunda etapa es la rápida división y crecimiento de las células, o pannus, que causa el espesamiento sinovial. En la tercera etapa, las células inflamadas liberan enzimas que pueden digerir hueso y cartílago, a menudo causando que la articulación involucrada pierda la forma y. alineación, ..causando más dolor, y la pérdida del movimiento. Un paciente afectado con la enfermedad puede experimentar un período de remisión, sin dolor, y luego una crisis de artritis reumatoide, también denominada empeoramiento o ataque, donde el dolor aumenta. Los métodos de acuerdo con la invención proponen tratar un paciente tal que experimente una crisis para ayudarlo a manejar el dolor.

El nivel de enfermedad de AR puede evaluarse por el uso de criterios diferentes. Los criterios más conocidos han sido establecidos por ACR (American College of Rheumatology) . Los criterios de ACR se indican como ACR 20, ACR 50, y ACR 70. Los criterios de ACR miden el aumento en los conteos de articulaciones suaves o hinchadas en tres de los siguientes parámetros agudos: reactante de fase aguda (tal como tasa de sedimentación), evaluación del paciente, evaluación física, escala del dolor y cuestionario discapacidad/funcionalidad.

La severidad de la enfermedad también puede medirse por una calificación conocida como DAS (Calificación de Actividad de la Enfermedad) . La DAS es un índice compuesto de actividad de AR diseñado por EULAR (European League Against Rheumatism) inicialmente desarrollado para 44 articulaciones para los números de articulaciones con sinovitis y los 53 sitios del índice de Ritchie. La DAS se calcula de acuerdo con la siguiente fórmula: DAS = [0,553938 Víndice de Richie] . + [0,06465 (número de articulaciones con sinovitis)] + [0,330 Ln (tasa de sedimentación de eritrocitos)] + 0,024 El índice de Ritchie cubre 53 articulaciones: temporomandibular, acromioclavicular, esternocostoclavicular, hombro, codo, muñeca, metacarpofalangea (MCP) , interfalangea próxima (PIP) en los dedos, cadera, rodilla, tobillo, subtalar, transversal tarsal, y metatarsofalangea (MTP) .

Se han definido tres niveles de actividad de acuerdo con el valor de DAS: AR con bajo nivel de actividad DAS = 2.4, AR moderada activa 2,4 < DAS < 3,7, AR activa > 3,7. El valor del umbral de remisión definido por DAS es < 1.6.

El objetivo principal de los métodos de tratamiento de acuerdo con la invención es controlar la actividad de la enfermedad y, también, lograr la remisión, reducir el dolor, prevenir y controlar la destrucción de las articulaciones, prevenir la pérdida de la función de las actividades cotidianas y en el trabajo, y optimizar la calidad de vida del paciente.

Opciones de tratamiento actuales Las recomendaciones actuales para el tratamiento de AR incluyen tratamiento temprano con fármacos antirreumáticos modificadores de enfermedades (DMARD) una vez establecido el diagnóstico. Se han utilizado ampliamente fármacos antiinflamatorios no esteroideos (NSAID) , y hasta hace poco, inhibidores de COX-2 "mientras que se aguarda la confirmación del diagnóstico o más adelante durante el transcurso de la enfermedad junto con DMARD. Metotrexato es el DMARD más ampliamente utilizado, pero también se prescriben otros agentes, que incluyen hidroxicloroquina, sulfasalazina, oro, minociclina, y leflunomida. Se pueden utilizar corticosteroides en combinación con DMARD, pero en general, sólo se utilizan dosis bajas para minimizar los efectos colaterales (O'Dell, New Engl . J. Med. 350:2591-2603, 2004). En los últimos años, las terapias anticitoquinas centradas| en citoquinas inflamatorios han recibido atención, y se han desarrollado biofarmacéuticos novedosos que tienen acciones antirreumáticas efectivas, tales como infliximab, etanercept, anakinra, y atlizumab. Sin embargo, actualmente no existe un tratamiento totalmente efectivo y permanece la necesidad por un tratamiento eficiente de la enfermedad, una mejora del confort del paciente y un alivio de dolor; y se requieren terapias alternativas para mejorar la vida cotidiana del paciente .· Algunos de los tratamientos principales se repasan a continuación.

Agentes antiinflamatorios no esteroideos (NSAID) . Estos fármacos inhiben la generación de prostaglandinas por el bloqueo de enzimas de ciclooxigenasa, COX-1 y COX-2. Las prostaglandinas son mediadores de la inflamación y el dolor que también. cumplen roles importantes en el mantenimiento de las funciones corporales normales que incluyen protección del ácido estomacal, mantenimiento del flujo sanguíneo del riñon, y contribución a la adhesión plaquetaria y la función vascular. Los inhibidores selectivos de COX-2 bloquean selectivamente las prostaglandinas generadas vía COX-2 que cumplen roles prominentes en la inflamación. Se encuentran disponibles numerosos NSAIDS diferentes, algunos de venta libre que incluyen aspirina, ibuprofeno (Advil ®, Motrin®, Nuprin ®) y naproxeno (Alleve®) y muchos otros se encuentran bajo prescripción que incluyen meloxicam (Mobíc®) , etodolac (Lodine®) , nabumetona (Relafen®) , sulindac (Clinoril®) , tolementina (Tolectin®) , salicilato de colina y magnesio (Trilasate®) , diclofenac (Cataflam®, Voltaren®, Arthrotec®) , Diflusinal (Dolobid®) , indometicina (Indocin®), Cetoprofeno (Orudis®, Oruvail®) , Oxaprozina (Díapro®) , y piroxicam (Feldene®) . La NSAID de acción más extensa que permiten una dosificación diaria o dos veces al día pueden aumentar la conformidad. La clase de NSAID también incluye fármacos conocidos como inhibidores COX-2 que también son efectivos en el control de la inflamación (celecoxib, Celebrex®; etoricoxib, Arcoxia®; lumiracoxib, Prexige®) .

Los corticosteroides (prednisona ; metilprenisolona, Medrol®) tienen actividad antiinflamatoria e inmunoreguladora . Pueden administrarse en forma oral, intravenosa, intramuscular o pueden inyectarse directamente, en la articulación. Los corticosteroides son útiles en la enfermedad temprana como terapia adjuntiva temporaria mientras se espera que los DMARD ejerzan sus efectos antiinflamatorios. Los corticosteroides también son útiles como terapia adjuntiva crónica en pacientes con enfermedades severas que son bien controladas con NSAID y DMARD. La dosis normal de prednisona es de 5 a 10 mg por día. Sin bien la administración de prednisona puede iniciarse en dosis más elevadas (15 a 20 mg por día) , debe intentarse reducir la dosis en unas pocas semanas a! menos que 10 mg por día. Una vez comenzada, la terapia con corticosteroides puede ser muy difícil de discontinuar, incluso en dosis más bajas. Algunos 5 pacientes son muy sensibles a la reducción de la prednisona que en general se lleva a cabo lentamente en unas pocas semanas .

Fármacos antirreumáticos modificadores de enfermedades (DMARDS) : Si bien los agentes NSAID y DMARD mejoran los 0 símtomas de la artritis reumatoide activa, únicamente se ha demostrado que los agentes DMARD alteran el curso de la enfermedad y mejoran los resultados radiográficos. Los DMARD tienen un efecto sobre la artritis reumatoide que es diferente y su inicio puede ser más retrasado que el de los 5 NSAID o corticos.teroids . En la mayoría de los casos, cuando se confirma el diagnóstico de la artritis reumatoide, debe '¦¦/'· comenzarse la terapia con agentes DMARD... La presencia de erosiones o espacios de articulaciones estrechos en los rayos X de las articulaciones involucradas es una clara indicación 0 de la terapia con DMARD, sin embargo no debe esperarse la aparición de cambios en los rayos X. Los fármacos actualmente disponibles incluyen: Metotrexato (Rheumatrex® , Trexall®) , Hidroxicloroquina (Plaquenil ®) , Sulfasalazina (Azulfidine®) , Leflunomida (Arava®) , Inhibidores del Factor de Necrosis 5 Tumorals- etanercept (Enbrel®, adalimumab (Humira ®) , e infliximab (Remicade®) , Agentes Bloqueadores Co-estiraulantes de las células T—ak>atacept (Orencia®) , Agentes Reductores de las Células B—rituximab (Rituxan®) , Terapia Antagonista del Receptor de Interleuquina-1 (IL-1)—anakinra (Kineret®) , Oro Intramuscular, Otros agentes inmunomodulantes y citotóxicos— azatioprina (Imuran®) , ciclofosfamida, y ciclosporina A(Neoral®, Sandimmune®} .

El metotrexato es considerado actualmente el agente DMARD de primera línea por la mayoría de los pacientes con AR. Tiene un inicio de acción relativamente rápido en dosis terapéuticas (6-8 semanas) , buena eficacia, perfil de toxicidad favorable, facilidad de administración, y un costo relativamente bajo. El metotrexato es efectivo en la reducción los signos y síntomas de AR, así como también en el aminoramiento o interrupción del daño radiográfico. El metotrexato también es efectivo en muchas otras formas de artritis inflamatoria que incluyen artritis, psoriática y otras espondiloartropatías , y se utiliza en muchas otras enfermedades autoinmunes. Dosificación: En un estudio de comparación de metotrexato con etanercept en AR temprana, la administración de metotrexato se inició en una dosis de 10 mg por semana, y aumentó a 20 mg per semana en la semana 8. Este régimen de dosificación que comienza con dosis relativamente superiores (hasta 15 mg por semana) con una suba de dosis a 20 mg dentro de los primeros tres meses es actualmente bastante bien aceptado en la práctica clínica. La dosis máxima es de normalmente 25 mg por semana pero a menudo es mayor. El metotrexato puede administrarse en forma oral o por inyección subcutánea. La última vía de administración puede ser ventajosa para pacientes que hayan tenido náuseas asociadas con metotrexato. Los pacientes que comiencen un tratamiento con metotrexato deben ser cuidadosamente evaluados por insuficiencia renal, enfermedad hepática aguda o crónica, ingesta significativa de alcohol o abuso de alcohol, leucopenia (conteos bajos de glóbulos blancos), trombocitopenia (conteos plaquetarios bajos) , o deficiencia de folato no tratada. La co-administración de NSAIDS con metotrexato es rutinaria en pacientes con artritis reumatoide y es considerada segura por los reumatologos con la condición que las pruebas de la función hepática sean cuidadosamente monitoreadas . El metotrexato puede combinarse en forma segura con, casi, cualquier otro DMARD aprobado por FDA para AR, que incluye sulfasalazina, hidroxicloroquina, inhibidores de TNF, abatacept, rituximab, anakinra, y leflunomida. En ninguna de las pruebas clínicas en que se combina metotrexato con uno de estos DMARD se observaron toxicidades inesperadas o toxicidades sinergísticas con la excepción de toxicidades hepáticas más elevadas con leflunomida que también es metabolizada por el hígado.

La hidroxicloroquina y cloroquina son fármacos antimalaria que son agentes relativamente seguros y bien tolerados para el tratamiento de la artritis reumatoide. Dado que éstos fármacos tienen capacidad limitada para prevenir el daño de las articulaciones por sí solos, su uso probablemente se limite a pacientes con enfermedades muy leves y no erosivas. La hidroxicloroquina a menudo se combina con metotrexato para beneficios adicionales en los signos y síntomas o como parte de un régimen de "triple terapia" con metotrexato y sulfasalazina .

La sulfasalazina (Azulfidine®) es un DMARD efectivo para el tratamiento de AR. Se administra junto con metotrexato e hidroxicloroquina como parte de un régimen de "triple terapia" que ha demostrado proporcionar beneficios a pacientes que hayan tenido respuestas inadecuadas a metotrexato solo. La sulfasalazina también se utiliza en el tratamiento de enfermedad intestinal inflamatoria y espondiloartropatías . Su .mecanismo de acción en .la AR. es desconocido. Algunos de sus efectos pueden deberse a la reducción del folato. Dosificación: La dosis usual es de 2-3 gramos por día en un régimen de dosificación de dos veces al día. La dosis puede iniciarse en 1 gramo por día y aumentarse según lo tolerado.

La leflunomida (Arava®) también es un DMARD efectivo. Su eficacia es similar a metotrexato en términos de signos y síntomas, y es una alternativa viable para pacientes que hayan fracasado o sean intolerantes a metotrexato. Se ha demostrado que la leflunomida aminora la progresión radiográfica. Ciertos estudios han demostrado que. también puede combinarse cuidadosamente con metotrexato en pacientes sin enfermedades hepáticas preexistentes, con la condición de que las pruebas de la función hepática se monitoreen cuidadosamente. La leflunomida también se ha estudiado en artritis psoriática con cierta eficacia demostrada. Dosificación: la vida media del metabolito activo de leflunomida es muy extensa. La leflunomida y sus metabolitos se unen extensivamente a las proteínas y experimentan un metabolismo adicional antes de la excreción. Cuando se aprobó inicialmente , la medicación se administró por el uso de una dosis inicial de saturación de 100 mg por día durante tres días seguido por 20 mg por día. Debido a una incidencia significativa de los efectos colaterales GI y la diarrea, la mayoría de los ..profesionales actualmente utiliza un período de carga más breve con dosis menores o inicia el tratamiento en 10-20 mg/día sin dosis inicial de saturación. La dosis puede reducirse a 10 mg por día si no se tolera en la dosis de 20 mg.

Inhibidores del factor de necrosis tumoral (TNF) . El TNF se halla en grandes cantidades en la articulación reumatoide y se produce localmente en la articulación por macrófagos sinoviales y linfocitos que infiltran la articulación sinovial. El TNF es una de las citoquinas críticas que median el daño y la destrucción de las articulaciones debido a sus actividades sobre numerosas células en las articulaciones así como efectos sobre otros órganos y sistemas corporales. Los antagonistas de TNF fueron los primeros DMARDS biológicos aprobados para el tratamiento de AR y también se han denominado modificadores de la respuesta biológica, o "biológicos" para diferenciarlos de otros DMARDS tales como metotrexato, leflunomida, o sulfasalazina . Tres antagonistas del TNF están aprobados para el tratamiento de AR y agentes adicionales se encuentran bajo investigación. Estos fármacos son similares en su eficacia en la reducción de signos y síntomas de AR, en el aminoramiento o interrupción del daño radiográfico, y en el aumento de la función y la calidad de vida. Estos agentes actualmente también están aprobados para el tratamiento de otras formas de artritis inflamatoria que incluyen artritis psoriática, artritis . idiopática juvenil y espondilitis anquilosante. Existen actualmente tres inhibidores de TNF aprobados por FDA para el tratamiento de AR (enumerados en el orden de su aprobación para AR) etanercept (Enbrel®) , infliximab (Remicade®) , y adalimumab (Humira®) .

El etanercept (Enbrel®) es efectivo en la reducción de los signos y síntomas de AR, así como también en el aminoramiento o interrupción del daño radiográfico, cuando se utiliza como monoterapia o en combinación con metotrexato. El etanercept también está aprobado para el tratamiento de artritis psoriática y para espondilitis anquilosante así como también para psoriasis. El etanercept es una proteína de fusión que combina dos dominios de unión extracelular de la forma p75 del receptor de TNF con la porción Fe de una molécula de anticuerpo IgGl humano. Los componentes de la proteína son completamente humanos, y los anticuerpos anti-etanercept son relativamente poco comunes. Dosificación: La dosis más común actualmente utilizada es de 50 mg autoadministrados una vez per semana por inyección subcutánea. Se encuentra disponibles tanto jeringas prellenadas como un sistema de autoinyección (SureClick®) . Etanercept también se encuentra disponible en una dosis de 25 mg que se administra dos veces por semana en esta dosis. La dosificación intermitente u ocasional no se ha estudiado. Existe información limitada sobre. la seguridad o eficacia en dosis superiores a 50 mg por semana. El etanercept tiene una vida media de 70 horas luego de una dosis de 25 mg.

Infliximab (Remicade®) : en combinación con metotrexato, está aprobado para el tratamiento de AR, y para el tratamiento de artritis psoriática, y espondilitis anquilosante, así como también para psoriasis y enfermedad de Crohn. El infliximab es un anticuerpo monoclonal quimérico que une TNF con alta afinidad y especificidad. El sitio de unión de anticuerpos para TNF tiene origen de ratón, estando el 75% restante del anticuerpo de inflixiraab derivado de | una secuencia de anticuerpo IgGl humano. Infliximab es efectivo como monoterapia en la reducción de los signos y síntomas de AR pero los anticuerpos anti-infliximab que pueden desarrollarse pueden, a su vez, reducir la durabilidad de la respuesta. El co-tratamiento con metotrexato reduce la frecuencia de estos anticuerpos y, por lo tanto, se recomienda junto con infliximab. La combinación de infliximab y metotrexato es muy efectiva en la reducción de las manifestaciones clínicas de la enfermedad, así como también en el aminoramiento o interrupción de la progresión radiográfica de la enfermedad en AR. Dosificación: Infliximab se administra a través de la vía intravenosa. Las infusiones en forma típica toman entre 2-3 horas. La dosis inicial recomendada de infliximab es de 3 mg/kg para AR administrada • como infusión intravenosa seguida por la dosificación 2 a 6 semanas después, en adelante cada 8 semanas. El infliximab debe administrarse en combinación con metotrexato. Si la respuesta clínica es inadecuada en la dosis inicial, el infliximab se puede aumentar en forma progresiva a una dosis máxima de 10 mg/kg y la frecuencia de infusión se puede aumentar cada 4-6 semanas.

El adalimumab (Humira®) es un anticuerpo monoclonal anti-TNF completamente humano con alta especificidad para TNF. Al igual que los otros antagonistas de TNF, es efectivo como monoterapia y en combinación con metotjrexato, en la reducción de signos y síntomas de AR y en el aminoramiento o interrupción de la progresión radiográfica de la enfermedad. Se administra por inyección subcutánea cada dos semanas pero se puede llevar a una administración semanal, de acuerdo con lo requerido. El adalimumab es efectivo en AR, artritis psoriática, y espondilitis anquilosante, y enfermedad de Crohn. Dosificación: el adalimumab se encuentra actualmente disponible en una dosis de 40 mg y se administra por inyección subcutánea (SC) auto-administrada semana por medio. Se encuentran disponibles tanto jeringas prellenadas como así también un sistema auto-inyector (Huimira Pen®) . Si la respuesta a esta dosis es inadecuada, la frecuencia de inyecciones se puede llevar a una frecuencia semanal. El adalimumab tiene una vida media de aproximadamente 2 semanas (que oscila de 10-20 días) luego de una dosis es.tándar; de 40. mg .

Bloqueo co-estimulante de las células T: Abatacept (Orencia®) : El abatacept es el primero de una clase de agentes conocidos como bloqueadores co-estimulantes de las células T. Estos agentes interfieren con las interacciones entre células con presencia de antígenos y linfocitos T y afectan las etapas tempranas en la cascada patogénica de eventos en artritis reumatoide. Los linfocitos T se activan debido a un estímulo desconocido pero que probablemente involucra la interacción entre ant|ígenos presentados en el contexto de la molécula del Complejo de Histocompatibilidad Principal de Clase II sobre la superficie de las células con presencia de antígenos. Las células T reconocen a los antígenos como foráneos y si reciben un segundo estímulo, se activarán, proliferarán, traficarán a sitios inflamados, y secretarán citoquinas proinflamatorias que incluyen TNF. Una de las segundas señales importantes para la activación de células T está mediada por las moléculas CD80 y CD86 halladas sobre las células con presencia de antígenos y la molécula CD28 sobre la superficie de las células T. Dosificación: el abatacept se administra vía infusión intravenosa una vez al mes luego de las dosis inicial en el valor de referencia, 2 semanas, y 4 semanas. La dosis se basa en el peso corporal, donde los pacientes <60 kg reciben 500 mg, 60-100 kg reciben 750 mg, .y >100. kg reciben.. 1000 mg. La medicación se administra en un período de aproximadamente 30 minutos a una hora .

Reducción de las Células B: Rituximab (Rituxan®) : las células B son células inflamatorias importantes con múltiples funciones en la respuesta inmune. Actúan como células con presencia de antígenos, puede secretar citoquinas, y diferenciarse en células plasmáticas de formación de anticuerpos. Se ha demostrado que la reducción de las células B es efectiva en la reducción de los signos y síntomas de AR y en el aminoramiento |de la progresión radiográfica. Un agente reductor de las células B, Rituximab, se encuentra actualmente disponible para el tratamiento de artritis reumatoide. El rituximab (Rituxan®) se desarrolló originalmente para tratar linfoma no Hodgkin y se ha utilizado para tratar esta afección maligna de los linfocitos y nodulos linfáticos durante varios años. Los estudios tempranos en pacientes con artritis reumatoide muestran que la rituximab causa una reducción rápida y sostenida de las células B circulantes en la circulación con mejoras clínicas en numerosos pacientes. Estudios clínicos adicionales han actualmente demostrado que el rituximab es efectivo en la reducción de signos y síntomas y en el aminoramiento de la progresión radiográfica en pacientes con RA que hayan fracasado con otras terapias de DMARD. El agente se encuentra actualmente aprobado en los EE.UU., sin. embargo, únicamente en pacientes que hayan fracasado con antagonistas de TNF. Dosificación: La dosis actualmente aprobada es de 1000 mg administrados en forma intravenosa durante 3-4 horas administrándose 2 dosis con una distancia de 2 semanas. Típicamente, los pacientes reciben corticosteroides intravenosos con cada infusión y premedicación con difenhidramina y acetaminofeno . El tiempo óptimo para la re-administración aún no está claro. Algunos han apoyado un régimen de dosificación fijo cada 6 meses, mientras que otros han sugerido | aguardar hasta que un paciente comience a empeorar antes de un nuevo tratamiento. Los estudios se encuentran en curso para evaluar los cronogramas de redosificación. La extensión y duración de la reducción de las células B no se ha correlacionado claramente con eficacia. La reconstitución de niveles normales de células. B tampoco se vio correlacionada con pérdida de la eficacia.

La interleuquina-1 (IL-1) es otra citoquina proinflamatoria implicada en la patogénesis de AR. El antagonista del receptor IL-1 (ILlra) es un bloqueador endógeno de la citoquina. La evidencia que sustenta un rol antiinflamatorio de IL-lra in vivo se demuestra por la observación de que los ratones con deficiencia de IL-lra desarrollan espontáneamente enfermedades autoinmunes similares a artritis reumatoide así como vasculitis. IL1 tiene., efectos sobre . la degradación de. cartílagos que deriva en daños así como también en la inhibición de reparaciones, y es un estímulo potente para osteoclastos que derivan en la erosión de los huesos. Un antagonista de IL1, anakinra (Kirieret®) , se encuentra actualmente aprobado para el tratamiento de AR. También se han estudiado otros agentes en AR.

Anakinra (Kineret®) , un antagonista del receptor IL-1 recombinante humano (hu rlL-lra) está aprobado para el tratamiento de AR. El anakinra se puede utilizar solo o en combinación con DMARD que no sean agentes de bloqueo de TNF (Etanercept, Infliximab, Adalimumab) . El anakinra no está recomendado para uso en combinación con inhibidores de TNF dado que ciertos estudios han demostrado aumentos en las infecciones sin beneficio clínico adicional alguno. Dosificación: La dosis recomendada de anakinra es de 100 mg/día administrada a diaria por inyección subcutánea. La dosis debe administrarse aproximadamente a la misma hora cada día. También se encuentra disponible para la medicación un sistema de autoinyección .

El oro intramuscular es efectivo en el tratamiento de artritis reumatoide. Las sales de oro intramuscular fueron, hasta los años 90, los agentes DMARD más frecuentemente utilizados pero han sido reemplazadas por metotrexato y otros DMARD como los agentes preferidos para tratar AR. Se encuentran- ... disponibles dos compuestos inyectables, (Myochrysine® y Solganal®) . Los compuestos de oro son raramente utilizados en la actualidad dados sus numerosos efectos colaterales y requerimientos de raonitoreo, su eficacia limitada, y su muy lento inicio de acción. Un compuesto de oro oral (Auranofin®) también se encuentra disponible pero su eficacia es incluso más limitada que la de los compuestos inyectables. Dosificación: la terapia con Myochrysine o Solganal se inicia en 10 mg en forma intramuscular, luego se administran 25mg a la segunda semana, luego se administran 50 mg semanalmente hasta que haya ocurrido una respuesta o que se haya administrado un total de 1 g. Si se observa una respuesta favorable, la terapia se reduce a 50mg cada 2 semanas durante 3 meses, luego cada 3 semanas durante 3 meses y finalmente a una dosis de mantenimiento mensual . La falta de respuesta luego de un total de lg debe considerarse una falla del tratamiento. La administración mensual de oro debe continuarse en forma indefinida.

Otros Agentes Inmunomoduladores y Citotóxicos: Los fármacos citotóxicos más comúnmente utilizados son azatioprina (Imuran®) , ciclosporina A (Sandimmune®, Neoral®) , ciclofosfamida (Citoxan®) y d-Penicilamina . Dado el potencial de alta toxicidad, estos agentes en forma típica se utilizan para manifestaciones extra-articulares con riesgo de muerte de AR tales como vasculitis sistémica . o , con enfermedades articulares severas refractarias a otras terapias.

I La azatioprina (Imuran®) tiene cierta actividad en la artritis reumatoide pero la observación de un efecto puede llevar 8-12 semanas. Es un análogo de purina que puede causar la supresión de la médula ósea y la reducción de los conteos celulares globales (glóbulos blancos, glóbulos rojos, y plaquetas) en particular en pacientes con insuficiencia renal o cuando se utiliza en forma concomitante con alopurinol o inhibidores de ACE . El riesgo aumentado de malignidades secundarias causadas por azatioprina es controversial . La observación de los niveles de la enzima tiopurina metiltransferasa (TPMT) se recomienda antes de iniciar una terapia con azatioprina. Ciertos individuos tienen deficiencias en esta enzima que metaboliza la azatioprina con un riesgo concomitantemente aumentado de toxicidad para la te medicación. Los efectos colaterales incluyen náuseas, y alopecia. Son necesarias, para pacientes sometidos a terapias con azatioprina, pruebas sanguíneas para monitorear los conteos de glóbulos así como también pruebas de la función hepática.

La ciclosporina (Sandimmune®, Neoral®) tiene cierta actividad como una terapia modificadora de enfermedades en artritis reumatoide. Estudios han demostrado que la ciclosporina puede combinarse con metotrexato en pacientes con AR para ..capturar _ respuestas clínicas. Es un agente inmunosupresor aprobado para uso en la prevención del rechazo del trasplante renal y hepático y también tiene actividad en la psoriasis y otras enfermedades autoinmunes. La ciclosporina inhibe la función de las células T por la inhibición de la transcripción de interleuquina-2. Las toxicidades principales incluyen infección e insu iciencia renal. El aumento de la presión sanguínea es común y puede requerir tratamiento. El monitoreo cuidadoso de la función renal función y la presión sanguínea es requerido durante todo el período en que un paciente esté tomando ciclosporina . Numerosas interacciones entre medicaciones pueden afectar los niveles sanguíneos de ciclosporina y derivar en mayor toxicidad. El prospecto del empaque contiene información importante referente a estas interacciones entre medicaciones. La ciclosporina aumenta los riesgos de infección y también puede aumentar el riesgo de malignidades que incluyen linfoma.

La ciclofosfamida (Citoxan®) es un potente agente inmunosupresor que se reserva para casos severos de artritis reumatoide refractaria y para aquellos con manifestaciones tales como vasculitis. Se utiliza en el tratamiento de otras afecciones autoinmunes que incluyen lupus y vasculitis. La ciclofosfamida es un agente alquilante con serias toxicidades que incluyen supresión de la médula ósea, cistitis hemorrágica, insuficiencia ovariana prematura,, infección- y malignidades secundarias, en particular un riesgo aumentado de cáncer de vejiga. Los conteos sanguíneos deben monitorearse cuidadosamente con esta medicación.

