CN109568265A - 一种穿心莲内酯纳米混悬剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种穿心莲内酯纳米混悬剂，所述穿心莲内酯纳米混悬剂包含：有效平均粒径小于1000 nm的穿心莲内酯微粒与至少一种阴离子表面稳定剂。该纳米混悬剂处方简单，制备工艺精简可控、易于产业化、效率高，制剂稳定性好，耐稀释。

Description

一种穿心莲内酯纳米混悬剂
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体的说，涉及一种穿心莲内酯纳米混悬剂及其制备方法和应用。
背景技术
穿心莲内酯为爵床科植物穿心莲中提取得到的二萜内酯化合物，其在抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、治疗心脑血管疾病、保肝利胆等方面有极好的应用价值。临床用于治疗细菌性痢疾、钩端螺旋体病、脑膜炎、肺炎、上呼吸道感染等，因其对于细菌或病毒感染疾病治疗效果良好，享有“中药抗生素”的美誉。
目前CFDA已批准生产穿心莲内酯片剂、胶囊、滴丸等口服剂型。这些制剂对细菌、病毒虽然有一定的抑制作用，但生物利用度受限。注射剂是最为直接的给药形式，但由于穿心莲内酯本身具有水溶性低，熔点高，且在脂质载药系统中载药量低的性质，目前上市的注射剂均为其亲水衍生物，但随着穿心莲内酯亲水衍生物注射剂的应用范围不断扩大，关于其不良反应的报道也逐渐增多。最近，喜炎平（穿心莲内酯水溶性衍生物）注射液在甘肃、黑龙江、江苏共发生十多例寒战、发热等严重不良反应。注射剂发生不良反应与联合用药、稳定性、不溶性微粒、辅料成分和生产工艺有密切关系。
因此直接将穿心莲内酯制成纳米混悬剂成为最佳选择。纳米混悬剂是以表面活性剂为稳定剂，由药物微粒组成的胶体分散系统。具有药物浓度高，给药体积小、辅料用量少、毒性低、处方简单、制备技术成熟等优势。其作为中间剂型，可制成不同制剂，口服可显著提高生物利用度，注射可减少给药频率或实现靶向给药等优势。因此纳米混悬剂技术可以提高药物有效性、安全性和稳定性，满足临床的迫切需要。
目前，纳米混悬剂的制备方法有bottom up及top down两种技术，前者包括沉淀法、超临界流体技术、乳化法等，后者包括介质研磨法、高压均质法，此外还可以两种技术联合使用。目前仅有专利“穿心莲内酯纳米混悬剂组合物及其制备方法和应用”（CN105726494 A）制备穿心莲内酯纳米混悬剂，但其采用的球磨法或高压均质法研磨时间均较长，效率较低。球磨机采用的闭式系统，不能实现连续操作；无过滤系统，研磨后需手动分离物料及研磨介质；且需要将原料药预分散于水体系中，工艺不够简便，放大生产受限。
同时需注意的是，纳米混悬剂作为高度分散的纳米胶体体系，系统自由能较高，在水性介质中易发生聚集、沉降、熟化等稳定性问题，成为限制其应用的重要因素。
发明内容
本发明目的是提供一种可注射的穿心莲内酯纳米混悬剂及其制备工艺和应用。该纳米混悬剂处方简单，制备工艺精简可控、易于产业化、效率高，制剂稳定性好，耐稀释。
为实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：
一种穿心莲内酯纳米混悬剂，其特征在于，组合物包括：有效平均粒径小于1000 nm的穿心莲内酯微粒与至少一种稳定剂。
本发明所述的穿心莲内酯纳米混悬剂，其特征在于，所述的穿心莲内酯量为0.05%~8%（w/v）；在一些技术方案中，穿心莲内酯含量为0.05%~5%（w/v）；在一些技术方案中，穿心莲内酯含量为5%~8%（w/v）；在一些技术方案中，穿心莲内酯含量为0.5%~5%（w/v），不包括5%（w/v）；在一些技术方案中，穿心莲内酯含量为0.5%~4%（w/v）；在一些技术方案中，穿心莲内酯含量为5%（w/v），在一些技术方案中，穿心莲内酯含量为6%（w/v），在一些技术方案中，穿心莲内酯含量为8%（w/v）。
