CN103642941A - 一种乙型肝炎病毒（hbv）核酸定量检测试剂盒 - Google Patents

一种乙型肝炎病毒（hbv）核酸定量检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

一种应用于生物医学临床诊断领域中的乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒，试剂盒包括磁珠法核酸提取试剂盒和HBV核酸扩增试剂盒，其中磁珠法核酸提取试剂盒包括裂解结合液、漂洗液、洗脱液、磁珠液；HBV核酸扩增试剂盒包括HBV-PCR反应液、酶混合液、HBV-内标、HBV定量参考品1-4、阴性质控品、临界阳性质控品、强阳性质控品。该发明操作简便快速、成本低廉、检测灵敏度高、重复性好、引物和探针保守性高、特异性强、覆盖乙型肝炎病毒不同的亚型或变种、有利于提高乙肝检测的准确性和特异性、引入高效的内标系统、解决靶基因和内标同时扩增而导致的相互抑制和干扰等问题、能够高效的监控整个PCR扩增整个过程、避免出现假阴性结果。

Description

一种乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测试剂盒
技术领域
本发明涉及生物医学临床诊断领域中的一种乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒。
背景技术
乙型肝炎仍是全球最严重的公共卫生问题之一，全球前10位疾病的死因，乙肝占第七位。据世界卫生组织的资料表明,全世界约30%的人口,即20亿人有感染乙型肝炎病毒的血清学证据,其中3.5亿人为慢性感染,每年至少有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和肝细胞癌。而中国是世界公认的乙型肝炎大国，我国的乙肝病毒携带者达一亿二千万人，慢性乙肝肝炎患者有二千万，每年因此死亡的人数近50万。对于乙肝病毒的预防和诊疗是国家传染病控制的头等大事。
HBV酶联免疫试剂是目前诊断乙肝的主要手段。乙肝“两对半”酶联免疫试剂目前已经普遍用于临床，急诊，血液筛查等各个领域。但是，酶联免疫方法作为一种间接滞后的检测方法，他所检测的目标是人体内产生的抗体而不是病原体本身。因此，虽然酶联免疫方法经过几代的改良和进化，在灵敏度、特异性、精确度和稳定性等方面有了巨大的提高。但是任然不能消除对“窗口期”标本的漏检。所谓“窗口期”，是指从感染病原体开始，直至用酶联免疫学检测方法能够检测到该病原体存在为止的这一段时间。乙肝的“窗口期”比较长，大约为59天，因此，HBV酶联免疫试剂容易造成漏检，不利于乙肝的早期诊断。近年来核酸分子检测技术在检验医学和临床研究中显示出强大的优势，相比较免疫诊断技术具有灵敏度高、特异性强、诊断快速等优点。血清中的HBV DNA是病毒复制和肝炎进程的确切标志，所以血清中HBV DNA的检测，已成为诊断乙肝的“金标准”方法。近几年来，通过荧光定量PCR方法直接检测HBV DNA已经成为一种通用乙肝医学检测方法，大大提高了乙肝的检测准确性，有利于疾病的早期诊断，可将“窗口期”大大的缩短。目前，乙肝荧光定量PCR检测目前已经是通过国家认证临床PCR实验室的常规检测项目之一。乙肝荧光定量PCR检测在乙肝病人的康复治疗过程中具有用药指导意义，同时，乙肝病毒载量的精确判读，也为患者提供了准确的康复治疗方案。
目前，国内已有多种基于荧光定量PCR技术的乙肝定量检测试剂盒应用于临床检测中，这些试剂盒所提供的乙肝核酸提取方法主要是糖元沉淀法和离心柱法。该类试剂盒具有一定的优点，但是，存在很多不足之处。如糖元沉淀法虽然操作比较简单，但是无法有效去除复杂样本(如高血脂、高胆红素，溶血等样本)中的PCR扩增抑制物，容易导致出现检测假阴性，导致样本的漏检。离心柱法虽然无需高速离心，但是需频繁更换离心管，用时长，操作繁琐，容易导致核酸“气溶胶”污染。因此，研究开发一种乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒是目前急待解决的新课题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒，该发明从根本上解决现有乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量PCR技术存在的灵敏度低、准确性差等问题，其设计的TaqMan荧光探针具有灵敏度高，特异性强、稳定性好的优点，核酸DNA提取方法简单，核酸纯度高，成本较低，特别适用于乙型肝炎病毒（HBV）精确的定量检测。