La d-Penicilamina (Cuprimine®, Depen®) históricamente tiene cierta actividad como un tratamiento para artritis reumatoide. Se prescribe principalmente para pacientes con enfermedades agresivas persistentes que hayan fracasado con otros DMARD disponibles. Al igual que el oro es un fármaco relativamente tóxico que tiene una utilidad limitada debido a cuestiones de tolerabilidad y eficacia que no son tan robustas como otros agentes actualmente disponibles . Los efectos colaterales principales incluyen erupciones severas y efectos sobre la función renal. El monitoreo cuidadoso de la función renal es requerido con este fármaco. Los pacientes pueden desarrollar una enfermedad similar al lupus u otras enfermedades autoinmunes mientras tomen d-Penicilamina .

Otros compuestos DMARD actualmente en desarrollo también son adecuados para una combinación en los métodos de tratamiento de acuerdo con la invención, tales como VX-702, ocrelizumab, compuestos que localizan SY cinasa tal como fostimatinib (R788) e inhibidores de JAK1, JAK2 tales como INCB28050, tanezumab o tasocitinib (CP- 690 , 550 ) .

El DMARD puede seleccionarse del grupo que consiste en micofenolato mofetilo (CellCept) , inhibidores de calcineurina, ciclosporina-, sirolimus, everolimus, retinoides orales, azatioprina, ésteres del ácido fumérico, D-penicilamina, ciclofosfamida, columna de inmunoadsorción, columna de Prosorba(r), una sal de oro, auranofina, aurotiomalato de sodio (Miocrisina) , hidroxicloroquina , cloroquina, leflunomida, metotrexato (MTX) , minociclina, sulfasalazina (SSZ) , bloqueadores del factor alfa de necrosis tumoral (TNFa) , etanercept (Enbrel) , infliximab (Remicade) , adalimumab (Humira) , certolizumab pegol (Cimzia) , golimumab (Simponi) ) , bloqueadores de interleuquina 1 (IL-1), por ej . , anakinra (Kineret) , anticuerpos monoclonales contra células B, rituximab (Rituxan) ) , bloqueadores de la co-estimulación de las células T, abatacept (Orencia) , bloqueadores de interleuquina 6 (IL-6), tocilizumab, RoActemra, y Actemra.

Tratamiento con un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 Un paciente que tiene AR puede evaluarse para evaluar la presencia, etapa, evolución o clasificación de la enfermedad. En forma opcional una muestra biológica (por ej . , fluido sinovial) se obtiene y evalúa por la presencia de mediadores proinflamatorios u otros etiquetadores de inflamación activa, y/o la presencia de células T (por ej., células T CD4+) . En una modalidad, se detecta la presencia de auto-anticuerpos, por ejemplo la detección de anticuerpos del factor reumatoide (RhF) , de péptidos citrulinados anti-cíclicos, anticuerpos anti-ssARN, anti-dsAR , anti-Smith, anti-fosfolípidos, anti-nucleares, vy/o anti-actina. En una modalidad, los métodos comprenden evaluar niveles de una enzima proteolítica, un mediador inflamatorio, un etiquetador de inflamaciones en curso o una citoquina proinflamatoria . En una modalidad, los métodos comprenden determinar el nivel de proteína c-reactiva (CRP) y/o la tasa de sedimentación de eritrocitos. Una determinación de que un paciente tiene AR, o que mediadores proinflamatorios u otros etiquetadores de inflamación activa, y/o células T (por ej . , células T infiltrantes, células T HLA-cw3 y/o cw4 positivas) están presentes (por ej . , en el tejido inflamado), de que la enfermedad| es aguda, crónica, que está experimentando un empeoramiento o una progresión indica que el paciente puede tratarse con un anticuerpo anti-KIR2DL1 , 2 y/o 3.

Un paciente que tiene AR, y en forma opcional que tiene una inflamación activa y/o AR establecida o crónica, y/o que experimenta un empeoramiento se trata con un anticuerpo anti-KIR2DL1, 2 y/o 3. Con preferencia, la AR establecida puede caracterizarse como AR que ha estado en progreso durante un año, o que ha estado en progreso durante menos que un año pero que no es responsiva a un primer fármaco antirreumático modificador de enfermedades (DMARD) . La AR establecida también puede evaluarse por el uso de los criterios DAS o CAS. "AR y enfermedades relacionadas" se refiere a enfermedades que pueden ser causadas o derivadas del inicio o evolución de , la .artritis reumatoide tal como._ por -.ej., episcleritis , neumotorax, embolismo y úlcera cutánea isquémica .

Los anticuerpos de acuerdo con la invención se administran en combinación con otro tratamiento de AR, tal como los enumerados con anterioridad.

El anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 puede inyectarse o infundirse a través de vías subcutáneas, intravenosas, intramusculares, intra-articulares , intrasinoviales , intrasternales , intratecales , intrahepáticas , intralesionales e intracraneales. En una mojdalidad, un anticuerpo anti-KIR2DL1, 2 y/o 3 se administra en forma intra-articular, con preferencia en el sitio de la inflamación.

Esclerosis Múltiple La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad inflamatoria crónica del sistema nervioso central (SNC) donde las vainas de mielina grasas alrededor de los axones del cerebro y la médula espinal están dañadas, lo que deriva en desmielinación y fibrosis así como también un amplio espectro de signos y síntomas. Las causas patofisiológicas permanecen desconocidas aunque teorías diferentes incriminan genéticos o infecciones. También se han propuesto factores de riesgo ambiental diferentes. Las manifestaciones clínicas están asociadas con la infiltración del sistema nervioso central por células inmuno-competentes . Las poblaciones de células T específicas., .dirigidas-...hacia neuroantígenos , tales como proteína básica de mielina, pueden demostrarse en la periferia. Prácticamente ningún síntoma neurológico puede aparecer con la enfermedad, y a menudo progresa en discapacidades físicas y cognitivas. La EM progresa en dos formas: nuevos síntomas que se producen en ataques separados (formas recidivantes) o se acumulan lentamente en el tiempo (formas progresivas) . Entre los ataques, los síntomas pueden desaparecer completamente-, pero a menudo se producen problemas neurológicos permanentes, en especial a menuda que la enfermedad avanza1.

Evaluación y clasificación de la enfermedad Se han descrito numerosos subtipos, o patrones de progresión. Los subtipos utilizan el curso pasado de la enfermedad en un intento por predecir el curso futuro. Son importantes no sólo para la prognosis sino también para decisiones terapéuticas. En 1996, United States National Múltiple Sclerosis Society estandarizó cuatro definiciones de subtipo: remisión recidivante, progresiva secundaria, progresiva principal, y remisión progresiva.

El subtipo de remisión recidivante se caracteriza por recaídas no predecibles seguidas por períodos de meses a años de remisión sin nuevos signos de actividad de la enfermedad. Este describe el curso inicial del 80% de los individuos con EM. La EM progresiva secundaria describe alrededor del 65% de aquellos con una EM de remisión, recidivante .inicial',, .que luego comenzaron a tener declinaciones neurológicas progresivas entre ataques agudos sin períodos de remisión definidos. Pueden observarse recaídas ocasionales y remisiones menores. El tiempo medio entre el inicio de la enfermedad y la conversión de EM de remisión recidivante a progresiva secundaria es de 19 años. El subtipo progresivo principal describe aproximadamente 10-15% de los individuos que; nunca experimentan una remisión luego de los síntomas de EM iniciales. Este se caracteriza por la progresión de la discapacijdad desde el inicio, con remisiones y mejoras nulas o únicamente ocasionales y menores. La edad de inicio del subtipo progresivo principal es posterior que la de remisión recidivante, pero similar a la edad media de progresión entre la remisión recidivante y progresiva secundaria. En ambos casos es de alrededor de 40 años. La EM de remisión progresiva describe aquellos individuos que, desde el inicio, tiene una declinación neurológica fija pero que también sufren de claros ataques superimpuestos . Este es el menos común de todos los subtipos. La esclerosis múltiple evoluciona por declinación neurológica progresiva o por ataques agudos, o por una combinación de ambos dependiendo del tipo de EM. Los síntomas de EM incluyen: fatiga, problemas visuales tales como visión borrosa o doble, hormigueos, entumecimientos, o sensaciones de ardor, debilidad muscular,, rigidez, tremores, y espasmos, problemas al caminar y andar, disfunción de la vejiga y el intestino, disfunción sexual, problemas cognitivos y de la memoria, problemas en el trabajo y discurso, dolor o depresión. Tales síntomas se exacerban durante un ataque mientras que la condición general del paciente declina. Se han descrito variantes típicas de EM sin comportamientos no estándares; estas incluyen enfermedad de Devic, esclerosis concéntrica de Balo, esclerosis difusa de Schilder y esclerosis múltiple de Marburg .

El diagnóstico de esclerosis múltiple se ha establecido por el uso de criterios diferentes. Históricamente, se utilizan ampliamente los criterios de Schumacher y Poser. En la actualidad, los criterios de McDonald, establecidos por Nacional Múltiple Sclerosis Society (NMSS) of America, por el uso de obtención de imágenes por IMR, tienden a reemplazar los criterios más viejos. (McDonald WI , Compston A, Edan G, et al-. (2001), Ann. Neurol . 50 (1): 121-7).

Opciones de tratamiento actuales Existen numerosas cuestiones a considerar por el paciente y el profesional a cargo en el tratamiento de la esclerosis múltiple. Los objetivos pueden incluir: aumentar la velocidad de recuperación de los ataques (por ej . ,. tratamiento con fármacos esteroideos) ,- reducción del número de ataques o del número de lesiones por MRI ; intento de amino amiento de la progresión de la enfermedad (tratamiento con fármacos modificadores de enfermedades o DMD) , un objetivo adicional es el alivio de complicaciones causadas por la pérdida de la función de los órganos afectados.

La mayoría de los neurólogos considerarán el tratamiento con DMD una vez que se establezca el diagnóstico esclerosis múltiple de remisión recidivante. Muchos comenzarán el tratamiento al momento del primer ataque de esclerosis múltiple, dado que las pruebas clínicas han sugerido que los pacientes en los que se retrase el tratamiento pueden no beneficiarse en la misma medida que los pacientes que se tratan más temprano.

Los pacientes reciben terapia inmunosupresora que incluye azatioprina y corticosteroides con el objetivo de limitar la extensión del proceso inflamatorio. La terapia inmunosupresora de esclerosis múltiple, sin embargo, es sólo parcialmente efectiva, y en la mayoría de los cosas sólo ofrece un retraso en la progresión de la enfermedad más allá del tratamiento antiinflamatorio e inmunosupresor . Los tratamientos modificadores de enfermedades actuales para EM son, ínter alia: ???ß-la (Avonex®, CinnoVex®, ReciGen81, Rebif®) , IFN -lb (Betaseron®, Betaferon®) , acetato de glatiramer (Copaxone®) que es un inmunomodulador no esteroideo sin interferón, mitoxantrona, un inmunosupresor, natalizumab (Tysabri®) , f ingolimod (Gilenia®) . Un número de tratamientos sé éhcuentran" bajo investigación. Los " agentes emergentes para RRMS que han sido promisorios en las pruebas de ,fase 2 incluyen alemtuzumab (Campath®) , daclizumab (Zenapax®) , rituximab, dirucotide, BHT-3009, cladribina, fumarato de dimetilo, estriol, f ingolimod, laquinimod, minociclina, estatinas, temsirolimus y teriflunomida .

Tratamiento con anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 En forma opcional, en un primer paso puede evaluarse una enfermedad de un paciente. Luego, el paciente se trata con un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 en una manera adecuada. Un paciente que tiene EM puede evaluarse para evaluar la presencia, etapa, evolución o clasificación de la enfermedad. En un aspecto ventajoso, un paciente determinado que tiene inflamación activa, y/o EM establecida o crónica, y/o que está experimentando un empeoramiento se trata con un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3. Con preferencia, la EM establecida puede caracterizarse como una EM que tiene una declinación neurológica progresiva, tal como enfermedad de tipo secundaria progresiva, principal progresiva o de remisión progresiva; en forma alternativa, una "EM establecida" se refiere a una EM que ha estado en progreso durante un año, o que ha estado en progreso durante menos que un año pero que no es responsiva a una primera línea de tratamiento. Con preferencia un empeoramiento se define como una exacerbación de., los síntomas relacionados con la esclerosis múltiple, en forma opcional; tal empeoramiento lleva a una declinación en la condición general del paciente. Otro aspecto de la invención es proporcionar una composición que sea capaz de tratar un EM establecida, o de reducir o abortar un ataque de EM, derivando así en una mejora de la salud y confort del paciente.

En una modalidad, los anticuerpos de acuerdo con la invención se administran en combinación con otro tratamiento para E , tal como los enumerados con anterioridad.

El anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 puede inyectarse o infundirse a través de vías subcutáneas, intravenosas, intramusculares, intra-articulares , intrasinoviales , intrasternales , intratecales , intrahepáticas , intralesionales e intracraneales.

Enfermedades Inflamatorias Crónicas del Intestino (CIDI) - Enfermedad de Crohn - Rectocolitis Las enfermedades inflamatorias crónicas del intestino son una serie de enfermedades que afecta el tracto gastrointestinal. Las CIDI más comunes son colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, enfermedad intestinal inflamatoria, enteritis regional, rectocolitis e ileocolitis granulomatosa .

Evaluación y clasificación de la enfermedad Las pruebas de diagnóstico incluyen: pruebas de laboratorio no invasivas (anemia . e infección, pruebas de función hepática para monitorear problemas del hígado y el conducto biliar, y estudios de heces para descartar las infecciones bacterianas, virales y parasíticas), endoscopía, ultrasonido endoscópico (EUS, por sus siglas en inglés) , endoscopía capsular, radiología tales como enterografía por CT de fases múltiples (MRE, por sus siglas en inglés) .

Las enfermedades inflamatorias crónicas del intestino son un tanto difíciles de puntuar. En la rectocolitis, una coloscopía puede proporcionar una perspectiva más bien completa de las lesiones en el colon, pero en la enfermedad de Crohn, dado que pueden aparecer lesiones en cualquier zona entre el esófago y el recto, la evaluación del paciente es mucho más difícil de obtener. Se ha establecido un sistema de puntuación para evaluar la enfermedad de Crohn: índice de Actividad de la Enfermedad de Crohn (CDAI, Véase por una revisión Sandbo n WJ et al. Gastroenterology 2002; 112 : 512) . La puntuación oscila de 0 a 600. Bajo 150 puntos, los pacientes se clasifican como "muy bien". Entre 150 y 219, la enfermedad es levemente activa, entre 220 y 449, la enfermedad es moderadamente activa. Sobre 450 puntos la enfermedad se clasifica como muy severa. Sin embargo, tal puntuación puede ser dependiente del paciente y, más recientemente, se ha establecido otro sistema de puntuación, Puntuación del Daño Digestivo de la Enfermedad de Crohn (CD3S) . o puntuación Lémann para puntuar la enfermedad de los pacientes a través de valores científicos más precisos, tales como una puntuación establecida por tomodensitometría .

(Pariente B. et al. Development of the Crohn' s Disease Digestive Damage score, the Lémann score Innflamm Bowel Dis 2010; Nov 28) .

La enfermedad de Crohn evoluciona con crisis, también conocidas como empeoramientos. Los empeoramientos pueden ser leves o severos, breves o prolongados. Tales empeoramientos o ataques pueden estar asociados con una puntuación CDAI mayor que 150 puntos, mayor que 219 puntos, mayor que 449 puntos. Los empeoramientos severos pueden derivar en dolor intenso, deshidratación, y pérdida de sangre. La inflamación recurrente tiende a aparecer en la misma área de los intestinos, pero puede propagarse a áreas adyacentes una vez que se haya retirado quirúrgicamente un segmento enfermo. Cuando la enfermedad de Crohn causa un empeoramiento de los síntomas gastrointestinales, la persona también puede experimentar la inflamación de las articulaciones (artritis) , inflamación del blanco de los ojos (episcleritis) , llagas bucales (aphthous stomatitis) , nodulos cutáneos inflamados en los brazos y piernas (erythema nodosum) , y llagas cutáneas azules-rojas que contienen pus (pyoderma gangrenosum) . Incluso cuando la enfermedad de Crohn no esté causando un empeoramiento de los síntomas.- gastrointestinales, la persona . aún. . uede experimentar pyoderma gangrenosum, aunque es probable que la inflamación de la columna vertebral (espondilitis anquilosante) , inflamación de las articulaciones pélvicas (sacroiliitis) , inflamación dentro del ojo (uveítis) , o inflamación de los conductos biliares (Colangitis esclerosante primaria) se produzca completamente sin relación con la actividad clínica de la enfermedad intestinal .

Opciones de tratamiento actuales Las opciones de tratamiento actuales se restringen al control de los síntomas, mantenimiento de la remisión, y prevención de la recaída. El tratamiento de la enfermedad de Crohn incluye en primer lugar tratar los síntomas agudos de la enfermedad, manteniendo luego la remisión. El tratamiento inicialmente implica el uso de medicaciones para eliminar infecciones, en general antibióticos, y reducir la inflamación, en general fármacos antiinflamatorios de aminosalicilato y corticosteroides . Puede requerirse cirugía para complicaciones tales como obstrucciones o abscesos, o si la enfermedad no responde a fármacos dentro de un período razonable .

Fármacos antiinflamatorios de aminosalicilato: Mesalazina o mesalamina (Lialda* , Asacol8, Pentasa', ® ® ® Salofalk , Dipentum y Rowasa ) , Sulfasalazina, que se •convierte en .5-ASA . , y sulfapiridina por bacterias^ intestinales. La sulfapiridina puede tener algún efecto terapéutico en artritis reumatoide. Sin embargo, el componente de sulfapiridina es a menudo el factor limitante en el tratamiento de la enfermedad de Crohn debido a su alto perfil de daños colaterales. Los compuestos 5-ASA han demostrado ser útiles en el tratamiento de la enfermedad de Crohn leve a moderada. Normalmente se consideran una terapia de primera línea para enfermedades en el íleon y el costado derecho del colon particularmente debido a su bajo perfil de efectos colaterales] en comparación con los corticosteroides.

Fármacos antiinflamatorios corticosteroides: Los enemas esteroideos se pueden utilizar para el tratamiento de síntomas de enfermedades rectales. Los corticosteroides son una clase de fármacos antiinflamatorios que se utilizan principalmente para el tratamiento de empeoramientos o ataques moderados a severos de la enfermedad de Crohn. Estos se utilizan con moderación a causa de la disponibilidad de tratamientos efectivos con menos efectos colaterales. El esteroide oral más comúnmente prescripto es prednisona, que en forma típica se dosifica a 0,5 mg/kg para la inducción de la remisión. Los esteroides intravenosos se utilizan para casos refractarios a esteroides orales, o donde no puedan tomarse esteroides orales. Dado que los corticosteroides reducen la capacidad de combatir la infección, debe ponerse mucho cuidado para asegurar que no haya infección activa,- en particular un absceso intra-abdominal antes del comienzo de la terapia con esteroides . La budesonida es un corticosteroide oral con absorción limitada y alto nivel de metabolismo de primer paso, lo que significa que menores cantidades de esteroides ingresan al torrente sanguíneo. Se ha demostrado que son útiles en el tratamiento de enfermedad de Crohn leve a moderada y para el mantenimiento de la remisión en la enfermedad de Crohn. Formulada como Entocort®, la budesonida se libera en el íleon y el colon derecho, y, por lo tjanto, tiene un efecto tópico contra la enfermedad en la área. La budesonida también es útil cuando se utiliza en combinación con antibióticos para enfermedad de Crohn activa.

Fármacos inmunosupresores de mercaptopurina : Azatioprina, mostrada en la presente en forma de comprimidos, es un inmunosupresor esteroideo moderado de primera línea. La azatioprina y 6 -mercaptopurina (6-MP) son los inmunosupresores más utilizados para la terapia de mantenimiento de la enfermedad de Crohn. Son antimetabolitos de purina, lo que significa que interfieren con la síntesis de purinas requeridas para células inflamatorias. Tienen una duración de acción de, meses, tornando su uso poco manejable para la inducción de la remisión. Ambos fármacos se dosifican a 1,5 a 2,5 mg/kg, donde la literatura da sustento al uso de dosis más elevadas. Se ha descubierto que la azatioprina y 6-MP son útiles ..para las siguientes indicaciones: terapia de mantenimiento para individuos dependientes de esteroides, enfermedad fistulizante , inducción de la remisión en enfermedad refractaria a esteroides, mantenimiento de la remisión luego de cirugía para enfermedad de Crohn. Sin embargo, la azatioprina es un fármaco particularmente peligroso, con enorme potencial para invitar un huésped de infecciones potencialmente fatales, y también se enumera por FDA como un carcinógeno humano.

El infliximab, comercializado como Remicade®, es un anticuerpo quimérico de ratón-humano que tiene por blanco el factor de necrosis tumoral , una citoquina en la respuesta inflamatoria. Es un anticuerpo monoclonal que inhibe el factor alfa de necrosis tumoral de citoquina proinflamatoria . Se administra en forma intravenosa y se dosifica por peso comenzando en 5 mg/kg. y aumentado de acuerdo con el carácter de la enfermedad. El infliximab ha hallado utilidad en lo siguiente: mantenimiento de la remisión para individuos con enfermedad de Crohn, inducción de remisión para individuos con enfermedad de Crohn, mantenimiento de la enfermedad de Crohn fistulizante , los efectos colaterales de infliximab, como otros inmunosupresores de clase TNF, pueden ser serios y potencialmente fatales, e infliximab porta una advertencia en un recuadro negro de FDA. Los efectos colaterales enumerados incluyen hipersensibilidad y reacciones alérgicas, riesgo de -re-ac ivación de tuberculosis, enfermedad. del suero, y riesgo de esclerosis múltiple.

El adalimumab, comercializado como Humira , como infliximab es un anticuerpo que tiene por blanco el factor de necrosis tumoral. Se ha demostrado que el adalimumab reduce los signos y síntomas de, y está aprobado para el tratamiento de, enfermedad de Crohn moderada a severa (CD) en adultos que no han respondido bien a tratamientos convencional y que han perdido la respuesta a, o son incapaces are de tolerar el infliximab .

El natalizumab, comercializado como Tysabri®, es un anticuerpo monoclonal anti-integrina que ha demostrado utilidad como tratamiento de inducción y mantenimiento para enfermedad de Crohn moderada a severa. El natalizumab puede ser adecuado en pacientes que no hayan respondido a medicaciones que bloquean el factor alfa de necrosis tumoral tal como infliximab.

Tratamiento con anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 Un aspecto de la invención es proporcionar una composición que sea capaz de tratar la enfermedad de Crohn, en forma opcional una enfermedad de Crohn establecida. En la presente invención "enfermedad de Crohn establecida" se refiere a una enfermedad de Crohn que se ha declarado durante más que un año.

Otro aspecto de la invención es proporcionar un método de tratamiento . ara reducir -o abortar un ataque de enfermedad de Crohn, derivando así en una mejora de la salud y confort del paciente. Un ataque de una enfermedad puede referirse a un paciente que tiene una puntuación CDAI mayor que 150 puntos, mayor que 219 puntos, mayor que 449 puntos. Por lo tanto, la presente invención también proporciona un método para tratar un paciente que tiene una enfermedad inflamatoria crónica del intestino que comprende el paso de evaluar si el paciente está experimentado un empeoramiento o un ataque, y si el paciente está experimentado un ataque, tratar a el paciente con una cantidad efectiva de un anticuerpo anti-KIR2DL1, 2 y/o 3.

Aún otro aspecto de la invención es proporcionar un método para el tratamiento profiláctico de un paciente que sufre de una enfermedad de Crohn, evitando así un empeoramiento .

En una modalidad, los anticuerpos de acuerdo con la invención se administran en combinación con otro tratamiento para la enfermedad de Crohn, tal como los enumerados con anterioridad.

Lupus eritematoso Existen cuatro tipos principales de lupus — lupus eritematoso sistémico, lupus eritematoso discoide, lupus eritematoso inducido por fármacos, y lupus eritematoso neonatal. Entre estos, el lupus eritematoso sistémico es la forma más. común, y. seria del lupus.

El lupus eritematoso discoide (DLE, por sus siglas en inglés) es una afección cutánea crónica de llagas con inflamación y fibrosis en el rostro, orejas y el cuero cabelludo y, a veces, en otras áreas de cuerpo. Estas lesiones se desarrollan como un parche inflamado, rojo, con una apariencia escamosa y ampollada. Las áreas centrales pueden tener un color más claro con un borde más oscuro que la piel normal.

El lupus eritematoso inducido por fármacos (DIL o DILE) es un trastorno autoinmune causado por el uso crónico de ciertos fármacos. Estos fármacos causan una respuesta autoinmune que produce síntomas similares a los de SLE. Existen 38 medicaciones conocidas que causan DIL pero tres comprenden el mayor número de casos: hidralazina, procainamida , e isoniazida. Si bien los criterios para diagnosticar DIL no se han establecido completamente, los síntomas de DIL en forma típica se presentan como mialgia y artralgia. En general, los síntomas se retiran luego de la discontinuación del uso de los fármacos.

El lupus eritematoso neonatal se hace presente en infantes, con mayor frecuencia niñas, nacidas de madres que tienen el anticuerpo Ro/SSA. Los infantes no tienen lesiones cutáneas en el nacimiento, pero las desarrollan durante las primeras semanas de vida.

El lupus eritematoso sistémico .es una enfermedad autoinmune sistémica crónica que puede afectar cualquier parte del cuerpo. Como ocurre en otras enfermedades autoinmunes , el sistema inmune ataca las células y el tejido del cuerpo, lo que da lugar a inflamación y daño tisular. El SLE con mayor frecuencia daña el corazón, la piel, los pulmones, los vasos sanguíneos, el hígado, los ríñones y el sistema nervioso. El curso de la enfermedad es impredecible , con períodos de enfermedad (empeoramientos) en alternancia con remisiones. La enfermedad se produce nueve veces más a menudo en mujeres que en hombres, en especial en mujeres en edad reproductiva de 15 a 35, y es más común también en aquellas de descendencia no europea. El SLE es tratable a través de la focalización de sus síntomas, principalmente con ciclofosfamida, corticosteroides e inmunosupresores ; actualmente no existe cura para la enfermedad. El SLE puede ser fatal, si bien con los avances medicinales recientes, las fatalidades se están tornando cada vez más inusuales. El SLE se considera incurable, pero altamente tratable. En los años 50, la mayoría de los individuos diagnosticados con SLE vivía menos que cinco años. Los avances en el diagnóstico y tratamiento han aumentado la supervivencia al punto en que más del 90% actualmente sobrevive durante más que diez años, y muchos pueden vivir en forma relativamente asintomática .

Evaluación y clasificación de la enfermedad Los esteroides., deben . utilizarse en la dosis más baja durante el período de tiempo lo más corto posible, para reducir el potencial de eventos cardiovasculares, y deben utilizarse, cuando sea posible, otros fármacos que puedan reducir los síntomas. Creatinina de suero elevado, hipertensión, síndrome nefrótico, anemia e hipoalbuminemia son factores prognósticos pobres. ANA es la prueba de observación más sensible para evaluación, mientras que anti-Sm (anti-Smith) es la más específica. El anticuerpo dsADN es también bastante específico y, a menudo, fluctúa con la actividad de la enfermedad; como tal, el título de dsADN es a menudo útil para monitorear los empeoramientos de la enfermedad o las respuestas al tratamiento.

