CN105726494A - 穿心莲内酯纳米混悬剂组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物制剂领域，公开了一种穿心莲内酯纳米混悬剂组合物及其制备方法和应用。其处方组成及质量百分比为：穿心莲内酯0.05%-5%，稳定剂0.5%-5%，稀释稳定剂为0.005%-1%，其余为蒸馏水，无有机溶媒。本发明的穿心莲内酯纳米混悬剂质量稳定，可制成100-1000nm的纳米制剂，具有工艺简单、易实现产业化、载药量大、给药方便、安全性高等特性。本品可加入适当的冻干保护剂，冻干后保存，临用前以5%葡萄糖直接溶解并稀释，用于静脉注射、肌肉注射；或加入赋形剂制备成片剂、胶囊剂等用于口服。

Description

穿心莲内酯纳米混悬剂组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体的说，涉及穿心莲内酯纳米混悬剂冻干组合物及其制备方法和应用。

背景技术

穿心莲内酯(分子式为C₂₀H₃₀O₅，分子量为350.45)为爵床科植物穿心莲中提取得到的二萜内酯化合物，是中药穿心莲的主要有效成分之一，具有清热解毒、凉血消肿等功能。现代药理研究表明，穿心莲内酯具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、调节免疫、治疗心血管疾病、保肝利胆等作用。临床用于治疗菌痢、钩端螺旋体病、脑膜炎、肺炎、上呼吸道感染。

穿心莲内酯在沸乙醇中溶解，甲醇或乙醇中微溶，极微溶于氯仿，乙醚中几乎不溶，水中的溶解度只有0.07mg/mL(22℃)，熔点230-231℃，油水分配系数为3.90。针对临床上病毒感染急症的需求，亟需研发穿心莲内酯注射剂，但由于其给药剂量较高(穿心莲内酯片日用量为300-450mg；喜炎平注射液日用量为250-500mg)，所以对制剂中的药物浓度有较高的要求，而现有技术无法达到这个要求。如张等以吐温80、普郎尼克F68、聚氧乙烯(35)氢化蓖麻油、聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油、聚乙二醇12羟基硬脂酸酯、聚乙二醇400、聚乙二醇300和丙二醇等增溶辅料均无法将其增溶至要求浓度(2.5mg/mL)；以脂质体、乳剂和胶束为载体，或仍无显著提高制剂药物浓度，或需加入大量辅料及有机溶剂。为了解决上述问题，穿心莲内酯注射剂的研发已受国家科技重大专项“基于脂质载体释药技术的穿心莲内酯新给药系统的研究与开发”的资助。

参考文献：张海燕，齐云，廖永红.注射剂常用增溶性药用辅料的安全与增溶研究[J].中国实验方剂学杂志，2011,17(11):1-4.

于波涛，张志荣.穿心莲内酯脂质体的制备及体外释放特性[J].中国医药工业杂志，2009,40(2):114-116.

欧阳五庆，吴旭锦.一种穿心莲内酯纳米乳口服液及其制备方法[P].中国专利:200610104591.2,2007-03-21.

纳米混悬剂是利用表面活性剂的稳定作用，将药物微粒分散在水中，通过粉碎或控制析晶等技术形成稳定的纳米胶态分散体。制剂中药物粒径小(平均粒径小于1μm，一般在100-500nm)、比表面积大，这是解决难溶性药物水溶性的一个重要技术。

纳米混悬剂的应用特点：

1.药物以固体微粒分散于介质(通常为水)中，制剂含药量高，特别适合大剂量、难溶药物的口服和注射给药。

2.应用范围广，可以应用于那些水不溶但溶于油的药物(高lopP)，如CoQ₁₀纳米混悬剂；对于那些高熔点、水油均不溶的药物(以脂质体、乳剂、固体脂质纳米粒等脂质系统无法有效载药)，纳米混悬剂也能轻而易举地使制剂中药物浓度达到临床应用的需求。

参考文献：

RabinowBE.Nanosuspensionsindrugdelivery[J].NatureReviewsDrugDiscovery,2004,3(9):785-796.

3.有机溶剂和辅料用量少，毒性小，安全性高。目前增加难溶性药物水溶性通常采用共溶剂增溶、表面活性剂增溶等技术。但共溶剂增溶存在有机溶剂毒副作用，配伍时药物析出等问题；而大量表面活性剂的加入会带来潜在的毒副作用，其中注射增溶剂吐温80还可能带来溶血性问题。纳米混悬剂一般仅用少量辅料和有机溶剂，甚至不需要有机溶剂，从注射安全性考虑，纳米混悬剂具有较大的优势。

4.改变药动学参数，减少给药频率。由于特殊的粒径效应，静脉注射纳米混悬剂在体内的清除与分布与溶液剂是完全不同的。纳米粒子大部分被体内的巨噬细胞吞噬，聚集在肝、脾等组织，这些组织成为药物的“仓库”，药物可缓慢地释放，延长作用时间，如伊曲康唑纳米混悬剂注射后24h，血药浓度能达到2.8μg/mL。

5.增大药物溶解度，提高药物溶出速率。根据Ostwald-Freundlich方程提出的粒径与溶解度的关系，药物的纳米化处理，可增大药物溶解度，而其比表面积的增加同时提高了其溶出速度，这也是改善口服难溶性药物生物利用度的有效措施。

6.提高药物稳定性。将化学性质不稳定的药物制剂制备成纳米混悬剂后，一方面固体药物比药物分子与外界环境接触小，另一方面纳米混悬剂中的表面活性剂以及高分子对药物颗粒有包裹作用。因此，药物纳米化大大增加其化学稳定性。

7.可起到被动或者主动靶向作用。纳米制剂的体内分布与其粒径有很大关系，一般大于7μm的微粒被肺毛细血管截留，更小的微粒被网状内皮系统(RES)汇集于肝脾组织，而在100nm左右的粒子则易借助EPR效应靶向于肿瘤。所以可以根据治疗目的，制备不同粒径的纳米制剂，从而靶向治疗对应病灶。

发明内容

本发明目的是提供一种可注射的穿心莲内酯纳米混悬剂组合物及其制备工艺和使用方法。该纳米混悬剂处方简单，制备工艺精简且易于产业化、载药量高、稳定性好，无有机溶剂、安全性好。

本发明要解决的第一个技术问题是提供穿心莲内酯纳米混悬剂组合物，其包含以下组分和质量百分含量：

其中所述的稳定剂选自普朗尼克F68、普朗尼克F87、普朗尼克F108、普朗尼克F127、普朗尼克P124、聚氧乙烯蓖麻油(CremophorEL)、聚氧乙烯醚(35)氢化蓖麻油(CremophorRH35)、聚氧乙烯醚(40)氢化蓖麻油(CremophorRH40)、聚山梨酯80(Polysorbate80)、聚乙二醇12羟基硬脂酸酯(solutolHS15)；天然磷脂：大豆卵磷脂(SPC)、蛋磷脂(EPC)；合成磷脂：氢化大豆磷脂(HSPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二月桂酰磷脂酰胆碱(DLPC)、二月桂酰磷脂酰乙醇胺(DLPE)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-mPEG₂₀₀₀)等中的一种或其任意混合物；所述的稀释稳定剂选自胆酸及其钠盐、脱氧胆酸及其钠盐、去氢胆酸及其钠盐、牛磺胆酸及其钠盐、牛磺熊去氧胆酸及其钠盐、牛磺鹅去氧胆酸及其钠盐等胆酸盐中的一种或其任意混合物。

作为优选，本发明的稳定剂为：普朗尼克F68、普朗尼克F108、普朗尼克F127、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯醚(40)氢化蓖麻油、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、聚乙二醇12羟基硬脂酸酯中的一种或其任意混合物；稀释稳定剂为：脱氧胆酸钠、牛磺胆酸钠、牛磺熊去氧胆酸钠、牛磺鹅去氧胆酸钠中的一种或任意混合物。

更为优选地，本发明中稳定剂的用量为：普朗尼克F68、普朗尼克F108及普朗尼克F127为0.5％-5％；聚氧乙烯蓖麻油和聚氧乙烯醚(40)氢化蓖麻油为0.5％-5％；大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂及氢化蛋黄卵磷脂为0.5％-2％；聚乙二醇12羟基硬脂酸酯为2％-5％；

稀释稳定剂的用量为：脱氧胆酸钠为0.005％-0.5％，牛磺胆酸钠为0.01％-1％，牛磺熊去氧胆酸钠为0.01％-1％，牛磺鹅去氧胆酸钠为0.005％-0.5％。

由于纳米粒的物理稳定性对稳定剂浓度很敏感，若临床需要静脉滴注必然需要稀释，期间可能产生粒子聚集等问题，而使用大量稳定剂会带来潜在的毒性。因此本发明中在稳定剂的基础上加入少量稀释稳定剂，即能起到稳定纳米粒的作用，不需要加入大量的一般稳定剂，从而减少大量稳定剂带来的毒性。