本发明的目的是这样实现的：一种乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒，试剂盒包括磁珠法核酸提取试剂盒和HBV核酸扩增试剂盒，其中磁珠法核酸提取试剂盒包括裂解结合液、漂洗液、洗脱液、磁珠液；HBV核酸扩增试剂盒包括HBV-PCR反应液、酶混合液、HBV-内标、HBV定量参考品1-4、阴性质控品、临界阳性质控品、强阳性质控品；所述磁珠法核酸提取试剂盒中裂解结合液组成为含有十二烷基硫酸钠0.5-2.5%，Triton X-1000.5-2.0ml/100ml，异硫氰酸胍2-6.0mol/L，1-10mM/L EDTA（PH7.5）；所述磁珠法核酸提取试剂盒中漂洗液组成为含有Triton X-1000.5-2.0ml/100ml，氯化钠0.1-0.3mol/L，60-80%乙醇；所述磁珠法核酸提取试剂盒中洗脱液组成为含有10mmol/LTris.HCl（PH8.3），0.01-0.05%Prolin300；所述磁珠法核酸提取试剂盒中磁珠液组成为直径为1μm的氧化硅超顺纳米磁珠，浓度为10-40mg/ml；所述HBV核酸扩增试剂盒中HBV-PCR反应液包括用于检测靶基因和内标的探针、用于扩增靶基因和内标的上游引物以及下游引物、PCR缓冲液；HBV核酸扩增试剂盒中用于检测靶基因的探针序列为：5'-CCTTCTCATCTGCCGGACCGTGTGCACTTC-'3（SEQ ID NO:1），5'端标记为FAM荧光发生基团，3'端标记为BHQ1荧光淬灭基团；用于内标检测的探针序列为：5'-CAGACTCCACATCGACCCTACCCGACTGC-'3（SEQ ID NO:2），5'端标记为HEX荧光发生基团，3'端标记为BHQ1荧光淬灭基团；用于扩增靶基因的上游引物序列为：5'-CGCACCTCTCTTTACGCGGTC-'3（SEQ ID NO:3）；用于扩增靶基因的下游引物序列为：5'-CGTTCACGGTGGTTTCCATGC-'3（SEQ ID NO:4）；用于扩增内标的上游引物序列为：5'-TTCGATCTCCGTCGAACCTTG-'3（SEQ ID NO:5）；用于扩增内标的下游引物序列为：5'-TTCTCAGGACTCCAGTCGCTG-'3（SEQ ID NO:6）；所述HBV核酸扩增试剂盒中用于检测靶基因的探针使用浓度为5-20pmol，优选靶基因探针使用浓度为8pmol；所述用于检测内标的探针使用浓度为5-20pmol，优选内标探针使用浓度为8pmol；所述用于检测靶基因的上下游引物使用浓度为10-30pmol，优选靶基因的上下游引物使用浓度为20pmol；所述用于检测内标的引物使用浓度为5-20pmol，优选内标引物使用浓度为8pmol；所述HBV核酸扩增试剂盒中PCR缓冲液组成为30mmol/L Tris-HCl（PH8.3），10mmol/L(NH4)2SO4，30mmol/LKCl，4.5mmol/LMgCl2，0.15mmol/L dNTPs；所述HBV核酸扩增试剂盒中酶混合液包括热启动Taq酶、尿嘧啶糖基化酶（UNG）；其中热启动Taq酶的用量为3-8U/人份，尿嘧啶糖基化酶的用量为0.05-0.2U/人份；所述试剂盒中HBV-内标是将序列5'-TTCGATCTCCGTCGAACCTTGCACTCTGCATCCTGGACTCATGCTGACTGCAGACTCCACATCGACCCTACCCGACTGCTCTACTGCACTCCTGCGTCATCACGCGACTGGAGTCCTGAGAA-'3（SEQ IDNO:7）插入到pUC18T载体而构成的重组体；HBV内标质粒使用浓度为100-500copies/次，优选使用浓度为200copies/次；所述试剂盒中阴性质控品为灭活阴性人源血浆，HBV定量参考品1-4，临界阳性质控品和强阳性质控品均由HBV病毒血清样本稀释而成；浓度分别为5.0x105，5.0x104，5.0x103，5.0x102，1.0x102，1.0x105IU/ml，HBV病毒血清为灭活病毒血清样本；所述试剂盒需要进行PCR反应，其扩增的最佳反应温度和时间为：50℃2min，1个循环；95℃3min，1个循环；最后94℃10s，60℃30s，42个循环采集荧光信号；所述试剂盒检测样本类型为血清和血浆；试剂盒的检测灵敏度为10IU/ml，检测线性范围为30-30x108IU/ml。
本发明的要点在于一种乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒，其基本原理是：首先采用纳米磁珠法提取血清、血浆样品中HBV DNA作为扩增模板，然后应用TaqMan荧光探针技术完成对该模板实时荧光定量PCR检测过程。同时扩增体系中引入了高效的内标系统，通过检测内标是否正常来监测待测样本中是否具有PCR抑制物，避免PCR假阴性。其中，通过应用专业生物信息学软件，分析比较了HBV基因序列，设计了高保守性、特异性和高效性的TaqMan荧光探针和引物以及内标的探针和引物。所述靶基因和内标探针分别标记FAM和HEX荧光报告基团；所述实时荧光定量PCR产物在70-130个碱基对范围。
本发明试剂盒采用吸附效果好、易于纯化的磁珠法提取血清、血浆样品中乙肝病毒核酸作为模板，应用TaqMan荧光探针技术完成对该模板荧光定量PCR检测过程。同时在反应体系中添加了高效的内标，通过检测内标是否正常来监测待测样本中是否具有PCR抑制物，避免PCR假阴性的存在。
本发明的优点在于：
1、引物和探针保守性高、特异性强、可以覆盖乙型肝炎病毒不同的亚型或变种，有利于提高乙肝检测的准确性和特异性。
2、检测灵敏度高，重复性好。本发明使用自主开发的磁珠法核酸提取技术，能够从样品中获得高纯度乙型肝炎病毒（HBV）核酸，消除提取物对PCR反应的干扰，加大了检测样本量，提高了检测灵敏度和稳定性。
3、引入了高效的内标系统，解决了靶基因和内标同时扩增而导致的相互抑制和干扰等问题，能够高效的监控整个PCR扩增整个过程，避免出现假阴性结果。
4、本发明操作简便、快速、成本低廉，并且易于开发为自动化检测系统，以便对大量样品的进行高通量筛检。所检测的样品中包括人源或动物源的血液、精液、唾液。适合常规血液样品的检测，也适合自动化和高通量检测。
一种乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒与现有技术相比，具有操作简便快速、成本低廉、检测灵敏度高、重复性好、引物和探针保守性高、特异性强、覆盖乙型肝炎病毒不同的亚型或变种、有利于提高乙肝检测的准确性和特异性、引入高效的内标系统、解决靶基因和内标同时扩增而导致的相互抑制和干扰等问题、能够高效的监控整个PCR扩增整个过程、避免出现假阴性结果等优点，将广泛的应用于生物医学临床诊断领域中。
附图说明
下面结合附图及实施例对本发明进行详细说明。
图1是本发明检测中检所HBV国家标准品的检测浓度和其理论浓度的拟合曲线图。
图2是本发明对四种浓度HBV阳性血清样本的重复性测试检测结果图。
图3是本发明对10IU/ml灵敏度血清样本的重复测试检测结果图。
图4是本发明检测中检所HBV国家标准品的检测结果图。
图5是本发明检测内标检测结果图。
具体实施方式
以下实施例将有助于对本发明的了解，但这些实施例仅为了对本发明加以说明，本发明并不限于这些内容。
实施例一
HBV DNA的荧光定量PCR检测实例
（1）试剂准备
a.PCR反应液的配制
PCR缓冲液组成为30mmol/L Tris-HCl（PH8.3），10mmol/L(NH4)2SO4，30mmol/LKCl，4.5mmol/LMgCl2，0.15mmol/L dNTPs。扩增靶基因的上游引物以及下游引物，使用浓度为20pmol，靶基因检测的探针使用浓度为8pmol，内标的上游引物以及下游引物使用浓度为8pmol，内标探针使用浓度为8pmol。