本发明所述的穿心莲内酯纳米混悬剂，其特征在于，所制备的穿心莲内酯纳米混悬剂平均粒径小于约1000 nm、小于约900 nm、小于约800 nm、小于约700 nm、小于约650nm、小于约600 nm、小于约550 nm、小于约500 nm、小于约450 nm、小约400 nm、小子约350nm、小于约300 nm、小于约250 nm、小于约200 nm、小于约150 nm、小于约100 nm。
本发明所述的穿心莲内酯纳米混悬剂，其特征在于，所述的稳定剂为胆酸及胆酸盐类：脱氧胆酸及其钠盐、去氢胆酸及其钠盐、猪去氧胆酸及其钠盐、牛磺胆酸及其钠盐、牛磺熊去氧胆酸及其钠盐、牛磺鹅去氧胆酸及其钠盐；硫酸盐类：十二烷基硫酸钠；磺酸盐类：十二烷基苯磺酸钠、二辛基琥珀酸磺酸钠；硬脂酸钠盐类；三乙醇胺盐；葡甲胺盐；三羟甲基氨基甲烷盐或碱性氨基酸盐中的一种或其任意组合的混合物。优选为胆酸盐类，用量为0.05%~1%（w/v）。本发明前期试验表明研磨前加入稳定剂对于维持研磨过程中纳米混悬剂稳定性具有重要作用。
一种穿心莲内酯纳米混悬剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）将稳定剂完全溶解于水中；2）将含有稳定剂的水溶液转移至已装好研磨介质的研磨机中，开始运行，待溶液在仪器中形成循环后加入穿心莲内酯原料药进行研磨；3）研磨一定时间后从出料口得到乳白色纳米混悬液；4）分装得稳定的穿心莲内酯纳米混悬剂组合物。本发明前期试验中采用多种仪器制备纳米混悬剂，包括行星式球磨机，高压均质机，微射流仪，湿法研磨机，优选湿法研磨机。
本发明一些技术方案中，穿心莲内酯原料药可直接制备纳米混悬剂。
本发明的一些技术方案中，穿心莲内酯原料药可经微粉化处理后制备纳米混悬剂。优选为原料药经微粉化处理。
本发明所述的穿心莲内酯纳米混悬剂的制备方法，其特征在于，采用的研磨介质为氧化锆珠，其粒径为0.1~0.8 mm，研磨介质填充率为50%~85%（v/v），即研磨介质体积与研磨腔体积比为50%~85%。
本发明的一些技术方案中，当采用的研磨介质为0.1 mm氧化锆珠时，穿心莲内酯原料药需经微粉化处理。因为由于研磨介质粒径较小，相应采用的过滤筛网孔径较小，如果不对药物进行微粉化处理会造成筛网堵塞。
本发明所述的穿心莲内酯纳米混悬剂的制备方法，其特征在于，研磨机工作参数为研磨转速1500~4000 rpm，运行时间为0.25~4 h，研磨腔温度控制在10~50oC。
本发明所述的穿心莲内酯纳米混悬剂，还可已加入适当的冻干保护剂，冷冻干燥后以固体形式储存或作为中间剂型进一步制成其他剂型制剂。可选择的冻干保护剂为蔗糖、海藻糖、麦芽糖、甘露醇、甘油、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺--聚乙二醇（PEG）2000、聚乙二醇2000、吐温20、吐温80、维生素E聚乙二醇琥珀酸酯中的一种或其混合物。单一冻干保护剂优选蔗糖、海藻糖，优选用量为3~10%（w/v）；组合冻干保护剂优选蔗糖与甘露醇组合或海藻糖与甘露醇组合，优选用量为蔗糖或海藻糖1~5%（w/v）（w/v），甘露醇1~5%（w/v）。冻干保护剂的选择对于维持药物的性质、状态起到关键作用。合适的冻干保护剂可保证冻干品的外观、复溶状态及粒径变化，因此需针对不同药物选择合适的冻干保护剂。本发明中，采用优选的单一或组合冻干保护剂得到的冻干品外观光滑完整、复溶时间较短、复溶状态较好、粒径增长较小。
本发明所述的穿心莲内酯纳米混悬剂的制备方法，其特征在于，所述的穿心莲内酯纳米混悬剂可通过喷雾干燥方式以固体形式储存或作为中间剂型进一步制成其他剂型制剂。喷干支持剂包括糊精、淀粉、微晶纤维素、二氧化硅、甘露醇、乳糖、麦芽糖中的一种或其任意混合物。
