CN103609831B - 一种制备银杏蛋白肽的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种银杏深加工的方法，具体公开了一种制备银杏蛋白肽的方法，主要包括以下步骤：（1）原料处理；（2）银杏粉的制备；（3）银杏蛋白粉制备；（4）一次酶解；（5）二次酶解的加工方法获得银杏糖肽、氨基酸平衡肽和银杏多肽产品，开拓了银杏资源的利用，也为开发特殊功能产品提供了新的产品资源。本发明方法工艺独特、简单，生产成本低，产品安全无毒副作用，开辟了银杏多肽制备的新工艺，开拓了银杏利用新领域，也为开发特殊功能产品提供了新的产品资源，本发明方法制得的银杏多肽产品可作为开发保健食品、食品添加剂和医药原料及辅料的原材料应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种银杏深加工的方法，具体涉及一种制备银杏蛋白肽的方法。
背景技术
银杏俗称白果，含有丰富的蛋白质、淀粉和多种生理活性成分，白果含有淀粉62.4%-67%、蛋白质11.3%、脂肪2.6%、蔗糖5.2%、还原糖1.1%、核蛋白0.26%和矿物质3%。白果中含有17种氨基酸，总量为10.77%，其中人体必需氨基酸为7种，含量为3.42%，占总氨基酸含量的31.8%，药效氨基酸9种，含量为7.25%，占总氨基酸含量67.3%，半必需氨基酸4种，含量为1.33%，占总氨基酸含量12.3%；白果中含有25种矿物元素，常量元素占总矿物质元素的99.4%，主要是Ca、Mg、P、K；微量元素占总矿物质的0.56%，主要是Fe、Na、Zn、Cu、Mn、Ba、Sr；充分提取利用银杏中具有的营养功能和生理活性物质已成为研究和开发的热点，银杏具有的营养功能和生理活性已被开发具有抗疲劳、抗氧化、降低胆固醇、降血压、调节血糖等的功能性保健品供应市场。小分子肽具有独特的生理活性，由于肽从胃到小肠移行速度快、吸收快，在医院外科手术病人、重度烧伤病人以及创伤性休克等重症病人的营养补充已采用流食、半流食的肽类营养制剂，目前还有将肽类开发为运动食品、饮料、药用辅料及功能性保健品应用的产品。
银杏中的蛋白质、淀粉含量丰富，在银杏制品的提取过程中均作为废弃物被丢弃，给资源造成了浪费，再之，银杏果仁的加工利用，大都属于低端普通食用产品，其银杏中的营养性成分利用率和附加值较低，造成资源浪费。
现有技术如中国专利CN102422976A公开的一种银杏多肽的制备方法，其技术特征是，将去壳的银杏果实采用醇提后，进行粗磨和细磨制得浆液后，采用500kDa的超滤装置去除杂质制得银杏多肽水解液，然后在20kDa的超滤膜进行分离后，再经通过100Da的纳滤膜进行分离，并进行浓缩后，在50℃的条件下进行真空干燥，得银杏肽粉，从现有技术案中可以看出，工艺繁杂，收得率低，生产成本高，然而二次膜分离将其未分解的蛋白质及淀粉仍作为废弃物被滤出，不能被充分利用，其银杏的利用率相对较低，不能给银杏的开发利用带来较为很好的利用效率和经济效益。
发明内容
本发明的目的针对现有技术的不足，提供一种以银杏为原料通过打浆和水解制得银杏蛋白粉，再经一、二次酶解后制得银杏多肽的方法，获得了对银杏进行深加工制得银杏糖肽、氨基酸平衡肽和银杏多肽的方法。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
一种制备银杏蛋白肽的方法，它包括以下工艺步骤：
（1）原料处理 将脱壳后的银杏果仁放入100℃沸水中漂烫2min后，捞入50-60℃热水中轻搓漂洗脱去内种皮后，用流动水冲洗干净，再迅速浸没于含有0.5%的食盐、0.25%的柠檬酸和0.1%的抗坏血酸水溶液中进行护色，处理30min后捞出，沥干水分；