b.按比例(裂解结合液400μl/人份+内标0.1μl/人份)取相应量的裂解结合液及内标，充分混匀成裂解结合液-mix，瞬时离心后备用。
c.根据待测样本、阴性对照、阳性对照、临界阳性和工作标准品1-4的量，按比例(PCR反应液19μl/人份+酶混合液1.0μl/人份)，充分混匀成PCR-mix，瞬时离心后备用。酶混合液组成包括热启动Taq酶4U、尿嘧啶糖基化酶（UNG）0.2U。
（2）标本提取
a.取适量1.5ml离心管，分别标记阴性对照、阳性对照、临界阳性对照、工作标准品1-4及待测样本，每管中加入400μl裂解结合液，裂解结合液组成为含有十二烷基硫酸钠0.5-2.5%，Triton X-1000.5-2.0ml/100ml，异硫氰酸胍2mol/L-6.0mol/L，1-10mM EDTA（PH7.5）。
b.每管加入200μl待测样本或阴性对照、阳性对照、临界阳性对照、工作标准品1-4；每管加入10μl磁珠悬液，震荡混匀10秒钟后，室温静置10分钟，瞬时离心；
c.将离心管置于磁力架上吸附约2分钟，弃掉上清液，瞬时离心，吸干残液；
d.加入600μl漂洗液，所述漂洗液组成为含有Triton X-1000.5-2.0ml/100ml，氯化钠0.1-0.3mol/L，60-80%乙醇。用移液器反复吸打10次后，瞬时离心。在磁力架上吸附2分钟，弃掉上清液，然后瞬时离心，将离心管再置于磁力架上吸附约2分钟，吸干残液；
e.加入40μl洗脱液，所述洗脱液为含有10mmol/L Tris.HCl（PH8.3），0.01-0.05%Prolin300。震荡混匀10秒钟，然后室温静置2分钟；将离心管放置在磁力架上吸附2分钟，吸出上清液。
（3）加样和检测
向含有PCR反应液的反应管中，分别加入提取的样本、阴性对照、阳性对照、临界阳性对照、及工作标准品各30μl，盖紧管盖，置于PCR仪上进行检测。扩增程序如下：
以ABI7500为例，设置如表1：
表1PCR扩增程序
检测通道选择：荧光信号收集设定为F1（FAM）和F2（VIC）通道，然后设置四个工作标准品的浓度。
（4）结果判定
a.反应结束后保存检测数据文件；
b.分析条件设置：点击Analysis按钮进入分析界面，手动调整Baseline；
c.检测样本中30IU/ml≤HBV DNA≤3×108IU/ml，结果有效，可直接报告阳性及相应拷贝量；
d.检测样本中HBV DNA＞3×108IU/ml，即可直接报告为＞3×108IU/ml，也可用正常人HBV DNA阴性血清按10倍梯度做相应稀释，使其拷贝量在1×105-1×107IU/ml范围内再重新测定，测定结果应按稀释倍数进行校正；
e.检测样本中HBV DNA的拷贝量为10-30IU/ml时，同时，内标检测为阳性且Ct≤35，则报告为HBV DNA阳性，HBV DNA浓度定量值仅供参考。
f.检测样本中HBV DNA的拷贝量＜10IU/ml，同时，内标检测为阳性且Ct≤35，则报告为灰区，HBV DNA浓度低于试剂盒检测下限。
g.若定量检测结果不显示，同时，内标检测为阳性且Ct≤35，则报告为HBVDNA阴性。
（5）质量控制
标准曲线的相关系数R≥0.980。阳性对照的HBV DNA拷贝量应为5×104-5×105IU/ml，临界阳性对照拷贝量应为50-500IU/ml，阴性对照的Ct值应不显示，同时内标的Ct≤35，试验视为有效。
（一）国家标准品测试
以中检所乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量标准品血清（L0-L6）为待测样本，采用本发明方法进行检测，最后分析中检所HBV核酸定量标准品的检测值和理论值之间的双对数线性关系。检测结果见图1和表2，理论浓度和检测浓度的双对数曲线线性相关系数（R2）为0.998，符合标准品的要求，即线性相关系数（R2）≥0.97。表明我们的试剂盒准确可靠，可以溯源到到中检所国家标准品。
表2国家标准品检验结果
线性灵敏度参考品 质量标准（IU/ml） 理论浓度对数值 实际检测值 检测浓度对数值
L0 (0.7762-6.165)E+08 8.342 3.19E+08 8.504