本发明要解决的第二个技术问题是提供穿心莲内酯纳米混悬剂组合物的制备方法。本发明所提供的制备方法有两种：第一种制备方法是介质研磨法，即将穿心莲内酯和稳定剂混合，加入球磨珠研磨，制得100-1000nm左右的穿心莲内酯纳米混悬剂；第二种方法是高压均质法，是将过100目的穿心莲内酯原料药与稳定剂混合，通过高压均质机粉碎制得100-1000nm左右的穿心莲内酯纳米混悬剂。

本发明提供的第一种制备穿心莲内酯纳米混悬剂的方法是介质研磨法，包括以下步骤：1)将稳定剂溶于水，完全溶解后依次加入药物及球磨介质；2)转移至球磨机，以200-400rmp工作10min，间歇2-5min，12-24次循环；3)分离球磨介质，得到乳白色纳米混悬液，向其中加入稀释稳定剂，搅拌或涡旋使所加物质溶解；4)分装得稳定的纳米混悬剂。研磨球粒径为0.2-1mm，投放量为球磨介质/水＝2/1－4/1；稀释稳定剂可以研磨后加，亦可以研磨前加。

本发明提供的第二种制备穿心莲内酯纳米混悬剂的方法是高压均质法，包括以下步骤：1)将稳定剂溶于水，完全溶解后加入过100目的穿心莲内酯原料药；2)转移至高压均质机，500bar循环5-10次，1000bar循环10-20次，得乳白色纳米混悬液；3)向上述纳米混悬液中加入稀释稳定剂，搅拌或涡旋使所加物质溶解；4)分装得稳定的纳米混悬剂。稀释稳定剂可以高压均质后加，亦可以高压均质前加。

本发明的穿心莲内酯纳米混悬剂可添加适当的冻干保护剂，分装制剂于3mL、5mL或10mL西林瓶中经冷冻干燥，得外观好、物理化学性质稳定、复溶速度快、复溶前后无粒径变化的穿心莲内酯纳米混悬剂冻干粉。

本发明要解决的第三个技术问题是提供穿心莲内酯纳米混悬剂冻干组合物在注射剂和口服制剂中的应用。本发明的组合物中无任何有机溶剂，所用的稳定剂和稀释稳定剂经过体外溶血实验，证明它们在本发明用量下安全性很好，纳米制剂经5％葡萄糖稀释后稳定性良好，无论是静脉注射还是静脉滴注，均满足条件。临用前以5％葡萄糖直接溶解并稀释，用于静脉注射、肌肉注射；也可以加入赋形剂制备成片剂、胶囊剂等用于口服。

由于药物毒性很小(口服半数致死量＞40g·kg^-1)，且根据药动试验发现注入药物浓度为30mg/kg后，大鼠无明显不适，为了保持稀释后纳米粒的物理稳定性，稀释倍数需要根据处方中的稀释稳定剂量而定。

本发明的穿心莲内酯纳米混悬剂组合物较现有技术有如下优势：1)载药量大。穿心莲内酯为难溶性药物，水中溶解度只有0.07mg/mL，并且表面活性剂对其增溶能力较弱。本发明的组合物药物浓度可高达40mg/mL，与其他制剂相比，载药量有明显提升(见表1)，无论是注射给药还是口服给药，均能够满足其临床应用。2)安全性好。本发明的组合物中无任何有机溶剂，稳定剂以及稀释稳定剂加入量也很少；所制备的纳米混悬剂99％粒子的粒径小于1μm，不会堵塞毛细血管(见附图2)。3)稳定性好。本发明的组合物具有贮存稳定性好，冻干粉再分散快且无粒径增大，有利于药物的运输、储存和使用。此外，较一般纳米混悬剂，本发明的组合物具有稀释稳定性好的优点，利于临床稀释成大体积后静脉滴注。4)被动靶向。细菌或病毒均易被体内免疫细胞吞噬，本发明的穿心莲内酯纳米混悬剂也易于被体内免疫细胞吞噬，从而被动靶向病毒和细菌，达到更好的疗效。5)本发明制备工艺简单，成分单纯，易于生产控制，有广阔的产业化前景。

表1不同制剂中Andro载药量的比较。

参考文献：

江志强.穿心莲内酯类脂质囊泡的研制及其抗肝癌靶向性研究[D]:广州中医药大学,2012.

