CN102895186A - 注射用青蒿琥酯脂肪乳的制备及其在疟疾治疗中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种青蒿琥酯脂肪乳注射制剂，含有0.01~30wt%的青蒿琥酯，10.0~30.0wt%的注射用油，0.6~30.0wt%的乳化剂，0~10wt%的增溶剂，0~5wt%的助乳化剂，2.25~7wt%的等渗剂，0.002~0.075wt%的抗氧化剂，其余为注射用水。还公开了上述青蒿琥酯脂肪乳注射制剂的制备方法、药效学及安全性评价。本发明青蒿琥酯脂肪乳具有生物相容性好、物理稳定性高、便于制备、安全性好、载药量高等特色，粒径小于200μm，非常适合于注射，如静脉注射、肌肉注射。同时可以利用大豆油脂肪乳抑制镰状疟原虫、恶性疟原虫生长的特性，增强药物的抗疟效果，提高它们的生物利用度并降低毒副作用。还能为疟疾患者提供身体所需的营养，改善患者的淋巴细胞活性，有助于患者抵抗疟疾和康复。

Description

注射用青蒿琥酯脂肪乳的制备及其在疟疾治疗中的应用

技术领域

本发明属于药学领域，涉及一种脂肪乳注射剂，特别涉及一种青蒿琥酯脂肪乳注射剂。 

背景技术

青蒿素是我国学者在20世纪70年代初从青蒿中分离提纯出的一种有效的抗疟单体，它是含有过氧桥结构的新型倍半萜内酯化合物，具有快速、高效、无抗药性、低毒性的特点，被世界卫生组织称为“治疗疟疾的最大希望”，可视为我国药学工作者对人类社会的最大贡献。它的发现成为世界抗疟史继奎宁之后又一个重要的里程。但研究表明，长期单独服用青蒿素制剂易使病原虫产生抗药性，并且青蒿素水溶性，生物利用度低，所以目前临床常使用青蒿素的衍生物青蒿琥酯。 

青蒿琥酯（Artesunate），化学名为二氢青蒿素-1,2-α-琥珀酸单酯，呈无色结晶或白色结晶粉末，无臭，几乎无味。微溶于水，易溶于乙醇、丙酮、氯仿。青蒿琥酯作为一种有效的抗疟药，对间日疟、恶性疟、脑型疟均有效。但是传统的青蒿琥酯片剂不能克服肝脏的首过效应，而且，市售的青蒿琥酯粉针剂在临床肌注时需先用5%碳酸氢钠注射液溶解，再用5%葡萄糖注射液或葡萄糖氯化钠注射液稀释，使用过程复杂、需要现用现配、放置不稳定、必须缓慢静注且体感疼痛。此外，由于青蒿琥酯在水中溶解性差，难以有效地被输送至病变部位及细胞内，另外，青蒿琥酯钠盐稳定性差，使得其生物利用度低，病人用药次数频繁，耐受性差，药效差，从而大大限制了它的临床应用。 

除了青蒿琥酯的口服制剂和钠盐针剂，还有纳米乳剂、微乳剂等，如“专利申请号是200810150353.4的中国专利”公开了一种青蒿琥酯纳米乳药物组合物及其制备方法。该发明虽然能有效地克服传统片剂在肝脏的首过效应，注射无疼痛感，但是此乳剂制备中加有防腐剂，只能为兽医临床上提供新型的抗寄生虫药物，起到对动物寄生虫病的治疗和预防作用。“专利申请号是 200410052565.0的中国专利”公开了一种含有蒿甲醚（或蒿乙醚或蒿琥酯）微乳剂的制备工艺。此专利中使用的乳化剂磷脂量较少，制备出的微乳剂不够稳定，且制备中并没有初乳的剪切及最后的均质，使得乳剂粒径较大，不适宜注射。“专利申请号是200910062882.3的中国专利”公开了纳米青蒿琥酯胶囊及其制备方法。此制剂是口服剂型，同样不能用于注射。但是对于一些急性疟疾患者，口服用药往往不能起到作用，必须使用注射制剂，所以针对青蒿琥酯口服及粉针制剂的缺陷和技术的不足，有必要开发青蒿琥酯的新剂型。 

