CN100579523C - 注射用二氢青蒿素乳剂、冻干乳剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种注射用二氢青蒿素乳剂，以乳剂总体积计，由下列重量/体积百分比的原料组成的混合物经调节pH值后制成：二氢青蒿素0.05～0.3%，注射用油5～30%，乳化剂0.5～10%，稳定剂0.1～3%，等渗调节剂0.5～5%，余量为注射用水；其稳定剂由胆酸钠、脱氧胆酸钠、油酸、油酸钠、胆固醇中的一种或多种和硬脂酸甘油酯组成。可在乳剂中加入冻干保护剂后冷冻干燥制成冻干乳剂。本发明还公开了上述乳剂及其冻干乳剂的制备方法。本发明制备的注射用二氢青蒿素乳剂使二氢青蒿素稳定的存在于乳剂的油相中，制剂长期稳定性好，疗效好，生物利用度高，符合静脉注射标准；冻干乳剂便于携带、储存并进一步增加药物的稳定性。

Description

注射用二氢青蒿素乳剂、冻干乳剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，具体涉及注射用二氢青蒿素乳剂、冻干乳剂及其制备方法。

背景技术

19世纪60年代，疟原虫对长期使用的氯喹等抗疟药产生抗药性，并在全世界迅速蔓延，寻找可以治疗抗药性疟疾的药物成为当时急需解决的医疗难题。1972年我国科研人员从中药黄花蒿中分离得到抗疟有效单体，命名为青蒿素(artemisinin)。青蒿素为新型倍半萜内酯类化合物，分子中具有独特的过氧桥结构，用于治疗疟疾，具有起效快、抗疟效果好和毒性低的特点，尤为突出的是它可杀灭氯喹耐药性的疟原虫，对有抗药性的脑型疟有特效，从而逐渐发展成为第一线的抗疟药，是经WTO批准的在世界范围内治疗脑型疟疾和恶性疟疾的首选药物。

青蒿素在水和油中溶解度极小，口服给药时在胃肠道内药物易分解失活，生物利用度低。科研人员对青蒿素进行结构改造，得到了性质更好的青蒿素衍生物。目前，青蒿素类衍生物主要有二氢青蒿素(dihydroartemisinin，DHA)、蒿甲醚、蒿乙醚及青蒿琥酯等，这类药物的问世，为抗疟药的发展书写了新的一页。现今，以青蒿素为基础的联合用药已作为最有效的疟疾治疗方法，并存在着巨大需求。目前，青蒿素类药物仍然是以抗疟药应用，国内外临床使用的有蒿甲醚注射剂、片剂和胶囊，青蒿琥酯针剂、片剂和栓剂，双氢青蒿素片剂、栓剂、混悬剂和干混悬剂等。

近些年研究发现，青蒿素类药物不仅具有良好的抗疟作用，在抗肿瘤、抗寄生虫病等方面也具有良好的药理活性。体内体外实验证实，青蒿素类药物对多种人类和动物肿瘤细胞均具有毒性作用，但治疗浓度的青蒿素及其衍生物对于正常细胞几乎无作用，这可以降低癌症患者治疗时药物对机体的损伤作用，增加癌症患者的治愈率并利于病人的术后恢复工作。青蒿素类药物在抗肿瘤等方面的神奇作用，使得其成为目前药学研究开发的热点。

研究表明，二氢青蒿素是青蒿素类药物在体内的最终活性物质，所有青蒿素类药物均在体内代谢成二氢青蒿素而发挥作用，因此开发出以二氢青蒿素为原料药的制剂更具有临床意义。二氢青蒿素不溶于水，分子中存在过氧桥结构，稳定性差，在胃肠道易被分解失活，首过效应严重，将其制成可静脉注射的亚微乳制剂，药物直接进入人体血液循环，起效迅速，避免了药物的首过效应，提高了二氢青蒿素的生物利用度，更好的发挥了药物疗效。同时药物可被动聚集于富含吞噬细胞的肝、脾、淋巴系统等部位，实现靶向给药，药物从乳剂的内油相释放，具有一定的缓释作用，制备得到的乳滴粒径较小，不易被网状皮质系统摄取，可延长其在血液循环中的时间。