（2）银杏粉的制备 将步骤（1）处理好的银杏果仁先放入砂轮磨中加入果仁重量8倍的含有0.3%食盐和0.2%柠檬酸的纯净水进行粗磨，磨成均匀的浆汁后，立即送入胶体磨中进行细磨，细磨15-25min，使磨浆成为均匀的乳状浆液，将细磨过的乳状浆液送入离心过滤机中进行离心过滤，浆渣加2倍量同上条件的纯净水，再送入胶体磨细磨1次，经离心过滤后，再将两次经过过滤的浆液合并，再用300目筛网过滤1次，经干燥后得银杏粉；
（3）银杏蛋白粉制备 将步骤（2）获得的银杏粉加入纯净水，按重量比为1：20的配料比混合，充分搅拌，用1moL/L氢氧化钠调节PH至6.6-7.2之间，浸泡3h后过滤，取滤液，以0.5moL/L盐酸调节PH4-5之间，煮沸3h，静置沉淀，除去上层泡沫和溶液后，得沉淀物，再将沉淀物，按重量比加入5倍量的纯净水，搅匀，冷至38-45℃时，离心甩干得湿银杏蛋白，经干燥后得银杏蛋白粉；
（4）一次酶解 将步骤（3）得到的银杏蛋白粉溶解，溶解的条件为银杏蛋白粉在水中的重量浓度为2%、控制温度为50℃、PH值为6.5-6.9进行溶解后，先用中性蛋白酶（SUKAPRO NE）进行酶解，其中条件为中性蛋白酶的重量为银杏蛋白溶液重量的1.5-3%，PH值为6.6-6.8，保温48-52℃，酶解时间为2.5-4小时，得中性蛋白酶酶解液，然后将酶解液再加入复合风味蛋白酶进行酶解，其中条件为：复合风味蛋白酶的重量为银杏蛋白溶液重量的1.5-3%，PH值自然（不需调整）、保温48-52℃，酶解时间为4.5-8.5小时，得酶解液，然后将酶解液以0.5moL/L盐酸调节PH值在3.6-4.6之间，静置使自然冷却后，进行离心分离得上清液和沉淀物；
（5）二次酶解 将步骤（4）得到的上清液用复混（配）蛋白酶进行第二次酶解，然后加热至95℃灭酶，经浓缩、喷雾干燥得银杏糖肽；将步骤（4）得到的沉淀物用复混（配）蛋白酶进行第二次酶解，然后加热至95℃灭酶，经离心分离取上清液进行喷雾干燥得氨基酸平衡肽；取沉淀物进行真空干燥得银杏多肽。
所述步骤（5）中的上清液酶解条件是PH值为6.6-6.8、温度为48-52℃，酶解时间为6.5-8.5小时；酶解时，复混蛋白酶的重量为上清液重量的1.55-2.6%。
所述步骤（5）中的沉淀物酶解时的投料重量浓度为1.5-2%；其中酶解条件是温度为48-52℃，酶解时间为7-9小时；酶解时，复混蛋白酶的重量为沉淀物溶解液的重量的0.75-1.56%。
所述步骤（5）中的复混蛋白酶，是由中性蛋白酶与复合风味蛋白酶按1：1.5重量份复配混合制得。
采用本发明权利要求1的方法获得银杏糖肽产品。
采用本发明权利要求1的方法获得氨基酸平衡肽产品。
采用本发明权利要求1的方法获得银杏多肽产品。
中性蛋白酶（SUKAPRO NE），蛋白酶（Neutrase）是由淀粉液化芽孢杆菌族生产的内蛋白酶制剂，被广泛用于动、植物的蛋白质加工业，以改变蛋白质的水结合能力、乳化能力、发泡能力及其粘度，能将蛋白质水解为低分子蛋白胨、眎 、多肽及氨基酸，中性蛋白酶由中性蛋白酶高产菌株--杆菌（BacuiLLus）深层发酵而成，在中性条件下具有较高的活性，能在中性条件下水解植物蛋白质中的缩氨酸键，释放氨基酸或者多肽，中性蛋白酶适用PH范围是6.0-8.0，最适PH值6.8-7.0，温度范围是10℃-60℃，最适温度45-50℃，然而根据本发明对比试验结果表明，结果显示在温度为48-52℃、PH值为6.6-6.8时酶解效果最佳，其发酵液的澄清度最好。
复合风味蛋白酶（Flavourzyme）是由米曲霉生产的内蛋白酶和外蛋白酶混合制剂（内蛋白酶为切割多肽键内部的肽键；外蛋白酶则为切割多肽链一端的肽键）再外加一些风味物质复配而成的复合风味蛋白酶，其特点是酶解后期风味优化，去除苦味，改善口感，可以制取风味良好的水解产品，提高产品质量，本产品含有氨肽酶，羧肽酶，通过末端水解多肽，可提高水解度。复合风味蛋白酶最适PH值是6.0-7.0，温度50-53℃，其酶解条件与中性蛋白酶相本相似。