欧阳五庆，吴旭锦.一种穿心莲内酯纳米乳口服液及其制备方法[P].中国专利:200610104591.2,2007-03-21.

于波涛，张志荣.穿心莲内酯脂质体的制备及体外释放特性[J].中国医药工业杂志，2009,40(2):114-116.

穿心莲内酯纳米混悬剂冻干品呈白色酥松饼状，药饼色泽均一、表面平整、质地细腻，轻微震摇不至使药粉脱落；以5％葡萄糖溶液复溶，1min内便能完全溶解，复溶液为均匀的乳白色纳米混悬液，以一定量的5％葡萄糖溶液稀释，混悬液略显蓝色乳光。穿心莲内酯冻干品及复溶液见附图1。

采用激光粒度测定仪测定穿心莲内酯纳米混悬剂粒度分布，仪器参数设置如下：介质折光率(n＝1.330)，温度25℃。光源为He-Ne激光(λ₀＝632.8)，自动选择通道(channelwidth)，测定角为90°，SolidParticle模式，功率75mW，温度25℃。所制备的穿心莲内酯纳米混悬剂的平均粒径在300nm左右，多分散系数P.I.为0.163，99％粒子粒径小于751.8nm，测定结果见附图2。

以5％甘露醇为冻干保护剂，不同浓度的纳米混悬剂结冷冻干燥后，制剂粒径无显著性差异(P<0.05)，提示穿心莲内酯纳米混悬剂冻干稳定性好，测定结果见附图3。

稀释稳定性一直是纳米混悬剂应用中的一大难题，纳米混悬剂中稳定剂种类及其浓度对于维持纳米粒物理稳定性至关重要。当以一定的溶剂稀释后，稳定剂浓度下降，由此带来的可能是制剂粒径增大，从而影响制剂安全性和有效性。本发明的穿心莲内酯纳米混悬剂具有良好的稀释稳定性，分别以5％葡萄糖将制剂稀释10倍和20倍，8小时内，制剂粒径几乎不变，结果见附图4。

附图说明

图1为实施例5下的穿心莲内酯纳米混悬剂冻干品、复溶、稀释液的外观；

图2为实施例4下的穿心莲内酯纳米混悬剂粒径；

图3为实施例4下的穿心莲内酯纳米混悬剂冻干稳定性；

图4为实施例4下的穿心莲内酯纳米混悬剂稀释稳定性。

图5为实施例4下的穿心莲内酯纳米混悬剂大鼠药动学试验中药时曲线特性。

图6为实施例4下的穿心莲内酯纳米混悬剂大鼠组织分布试验中各组织中药物浓度。

具体实施方式

实施例1穿心莲内酯纳米混悬剂的制备

处方：

制备工艺：

以介质研磨法制备穿心莲内酯纳米混悬剂。将处方量的聚乙二醇12羟基硬脂酸酯溶于一定量的蒸馏水中，待完全溶解，加入处方量的穿心莲内酯，并加入蒸馏水至处方量，搅拌分散后加入0.4mm氧化锆球磨珠80g，于400rpm转速下，工作10min，间歇2min，运转12个循环，分离上层穿心莲内酯混悬液后，向其中加入处方量的脱氧胆酸钠。

实施例2穿心莲内酯纳米混悬剂的制备

处方：

制备工艺：

以高压均质法穿心莲内酯纳米混悬剂。将处方量的聚乙二醇12羟基硬脂酸酯和脱氧胆酸钠溶于一定量的蒸馏水中，待完全溶解，加入过100目的穿心莲内酯原料药800mg，继续加入蒸馏水至处方量，搅拌分散后，将初混悬液进行高压均化，条件为500bar循环10次，1000bar循环20次，得纳米混悬液。

实施例3穿心莲内酯纳米混悬剂的制备

处方：

制备工艺：

以介质研磨法制备穿心莲内酯纳米混悬剂。将处方量的普朗尼克F68和牛磺熊去氧胆钠溶于一定量的蒸馏水中，待完全溶解，加入处方量的穿心莲内酯，并加入蒸馏水至处方量，搅拌分散后加入0.4mm氧化锆球磨珠80g，于350rpm转速下，工作10min，间歇4min，运转18个循环，分离上层穿心莲内酯混悬液后，向其中加入处方量的甘露醇，放入冷冻干燥机中进行样品冻干，冷冻干燥工艺为-80℃预冻8h，-25℃抽真空2h，温度上升至-10℃，保持10h，温度上升至0℃，保持8h，温度上升至10℃，保持6h，温度上升至25℃，保持6h。