公开号为CN1771909A的中国专利申请公开了一种青蒿素脂肪乳剂及其制备方法与应用，采用聚乙二醇(PEG)、聚维酮、羟丙基-β-环糊精或者其混合物作为增溶剂制备静脉注射乳剂。采用此类增溶剂制备的乳剂中有一部分药物会通过增溶作用分散在水相中而不是包封于油相中，同时该乳剂在静脉注射给药时存在某些问题，PEG一般不作为静脉注射给药制剂的增溶剂；聚维酮静脉注射时能妨碍凝血的过程，存在不安全隐患，不宜用于注射剂中；羟丙基-β-环糊精静脉注射时可能会引起溶血现象的发生，同时具有肾毒性，还有文献报道其有致癌性，到目前为止我们对羟丙基-β-环糊精的安全性了解并不深入，因而其使用宜慎重。此外，实施例中药物最高载药量可达4.6mg/ml，但进行体内抗肿瘤实验时仅采用0.1mg/ml的制剂，其原因不明。按文中所述浓度给药，小鼠每次注射体积为3～6ml，超出了常规小鼠的耐受范围。青蒿素类药物对热不稳定，超过60℃药物即易分解失活，进行静脉注射给药其灭菌方式需进行考虑。

发明内容

本发明提供了一种注射用二氢青蒿素乳剂和注射用二氢青蒿素冻干乳剂，采用在乳剂中添加注射用适宜稳定剂的方法来增加难溶性药物的载药量，制备得到的乳剂部分药物形成纳米粒存在于内油相中，构成水包油包纳米粒(N/O/W)亚微乳制剂，可用于治疗疟疾和抗肿瘤。

本发明还提供了所述注射用二氢青蒿素乳剂及其冻干乳剂的制备方法，以青蒿素类药物在体内的最终活性成分二氢青蒿素为原料药，制备出疗效好，生物利用度高的青蒿素类制剂。本发明制备的亚微乳制剂使二氢青蒿素稳定的存在于乳剂的油相中，制剂长期稳定性好，放置乳剂不分层、药物不析出，符合静脉注射标准；同时可在乳剂中加入冻干保护剂后冷冻干燥制成冻干乳剂，便于携带、储存，并进一步增加药物的稳定性。

一种注射用二氢青蒿素乳剂，以乳剂总体积计，由下列重量/体积(g/ml)百分比的原料药和药用辅料组成的混合物，经pH调节剂调节pH值后制成：

二氢青蒿素      0.05～0.3％

注射用油        5～30％

乳化剂          0.5～10％

稳定剂          0.1～3％

等渗调节剂      0.5～5％

注射用水        余量。

所述的注射用二氢青蒿素乳剂中加入冻干保护剂，经冷冻干燥后制成注射用二氢青蒿素冻干乳剂，冻干保护剂的加入量为乳剂制备冻干乳剂所需的常规用量。所制得的冻干乳剂提高了二氢青蒿素的稳定性，加入注射用水后，通过轻轻振荡即可迅速复原成乳剂，复溶后制剂符合肌肉注射或静脉注射给药要求。

所述的注射用油为大豆油、麻油、玉米油、花生油、茶油、棉籽油、橄榄油、椰子油、蓖麻油、红花油等植物油中的一种或多种的混合物，该类注射用植物油为注射剂常用的植物油。在药剂学中，一些水不溶性的药物或要求在体内缓慢释放而呈现长效作用的药物可选用植物油作为溶剂制成注射剂，常用的植物油有麻油、茶油、花生油、玉米油等。

所述的乳化剂由大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂中的一种与普朗尼克188(F68)组成，其中普朗尼克188为聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物。

所述的稳定剂由胆酸钠、脱氧胆酸钠、油酸、油酸钠、胆固醇中的一种或多种的混合物和硬脂酸甘油酯组成，所述的硬脂酸甘油酯为单硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯中的一种或多种的混合物。稳定剂具有稳定油水界面膜、增加油相黏度、抑制药物集聚的作用，其原理是利用某些可注射用辅料的相变性质，此类辅料具有适宜的熔点，在高于其熔点的温度下可熔化成为液态，而在较低的温度下(如37℃或者室温)为固态，该辅料与油热溶混合均匀后，冷至室温可为半固体状物质。制备乳剂时保持在高于稳定剂熔点的温度下将药物、乳化剂、稳定剂和注射用油等混合均匀，注入水相制备成乳剂，经高压均质机分散后制成粒径范围符合要求的亚微乳制剂，此时部分药物和辅料在油相中结合在一起形成纳米粒结构，制备得到的水包油包纳米粒(N/O/W)亚微乳制剂可以提高载药量，进一步增加乳剂缓释作用。