本发明所述的穿心莲内酯纳米混悬剂冷冻干燥或喷雾干燥后，固态或复溶后的穿心莲内酯纳米粒平均粒径小于约1000 nm、小于约900 nm、小于约800 nm、小于约700 nm、小于约650 nm、小于约600 nm、小于约550 nm、小于约500 nm、小于约450 nm、小于约400 nm、小子约350 nm、小于约300 nm、小于约250 nm、小于约200 nm、小于约150 nm、小于约100nm。
一种穿心莲内酯纳米混悬剂的应用，其特征在于，所述穿心莲内酯纳米混悬剂组合物可以配制用于胃肠外注射（例如，静脉，肌肉，皮下），口服（以固体，液体或吸入形式），阴道，鼻，直肠，眼部，口腔，脑池内，腹膜内或局部给药等不同给药途径的制剂。
本发明所述的穿心莲内酯纳米混悬剂组合物的应用，其特征在于，所述穿心莲内酯纳米混悬剂可以按制剂的常规方法制备成如下的剂型：固体或半固体制剂包括但不限于，片剂、胶囊剂、凝胶、软膏、霜剂等；液体制剂包括但不限于液体分散剂、混悬剂等。
本发明所述的穿心莲内酯纳米混悬剂，其作为固体或半固体制剂时还包含一种或多种辅料，如：填充剂、黏合剂，润滑剂，崩解剂，泡腾崩解剂，矫味剂，防腐剂，或其他辅料，取决于最终剂型。所述的填充剂包括但不限于，淀粉、蔗糖、糊精、乳糖、预胶化淀粉、微晶纤维素、甘露醇、山梨醇等；所述的黏合剂包括但不仅限于，纤维素类、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、聚乙二醇等；所述的润滑剂包括但不仅限于，胶体二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硅胶、十二烷基硫酸钠等；所述的崩解剂包括但不仅限于，交联聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基淀粉钠、马铃薯淀粉、玉米淀粉、改性淀粉、交联羧甲基纤维素钠等；所述的泡腾崩解剂包括但不仅限于，有机酸和碳酸盐或碳酸氢盐。合适的有机酸包括，柠檬酸、酒石酸、苹果酸、富马酸、己二酸、琥珀酸和藻酸以及酸酐及酸盐；合适的碳酸盐和碳酸氢盐包括例如碳酸钠、碳酸钙、碳酸锌、碳酸氢钠。或只有碳酸氢钠的存在；所述的矫味剂包括但不仅限于，蔗糖、木糖醇、糖精、环己烷氨基磺酸盐、阿斯巴甜、安赛蜜等；所述的防腐剂包括但不限于，山梨酸钾、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、苯甲酸及其盐等。
本发明所述的穿心莲内酯纳米混悬剂，其特征在于，纳米混悬制剂、冷冻干燥制剂、喷雾干燥制剂、或制备成的固体、半固体、液体制剂，作为液体制剂用药时，使用前可用水复溶，必要时可用5%葡萄糖溶液复溶和稀释，复溶和稀释后穿心莲内酯纳米混悬液平均粒径小于约1000 nm、小于约900 nm、小于约800 nm、小于约700 nm、小于约650 nm、小于约600 nm、小于约550 nm、小于约500 nm、小于约450 nm、小于约400 nm、小子约350 nm、小于约300 nm、小于约250 nm、小于约200 nm、小于约150 nm、小于约100 nm。
本发明的优势在于：
（1）处方简单，稳定剂用量少，安全性高。而本发明中，采用至少一种稳定剂即可同时解决制备及稀释过程中制剂稳定性问题，且用量小，安全性更高。
（2）工艺精简可控，效率高，易于产业化。与现有技术相比，湿法研磨机为开放式系统，可进行连续性操作，批次大小可调控；可实现物料及研磨介质自动分离；可随时调整研磨时间，随时取样检测；研磨效率显著提高，相同研磨时间内，制剂中微粒平均粒径更小，分散系数较小；设备符合GMP要求，易于产业化。
（3）稳定性好。研磨过程中采用冷凝水循环的方式控制温度，避免高温对制剂稳定性造成影响；制剂采用冷冻干燥方式解决纳米混悬剂存储过程中的稳定性问题，并且采用单一或联合冻干保护剂最大程度避免冻干过程中制剂粒径的增长，制剂的稳定性更好。
附图说明
图 1 为实施例4不同研磨珠粒径所制备穿心莲纳米混悬剂粒径随研磨时间变化曲线；