实施例4穿心莲内酯纳米混悬剂的制备

处方：

制备工艺：

以高压均质法制备穿心莲内酯纳米混悬剂。将处方量的普朗尼克F68溶于一定量的蒸馏水中，待完全溶解，加入过100目的穿心莲内酯原料药2000mg，并加入蒸馏水至处方量，搅拌分散后，将初混悬液进行高压均化，条件为500bar循环10次，1000bar循环20次，向所得混悬液中加入处方量的脱氧胆酸钠以及蔗糖，放入冷冻干燥机中进行样品冻干，冷冻干燥工艺为-80℃预冻8h，-30℃抽真空2h，温度上升至-10℃，保持10h，温度上升至0℃，保持8h，温度上升至20℃，保持8h。

实施例5穿心莲内酯纳米混悬剂的制备

处方：

制备工艺：

以高压均质法制备穿心莲内酯纳米混悬剂。将处方量的聚氧乙烯蓖麻油和牛磺胆酸钠溶于一定量的蒸馏水中，待完全溶解，加入过100目的穿心莲内酯原料药2000mg，并加入蒸馏水至处方量，搅拌分散后，将初混悬液进行高压均化，条件为500bar循环10次，1000bar循环20次，向所得混悬液中加入处方量的甘露醇，放入冷冻干燥机中进行样品冻干，冷冻干燥工艺为-80℃预冻8h，-30℃抽真空2h，温度上升至-10℃，保持10h，温度上升至0℃，保持8h，温度上升至20℃，保持8h。

实施例6穿心莲内酯纳米混悬剂的制备

处方：

制备工艺：

以介质研磨法制备穿心莲内酯纳米混悬剂。将处方量的聚氧乙烯醚(40)蓖麻油于一定的蒸馏水中，待完全溶解，加入处方量的穿心莲内酯，并加入蒸馏水至处方量，搅拌分散后加入0.8mm氧化锆球磨珠100g，于200rpm转速下，工作10min，间歇4min，运转18个循环，分离上层穿心莲内酯混悬液后，向其中加入处方量的牛磺鹅去氧胆钠以及蔗糖，放入冷冻干燥机中进行样品冻干，冷冻干燥工艺为-80℃预冻8h，-25℃抽真空2h，温度上升至-10℃，保持10h，温度上升至0℃，保持8h，温度上升至10℃，保持6h，温度上升至25℃，保持6h。

实施例7穿心莲内酯纳米混悬剂的制备

处方：

制备工艺：

以介质研磨法制备穿心莲内酯纳米混悬剂。将处方量的聚氧乙烯醚(40)蓖麻油和牛磺鹅去氧胆酸钠溶于一定量的蒸馏水中，待完全溶解，加入处方量的穿心莲内酯，并加入蒸馏水至处方量，搅拌分散后加入1mm氧化锆球磨珠100g，于400rpm转速下，工作10min，间歇4min，运转18个循环，分离上层穿心莲内酯混悬液后，向其中加入处方量的蔗糖，放入冷冻干燥机中进行样品冻干，冷冻干燥工艺为-80℃预冻8h，-25℃抽真空2h，温度上升至-10℃，保持10h，温度上升至0℃，保持8h，温度上升至10℃，保持6h，温度上升至25℃，保持6h。

实施例8穿心莲内酯纳米混悬剂的制备

处方：

制备工艺：

以介质研磨法制备穿心莲内酯纳米混悬剂。将处方量的聚氧乙烯蓖麻油和牛磺胆酸钠溶于一定量的蒸馏水中，待完全溶解，加入处方量的穿心莲内酯，并加入蒸馏水至处方量，搅拌分散后加入0.4mm氧化锆球磨珠100g，于300rpm转速下，工作10min，间歇4min，运转18个循环，分离上层穿心莲内酯混悬液后，向其中加入处方量的蔗糖，放入冷冻干燥机中进行样品冻干，冷冻干燥工艺为-80℃预冻8h，-25℃抽真空2h，温度上升至-10℃，保持10h，温度上升至0℃，保持8h，温度上升至10℃，保持6h，温度上升至25℃，保持6h。