所述的等渗调节剂为甘油、木糖醇或葡萄糖中的一种或多种的混合物。

所述的pH调节剂为盐酸、氢氧化钠、醋酸钠、醋酸、磷酸盐、柠檬酸中的一种或多种的混合物，为注射剂中常用的pH调节剂。

所述的冻干保护剂为葡萄糖、蔗糖、乳糖、海藻糖、右旋糖苷、甘露醇、山梨醇、木糖醇中的一种或几种的混合物。

注射用二氢青蒿素乳剂及其冻干乳剂的制备方法包括如下步骤：

(1)取二氢青蒿素、乳化剂大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂、稳定剂I于室温下以适量乙醇溶解，减压蒸干除去乙醇，加入注射用油和稳定剂II，于35～80℃混合均匀形成油相A；

(2)将适量注射用水、等渗调节剂、乳化剂普朗尼克188于室温下混合，搅拌溶解形成水相B；

(3)将油相A与水相B于35～80℃下混合，同温度下高速分散后机械搅拌5～30分钟制成初乳，用注射用水定容，调节pH值至6～7.5后，再进行高压均质，将均质好的乳液过0.22μm微孔滤膜，灌装通氮、密封、灭菌，即制成注射用二氢青蒿素乳剂；也可将均质好的乳液中加入冻干保护剂，过0.22μm微孔滤膜，分装后进行冷冻干燥，充氮、封口、灭菌，制成注射用二氢青蒿素冻干乳剂；冻干保护剂与乳剂中油相A的重量比为0.5～5。

所述的稳定剂I为胆酸钠、脱氧胆酸钠、油酸、油酸钠、胆固醇中的一种或多种的混合物；所述的稳定剂II为单硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯中的一种或多种的混合物。

本发明制备的乳剂，通过在油相中分两次加入稳定剂，使得二氢青蒿素稳定的存在于乳剂的油相中，相对于通过羟丙基-β-环糊精或聚乙二醇增加药物溶解度制成的乳剂，更能体现出缓释长效的目的，制剂长期稳定性好，放置乳剂不分层、药物不析出，符合静脉注射标准；同时可以通过冻干法制成冻干乳剂，避免了乳剂长期放置可能出现的分层、絮凝现象，以及二氢青蒿素由于性质不稳定以溶液状态保存过程中可能出现的分解失活。

附图说明

图1为实施例2制备的注射用二氢青蒿素乳剂冷冻蚀刻透射电镜照片；

图2为实施例2制备的注射用二氢青蒿素乳剂粒径分布图。

具体实施方式

实施例1：

取0.05g二氢青蒿素与0.25g大豆卵磷脂、0.10g油酸在室温下以适量乙醇溶解混合均匀，减压蒸干除去乙醇，加入5g注射用大豆油、0.05g单硬脂酸甘油酯在40℃下混合均匀形成油相A；取80ml注射用水，向其中加入2.2g甘油，0.25g F68室温下搅拌溶解形成水相B；将上述油相A在40℃下与水相B混合，同温度下经高速均质机搅拌5分钟制成初乳，加注射用水至终体积至100ml，调节pH值至6～7.5；将制得的初乳移入微射流高压均质机，调节匀化压力至5000psi处理2个循环，再调节匀化压力至15000psi匀化处理8个循环制得乳液，将乳液过0.22μm微孔滤膜后灌装，通氮、密封、灭菌，即制成0.5mg/ml的注射用二氢青蒿素乳剂。