Algunos profesionales hacen un diagnóstico sobre la base de los criterios de clasificación de American College of Rheumatology (ACR) . Sin embargo, los criterios se establecieron principalmente para uso en la investigación científica que incluye el uso en pruebas controladas aleatorizadas que requieren mayores niveles de confidencia, de modo que algunos individuos con SLE pueden no pasar los criterios completos.

American College of Rheumatology ha establecido once criterios en 1982, revisados en 1997 como un instrumento clasificatorio para operacionalizar la definición de SLE en pruebas clínicas. Por el propósito de identificar pacientes • - para estudios clínicos, un individuo tiene SLE si cualesquier 4 de 11 síntomas están presentes en forma simultánea o serial en dos ocasiones separadas: Serositis: Pleuritis o pericarditis, Úlceras orales, Artritis: artritis no erosiva de dos o más articulaciones periféricas, con sensibilidad, hinchazón, o efusión, fotosensibilidad, sangre (trastorno hematológico, anemia hemolítica (conteo bajo de glóbulos rojos) o leucopenia (conteo de glóbulos blancos <4000/µ1) , linfopenia (<1500/µ1) o trombocitopenia (<100000/µ1) en ausencia del fármaco ofensivo; trastorno renal; prueba positiva de anticuerpo antinuclear!; trastorno inmunológico : anti-Smith positivo, anti-ss ADN, anticuerpo antifosfolípido, y/o prueba serológica positiva falsa para sífilis; presencia de anti-ss ADN en el 70% de los casos, trastorno neurológico: Apoplejías o Psicosis, Erupción malar, Erupción discoide.

Opciones de tratamiento actuales El tratamiento de SLE implica prevenir empeoramientos y reducir su severidad y duración cuando ocurran. El tratamiento puede incluir corticosteroides y fármacos antimalaria. Ciertos tipos de lupus nefritis tales como glomerulonefritis proliferativa difusa requieren períodos de fármacos citotóxicos. Estos fármacos incluyen ciclofosfamida y micofenolato .

Los fármacos antirreumáticos modificadores de enfermedades (DMARD) se utilizan en forma preventiva para reducir la. incidencia de. .empeoramientos,, el .proceso de la enfermedad, y reducir la necesidad del uso de esteroides,-cuando ocurren los empeoramientos, se tratan con corticosteroides . Los DMARD comúnmente en uso son fármacos antimalaria tales como plaquenil e immunosupresores (por ej . , metotrexato y azatioprina) . Hidroxicloroquina' (HCQ) fue la última medicación aprobada por FDA para el lupus en 1955. También puede utilizarse anticuerpos anti-BlyS (Benlysta®, Human Genomce Science, Inc.) como un DMARD. La hidroxicloroquina es un fármaco antimalaria utilizado para manifestaciones constitucionales, cutáneas, y articulares. La hidroxicloroquina tiene relativamente pocos efectos colaterales, y existe evidencia de que mejora la supervivencia entre los individuos que sufren SLE . La ciclofosfamida se utiliza para glomerulonefritis severa u otras complicaciones perjudiciales de los órganos. Algunos fármacos aprobados para otras enfermedades se utilizan para SLE "fuera de lo indicado en la etiqueta"; también se utilizan fármacos inmunosupresores para controlar la enfermedad y prevenir la recurrencia de síntomas (conocidos como empeoramientos) . Dependiendo de la dosis, los individuos que requieren esteroides pueden desarrollar síndrome de Cushing, cuyos efectos colaterales pueden incluir obesidad, hinchazón facial, diabetes melitus, mucho apetito, dificultades para dormir y osteoporosis . Tales efectos colaterales .. pueden mermar cuando se reduce la gran dosis inicial, pero el uso a largo plazo de dosis incluso bajas puede causar presión sanguínea elevada y cataratas. Numerosos fármacos inmunosupresores novedosos se encuentran bajo pruebas activas para SLE. Más que suprimir el sistema inmune en forma no específica, como los corticosteroides , estos focalizan las respuestas de células inmunes individuales; se pueden utilizar analgésicos, tales como indometacina y diclofenac, si los fármacos de venta libre (principalmente fármacos antiinflamatorios no esteroideos) no proporcionan un alivio efectivo. Típicamente, el dolor se trata con fármacos de prescripción. Dada la variedad de síntomas y la implicación del sistema de órganos con SLE, su severidad en un individuo debe evaluarse con el fin de tratar el SLE en forma exitosa. La enfermedad leve o remitente puede a menudo permanecer no tratada en forma segura.

Tratamiento con anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 Los anticuerpos anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 se pueden utilizar para tratar lupus, que incluye pero sin limitación un lupus establecido, o para reducir o abortar un empeoramiento del lupus, derivando así en una mejora de la salud y confort del paciente. "Lupus establecido" se refiere a una enfermedad de lupus que ha estado en progreso durante un año o que se ha declarado durante más que un año. En una modalidad, los anticuerpos de acuerdo con la invención se administran en combinación con otro tratamiento del lupus, tal .como los enumerados con anterioridad.

Otros trastornos autoinmunes e inflamatorios Los anticuerpos antÍ-KIR2DL1 , 2 y/o 3 se pueden utilizar para tratar trastornos autoinmunes e inflamatorios adecuados, con .preferencia trastornos que involucran células T. Las enfermedades autoinmunes e inflamatorias pueden ser, pero sin limitación: Hepatitis Crónica Activa Autoinmune Aclorhidra, Encefalomielitis Diseminada Aguda, leucoencefalitis hemorrágica aguda, Enfermedad de Addison, Agammaglobulinemia, Alopecia areata, Esclerosis Lateral Amiotrófica, Espondilitis Anquilosante, Nefritis Anti -GBM/TBM, Síndrome Antifosfolípido, Síndrome Antisintetasa, Artritis, Alergia Atópica, Dermatitis Atópica, Anemia Aplásica Autoinmune, Cardiomiopatía Autoinmune, Anemia hemolítica autoinmune, Hepatitis autoinmune, enfermedad de oído interno autoinmune, Síndrome linfoproliferativo autoinmune, Neuropatía periférica autoinmune, Pancreatitis autoinmune, Síndrome poliendocrino autoinmune, Dermatitis de progesterona autoinmuna desconocida o múltiple, Púrpura trombocitopénica autoinmune, uveítis autoinmune, enfermedad de Balo/esclerosis concéntrica de Balo, Síndrome de Bechets, Enfermedad de Berger, encefalitis de Bickerstaff, síndrome de Blau, Penfigoide Bulloso, enfermedad de Castleman, enfermedad de Chagas, Síndrome de Disfunción Inmune de Fatiga Crónica, Polineuropatía desmielinizante, inflamatoria, crónica, Ostomielitis multifocal recurrente crónica, enfermedad de lyme crónica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, síndrome de Churg-Strauss , Penfigoide Cicatricial, Enfermedad Celíaca, síndrome de Cogan, enfermedad de aglutinina fría, Deficiencia del componente 2 complementario, Arteritis craneal, síndrome de CREST, Enfermedad de Crohn (uno de los dos tipos de enfermedad intestinal inflamatoria idiopática "IBD"), Síndrome de Cushing, Angeítis leucocitoclástica cutánea, enfermedad de Dego, enfermedad de Dercum, Dermatitis herpetiforme , Dermatomiositis , Diabetes mellitus tipo 1, esclerosis sistémica cutánea difusa, síndrome de Dressler, Lupus eritematoso discoide, Eczema, Endometriosis , Artritis relacionada con entesitis, Fascitis eosinofílica, Epidermolisis bullosa adquisita, Eritema nodoso, crioglobulinemia mixta esencial, síndrome de Evan, Fibrodisplasia osificante progresiva, Fibromialgia, Fibromiositis , Aveolitis fibrosante, Gastritis, Penfigoide gastrointestinal, Arteritis de células gigante, Glomerulonefritis , Síndrome del buen pastor, enfermedad de Graves, síndrome Guillain-Barré (GBS) , Encefalitis de Hashimoto, Tiroiditis de Hashimoto, Anemia hemolítica, Púrpura de Henoch-Schonlein, Herpes gestationis, Hidradenitis supurativa, Síndrome de Hughes, Hipogammaglobulinemia, Enfermedad Desmielizante Inflamatorio Idiopática, Fibrosis ¦pulmonar idiopática, Púrpura trombocitopénica idiopática, Nefropatía IgA, miositis de cuerpos de inclusión, Polineuopatía desmielizante inflamatoria, Cistitis intersticial, Síndrome del Colon Irritable (IBS), artritis idiopática juvenil, artritis reumatoide juvenil, Enfermedad de Ka asaki, Síndrome miasténico de Lambert-Eaton, Vasculitis leucocitoclástica , Lichen planus, Lichen sclerosus, Enfermedad de IgA lineal (LAD) , Enfermedad de Lou Gehrig, Hepatitis lupoide, Lupus eritematoso, Síndrome de Majeed, enfermedad de Méniére, poliangiitis microscópica, síndrome de Miller-Fisher, Enfermedad Mixta del Tejido Conectivo, Morphea, Enfermedad de Mucha-Habermann, Síndrome de Muckle- ells, Mieloma Múltiple, Esclerosis Múltiple, Miastenia gravis, Miositis, Narcolepsia, Neuromielitis óptica, Neuromiotonia, Penfigoide cicatrizal ocular, síndrome de opsoclonus mioclonus, tiroiditis de Ord, Reumatismo palindrómico, PANDAS (Trastornos Neuropsiquiátricos Autoinmunes Pediátricos Asociados con Streptococcus ) , Degeneración cerebelar paraneoplásica, Hemoglobinuria paroxística nocturna (PNH) , Síndrome de Parry Romberg, Síndrome de Parsonnage-Turner, Pars planitis, Pénfigo, Pénfigo vulgaris, Anemia Perniciosa, Encefalomielitis Perivenosa, Síndrome de POEMS, Poliarteritis nodosa, Polimialgia reumática, Polimiositis , Cirrosis biliar primaria, Colangitis esclerosante primaria, Neuropatía inflamatoria, progresiva,. Psoriasis, Artritis psoriática, Pioderma gangrenoso, Aplasia de glóbulos rojos puros, Encefalistis de Rasmussen, Fenómeno de Raynaud, Policondritis recidivante, síndrome de Reiter, síndrome de las piernas inquietas, Fibrosis retroperitoneal , Artritis reumatoide, Fiebre reumatoide, Sarcoidosis, Esquizofrenia, Síndrome de Schmidt, Síndrome de Schnitzler, Escleritis, Escleroderma , Síndrome de Sjógren, Espondiloartropatía , Síndrome de la sangre pegajosa, Enfermedad de Still, Síndrome del Hombre Rígido, Endocarditis bacteriana subaguda (SBE) , Síndrome de Susac, Síndrome de Sweet, Sydenham Chorea, Oftalmía Simpática, Arteritis de Takayasu, Arteritis Temporal, Síndrome de Tolosa-Hunt, Mielitis Transversa, Colitis ulcerativa, Enfermedad no diferenciada del tejido conectivo, Espondiloartropatía no diferenciada, Vasculitis, Vitíligo, Granulomatosis de Wegener, Síndrome de ilson y Síndrome de Wiskott-Aldrich.

Dosificación y regímenes de Dosificación de anticuerpos anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 En un aspecto, los métodos de tratamiento proporcionados por la invención comprenden administrar a un individuo una composición que comprende un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 en una cantidad efectiva para uso terapéutico. Una cantidad efectiva para uso terapéutico puede ser, por ejemplo, una dosis de aproximadamente 0,0003 mg (anticuerpo) /kg (peso del paciente), a aproximadamente 3 mg/kg [por ej . , aproximadamente 0,003 mg/kg a aproximadamente 3 mg/kg, tal como aproximadamente 0,015 a aproximadamente 3 mg/kg, por ej., cualquiera de aproximadamente 0,075 mg a aproximadamente 3 mg/kg, aproximadamente 0,3 mg/kg a aproximadamente 3 mg/kg, y aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 3 mg/kg, o cualquiera de aproximadamente 0,0003 mg/kg, aproximadamente 0,003 mg/kg, aproximadamente 0,015 mg/kg, aproximadamente 0,075 mg/kg, aproximadamente 0,3 mg/kg, aproximadamente 1 mg/kg, y aproximadamente 3 mg/kg) . Se describen dosis y formulaciones de anticuerpos anti-KIR en WO2008/084106 , cuya revelación se incorpora en la presente como referencia. En una modalidad, el método comprende repetir la administración al menos una vez, por ejemplo con una frecuencia de dosificación en el intervalo de 3 veces por día a una cada 2 meses. La dosis también puede administrarse, por ej . , al menos 3 veces, al menos 6 veces, o al menos 10 veces. En una modalidad, el anticuerpo se administra en forma intravenosa. En otra modalidad, la unión del anticuerpo a un KIR inhibitorio sobre la superficie de una célula NK potencia la actividad citotóxica de la célula NK. Aún en otra modalidad, el anticuerpo es un anticuerpo anti-KIR de reacción cruzada. Por ejemplo, el anticuerpo puede ser un anticuerpo 1-7F9 en una formulación de acuerdo con lo descrito en WO2008/084106.

En una modalidad preferida, la dosis se selecciona para proporcionar una . saturación completa (al menos .90%. ...de ocupación del KIR2DL1, 2 y/o 3 localizado) en pacientes humanos. El método en forma opcional incluye evaluar el paciente por la potenciación de las células NK y/o la actividad antiinflamatoria (o células anti-T) (que puede llevarse a cabo por el uso de cualquier técnicas adecuadas, muchas de las que son bien conocidas en la técnica, que incluyen, por ej . , el nivel de ocupación de KIR2DL1, 2 y/o 3, etiquetador CD107a, de acuerdo con lo descrito en la presente) . La formulación en forma típica se administra por administración i.v. durante un período de tiempo ¡adecuado, tal como aproximadamente 1 hora.

Por ejemplo, un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 puede administrarse en una dosis y una frecuencia de dosificación que logran al menos aproximadamente 90%, con preferencia al menos aproximadamente 95% de ocupación de KIR2DL1, 2 y/o 3 sobre las células NK en plasma durante al menos aproximadamente uno, dos, tres o seis meses, teniendo así una saturación sostenida durante un período de tiempo extendido (por ej . , al menos 3 meses, 6 meses) . En modalidades separadas, la dosis está en el intervalo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 3 mg/kg, de aproximadamente 0,3 a aproximadamente 3 mg/kg, de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 1 mg/kg y de aproximadamente 1 a aproximadamente 3 mg/kg, con mayor preferencia donde el anticuerpo es .un- anticuerpo anti -KIR, con mayor preferencia donde el anticuerpo es 1-7F9. La frecuencia de dosificación puede estar en el intervalo de una vez al día a una vez cada 2 meses, de aproximadamente una vez por semana a aproximadamente una vez cada 2 meses; o aproximadamente una vez por mes. En forma alternativa, la frecuencia de dosificación puede seleccionarse de aproximadamente tres veces, aproximadamente dos veces, y aproximadamente una vez por día; aproximadamente cinco veces, aproximadamente cuatro veces, aproximadamente tres veces, y aproximadamente dos veces por semana; y aproximadamente una v|ez cada dos, cuatro, y seis semanas.

En una modalidad preferida, una dosis de anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 que da lugar sustancialmente a la saturación completa del receptor (por ej . , al menos aproximadamente 90% o 95% de ocupancia del receptor) se administra de aproximadamente 2 veces por semana a aproximadamente una vez por mes, o de aproximadamente una vez por mes a aproximadamente una vez cada 2 meses. La dosis puede, por ej., administrarse al menos 3 veces, al menos 6 veces, o más. Por ejemplo, el método puede comprender administrar un anticuerpo anti-KIR2DLl, 2 y/o 3 en una dosis y una frecuencia de dosificación que logran al menos aproximadamente 90% o 95% de ocupación de KIR2DL1, 2 y/o 3 sobre células NK durante al menos aproximadamente dos semanas, un mes, 6 meses, 9 meses o 12 meses.

En una modalidad preferida, un régimen da lugar a una saturación completa del receptor sustancialmente sostenida. Se administra una dosis de anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 que da lugar sustancialmente a la saturación completa del receptor durante un período de al menos aproximadamente 1 semana, 2 semanas o 1 mes. Cuando la dosis da lugar sustancialmente a una saturación del receptor completa (por ej., al menos aproximadamente 90% o 95% de ocupación del receptor) durante aproximadamente una semana, la dosis puede administrarse por ejemplo entre una vez por semana y una vez cada dos semanas; cuando la dosis da lugar sustancialmente a una saturación del receptor completa durante aproximadamente dos semanas, la dosis puede administrarse por ejemplo entre una vez cada dos semanas y una vez por mes. Cuando la dosis da lugar sustancialmente a la saturación completa del receptor durante aproximadamente dos semanas a aproximadamente un mes, la dosis puede administrarse por ejemplo aproximadamente una vez por mes. En cada régimen, la dosis puede, por ej . , administrarse al menos 3 veces, al menos 6 veces, o más. Por ejemplo, el método puede comprender administrar un anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 en una dosis y una frecuencia de dosificación que logran al menos aproximadamente 95% de ocupación de KIR sobre las células NK durante al menos aproximadamente 6 meses, 9 meses o 12 meses.

En otra modalidad preferida,, un régimen da lugar a una saturación del receptor intermitente sustancialmente completa. Se administra una dosis de anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 que da lugar a una saturación del receptor sustancialmente completa (por ej . , al menos aproximadamente 90% o 95% de la ocupancia del receptor) durante un período de al menos aproximadamente 1 semana, 2 semanas o 1 mes. Cuando la dosis da lugar sustancialmente a una saturación del receptor completa durante aproximadamente una a dos semanas, la dosis puede administrarse por ejemplo aproximadamente una vez al mes o una vez por período de al menos dos meses (por ej., una vez cada dos meses) . Cuando la dosis da lugar sustancialmente a una saturación del receptor completa durante aproximadamente dos semanas a aproximadamente un mes, la dosis puede administrarse por ejemplo aproximadamente una vez por período de al menos dos meses (por ej . , una vez cada dos meses). En modalidades separadas, la dosis está en el intervalo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 0,3 mg/kg, administrada aproximadamente uña vez por mes; en una modalidad, la dosis está en el intervalo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 3 mg/kg, con preferencia 1 a aproximadamente 3 mg/kg, administrada aproximadamente una vez cada aproximadamente dos meses (o una vez por período de más de dos meses, esto es, menos que una vez por período de dos meses) , con mayor preferencia donde el anticuerpo es un anticuerpo... anti-KIR, con mayor preferencia . donde . el anticuerpo es 1-7F9. El tratamiento puede repetirse de manera tal que el régimen del tratamiento dé lugar a una saturación del receptor intermitente sustancialmente completa durante un período de al menos 6 meses, 9 meses o 12 meses.

El anticuerpo típicamente se administra en forma intravenosa, pero otros modos de administración adecuados son conocidos, y también descritos en, por ej . , WO2008/084106.

Si bien anti -KIR ( 1-7F9) o su variante S241P es un anticuerpo preferido para modular la actividad de las células NK y/o |el tratamiento de enfermedades, otros anticuerpos anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 y anti-KIR pueden utilizarse en los métodos de acuerdo con la invención. Sin embargo, tales anticuerpos deben tener valores Kd similares, depuración similar en un paciente, y un volumen de distribución similar, a los de anti-KIR(l-7F9) , donde "similar" significa dentro de aproximadamente 50%, con preferencia dentro de aproximadamente 30% del parámetro correspondiente de anti-KIR(1-7F9) . Anti-KIR (1-7F9) tiene una Kd de alta afinidad de aproximadamente 4 ng/ml, y una Kd de baja afinidad de aproximadamente 20 ng/ml para dosis de hasta 0,015 mg/kg; una depuración de aproximadamente 0,5 ml/h/kg, y un volumen de distribución de aproximadamente 115 ml/kg (Véase WO2008/084106) . Un anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 representativo útil en uno o más métodos de la invención puede tener las siguientes propiedades:. . (a)„ - reducir, o bloquear la señalización de un KIR2DL1, 2 y/o 3 inhibitorio sobre células NK; (b) una Kd de alta afinidad de aproximadamente 2 a aproximadamente 6 ng/ml; (c) una Kd de baja afinidad de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 ng/ml; (d) una depuración de aproximadamente 0,25 a aproximadamente 0,75 ml/h/kg, (e) un volumen de distribución de aproximadamente 50 ml/kg a aproximadamente 175 ml/kg. La ocupación del receptor de anticuerpos anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 puede determinarse por el uso de ensayos de acuerdo con lo descrito en la presente invención adaptados a la unión del KIR2DL1, 2 y/o 3 particular por el anticuerpo. Véase, por ej., el Ejemplo 2. Las propiedades farmacocinéticas de los anticuerpos anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 pueden determinarse por el uso de ensayos de acuerdo con lo descrito en la presente invención adaptados al anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 particular. Véase, por ej., el Ejemplo 1.

ENFERMEDADES AUTOINMUNES Los anticuerpos anti-KIR2DLl , KIR2DL2 y KIR2DL3 descritos en la presente pueden ser utilizados en composiciones, usos y métodos para el tratamiento de enfermedades autoinmunes .