脂肪乳注射剂是一种新的脂溶性药物载体。它是以大豆油为主要成分，用精制卵磷脂为乳化剂，甘油为等渗剂，经高压均质而成。它具有生物相容性好、物理稳定性高、便于制备、安全性好、载药量高等特色，非常适合于注射。同时，它还能改善营养不良病人的淋巴细胞活性，为患者提供营养，非常适用于恶性疟及一般疟疾的紧急治疗。 

因此，为了使青蒿琥酯的注射剂使用方便且稳定性好，同时提高青蒿琥酯的生物利用度及治疗效果，本发明公开一种青蒿琥酯脂肪乳的注射剂及制备方法。 

发明内容

为了提高青蒿琥酯的生物利用度，也为了满足临床治恶性疗疟疾用于注射的需求，本发明提供一种青蒿琥酯注射剂即青蒿琥酯脂肪乳剂。 

它在用于注射时无需添加任何助溶剂，因此使用方便且降低了毒副作用的发生率。并且，它还可以为疟疾患者提供身体所需的营养，改善患者的淋巴细胞活性，有助于患者抵抗疟疾和康复。 

本发明所述的青蒿琥酯脂肪乳注射剂，由以下成分加工制成： 

其余为注射用水。 

其中，所述注射用油是大豆油、茶油、麻油、中长链脂肪酸酯、橄榄油、莪术油、薏米仁油、大蒜油、红花油、花椒油、川芎油、青蒿油、沙棘油、冬青油、月见草油、当归油、生姜油、荆芥油、连翘油、桉叶油、紫苏油、陈皮油、牡荆油、玫瑰油、蓖麻油、薄荷油、茵陈油、小茴香油、松木油、丁香油、八角茴香油、麝香草油、肉桂油、艾叶油、苏子油、姜黄油、白千层油、熏衣草油、木香油、广藿香油、马鞭草油、苦艾油、香紫苏油、苍术油、香桃木油、柠檬油、枳实油、丁香罗勒油、红紫苏叶油、术(松)榴油、椰子油、砂仁油、橄榄油、香茅油、香叶油、香薷草油、留兰香油、杜杉油、广霍香油、苏合香油、黑加伦油、五味子油、石菖蒲油、蛇床子油、黄柏果油、薰衣草油、迷迭香油、香柠檬油、白檀油、胡萝卜籽油、柏木叶油、芹菜籽油、牛至油、香茅醛油、芫荽油、橙花油、肉豆蔻油、洋葱油、檀香油、万寿菊油、百里香油、依兰油中的任一种或多种混合物。 

其中，所述乳化剂是蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、人工合成卵磷脂中的任一种； 

其中，所述助乳化剂是吐温80、F68、油酸钠、油酸钾、油酸中的任一种或任几种； 

其中，所述增溶剂是无水乙醇、氯仿、丙酮或异丙醇的任一种； 

其中，所述等渗剂是甘油、葡萄糖或木糖醇的任一种。 

其中，所述抗氧化剂为维生素E。 

本发明还提供了青蒿琥酯脂肪乳注射剂的制备方法，包括以下步骤： 

步骤1：将0.01~30wt%的青蒿琥酯放入0~10wt%的增溶剂中进行溶解，然后与10.0~30.0wt%的注射用油混合，在80℃水浴中蒸发10 ~120min除去增溶剂；在氮气保护下加入0.6~30.0wt%的乳化剂和0.002~0.075wt%的抗氧化剂，加热至40~80℃得到形成油相混合物； 

步骤2：将2.25~7wt%的等渗剂、0~5wt%的助乳化剂和注射用水在40~80℃下进行混合，形成水相混合物；  

步骤3：在氮气保护下将步骤2得到的水相混合物与步骤1得到的油相混合物进行混合，然后在40~80℃，5000~12000r/min条件下高速分散5~30min后， 再机械搅拌60~120min，用0.1mol/L NaOH或HCL调节pH 至6.0~9.0，在压力为90~110MPa条件下进行均质6~9次，得到均匀的乳状溶液； 