实施例2：

取0.20g二氢青蒿素与1.2g大豆卵磷脂、0.18g油酸在室温下以适量乙醇溶解混合均匀，减压蒸干除去乙醇，加入10g注射用大豆油、0.10g单硬脂酸甘油酯在55℃下混合均匀形成油相A；取80ml注射用水，向其中加入2.2g甘油，1.2g F68在室温下搅拌溶解形成水相B；将上述油相A在55℃下与水相B混合，同温度下经高速均质机搅拌10分钟制成初乳，加注射用水至终体积至100ml，调节pH值至6～7.5；将制得的初乳移入微射流高压均质机，调节匀化压力至5000psi处理4个循环，再调节匀化压力至15000psi匀化处理8个循环制得乳液，将乳液过0.22μm微孔滤膜后灌装，通氮、密封、灭菌，即制成2.0mg/ml的注射用二氢青蒿素乳剂。

实施例3：

取0.25g二氢青蒿素与1.8g大豆卵磷脂、0.8g胆固醇室温下以适量乙醇溶解混合均匀，减压蒸干除去乙醇，加入10g注射用大豆油、0.10g单硬脂酸甘油酯在80℃下混合均匀形成油相A；取80ml注射用水，向其中加入2.2g甘油，1.8g F68在室温下搅拌溶解形成水相B；将上述油相A在80℃下与水相B混合，同温度下经高速均质机搅拌5分钟制成初乳，加注射用水至终体积至100ml，调节pH值至6～7.5；将制得的初乳移入微射流高压均质机，调节匀化压力至5000psi处理4个循环，再调节匀化压力至15000psi匀化处理8个循环制得乳液，将乳液过0.22μm微孔滤膜后灌装，通氮、密封、灭菌，即制成2.5mg/ml的注射用二氢青蒿素乳剂。

实施例4：

取0.3g二氢青蒿素与2g大豆卵磷脂、1g胆固醇室温下以适量乙醇溶解混合均匀，减压蒸干除去乙醇，加入15g注射用大豆油、0.3g三硬脂酸甘油酯在70℃下混合均匀形成油相A；取80ml注射用水，向其中加入2.2g甘油，2g F68在室温下搅拌溶解形成水相B；将上述油相A在70℃下与水相B混合，同温度下经高速均质机搅拌10分钟制成初乳，加注射用水至终体积至100ml，调节pH值至6～7.5；将制得的初乳移入微射流高压均质机，调节匀化压力至5000psi处理2个循环，再调节匀化压力至15000psi匀化处理8个循环制得乳液，将乳液过0.22μm微孔滤膜后灌装，通氮、密封、灭菌，即制成3.0mg/ml的注射用二氢青蒿素乳剂。将制得乳液中加入15g葡萄糖混合均匀，过0.22μm微孔滤膜后分装，经冷冻干燥去除水分，充氮、封口、灭菌，即制成注射用二氢青蒿素冻干乳剂。

实施例5：

取0.3g二氢青蒿素与1.8g大豆卵磷脂、0.8g胆固醇、0.12g油酸室温下以适量乙醇溶解混合均匀，减压蒸干除去乙醇，加入20g注射用大豆油、0.3g三硬脂酸甘油酯在60℃下混合均匀形成油相A；取注射用水80ml，向其中加入2.2g甘油，1.8g F68在室温下搅拌溶解形成水相B；将上述油相A在60℃下与水相B混合，经高速均质机搅拌10分钟制成初乳，加注射用水至终体积至100ml，调节pH值至6～7.5；将制得的初乳移入微射流高压均质机，调节匀化压力至5000psi处理2个循环，再调节匀化压力至15000psi匀化处理8个循环制得乳液，将乳液过0.22μm微孔滤膜后灌装，通氮、密封、灭菌，即制成3.0mg/ml的注射用二氢青蒿素乳剂。将制得乳液中加入15g葡萄糖混合均匀，过0.22μm微孔滤膜后分装，经冷冻干燥去除水分，充氮、封口、灭菌，即制成注射用二氢青蒿素冻干乳剂。

实施例6：

取0.2g二氢青蒿素同实施例2法制得乳液，加入10g葡萄糖混合均匀，过0.22μm微孔滤膜后分装，经冷冻干燥去除水分，充氮、封口、灭菌，即制成8.5mg/g的注射用二氢青蒿素冻干乳剂。

实施例7：

取0.3g二氢青蒿素同实施例2法制得乳液，加入15g葡萄糖混合均匀，过0.22μm微孔滤膜后分装，经冷冻干燥去除水分，充氮、封口、灭菌，即制成10.5mg/g的注射用二氢青蒿素冻干乳剂。