Los ejemplos de enfermedades o trastornos autoinmunes incluyen, entre otros al síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) , atrofia esplénica adquirida, uveítis anterior aguda, encefalomielitis diseminada aguda (ADEM) , artritis gotosa aguda, leucoencefalitis hemorrágica necrbtizante aguda, sinusitis crónica o aguda, meningitis purulenta aguda (u otros trastornos inflamatorios del sistema nervioso central) , inflamación seria aguda, enfermedad de Addison, adrenalitis, diabetes mellitus de comienzo en el adulto (diabetes tipo II) , hipoparatiroidismo idiopático de comienzo en el adulto (AOIH) , agammaglobulinemia , agranulocitosis , vasculitides , incluyendo vasculitis (incluyendo vasculitis de grandes vasos (incluyendo polimialgia reumática y de células gigantes (artritis de Takayasu) , enfermedades alérgicas, dermatitis por contacto alérgica, dermatitis alérgica, angiitis granulomatosa alérgica, trastornos alérgicos de hipersensibilidad, neuritis alérgica, reacción alérgica, alopecia areata, alopecia total, síndrome, de Alport, alveolitis (por ejemplo, alveolitis alérgica y alveolitis fibrosante) , enfermedad de Alzheimer, amiloidosis, esclerosis lateral amiotrófica (ALS, enfermedad de Lou Gehrig) , un trastorno relacionados con eosinófilos (por ejemplo, eosinofilia) , anafilaxia, espondilitis anquilosante, angiectasia, nefritis mediada por anticuerpos, nefritis anti-GB /anti-TBM, enfermedades mediadas por complejo antígeno-anticuerpo, enfermedad de la membrana basal glomerular, síndrome por anticuerpos anti - fosfolípidos , síndrome anti-fosfolipídico (APS) , aftas, estomatitis aftosa, anemia aplásica, arritmia, arteriosclerosis , trastornos arterioscleróticos , artritis (por ejemplo, artritis reumatoide, como artritis aguda, artritis reumatoide crónica), artritis crónica progrediente , artritis deformante, ascariasis, aspergiloma (o granulomas que contienen eosinófilos) , aspergilosis , aspermiogenesia , asma (por ejemplo, asma bronquial, y asma auto- inmune) , ataxia, telangiectasia esclerosis atáxica, aterosclerosis , autismo, angioedema autoinmune, anemia aplásica autoinmune, gastritis atrófica autoinmune, diabetes autoinmune, enfermedad autoinmune de testículo y ovario, incluyendo orquitis y ooforitis autoinmune, trastornos autoinmunes asociados con enfermedades del colágeno, disautonomía autoinmune, enfermedad autoinmune del oído (por ejemplo, enfermedad autoinmune del oído interno (AGED) ) , enfermedades endocrinas autoinmunes incluyendo tiroiditis como tiroiditis autoinmune, síndrome de enteropatía autoinmune, insuficiencia gonadal autoinmune, pérdida de audición autoinmune, hemolisis autoinmune, hepatitis autoinmune, trastorno hepático autoinmune, hiperlipidemia autoinmune, inmunodeficiencia autoinmune, enfermedad autoinmune del oído interno (AIED) , miocarditis autoinmune, neutropenia autoinmune, pancreatitis autoinmune, poliendocrinopatías autoinmunes, síndrome poliglandular autoinmune tipo I, retinopatía autoinmune, púrpura trombocitopénica autoinmune (ATP) , enfermedad tiroidea -.autoinmune, urticaria autoinmune, enfermedades gastrointestinales autoinmunes, neuropatías axonales y neuronales, enfermedad de Balo, enfermedad de Behcet, lesión benigna familiar y de isquemia por reperfusión, angiitis linfocítica benigna, enfermedad de Berger (nefropatía por IgA) , pulmón de cuidador de palomas, ceguera, enfermedad de Boeck, bronquiolitis obliterante (sin trasplante) versus NSIP, bronquitis, aspergilosis bronconeumónica, síndrome de Bruton, penfigoide ampollar, síndrome de Caplan, cardiomiopatía, isquemia cardiovascular, síndrome de Castleman, enfermedad celíaca, enfermedad celíaca (enteropatía por gluten) , degeneración cerebelosa, isquemia cerebral y enfermedad que acompaña a la vascularización, enfermedad de Chagas, canalopatías (por ejemplo, epilepsia), canalopatías del SNC, coriorretinitis , coroiditis, un trastorno hematológico autoinmune, hepatitis crónica activa o hepatitis crónica activa autoinmune, dermatitis de contacto crónica, neumonía eosinofílica crónica, síndrome de fatiga crónica, hepatitis crónica, neumonitis por hipersensibilidad crónica, artritis inflamatoria crónica, polineuropatía desmielinizante inflamatoria crónica (CIPD) , inflamación crónica no tratable, candidiasis mucocutánea crónica, neuropatía crónica (por ejemplo, polineuropatías por IgM o neuropatía mediada por IgM) , enfermedad obstructiva crónica de las vías respiratorias, enfermedad inflamatoria pulmonar crónica, osteomielitis multifocal crónica recurrente ..(CRMO).; tiroiditis crónica (tiroiditis de Hashimoto) o tiroiditis subaguda, síndrome de Churg-Strauss , penfigoide cicatricial/penfigoide mucoso benigno, trastornos inflamatorios del SNC, vasculitis del SNC, enfermedad celiaca, síndrome de Cogan, enfermedad de aglutinina fría, colitis poliposa, colitis como colitis ulcerosa, colitis ulcerosa, colitis colagenosa, enfermedades que implican células T infiltrantes y respuestas inflamatorias crónicas, bloqueo cardíaco congénito, infección por rubéola congénita, anemia con Coombs positivo, enfermedad arterial ¡coronaria, miocarditis por Coxsackie, síndrome de CREST (calcinosis, fenómeno de Raynaud) , enfermedad de Crohn, crioglobulinemia, síndrome de Cushing, ciclitis (por ejemplo, ciclitis crónica, ciclitis heterocrónica, iridociclitis, o ciclitis de Fuchs) , fibrosis quística, toxicidad inducida por citoquinas, sordera, artritis degenerativa, enfermedades desmielinizantes (por ejemplo, enfermedades autoinmunes desmielinizantes) , neuropatías desmielinizantes, dengue, dermatitis herpetiforme y dermatitis atópica, dermatitis incluyendo dermatitis de contacto, dermatomiositis , dermatosis con componentes inflamatorios agudos, enfermedad de Devic (neuromielitis óptica) , trastorno diabético de grandes arterias, nefropatía diabética, retinopatía diabética, anemia de Diamond Blackfan, fibrosis pulmonar intersticial difusa, miocardiopatía dilatada, lupus... discoide . ..enfermedades que comprenden diapedesis de leucocitos, síndrome de Dressler, contractura de Dupuytren, infección por virus ECHO, eczema incluyendo eczema alérgico o atópico, encefalitis como encefalitis de Rasmussen y encefalitis límbica y/o del tronco encefálico, encefalomielitis (por ejemplo, encefalomielitis alérgica o encefalomielitis alérgica y encefalomielitis alérgica experimental (EAE )), hiperplasia endarterial, endocarditis, oftalmopatía endocrina, endometriosis . fibrosis endoraiocárdica , endoftalmia facoanafiláctica, endoftalmitis , enteritis alérgica, síndrome de eosinofiíLia-mialgia, fascitis eosinofílica , queratoconjuntivitis epidémica, epidermolisis ampollar adquirida (EBA) , episclera, epiescleritis , infección por virus de Epstein-Barr, eritema elevatum et diutinum, eritema multiforme, eritema nodoso leproso, eritema nodoso, eritroblastosis fetal, alteración de la motilidad esofágica, crioglobulinemia mixta esencial, etmoide, síndrome de Evan, encéfalomielitis alérgica experimental (EAE) , deficiencia de factor VIII, pulmón de granjero, fiebre reumática, síndrome de Felty, fibromialgia, alveolitis fibrosante, flariasis, glomeruloesclerosis focal segmentaria (FSGS) , intoxicación alimentaria, atrofia gástrica frontal, artritis de células gigantes (artritis temporal) , hepatitis de células gigantes, polimialgia de células gigantes, glomerulonefritis , glomerulonefritis (GN) con y sin síndrome nefrótico, como glomerulonefritis aguda o crónica (por. ejemplo, GN primaria) , síndrome de Goodpasture, artritis gotosa, síndromes asociados con transfusión de granulocitos , granulomatosis incluyendo granulomatosis linfomatoide , granulomatosis con poliangeítis (GPA) , uveítis granulomatosa , enfermedad de Graves, síndrome de Guillain-Barre , psoriasis gutata, hemoglobinuria paroxística, enfermedad de Hamman-Rich, enfermedad de Hashimoto, encefalitis de Hashimoto, tiroiditis de Hashimoto, hemocromatosis , anemia hemolítica o anemia hemolítica inmune incluyendo anemia hemolítica autoinmune (AIHA) , anemia hemolítica, hemofilia A, púrpura de Henoch-Schonlein, herpes gestacional, infección por virus de inmunodeficiencia humana (VIH) , hiperalgesia, hipogammaglobulinemia, hipogonadismo, hipoparatiroidismo, diabetes insípida idiopática, parálisis facial idiopática, hipotiroidismo idiopático, nefropatía idiopática por IgA, GN membranosa idiopática o nefropatía membranosa idiopática, síndrome nefrótico idiopático, fibrosis pulmonar idiopática, esprue idiopático, púrpura trombocitopénica idiopática (ITP) , nefropatía por IgA, enfermedades mediadas por IgE (por ejemplo, anafilaxia y rinitis alérgica y atópica) , enfermedad esclerosante relacionada con IgG4, ileítis regional, nefritis de complejos inmunes, respuestas inmunes asociadas con hipersensibilidad aguda y retardada mediada por citocinas y linfocitos T, GN inmune, lipoproteínas inmunorreguladoras , incluyendo síndrome de distrés respiratorio agudo .o. del adulto (ARDS) , miositis por cuerpos de inclusión, artritis infecciosa, infertilidad debido a anticuerpos anti -espermatozoides, inflamación de la totalidad o parte de la úvea, enfermedad inflamatoria intestinal (IBD), enfermedades inflamatorias de la piel hiperproliferativas , miopatía inflamatoria, diabetes dependiente de insulina (tipo I), insulitis, cistitis intersticial, enfermedad pulmonar intersticial, fibrosis pulmonar intersticial, iritis, trastorno isquémico por reperfusión, inflamación de las articulaciones, artritis juvenil, dermatomipsitis juvenil, diabetes juvenil, diabetes mellitus de comienzo juvenil ( (Tipo I) , incluyendo diabetes mellitus pediátrica dependiente de insulina (IDDM) , artritis reumatoide de comienzo juvenil, síndrome de Kawasaki, queratoconjuntivitis seca, quipanosomiasis , síndrome de Lambert-Eaton, leishmaniasis , lepra, leucopenia, deficiencia de adhesión leucocitaria, vasculitis leucocitoclástica , leucopenia, liquen plano, liquen escleroso, conjuntivitis leñosa, Dermatosis por IgA lineal, enfermedad por IgA lineal (LAD) , síndrome de Loffler, hepatitis lupoide, lupus (incluyendo nefritis, cerebritis, pediátrica, no renal, extra-renal, discoide, alopecia), Lupus (LES), lupus eritematoso diseminado, artritis de Lyme, enfermedad de Lyme, neumonitis intersticial linfoide, paludismo, infertilidad autoinmune masculina y femenina, vasculitis de vaso medio maxilar.- (incluyendo enfermedad de Kawasaki y poliarter.itis nodosa) , GN membranosa o membranosa proliferativa (MPGN) , incluyendo tipo I y tipo II y GN rápidamente progresiva, GN membranosa (nefropatía membranosa), enfermedad de Meniere, meningitis, colitis microscópica, poliangitis microscópica, migraña, nefropatía de cambios mínimos, enfermedad mixta del tejido conectivo (MCTD) , mononucleosis infecciosa, úlcera de Mooren, enfermedad de Mucha-Habermann, neuropatía motora multifocal, insuficiencia endocrina múltiple, síndrome de lesión orgánica múltiple como secundario a septicemia, traumatismo o hemorragia, síndrome de lesión orgánica múltiple, esclerosis múltiple (MS) como MS espino-óptica, esclerosis múltiple, paperas, trastornos musculares, miastenia gravis como miastenia gravis asociada a timoma, miastenia gravis, miocarditis, miositis, narcolepsia, enterocolitis necrotizante y colitis transmural, y enfermedad intestinal inflamatoria autoinmune, vasculitis necrotizante, cutánea o por hipersensibilidad, síndrome de lupus neonatal (NLE) , nefrosis, síndrome nefrótico, enfermedad neurológica, neuromielitis óptica (de Devic) , neuromielitis óptica, neuromiotonía , neutropenia, linfocitosis no cancerosa, uveítis no granulomatosa, timoma no maligno, trastornos inflamatorios oculares y orbitales, penfigoide cicatricial ocular, ooforitis, oftalmía simpática, síndrome de opsoclono mioclono (OMS) , síndrome de opsoclono u opsoclono mioclono (OMS) , y neuropatía sensorial, neuritis.. óptica, . orquitis granulomatosa, osteoartrosis , reumatismo palindrómico, pancreatitis, pancitopenia , PANDAS (Ttrastornos neuropsiquiátricos autoinmunes pediátricos asociados a Streptococcus ) , degeneración cerebelosa paraneoplásica , síndrome paraneoplásico, síndromes paraneoplásicos , incluyendo síndromes paraneoplásicos neurológicos (por ejemplo, síndrome misténico de Lambert-Eaton o síndrome de Eaton-Lambert) , enfermedades parasitarias como Lesihmania, hemoglobinuria paroxística nocturna (PNH) , síndrome de Parry Romberg, pars planitis (uveítis periférica) , síndrome de Parsonnage-Turner, infección por parvovirus, penfigoide como pen igoide ampolloso y penfigoide cutáneo, pénfigo (incluyendo pénfigo vulgar) , pénfigo eritematoso, pénfigo foliáceo, pénfigo mucos-membranoso, penfigoide, pénfigo, úlcera péptica, parálisis periódica, neuropatía periférica, encefalomielitis perivenosa, anemia perniciosa (anemia perniciosa) , anemia perniciosa, uveítis facoantigénica, neumonocirrosis , síndrome de POEMS, poliarteritis nodosa, Tipo I, II y III, poliartritis crónica primaria, policondritis (por ejemplo, policondritis refractaria o recidivante) , enfermedad autoinmune poliendocrina, insuficiencia poliendocrina, síndromes poliglandulares (por ejemplo, síndromes poliglandulares autoinmunes (o síndromes de endocrinopatía poliglandular) ) , polimialgia reumática, pol-imiositis ,¦ polimiositis/dermatomiositis , polineuropatías , polirradiculitis aguda, síndrome post-cardiotomía, uveítis posterior, o uveítis autoinmune, síndrome post-infarto de miocardio, síndrome post-pericardiotomía, nefritis post-estreptocócica , síndromes post-vacunación, demencia presenil, cirrosis biliar primaria, hipotiroidismo primario, mixedema idiopático primario, linfocitosis primaria, que incluye linfocitosis monoclonal de células B (por ejemplo, gammapatía monoclonal benigna y gammapatía monoclonal de significado incierto, GUS) , mixedema primario MS progresiva primaria (PPMS) y MS remitente-recidivante (RRMS) , colangitis esclerosante primaria, dermatitis por progesterona, esclerosis sistémica progresiva, artritis proliferativa, psoriasis tal como psoriasis en placas, psoriasis, artritis psoriásica, proteinosis alveolar pulmonar, eosinofilia con infiltración pulmonar, anemia o aplasia pura de glóbulos rojos (PRCA) , aplasia pura de glóbulos rojas, sinusitis purulenta o no purulenta, psoriasis pustulosa y psoriasis ungueal, pielitis, pioderma gangrenoso, tiroiditis de Quervain, fenómeno de Raynaud, artritis reactiva, aborto recurrente, reducción en la respuesta de la presión arterial, distrofia simpática refleja, esprúe resistente al tratamiento, enfermedad o síndrome de Reiter, policondritis recidivante, lesión por reperfusión del miocardio o u otros tejidos, lesión por reperfusión, síndrome de distrés respiratorio, síndrome de piernas inquietas, autoinmunidad retiniana, fibrosis retroperitoneal , síndrome de Reynaud, enfermedades reumáticas, fiebre reumática, reumatismo, artritis reumatoide, espondilitis reumatoide, infección por virus de la rubéola, síndrome de Sampter, sarcoidosis, esquistosomiasis , síndrome de Schmidt, enfermedades relacionadas con virus de SCID y de Epstein-Barr, esclerótica, escleritis, esclerodactilia , esclerodermia (incluyendo esclerodermia sistémica), colangitis esclerosante, esclerosis diseminada, esclerosis como esclerosis sistémica, pérdida de audición sensoneural, espondiloartritis seronegativa, síndrome de Sheehan, síndrome de Shulman, silicosis, síndrome de Sjogren, autoinmunidad del esperma y testicular, sinusitis esfenoidal, síndrome de Stevens-Johnson, síndrome del hombre rígido (o persona rígida) , endocarditis bacteriana subaguda (SBE) , lupus eritematoso cutáneo subagudo, pérdida repentina de la audición, síndrome de Susac, corea de Sydenham, oftalmía simpática, lupus eritematoso sistémico (LES) o lupus eritematoide sistémico (por ejemplo, SLE cutáneo) , vasculitis necrotizante sistémica y vasculitis asociada a ANCA, como vasculitis o síndrome de Churg-Strauss (CSS) ) , tabes dorsal, arteritis de Takayasu, ' telangiectasias , arteritis temporal/arteritis de células gigantes, tromboangitis ubiterans, trombocitopenia (desarrollada, por ejemplo, por pacientes con infarto .. de , miocardio) , ,:> incluyendo púrpura trombótica trombocitopénica (TTP) y trombocitopenia autoinmune o inmuno-mediada, como púrpura trombocitopénica idiopática (ITP) , incluyendo ITP crónica o aguda, púrpura trombocitopénica (TTP), tirotoxicosis , lesión tisular, síndrome de Tolosa-Hunt, necrólisis epidérmica tóxica, síndrome de shock tóxico, reacción a la transfusión, hipogammaglobulinemia transitoria de la infancia, mielitis transversa, mielitis transversa, eosinofilia pulmonar tropical, tuberculosis, colitis ulcerosa, enfermedad indiferenciada del tejido conectivo (UCTD) , urticaria (por ejemplo, urticaria alérgica crónica y urticaria idiopática crónica, incluyendo urticaria autoinmune crónica) , uveítis (por ejemplo, uveítis anterior), uveorretinitis , valvulitis, disfunción vascular, vasculitis, artritis vertebral, dermatosis vesiculoampollosa , vitíligo, granulomatosis de egener (ahora denominada Granulomatosis con poliangeítis (GPA) , síndrome de Wiskott-Aldrich y síndrome de hiper IgM ligada al cromosoma X.

TRATAMIENTO DEL CÁNCER Los anticuerpos anti-KIR2DLl , KIR2DL2 y KIR2DL3 descritos en la presente pueden ser utilizados en composiciones, usos y métodos para el tratamiento del cáncer (por ejemplo, tumores) .

Los ejemplos de cáncer incluyen, entre otros a, carcinoma,., linfoma, blastoma, sarcoma y leucemia. Ejemplos más particulares de estos cánceres incluyen cáncer de células escamosas, cáncer de pulmón (incluyendo cáncer de pulmón miorocítico, cáncer de pulmón no microcítico, adenocarcinoma de pulmón y carcinoma de pulmón de células escamosas) , cáncer de peritoneo, cáncer hepatocelula , cáncer gástrico o de estómago (incluyendo cáncer gastrointestinal) , cáncer pancreático, glioblastoma , cáncer de cuello uterino, cáncer de ovario, cáncer de hígado, cáncer de vejiga, hepatoma, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer colorrectal, carcinoma de endometrio o uterino, carcinoma de glándula salival, cáncer de riñon o renal , cáncer de hígado, cáncer de próstata, cáncer de vulva, cáncer de tiroides, carcinoma hepático y diversos tipos de cáncer de cabeza y cuello, así como linfoma de células B (incluyendo linfoma no Hodgkin (NHL) de bajo grado/folicular, NHL linfocítico pequeño (SL) , NHL de grado intermedio/folicular, NHL de grado intermedio difuso, NHL inmunoblástico de alto grado, NHL linfoblástico de alto grado, NHL de células pequeñas no hendidas de alto grado; NHL de enfermedad voluminosa, linfoma de células del manto, linfoma relacionado con SIDA y macroglobulinemia de Walclenstrom) ; leucemia linfocítica crónica (LLC) ; leucemia linfoblástica aguda (LLA) ; leucemia de células pilosas; leucemia mieloblástica crónica; mieloma múltiple y trastorno lin oproliferativo post-trasplante (PTLD) .

El término cáncer susceptible de . tratamiento -por .. la presente invención incluye, entre otros a, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma y leucemia o tumores malignos linfoides. Ejemplos más particulares de estos cánceres incluyen cáncer de vejiga, ovario, melanoma, cáncer de células escamosas, cáncer de pulmón (incluyendo cáncer de pulmón microcítico, cáncer de pulmón no microcítico, adenocarcinoma de pulmón y carcinoma de pulmón de células escamosas) , cáncer de peritoneo, cáncer hepatocelular, cáncer gástrico o de estómago (incluyendo cáncer gastrointestinal) , cáncer pancreático, glioblastoma, cáncer de ¡cuello uterino, cáncer de ovario, cáncer de hígado, cáncer de vejiga, hepatoma, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer colorrectal, carcinoma de endometrio o de útero, carcinoma de glándulas salivales, cáncer de riñon o renal, cáncer de hígado, cáncer de próstata, cáncer de vulva, cáncer de tiroides, carcinoma hepático y diversos tipos de cáncer de cabeza y cuello, así como linfoma de células B (incluyendo linfoma no Hodgkin (NHL) de bajo grado/folicular; NHL linfocítico pequeño (SL) ; NHL de grado intermedio/folicular; NHL difuso de grado intermedio, NHL inmunoblástico de alto grado, NHL linfoblástico de alto grado, NHL de células pequeñas no hendidas de alto grado; NHL de enfermedad voluminosa; linfoma de células del manto, linfoma relacionado con SIDA y macroglobulinemia de aldenstrom) ; leucemia Linfocítica-.... crónica . (LLC) ; leucemia linfoblástica aguda (LLA) ; leucemia de células pilosas, leucemia mieloblástica crónica y trastorno linfoproliferativo post-trasplante (PTLD) , así como proliferación vascular anormal asociada con facomatosis, edema (como el asociado con tumores cerebrales) y síndrome de Meigs. Preferentemente, el cáncer se selecciona del grupo que consiste de cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de recto, cáncer de pulmón no microcítico, linfoma no Hodgkin (NHL) , cáncer de células renales, cáncer de próstata, cáncer de hígado, cáncer de páncreas, sarcoma de tejidos blandos, sarcoma de Kaposi, carcirioma carcinoide, cáncer de cabeza y cuello, melanoma, cáncer de ovario, mesotelioma y mieloma múltiple. En una modalidad de ejemplo (Ver ejemplos de trabajo) el cáncer es un cáncer tempranamente avanzado (incluyendo metástasis) de vejiga, ovario o melanoma. En otra modalidad, el cáncer es cáncer colorrectal . Las condiciones cancerosas susceptibles para el tratamiento de la invención incluyen cánceres metastásicos en donde la expresión de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 por células supresoras derivadas mieloides suprime las respuestas antitumorales y las respuestas inmunes anti- invasivas . El método de la presente invención es particularmente adecuado para el tratamiento de tumores vascularizados .

La invención también es adecuada para el tratamiento de cánceres en combinación con quimioterapia o radioterapia o otros productos biológicos y . para mejorar la actividad, . del mismo, es decir, en individuos en los que la expresión de KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 por células supresoras derivadas mieloides suprime respuestas antitumorales y la eficacia de la quimioterapia o la radioterapia o la eficacia biológica. Cualquier agente quimioterapéutico que presenta actividad contra el cáncer puede ser utilizado de acuerdo con la presente invención. Preferentemente, el agente quimioterapéutico puede seleccionarse del grupo que consiste de agentes alquilantes, antimetabolitos , análogos de ácido fólico, análogos de pirimidina, análogos de purina e inhibidores relacionados, alcaloides de la vinca, epipodofilotoxinas , antibióticos, L-asparaginasa, inhibidores de topoisomerasa, interferones , complejos de coordinación de platino, urea sustituida con antracenodiona, derivados de metil hidracina, supresores adrenocorticales , adrenocorticosteroides , progestinas, estrógenos, antiestrógenos , andrógenos, antiandrógenos y análogo de la hormona liberadora de gonadotropina . Más preferentemente, el agente quimioterapéutico puede seleccionarse del grupo que consiste de 5-fluorouracilo (5-FU) , leucovorina (LV) , irenotecano, oxaliplatino, capecitabina, paclitaxel y docetaxel. Pueden usarse dos más agentes quimioterapéuticos en un cóctel a administrar en combinación con la administración del anticuerpo anti-VEGF. Una combinación preferida es la .quimioterapia basada .en fluorouracilo, que comprende 5-FU y una o más otro agente (s) quimioterapéutico (s) . Los regímenes de dosificación adecuados de quimioterapias combinadas son conocidos en la técnica y se describen en, por ejemplo, Saltz, et al. (1999) Proc ASCO 18:233a y Douillard, et al. (2000) Lancet 355: 1041-7. El agente biológico puede ser otros potenciador inmune como los anticuerpos contra proteínas de fusión PD-L1-L2, PD, CTLA-4 y PD-L1, PD-L2, CTLA-4, así como citocinas, antagonistas y agonistas del factor de crecimiento, hormonas y anticuerpos anti-citocinas .

ALERGIAS Los anticuerpos anti-KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 descritos en la presente pueden ser utilizados en composiciones, usos y métodos para el tratamiento de alergias (por ejemplo, reacciones alérgicas a alérgenos) .

Los ejemplos de alérgenos incluyen antígenos de ácaros y antígenos polínicos.

Las enfermedades alérgicas representativas incluyen asma bronquial, rinitis alérgica, dermatitis atópica y alergias al polen e insectos. La diátesis alérgica es un factor genético que puede ser heredado por hijos de padres alérgicos. Las enfermedades alérgicas familiares son también conocidas como enfermedades atópicas y el factor causal, de transmisión genética es diátesis atópica. "Dermatitis atópica" es un término general para una enfermedad atópica, especialmente enfermedades acompañadas de síntomas de dermatitis. Los ejemplos preferidos incluyen una afección alérgica seleccionada del grupo que consiste de eccema, rinitis alérgica, fiebre del heno, urticaria y alergias a alimentos. Las condiciones alérgicas incluyen eccema, rinitis alérgica o rinitis, fiebre del heno, asma bronquial, urticaria (ronchas) y alergias alimentarias y otras enfermedades atópicas.

Afecciones inflamatorias y enfermedades inflamatorias I Los anticuerpos anti-KIR2DLl , KIR2DL2 y KIR2DL3 descritos en la presente pueden ser utilizados en composiciones, usos y métodos para el tratamiento de afecciones inflamatorias y enfermedades inflamatorias.

Las condiciones inflamatorias y enfermedades inflamatorias, incluyen entre otras a enfermedades reumáticas (por ejemplo, artritis reumatoide, osteoartritis , artritis psoriásica) espondiloartropatías (por ejemplo, espondilitis anquilosante, artritis reactiva, síndrome de Reiter) ; artropatías por cristales (por ejemplo, gota, pseudogota, enfermedad por depósito de pirofosfato de calcio) , esclerosis múltiple, enfermedad de Lyme, polimialgia reumática, enfermedades del tejido conectivo (por ejemplo, lupus eritematoso sistémico, esclerosis sistémica, polimiositis , dermatomiositis , síndrome de Sjogren) , vasculitis (por ejemplo, poliarteritis nodosa, . granulomatosis de . Wegener, síndrome de Churg-Strauss) ; enfermedades inflamatorias, incluyendo consecuencias de traumatismo o isquemia, sarcoidosis, enfermedades vasculares incluyendo enfermedad vascular aterosclerótica, aterosclerosis y enfermedad vascular oclusiva (por ejemplo, aterosclerosis, enfermedad isquémica cardiaca, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular, enfermedad vascular periférica) , y reestenosis de stent vascular; enfermedades oculares incluyendo uveítis, enfermedad de la córnea, iritis, iridociclitis y cataratas.

Las enfermedades inflamatorias también incluyen, entre otras, reflujo ácido/acidez estomacal, acné, acné vulgar, alergias y sensibilidades, enfermedad de Alzheimer, asma, aterosclerosis y enfermedad vascular oclusiva (por ejemplo, ateroesclerosis , cardiopatía isquémica, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular , enfermedad vascular periférica) y reestenosis del stent vascular, enfermedades autoinmunes, bronquitis, cáncer, carditis, cataratas, enfermedad celíaca, dolor crónico, prostatitis crónica, cirrosis, colitis, enfermedades del tejido conectivo (por ejemplo, lupus eritematoso sistémico, esclerosis sistémica, polimiositis , dermatomiositis , síndrome de Sjogren) , enfermedad de la córnea, enfermedad de Crohn, artropatías por cristales (por ejemplo, gota, seudogota, enfermedad por depósito de pirófosfato. de calcio)^,, demencia, dermatitis, diabetes, ojos secos, eczema, edema, enfisema, fibromialgia , gastroenteritis, gingivitis, glomerulonefritis , enfermedad cardiaca, hepatitis, presión arterial elevada, hipersensibilidades , enfermedades inflamatorias intestinales, enfermedades inflamatorias incluyendo consecuencias de traumatismo o isquemia, resistencia a la insulina, cistitis intersticial, iridociclitis, iritis, dolor en articulaciones/artritis/artritis reumatoide, enfermedad de Lyme, síndrome metabólico (síndrome X) , esclerosis múltiple, miositis, nefritis, obesidad, enfermedades oculares incluyendo uveítis, osteopenia, osteoporosis , enfermedad de Parkinson, enfermedad inflamatoria pélvica, enfermedad periodontal, poliarteritis , policondritis , polimialgia reumática, psoriasis, lesión por reperfusión, artritis reumática, enfermedades reumáticas (por ejemplo, artritis reumatoide, osteoartritis , artritis psoriásica) , artritis reumatoide, sarcoidosis, esclerodermia, sinusitis, síndrome de Sjógren, colon espástico, espondiloartropatías (por ejemplo, espondilitis anquilosante, artritis reactiva, síndrome de Reiter) , candidiasis sistémica, tendinitis, rechazo de trasplante, infecciones urinarias, vaginitis, enfermedades vasculares incluyendo enfermedad vascular aterosclerótica , vasculitides (por ejemplo, poliarteritis nodosa, granulomatosis de Wegener, síndrome de Churg-Strauss ) y vasculitis. · . ...

MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO Los anticuerpos anti -KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 y anti-KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 anticuerpos que se unen selectivamente a KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 y fragmentos de unión a antígenos de los mismos, pueden ser utilizados en métodos de diagnóstico para detectar la presencia o ausencia de polipéptidos KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3. Los anticuerpos an i -KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 y anti-KIR2DLl , KIR2DL2 y KIR2DL3 pueden utilizarse en métodos que comprenden (a) poner en contacto una muestra de prueba con un anticuerpo, o fragmento del mismo, que se une a KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 o KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 ; y (b) ensayar en cuanto a complejos anticuerpo-epítopo . El complejo anticuerpo-epítopo puede ser detectado por Western Blot, radioinmunoensayo, ELISA (ensayo de inmunosorbente unido a enzimas) , inmunoensayo tipo "sandwich" , ensayo de inmunoprecipitación, reacción de precipitación, reacción de difusión en gel y precipitación, ensayo de i inunodifusión, ensayo de aglutinación, ensayo de fijación del complemento, ensayo irimunohistoquímico, inmunoensayo fluorescente e inmunoensayo con proteína A. La muestra puede ser una muestra de biopsia de tejido, linfa, orina, líquido cefalorraquídeo, líquido amniótico, exudado inflamatorio, sangre, suero, heces o líquido recogido en el tracto colorrectal .

Los anticuerpos que se unen selectivamente a KIR2DL1, IR2DL2 y KIR2DL3 pueden ser recombinantes . Los fragmentos de anticuerpos que se unen selectivamente a KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 pueden ser un Fab, Fab' , F(ab')2, Fv, CDR, paratopo, o porción de un anticuerpo que es capaz de unirse al antígeno. Los anticuerpos que se unen selectivamente a KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 pueden ser quiméricos, humanizados, antiidiotípicos , de una sola cadena, bifuncionales o co-específieos . Los anticuerpos que se unen selectivamente a KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 pueden ser un fragmento que es conjugado con una etiqueta, incluyendo entre otros a una etiqueta quimioluminiscente , una etiqueta paramagnética (por ejemplo, aluminio, manganeso, platino, oxígeno, lantano, lutecio, escandio, itrio o galio) , un agente de contraste para IRM, etiqueta fluorescente, etiqueta bioluminiscente o etiqueta radioactiva.

Además, el anticuerpo KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 que se une selectivamente a KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 y los fragmentos de unión a antígenos del mismo, pueden estar unidos a un soporte sólido (por ejemplo, perla, tubo de ensayo, lámina, placa de cultivo o tira de ensayo) , tal como una matriz.

El método puede comprender la obtención de imágenes de un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 por tomografía de emisión de positrones (PET) , sistema de monitoreo de CCD de luz -.baja, rayos X, tomografía computerizada , . gammagrafía, imagen fotoacústica, tomografía computarizada de emisión de fotón único (SPECT) , imágenes de resonancia magnética (IRM) , ecografía, imágenes paramagnéticas y tomografía de coherencia óptica endoscópica.

