CN103705469A - 一种和厚朴酚纳米粒及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，涉及一种和厚朴酚纳米粒及其制备方法。所述的和厚朴酚纳米粒采用超声-沉淀法联合冷冻干燥技术制备，其处方组成：和厚朴酚与稳定剂的组合比例为1∶0.05～50。本发明通过处方优化，筛选出聚维酮(PVP)和牛血清白蛋白(BSA)为最佳稳定剂组合。制备的和厚朴酚纳米粒载药量高，性质稳定，处方组成简单，制备工艺简便可行，粒径范围为100nm-300nm；通过制备纳米粒，能明显促进和厚朴酚的溶出，提高其口服生物利用度，改善其体内组织分布。此外，可将和厚朴酚纳米粒进行冷冻干燥，所得的冻干粉加入适当赋形剂进一步制备口服液、片剂、颗粒剂、胶囊剂等不同剂型，还可制备成注射液供皮下、肌肉或静脉给药，以便于临床应用。

Description

一种和厚朴酚纳米粒及其制备方法

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种和厚朴酚纳米粒、制备方法及应用。

背景技术

和厚朴酚(Honokiol)是从中药厚朴中提取的一种含有酚羟基的小分子生物活性物质，分子式为C18H18O2，分子量266.33，水溶性差。国内外研究报道，和厚朴酚具有较强的抗氧化、抗菌、抗血栓生成、抗炎、抗焦虑和抗肿瘤作用。

水溶性差，口服生物利用度低，很大程度上限制了它的临床应用及疗效的发挥，有关和厚朴酚的制剂及活性方面的报道大多限于脂质体和胶束，载药量都相对较低，而对于其体内的研究相对较少。

纳米粒是将药物直接制备成纳米大小的微粒，并借助于稳定剂对其进行稳定而得到的给药系统，药物粒径小、比表面积大，载药量高，制备工艺简单，制备方法多样，生产过程简单，适用范围广，几乎适用于所有的水难溶性药物。纳米粒作为一种中间制剂可与传统制剂相结合以满足不同的需要。如，可以直接以液体混悬剂形式口服，也可以通过冷冻干燥技术将其转变为固体形式，制成片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂等，以方便服用和运输。因此，纳米粒是难溶性药物的理想剂型之一。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备方法简便、载药量高、制剂稳定性高，能显著增加和厚朴酚的生物利用度及改善体内分布的纳米粒。

一种和厚朴酚纳米粒由和厚朴酚和稳定剂组成，和厚朴酚与稳定剂的质量比为1∶0.05～50。

一种和厚朴酚纳米粒，选用的稳定剂为羟丙基甲基纤维素(HPMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚维酮(PVP)、泊洛沙姆188(P188)、吐温-80(Tween-80)、聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)、胆固醇-PEG(500、1000、2000、5000)、聚乙二醇聚乳酸共聚物(PEG-PCL)、聚乙二醇聚己内酯共聚物(PEG-PLA)、聚乙二醇聚乳酸乙醇酸共聚物(PEG-PLGA)嵌段共聚物、牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)中的一种或几种。

本发明目的之二在于提供一种和厚朴酚纳米粒制备方法，本发明采用的是超声或沉淀的方法制备纳米粒，技术方案如下：

(1)和厚朴酚原料药(或和厚朴酚和稳定剂)溶于有机溶剂中；

(2)超声或搅拌条件下将药物(或和厚朴酚和稳定剂)的有机溶剂滴加到含有稳定剂的水溶液(或水)中；

(3)减压除去有机溶剂；

(4)加入冻干保护剂经冷冻干燥制成稳定的纳米粒冻干粉。

上述制备方法，其特征在于：步骤(1)所述的有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮中的一种或两种或两种以上的混合液，药物在有机溶剂中的浓度为0.01％～1％(w/v)；步骤(2)分散介质中稳定剂的浓度为0.1％～5％(w/v)；步骤(3)中有机溶剂的浓度为1％～20％(v/v)；步骤(4)中支架剂为海藻糖、麦芽糖、甘露醇中的一种或其任意混合，浓度为0.5％～20％(w/v)。最优处方为0.5％和厚朴酚、稳定剂为0.25％白蛋白和0.25％聚维酮、10％有机溶剂、0.5％冻干保护剂。