步骤4：将步骤3所得乳状溶液过滤、通氮气密封，经100~125℃灭菌处理15~50min或经0.22μm无菌滤膜过滤后，25℃以下贮藏。  

本发明还提供了青蒿琥酯脂肪乳注射剂在治疗疟疾中的应用。本药物剂型可以是肌肉注射或静脉注射。根据体内抗疟活性检测（详见5.1），实验时各组小鼠腹腔内定量接种含有l×10⁷个被鼠疟原虫寄生的红细胞，接种量0.2ml/只。于接种后第二日按组给药，按WHO规定的4d抑制性试验法，连续给药3天。青蒿琥酯脂肪乳给药组（浓度分别为112、56、28 mg/kg/d），尾注射给药。结果显示各个青蒿琥酯脂肪乳注射剂给药组小鼠的转阴率均为100%，说明青蒿琥酯脂肪乳具有很好的抗疟活性，可以用于疟疾治疗。 

本发明方法制备的青蒿琥酯脂肪乳注射剂使用方便且稳定性好。并且，可以利用脂肪乳抑制疟原虫生长、营养供给的特性，增强青蒿琥酯的抗疟效果，同时为疟疾患者提供身体所需的营养，改善患者的淋巴细胞活性，有助于患者抵抗疟疾和康复。本发明方法制备的青蒿琥酯脂肪乳注射剂可直接用于注射，不再需要助溶载体，从而降低了对人体的毒副作用，同时能增加药物的稳定性。 

附图说明

图1：小鼠血液中含疟原虫（图1A）及转阴后不含疟原虫（图1B）的显微镜照片 

具体实施方式

本发明对注射用青蒿琥酯脂肪乳的制剂配方中各种辅料的用量范围进行了验证。下面结合实施例对本发明作详细说明，但不仅限于下列实例。 

一、不同油相制备的青蒿琥酯脂肪乳剂注射剂 

实施例1： 

处方： 

将50mg青蒿琥酯放入1mL无水乙醇中充分溶解成溶液，将此溶液与10g注射用大豆油混合，蒸发除去无水乙醇后在氮气保护下加入1.2g注射用蛋黄卵磷脂、0.02g的抗氧化剂维生素E，于60℃混合，形成油相混合物。将50mL注射用水、0.4g油酸钠和2.5g甘油于60℃混合，形成水相混合物。在氮气保护下将水相混合物与油相混合物混合，并加水至100mL，在60℃下，6500r/min高速分散后机械搅拌20min制成初乳，调节pH至7.0后，在压力为105MPa条件下均质8次，得到均匀的乳状溶液；上述乳状溶液过滤、通氮气密封，经115℃灭菌处理15min后，25℃以下贮藏。 

实施例2： 

处方： 

将500mg青蒿琥酯放入5mL氯仿中充分溶解成溶液，将此溶液与10g注射用橄榄油混合，蒸发除去氯仿后在氮气保护下加入1.2g注射用卵磷脂、0.02g的抗氧化剂维生素E，于70℃混合，形成油相混合物。将70mL注射用水、2.5g木糖醇、0.2g F68于70℃混合，形成水相混合物。在氮气保护下将水相混合物与油相混合物混合，加水至100mL，在70℃下，7000r/min高速分散后机械搅拌20min制成初乳，调节pH至7.5后，在压力为90MPa条件下进行均质9次，得到均匀的乳状溶液；上述乳状溶液过滤、通氮气密封，经120℃灭菌处理25min后，25℃以下贮藏。 