实施例9穿心莲内酯纳米混悬剂的制备

处方：

制备工艺：

以高压均质法制备穿心莲内酯纳米混悬剂。将处方量的普郎尼克F127和牛磺胆酸钠溶于一定量的蒸馏水中，待完全溶解，加入过100目的穿心莲内酯原料药1800mg，并加入蒸馏水至处方量，搅拌分散后，将初混悬液进行高压均化，条件为500bar循环10次，1000bar循环10次，向所得混悬液中加入处方量的甘露醇，放入冷冻干燥机中进行样品冻干，冷冻干燥工艺为-80℃预冻8h，-30℃抽真空2h，温度上升至-10℃，保持10h，温度上升至0℃，保持8h，温度上升至20℃，保持8h。

实施例10穿心莲内酯纳米混悬剂的制备

处方：

制备工艺：

以介质研磨法制备穿心莲内酯纳米混悬剂。将处方量的普郎尼克F127和牛磺胆酸钠溶于一定量的蒸馏水中，待完全溶解，加入处方量的穿心莲内酯，并加入蒸馏水至处方量，搅拌分散后加入0.4mm氧化锆球磨珠40g，于350rpm转速下，工作10min，间歇4min，运转18个循环，分离上层穿心莲内酯混悬液后，向其中加入处方量的牛磺熊去氧胆钠以及蔗糖，放入冷冻干燥机中进行样品冻干，冷冻干燥工艺为-80℃预冻8h，-25℃抽真空2h，温度上升至-10℃，保持10h，温度上升至0℃，保持8h，温度上升至10℃，保持6h，温度上升至25℃，保持6h。

实施例11穿心莲内酯纳米混悬剂的制备

处方：

制备工艺：

以介质研磨法制备穿心莲内酯纳米混悬剂。将处方量的F68和F127溶于一定量的蒸馏水中，待完全溶解，加入处方量的穿心莲内酯，并加入蒸馏水至处方量，搅拌分散后加入0.4mm氧化锆球磨珠100g，于400rpm转速下，工作10min，间歇4min，运转18个循环，分离上层穿心莲内酯混悬液后，向其中加入处方量的脱氧胆酸钠、牛磺熊去氧胆钠以及甘露醇，放入冷冻干燥机中进行样品冻干，冷冻干燥工艺为-80℃预冻8h，-25℃抽真空2h，温度上升至-10℃，保持10h，温度上升至0℃，保持8h，温度上升至10℃，保持6h，温度上升至25℃，保持6h。

实施例12穿心莲内酯纳米混悬剂的制备

处方：

制备工艺：

以介质研磨法制备穿心莲内酯纳米混悬剂。将处方量的F108溶于一定量的蒸馏水中，待完全溶解，加入处方量的穿心莲内酯，并加入蒸馏水至处方量，搅拌分散后加入0.4mm氧化锆球磨珠100g，于400rpm转速下，工作10min，间歇4min，运转18个循环，分离上层穿心莲内酯混悬液后，向其中加入处方量的牛磺鹅去氧胆酸钠、牛磺熊去氧胆钠以及甘露醇，放入冷冻干燥机中进行样品冻干，冷冻干燥工艺为-80℃预冻8h，-25℃抽真空2h，温度上升至-10℃，保持10h，温度上升至0℃，保持8h，温度上升至10℃，保持6h，温度上升至25℃，保持6h。

实施例13穿心莲内酯纳米混悬剂的制备

处方：

制备工艺：

以高压均质法制备穿心莲内酯纳米混悬剂。将处方量的普郎尼克F127、牛磺鹅去氧胆酸钠和牛磺熊去氧胆酸钠溶于一定量的蒸馏水中，待完全溶解，加入过100目的穿心莲内酯原料药400mg，并加入蒸馏水至处方量，搅拌分散后，将初混悬液进行高压均化，条件为500bar循环10次，1000bar循环20次，向所得混悬液中加入处方量的蔗糖，放入冷冻干燥机中进行样品冻干，冷冻干燥工艺为-80℃预冻8h，-30℃抽真空2h，温度上升至-10℃，保持10h，温度上升至0℃，保持8h，温度上升至20℃，保持8h

实施例14穿心莲内酯纳米混悬剂的制备

处方：

制备工艺：

以高压均质法制备穿心莲内酯纳米混悬剂。将处方量的氢化大豆卵磷脂和牛磺鹅去氧胆酸钠溶于一定量的蒸馏水中，待完全溶解，加入过100目的穿心莲内酯原料药400mg，并加入蒸馏水至处方量，搅拌分散后，将初混悬液进行高压均化，条件为500bar循环10次，1000bar循环10次，向所得混悬液中加入处方量的蔗糖，放入冷冻干燥机中进行样品冻干，冷冻干燥工艺为-80℃预冻8h，-30℃抽真空2h，温度上升至-10℃，保持10h，温度上升至0℃，保持8h，温度上升至20℃，保持8h