实施例8：

取0.5g二氢青蒿素同实施例4法制得乳液，加入15g葡萄糖和蔗糖混合物(葡萄糖与蔗糖的重量比为1∶1)，混合均匀，过0.22μm微孔滤膜后分装，经冷冻干燥去除水分，充氮、封口、灭菌，即制成13.3mg/g的注射用二氢青蒿素冻干乳剂。

一、二氢青蒿素含量测定方法

HPLC色谱条件

流动相：乙腈∶0.1％冰醋酸(60∶40)(v/v)；

色谱柱：Diamonsil^TM C18(4.6mm×150mm，5μm)；

检测波长：210nm；

流速：1.0mL·min^-1；

柱温：40℃；

进样量：20μL。

精取二氢青蒿素冻干乳剂1g用乙醇稀释至10mL，旋涡振荡3min，超声15min，样品用0.45μm微孔滤膜过滤后，HPLC测定冻干乳剂中二氢青蒿素含量。

二、对本发明制备的注射用二氢青蒿素乳剂进行理化性质研究，结果如下：

1、外观形态检测

取实施例2制备的注射用二氢青蒿素乳剂进行外观形态观察，该乳剂外观为乳白色液体，无油花，不挂壁，用水稀释后有淡蓝色乳光出现。

采用冷冻蚀刻透射电镜观察实施例2制备的水包油包纳米粒(N/O/W)亚微乳制剂乳滴的内部形态。图1为亚微乳制剂的冷冻蚀刻透射电镜照片，图中A为对照用普通亚微乳制剂的冷冻蚀刻透射电镜照片，B为水包油包纳米粒(N/O/W)亚微乳制剂的冷冻蚀刻透射电镜照片。如图所示，两种亚微乳制剂乳滴均呈类椭圆状，边缘光滑。观察二者的断面层我们可以发现，普通乳剂断层平整、光滑，而水包油包纳米粒(N/O/W)亚微乳制剂断面层粗糙，有类似壳状的结构，结合实验中采用辅料的理化性质，推测这就是药物和辅料结合形成的纳米粒结构。

取实施例6制备的注射用二氢青蒿素冻干乳剂进行外观形态观察，该制剂性状为类白色膨松团块状，表面平整无皱陷，加入注射用水后迅速复溶，复溶时间小于1分钟，通过轻轻振荡即可复原成乳剂。

2、粒径及分布测定

采用达尔文纳米粒径测定仪对实施例2制备的注射用二氢青蒿素乳剂进行粒径测试，粒径分布结果如图2所示：亚微乳粒径在175nm左右，多分散相系数(PDI)为0.153，符合静脉注射要求。

采用达尔文纳米粒径测定仪测定二氢青蒿素冻干乳剂冻干前、复溶后粒径，结果如表1所示。

表1二氢青蒿素冻干乳剂冻干前、复溶后粒径变化情况

粒径(nm)	实施例4	实施例5	实施例6	实施例7
					冻干前	175	168	193	189
复溶后	202	327	233	229

三、对本发明制备的注射用二氢青蒿素乳剂及其冻干乳制剂进行稳定性试验，结果如下：

取实施例2制备的注射用二氢青蒿素乳剂，置于具塞离心管中，在4000rpm的转速下离心15min后，未发现分层，也未见药物沉淀析出。

将二氢青蒿素乳剂和二氢青蒿素水溶液分别置于强光、4℃、25℃、40℃、60℃等条件下，于第5天和第10天测定二氢青蒿素含量。结果见表2，可见二氢青蒿素乳剂(亚微乳)比二氢青蒿素水溶液的稳定性有很大提高，由于二氢青蒿素本身理化性质的限制，二氢青蒿素乳剂应置于6±2℃下充氮密闭避光保存。

表2二氢青蒿素亚微乳制剂与水溶液稳定性考察结果

^*表中符号“-”代表该条件下，已经检测不到药物

取实施例6制备的二氢青蒿素冻干乳剂，加入注射用水后复溶，置于具塞离心管中，在4000rpm的转速下离心15min后，未发现分层，也未见药物沉淀析出，在25℃，湿度60％条件下进行加速试验，对冻干乳剂外观、复溶时间、复溶粒径、Zeta电位等理化性质以及二氢青蒿素含量进行监测，结果显示三个月过程中各项指标未发生显著变化，二氢青蒿素含量几乎不变，表明将二氢青蒿素制成冻干乳剂，稳定性大大提高。