二、不同乳化剂制备的青蒿琥酯脂肪乳剂注射剂 

实施例3： 

处方： 

将300mg青蒿琥酯放入3mL丙酮中充分溶解成溶液，将此溶液与20g注射用麻油混合，蒸发除去丙酮后在氮气保护下加入2.4g注射用蛋黄卵磷脂、0.02g的抗氧化剂维生素E，于70℃混合，形成油相混合物。将150mL注射用水、5g甘油、0.02g油酸于70℃混合，形成水相混合物。在氮气保护下将水相混合物与油相混合物混合，加水至200mL，在70℃下，7500r/min高速分散后机械搅拌20min制成初乳，调节pH至8.0后，在压力为95MPa条件下进行均质6次，得到均匀的乳状溶液；上述乳状溶液过滤、通氮气密封，经125℃灭菌处理10min后，25℃以下贮藏。 

实施例4： 

处方： 

将150mg青蒿琥酯放入3mL无水乙醇中充分溶解成溶液，将此溶液与30g注射用中长链脂肪酸酯混合，蒸发除去异丙醇后在氮气保护下加入1.2g注射用氢化蛋黄卵磷脂、0.02g的抗氧化剂维生素E，于60℃混合，形成油相混合物。将50mL注射用水、2.5g甘油、0.4g F68于70℃混合，形成水相混合物。在氮 气保护下将水相混合物与油相混合物混合，加水至100mL，在70℃下，8000r/min高速分散后机械搅拌15min制成初乳，调节pH至8.0后，在压力为100MPa条件下进行均质8次，得到均匀的乳状溶液；上述乳状溶液过滤、通氮气密封，经100℃灭菌处理30min后，25℃以下贮藏。 

三、不同助乳化剂制备的青蒿琥酯脂肪乳剂注射剂 

实施例5： 

处方： 

将400mg青蒿琥酯放入4mL氯仿中充分溶解成溶液，将此溶液与200g注射用大豆油混合，蒸发除去氯仿后在氮气保护下加入12g注射用卵磷脂、0.15g的抗氧化剂维生素E，于60℃混合，形成油相混合物。将900mL注射用水、25g甘油、0.4g F68于60℃混合，形成水相混合物。在氮气保护下将水相混合物与油相混合物混合,加水至1000mL，在60℃下，8900r/min高速分散后机械搅拌15min制成初乳，调节pH至7.8后，在压力为110MPa条件下进行均质6次，得到均匀的乳状溶液；上述乳状溶液过滤、通氮气密封，经125℃灭菌处理10min后，25℃以下贮藏。 

实施例6： 

处方： 

将800mg青蒿琥酯放入8mL氯仿中充分溶解成溶液，将此溶液与300g注射用茶油混合，蒸发除去氯仿后在氮气保护下加入24g注射用蛋黄卵磷脂、0.21g的抗氧化剂维生素E，于70℃混合，形成油相混合物。将900mL注射用水、25g甘油、0.04g油酸于70℃混合，形成水相混合物。在氮气保护下将水相混合物与油相混合物混合，加水至1000mL，在70℃下，9000r/min高速分散后机械搅拌10min制成初乳，调节pH至7.2后，在压力为108MPa条件下进行均质7次，得到均匀的乳状溶液；上述乳状溶液过滤、通氮气密封，经120℃灭菌处理15min后，25℃以下贮藏。 

四、不同等渗调节剂制备的青蒿琥酯脂肪乳剂注射剂 

实施例7： 

处方： 

将1400mg青蒿琥酯放入35mL无水乙醇中充分溶解成溶液，将此溶液与300g注射用中长链脂肪酸酯混合，蒸发除去异丙醇后在氮气保护下加入30g注射用氢化蛋黄卵磷脂、0.23g的抗氧化剂维生素E，于80℃混合，形成油相混合物。将800mL注射用水、25g葡萄糖、0.2g吐温80于80℃混合，形成水相混合物。在氮气保护下将水相混合物与油相混合物混合，加水至1000mL，在80℃下，10000r/min高速分散后机械搅拌5min制成初乳，调节pH至7.8后，在压力为110MPa条件下进行均质6次，得到均匀的乳状溶液；上述乳状溶液过滤、通氮气密封，经121℃灭菌处理15min后，25℃以下贮藏。 