根据中性蛋白酶与复合风味蛋白酶的特性，将二者复混配合使用可取得最好的使用效果。
本发明的有益效果
1.本发明首先通过对银杏果仁进行加工分离处理制得银杏粉，然后将银杏粉采用碱液溶解，再用HCl调节PH值4-5之间煮沸3小时进行水解、分离制得银杏蛋白粉，再将银杏蛋白粉通过中性蛋白酶酶解和复混蛋白酶二次酶解工艺，获得了两种组成不同的银杏糖肽、氨基酸平衡肽和一个混合肽即银杏多肽新产品。
2.本发明步骤（5）中采用的复混蛋白酶进行二次酶解工艺，该复混酶是由中性蛋白酶与复合风味蛋白酶按1：1.5的重量分复配混合而成，该工艺使用的好处在于，二种酶的酶解条件相近，可减少工艺的繁杂调整过程，有利于节约原材料、节省时间，提高其稳定性；复合风味蛋白酶是由米曲霉生产的内蛋白酶和外蛋白酶的混合制剂，其内蛋白酶为切割多肽内部的肽键，而外蛋白酶则为切割多肽链一端的肽键，有利多肽的产生，提升银杏酶解过程多肽的含量和提取率，另外复合风味蛋白酶的应用还能改善酶解产物的风味，去除苦味，改善口感，使制得的产品风味良好，有利于提高产品质量。
3.本发明方法采取从银杏原料入手开辟银杏多肽制备新工艺，实现了产品概念的内在本质和技术创新，所制得的银杏糖肽、氨基酸平衡肽及银杏多肽性质稳定，不受PH值和加热的影响，本发明利用银杏果实制备的银杏糖肽、氨基酸平衡肽银杏多肽和银杏多肽，开拓了银杏利用新领域，也为开发特殊功能产品提供了新的产品资源。
4.本发明的制备技术，工艺独特，工艺简单，生产成本低，产品安全而无毒副作用，是营养和辅助医疗的有前景的原料制品，可作为开发保健食品、食品添加剂和医药原料及辅料的原材料应用。
具体实施方式
实施例1
取成熟新鲜的银杏果，经脱壳后得果仁，将果仁放入100℃沸水中漂烫2min后，捞入50-60℃热水中，轻搓漂洗脱去内种皮后，用流动水冲洗干净，再迅速浸没于含有0.5%的食盐0.25%的柠檬酸和0.1%的抗坏血酸水溶液中进行护色处理30min，捞出并沥干水分；然后将银杏果仁采用砂轮磨进行粗磨，粗磨时加入果仁重量的8倍含有0.3%食盐和0.2%柠檬酸的水溶液，磨成均匀的浆汁后，立即送入胶体磨中进行细磨，细磨15-25min，使磨浆成为均匀的乳状浆液，再将乳状浆液送入离心过滤机中进行离心过滤，得滤液，浆渣再加入其渣重量的2倍量的含有重量0.3%食盐和0.2%柠檬酸水溶液，再送入胶体磨细磨1次，经离心过滤后，将两次过滤的浆液合并，再用300目筛网过滤1次，经浓缩、真空干燥得银杏粉。
实施例2
称取实施例1制得银杏粉与纯净水按其重量比为1：20配料混合，充分搅拌，用1moL/L 氢氧化钠溶液调节PH值至6.6-7.2之间，浸泡3h后，过滤，滤渣另作他用，取滤液以0.5moL/L盐酸调节PH值4-5之间，煮沸3h，静置沉淀，分离除去上层泡沫和溶液后，得沉淀物，再将沉淀物按重量加入5倍量的纯净水，搅匀，冷至38-45℃时，离心甩干得湿银杏蛋白，经真空干燥后得银杏蛋白粉。
实施例3
称取实施例2制得的银杏蛋白粉，加纯净水使溶解，银杏蛋白粉在水中的重量浓度为2%，在不断搅拌中加热，使溶液温度达50℃，用1moL/L氢氧化钠调节PH值为6.5-6.9，进行溶解后，再测定PH值，保证PH值在6.6-6.8范围，溶液温度在48-52℃范围，然后按银杏蛋白溶液重量的1.5-3%加入中性蛋白酶进行酶解，酶解时间为2.5-4小时，得中性蛋白酶酶解液，然后将中性蛋白酶酶解液，在不用调节PH值的条件下，继续保温48-52℃，加入银杏蛋白粉溶液重量1.5-3%的复合风味蛋白酶继续进行酶解4.5-8.5小时，得酶解液，然后将酶解液以0.5moL/L盐酸调节PH值在3.6-4.6之间，静置让其自然冷却后，进行离心分离得上清液和沉淀物；将上述得到的上清液用1moL/L氢氧化钠调节PH为6.6-6.8温度控制在48-52℃，加入上清液重量的1.55-2.6%复混蛋白酶进行第二次水解，水解时间为6.5-8.5小时，酶解完成后，加热至95℃灭酶，经浓缩、喷雾干燥得银杏糖肽。