La invención puede comprender un paso de modalidad de una evaluación o paso de prueba para evaluar la presencia, estadio, evolución o calificación de la enfermedad. Así, un método para el tratamiento de una enfermedad autoinmune o inflamatoria en un paciente puede comprender: (a) la modalidad de una evaluación de la enfermedad en el | paciente; y (b) si el paciente tiene una enfermedad adecuada para el tratamiento con un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 de la invención, la administración a el paciente una dosis efectiva de anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3. Opcionalmente tal paso de evaluación puede implicar la obtención de una muestra biológica de un paciente sospechoso de tener una enfermedad autóinmune o inflamatoria. Por ejemplo, el genotipo KIR y HLA-C de un paciente con artritis reumatoide pueden proporcionar información de predicción de respuesta a la terapia anti-TNF-a. Véase McGeough, et al. (2011) Rheumatology International. Además, la expresión de isoformas de KIR2DL está asociada con susceptibilidad a enfermedad inflamatoria intestinal. Zhang et al. (2008) Life Science Journal 5(4):17-22. Pueden lograrse métodos para evaluar la enfermedad (por ejemplo, diagnóstico, estadificación) mediante cualquier técnica adecuada conocida en la técnica, por ejemplo mediante la modalidad de una prueba de laboratorio. Ejemplos de técnicas adecuadas incluyen la modalidad de un ensayo basado en PCR o RT-PCR (por ejemplo, para detectar ácidos nucleicos o genes asociados con la enfermedad, a menudo denominados "etiquetadores" o "etiquetadores biológicos"), biopsia, endoscopia, estudios de heces, cualquier prueba de laboratorio no invasiva (por ejemplo, pruebas para anemia e infección, pruebas de función hepática para detectar problemas en el| hígado y las vías biliares, pruebas para infecciones bacterianas, virales y parasitarias) , ecografía, tomografía computarizada, MRE, IRM y otras técnicas de imágenes, análisis cromosómico, técnicas de detección de inmunoensayo/inmunocitoquímicas (por ejemplo, presencia de autoanticuerpos) , ensayos histológicos y/o histopatológicos , electroforesis de proteínas séricas, citómetría de flujo (por ejemplo, detección de células inmunes, células T) , gas en sangre arterial (ABG) (en asma o COP ) y técnicas de exploración física (por ejemplo, para síntomas físicos, número de articulaciones con sinovitis) .

Además, los sujetos con genes de activación de KIR2DS1 y/o KIR2DS2 son susceptibles a desarrollar artritis psoriásica, pero sólo cuando los ligandos HLA para sus ¦receptores inhibitorios homólogos, KIR2DL1 y KIR2DL2/3 están ausentes— La ¦ ausencia de ligandos para KIRs inhibitorios podría reducir potencialmente el umbral de activación de células NK (y/o T) mediada a través de la activación de receptores, lo que contribuye a la patogénesis de la artritis psoriásica. Martin et al. (2002) The Journal of Immunology 169: 2818-2822. Los métodos comprenden la detección de la presencia de auto-anticuerpos, por ejemplo detectar factor reumatoide (RhF) , anticuerpos anti-péptido cíclico citrulinado, anti-ARNss, anti AR ds , anti-Smith, anti- fosfolípido, anti -nucleares y/o anti-actina. En una modcilidad, los métodos1 comprenden la evaluación de los niveles de una enzima proteolítica, un mediador inflamatorio, un etiquetador de inflamación en curso o una citoquina proinflamatoria . En una modalidad, los métodos comprenden la determinación del nivel de proteína C-reactiva (CRP) y/o la velocidad de sedimentación eritrocitaria . Una determinación de que un individuo tiene resultados anormales (indicativos de la enfermedad, exacerbación, inflamación en curso) , por ejemplo, niveles anormales de ABG, autoanticuerpos , CRP, cualquier enzima proteolítica, mediador inflamatorio o etiquetador de inflamación en curso indica que el individuo es adecuado para el tratamiento con un anticuerpo anti-KIR2DL1, 2 y/o 3. Se evalúa una muestra biológica de un paciente para determinar la presencia de células T, preferentemente células- T CD4+ y/o células T activadas y/o -proliferantes) . ..·..;¦ Ensayos, de detección La invención proporciona un método para identificar moduladores ("ensayo de detección") , es decir, compuestos o agentes candidatos o de prueba (por ejemplo, péptidos, peptidomiméticos , moléculas pequeñas u otros fármacos) que se unen a polipéptidos KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 , tienen un efecto estimulador o inhibidor sobre, por ejemplo, la expresión de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 o la actividad de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 , o tienen un efecto estimulador o inhibidor de |la interacción entre KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 y su pa (es) de unión natural (es) .

La invención proporciona ensayos para la detección de compuestos candidatos o de prueba que se unen a la proteína o polipéptido KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 porción o la porción biológicamente activa del mismo, por ejemplo, que modulan la capacidad del polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 para interactuar con su par (es) de unión natural (es) . En otra modeilidad, la invención proporciona ensayos para la detección de compuestos candidatos o de prueba que se unen o modulan la actividad de una proteína o polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 o una porción biológicamente activa del mismo. En una modalidad, la invención proporciona ensayos para la detección de compuestos candidatos o de prueba que tienen un efecto estimulador o inhibidor sobre funciones inmunes reguladas negativamente por KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 tal como se identifican en la presente o en base a su efecto sobre la interacción entre KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 y su par (es) de unión natural (es) . Estas funciones relacionadas con KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 incluyen a modo de ejemplo la inhibición de la producción de citoquinas (por ejemplo, IL-2, interferón gamma por células T, supresión de la coestimulación moderada de CD28, inhibición de la proliferación de células T CD4+ y CD8+, supresión de la proliferación de células T CD4+ naíve y de memoria, y supresión de la activación de TCR sin la inducción de apoptosis) . Los compuestos de prueba de la presente invención pueden obtenerse mediante cualquiera de los numerosos enfoques en métodos de bibliotecas combinatorias conocidos en la técnica, entre ellos: bibliotecas biológicas; bibliotecas en fase sólida o en fase de solución espacialmente direccionables en paralelo, métodos de bibliotecas de síntesis que requieren deconvolución; el método de biblioteca "de una perla un compuesto" ; y métodos de bibliotecas de síntesis usando selección por cromatografía de afinidad. El enfoque de biblioteca biológica se limita a bibliotecas de péptidos, mientras que los otros cuatro enfoques son aplicables a péptidos, oligómeros no peptídicos o bibliotecas de compuestos de moléculas pequeñas. Lam (1997) Anticancer Drug Des. 12: 145.

En una modalidad, un ensayo es un ensayo basado en células en el que una célula que . expresa un ...polipéptido KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 o una porción biológicamente activa del mismo se pone en contacto con un compuesto de prueba, y se determina la capacidad del compuesto de prueba para modular la actividad de KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3. La determinación de la capacidad del compuesto de prueba para modular la actividad de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 puede llevarse a cabo mediante el monitoreo, por ejemplo, de la capacidad de KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 para unirse a su par (es) de unión natural (es) y modular la actividad de las células inmunes. La célula inmune puede ser una célula T, una célula B o una célula mieloide. La determinación de la capacidad del compuesto de ensayo para modular la unión de KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 a su contra-receptor puede lograrse, por ejemplo, mediante el acoplamiento de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 con una etiqueta radioisotópica o enzimática para monitorear la capacidad de un compuesto de prueba para modular la unión de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 a células T que expresan el contra-receptor de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3. La determinación de la capacidad del compuesto de prueba para unirse a KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 puede lograrse, por ejemplo, mediante el acoplamiento del compuesto con una etiqueta radioisotópica o enzimática tal que la unión del compuesto a KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 puede determinarse mediante la detección del compuesto KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3. etiquetado..en un complejo.

También está dentro del alcance de esta invención determinar la capacidad de un compuesto para interactuar con KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 sin el etiquetado de cualquiera de los interactuantes . Por ejemplo, puede utilizarse un microfisiómetro para detectar la interacción de un compuesto con KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 sin el etiquetado del compuesto o KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3. McConnell, H. M. et al. (1992) Science 257:1906-1912. Un microfisiómetro (por ejemplo, Cytosensor) es un instrumento analítico que mide la velocidad a la que una célula acidifica su entorno mediante un sensor potenciométrico de luz direccionable (LAPS) . Los cambios en esta velocidad de acidificación pueden utilizarse como un indicador de la interacción entre un compuesto y KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3.

Un ensayo puede ser un ensayo basado en células que comprende poner en contacto una célula T que expresa un par de unión de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 con un compuesto de prueba y determinar la capacidad del compuesto de prueba para modular (por ejemplo, estimular o inhibir) la actividad del par de unión de KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3. La determinación de la capacidad del compuesto de prueba para modular la actividad de un par de unión de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 puede lograrse, por ejemplo, mediante la determinación de la capacidad del polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 para unirse o interactuar con el par de unión. de KIR2DL1, .KIR2DL2. y KJR2DL3.

La determinación de la capacidad del polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 , o un fragmento biológicamente activo del mismo, para unirse o interactuar con un par de unión de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 , puede llevarse a cabo por uno de los métodos descritos anteriormente para determinar unión directa. En una modalidad, la determinación de la capacidad del polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 para unirse o interactuar con un par de unión de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 puede lograrse mediante la determinación de la actividad del par de unión. Por ejemplo, la actividad del par de unión puede ser determinada mediante la detección de inducción de un segundo mensajero celular (por ejemplo, actividad de tirosina cinasa o fosfatasa) , la detección de actividad catalítica/enzimática de un sustrato apropiado, la detección de la inducción de un gen reportero (que comprende un elemento regulador sensible a un objetivo unido operativamente a un ácido nucleico que codifica un etiquetador detectable, por ejemplo, luciferasa) , o la detección de una respuesta celular regulada por un objetivo. Por ejemplo, la determinación de la capacidad del polipéptido KIR2DL1 , KIR2DL2 y IR2DL3 para unirse o interactuar con un par de unión natural de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 puede lograrse mediante la medición de la capacidad de un compuesto para modular la coestimulación, de células inmunes o la inhibición en un ensayo de proliferación, o mediante la interferencia con la capacidad de un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 de unirse a anticuerpos que reconocen una porción del polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3. En una modalidad, los compuestos que modulan la activación de células T pueden ser identificados mediante la determinación de la capacidad de un compuesto para modular la proliferación de células T o la producción de citoquinas. En una modalidad, los compuestos que modulan la activación de células T pueden ser identificados mediante la determinación de la capacidad de un compuesto para modular la proliferación de células T o la producción de citoquinas en más de una concentración de antigeno.

Un ensayo puede ser un ensayo no celular en el que un polipéptido KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 o una porción biológicamente activa del mismo se pone en contacto con un compuesto de prueba y se determina la capacidad del compuesto de prueba para unirse al polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 o una porción biológicamente activa del mismo. Las porciones biológicamente activas preferidas de los polipéptidos KIR2DL1, los KIR2DL2 y KIR2DL3 a ser utilizadas en ensayos de la presente invención incluyen fragmentos que participan en interacciones con moléculas distintas de KIR2DL1, IR2DL2 y KIR2DL3 , por ejemplo, al menos una porción " de un dominio extracelular que se une a un par de unión de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3. La unión del compuesto de prueba al polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 puede determinarse directa o indirectamente como se describió anteriormente.

; El ensayo puede ser un ensayo no celular en el que una polipéptido KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 o una porción biológicamente activa del mismo se pone en contacto con un compuesto de prueba y se determina la capacidad del compuesto de prueba para modular (por ejemplo, estimular o inhibir) la actividad del polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 o una porción biológicamente activa del mismo. La determinación de la capacidad del compuesto de prueba para modular la actividad de un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 puede lograrse, por ejemplo, mediante la determinación de la capacidad del polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 de unirse a un par de unión de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 por uno de los métodos descritos anteriormente para determinar unión directa. Los ensayos no celulares de la presente invención son adecuados para el uso de formas de polipéptidos soluble y/o unidas a membranas (por ejemplo, polipéptidos KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 o porciones biológicamente activas de los mismos, o pares de unión a los que se unen KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3) . En el caso de ensayos no celulares en los que se utiliza una forma unida a membrana de un polipéptido (por ejemplo, un KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 de superficie celular), puede, ser deseable utilizar un agente . solubilizante tal ,que la forma unida a membrana del polipéptido se mantiene en solución. Los ejemplos de tales agentes solubilizantes incluyen detergentes no iónicos como n-octilglucósido, n-dodecilglucós'ido, n-dodecilmaltósido, octanoil-N-metilglucamida, decanoil-N-metilglucamida, Tritón® X-100, Tritón® X-114, Thesit, Isotridecilpoli (etilenglicol éter)n, 1-propano sulfonato de 3- [ (3-colamidopropil) dimetilaminio] -(CHAPS) , hidroxi- 1-propano sulfonato de 3- [(3- colamidopropil ) dimetilaminio] -2 (CHAPSO) , o 1-propano sulfonato de N-dodecil .dbd.N,N-dimetil-3famonio.

En los métodos de ensayo,, puede ser deseable inmovilizar KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 o su par de unión para facilitar la separación de formas complejadas de no complejadas de uno o ambos de los polipéptidos, asi como para dar cabida a la automatización del ensayo. La unión de un compuesto de prueba a una polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3, o la interacción de un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3con su par de unión en presencia y en ausencia de un compuesto candidato, puede llevarse a cabo en cualquier recipiente adecuado para contener los reactivos. Los ejemplos de tales recipientes incluyen placas de microtitulación, tubos de ensayo y tubos de microcentrífuga . Puede proporcionarse una proteína de fusión que añade un dominio que permite que uno o ambos de los polipéptidos se unan a una matriz. Por ejemplo, las . roteínas, de -fusión glutatión-S-transíerasa/KIR2DLl , los KIR2DL2 y KIR2DL3 o las proteínas de fusión glutatión-S-transferasa/par de unión pueden ser adsorbidas sobre perlas de el glutatión SEPHAROSE® (Sigma Chemical, St . Louis, MO) o placas de microtitulación derivatizadas con glutatión, que luego son combinadas con el compuesto de prueba o el compuesto de prueba y el polipéptido par de unión no adsorbido o el polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 , y la mezcla se incuba bajo condiciones conducentes a la formación de complejos (por ejemplo, en condiciones fisiológicas en cuanto a sal y pH) . Después |de la incubación, las perlas o los pocilios de la placa de microtitulación se lavan para eliminar cualquier componente no unido, se inmoviliza la matriz en el caso de las perlas, y se determina la formación de complejos directa o indirectamente, por ejemplo, como se describió anteriormente. Alternativamente, los complejos pueden ser disociados de la matriz y el nivel de unión o actividad de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 puede determinarse usando técnicas estándar. Pueden usarse también otras técnicas para inmovilizar polipéptidos en matrices en los ensayos de detección de la invención. En una modalidad alternativa, la determinación de la capacidad del compuesto de prueba para modular la actividad de un polipéptido KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 puede lograrse mediante la determinación de la capacidad del compuesto de prueba para modular la actividad de una molécula que funciona, dirección 3' de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 , por ejemplo, mediante la interacción con el dominio citoplasmático de un par de unión de KIR2DL1, KIR2DL2 y IR2DL3. Por ejemplo, pueden determinarse los niveles de segundos mensajeros, la actividad de la molécula interactuante sobre un objetivo apropiado, o la unión del interactuante a un objetivo apropiado como se ha descrito anteriormente.

Los moduladores de la expresión de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 pueden identificarse en un método en el que una célula se pone en | contacto con un compuesto candidato y se determina la expresión de ARNm o polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 en la célula. El nivel de expresión de ARNm o polipéptido KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 en presencia del compuesto candidato se compara con el nivel de expresión de ARNm o polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 en ausencia del compuesto candidato. El compuesto candidato puede entonces ser identificado como un modulador de la expresión de KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 sobre la base de esta comparación si el cambio es estadísticamente significativo.

Los polipéptidos KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 pueden ser utilizados como "proteínas cebo" en un ensayo de dos híbridos o un ensayo de tres híbridos (Véase, por ejemplo, la patente de EE.UU. N° 5.283.317; Zervos , et al (1993) Cell. 72:223-232; Madura, et al (1993) J. Biol . Chem. 268:12046-12054; Bartel.,. et al ( 1993 ) . Biotechniques 14:920-924; Iwabuchi , et al (1993) Oncogene. 8:1693-1696; y WO 94/10300), para identificar otros polipéptidos que se unen o interactuar con KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 ("proteínas de unión a KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3", "pares de unión de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3" , o "bp KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3") y están involucrados en la actividad de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3. Estas proteínas de unión a KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 están también probablemente involucradas, en la propagación de señales por los polipéptidos KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 o los objetivo's de KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 como, por ejemplo, elementos dirección 3'· de una vía de señalización mediada por KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3. Alternativamente, tales 5 polipéptidos de unión de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 pueden ser inhibidores de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3. El sistema de dos híbridos se basa en la naturaleza modular de la mayoría de los factores de transcripción, que consisten en dominios de unión y activación de ADN separables. Brevemente, el 10 ensayo utiliza dos construcciones de ADN diferentes. En una construcción, el gen que codifica para un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 está fusionado a un gen que codifica el dominio de unión a ADN de un factor de transcripción conocido (por ejemplo, GAL-4 ) . En la otra 15 construcción, una secuencia de ADN, de una biblioteca de secuencias de ADN, que codifica un polipéptido identificado ·"" . ("presa" o "muestra") se fusiona a un gen que codifica para el dominio de activación del factor de transcripción conocido. Si el "cebo" y los polipéptidos "presa" son capaces 20 de interactuar en vivo, formando un complejo dependiente de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 , los dominios de unión y activación a ADN del factor de transcripción se ponen en estrecha proximidad. Esta proximidad permite la transcripción de un gen reportero (por ejemplo, LacZ) que está unido 25 operativamente a un sitio de regulación transcripcional sensible al factor de transcripción. La expresión del gen reportero puede ser detectada y las colonias de células que contienen el factor de transcripción funcional pueden ser aisladas y utilizarse para obtener el gen clonado que codifica el polipéptido que interactúa con el polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3.

Una combinación de dos o más de los ensayos descritos en la presente. Por ejemplo, puede identificarse un agente de modulación utilizando un ensayo a base de células o un ensayo no celular y la capacidad del agente para modular la actividad de un polipéptido KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 puede ser confirmada in vivo, por ejemplo, en un animal tal como un modelo animal para transformación y/o tumorigénesis celular.

Esta invención se refiere además a nuevos agentes identificados por los ensayos de selección descritos anteriormente. Un agente identificado en los métodos descritos en la presente en un modelo animal adecuado. Por ejemplo, un agente identificado como se describe en la presente (por ejemplo, un agente modulador de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 , una molécula de ácido nucleico antisentido de K.IR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 , un anticuerpo específico para KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3, o un par de unión de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3) puede ser utilizado en un modelo animal para determinar la eficacia, toxicidad, o efectos secundarios del tratamiento con el agente. Alternativamente, un agente identificado como se describe en la presente puede ser utilizado en un modelo animal para determinar el mecanismo de acción de el agente. Además, esta invención se refiere a usos de nuevos agentes identificados por los ensayos de selección descritos anteriormente para los tratamientos que se describen en la presente.

Ensayos de detección Pueden usarse porciones o fragmentos de secuencias de ADNc identificadas en la presente (y las secuencias de genes completos correspondientes) de muchas maneras como reactivos polinucleótidos . Por ejemplo, estas secuencias pueden usarse para: (i) mapear sus genes respectivos en un cromosoma; y, por lo tanto, localizar regiones de genes asociados con la enfermedad genética; (ii) identificar a un individuo a partir de una muestra biológica diminuta ..(tipificación de tejido); y (iii) ayudar en la identificación forense de una muestra biológica... Estas aplicaciones se describen en las subsecciones siguientes.

Ma eo de cromosomas Una vez que la secuencia (o una porción de la secuencia) de un gen ha sido aislada, esta secuencia puede utilizarse para mapear la localización del gen en un cromosoma. Este proceso se llama mapeo de cromosomas. En consecuencia, las porciones o fragmentos de las secuencias de nucleótidos de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 , descritas en la presente, pueden utilizarse para mapear la ubicación de los genes de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 en un cromosoma. El mapeo d¡e las secuencias de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 en los cromosomas es un primer paso importante en la correlación de estas secuencias con genes asociados con la enfermedad. En pocas palabras, los genes de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 pueden ser mapeados a cromosomas mediante la preparación de cebadores de PCR (preferentemente de 15-25 pb de longitud) de las secuencias de riucleótidos de IR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3. El análisis por computadora de las secuencias de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 puede utilizarse para predecir cebadores que no se extienden más de un exón en el ADN genómico, lo que complica el proceso de amplificación. Estos cebadores pueden utilizarse entonces para, la detección por PCR de híbridos de células somáticas que contienen cromosomas humanos individuales. Sólo aquellos híbridos que contienen el gen humano correspondiente a las secuencias de KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3. producirán un fragmento amplificado. Los híbridos de células somáticas son preparados por la fusión de células somáticas de mamíferos diferentes (por ejemplo, células humanas y de ratón) . Como los híbridos de células humanas y de ratón crecen y se dividen, pierden poco a poco los cromosomas humanos en un orden aleatorio, pero conservan los cromosomas de ratón. Mediante el uso de medios en los que las células de ratón no pueden crecer, porque carecen de una enzima en particular, pero si pueden hacerlo las células humanas, el único cromosoma humano que contiene el ¡gen que codifica la enzima necesaria será retenido. Mediante el uso de diversos medios, pueden establecerse paneles de líneas celulares híbridas. Cada línea celular en un panel contiene un solo cromosoma humano o un pequeño número de cromosomas humanos y un conjunto completo de cromosomas de ratón, lo que permite un mapeo fácil de los genes individuales a cromosomas humanos específicos. D'Eustachio, et al. (1983) Science 220: 919-924. Los híbridos de células somáticas que contienen sólo fragmentos de cromosomas humanos también pueden ser producidos mediante el uso de cromosomas humanos con translocaciones y deleciones.

El mapeo por PCR de híbridos de células somáticas es un procedimiento rápido para la asignación de una secuencia particular a un cromosoma dado. Pueden asignarse tres o más secuencias por día utilizando un solo termociclador . Usando las secuencias de nucleótidos de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 para diseñar cebadores de oligonucleótidos , puede lograrse la sublocalización con paneles de fragmentos de cromosomas específicos. Otras estrategias de mapeo que pueden utilizarse de manera similar para mapear una secuencia de KIR2DL1, IR2DL2 y KIR2DL3 a su cromosoma incluyen hibridación in situ (descrito en Fan et al. (1990) Proc Nati. Acad. Sci . USA 87:6223-27), pre-selección con cromosomas etiquetados clasificados por flujo y pre-selección por hibridación a bibliotecas de ADNc específicas de cromosomas.

La hibridación in situ por fluorescencia (FISH, por sus siglas en inglés) de una secuencia de ADN a una dispersión de cromosomas en metafase puede utilizarse además para proporcionar una ubicación cromosómica precisa en un paso. Las dispersiones de cromosomas pueden hacerse usando células cuya división ha sido bloqueada en la metafase con un producto químico como colcemid que desorganiza el huso mitótico. Los cromosomas pueden ser tratados brevemente con tripsina y luego teñidos con Giemsa. Se desarrolla un patrón de bandas claras y oscuras en cada cromosoma, de modo que los cromosomas pueden ser identificados individualmente. La técnica de FISH puede utilizarse con una secuencia de ADN tan corta como de 500 o 600 bases. Sin embargo, clones más grandes que 1.000 bases tienen una mayor probabilidad de unirse a una localización cromosómica única con una intensidad de señal suficiente para la detección sencilla. Preferentemente 1.000 bases y más preferentemente 2.000 bases serán suficientes para obtener buenos resultados en un período razonable de tiempo. Para una revisión de esta técnica, véase Verma et al., Human Chromosomes : A manual of basic techniques (Pergamon Press, Nueva York, 1988). Los reactivos para mapeo cromosómico pueden utilizarse individualmente para etiquetar un solo cromosoma o un sitio único en ese cromosoma, o pueden utilizarse paneles de reactivos p¡ara etiquetar varios sitios y/o múltiples cromosomas. Los reactivos que corresponden a regiones no codificantes de los genes son en realidad preferidos para fines de mapeo . Las secuencias de codificación son más propensas a ser conservadas dentro de familias de genes, aumentando así la probabilidad de hibridación cruzada durante el mapeo cromosómico.

Una vez que una secuencia ha sido mapeada a una localización cromosómica precisa, la posición física de la secuencia en el cromosoma puede ser correlacionada con los datos del mapa genético En última instancia, puede llevarse a cabo la secuenciación completa de genes de varios individuos para confirmar la presencia de una mutación y distinguir mutaciones de polimorfismos.

Tipificación de tejidos Las secuencias de KIR2DL1 ,. · KIR2DL2.. y KIR2DL3 de la presente invención también pueden utilizarse para identificar individuos a partir de muestras biológicas diminutas. Además, las secuencias de la presente invención pueden utilizarse para proporcionar una técnica alternativa que determina la secuencia de ADN real, base por base de porciones seleccionadas del genoma de un individuo. Así, las secuencias de nucleótidos de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 descritas en la presente pueden utilizarse para preparar dos cebadores de PCR de los extremos 5 'y 3' de las secuencias. Estos cebadores pueden utilizarse para amplificar el ADN de un individuo y posteriormente secuenciarlo.

Los paneles de secuencias de ADN correspondientes de los individuos, preparados de esta manera, pueden proporcionar identificaciones individuales únicas, ya que cada individuo tendrá un conjunto único de tales secuencias de ADN debido a diferencias alélicas. Las secuencias de la presente invención pueden utilizarse para obtener las secuencias de identificación de individuos y de tejido. Las secuencias de nucleótidos de KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 de la invención representan únicamente porciones del genoma humano. Se produce variación alélica en cierto grado en las regiones codificantes de estas secuencias y en un grado mayor en las regiones no codificantes. Se estima que la variación alélica entre los seres humanos individuales se produce con una •frecuencia de .aproximadamente una vez por cada 500 bases. Cada una de las secuencias descritas en la presente puede, en cierta medida, utilizarse como un estándar contra el cual el ADN de un individuo puede ser comparado con fines de identificación. Debido a que se produce un mayor número de polimorfismos en las regiones no codificantes, son necesarias menos secuencias para diferenciar individuos. Las secuencias no codificantes de SEQ ID NO: 1 o 4 pueden proporcionar cómodamente identificación individual positiva con un panel de quizás 10 a 1.000 cebadores que producen cada uno secuencia no codificante amplificada de 100 bases. Si se usan secuencias de codificación prelas, tales como las de SEQ ID NO: 3 o 6, un número más apropiado de cebadores para la identificación individual positiva sería 500-2000.

Si un panel de reactivos de secuencias de nucleótidos de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 descritas en la presente se utiliza para generar una base de datos de identificación única para un individuo, estos mismos reactivos pueden ser utilizados más tarde para identificar tejido de ese individuo. Utilizando la base de datos de identificación única, puede hacerse la identificación positiva del individuo, vivo o muerto, a partir de muestras de tejidos extremadamente pequeñas.

Uso de secuencias de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 en biología forense . Las técnicas de identificación basadas en ADN . también pueden utilizarse en biología forense. Las secuencias de la presente invención pueden utilizarse para proporcionar reactivos polinucleótidos , por ejemplo, cebadores de PCR, dirigidos a loci específicos en el genoma humano, que pueden mejorar la fiabilidad de las identificaciones forenses basadas en ADN, por ejemplo, proporcionando otro "etiquetador de identificación" (es decir, otra secuencia de ADN que es única a un individuo en particular) . Como se mencionó anteriormente, la información real de secuencias de bases pueden utilizarse para la identificación como una alternativa exacta a patrones formados por fragmentos generados por enzimas de restricción. Las secuencias dirigidas a regiones no codificantes de SEQ ID NO: 1 o 3 son particularmente apropiadas para este uso ya que se produce un mayor número de polimorfismos en las regiones no codificantes, haciendo más fácil la diferenciación de individuos utilizando esta técnica. Los ejemplos de reactivos polinucleótidos incluyen secuencias de nucleótidos de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 o porciones de las mismas, por ejemplo, fragmentos derivados de las regiones no codificantes de SEQ ID NO: 1 o 3 que tienen una longitud de al menos 20 bases, preferentemente al menos 30 bases. La secuencias de nucleótidos de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 descritas en la presente pueden utilizarse además parat proporcionar reactivos polinucleótidos, por ejemplo, sondas etiquetadas -o etiquetables que pueden usarse en, por ejemplo, una técnica de hibridación in situ, para identificar un tejido específico, por ejemplo, linfocitos. Esto puede ser muy; útil eri casos donde se presenta un patólogo forense con un tejido de origen desconocido. Los paneles de estas sondas de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 pueden utilizarse para identificar tejidos por especies y/o por tipo de órgano. De manera similar, estos reactivos, por ejemplo, cebadores o sondas de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 pueden usarse para examinar contaminación en cultivos de tejidos (es decir, detectar la presencia de una mezcla de diferentes tipos de células en un cultivo) .