实施例8： 

处方： 

将2000mg青蒿琥酯放入12mL氯仿中充分溶解成溶液，将此溶液加入与150g注射用茶油，蒸发除去氯仿后在氮气保护下加入35g注射用蛋黄卵磷脂、0.29g的抗氧化剂维生素E，于70℃混合，形成油相混合物。将600mL注射用水、25g甘油、0.6gF68于70℃混合，形成水相混合物。在氮气保护下将水相混合物与油相混合物混合，加水至1000mL，在70℃下，10000r/min高速分散后机械搅拌10min制成初乳，调节pH至7.4后，在压力为108MPa条件下进行均质7次，得到均匀的乳状溶液；上述乳状溶液过滤、通氮气密封，经121℃灭菌处理15min后，25℃以下贮藏。 

实施例9、青蒿琥酯脂肪乳注射制剂的动物实验研究 

5.1 青蒿琥酯脂肪乳注射制剂治疗疟疾的药效学研究 

5.1.1动物 

昆明种小鼠，体重22±1g，雌雄各半，中国医学科学院实验动物研究所提供，合格证号：SCXK（京）2004-0001；伯氏疟原虫虫株（NK-173，中国军事医学科学院微生物流行病所提供）。 

5.1.2方法 

试验采用Peters法。取昆明种小鼠，按体重随机分组，每组动物10只，雌雄各半，分为模型对照组、青蒿琥酯脂肪乳给药组（浓度分别为112、56、28 mg/kg/d），尾注射给药。模型对照组不作处理。实验时各组小鼠腹腔内定量接种含有l×10⁷个被鼠疟原虫寄生的红细胞，接种量0.2ml/只。于接种后第二日按组给药，按WHO规定的4d抑制性试验法，连续给药3天。 

给药4天后，第5天从小鼠尾巴取血涂薄血膜片，用Giemsa染色法染色，显微镜下观察，并计数1×10³红细胞中原虫数，计算红细胞的感染率（%）。在 显微镜下观察50个油镜视野（×1000，约2.5万个红细胞），观察不到疟原虫者定为阴性血片，按公式一计算各给药剂量组小鼠转阴率（%）。 

如小鼠转阴，则观察30天内小鼠复燃情况，即隔日涂一次薄血膜(每周三次)，直到30天。到30天后观察仍为阴性血片者则定为治愈，并按公式二计算各给药剂量组小鼠的治愈率(％)。 

5.1.3结果 

结果分别见表5.1。小鼠血液中疟原虫和小鼠转阴后血液的显微镜照片见图1。由此可以看出青蒿琥酯脂肪乳对疟原虫有明显的杀灭作用，并且可以有效的控制疟原虫的复发。 

表5.1 青蒿琥酯脂肪乳药效试验结果 

5.2  对本发明青蒿琥酯脂肪乳剂进行安全性试验 

5.2.1血管刺激性实验： 

试验方法：每日给家兔注射3.0ml/kg供试品（按临床用药量折算），连续三次后，解剖动物血管作病理切片观察，无组织变性或坏死等显著刺激反应。 

5.2.2 溶血性实验：按新药研究安全性试验指导原则的方法进行，无溶血现象出现。 

5.2.3 全身过敏性实验： 

按《中华人民共和国药典》的方法规定进行试验，试验结果：在首次注射 后第14天及21天，经青蒿琥酯脂肪乳激发后30min内动物未出现竖毛、喷嚏、干呕、咳嗽、呼吸困难、啰音、抽搐、虚脱等现象，表明青蒿琥酯脂肪乳豚鼠全身过敏性试验结果为阴性，本品无致敏性。 

5.2.4 热原检查： 

试验方法：参照中国药典2005版附录ⅩⅢ A热原检查法进行试验，结果表明青蒿琥酯脂肪乳对家兔血管和肌肉均无刺激性，对豚鼠试验无过敏性，对大鼠无被动皮肤过敏性，无溶血性与家兔热原检查复合药典规定的标准。表明注射用青蒿琥酯脂肪乳符合安全性指标的要求。 