图 2 为实施例5不同研磨时间所制备穿心莲内酯纳米混悬剂平均粒径（Particlesize）及分散系数（PI）；
图 3 为实施例6不同研磨转速所制备穿心莲内酯纳米混悬剂平均粒径（Particlesize）及分散系数（PI）；
图 4 为实施例10穿心莲内酯纳米混悬冻干品、复溶液及稀释液外观；
图 5 为实施例10穿心莲内酯纳米混悬冻干品透射电镜照片；
图 6 为实施例10穿心莲内酯纳米混悬冻干品扫描电镜照片；
图 7 为实施例11穿心莲内酯冻干品复溶及稀释后平均粒径（Particle size）及分散系数（PI）随时间变化情况；
图 8 为穿心莲内酯纳米混悬剂冻干品加速试验药物含量（drug content）及平均粒径（Particle size）；
图 9 为穿心莲内酯纳米混悬剂冻干品长期试验药物含量（drug content）及平均粒径（Particle size）；
图 10 为实施例15穿心莲内酯纳米晶喷干粉扫描电镜照片；
图11 为穿心莲内酯纳米混悬剂静注药时曲线；
图12 为穿心莲内酯纳米混悬剂口服药时曲线。
具体实施方式
下面用具体实施例来进一步说明本发明的内容，但并不意味着以任何方式对本发明进行限制。
下述实施例中，所述穿心莲内酯原料药来自四川省玉鑫药业有限公司，纯度大于99%；粒径及zeta电位测定采用Nicomp-380动态光散射激光粒度仪（美国PSS公司）进行检测。
本发明中百分含量的单位除特别注明外均为w/v，表示每100 mL水中含有该组分的克数。
实施例 1穿心莲内酯纳米混悬剂的制备——不同仪器比较
处方：
工艺：
（1）ATS高压均质机：将0.2 g脱氧胆酸钠溶于蒸馏水，完全溶解后加入6g穿心莲内酯，采用剪切分散方式使药物完全分散于含稳定剂的水溶液中。将混合液通过高压均质机，400、800 bar各循环一次，然后1200 bar循环20次，取出适量穿心莲内酯混悬液测定粒径为1.1 μm，达不到纳米级。将处方穿心莲内酯量降至0.6%，采用相同方式通过高压均质机循环20次，取出适量穿心莲内酯混悬液测定平均粒径为532 nm。
（2）微射流仪：采用与（1）中相同处方及方法将药物完全分散于含稳定剂的水溶液中。将混合液通过微射流仪，25000 psi循环20次，取出适量穿心莲内酯混悬液测定粒径为1.5 μm。将处方穿心莲内酯量降至0.6%，采用相同方式通过微射流仪循环20次，取出适量穿心莲内酯混悬液测定平均粒径为1.4 μm，仍达不到微米级。
（3）行星球磨机：采用与（1）中相同处方（制备量为40 mL）及方法将药物完全分散于含稳定剂的水溶液中。将混合液装入含80 g粒径为0.4 mm氧化锆研磨珠的行星球磨机中，运行10 min，停歇2 min，共工作16个循环，或20个循环或24个循环。研磨结束后取出适量穿心莲内酯混悬液测定平均粒径，分别为630.0 nm，367.0 nm和367.1 nm，粒径可达纳米级，但研磨效率较低。
（4）MiniCer湿法研磨机：采用与（1）中相同处方，将稳定剂完全溶解于水中后转移至已装好已装有500 g粒径为0.2~0.3 mm氧化锆研磨珠MiniCer湿法研磨机，开始运行，待溶液在仪器中形成循环后加入穿心莲内酯原料药，于30 oC，3500 rpm研磨1.5 h，取出适量穿心莲内酯混悬液测定平均粒径为214 nm，研磨效率明显高于行星球磨机。
故最终确定研磨设备为MiniCer研磨机（NETZSCH，上海耐驰机械仪器有限公司）。
实施例2穿心莲内酯纳米混悬剂的制备——原料药未经微粉化或经微粉化处理
取未微粉化穿心莲内酯原料药，采用与实施例1中相同处方及实施例1中（4）方法分别制备穿心莲内酯纳米混悬剂，于研磨前，0.5 h，1 h取出适量穿心莲内酯混悬液测定粒径。与实施例1（4），即原料药微粉化后制备的纳米混悬剂比较。结果见表1。
表1 穿心莲内酯原料药经微粉化或未经微粉化制备的纳米混悬剂平均粒径
由表1可知，原料药经微粉化后研磨相同时间粒径较小。但同时，本发明方法对于粒径较大粒子的研磨效率更高，前0.5 h，可使粒子粒径从39.8 μm减小至0.386 μm，可见本方法的研磨效率很高。