Pruebas de diagnóstico Un método ejemplar para detectar la presencia o ausencia de polipéptidos o ácido nucleico de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 en una muestra biológica, consiste en obtener una muestra biológica de un sujeto de prueba y poner en contacto la muestra biológica con un compuesto o un agente capaz de detectar polipéptidos o ácido nucleico de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 (por ejemplo, AR m o ADN genómico) que codifica un polipéptido de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 tal que se detecta la presencia de polipéptidos o ácido nucleico de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 en la muestra biológica. Un agente preferido para detectar ARNm o ADN genómico de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 es una sonda de ácido nucleico etiquetada capaz de hibridar con ARNm o ADN genómico de KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3. La sonda de ácido nucleico puede ser, por ejemplo, el ácido nucleico de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 expuesto en SEQ ID NO : 1 o 3, o una porción del mismo, tal como un oligonucleótido de al menos 15, 30, 50, 100, 250 o 500 nucleótidos de longitud y suficiente para hibridar específicamente bajo condiciones rigurosas a ARNm o ADN genómico de KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3. Otras sondas adecuadas para su uso en los ensayos de diagnóstico de la invención se describen en la presente. Un agente preferido para detectar polipéptido de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 es un anticuerpo capaz de unirse a un polipéptido de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 , preferentemente un anticuerpo con un eti[uetador detectable. Los anticuerpos pueden ser policlonales o, más preferentemente, monoclonales . Pueden utilizarse un anticuerpo intacto, o un fragmento del mismo (por ejemplo, Fab o F (ab')2)- El término "etiquetado", con respecto a la sonda o el anticuerpo, pretende abarcar la eticjuetación directa de la sonda o el anticuerpo por acoplamiento (es decir, unión física) de una sustancia detectable a la sonda o el anticuerpo, así como el etiquetado indirecto de la sonda o anticuerpo por reactividad con otro reactivo que es etiquetado directamente. Los ejemplos de etiquetación indirecta incluyen la detección de un anticuerpo primario utilizando un anticuerpo secundario etiquetado con fluorescencia y la etiquetación terminal, de una. sonda de ADN con biotina de modo que puede ser detectada con estreptavidina etiquetada con fluorescencia. El término "muestra biológica" pretende incluir tejidos, células y líquidos biológicos aislados de un sujeto, así como tejidos, células y líquidos presentes dentro de un sujeto. Es decir, el método de detección de la invención puede ser utilizado para detectar AR m, polipéptido, o ADN genómico de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3en una muestra biológica in vitro así como in vivo. Por ejemplo, las técnicas in vitro para la detección de ARm de EP-L2 incluyen hibridaciones Nprthern e hibridaciones in situ. Las técnicas in vitro para la detección de polipéptido de KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 incluyen ensayos de inmunosorbentes unidos a enzimas (ELISA) , transferencias Western, inmunoprecipitaciones e inmunofluorescencia . Las técnicas in vitro para la detección de ,ADN genómico de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 incluyen hibridaciones Southern. Por otra parte, las técnicas in vivo para la detección de polipéptido de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 incluyen la introducción en un sujeto de un anticuerpo etiquetado contra KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3. Por ejemplo, el anticuerpo puede etiquetarse con un etiquetador radiactivo cuya presencia y ubicación en un sujeto puede ser detectada por técnicas de imágenes estándar. La muestra biológica contiene moléculas de polipéptidos del sujeto de prueba.... Alternativamente , la muestra biológica puede .contener moléculas de ARNm del sujeto de prueba o moléculas de ADN genómico del sujeto de prueba. Una muestra biológica preferida es una muestra de suero aislada de un sujeto por medios convencionales. En otra modalidad, los métodos implican además la obtención de una muestra de control biológico a partir de un sujeto de control, poner en contacto la muestra de control con un compuesto o agente capaz de detectar un polipéptido, ARNm o ADN genómico de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 , de tal manera que la presencia de polipéptido, AR m o ADM genómico de| KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 se detecta en la muestra biológica y comparar la presencia de polipéptido, ARNm o ADN genómico de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 en la muestra de control con la presencia de polipéptido, ARNm o ADN genómico de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 en la muestra de ensayo.

La invención comprende también kits para detectar la presencia de KIR2DL1, IR2DL2 y KIR2DL3 en una muestra biológica. Por ejemplo, el kit puede comprender un compuesto o agente etiquetado capaz de detectar un polipéptido o ARNm de IR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 en una muestra biológica; medios para determinar la cantidad de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 en la muestra y medios para comparar la cantidad de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 en la muestra con un estándar. El compuesto o agente puede envasarse en un recipiente adecuado. El kit puede comprender además instrucciones para usar el. kit. a fin de detectar polipéptido o ácido nucleico de KIR2DL1, KIR2.DL2 y KIR2DL3.

Ensayos de pronóstico Los métodos de diagnóstico descritos en este documento, pueden ser utilizados además para identificar a sujetos con o en riesgo de desarrollar una enfermedad o trastorno asociado con la expresión o actividad aberrante o no deseada de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3. Tal como se usa en la presente, el término "aberrante" incluye una expresión o actividad de KIR2DL1, KIR2DL2 y KI¡R2DL3 que difiere de la expresión o actividad de tipo salvaje de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3. La expresión o actividad aberrante incluye la expresión o 5 actividad aumentada o disminuida, así como la expresión o actividad que no sigue el patrón de desarrollo de tipo salvaje de la. expresión o el patrón de expresión subcelular. Por ejemplo, la expresión o actividad aberrante de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 pretende incluir casos en los que una 0 mutación en el gen de KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 hace que el gen de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 sean infra- o sobre- expresados y situaciones en las que estas mutaciones resultan en un polipéptido KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 no funcional o en un polipéptido que no funciona en la forma del tipo 5 salvaje, por ejemplo, un polipéptido que no interacciona con un par de unión de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 , o que ' ." ' interactúa con un par de unión distinto a KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3. Tal como se usa en la presente, el término "no deseado" incluye un fenómeno no deseado involucrado en una 0 respuesta biológica tal como la activación de células inmunes. Por ejemplo, el término no deseado incluye una expresión o actividad de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 que es indeseable en un sujeto.

Los ensayos descritos en la presente, tales como los 5 ensayos de diagnóstico precedentes o los siguientes ensayos, pueden utilizarse para identificar un sujeto con o en riesgo de desarrollar un trastorno asociado con una regulación deficiente de la actividad del polipéptido o la expresión de ácido nucleico de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3, como un trastorno autoinmune, un trastorno de inmunodeficiencia, un trastorno del sistema inmunológico, como autoinmunidad, enfermedades un trastorno alérgico o inflamatorio o cáncer. Así, la presente invención proporciona un método para identificar uña enfermedad o trastorno asociado con la expresión o actividad aberrante o no deseada de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 en la que se obtiene una muestra de ensayo de un sujeto y se detecta un polipéptido o ácido nucleico de KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 (por ejemplo, AR m o ADN genómico) , en el que la presencia de polipéptido o ácido nucleico de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 es un diagnóstico de que un sujeto tiene o está en riesgo de desarrollar una enfermedad o , trastorno asociado con la .expresión o actividad aberrante o no deseada de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3. Como se usa en la presente, una "muestra de ensayo" se refiere a una muestra biológica obtenida de un sujeto de interés. Por ejemplo, una muestra de ensayo puede ser un líquido biológico (por ejemplo, líquido cefalorraquídeo o suero) , muestra de células o tejidos.

Además, los ensayos de pronóstico descritos en la presente pueden utilizarse para determinar si un sujeto puede ser tratado con un agente (por ejemplo, un agonista, Antagonista, peptidomimético, polipéptido, péptido, ácido nucleico, molécula pequeña, u otro fármaco candidato) para tratar una enfermedad o trastorno asociado con la expresión o actividad aberrante o no deseada de KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3. Por ejemplo, tales métodos pueden utilizarse para determinar si un sujeto puede ser tratado efectivamente con un agente por un trastorno autoinmune, trastorno de inmünodeficiencia, cáncer del sistema inmunológico, o trastorno alérgico o inflamatorio. Así, la presente invención proporciona métodos para determinar si un sujeto puede ser tratado efectivamente con un agente por un trastorno asociado con la expresión o actividad aberrante o no deseada de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 en la que se obtiene una muestra de prueba y se detecta la expresión o actividad de polipéptido o ácido nucleico de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 (por ejemplo, donde la abundancia de la expresión o actividad de polipéptido o ácido nucleico de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 es diagnóstica de que un sujeto puede recibir el agente para el tratamiento de un trastorno asociado con la expresión o actividad aberrante o no deseada de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3) . Los métodos de la invención también pueden utilizarse para detectar alteraciones genéticas en un gen de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3, determinando así si un sujeto con el gen alterado está en riesgo de un trastorno caracterizado por la regulación deficiente de la actividad de un polipéptido o la expresión de un ácido nucleico de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 , tal como un trastorno autoinmune, un trastorno de inmunodeficiencia, un cáncer del sistema inmunológico, un trastorno alérgico o un trastorno inflamatorio. Los métodos descritos en la presente pueden realizarse, por ejemplo, mediante la uso de kits de diagnóstico pre-envasados que comprenden al menos un ácido nucleico sonda o anticuerpo reactivo descritos en la presente, que pueden ser utilizados convenientemente, por ejemplo, en contextos clínicos para diagnosticar pacientes que exhiben síntomas o historia familiar de una enfermedad o afección que implica un gen de KIR2DL1 , IR2DL2 y KIR2DL3. Además, cualquier tipo de célula o tejido en el que se expresan KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 puede ser utilizado en los ensayos de pronóstico descritos en la presente.

INMUNOENSAYOS KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 , los anticuerpos y fragmentos de unión al antígeno que se unen a KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 , pueden utilizarse en inmunoensayos para detectar cualitativa o cuantitativamente y analizar etiquetadores en una muestra. Este método comprende proporcionar un anticuerpo se une específicamente a un KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 ; poner en contacto una muestra con el anticuerpo y detectar la presencia de un complejo del anticuerpo unido al etiquetador en la muestra.

KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 pueden detectarse y/o cuantificarse utilizando cualquiera de una serie de ensayos de unión inmunológicos reconocidos. Los ensayos útiles incluyen, por ejemplo, un ensayo de inmunoenzimático (EIA) tal como un ensayo de inmunosorbente unido a enzimas (ELISA) , un radioinmunoensayo (RIA), un ensayo de Western Blot, o un ensayo de transferencia en hendidura. Véase, por ejemplo, las Patentes de EE.UU. N° 4.366.241, 4.376.110, 4.517.288, y 4.837.168. Generalmente, una muestra obtenida de un sujeto puede ponerse en contacto con el anticuerpo que se une específicamente a KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3.

Opcionalmente, el anticuerpo puede ser fijado a un soporte sólido para facilitar el lavado y posterior aislamiento del complejo, antes de poner en contacto el anticuerpo con una muestra. Los ejemplos de soportes sólidos incluyen, entre otros a vidrio o plástico en forma de, por ejemplo, una placa de microtitulación, una varilla, una perla, o una microperla. Los anticuerpos pueden estar unidos a un soporte sólido.

Después de incubar la muestra con anticuerpos, la mezcla se lava y el complejo anticuerpo-etiquetador formado puede ser detectado. Esto puede lograrse mediante la incubación de la mezcla lavada con un reactivo de detección. Alternativamente , el etiquetador en la muestra puede ser detectado mediante un ensayo indirecto, en el que, por ejemplo, se utiliza un segundo anticuerpo etiquetado para detectar el anticuerpo específico unido al etiquetador, y/o en un ensayo de competición o inhibición en el que, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal que se une a un epítope distinto del etiquetador se incuba simultáneamente con la mezcla.

A lo largo de los ensayos, pueden ser necesarios pasos de incubación y/o de lavado después de cada combinación de reactivos. Los pasos de incubación pueden variar desde alrededor de 5 segundos a varias horas, preferentemente de alrededor de 5 minutos a alrededor de 24 horas. Sin embargo, el tiempo de incubación dependerá del formato del ensayo, el etiquetador, el volumen de solución, las concentraciones. Por lo general, los ensayos se llevarán a cabo a temperatura ambiente, aunque pueden realizarse en un intervalo de temperaturas (por ejemplo, 10 °C-40 °C) Puede usarse un inmunoensayo para determinar una cantidad de prueba de un etiquetador en una muestra de un sujeto. En primer lugar, puede detectarse una cantidad de prueba de un etiquetador en una muestra utilizando los métodos de inmunoensayo descritos anteriormente. Si un etiquetador está presente en la muestra, se formará un complejo anticuerpo-etiquetador con un anticuerpo se une específicamente al etiquetador en condiciones de incubación apropiadas descritas anteriormente. La cantidad del complejo anticuerpo-etiquetador puede determinarse opcionalmentej mediante la comparación con un estándar. Como se señaló anteriormente, la cantidad de prueba de un etiquetador no necesita ser medida en unidades absolutas, siempre y cuando la unidad de medida pueda compararse con una cantidad y/o seña.l de control. Se conocen varios inmunoensayos en la técnica y el polipéptido de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 descrito en la presente puede utilizarse en estos inmunoensayos incluyendo entre otros radioinmunoensayo (RIA) , ensayo de inmunosorbente unido a enzimas (ELISA) , inmunoensayo magnético, inmunotransferencia, Western Blot, ensayos de inmunoprecipitación, análisis inmunohistoquímico y clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS) . Ver Wild (2008) [Ed.] The Immunoassay Handbook [3rd Ed.] Elsevier .

METODOS DE RADIO- IMÁGENES .

Los anticuerpos anti -KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 pueden utilizarse en métodos de radio- imágenes para diagnosticar cáncer, incluyendo cáncer de páncreas y colorrectal, o monitorear la progresión de tumores. Estos métodos incluyen, entre otros, tomografía por emisión de positrones (PET, por sus siglas en inglés) , tomografía computada por emisión de fotón único (SPECT, por sus siglas en inglés) . Ambas técnicas son no invasivas y pueden ser utilizadas para detectar y/o medir una gran variedad de eventos y/o funciones en tejidos como, por ejemplo, la detección de células cancerosas. La SPECT puede utilizarse opcionalmente con dos etiquetas simultáneamente. Véase la Patente de EE.UU. N° 6.696.686.

APLICACIONES Y MÉTODOS COMERCIALES La presente invención proporciona además la producción de anticuerpos anti -KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 para alcanzar cantidades comerciales. Los anticuerpos anti-KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 pueden ser producidos a gran escala, ser almacenados en caso necesario y suministrarse a hospitales, médicos u otros centros sanitarios.

Los métodos de producción, almacenamiento y distribución de anticuerpos anti -KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 pueden ser producidos por los métodos descritos en la presente. Después de la producción, los anticuerpos anti -KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 pueden ser cosechados y purificados y, opcionalmente, almacenados previamente al tratamiento de un paciente. Por ejemplo, cuando un paciente se presenta con una indicación como, por ejemplo, cáncer, enfermedad autoinmune o enfermedad inflamatoria, los anticuerpos anti-KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 pueden ser solicitados y provistos de manera oportuna. En consecuencia, la presente invención se refiere a métodos para producir KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 para obtener anticuerpos en una escala comercial, composiciones farmacéuticas que comprenden anticuerpos y fragmentos de unión al antígeno de los mismos que se unen selectivamente a KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3, así como métodos para proporcionar (es decir, producción, almacenamiento opcional y venta) de los anticuerpos anti -KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 a hospitales y médicos. La producción de anticuerpos anti -KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3 puede ser aumentada en escala para uso comercial.

La presente invención proporciona también métodos para la modalidad de una actividad farmacéutica que comprende el esteiblecimiento de un sistema de distribución para distribuir la preparación para la venta o puede incluir el establecimiento de un grupo de ventas para la comercialización de la preparación farmacéutica.

BIBLIOTECA DE ÁCIDOS NUCLEICOS Puede generarse una biblioteca variada de variantes de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 por mutagénesis combinatoria a nivel de ácido nucleico y codificarse mediante una biblioteca variada de genes. Una biblioteca variada, de^ variantes de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 puede ser producida, por ejemplo, mediante la unión enzimática de una mezcla de oligonucleótidos sintéticos en secuencias de genes tal que un conjunto de secuencias potenciales de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 degeneradas se expresen como polipéptidos individuales o, alternativamente , como un conjunto de proteínas de fusión más grandes (por ejemplo, para exhibición por fagos) que contienen el conjunto de secuencias de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 en las mismas. Existe una variedad de métodos que pueden ser¡ utilizados para producir las bibliotecas de variantes potenciales de KIR2DL1,-.- KIR2DL2 y KIR2DL3 a partir de una secuencia de oligonucleótido degenerada. La síntesis química de una secuencia génica degenerada puede llevarse a cabo en un sintetizador automático de ADN y el gen sintético se unirá a continuación a un vector de expresión apropiado. El uso de un conjunto de genes degenerados permite la provisión, en una mezcla, de todas las secuencias que codifican el conjunto deseado de secuencias potenciales de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3. Los métodos para sintetizar oligonucleót idos degenerados son conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Narang (1983) Tetrahedron 39:3; Itakura efc al. (1984) Annu. Rev. Biochem. 53:323; Itakura et al'. (1984) Science 198:1056; Ike et al. (1983) Nucleic Acids Res. 11:477.

Además, las . bibliotecas de fragmentos de una secuencia de codificación de polipéptidos de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 pueden utilizarse para generar una población variada de fragmentos de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 para la detección y posterior selección de variantes de un polipéptido de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3. Puede generarse una biblioteca de fragmentos de secuencia de codificación por el tratamiento de un fragmento de PCR de cadena doble de un secuencia codificante de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3 con una nucleasa bajo condiciones en las que se produce un corte sólo alrededor de una ¡vez por molécula, la desnaturalización del ADN de cadena doble; la renaturalización del ADN para formar ADN de doble cadena que puede incluir pares sentido/antisentido de diferentes productos sometidos a corte, la eliminación de porciones de cadena única de dúplex reformados por tratamiento con nucleasa SI y la unión de la biblioteca de fragmentos resultante en un vector de expresión. Mediante este método, puede derivarse una biblioteca de expresión que codifica fragmentos N-terminales, C-terminales e internos de diversos tamaños del polipéptido de KIR2DL1 , KIR2DL2 y KIR2DL3.

Se conocen varios métodos en la técnica para la detección de productos génicos de bibliotecas combinatorias realizadas por mutaciones o truncamiento puntuales y para la detección de bibliotecas de ADNc de productos génicos con una propiedad seleccionada. Estas técnicas son adaptables para la. detección rápida de bibliotecas de genes generadas por la mutagénesis combinatoria de polipéptidos de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3. Las técnicas más utilizadas, que son aptas para análisis de procesamiento de alto rendimiento, para la detección de grandes bibliotecas de genes incluyen comúnmente la clonación de la biblioteca de genes en vectores de expresión replicables, la transformación de células apropiadas con la biblioteca de vectores resultante y la expresión de los genes combinatorios en condiciones en las que lá detección de una actividad deseada facilita el aislamiento del vector que codifica el gen cuyo producto fue detectado. La mutagénesis de ensamble recursiva (REM) , una nueva técnica que aumenta la frecuencia de mutantes funcionales en las bibliotecas, puede utilizarse en combinación con ensayos de selección para identificar variantes de KIR2DL1, KIR2DL2 y KIR2DL3. Arkin and Youvan (1992) Proc Nati. Acad. Sci. USA 89:7811-7815; Delagrave et al. (1993) Protein Eng. 6 (3) 327-331.

Todas las publicaciones (por ejemplo, Literatura no de Patente) , patentes, publicaciones de solicitudes de patentes y solicitudes de patente mencionadas en esta descripción son indicativas del nivel de experiencia de los expertos en la materia a la que pertenece esta invención. Todas estas publicaciones (por ejemplo, Literatura no de Patente), patentes, publicaciones de · solicitudes de patentes y solicitudes de patentes se incorporan en la presente por referencia en la misma extensión que si cada publicación, patente, publicación de solicitud de patente, o solicitud de patente individuales fuera indicada específica e individualmente como incorporada por referencia.

EJEMPLOS La invención se describirá ahora en general, se comprenderá más fácilmente por referencia a los siguientes ejemplos, que se incluyen meramente para fines de ilustración de ciertos aspectos y modalidades de la presente invención y no pretenden limitar la invención.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 FARMACOCINÉTICA EN PACIENTES

[0126] Las concentraciones plasmáticas de anti-KIR (1-7F9) se determinan por ELISA como se describe brevemente a continuación .

Las placas son recubiertas con solución de revestimiento de IR2DL3 (100 µ?/pocillo) y se incuban durante una noche a aproximadamente +4 °C. Las placas se lavan luego 3 veces con amortiguador de lavado utilizando una lavadora automática de placas (400 µ?/pocillo) . Se añade amortiguador de bloqueo (200 µ? por pocilio) y las placas se incuban durante aproximadamente 2 horas en un agitador de placas a temperatura ambiente. Después de esto, las placas se lavan una vez más 3 veces con amortiguador de lavado (400 µ?/pocillo) .

Los estándares, controles de calidad y muestras se añaden a las placas (100 µ?/pocillo) antes de la incubación durante aproximadamente 2 horas en el agitador de placas a temperatura ambiente. Antes de la adición de solución de trabajo de IgG4 anti -humano de ratón : peroxidasa (100 µ?/pocillo) las placas se lavan otras 3 veces (como anteriormente) . Las placas se incuban entonces nuevamente durante aproximadamente 2 horas en un agitador de placas a temperatura ambiente, después de lo cual se lavan una vez más .

Se añade TMB a las placas (100 µ?/pocillo) , que luego se incuban durante aproximadamente 30 minutos en un agitador de placas a temperatura ambiente. La reacción enzimática se termina con la adición de solución de detención (50 µ?/pocillo) . Se leen las absorbancias a 450 nm (filtro de referencia de 650 nm) . El límite inferior de cuantificacion de este estudio es de 5.000 ng/ml y el límite superior de cuantificacion de este estudio es 110,0 ng/ml.

EJEMPLO 2 ENSAYO DE OCUPACIÓN DE KIR La ocupación del receptor se evalúa en muestras de sangre humana entera mediante análisis de fluorescencia de cuatro colores. En resumen, los niveles de. receptores- KIR2D libres y unidos son evaluados en linfocitos T y NK en sangre periférica anticoagulada con EDTA. El ensayo de sitios libres evaluará KIR2D no unido por tinción con 1-79 conjugado con PE, que se une a la molécula de KIR2D. El ensayo de sitios unidos evaluará receptores dé KIR2D ocupados por 1-7F9 mediante tinción con un anticuerpo monoclonal IgG4 antihumano de ratón conjugado con PE que reconoce el 1-7F9 unido a receptores KIR2D. Los Ensayos de Libres y Conjugados permitirán evaluar los porcentajes de tinción positiva así como la intensidad la de fluorescencia [MESF] para 1-7F9-PE o anti -PE-hIgG4. Se utilizan las siguientes combinaciones de anticuerpos conjugados en los dos ensayos siguientes: Ensayo de Sitios Libres: CD3/1-7F9/CD45/CD56 Ensayo de Unidos: CD3/hIgG4/CD45/CD56.

Las muestras se analizan en un equipo Becton Dickinson FACScalibur usando el software Becton Dickinson Cellquest. Las células T se definen como linfocitos CD45+CD3+ y las células NK se definen como células CD45+CD3 -CD56+ .

EJEMPLO 3 SEGURIDAD CLÍNICA Y AUTO-REACTIVIDAD Se realizó un estudio de escalada de dosis única en pacientes ancianos (> 60 años) con leucemia mieloide aguda (LMA) , que se encuentran en la primera remisión completa después de la quimioterapia de inducción y consolidación y no son elegibles .para ..un trasplante de médula ósea: Se aplica un diseño estándar de 3+3 y se exploran un total de 7 niveles de dosis: las dosis abarcan de 0,0003 mg/kg a 3 mg/kg. Después de la administración, los pacientes fueron monitoreados en cuanto a seguridad, PK y ocupación de KIR hasta que la ocupación de KIR ya no era detectable.

Se llevó a cabo también un estudio de extensión. Los pacientes con LMA que habían completado el ensayo de escalada de dosis y que aún estaban en remisión completa podían participar en el ensayo de extensión, en el que los pacientes recibieron dosis hasta 6 veces mensualmente . Los pacientes son tratados con las mismas dosis que recibieron en el ensayo anterior .

Pacientes, materiales y métodos En ambos ensayos, pacientes ancianos (> 60 años de edad) con LMA en su primera remisión completa (RC) y no elegibles para trasplante eran elegibles para los estudios . La LMA cumplía con los Criterios de la OMS . (Brunning RD, Matutes E, Harris NL et al.: Acute myeloid leukaemia: Introduction . En Jaffe ES, Harris NL, Stein H, et al. Eds . : Pathology and Genetics of Tumors of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. Lyon, France : IARC Press, 2001. World Health Organization Classification of Tumors, 3, pp 77-80) . La remisión fue remisión morfológica completa (RC) definida de acuerdo a los criterios del NCI (Cheson et al. JCO, 21(24): 4642-4649 (2003)), o RCi con recuperación incompleta del recuento - de plaquetas sólo después de 1 o 2 ciclos de quimioterapia de inducción y al menos 1 y como máximo 6 ciclos de quimioterapia de consolidación.

En la selección en el ensayo de escalada de dosis, el tiempo transcurrido desde la última dosis de quimioterapia fue de al menos 30 días y no más de 120 días. Otros criterios de elegibilidad incluyeron (entre otros) la expresión de KIR2DL1 y 2/3 en células NK, ECOG (Oken, et al. Toxicity And Response Criteria Of The Eastern Cooperative Oncology Group . Am J Clin Oncol 5:649-655, 1982) estado 0-2 y recuperación de todas las toxicidades del tratamiento anterior.

Para el ensayo de extensión, la finalización del ensayo de escalada de dosis con un perfil de seguridad aceptable fue un criterio de elección adicional.

Los criterios adicionales incluyeron el recuento absoluto de neutrófilos > 1 x 109/L, plaquetas > 80 x 109/L, no hay síntomas de la enfermedad, la recuperación de la toxicidad aguda de todos los anteriores de lucha contra la leucemia terapias, KIR expresión-en los pacientes las células NK (capacidad para unirse Anti-KIR (1-7F9) ) , ninguna disyunción importante órgano competente, a juzgar por el investigador y los valores de laboratorio clínico de la siguiente manera: (a) una creatinina sérica <2 mg/dl, (b) Bilirrubina total <1,5 x el límite superior límite de la normalidad y (c) . AST <3 veces el límite superior de lo normal .

Diseño del estudio El ensayo de escalada de dosis fue un estudio multicéntrico, abierto, de escalada de dosis, de seguridad y tolerabilidad . Se exploraron siete niveles de dosis; 0,0003 mg/kg, 0,003 mg/kg, 0,015 mg/kg, 0,075 mg/kg, 0,3 mg/kg, 1 mg/kg y 3 mg/kg. Se eligió un diseño general (3+3) para este ensayo. Cada paciente fue asignado a una dosis y monitoreado en cuanto a seguridad, farmacocinética y farmacodinamia hasta que no hubiera ocupación de KIR detectable en las células NK de los pacientes. La seguridad, PK y ocupación de KIR se analizaron en forma continua y los datos obtenidos durante las primeras 4 semanas después de la dosificación de cada grupo de dosis formaron en general el fundamento de la decisión de la escalada de dosis.