5.2.5 青蒿琥酯脂肪乳的稳定性试验 

取新鲜制备的脂肪乳，置于离心管中，13000rpm离心15min后，未发现分层，也未见药物沉淀析出。室温阴凉处储存一年，乳剂外观、粒径、Zeta电位等理化性质以及含量均未发生明显变化，表明乳剂稳定。 

Claims (10)

1.一种青蒿琥酯脂肪乳注射剂，其特征在于，由以下成分加工制成：

其余为注射用水。

2.根据权利要求1所述的青蒿琥酯脂肪乳注射剂，其特征在于：所述注射用油为大豆油、茶油、麻油、中长链脂肪酸酯、橄榄油、莪术油、薏米仁油、大蒜油、红花油、花椒油、川芎油、青蒿油、沙棘油、冬青油、月见草油、当归油、生姜油、荆芥油、连翘油、桉叶油、紫苏油、陈皮油、牡荆油、玫瑰油、蓖麻油、薄荷油、茵陈油、小茴香油、松木油、丁香油、八角茴香油、麝香草油、肉桂油、艾叶油、苏子油、姜黄油、白千层油、熏衣草油、木香油、广藿香油、马鞭草油、苦艾油、香紫苏油、苍术油、香桃木油、柠檬油、枳实油、丁香罗勒油、红紫苏叶油、术(松)榴油、椰子油、砂仁油、橄榄油、香茅油、香叶油、香薷草油、留兰香油、杜杉油、广霍香油、苏合香油、黑加伦油、五味子油、石菖蒲油、蛇床子油、黄柏果油、薰衣草油、迷迭香油、香柠檬油、白檀油、胡萝卜籽油、柏木叶油、芹菜籽油、牛至油、香茅醛油、芫荽油、橙花油、肉豆蔻油、洋葱油、檀香油、万寿菊油、百里香油、依兰油中的任一种或多种混合物。

3.根据权利要求1所述的青蒿琥酯脂肪乳注射剂，其特征在于：所述乳化剂为蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂或人工合成卵磷脂。

4.根据权利要求1所述的青蒿琥酯脂肪乳注射剂，其特征在于：所述助乳化剂为吐温80、F68、油酸钠、油酸钾或油酸中的任一种或任几种。 

5.根据权利要求1所述的青蒿琥酯脂肪乳注射剂，其特征在于：所述增溶剂为无水乙醇、氯仿、丙酮或异丙醇。

6.根据权利要求1所述的青蒿琥酯脂肪乳注射剂，其特征在于：所述等渗剂是甘油、葡萄糖或木糖醇。

7.根据权利要求1所述的青蒿琥酯脂肪乳注射剂，其特征在于：所述抗氧化剂为维生素E。

8.根据权利要求1所述的青蒿琥酯脂肪乳注射剂，其特征在于，由以下成分加工制成：

。

9.权利要求1~7所述任一种青蒿琥酯脂肪乳注射剂的制备方法，其特征在于，步骤如下：

步骤1：将0.01~30wt%的青蒿琥酯放入0~10wt%的增溶剂中进行溶解，然后与10.0~30.0wt%的注射用油混合，在80℃水浴中蒸发10 ~120min除去增溶剂；在氮气保护下加入0.6~30.0wt%的乳化剂和0.002~0.075wt%的抗氧化剂，加热至40~80℃得到形成油相混合物；

步骤2：将2.25~7wt%的等渗剂、0~5wt%的助乳化剂和注射用水在40~80℃下进行混合，形成水相混合物； 

步骤3：在氮气保护下将步骤2得到的水相混合物与步骤1得到的油相混合物进行混合，然后在40~80℃，5000~12000r/min条件下高速分散5~30min后，再机械搅拌60~120min，用0.1mol/L NaOH或HCL调节pH 至6.0~9.0，在压力为90~110MPa条件下进行均质6~9次，得到均匀的乳状溶液；

步骤4：将步骤3所得乳状溶液过滤、通氮气密封，经100~125℃灭菌处理15~50min或经0.22μm无菌滤膜过滤后，25℃以下贮藏。  

10.权利要求1所述的青蒿琥酯脂肪乳注射剂在制备治疗疟疾的药物中的应用。 

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