实施例 3穿心莲内酯纳米混悬剂的制备——加入或不加入稳定剂
处方：
工艺：
采用实施例1中（4）工艺制备穿心莲内酯纳米混悬剂，于研磨前，0.5，1.0，1.5 h从出料口取出适量穿心莲内酯纳米混悬液测定粒径。与实施例2加入稳定剂制备的穿心莲内酯纳米混悬剂比较。结果见表2。
表2 处方中含有或不含有稳定剂时制备的穿心莲内酯纳米混悬剂平均粒径
由表2可知，加入稳定剂后，可以使药物粒子粒径随研磨时间增长不断降低，但不加入稳定剂，研磨1 h时药物粒子不但没有下降，反而增加。可见加入稳定剂对于维持研磨过程中纳米混悬剂稳定性具有重要作用。
实施例 4 穿心莲内酯纳米混悬剂的制备——不同研磨珠粒径
处方：
工艺：
将1g猪去氧胆酸溶于蒸馏水，将此溶液转移至已装入450 g，0.1 mm（或0.2、0.3、0.4、0.6、0.8 mm）氧化锆珠的湿法研磨机，开始运行，待溶液在仪器中形成循环后加入8 g穿心莲内酯原料药进行研磨；于3600 rpm转速下，工作1 h。工作期间，于0.25、0.5、0.75、1.0 h从出料口取出适量穿心莲内酯纳米混悬液测定粒径，结果见图1。
由图1可以看出，随研磨珠粒径的减小，相同研磨时间得到的纳米混悬剂粒径越小。因此，可以通过调节研磨珠粒径控制所制备纳米混悬剂平均粒径。
实施例 5 穿心莲内酯纳米混悬剂制备——不同研磨时间
处方：
工艺：
将0.8g去氢胆酸钠溶于蒸馏水将此溶液转移至已装入500 g，0.1 mm氧化锆珠的湿法研磨机中，待溶液在仪器中形成循环后加入8g穿心莲内酯原料药进行研磨；于3900 rpm转速下，工作3.5 h。工作期间，于0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 h从出料口取出适量穿心莲内酯纳米混悬液测定粒径，结果见图2。
由图2可以看出，随研磨时间的增加，纳米混悬剂粒径逐渐降低，但是粒径降低速率逐渐减小；分散系数始终在0.1~0.25之间。因此，可以通过调节研磨时间控制所制备纳米混悬剂平均粒径。
实施例 6 穿心莲内酯纳米混悬剂制备——不同研磨转速
处方：
工艺：
将0.1g牛磺熊去氧胆酸钠溶于蒸馏水，将此溶液转移至已装入350 g，0.4 mm氧化锆珠的湿法研磨机中，待溶液在仪器中形成循环后加入1g穿心莲内酯原料药进行研磨；于1500rpm（或2000、2500、3000、3600、3900 rpm）转速下，工作0.5 h。研磨结束后，从出料口取出穿心莲内酯纳米混悬液测定粒径，结果见图3。
由图3可以看出，随研磨转速增加，相同研磨时间纳米混悬剂粒径减小，分散系数减小。因此，可以通过调节研磨时间控制所制备纳米混悬剂平均粒径。
实施例 7 穿心莲内酯纳米混悬剂制备——不同稳定剂
处方：
工艺：
将处方量的不同种类稳定剂溶于蒸馏水，将此溶液转移至已装入450 g，0.6 mm氧化锆珠的湿法研磨机中，待溶液在仪器中形成循环后加入4g穿心莲内酯原料药进行研磨；于3500 rpm转速下，工作1.5 h。研磨结束后，从出料口取出穿心莲内酯纳米混悬液测定粒径，结果见表3。
表3 不同种类的稳定剂制备的穿心莲内酯纳米混悬剂
由表3可知，采用各种稳定剂均能制备穿心莲内酯纳米混悬剂，在相同工艺下，采用胆酸盐类制备的纳米混悬剂平均粒径更小，分散系数更小。
实施例 8 穿心莲内酯纳米混悬剂制备——冷冻干燥
处方：
制剂制备后加入冻干保护剂适量（%，w/v，冻干保护剂质量/制剂总质量）
工艺：
将2g牛磺鹅去氧胆酸钠溶于蒸馏水，将此溶液转移至已装入400 g，0.2 mm氧化锆珠的湿法研磨机中，待溶液在仪器中形成循环后加入5 g穿心莲内酯原料药进行研磨；于3400rpm转速下，工作3 h，从出料口得到乳白色纳米混悬液；向其中加入适量冻干保护剂，分装后放入冷冻干燥机中进行冻干45 h得稳定的纳米混悬剂冻干品。将穿心莲纳米混悬剂冻干品以蒸馏水复溶复溶液粒径结果见表4及表5。