四、二氢青蒿素乳剂小鼠体内药动学研究

取昆明种小鼠(SPF级)60只，雌雄各半，随机分为二氢青蒿素溶液组、二氢青蒿素乳剂组两组，每组按36mg/kg单剂量尾静脉注射亚微乳和对照溶液后，分别于2，5，10，15，20，30，45，60，90和120min从每组中各取1只小鼠，每个时间点平行3只小鼠，眼眶取血约0.5mL至预先加入肝素抗的离心管中，样品加入乙酸乙酯处理后用HPLC测定二氢青蒿素含量，HPLC分析条件为色谱柱：Diamonsil^TM C₁₈(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：甲醇∶0.1％冰醋酸(60∶40)(v/v)；流速：0.3mL·min^-1；进样量：10μL；柱温：(30±2)℃。得到的血药浓度数据用kinetica软件进行处理，得其药动学参数。如表3所示。

表3药动学参数计算结果

参数	单位	溶液组α-DHA	乳剂α-DHA
				A	ng·mL<sup>-1</sup>	320749±81082.7	5424.76±1371.33
α	min<sup>-1</sup>	4.114±0.003	0.1601±0.0031
				B	ng·mL<sup>-1</sup>	3202.28±390.75	145.09±390.75
β	min<sup>-1</sup>	0.1276±0.0371	0.0108±0.0371
				Vc	L	0.0153±0.0037	0.08905±0.0037
t<sub>1/2α</sub>	min	1.68±0.01	4.33±0.13
				t<sub>1/2β</sub>	min	5.43±1.58	64.42±1.58
K<sub>21</sub>	min<sup>-1</sup>	0.17±0.02	0.0146±0.018
				K<sub>10</sub>	min<sup>-1</sup>	3.14±1.24	0.1176±0.046
K<sub>12</sub>	min<sup>-1</sup>	0.93±0.0032	0.0386±0.0013
				AUC	min·ng·mL<sup>-1</sup>	10306±16530.3	47373.08±7598.7
Cl	mL·min<sup>-1</sup>	0.0048±0.001	0.01047±0.0016
				MRT	min	2.09±0.63	30.93±9.34

表中的A、B分别为分布相与消除相常数，α为分布速率常数，β为消除速率常数，Vc为中央室表观分布容积，t_1/2α为分布相半衰期，t_1/2β为消除相半衰期，K₂₁为周边室向中央室转运的速率常数，K₁₀为中央室消除速率常数，K₁₂为中央室向周边室转运的速率常数，AUC为血药浓度时间曲线下面积，Cl为清除率，MRT为平均滞留时间。

小鼠体内药动学研究结果显示，与溶液组比较，二氢青蒿素乳剂(亚微乳)可延长二氢青蒿素的血液循环时间，有较大的表观分布容积，消除半衰期增加，平均滞留时间延长。

五、二氢青蒿素乳剂药效学研究

取体重18～22g的昆明种小鼠40只，随机分成4组，雌雄各半。抽取接种7天的H₂₂瘤株小鼠淡黄色腹水，以无菌生理盐水稀释，调整细胞浓度至1×10⁷/ml。每只鼠于右腋皮下接种0.2ml H₂₂细胞悬液。建立荷瘤小鼠动物模型。接种第二天开始，每天早8:00尾静脉注射给药，实验组给予不同浓度二氢青蒿素乳剂，高剂量组45mg/kg，低剂量组11.25mg/kg，另设立二氢青蒿素溶液组(11.25mg/kg)观察，每日给药一次，连续给药10天。末次给药24小时，称量体重，脱颈椎处死，剥取皮下接种的实体瘤体组织，冲洗干净，滤纸吸干，称重。计算各组平均瘤重。实体瘤的疗效评价以瘤重抑制百分率表示：将给药组的平均瘤重与对照组的平均瘤重按下列公式计算抑瘤率，做统计学处理。抑瘤率(％)＝(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％。二氢青蒿素乳剂对小鼠移植性肿瘤H₂₂的抑制作用如表4所示：