本发明的和厚朴酚纳米粒可以通过冷冻干燥或喷雾干燥进一步固化。

和厚朴酚纳米粒在口服给药制剂中的应用包括口服纳米粒和冻干粉。

本发明的优点在于

所述纳米粒的给药方式可以是口服、注射或外用给药，所得纳米粒冻干粉加入适当赋形剂进一步制备口服液、片剂、颗粒剂、胶囊剂等不同剂型，还可制备成注射液供皮下、肌肉或静脉给药，口服给药前，为了保证药物的稳定性，其分散介质应需含浓度不小于0.4MPBS，且pH不小于8。

和厚朴酚难溶于水，口服生物利用度很低，制成纳米粒后，能明显促进和厚朴酚的溶出，提高其口服生物利用度，改善其体内组织分布。

所制备的纳米混悬剂经注射给药，还能改善药物的体内组织分布，使心脑血管系统的药物分布大幅度提高，从而利于心脑血管系统疾病的治疗。

附图说明

图1和厚朴酚纳米粒的平均粒径及多分散指数(PDI)

图2为实施例5中的DSC扫描图谱(从上到下依次为：甘露醇、聚维酮、牛血清白蛋白、和厚朴酚、原药与辅料物理混合、和厚朴酚纳米粒冻干粉)

图3为实施例5中X-粉末衍射图谱(从上到下依次为：甘露醇、和厚朴酚、原药与辅料物理混合、聚维酮、白蛋白、和厚朴酚纳米粒冻干粉)

图4为实施例5中透射电镜照片(×20000)

图5为实施例6中和厚朴酚体外释放曲线

图6为实施例7中大鼠血药浓度与时间变化的关系曲线(n＝5)

图7为实施例8中纳米粒注射或口服后在心、脑、血管中的分布(n＝5)

具体实施方式

下面将描述本发明的几个实施例，但本发明的内容完全不局限于此。

实施例1

将羟丙基甲基纤维素100mg加入20mL水中，搅拌使之完全溶解，将40mg和厚朴酚完全溶解于2mL丙酮中，将此溶液用注射器缓慢滴加到20mL的水溶液中，200W超声10min，水浴温度为室温。得到和厚朴酚初混悬液，减压旋转蒸发除去丙酮，即得到和厚朴酚纳米粒，平均粒径为353nm(图1)。

实施例2

将泊洛沙姆P188200mg加入20mL水中，搅拌使之完全溶解，将100mg和厚朴酚完全溶解于3mL丙酮中，将此溶液用注射器缓慢滴加到20mL的水溶液中，搅拌10min，水浴温度为室温。得到和厚朴酚初混悬液，减压旋转蒸发除去丙酮，即得到和厚朴酚纳米粒，平均粒径为189nm(图1)。

实施例3

将40mg吐温-80加入20mL水中，搅拌使之完全溶解，将40mg和厚朴酚完全溶解于1mL丙酮中，将此溶液用注射器快速滴加到20mL的水溶液中，250W超声8min，水浴温度为0℃。得到和厚朴酚初混悬液，减压旋转蒸发除去丙酮，即得到和厚朴酚纳米粒，平均粒径为151nm(图1)。

实施例4

将白蛋白100mg加入20mL水中，搅拌使之完全溶解，将100mg和厚朴酚完全溶解于2mL丙酮中，将此溶液用注射器快速滴加到20mL的水溶液中，250W超声8min，水浴温度为0℃。得到和厚朴酚初混悬液，减压旋转蒸发除去丙酮，即得到和厚朴酚纳米粒，平均粒径为134nm(图1)。