表4 加入不同种类不同量的单一冻干保护剂后穿心莲内酯纳米混悬剂
冻干品复溶液平均粒径（冻干前平均粒径为155.9 nm）
外观：蔗糖及海藻糖组1%时冻干粉饼略萎缩；3%、5%、10%时外观光滑完整，呈圆饼状；15%、20%时冻干品上部成圆饼状，下部萎缩或熔化。复溶时间均在10s以内；麦芽糖组冻干品呈团状，有针状或颗粒状结晶，且随麦芽糖量增加抱团情况加剧，复溶时间均在5s以内；甘露醇组整体外观光滑完整，呈圆饼状，复溶时间均在5 s以内。
结合冻干品外观，复溶时间及复溶后粒径结果可知，单一冻干保护剂时优选为蔗糖或海藻糖，优选用量范围为3%~10%。
表5 加入不同种类不同量的组合冻干保护剂后穿心莲内酯纳米混悬剂冻
干品复溶液平均粒径（冻干前平均粒径为155.9 nm）
注：“-”表示没有进行此项实验。
表6 加入不同种类不同量的组合冻干保护剂后穿心莲内酯纳米混悬剂冻干品复溶状态及时间
结合冻干品外观，复溶时间及复溶后粒径结果可知，可以选择蔗糖、海藻糖或甘露醇分别与甘油、吐温20、吐温80、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-PEG2000、维生素E聚乙二醇琥珀酸酯或PEG2000组成冻干保护剂，但制剂冻干后粒径有不同程度的增长。
实施例 9 穿心莲内酯纳米混悬剂制备——不同冻干保护剂
处方：
制剂制备后加入冻干保护剂适量（%，w/v，冻干保护剂质量/制剂总质量）
工艺：
将0.4g牛磺胆酸钠溶于蒸馏水，将此溶液转移至已装入500 g，0.1 mm氧化锆珠的湿法研磨机中，待溶液在仪器中形成循环后加入10g穿心莲内酯原料药进行研磨；于3900 rpm转速下，工作2.5 h，从出料口得到乳白色纳米混悬液；向其中加入适量冻干保护剂，分装后放入冷冻干燥机中进行冻干45 h得稳定的纳米混悬剂冻干品。将穿心莲纳米混悬剂冻干品以蒸馏水复溶，复溶液粒径结果见表7。
表7 加入不同种类不同量的组合冻干保护剂后穿心莲内酯纳米混悬剂冻干品复溶液平均粒径（冻干前粒径为142.3 nm）
所有组冻干品表面平整光滑，无分层、气泡、萎缩等现象。复溶时间均在10 s以内。结合实施例8组合冻干保护剂优选蔗糖与甘露醇组合或海藻糖与甘露醇组合，优选用量为蔗糖或海藻糖1~5%（w/v），甘露醇1~5%（w/v）。
实施例10 穿心莲内酯纳米混悬剂的外观与形态
根据实施例9制备的穿心莲内酯纳米混悬剂，当冻干保护剂为5%蔗糖，3%甘露醇时，穿心莲内酯冻干品、复溶液及稀释液见附图4。如图4所示，穿心莲内酯冻干品呈白色饼状，表面平整光滑，无分层、气泡、萎缩等现象。以蒸馏水复溶后，复溶液为均匀的乳白色纳米混悬液；以5%葡萄糖溶液稀释后，稀释液略显蓝色乳光。
冻干品的透射电镜（TEM）照片见图5。如图5所示，穿心莲内酯纳米晶呈不规则六边形状，接近圆形或椭圆形。
冻干品的扫描电镜（SEM）照片见图6。如图6所示，穿心莲内酯冻干品外观呈不规则片状。
实施例11 穿心莲内酯纳米混悬剂稀释稳定性
处方：
制剂制备后加入
工艺：
将1.2g脱氧胆酸钠溶于蒸馏水，将此溶液转移至已装入500 g，0.4 mm氧化锆珠的湿法研磨机中，待溶液在仪器中形成循环后加入6g穿心莲内酯原料药进行研磨；于3200 rpm转速下，工作2 h，从出料口得到乳白色纳米混悬液；向其中加入6g蔗糖及6g甘露醇，分装后放入冷冻干燥机中进行冻干45 h得稳定的纳米混悬剂冻干品。将穿心莲纳米混悬剂冻干品以蒸馏水复溶，并以5%葡萄糖溶液稀释20倍，静止放置，于0、1、2、4、6、8、12、24 h测定平均粒径，结果见附图7。
结果表明，穿心莲内酯纳米混悬剂复溶及稀释后稳定性良好。
实施例12 穿心莲内酯含量测定方法
Agilent1260 Infinity 高效液相色谱仪及DAD检测器（美国安捷伦公司）；色谱柱：Thermo C18（250 mm×4.6 mm，5 μm，热电公司）；检测波长：225 nm；流动相：甲醇-水（60:40，v/v）；柱温：35oC；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL。