实施例15穿心莲内酯纳米混悬剂的制备

处方：

制备工艺：

以介质研磨法制备穿心莲内酯纳米混悬剂。将处方量的蛋黄卵磷脂溶于一定量的蒸馏水中，待完全溶解，加入处方量的穿心莲内酯，并加入蒸馏水至处方量，搅拌分散后加入0.4mm氧化锆球磨珠100g，于350rpm转速下，工作10min，间歇4min，运转18个循环，分离上层穿心莲内酯混悬液后，向其中加入处方量的脱氧胆酸钠、牛磺熊去氧胆钠以及甘露醇，放入冷冻干燥机中进行样品冻干，冷冻干燥工艺为-80℃预冻8h，-25℃抽真空2h，温度上升至-10℃，保持10h，温度上升至0℃，保持8h，温度上升至10℃，保持6h，温度上升至25℃，保持6h。

实施例16各实施例下制备的穿心莲内酯纳米混悬剂的表征

表2实施例1至实施例15下制备的穿心莲内酯纳米混悬剂的粒径、Zeta电位及载药量

实施例17不加入稀释稳定剂制备的纳米制剂粒径(组方其它成分及其制备方法同实施例1)

表3不同种类稳定剂制备得到的纳米制剂粒径。

注：朗尼克F68、普朗尼克F108、普朗尼克F127、普朗尼克P124、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯醚(40)氢化蓖麻油、聚山梨酯80、聚乙二醇12羟基硬脂酸酯加入量为3％(m/m)，蛋磷脂、大豆卵磷脂和氢化大豆磷脂加入量为0.5％(m/m)，投药量为5mg/mL。

实施例18不加入稳定剂制备的纳米制剂粒径(组方其它成分及其制备方法同实施例1)

表4不同稀释稳定剂对穿心莲内酯纳米混悬剂(以F68为稳定剂)稀释后的稳定作用。

注：各稀释稳定剂加入量均为0.5mg/mL。

实施例19穿心莲内酯的测定方法

含量测定：高效液相色谱仪(大连依利特)；UVⅡ紫外可变波长检测器(大连依利特)；流动相：甲醇—无水乙醇(60:40，v/v)；柱温：35℃；流速：1.0ml/min；检测波长：225nm；进样量：20uL。

实施例20穿心莲内酯纳米混悬剂(组方其它成分及其制备方法同实施例4)大鼠药动试验

9只Wistar雄性大鼠随机分成3组，每组给予不同剂量药物：5mg/kg，20mg/kg和40mg/kg。实验动物均于给药前禁食过夜，按上述剂量尾静脉注射，分别在给药后1min、5min、15min、30min、1h、2h、4h、8h经眼眶静脉丛取血0.5mL于肝素化EP管中，取完最后时间点血样后将大鼠脱颈处死，取出心、肝、脾、肺、肾，生理盐水洗去残留血液后以滤纸吸干水分。以苯甲酸丙酯为内标，采用HPLC法测定血浆以及各脏器中的药物浓度。色谱条件参照实施例19。

实施例21血浆样品的处理方法

精密移取血液样品200μL于1.5ml离心管中，加入内标(苯甲酸丙酯甲醇溶液，0.1mg/mL)50μL，甲醇200uL及丙酮800μL，涡旋15min提取后于10,000rpm离心10min，移取丙酮层600μL，室温氮气挥干，挥干的药物以流动相200μL复溶，涡旋5min，于10,000rpm离心10min，精密移取上清液20uL进样分析。

实施例22组织样品的处理方法

取0.5g组织于10mL玻璃探头管中，加入1mL生理盐水高速分散匀浆。精密移取组织匀浆液200μL，加入内标(苯甲酸丙酯甲醇溶液，0.1mg/mL)50μL，甲醇200uL及丙酮800μL，涡旋15min提取后于10,000rpm离心10min，移取丙酮层600μL，室温氮气挥干，挥干的药物以流动相200μL复溶，涡旋5min，于10,000rpm离心10min，精密移取上清液20uL进样分析。

实施例23测得受试制剂的平均血药浓度如图5所示。各纳米粒由于受到单核吞噬系统的快速摄取，10min内药物浓度便降至1μg/mL以下。

实施例24测得受试制剂各组织中的药物浓度如图6所示。穿心莲内酯纳米混悬剂被单核吞噬系统吞噬，主要聚集于肝脏、脾脏和肺，在这些脏器的浓度远远高于血浆中的药物浓度，达到被动靶向的作用。