实施例5

将白蛋白和聚维酮各50mg加入20mL水中，搅拌使之完全溶解，将100mg和厚朴酚完全溶解于2mL丙酮中，将此溶液用注射器快速加入20mL的水溶液中，搅拌并超声8min，超声条件为250W，冰浴条件下进行。得到和厚朴酚初混悬液，减压旋转蒸发除去丙酮，加入甘露醇100mg，搅拌均匀后分装于10mL西林瓶中，液面高度为1～3cm。将西林瓶于-80℃预冻12小时，然后放入冷冻干燥机中-52℃、0.1mbar抽真空干燥24小时，逐渐升温至室温，即得疏松多孔的和厚朴酚纳米粒冻干粉。

将得到的和厚朴酚纳米粒冻干粉用0.5M的PBS(pH＝8.0)溶液复溶分散成浓度为2mg/mL的纳米粒，平均粒径约为120nm，4℃放置稳定性大于12小时，无任何颜色上的变化，无任何沉淀产生，平均粒径未见显著变化。

和厚朴酚纳米粒冻干前后的平均粒径和多分散系数(PDI)变化如下表：

本发明和厚朴酚纳米粒冻干组合物样品DSC扫描图谱如图2所示，扫描参数：以氧化铝盘为参比，氮气为载气，升温速度：10℃/min，在30～200℃范围内进行测定。

X-粉末射线衍射图谱见图3，采用Cu靶，管压40KV，管流40MA，扫描速度为10℃/min，扫描范围为3～40℃，步长0.02°。结果可知和厚朴酚纳米粒中药物以无定形态晶体形式存在。

取用0.5M的PBS(pH＝8)溶液复溶重建后的和厚朴酚纳米粒冻干组合物，稀释至一定的倍数，滴至专用铜网上，自然干燥后，再滴加1％磷钨酸溶液(w/v)染色15-20min，用滤纸吸干溶液，放入透射电镜下观察纳米粒的形态，如图4所示。

实施例6

和厚朴酚纳米粒的体外释放实验

实验方案：制备和厚朴酚纳米粒(5mg/mL)，以和厚朴酚混悬液(和厚朴酚超声分散于水中，5mg/mL)为对照，采用动态膜透析法进行体外释放实验。精密吸取1mL和厚朴酚纳米粒及和厚朴酚水混悬液，装入经蒸馏水浸泡处理过的透析袋内，各平行3份，将袋口扎紧以50mL的pH7.4PBS溶液(含有0.5％SDS的PBS，pH＝7.4)为释放介质，在37℃水浴恒温振荡器上振荡(75rpm)。

样品采集：在预设时间点(0.5、1、2、4、8、12、24、36、48、60、72h)取样1mL，同时补加同体积的37℃新鲜释放介质，每12h更换一次释放介质。将所取样品过0.22μm的滤膜后，测定释放介质中和厚朴酚的含量，计算累计释放百分率，绘制体外释放曲线。结果如图5所示。

结果表明纳米粒较原药的溶出度和溶解速率有明显的提高。

实施例7

和厚朴酚纳米粒药代动力学研究

实验动物：健康SD大鼠16只，雄性，体重200～220g。

给药方案：随机分成两组。给药前禁食12h，自由饮水。以20mg/kg的剂量分别灌胃给予和厚朴酚纳米粒和混悬剂。

样品采集：在0～24小时内，每隔一段时间，经大鼠眼球后静脉丛取血0.5mL，置于肝素钠试管中，5000rpm离心5min，分离血浆，取血浆200mL，加入1mL乙腈溶液，涡旋混匀，沉淀蛋白，室温下放置10min，混合物10000rpm离心5min，上清液转移至含有50-60mg氯化钠的离心管中，涡旋30s混匀，室温保持10min后10000rpm离心5min，取上层有机相过膜，进样20mL，HPLC检测分析。