实施例13 穿心莲内酯纳米混悬剂冻干品稳定性考察——加速试验
采用实施例11的处方及工艺制备穿心莲纳米混悬剂冻干品进行加速试验。将冻干品压盖，放置于BIC-250人工气候箱（上海博讯实业有限医疗公司）。设置温度为40±2 oC，湿度为75±5%，于0，1，2，3个月末取样，测定制剂复溶后粒径及制剂中穿心莲内酯含量变化。结果见图8。
由图8可知，穿心莲纳米混悬剂冻干品于40±2 oC，湿度为75±5%放置3个月，药物含量基本无变化，而平均粒径有一定程度增长，但增长程度在70 nm以内。
实施例14 穿心莲内酯纳米混悬剂冻干品稳定性考察——长期试验
采用实施例13制备的穿心莲纳米混悬剂冻干品进行长期试验。将冻干品压盖，于温度25±2 oC，湿度60±5%条件下放置，于0，1，2，3个月末取样，测定制剂复溶后粒径及制剂中穿心莲内酯含量变化。结果见图9。
由图9可知，穿心莲纳米混悬剂冻干品于25±2 oC，湿度为60±5%放置3个月，药物含量基本无变化，平均粒径基本无增长，综合实施例13及14结果，穿心莲纳米混悬剂冻干品应避免高温，室温下放置物理及化学性质稳定。
实施例15 穿心莲内酯纳米晶胶囊的制备
喷干工艺：
处方（穿心莲内酯纳米晶胶囊）：
采用实施例4处方工艺制备纳米混悬液，向混悬液中加入2%（w/v）甘露醇后，经过B-290小型喷雾干燥机（瑞士布琦公司）得固体粉末，即为穿心莲内酯纳米晶喷干粉。纳米晶喷干粉扫描电镜照片见图10，如图10所示，穿心莲内酯纳米晶呈球状或类球状。
称取穿心莲内酯纳米晶喷干粉，及处方量辅料，填充于胶囊壳中，即得穿心莲内酯纳米晶胶囊。
实施例16 穿心莲内酯纳米混悬剂（组方其它成分及其制备方法同实施例4）大鼠药动试验
本试验所用穿心莲纳米注射剂按实施例4的处方和工艺制备得到，其中粒径为312 nm的穿心莲纳米注射剂制备采用的是0.3 mm的氧化锆珠，研磨1 h；粒径为152 nm的穿心莲纳米注射剂制备采用的是0.1mm的氧化锆珠，研磨1 h。
给药方案：取禁食12 h的Wistar大鼠15只随机分成5组，尾静脉注射剂量为240mg·kg-1的粒径为152、312nm穿心莲内酯纳米注射剂；灌胃口服给药152 nm、312 nm的Andro纳米混悬制剂，物理混合组，静脉注射组于给药后的1、5、15、30、60、120、240min眼眶取血，灌胃口服组以给药后的5、15、30、60、120、240min眼眶取血，收集于1.5mL离心管中，迅速进行血浆样品的处理，样品于4oC保存待用。
血浆样品的处理方法：精密移取血液样品200 μL于1.5mL离心管中，加入内标（卡马西平甲醇溶液，0.01mg·mL-1）50μL，甲醇200 μL及丙酮800 μL，涡旋15 min提取后于10000 rpm离心10min，移取丙酮层600 μL，室温氮气挥干，挥干的药物以流动相100 μL复溶，涡旋5 min，于10000 rpm离心10 min，精密移取上清液20 μL进样分析。
色谱条件：
色谱柱：Hypersil BDS C18（200 mm×4.6 mm，5 μm，大连依利特）；
检测波长：225 nm；
柱温：35oC；
流速：1.0 mL/min；
进样量：10 μL；
流动相：甲醇-水（60:40，v/v）。
测得受试制剂的平均血药浓度如图11、图12所示。
表8 药动参数
组别 AUC<sub>0-t</sub>（μg/mL·min） t<sub>1/2</sub>（min） t<sub>max</sub>（min） C<sub>max</sub>（μg/mL）
静注（纳米混悬152 nm） 3012.4 7.5 1 135.6
静注（纳米混悬312 nm） 2808.7 1.9 1 166.9
口服（纳米混悬） 9821.6 101.5 15 50.9