L1 (0.1479-1.175)E+08 7.619 3.57E+07 7.553
L2 (0.1585-1.259)E+07 6.649 4.76E+06 6.678
L3 (0.1659-1.318)E+06 5.672 4.33E+05 5.636
L4 (0.1820-1.479)E+05 4.715 3.95E+04 4.597
L5 (0.1514-1.230)E+04 3.636 4.42E+03 3.645
L6 (0.3890-3.090)E+02 2.043 1.23E+02 2.090
（二）样本的重复性测试
以中检所乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量标准品血清（L0-L6）标定的HBV阳性血清为初始样本，用血清将其稀释成为1x106，1x105，1x104和1x103IU/ml四个梯度样本。每个样本重复测试三次，结果如图.2所示。CT值的变异系数分别为0.51%，0.32%，0.48%，0.37%，变异系数均控制在1%以内，表明运用本发明方法检测血清样本的重复性很好。
（三）灵敏度样本测试
以中检所乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量标准品血清（L0-L6）标定的HBV阳性血清为初始样本，用血清将其稀释到10IU/ml制备成为灵敏度血清样本，样本重复测试20次，阳性检出率为100%，结果如图.3。
（四）内标干扰测试
以中检所乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量标准品血清（L0-L6）为待测样本，在测试样本中添加HBV内标，每个样本中内标添加浓度为200copies。测试结果表明，在L0-L6这七个浓度范围内，内标检测信号稳定，内标阳性检出率为100%。并且内标没有对低浓度的L6（浓度约为100IU/ml）样本检测带来负面影响。同时高浓度的L0（浓度约为3x108IU/ml）样本也没有对内标扩增产生影响，结果如图.4。测试结果表明，运用本发明的内标能够对PCR扩增假阴性起到高效的监控作用。
综上，本发明与目前国内外常用的煮沸法和柱提法相比，无论是在灵敏度上，还是在操作的简便程度上都有很大的优势。本发明适用于临床血液检测和诊断，监测和评价药物的疗效，也可用于中心血站血液筛查以及流行病学调查。

Claims (10)

1.一种乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒，其特征在于：试剂盒包括磁珠法核酸提取试剂盒和HBV核酸扩增试剂盒，其中磁珠法核酸提取试剂盒包括裂解结合液、漂洗液、洗脱液、磁珠液；HBV核酸扩增试剂盒包括HBV-PCR反应液、酶混合液、HBV-内标、HBV定量参考品1-4、阴性质控品、临界阳性质控品、强阳性质控品。
2.如权利要求1所述的一种乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述磁珠法核酸提取试剂盒中裂解结合液组成为含有十二烷基硫酸钠0.5-2.5%，Triton X-100 0.5-2.0ml/100ml，异硫氰酸胍2-6.0mol/L，1-10mM/L EDTA（PH7.5）；所述磁珠法核酸提取试剂盒中漂洗液组成为含有TritonX-100 0.5-2.0ml/100ml，氯化钠0.1-0.3mol/L，60-80%乙醇；所述磁珠法核酸提取试剂盒中洗脱液组成为含有10mmol/L Tris.HCl（PH8.3），0.01-0.05%Prolin300；所述磁珠法核酸提取试剂盒中磁珠液组成为直径为1μm的氧化硅超顺纳米磁珠，浓度为10-40mg/ml。