结果：平均血药浓度数据用Phoenix WinNonlin(version6.1)拟合，计算药代动力学参数，药代动力学参数如下表：

实施例8

不同给药方式和厚朴酚纳米粒在ICR小鼠体内分布

实验动物：取ICR小鼠60只，体重20g左右，随机分为三组。

给药方案：以20mg/kg的剂量分别注射和厚朴酚纳米粒和口服和厚朴酚纳米粒和混悬液，给药前禁食12h，自由饮水。

样品采集：于给药后0.5h、1h、3h、6h、12h，分别取出血浆，心、肝、脾、肺、肾和脑组织，用生理盐水冲洗表面的浮血及内容物，滤纸吸干，将各组织剪碎，按比例加入3倍组织重量的生理盐水，用组织匀浆器匀浆。取各组织匀浆液200mL，加入1mL乙腈溶液，涡旋混匀，沉淀蛋白，室温下放置10min，混合物10000rpm离心5min，上清液转移至含有50-60mg氯化钠的离心管中，涡旋30s混匀，室温保持10min后10000rpm离心5min，取上层有机相过膜，进样20mL，HPLC检测分析。

结果：注射后纳米粒较口服给药后在心、脑、血浆中的分布明显增加(图7)，注射给药后血浆AUC、心脏AUC、脑AUC分别大约是口服的9.08、3.63、14.67倍，而血浆、心脏、脑中的Cmax分别大约是口服的45.28、6.19、10.22倍，提示纳米粒静脉给药后有潜力用于治疗心、脑、血管系统疾病。

Claims (8)

1.一种和厚朴酚纳米粒，其特征在于：所述的和厚朴酚纳米粒由和厚朴酚和稳定剂组成，和厚朴酚与稳定剂的质量比为1∶0.05～50。

2.根据权利要求1所述的一种和厚朴酚纳米粒，其特征在于：所述的稳定剂为羟丙基甲基纤维素(HPMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚维酮(PVP)、泊洛沙姆188(P188)、吐温-80(Tween-80)、聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)、胆固醇-PEG(500、1000、2000、5000)、聚乙二醇聚乳酸共聚物(PEG-PCL)、聚乙二醇聚己内酯共聚物(PEG-PLA)、聚乙二醇聚乳酸乙醇酸共聚物(PEG-PLGA)嵌段共聚物、牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的一种和厚朴酚纳米粒的制备方法，其特征在于：采用超声法、沉淀法、高压均质法中的一种或几种结合。

4.根据权利要求3所述的一种和厚朴酚纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)和厚朴酚原料药(或和厚朴酚和稳定剂)溶于有机溶剂中；

(2)超声或搅拌条件下将药物(或和厚朴酚和稳定剂)的有机溶剂滴加到含有稳定剂的水溶液(或水)中；

(3)减压除去有机溶剂；

(4)加入冻干保护剂经冷冻干燥制成稳定的纳米粒冻干粉。

5.根据权利要求4所述的一种和厚朴酚纳米粒及其制备方法，其特征在于：步骤(1)所述的有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮中的一种或两种或两种以上的混合液，药物在有机溶剂中的浓度为0.01％～1％(w/v)；步骤(2)分散介质中稳定剂的浓度为0.1％～5％(w/v)；步骤(3)中有机溶剂的浓度为1％～20％(v/v)；步骤(4)中冻干保护剂为海藻糖、麦芽糖、甘露醇中的一种或其任意混合，浓度为0.5％～20％(w/v)。

6.根据权利要求4所述的一种和厚朴酚纳米粒的制备方法，其特征在于：步骤(4)中可以通过冷冻干燥或喷雾干燥进一步固化。

7.如权利要求1所述的和厚朴酚纳米粒，其特征在于：能明显促进和厚朴酚的溶出，提高其口服生物利用度，注射后能大幅度增加药物在心脑血管系统中的分布。

8.如权利要求1至6中任一项所述的和厚朴酚纳米粒，其特征在于：所述纳米粒的给药方式可以是口服、注射或外用给药，所得纳米粒干粉加入适当赋形剂进一步制备口服液、片剂、颗粒剂、胶囊剂等不同剂型，还可制备成注射液供皮下、肌肉或静脉等给药，口服给药前，其分散介质应需含浓度不小于0.4M的PBS，且pH不小于8。

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