实施例25

称取1.0g按具体实施方式4方法制备的穿心莲内酯纳米混悬剂冻干粉，加入0.5g淀粉，过筛混匀，灌胶囊，得胶囊剂。

Claims (11)

1.穿心莲内酯纳米混悬剂组合物，其特性在于，包含以下组分与质量百分比

穿心莲内酯0.05%-5%

稳定剂0.5%-5%

稀释稳定剂0.005%-1%

添加水至100%；

所述的稳定剂选自普朗尼克F68、普朗尼克F87、普朗尼克F108、普朗尼克F127、普朗尼克P124；聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯醚（35）氢化蓖麻油、聚氧乙烯醚（40）氢化蓖麻油；天然磷脂：大豆卵磷脂、蛋磷脂；合成磷脂：氢化大豆磷脂、二油酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、二亚油酰磷脂酰胆碱、二亚油酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二月桂酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000等；聚山梨酯80、聚乙二醇12羟基硬脂酸酯；所述的稀释稳定剂选自胆酸及其钠盐、脱氧胆酸及其钠盐、去氢胆酸及其钠盐、牛磺胆酸及其钠盐、牛磺熊去氧胆酸及其钠盐、牛磺鹅去氧胆酸及其钠盐等胆酸盐。

2.如权利要求1所述的穿心莲内酯纳米混悬剂组合物，其特性在于，所述的稳定剂为：普朗尼克F68、普郎尼克108、普朗尼克F127、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯醚（40）氢化蓖麻油、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、聚乙二醇12羟基硬脂酸酯中的一种或其任意混合物；优选用量为：普朗尼克F68、普朗尼克F108及普朗尼克F127为0.5%-5%；聚氧乙烯蓖麻油和聚氧乙烯醚（40）氢化蓖麻油为0.5%-5%；大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂及氢化蛋黄卵磷脂为0.5%-2%；聚乙二醇12羟基硬脂酸酯为2%-5%。

3.如权利要求1所述的穿心莲内酯纳米混悬剂组合物，其特性在于，所述的稀释稳定剂为：胆酸钠、脱氧胆酸钠、去氢胆酸钠、牛磺胆酸钠、牛磺熊去氧胆酸钠、牛磺鹅去氧胆酸钠等胆酸盐中的一种或任意混合物；优选用量为：脱氧胆酸钠为0.005%-0.5%，牛磺胆酸钠为0.01%-1%，牛磺熊去氧胆酸钠为0.01%-1%，牛磺鹅去氧胆酸钠为0.005%-0.5%。

4.一种如权利要求1-3任何一项所述的穿心莲内酯纳米混悬剂组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将稳定剂溶于水，完全溶解后依次加入药物及球磨介质（氧化锆球磨珠）；

2）转移至球磨机，以200-400rmp工作10min，暂停2-5min，12-18次循环；

3）分离球磨介质，得到乳白色纳米混悬液，向其中加入稀释稳定剂，搅拌或涡旋使所加物质溶解；

4）分装得稳定的纳米混悬剂。

5.一种如权利要求1-3任何一项所述的穿心莲内酯纳米混悬剂组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将稳定剂溶于水，完全溶解后加入过100目的穿心莲内酯，

2）转移至高压均质机，500bar循环5-10次，1000bar循环10-20次，得乳白色纳米混悬液，

3）向上述纳米混悬液中加入稀释稳定剂，搅拌或涡旋使所加物质溶解，

4）分装得稳定的纳米混悬剂。

6.根据权利要求4或5所述的穿心莲内酯纳米混悬剂组合物，其特征在于，所述的制备方法包括介质研磨法、高压均质法和沉淀-高压均质法。

7.根据权利要求4或5所述的穿心莲内酯纳米混悬剂组合物，其特征在于，稀释稳定剂可以研磨或高压均质前加入，亦可以研磨或高压均质后加入。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，研磨球粒径为0.2-1mm，投放量为球磨介质/水=2/1－4/1。

9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，球磨机工作参数为200-400rmp，运转10min，暂停2-5min，12-18次循环。

10.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，高压均质参数为500bar循环5-10次，1000bar循环10-20次。

11.如权利要求1-3任何一项所述的穿心莲内酯纳米混悬剂组合物，其特征在于，所述的穿心莲内酯纳米混悬剂组合物加入适当的冻干保护剂，冷冻干燥。