El ensayo de extensión fue diseñado como de dosificación repetida, multicéntrico, abierto, de seguridad y toierabilidad . La dosis administrada al paciente individual fue la misma que el paciente recibió en el ensayo de dosis única. El paciente puede recibir 6 administraciones a intervalos de 4 semanas, es decir, 6 ciclos de dosificación con un máximo de duración de 6 meses. Cada ciclo de dosificación consiste en una visita de dosificación y una visita de monitoreo de seguridad. Después de la última dosis, el paciente es monitoreado en cuanto a seguridad hasta que no hubiera ocupación de KIR detectable en las células NK de los pacientes. La duración de este período de seguimiento de la seguridad depende probablemente de la dosis recibida y se espera que sea máxima 24 semanas después de la última dosis.

La seguridad (es decir, cualquier toxicidad observada) de la administración de anti-KIR (1-7F9) se evaluó usando los Criterios de Terminología Comunes para Eventos Adversos (CTCAE, por sus siglas en inglés) versión 3.0 del Instituto Nacional del Cáncer de EE.UU. Se evaluaron también criterios de valoración farmacocinético¡s , ocupación de KIR, etiquetadores de activación de células NK y T, etiquetador tumoral WT-1, supervivencia libre de progresión y supervivencia global.

Resultados La saturación de receptores fue evaluada en el ensayo de escalada de dosis entre los pacientes que reciben cada nivel de dosis de 0,0003 mg/kg, 0,003 mg/kg, 0,015 mg/kg, 0,075 mg/kg, 0,3 mg/kg, 1 mg/kg y 3 mg/kg. En resumen, la dosis de 0,0003 mg/kg dio como resultado la saturación parcial de KIR (50% de ocupación) durante un período de aproximadamente 2 horas; la dosis de 0,003 mg/kg dio lugar a la saturación completa de KIR (90% de ocupación) durante un período de menos de 24 horas; la dosis de 0,015 mg/kg dio lugar a la saturación completa de KIR durante un período de menos de 7 días; la dosis de..0,075 mg/kg dio lugar a- la saturación completa de KIR durante un período de casi 7 días; la dosis de 0,3 mg/kg dio lugar a la saturación completa de KIR durante un período de más de 7 días y menos de 14 días, la dosis de 1 mg/kg dio lugar a un estado de saturación completa de KIR durante un período de menos de 3 semanas (entre alrededor de 2 y 3 semanas) ; la dosis de 3 mg/kg dio lugar a la saturación completa de KIR durante un período de más de 4 semanas.

No se produjeron eventos adversos relacionados con auto-reactividad (como I erupción cutánea y síntomas gastrointestinales) , infusión (como erupción cutánea, prurito, eritema, fatiga, dolor de cabeza, fiebre) o liberación de citoquinas (como fiebre, fatiga, malestar general y dolor de cabeza) en un grado que plantee problemas de seguridad.

EJEMPLO 4 EFICACIA IN VIVO EN LA ELIMINACIÓN DE BLASTOS ConA EN XJN MODELO DE RATÓN TRANSGÉNICO La inducción de la eliminación in vivo mediada por NK de blastos ConA que expresan CW3 fue evaluada en ratones transgénicos que reciben anticuerpos 1-7F9 anti -KIR2DL1 , 2 y 3.

Materiales y métodos Anticuerpos: Los anticuerpos monoclonales 1-7F9 anti-KIR2DL1, .2. y .3. completamente humanos fueron generados por inmunización de ratones portadores de loci de IgG genómicos humanos (Medarex, Inc.) con células BW5417 trans ectadas en forma estable con KIR2DL1, seguido de 3 inmunizaciones de refuerzo con la parte soluble, extracelular de KIR2DL3 producida en Escherichia coli como se describe en el documento WO 2006/003179. Los anticuerpos fueron examinados en cuanto a la unión a KIRs recombinantes , solubles mediante ensayo de inmunosorbente unido a enzimas y los clones positivos se ensayaron en cuanto a unión a células YTS-KIR2DL1 por citometría de flujo. Los hibridomas seleccionados se subclonaron hasta obtenerse líneas estables.

Ratones transgénicos : Se cruzaron ratones Rag-/- y ratones transgénicos (tg) para KIR2DL3 para obtener ratones KIR2DL3tg, Rag-/-. Los ratones transgénicos HLA-Cw3 se cruzaron con ratones KBDB -/- dando lugar a ratones Cw3tg, KbDb-/-. Los ratones se describen en Romagne et al., (2009) Bloód 114: 2667-2677 , así como en Sola et al. (2009) P.N.A.S. U.S. A 106 (31) : 12879-12884.

Ensayo de rechazo basado en fluorescencia: Los ensayos se llevaron a cabo de de acuerdo con los métodos descritos por el laboratorio de K. Karr (Oberg et al. Eur. J. Immunol (2004) 34: 1646; S. Johansson et al. J. Ex . Med. (2005) 201: 1145) . La inyección de células diana etiquetadas con CFSE (células diana de prueba y células diana singénicas/control en relación 1:1) fue seguida po.r :el anális.is de diferentes órganos después de 1 o 2 días. Las células diana eran células esplénicas, células tumorales o blastos ConA (48 hs, ConA 2µ /t(?1) aisladas recientemente.

¦ Resultados El objetivo del experimento era probar si 1-7F9 induce la eliminación por NK de blastos ConA diana cw3 - en ratones KIR2DL3tg. En resumen, los ratones receptores y las células donantes fueron los siguientes: (1) Ratones receptores: ratones KIR2DL3tg B6, KIR2DL3 tg Rag-/ - y C57/BL6. (2) Células donantes: (A) Células de bazo naive de ratones KbDb KO, ratones KbDb KO c 3 tg, ratones C57/BL6, y (B) Blastos ConA de ratones KbDb KO, ratones KbDb KO cw3 tg, ratones C57/BL6.

Las células esplénicas de ratones C57/BL6 y KbDb -/--cw3 tg fueron estimuladas durante 2 días con ConA (2 µg/l07 células/ml) . Las células fueron etiquetadas con CFSE 0,5 µ? (B6) y 3 µ? (KbDb -/--cw3), mezcladas en una proporción de 1:1 y luego inyectadas en ratones KIR2DL3tg B6 previamente inyectados (o no) con anticuerpo monoclonal 1-7F9 (300 yg) . El anticuerpo 1-7F9 fue así administrado (aproximadamente 6 horas antes de la inyección de células) para inducir la lisis de células diana c 3-. El anticuerpo PK136 anti-NKl.l (BD Biosciences) , administrado -24h antes, de la inyección de células se utilizó como control para inducir la deplecion de células NK.

Los resultados se muestran en las Figuras 1A, IB y 2.

Las Figuras 1A y IB examinan el porcentaje de células etiquetadas con CSFE a las 40 horas después de la inyección de células. Se obtuvieron resultados similares con células etiquetadas con CSFE a las 20 horas después de la inyección. La Figura 1A muestra una disminución drástica en el porcentaje de células etiquetadas con CSFE en PBMC en ratones KIR2DL3tg B6 cuando son tratados con anticuerpo 1-7F9, en comparación con los ratones KIR2DL3tg B6 sin tratar y los ratones C57BL6 tratados y no tratados. La Figura IB muestra 5 una disminución drástica en el porcentaje de células esplénicas etiquetadas con CSFE en el bazo de ratones B6 KIR2DL3tg cuando son tratados con anticuerpo 1-7F9, en comparación con ratones KIR2DL3tg B6 sin tratar y ratones C57BL6 tratados y no tratados. La Figura 2 examina la 0 supervivencia celular relativa de células etiquetadas con CSFE a las 40 horas después de la inyección de células. La Figura 2 muestra una disminución drástica en la supervivencia de blastos KbDb/- cw3 ConA en PBMC y bazo en ratones KIR2DL3tg B6 cuando son tratados con el anticuerpo 1-7F9, en 5 comparación con ratones KbDb KO cw3 tg no tratados.

Las células NK son generalmente conocidas por tener ¦·>...· mecanismos para asegurar la auto-tolerancia. Yer Raulet and Vanee (2006) Nature Immuno . Rev. 6: 520-531. En particular, todas las células NK expresan un KIR inhibidor o moléculas 0 inhibidoras de CD94/NKG2A. El bloqueo de los receptores KIR, como se observa en ensayos clínicos de Fase I actuales de anticuerpo 1-7F9 anti-KIR en oncología, indica que el anticuerpo no induce inflamación o autoinmunidad en particular más que la observada para los anticuerpos 5 monoclonales en general. Sin embargo, no ha habido estudios sobre el efecto del bloqueo de KIR2DL1, 2 o 3 en la eliminación de células T activadas o proliferantes in vivo. Los resultados presentes indican que las células NK que expresan KIR2DL3 son capaces, in vivo, de reducir o eliminar las células T activadas que de otra forma habríaN sido bloqueados por su ligando HLA-cw3, siempre y cuando KIR2DL3 esté bloqueado. En consecuencia, KIR2DL1, 2 y/o la población de células tienen el potencial de eliminar células pro-inflamatorias autólogas activadas cuando los KIRs son bloqueados in vivo.

Todas las referencias, incluidas las publicaciones y solicitudes de patentes y patentes, citados en la presente se incorporan por referencia en su totalidad y en la misma medida como si cada referencia fuera individual y específicamente indicada como incorporada por referencia y se describen en su totalidad en la presente (hasta el máximo permitido por . la ley) , . independientemente de . cualquier incorporación proporcionada por separado de documentos particulares realizada en otras partes de la presente.

A menos que se indique lo contrario, todos los valores exactos proporcionados en la presente son representativos de los valores aproximados correspondientes (por ejemplo, puede considerarse que todos los valores exactos de ejemplo proporcionados con respecto a un factor o medición en particular suministran también una medición aproximada correspondiente, modificada por "alrededor de", si corresponde) .

La presente descripción de cualquier aspecto o modalidad de la invención que utiliza términos tales como "que comprende", "que tiene", "incluyendo" o "que contiene" en referencia a un elemento o elementos está destinada a proporcionar apoyo a un aspecto o modalidad similar de la invención que "consiste de", "consiste esencialmente de", o "comprende sustancialmente" ese elemento o elementos particulares, a menos que se indique lo contrario o sea contrael claramente por el contexto (por ejemplo, una composición descrita en la presente como comprendiendo un elemento en particular debe ser entenderse como que describe también una composición que consiste de ese elemento, a menos que se indique lo contrario o sea contrael claramente por el contexto) .

. . El . uso. de cualquiera y de todos los ejemplos, o una expresión de ejemplo (por ejemplo, "tal como") proporcionados en la presente, sólo tiene por objeto aclarar más la invención y no representa una limitación en el alcance de la invención a menos que se reivindique lo contrario. Ninguna expresión en la memoria descriptiva debe interpretarse como una indicación de algún elemento no reivindicado como esencial para la práctica de la invención.

Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patente se incorporan en la presente por referencia en su totalidad en la misma medida como si cada publicación, patente o solicitud de patente individuales fueran indicadas específica e individualmente como incorporadas por referencia en su totalidad.

Los expertos en la técnica reconocerán, o serán capaces de determinar usando no más que la experimentación rutinaria, numerosos equivalentes a las modalidades específicas de la invención descritas en la presente. Los equivalentes están destinados a estar comprendidos por las siguientes reivindicaciones .

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (118)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Un método para tratar un trastorno autoinmune caracterizado porque comprende administrar una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1 , 2, y/o 3.

2. Un método para tratar un trastorno inflamatorio caracterizado porque comprende administrar una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1 , 2, y/o 3.

3. Un método para eliminar o reducir el número de células T involucradas en una condición de enfermedad, caracterizado porque comprende poner en contacto las células T con un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o.,3 , .en presencia de células que expresan un polipéptido de KIR2DL1 , 2, y/o 3.

4. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque las células que expresan un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 sobre las células NK.

5. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque se efectúa ex vivo.

6. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque se efectúa in vivo.

7. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque las células T incluyen una o más células T pro- inflamatorias , activadas y/o proliferantes, células T CD4+, células T infiltrantes, y/o células T que expresan HLA-c 3 y/o HLA-cw4.

8. Un método para eliminar o reducir el número de células T que están involucradas en la patología de un trastorno inflamatorio, caracterizado porque comprende administrar a un individuo que tiene un trastorno inflamatorio una cantidad de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 efectiva para reducir para el número de las células T.

9. Un método para eliminar o reducir el número de células T que están involucradas en la patología de un trastorno autoinmune, caracterizado porque comprende administrar a un individuo que tiene un trastorno autoinmune una cantidad de ..un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 efectiva para reducir el número de las células T.

10. El método de conformidad con las reivindicaciones 8 ó 9, caracterizado porque las células T comprenden células T activadas y/o proliferantes, células T CD4+, células T proinflamatorias , y/o células T que expresan HLA-cw3 y/o HLA-cw4.

11. El método de conformidad con la reivindicación 8, 9, ó 10, caracterizado porque las células T incluyen una o más de las siguientes: están en circulación, están comprendidas en el tejido enfermo o inflamado, sobre las células T infiltrantes, sobre las células T que se han infiltrado en los tejidos enfermos, están comprendidas en los tejidos articulares sinoviales o fluido sinovial, o están comprendidas en el sistema nervioso central, colon, o tejido dérmico .

12. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8-11, caracterizado porque el individuo padece una enfermedad mediada al menos en parte por las células T.

13. Un método para eliminar o reducir el número de células T activadas y/o proliferantes que están involucradas en la patología de un trastorno inflamatorio o autoinmune in vivo, caracterizado porque comprende administrar a un individuo que padece un trastorno inflamatorio o autoinmune una cantidad de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 efectiva para reducir el número de las células T.

14. Un método para eliminar o reducir el número de células T CD4+ que están involucradas en la patología de un trastorno inflamatorio o autoinmune, caracterizado porque comprende administrar a un individuo que padece un trastorno inflamatorio o autoinmune una cantidad de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 efectiva para reducir el número de las células T.

15. Un método para eliminar o reducir el número de células T proinflamatorias, caracterizado porque comprende administrar a un individuo que padece un trastorno inflamatorio o autoinmune una cantidad de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 efectiva para reducir el número de las células T.

16. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 13, 14, o 15, caracterizado porque la enfermedad está mediada al menos en parte por las células T.

17. Un método para eliminar o reducir el número de células T infiltrantes, caracterizado porque comprende administrar a un individuo que tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune una cantidad de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 efectiva para reducir el número de las células T. ¦· .. . .

18. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque la enfermedad está mediada al menos en parte por las células T.

19. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque las células T infiltrantes incluyen una o más de los siguientes: células que se han infiltrado en tejidos enfermos, células que se han infiltrado en tejidos articulares sinoviales o fluido sinovial, o células que se han infiltrado en el sistema nervioso central, colon, o tjejido dérmico.

20. Un método para eliminar o reducir el número de células T que expresan HLA-cw3 y/o HLA-cw4, caracterizado porque comprende administrar a un individuo que tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune una cantidad de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 efectiva para reducir el número de las células T.

21. El método de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque las células T, al menos en parte, median el trastorno.

22. Un método para tratar un trastorno inflamatorio caracterizado porque comprende: (a) determinar si un individuo tiene un trastorno inflamatorio,; y (b) si el individuo tiene un trastorno inflamatorio, tratar el individuo con una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

23. Un método para tratar un trastorno autoinmune caracterizado porque comprende: (a) determinar si un individuo tiene un trastorno autoinmune; y (b) si el individuo tiene un trastorno autoinmune, tratar el individuo con ' una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

24. Un método para tratar un trastorno inflamatorio caracterizado porque comprende: (a) determinar si un individuo tiene un trastorno inflamatorio mediado al menos en parte por células T, y (b) si el individuo tiene un trastorno inflamatorio mediado al menos en parte por las células T, tratar el individuo con una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KI 2DL1, 2, y/o 3.

25. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque las células T incluyen una o más de los siguientes: sobre las células T proinflamatorias , activadas y/o proliferantes, están en circulación o en un tejido enfermo o inflamado, células T CD4+, sobre las células T infiltrantes, y/o expresan HLA-cw3 y/o HLA-cw4.

26. Un método para tratar un trastorno autoinmune caracterizado porque comprende: (a) determinar si un individuo tiene un trastorno autoinmune mediado al menos en parte por células T; y (b) si el individuo tiene un trastorno autoinmune mediado al menos en parte por las células T, tratar, el individuo con una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

27. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque las células T incluyen una o más de los siguientes, sobre las células T proinflamatorias , activadas y/o proliferantes, están en circulación o están en un tejido enfermo o inflamado, sobre las células T CD4+, sobre las células T infiltrantes, y/o expresan HLA-cw3 y/o HLA-cw4.

28. Un método para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un individuo caracterizado porque comprende: (a) evaluar la presencia, etapa y/o evolución de la enfermedad inflamatoria en un individuo; y (b) administrar a el individuo una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

29. Un método para el tratamiento de una enfermedad autoinmune en un individuo caracterizado porque comprende: (a) evaluar la presencia, etapa y/o evolución de la enfermedad autoinmune en un individuo; y (b) administrar a el individuo una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1 , 2, y/o 3.

30. El método de conformidad con la reivindicación 28 o 29, caracterizado porque comprende evaluar la presencia, etapa y/o evolución de la enfermedad en un individuo comprende analizaron los niveles de autoant icuerpos , CRP, cualquier enzima proteolítica, mediador inflamatorio, o etiguetador de la inflamación en curso.

31. El método de conformidad con la reivindicación 28 o 29, caracterizado porque si se determina que el individuo es adecuado para el tratamiento con un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3, administrar a el individuo una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

32. Un método para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un individuo caracterizado porque comprende: (a) determinar si el individuo tiene una enfermedad inflamatoria establecida; y (b) si el individuo tiene una enfermedad inflamatoria establecida, administrar a el paciente una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

33. Un método para el tratamiento de una enfermedad autoinmune en un individuo caracterizado porque comprende: (a) determinar si el individuo tiene una enfermedad autoinmune establecida; y (b) si el individuo tiene una enfermedad autoinmune establecida, administrar a el paciente una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

34. Un método para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un individuo caracterizado porque comprende (a) determinar si el individuo está experimentando un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad inflamatoria; y (b) . si el individuo experimenta un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad inflamatoria, administrar a el individuo una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

35. Un método para el tratamiento de una enfermedad autoinmune en un individuo caracterizado porque comprende (a) determinar si el individuo está experimentando un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad autoinmune; y (b) si el individuo experimenta un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad autoinmune, administrar a el individuo una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

36. Un método para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un individuo caracterizado porque comprende (a) determinar si el individuo tiene una enfermedad inflamatoria caracterizada por la presencia de células T; y (b) si el individuo tiene una enfermedad inflamatoria que tiene la presencia de las células T, administrar a el paciente una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

37. Un método para el tratamiento de una enfermedad autoinmune en un individuo caracterizado porque comprende (a) determinar si el individuo tiene la enfermedad autoinmune que tiene la presencia de células T; y (b) si el individuo tiene una enfermedad autoinmune caracterizada por la presencia de las células T, administrar a el paciente una . cantidad . efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1 , 2, y/o 3.

38. El método de conformidad con la reivindicación 36 o 37, caracterizado porque las células T son células T activadas y/o proliferantes, células T CD4+, células T proinflamatorias , células T infiltrantes, y/o células T que expresan HLA-cw3 y/o HLA-c 4.

39. Un método para el tratamiento de un individuo que experimenta un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad inflamatoria, caracterizado porque | comprende administrar al individuo una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

40. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el individuo tiene una enfermedad inflamatoria establecida.

41. Un método para el tratamiento de un individuo que experimenta un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad autoinmune, caracterizado porque comprende administrar al individuo una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

42. El método de conformidad con la reivindicación 41, caracterizado porque el individuo tiene una enfermedad inflamatoria autoinmune.

43. Un método para el tratamiento de un individuo caracterizado porque, comprende: . (a) determinar si un individuo tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune; y (b) si el individuo tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune, tratar el individuo con una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

44. Un método para el tratamiento de un individuo caracterizado porque comprende: (a) determinar si un individuo tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune mediado al menos en parte por células T; y (b) si el individuo tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune mediado al menos en parte por las células T, tratar el individuo con una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

45. Un método para el tratamiento de un individuo caracterizado porque comprende: (a) evaluar la presencia, etapa y/o evolución de la enfermedad inflamatoria o autoinmune en un individuo; y (b) administrar al individuo una 1 cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

46. Un método para el tratamiento de un individuo caracterizado porque comprende: (a) determinar si el individuo tiene una enfermedad inflamatoria o autoinmune establecida; y (b) si el individuo tiene una enfermedad inflamatoria o autoinmune establecida, administrar a el paciente una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un - -.polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3. .

47. Un método para el tratamiento de un individuo caracterizado porque comprende: (a) determinar si el individuo está experimentando un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad inflamatoria o autoinmune; y (b) si el individuo experimenta un ataque, crisis, exacerbación o brote de una enfermedad inflamatoria o autoinmune, administrar a el individuo una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3.

48. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-47, caracterizado porque el compuesto es un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un péptido, un glicoalcoide, un ácido nucleico antisentido, una ribozima, un retinoide, un avemir, una molécula pequeña, o cualquiera de sus combinaciones.

49. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-47, caracterizado porque el individuo tiene un trastorno inflamatorio o autoinmune mediado por células T.

50. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 9, 13, 14, 15, 17, 20, 23, 26, 29, 33, 35, 37, 41, y 43-47, caracterizado porque el trastorno autoinmune es Síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) , atrofia esplénica adquirida, uveítis anterior aguda, encefalomielitis diseminada aguda (ADEM) , artritis gotosa aguda, leucoencefalitis hemorrágica . necrotizante aguda, sinusitis aguda o crónica, meningitis purulenta aguda (u otros trastornos inflamatorios del sistema nervioso central) , inflamación grave aguda, enfermedad de Addison, adrenalitis, diabetes mellitus de comienzo adulto (diabetes Tipo II) , hipoparatiroidismo idiopático de comienzo adulto (AOIH) , Agammaglobulinemia, agranulocitosis , vasculitides , que incluye a vasculitis (que incluye vasculitis de grandes vasos (que: incluye polimialgia reumática y células gigantes (Takayasu) artritis), afecciones alérgicas, dermatitis por contacto, dermatitis alérgica, angíitis granulomatosa alérgica, trastornos de hipersensibilidad alérgica, neuritis alérgica, reacción alérgica, alopecia areata, alopecia totalis, Síndrome de Alport (por ejemplo, alveolitis alérgica y alveolitos fibrosante) , enfermedad de Alzheimer, amiloidosis, esclerosis lateral amilotrófica (ALS, enfermedad de Lou Gehrig) , un trastorno relacionado con eosinófilo (por ejemplo, eosinofilia) , anafilaxis, espondilitis anquilosante, angiectasia, nefritis mediada por anticuerpo, nefritis anti-GBM/anti-TBM, enfermedades mediadas por el complejo de antigeno-anticuerpo, enfermedad de la membrana basal antiglomerular, síndrome de anticuerpos anti-fosfolípido, síndrome antifosfolípido (APS), aftas, estomatitis aftosa, anemia aplásica, arritmia, arteriosclerosis , trastornos arterioscleróticos , artritis {por ejemplo, artritis reumatoide ...tales.. como artritis aguda, artritis reumatoide crónica) , artritis crónica progrediente , artritis deformante, ascariasis, aspergiloma (o granulomas que contienen eosinófilos ) , aspergilosis , aspermiogenesia , asma (por ejemplo, asma bronquia y asma autoinmune, telangiectasia ataxia, angiectasia, esclerosis atáxica, aterosclerosis , autismo, angioedema autoinmune, anemia aplásica autoinmune, gastritis atrófica autoinmune, diabetes autoinmune, enfermedad autoinmune del testículo y ovario que incluye orquitis autoinmunes y ooforitis, trastornos autoinmunes asociados con enfermedad del colágeno, disautonomía autoinmune, enfermedad auditiva autoinmune (por ejemplo, enf rmedad de oído interno autoinmune (AGED) ) , enfermedades endocrinas autoinmunes que incluyen tiroiditis tales como tiroiditis autoinmune, síndrome enteropático autoinmune, falla gonadal autoinmune, pérdida auditiva autoinmune, hemolisis autoinmune, hepatitis autoinmune, trastorno hepatológico autoinmune, hiperlipidemia autoinmune, inmunodeficiencia autoinmune, enfermedad del oído interno autoinmune (AIED) , miocarditis autoinmune, neutropenia autoinmune, pancreatitis autoinmune, polinedocrinopatías autoinmunes, síndrome poliglandular autoinmune tipo I, retinopatía autoinmune, púrpura trombocitopenia autoinmune (ATP), enfermedad tiroidea autoinmune, urticaria autoinmune, enfermedades gastrointestinales mediadas autoinmunes, neuropatía axonal & neuronal , . enfermedad de Balo,—.enfermedad de Behcet, lesión por reperfusión- isquemia y familiar, angiítis linfocítica benigna, enfermedad de Berger (neuropatía por IgA) , pulmón del cuidador de palomas, ceguera, enfermedad de Boeck, bronquiolitis obliterante (no-trasplante) vs NSIP, bronquitis, aspergilosis bronconeumónica, síndrome de Bruton, penfigoide bulloso, síndrome de Caplan, cardiomiopatía, isquemia cardiovascular, síndrome de Castleman, enfermedad celíaca, sprue celíaco (enteropatía de gluten) , degeneración cerebelar, isquemia cerebral, y enfermedad acompañante de la vascularización, enfermedad de Chagas, canalopatías (por ejemplo, epilepsia), canalopatías del SNC, coriorretinitis , coroiditis, un trastorno hematologico autoinmune, hepatitis crónica activa o hepatitis crónica activa autoinmune, dermatitis por contacto crónica, neumonía eosinofilia crónica, síndrome de fatiga crónica, hepatitis crónica, neumonitis hipersensible crónica, artritis inflamatoria crónicas, polineuropatías desrnielinizante inflamatoria crónica (CIDP) , inflamación intratable crónica, candidiasis mucocutánea crónica, neuropatía crónica (por ejemplo, polineuropatía IgM o neuropatías mediadas por IgM) , enfermedad respiratoria obstructiva crónica, enfermedad inflamatoria pulmonar crónica, osteomielitis multifocal recurrente crónica (CRMO) , tiroiditis crónica (tiroiditis de Hashimoto) o tiroiditis subaguda, .síndrome . .. de .. ...Churg-Strauss , penfigoide cicatricial/penfigoide mucoso benigno, trastornos inflamatorios del SNC, vasculitis de SNC, enfermedad celíaca, síndrome de Cogan, enfermedad de aglutinina fría, colitis poliposa, colitis tales como colitis ulcerativa, colitis ulcerosa, colitis colagenosa, afecciones que involucran la infiltración de células T y respuestas inflamatorias crónicas, bloqueo cardíaco congénita, infección de rubéola congénita, anemia anemia positiva a Coomb, enfermedad arterial coronaria, miocarditis de Coxsackie, síndrome CREST (calcinosis, fenómeno de Raynaud) , enfermedad de Crohn, crioglobulinemia, síndrome de Cushing, ciclitis (por ejemplo, ciclitis crónica, ciclitis heterocrónica, iridociclitis , o 5 ciclitis de Fuch) , fibrosis tóxica, toxicidad inducida por citoquina, sordera, artritis degenerativa, enfermedades desmielinizantes {por ejemplo, enfermedades desmielinizantes autoinmunes) , neuropatías desmielinizantes, dengue, dermatitis herpetiforme y dermatitis atópica, dermatitis que 10 incluye dermatitis por contacto, dermatomiositis , dermatosis con componentes agudos inflamtorios , enfermedad de Devic (neuromielitis óptica) , trastorno de arterias grandes diabético, neuropatía diabética, retinopatía diabética, anemia de Diamond Blackfan, fibrosis pulmonar intersticial 15 difusa, cardiomiopatía difusa, lupus discoide, enfermedades que involucran diapédesis leucocitaria, síndrome de Dressler, -..··¦¦ contractura de Dupuytren, infección con echovirus, eczema, que incluye eczema alérgico o atópico, encefalitis tal como encefalitis de Rasmussen y encefalitis limbico y/o tronco del 20 encéfalo, encefalimielitis (por ejemplo, encefalomielitis alérgica o encefalomielitis alérgica y experimental (EAE) ) , hiperplasia endoarterial , endocarditis, oftalmopatía endocrina, endometriosis , fibrosis endomiocárdica, endoftalmia facoanafiláctica , endoftalmitis , enteritis 25 alérgica, síndrome eosinofilia-mialgia, faciítis eosinofílica, queratoconjuntivitis epidémica, epidermolisis bullosa adquirida (EBA) , episclera, episcleritis , infección con virus de Epstein-Barr , , eritema elevatum et diutinum, eritema multiforme, eritema nodoso leproso, eritema nodoso, eritroblastosis fetal, dismotilidad esofágica, crioglobulinemia mixta esencial, etmoide, síndrome de Evan, ence:falomielitis alérgica experimental (EAE) , deficiencia del Factor VIII, pulmón de granjero, fiebre reumática, síndrome de Felty, fibromialgia, alveolitos fibrosante, filariasis, glomerulosclerosis segmentaria focal (FSGS) , intoxicación alimentaria, atrofia gástrica frontal, artritis de células gigantes (artritis temporal) , hepatitis de células gigantes, polimialgia de células gigantes, glomerulonefritis , glomerulonefritis (GN) con y sin síndrome nefrótico glomerulonefritis aguda o crónica (por ejemplo, GN primaria) , síndrome de Goodpasture, artritis gotosa, síndromes asociados con transfusión de granulocitos , granulomatosis que incluye granulomatosis linfomatoide, granulomatosis con poliangiítis (GPA) , uveítis granulomatosa, enfermedad de Grave, síndrome de Guillain-Barre , psoriasis guttata, hemoglobinuria paroxística, enfermedad de Hamman-Rich, enfermedad de Hasbimoto, encefalitis de Hashimoto, tiroiditis de Hashimoto/ hemocromatosis , anemia hemolítica o anemia hemolítica inmune que incluye anemia hemolítica autoinmune (AIHA) , anemia hemolítica, hemofilia A, púrpura de Henoch-Schonlein, Herpes gestacional , infección con el virus de inmunodeficiencia humana (HIV) , hiperalgesia, hipogammaglobulinemia, hipogonadismo, hipoparatiroidismo, ¦ diabetes insípida idiopática, parálisis facial idiomática, hipotiroidismo idiopático, nefropatía IgA idiopática, GN membranosa idiomática o neuropatía membranosa idiopática, síndrome nefrítico idiopático, fibrosis pulmonar idiopática, sprue idiopático, púrpura trombocitopénica idiopática (ITP) , nefropatía IgA, enfermedades mediadas por IgE (por ejemplo, anafilaxis y rinitis alérgica y atópica) , enfermedad esclerosante IgG4 , ileítis regional, por complejo inmune, respuestas inmunes asociadas con hipersensibilidad aguda y retardada mediada por citoquinas y linfocitos T, GN inmunomediada, lipoproteínas inmunorregulatoria, que incluye síndrome de distrés respiratorio adulto o agud (ARDS) , miositis con cuerpo de inclusión, artritis infecciosa, infertilidad debido a los anticuerpos anti -espermatozoides, inflamación del total o parte de uvea, enfermedad intestinal inflamatoria (IBD) enfermedades cutáneas hiperproliferativas inflamatorias, miopatía inflamatoria, diabetes insulinodependiente (tipo 1) , insulitis, cistitis intersticial, enfermedad pulmonar intersticial, fibrosis pulmonar intersticial, iritis, trastorno de reprofusión isquémica, inflamación de articulaciones, artritis juvenil, dermatomiositis juvenil, diabetes juvenil, diabetes mellitus de inicio juvenil (Tipo I) , que incluye diabetes insulinodependiente pediátrica (IDD ), artritis reumatoijde de inicio juvenil, síndrome de Kawasaki, queratoconjuntivitis seca, quipanosomiasis , síndrome de Lambert-Eaton, leishmaniasis , lepra, leucopenia, deficiencia de adhesión leucocitaria, vasculitis leucocitoclástica , leucopenia, liquen plano, liquen escleroso, conjuntivitis leñosa, dermatosis IgA lineal (LAD) , síndrome de Loffler, hepatitis lupoide, lupus (que incluye nefritis, cerebritis, pediátrico, no renal, extrarrenal, discoide, alopecia), Lupus (SLE) , lupus eritematoso diseminado, artritis de Lyme, enfermedad de Lyme, neumonitis intersticial linfoide, malaria, infertilidad autoinmune masculina y femenina, vasculitis de vaso medio maxilar (que incluye enfermedad de Kawasaki y poliarteritis nodosa) , GN GN proliferativa membrano o membranosa (MPGN) , que incluye Tipo ? y Tipo II, y GN rápidamente progresiva, GN membranosa (neuropatía -membranosa), enfermedad de Meniere,. meningitis, colitis microscópica, poliangiítis microscópica, migraña, neuropatía de cambios mínimos, enfermedad del tejido conectivo mixto (MCTD) , mononucleosis infecciosa, úlcera de Mooren, enfermedad de Mucha-Habermann, neuropatía motora multifocal, falla endocrina múltiple, síndrome de lesión orgánica múltiple tal como los secundarios a septicemia, trauma o hemorragia, síndrome de lesión orgánica múltiple, esclerosis múltiple ( S) tales como MS espino-óptica, esclerosis múltiple, paperas, trastornos musculares, miastenia gravis tal como miastenia gravis asociada a timoma, miastenia gravis, miocarditis, miositis, narcolepsia, enterocolitis necrotizante, y colitis transmural y enfermedad intestinal inflamatoria autoinmune, vasculitis necrotizante, cutánea o por hipersensibilidad, síndrome lúpico neonatal (NLE) , nefrosis, síndrome nefrótico, enfermedad neurológica, neuromielitis óptica (Devic) , neuromielitis óptica, neuromiotonía , neutropenia, lifocitosis no cancerosa, uveítis no granulomatosa , timoma no maligno, trastornos inflamatorios ocular y orbital, penfigoide cicatrizal ocular, ooforitis, oftalmía simpática, síndrome opsoclonus mioclonus (OMS) , opsoclonus o síndrome opsoclonus mioclonus (OMS) , y neuropatía sensorial, neuritis óptica, orquitis granulomatosa, osteoartritis , reumatismo palindrómico, pancreatitis, pancitopenia , PANDAS (trastornos neuropsiquiátricos- ..··... autoinmunes pediátricos con estreptococos) , degeneración paraneoplásica, síndrome pararieoplásico, síndromes paraneoplásicos , que incluyen síndromes paraneoplásicos neurológicos (por ejemplo, síndrome de Lambert -Eaton miasténico o síndrome de Eaton-Lambert ) , enfermedades parasitarias s tales como leishmaniasis , hemoglobinuria paroxística nocturna (PNH) , síndrome de Parry Romberg, pars planitis (uveítis periférica) , síndrome de Parsonnage-Turner, infección con parvovirus, penfigoide bulloso y penfigoide de la piel, pénfigos que incluye pénfigo vulgar) , pénfigo eritematoso, pénfigo foliáceo, pénfigo mucus-menmbranoso penfigoide, pénfigos, úlcera péptica, parálisis periódica, neuropatía periférica, encefalomielitis 5 perivanosa, anemia perniciosa (anemia perniciosa) , anemia perniciosa, uveítis fagoantigénica . pneumonocirrosis , síndrome de POEMS , poliarteritis nodosa, Tipo I, II, & III, poliartritis crónica primaria, policondritis (por ejemplo, policondritis refractaria o recidivante) , enfermedad 10 autoinmune poliendocrina , falla poliendocrina , síndromes poliglandulares (por ejemplo, síndromes poliglandulares autoinmunes (o síndromes de endocrínopatía poliglandular) ) , polimialgia reumática, polimiositis , polimiositis/dermatomiositis , polineuropatías , 15 poliradiculitis aguda, síndrome pos-cardiotomía, uveítis posterior, o uveítis autoinmune, síndrome de infarto '· ·', ·-.. -posmiocárdico, síndrome pospericardiotomía, nefritis pos- . estreptocócica , síndromes pos -vacunación, demencia presenil, cirrosis biliar primaria, hipotiroidismo primario, mixedema 20 idiopático primario, linfocitosis primaria, que incluyen linfocitosis de células B monoclonales (por ejemplo, gamopatía monoclonal benigno y gammopatía monoclonal de significación no determinado, MGUS) , mixedema primario, MS progresiva primaria (PP S) , y MS remitente-recidivante 25 (RRMS) , colangitis esclerosante primaria, dermatitis por progesterona, esclerosis sistémica progresiva, artritis proliferativa , psoriasis tales como psoriasis en placa, psoriasis, artritis psoriática, proteinosis alveolar pulmonar, eosinofilia por infiltración pulmonar, anemia o aplasia de hematíes pura (PRCA) , aplasia de hematíes pura, sinusitis purulenta o no purulenta, psoriasis pustular y psoriasis de las uñas, pielitis, pioderma gangrenosa, tiroiditis de Quervain, fenómeno de Raynaud, artritis reactiva, aborto recurrente, reducción de la respuesta a la presión arterial, distrofia simpática refleja, sprue refractaria, enfermedad o síndrome de Reiter, policondritis recidivante, lesión por repercusión de tejidos miocárdicos u otros, lesión por reperfusión, síndrome de distrés respiratorio, síndrome de piernas inquietas, autoinmunidad retiniana, fibrosis retroperitoneal , síndrome de Reynaud, enfermedades reumáticas, fiebre reumática, reumatismo, artritis reumatoide, espondilitis reumatoide, infección con el virus de rubéola, síndrome de Sampter, sarcoidosis, esquistosomiasis , síndrome de Schmidt, SCID y enfermedades asociadas al virus Epstein-Barr, esclera, escleritis, esclerodactilia, escleroderma (que incluye escleroderma sistémica) , colangitis esclerosante, esclerosis diseminada, esclerosis tal como esclerosis sistémica, pérdida de audición sensoneural , espondiloartritis seronegativa , síndrome de Sheehan, síndrome de Shulman, silicosis, síndrome de Sjogren, autoinmunidad espermática & testicular, sinusitis esfenoide, síndrome de | Stevens-Johnson, síndrome del hombre rígido (o persona rígida) , endocarditis bacteriana subaguda (SBE) , lupus eritematoso cutáneo subagudo, pérdida auditiva súbita, síndrome de Susac, corea de Sydenham, oftalmía simpática, lupus eritematoso sistémica (SLE) o lupus eritematoso sistémica (por ejemplo, SLE cutáneo) , vasculitis necrotizante sistémica, y vasculitis asociada ANCA, tales como vasculitis o síndrome de Churg-Strauss (CSS) ) , tabes dorsal, arteritis de Takayasu, telangiectasia, arteritis temporal/arteritis de células gigantes, tromboangitis ubiterans, trombocitopenia (desarrollado por ejemplo, por pacientes de infarto miocárdico) , que incluyen púrpura trombocitopénica trombótica (TTP) y trombocitopenia autoinmune o inmunomediada tales como púrpura trombocitopénica idiopática (ITP) que incluyen ITP crónica o aguda, púrpura trombocitopénica (TTP) , tirotoxicosis., . lesión tisular, síndrome de Tolosa-Hunt, necrólisis epidérmico tóxico, síndrome del shock tóxico, reacción de transfusión, hipogammaglobulinemia transitoria de infancia, mielitis transversa, mielitis transversa, eosinofilia pulmonar tropical, tuberculosis, colitis ulcerativa, enfermedad del tejido conectivo no diferenciado (UCTD) , urticaria (por ejemplo, urticaria alérgica crónica y urticaria idiopática crónica, que incluye urticaria autoinmune crónica) , uveítis (por ejemplo, uveítis anterior) , uveorretinitis , valvulitis, disfunción vascular, vasculitis, artritis vertebral, dermatosis vesiculobullosa, vitíligo, granulomatosis de egener (actualmente denominada granulomatosis con poliangiítis (GPA) , síndrome de Wiskott-Aldrich, o síndrome de hiper IgM ligada a x.

51. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2, 8, 13, 14, 15, 17, 20, 22, 24, 28, 32, 34, 36, 39, y 43-47, caracterizado porque el trastorno inflamatorio es enfermedades reumáticas (por ejemplo, artritis reumatoide, osteoartritis , artritis psoriática) espondiloartropatías (por ejemplo, espondilitis anquilosante, artritis reactiva, síndrome de Reiter) , artropatías cristalinas (por ejemplo, gota, pseudogota, enfermedad de depósito de pirofosfato de calcio) , esclerosis múltiple, enfermedad de Lyme, polimialgia reumática; enfermedades del tejido conectivo (por ejemplo, lupus eritematoso sistémico, esclerosis sistémica,. polimiositis , dermatomiositis , .síndrome de Sjogren) vasculitis (por ejemplo, poliarteritis nodosa, granulomatosis de Wegener, síndrome de Churg-Strauss) ; afecciones inflamatorias que incluyen consecuencias de trauma o isquemia, sarcoidosis ; enfermedades vasculares que incluyen enfermedad vascular aterosclerótica , aterosclerosis , y enfermedad oclusiva vascular (por ejemplo, aterosclerosis, enfermedad cardíaca isquémica, infarto miocárdico, accidente cerebrovascular, enfermedad vascular periférica) , restenosis del stent vascular; enfermedades oculares que incluyen uveítis, enfermedad corneana, iritis, iridociclitis , cataratas, reflujo ácido/acidez, acné, acné vulgar, alergias y sensibilidades, enfermedad de Alzheimer, asma, aterosclerosis y enfermedad oclusiva vascular (por ejemplo, ateroesclerosis , enfermedad cardíaca isquémica, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular, enfermedad vascular periférica) y restenosis del stent vascular, enfermedades autoinmunes, bronquitis, cáncer, carditis, cataratas, enfermedad celíaca, dolor crónico, prostatitis crónica, cirrosis, colitis, enfermedades del tejido conectivo (por ejemplo, lupus eritematoso sistémico, esclerosis sistémica, polimiositis , dermatomiositis , síndrome de Sjogren), enfermedad corneana, enfermedad de Crohn, artropatías cristalinas (por ejemplo, gota, pseudogota, enfermedad del depósito de pirofosfato de calcio) , demencia, dermatitis, diabetes, ojos secos, eczema, edema, enfisema, fibromialgia , gastroenteritis, gingivitis, glomerulonefritis , enfermedad cardiaca, hepatitis, presión arterial alta, hipersensibilidades , enfermedades intestinales inflamatorias, afecciones inflamatorias que incluyen consecuencias de trauma o isquemia, resistencia a la insulina, cistitis intersticial, iridociclitis, iritis, dolor articular/artritis/artritis reumatoide, enfermedad de Lyme, síndrome metabólico (síndrome x) , esclerosis múltiple, miositis, nefritis, obesidad, enfermedades oculares que incluyen uveítis, osteopenia, osteoporosis , enfermedad de Parkinson, enfermedad inflamatoria pélvica, enfermedad periodontal, poliarteritis , policondritis , polimialgia reumática, psoriasis, lesión por reperfusión, artritis reumática, enfermedades reumáticas (por ejemplo, artritis reumatoide, osteoartritis , artritis psoriáticas) , artritis reumatoide, sarcoidosis, escleroderma, sinusitis, síndrome de Sjógren, colon espástico, espondiloartropatías (por ejemplo, espondilitis anquilosante, artritis reactiva, síndrome de Reiter) , candidiasis sistémica, tendonitis, rechazo del transplante, UTI, vaginitis, enfermedades vasculares que incluyen enfermedad vascular ateroesclerótica, vasculitis (por ejemplo, poliarteritis nodosa, granulomatosis de Wegener, síndrome de Churg-Strauss) , y vasculitis.

52. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-51, caracterizado porque , el. compuesto es un anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3.

53. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el anticuerpo es quimérico, humanizado, anti -idiotípico, cadena simple, bifuncional, o co-específico .

54. El método dé conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque la cadena ligera del anticuerpo comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, 3, o 5.

55. El método de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado porque los residuos 3, 4, 9, 24, 32, 41, 47, 50, 55, 71, y 74 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 son Q, L, S, R, A, G, L, D, E, F, y A, respectivamente

56. El método de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado porque los residuos 3, 4, 9, 24, 32, 41, 47, 50, 55, 71, y 74 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 son R, M, F, , Y, A, F, Y, Q, Y, y T, respectivamente.

57. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque la cadena pesada del anticuerpo comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, 4, o 6.

58. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el anticuerpo comprende la secuencia de aminoácidos de cadena ligera CDR1 de la corresponde a los residuos 24-34 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1; secuencia., de aminoácidos de CDR2 de cadena ligera corresponde a los residuos 50-56 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1; o la secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena ligera corresponde a los residuos 89-97 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1.

59. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el anticuerpo comprende la secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena ligera corresponde a los residuos 24-34 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3; la secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena ligera corresponde a los residuos 50-56 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3; o la secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena ligera corresponde a los residuos 89-97 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3.

60. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el anticuerpo comprende la secuencia de aminoácidos de CDR1 de cadena pesada corresponde a los residuos 31-35 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, la secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena pesada corresponde a los residuos 50-65 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, o la secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena pesada corresponde a los residuos 99-112 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO : 2.

61. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el anticuerpo comprende la secuencia de aminoácidos de CDR1 de .. cadena pesada corresponde a . Ios-residuos 31-35 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, la secuencia de aminoácidos de CDR2 de cadena pesada corresponde a los residuos 50-66 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO : 4, o la secuencia de aminoácidos de CDR3 de cadena pesada corresponde a los residuos 99-113 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4.

. 62. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el anticuerpo comprende una secuencia de la cadena ligera variable y una de cadena pesada variable que comprende la SEQ ID NO : 1 y SEQ ID NO : 2 , respectivamente.

63. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el anticuerpo comprende una secuencia de la cadena ligera variable y una de cadena pesada variable que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO : 3 y SEQ ID NO : 4 , respectivamente.

64. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el anticuerpo comprende una secuencia de la cadena ligera variable y una de cadena pesada variable que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO : 5 y SEQ ID NO: 6, respectivamente.

65. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el anticuerpo se une a un epitopo dentro de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, o 24.

66. El método de- conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el anticuerpo se une a KIR2DL1 dentro de una región definida por al menos uno de los residuos de aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 127, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 181, y 192.

67. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el anticuerpo se une a KIR2DL1 y KIR2DL2/3 dentro de una región definida por al menos uno de los residuos de aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en 105, 106; 107, 108, 109, 110, 111, 127, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 181, y 192.

68. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento se conjuga directa o indirectamente a una etiqueta, agente citotóxico, agente terapéutico o un agente inmunosupresor .

69. El método de conformidad con la reivindicación 68, caracterizado porque la etiqueta es una etiqueta quimioluminiscente, etiqueta paramagnética, un agente de contraste MRI , etiqueta fluorescente, etiqueta bioluminescente, o etiqueta radioactiva.

70. El método de conformidad con la reivindicación 69, caracterizado porque la etiqueta paramagnética es aluminio, manganeso, platino, oxígeno, lantano, . lutecio, escandio, itrio, o galio.

71. El método de conformidad con la reivindicación 68, caracterizado porque el agente citotóxico es un resto que inhibe ADN, AR , o síntesis de proteína, un radionucleido , o proteína inhibidora de ribosomas .

72. El método de conformidad con la reivindicación 71, caracterizado porque el agente citotóxico es 212Bi, 131I, 188Re, 90Y, vindesina, metotrexato, adriamicina, cisplatino, proteína antiviral de phytolaca, exotoxina A de Pseudomonas, ricina, toxina de difteria, cadena de ricina A, o enzima fosfolipasa citotóxica .

73. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el anticuerpo bloquea o neutraliza la inhibición de NK.

74. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el anticuerpo se une a al menos uno de KIR2DL1, 2 o 3 y neutraliza la inhibición mediada por KIR2DL1, 2 y/o 3 -de la citotoxicidad de las células NK.

75. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el anticuerpo neutralizante comprende al menos aproximadamente 20% de aumento de la lisis específica mediada por las células NK de las células blanco NK.

76. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el anticuerpo compite por la unión con la. misma región determinante antigénica , del anticuerpo monoclonal 1-7F9, DF200, y/o NKVSFl.

77. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el anticuerpo se une a al menos do receptores de KIR inhibitorios en la superficie de las células NK.

78. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el anticuerpo se une a una región determinante antigénica común de los receptores humanos de KIR2DL.

79. Elj método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el anticuerpo se une a los receptores de KIR2DL1, 2 y/o 3.

80. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el anticuerpo tiene una afinidad por KIR2DL1, 2 y/o 3 de al menos aproximadamente 104 a aproximadamente 1010 M"1.

81. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el anticuerpo tiene una afinidad por KIR2DL1, 2 y/o 3 de al menos aproximadamente 107 a aproximadamente 109 M"1.

82. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el anticuerpo exhibe unión con KIR con una constante de disociación de menos de aproximadamente 100 nM.

.·¦·.. 83. El método de conformidad con la reivindicación 52, caréicterizado porque el anticuerpo reacciona en forma cruzada con los KIR 2DL1 más 2DL2/3, 3DL1 más 3DL2 , 2DL1 (y 2DL2/3) más 2DS4, y 2DL1 (y 2DL2/3) pero no 2D2 .

84. El método de conformidad con la reivindicación 52, caréicterizado porque el anticuerpo es el anticuerpo DF200, 1-7F9, o NKVSF1.

85. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-84, caracterizado porque el compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 se administra como ionoterapia .

86. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-84, caracterizado porque el compuesto que inhibe un polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3 se administra en combinación con un segundo agente terapéutico.

87. El método de conformidad con la reivindicación 86, caracterizado porque el segundo agente terapéutico es un agente que disminuye la inflamación.

88. El método de conformidad con la reivindicación 86, caracterizado porque el segundo agente terapéutico es un agente químico de molécula pequeña.

89. El método de conformidad con la reivindicación 86, caracterizado porque el segundo agente terapéutico es un DMARD, opcionalmente un anticuerpo anti-TNFa, un inhibidor de tirosina cinasa de molécula pequeña, o metotrexato (MTX) .

90. El método de conformidad con la reivindicación 86, caracterizado porque el segundo agente terapéutico es un agente diferente de un anticuerpo que tiene un isotipo IgGl o IgG3.

91. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-90, caracterizado porque el compuesto que inhibe un KIR2DL1, 2 y/o 3 es un anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 que tiene la capacidad de bloquear o neutralizar la inhibición mediada de NK por KIR2DL1, 2 y/o 3 y de este modo potenciar la actividad de las células NK contra las células blanco bloqueadas de otro modo.

92. El método de conformidad con la reivindicación 91, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo anti-KIR que se une a KIR2DL1 y KIR2DL2/3.

93. El método de conformidad con la reivindicación 92, caracterizado porque el anticuerpo anti-KIR compite con 1-7F9 por la unión a KIR2DL1 , 2 y/o 3.

94. El método de conformidad con la reivindicación 93, caracterizado porque el anticuerpo es 1-7F9.

95. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 52-84, caracterizado porque el anticuerpo comprende los dominios VL y VH de 1-7F9.

96. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 52-84, caracterizado porque el anticuerpo comprende las CDR de VL y VH de 1-7F9.

97. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 52-84, caracterizado porque el anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 se administra como una composición farmacéuticamente aceptable que comprende una cantidad efectiva del anticuerpo anti-KIR2DL1 , 2 y/o 3.

98. El método de conformidad con la reivindicación 97, caracterizado porque la composición está libre de cualquier otro agente farmacéuticamente activo.

99. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 52-84, caracterizado porque el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 se administra en una cantidad que produce saturación sustancialmente completa del KIR2DL1, 2 y/o 3 sobre las células NK durante un período de al menos aproximadamente 1 semana .

100. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 52-84, caracterizado porque el anticuerpo anti-KIR2DLl , 2 y/o 3 se administra en una cantidad que produce saturación sustancialmente completa del KIR2DL1, 2 y/o 3 sobre las células NK durante un período de al menos aproximadamente 2 semanas .

101. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 52-84, caracterizado porque el anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 se administra en una cantidad que produce saturación sustancialmente completa del KIR2DL1, 2 y/o 3 sobre las células NK durante un período de al menos aproximadamente 1 mes . . . ..

102. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 52-84, caracterizado porque el anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 se administra varias veces con una frecuencia de dosis de una vez aproximadamente cada 2 semanas .

103. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 52-84, caracterizado porque el anticuerpo anti -KIR2DL1 , 2 y/o 3 se administra varias veces con una frecuencia de dosis de una vez aproximadamente cada 1 mes.

104. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 52-84, caracterizado porque el anticuerpo ant.i-KIR2DLl , 2 y/o 3 se administra varias veces con una frecuencia de dosis de una vez aproximadamente cada 2 meses o una vez por cada período de más de 2 meses.

105. Uso de la composición para el tratamiento de un trastorno autoinmune que comprende un anticuerpo anti-KIR2DL1.

106. Uso de la composición para el tratamiento de un trastorno autoinmune que comprende un anticuerpo anti-KIR2DL2.

107. Una composición para usarse en el tratamiento de un trastorno autoinmune que comprende un anticuerpo anti-KIR2DL3.

108. Una composición para usarse en el tratamiento de un trastorno inflamatorio que comprende un anticuerpo anti -KIR2DL1.

109. Una composición para usarse en el tratamiento de un trastorno inflamatorio que comprende un anticuerpo an i -KIR2DL2.

110. Una composición para usarse en el tratamiento de un trastorno inflamatorio que comprende un anticuerpo anti -KIR2DL3.

111. Uso de un anticuerpo anti -KIR2DL1 , en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno autoinmune.

112. Uso de un anticuerpo anti-KIR2DL2 , en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un tra£3torno autoinmune.

113. Uso de un anticuerpo anti-KIR2DL3 , en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno autoinmune.

114. Uso de un anticuerpo anti-KIR2DL1 , en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno inflamatorio.

115. Uso de un anticuerpo anti-KIR2DL2 , es en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno inflamatorio.

116. Uso de un anticuerpo anti-KIR2DL3 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno inflamatorio.

117. Un método para producir un anticuerpo para el tratamiento de un trastorno inflamatorio o autoinmune, caracterizado porque comprende las etapas de: (a) inmunizar un mamífero no humano con un inmunógeno que comprende un polipeptido de KIR2DL1, 2 y/o 3; (b) seleccionar anticuerpos de el mamífero inmunizado, donde los anticuerpos se unen a el polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3, y (c) seleccionar anticuerpos de (b) que potencian la eliminación de las células NK de las células T. |

118. Un método para producir un anticuerpo para el tratamiento de un trastorno inflamatorio o autoinmune, caracterizado porque comprende proporcionar una biblioteca de anticuerpos por tecnología despliegue en fago de la. biblioteca, donde los anticuerpos se unen a el polipéptido de KIR2DL1, 2, y/o 3, y seleccionar anticuerpos que potencian la eliminación o reducción de células T por las células NK.