再将上述所得沉淀物采用复混蛋白酶进行第二次酶解，第二次酶解是在沉淀物投料重量浓度为2%，温度为48-52℃条件下，用沉淀物溶液重量的1.15%的复混蛋白酶，酶解7-9小时，然后加热至95℃灭酶，经离心分离取上清液进行喷雾干燥得氨基酸平衡肽；取沉淀进行真空干燥得银杏多肽。
实施例3中所述的复混蛋白酶，是由中性蛋白酶与复合风味蛋白酶按其重量份为1：1.5复配混合制得。
Claims (1)
1.一种银杏深加工的方法，其特征在于，包括以下工艺步骤：
取成熟新鲜的银杏果，经脱壳后得果仁，将果仁放入100℃沸水中漂烫2min后，捞入50-60℃热水中，轻搓漂洗脱去内种皮后，用流动水冲洗干净，再迅速浸没于含有0.5%的食盐0.25%的柠檬酸和0.1%的抗坏血酸水溶液中进行护色处理30min，捞出并沥干水分；然后将银杏果仁采用砂轮磨进行粗磨，粗磨时加入果仁重量的8倍含有0.3%食盐和0.2%柠檬酸的水溶液，磨成均匀的浆汁后，立即送入胶体磨中进行细磨，细磨15-25min，使磨浆成为均匀的乳状浆液，再将乳状浆液送入离心过滤机中进行离心过滤，得滤液，浆渣再加入其渣重量的2倍量的含有重量0.3%食盐和0.2%柠檬酸水溶液，再送入胶体磨细磨1次，经离心过滤后，将两次过滤的浆液合并，再用300目筛网过滤1次，经浓缩、真空干燥得银杏粉；
称取制得银杏粉与纯净水按其重量比为1：20配料混合，充分搅拌，用1moL/L 氢氧化钠溶液调节pH值至6.6-7.2之间，浸泡3h后，过滤，取滤液以0.5moL/L盐酸调节pH值4-5之间，煮沸3h，静置沉淀，分离除去上层泡沫和溶液后，得沉淀物，再将沉淀物按重量加入5倍量的纯净水，搅匀，冷至38-45℃时，离心甩干得湿银杏蛋白，经真空干燥后得银杏蛋白粉；
称取制得的银杏蛋白粉，加纯净水使溶解，银杏蛋白粉在水中的重量浓度为2%，在不断搅拌中加热，使溶液温度达50℃，用1moL/L氢氧化钠调节pH值为6.5-6.9，进行溶解后，再测定pH值，保证pH值在6.6-6.8范围，溶液温度在48-52℃范围，然后按银杏蛋白溶液重量的1.5-3%加入中性蛋白酶进行酶解，酶解时间为2.5-4小时，得中性蛋白酶酶解液，然后将中性蛋白酶酶解液，在不用调节pH值的条件下，继续保温48-52℃，加入银杏蛋白粉溶液重量1.5-3%的复合风味蛋白酶继续进行酶解4.5-8.5小时，得酶解液，然后将酶解液以0.5moL/L盐酸调节pH值在3.6-4.6之间，静置让其自然冷却后，进行离心分离得上清液和沉淀物；将上述得到的上清液用1moL/L氢氧化钠调节pH为6.6-6.8温度控制在48-52℃，加入上清液重量的1.55-2.6%复混蛋白酶进行第二次水解，水解时间为6.5-8.5小时，酶解完成后，加热至95℃灭酶，经浓缩、喷雾干燥得银杏糖肽；再将上述所得沉淀物采用复混蛋白酶进行第二次酶解，第二次酶解是在沉淀物投料重量浓度为2%，温度为48-52℃条件下，用沉淀物溶液重量1.15%的复混蛋白酶，酶解7-9小时，然后加热至95℃灭酶，经离心分离取上清液进行喷雾干燥得氨基酸平衡肽；取沉淀进行真空干燥得银杏多肽；所述的复混蛋白酶，是由中性蛋白酶与复合风味蛋白酶按其重量份为1：1.5复配混合制得。
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