表4二氢青蒿素乳剂对小鼠移植性肿瘤H₂₂的抑制作用结果

组别	剂量(mg/kg)	动物数(始/末)	死亡数	瘤重(g±sd)	抑瘤率(％)
						生理盐水组	-	10/10	0	1.38±0.37	-
溶液组	11.25	10/10	0	1.08±0.27	21.47
						乳剂组1	11.25	10/10	0	1.06±0.15	22.99
乳剂组2	45.00	10/10	0	0.66±0.19	51.75

实验中肉眼可见小鼠右侧腋窝有明显包块，右上肢行动困难。给药期间各组没有荷瘤小鼠死亡，进食、饮水正常；溶液组小鼠在给药后出现毛发竖起，走路不平衡等症状，一般在30分钟内症状消失。这可能是由于溶液组中存在一定浓度的乙醇和聚乙二醇氢化蓖麻油(Cremorphor EL)影响所致，各组动物均未发现其他异常。结果显示，同剂量的溶液组与乳剂组对小鼠移植性肿瘤H₂₂的抑制作用结果相近，乳剂组1略优于溶液组，高剂量乳剂组2可有效抑制H₂₂肿瘤的生长。

Claims (6)

1、一种注射用二氢青蒿素乳剂，以乳剂总体积计，由下列重量/体积(g/ml)百分比的原料药和药用辅料组成的混合物，经pH调节剂调节pH值后制成：

二氢青蒿素    0.05～0.3％

注射用油      5～30％

乳化剂        0.5～10％

稳定剂        0.1～3％

等渗调节剂    0.5～5％

注射用水      余量；

所述的稳定剂由胆酸钠、脱氧胆酸钠、油酸、油酸钠、胆固醇中的一种或多种的混合物和硬脂酸甘油酯组成；

所述的乳化剂由大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂中的一种与普朗尼克F68组成；

所述的注射用油为大豆油、麻油、玉米油、花生油、茶油、棉籽油、橄榄油、椰子油、蓖麻油和红花油中的一种；

所述的注射用二氢青蒿素乳剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)将二氢青蒿素、乳化剂大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂、稳定剂I于室温下以适量乙醇溶解，减压蒸干除去乙醇，加入注射用油和稳定剂II，于35～80℃混合均匀形成油相A；

(2)将适量注射用水、等渗调节剂、乳化剂普朗尼克F68于室温下混合，搅拌溶解形成水相B；

(3)将油相A与水相B于35～80℃下混合，同温度下高速分散后机械搅拌5～30分钟制成初乳，用注射用水定容，调节pH值至6～7.5后，再进行高压均质，将均质好的乳液过0.22μm微孔滤膜，灌装通氮、密封、灭菌，即制成注射用二氢青蒿素乳剂；

所述的稳定剂I为胆酸钠、脱氧胆酸钠、油酸、油酸钠、胆固醇中的一种或多种的混合物；所述的稳定剂II为硬脂酸甘油酯。

2、如权利要求1所述的注射用二氢青蒿素乳剂，其特征在于：所述的硬脂酸甘油酯为单硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯中的一种或多种的混合物。

3、如权利要求1所述的注射用二氢青蒿素乳剂，其特征在于：所述的等渗调节剂为甘油、木糖醇或葡萄糖中的一种或多种的混合物。

4、如权利要求1所述的注射用二氢青蒿素乳剂，其特征在于：所述的pH调节剂为盐酸、氢氧化钠、醋酸钠、醋酸、磷酸盐、柠檬酸中的一种。

5、如权利要求1所述的注射用二氢青蒿素乳剂，其特征在于：所述步骤(3)中均质好的乳液中加入冻干保护剂，过0.22μm微孔滤膜，分装后进行冷冻干燥，充氮、封口、灭菌，即制成注射用二氢青蒿素冻干乳剂；冻干保护剂与乳剂中油相A的重量比为0.5～5。

6、如权利要求5所述的注射用二氢青蒿素乳剂，其特征在于：所述的冻干保护剂为葡萄糖、蔗糖、乳糖、海藻糖、右旋糖苷、甘露醇、山梨醇、木糖醇中的一种或多种的混合物。

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