口服（市售制剂） 8742.9 110.9 240 41.9
口服（物理混合） 2334.1 21.6 120 20.0
由图11、12及表8可知，纳米混悬静脉注射组消除较快。口服组比较，纳米混悬tmax最小，AUC最大，与市售分散片及原料药物理混合相比可体现其优势。

Claims (12)

1.一种穿心莲内酯纳米混悬剂，其特征在于，包括有效平均粒径小于1000 nm的穿心莲内酯微粒与至少一种稳定剂，冷冻干燥或喷雾干燥后以固体形式储存或作为中间剂型进一步制成其他剂型制剂。
2.如权利要求1所述的穿心莲内酯纳米混悬剂组合物，其特征在于，所述的穿心莲内酯含量为0.05%~8%（w/v）。
3.根据权利要求1所述的穿心莲内酯纳米混悬剂，其特征在于，冷冻干燥过程中选用的冻干保护剂为蔗糖、海藻糖、麦芽糖、甘露醇、甘油、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇（PEG）2000、聚乙二醇2000吐温20、吐温80、维生素E聚乙二醇琥珀酸酯中的一种或其任意混合物。
4.根据权利要求3所述的穿心莲内酯纳米混悬剂，其特征在于，单一冻干保护剂为蔗糖或海藻糖，用量为3~10%（w/v）。
5.根据权利要求3所述的穿心莲内酯纳米混悬剂，其特征在于，组合冻干保护剂为蔗糖与甘露醇组合或海藻糖与甘露醇组合，用量为蔗糖或海藻糖1~5%（w/v），甘露醇1~5%（w/v）。
6.根据权利要求5所述的穿心莲内酯纳米混悬剂，其特征在于，组合冻干保护剂为蔗糖5%（w/v），甘露醇3%（w/v）。
7.根据权利要求1所述的穿心莲内酯纳米混悬剂，其特征在于，喷雾干燥过程中的喷干支持剂包括糊精、淀粉、微晶纤维素、二氧化硅、甘露醇、乳糖、麦芽糖中的一种或其任意混合物。
8.如权利要求1-6任一所述的穿心莲内酯纳米混悬剂，其特征在于，所述的穿心莲内酯纳米混悬剂冷冻干燥后，复溶后的穿心莲内酯纳米粒平均粒径小于约1000 nm、小于约900nm、小于约800 nm、小于约700 nm、小于约650 nm、小于约600 nm、小于约550 nm、小于约500nm、小于约450 nm、小于约400 nm、小子约350 nm、小于约300 nm、小于约250 nm、小于约200nm、小于约150 nm、小于约100 nm。
9.如权利要求1或7任一所述的穿心莲内酯纳米混悬剂，其特征在于，所述的穿心莲内酯纳米混悬剂喷雾干燥后，复溶后的穿心莲内酯纳米粒平均粒径小于约1000 nm、小于约900 nm、小于约800 nm、小于约700 nm、小于约650 nm、小于约600 nm、小于约550 nm、小于约500 nm、小于约450 nm、小于约400 nm、小子约350 nm、小于约300 nm、小于约250 nm、小于约200 nm、小于约150 nm、小于约100 nm。
10.一种如权利要求1所述的穿心莲内酯纳米混悬剂的应用，其特征在于，所述穿心莲内酯纳米混悬剂可以配制用于胃肠外注射、口服、阴道、鼻、直肠、眼部、口腔、脑池内、腹膜内或局部给药等不同给药途径的制剂。
11.一种如权利要求1所述的穿心莲内酯纳米混悬剂的应用，其特征在于，所述穿心莲内酯纳米混悬剂可以制备成固体、半固体或液体制剂。
12.如权利要求1所述的穿心莲内酯纳米混悬剂，其特征在于，其作为液体制剂用药时，使用前可用水或5%葡萄糖溶液复溶和稀释，复溶和稀释后的穿心莲内酯纳米混悬液平均粒径小于约1000 nm、小于约900 nm、小于约800 nm、小于约700 nm、小于约650 nm、小于约600nm、小于约550 nm、小于约500 nm、小于约450 nm、小于约400 nm、小子约350 nm、小于约300nm、小于约250 nm、小于约200 nm、小于约150 nm、小于约100 nm。
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