3.如权利要求1所述的一种乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述HBV核酸扩增试剂盒中HBV-PCR反应液包括用于检测靶基因和内标的探针、用于扩增靶基因和内标的上游引物以及下游引物、PCR缓冲液；HBV核酸扩增试剂盒中用于检测靶基因的探针序列为：5'-CCTTCTCATCTGCCGGACCGTGTGCACTTC-'3（SEQ ID NO:1），5'端标记为FAM荧光发生基团，3'端标记为BHQ1荧光淬灭基团；用于内标检测的探针序列为：5'-CAGACTCCACATCGACCCTACCCGACTGC-'3（SEQ ID NO:2），5'端标记为HEX荧光发生基团，3'端标记为BHQ1荧光淬灭基团；用于扩增靶基因的上游引物序列为：5'-CGCACCTCTCTTTACGCGGTC-'3（SEQ ID NO:3）；用于扩增靶基因的下游引物序列为：5'-CGTTCACGGTGGTTTCCATGC-'3（SEQ ID NO:4）；用于扩增内标的上游引物序列为：5'-TTCGATCTCCGTCGAACCTTG-'3（SEQ ID NO:5）；用于扩增内标的下游引物序列为：5'-TTCTCAGGACTCCAGTCGCTG-'3（SEQ ID NO:6）。
4.如权利要求1或3所述的一种乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述HBV核酸扩增试剂盒中用于检测靶基因的探针使用浓度为5-20pmol，优选靶基因探针使用浓度为8pmol；所述用于检测内标的探针使用浓度为5-20pmol，优选内标探针使用浓度为8pmol；所述用于检测靶基因的上下游引物使用浓度为10-30pmol，优选靶基因的上下游引物使用浓度为20pmol；所述用于检测内标的引物使用浓度为5-20pmol，优选内标引物使用浓度为8pmol。
5.如权利要求1所述的一种乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述HBV核酸扩增试剂盒中PCR缓冲液组成为30mmol/L Tris-HCl（PH8.3），10mmol/L(NH4)2SO4，30mmol/LKCl，4.5mmol/LMgCl2，0.15mmol/LdNTPs。
6.如权利要求1所述的一种乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述HBV核酸扩增试剂盒中酶混合液包括热启动Taq酶、尿嘧啶糖基化酶（UNG）；其中热启动Taq酶的用量为3-8U/人份，尿嘧啶糖基化酶的用量为0.05-0.2U/人份。
7.如权利要求1所述的一种乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中HBV-内标是将序列5'-TTCGATCTCCGTCGAACCTTGCACTCTGCATCCTGGACTCATGCTGACTGCAGACTCCACATCGACCCTACCCGACTGCTCTACTGCACTCCTGCGTCATCACGCGACTGGAGTCCTGAGAA-'3（SEQ IDNO:7）插入到pUC18T载体而构成的重组体；HBV内标质粒使用浓度为100-500copies/次，优选使用浓度为200copies/次。
8.如权利要求1所述的一种乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中阴性质控品为灭活阴性人源血浆，HBV定量参考品1-4，临界阳性质控品和强阳性质控品均由HBV病毒血清样本稀释而成；浓度分别为5.0x105，5.0x104，5.0x103，5.0x102，1.0x102，1.0x105IU/ml，HBV病毒血清为灭活病毒血清样本。
9.如权利要求1所述的一种乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒需要进行PCR反应，其扩增的最佳反应温度和时间为：50℃2min，1个循环；95℃3min，1个循环；最后94℃10s，60℃30s，42个循环采集荧光信号。
10.如权利要求1所述的一种乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒检测样本类型为血清和血浆；试剂盒的检测灵敏度为10IU/ml，检测线性范围为30-30x108IU/ml。
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