CN107418990B - 一种银杏功能多肽及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

一种银杏功能多肽及其制备方法和应用，以脱脂银杏蛋白为原料，将其加入缓冲液中，加入木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶，酶解2‑6h；将得到的料液在100℃的沸水浴中灭酶，经离心取上清液进行膜分离，获得银杏功能多肽组分；将得到的多肽组分冷冻干燥，即得到具有降血糖、降甘油三酯和降总胆固醇的银杏功能的多肽。本发明制备的银杏功能多肽分子量<3kDa，通过动物试验证明该多肽同时具有体内降血糖、降甘油三酯和降总胆固醇活性。本发明工艺简单，生产成本低，产品安全无毒副作用，可用于开发预防和治疗糖尿病和高血脂症的药物或保健品。

Description

一种银杏功能多肽及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及银杏蛋白深加工领域，具体涉及一种银杏功能多肽及其制备方法和应用，该多肽具有体内降血糖、降甘油三酯和降总胆固醇的功效。
背景技术
银杏(Ginkgo biloba)为银杏科银杏属多年生落叶乔木，被称为“活化石”和“植物界的大熊猫”，在中国的分布极广。银杏种仁又称为白果，可以食用，具有止咳、化痰、润肺平喘的作用。银杏种子营养丰富，其蛋白质含量(干基含量)约为10％，氨基酸组成合理，因此它属于优质蛋白质。已经报道了银杏蛋白具有抗氧化剂和抗菌的功能。
蛋白质多肽链内蕴含着很多功能活性多肽，经过水解后功能集团就会暴露出来，便显出不同的活性，如调节神经、激素和免疫肽化合物、抗高血压、降低胆固醇、抗癌、抗氧化等作用。近年来，有许多文献报道从天然的动植物以及机体分离到降血糖肽和降血脂肽，并且研究了它的结构和机制，其中一些已被用作抗糖尿病药物或保健食品。
高血糖和高血脂严重威胁人类健康。糖尿病患者发生以动脉粥样硬化疾病为特征的大血管病变的危险，是非糖尿病人群的3～4倍，而且病变发生早进展快，是糖尿病患者死亡的最主要原因。这种大血管病变导致的死亡，与糖尿病人的血脂代谢异常密切相关。本研究拟利用木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶制备银杏功能多肽，通过膜分离纯化，并进行体内降血糖、降甘油三酯和降总胆固醇的功能实验，旨在为银杏资源的深加工和银杏功能多肽的开发提供理论依据。
发明内容
解决的技术问题：本发明提供一种银杏功能多肽及其制备方法和应用，该功能多肽具备显著的体内降血糖、降甘油三酯和降总胆固醇活性。
技术方案：一种银杏功能多肽的制备方法，包括以下步骤：(1)以脱脂银杏蛋白为原料，将其加入pH值为6.0-8.0的缓冲液中，蛋白浓度为0.5％-3.0wt.％，按E/S酶底比为1.0-5.0g/100g加入木瓜蛋白酶和2.0-8.0mg/100g加入菠萝蛋白酶，在45-75℃酶解2-6h；(2)将步骤(1)得到的料液在100℃的沸水浴中灭酶，经离心取上清液进行膜分离，获得银杏功能多肽组分；(3)将步骤(2)得到的多肽组分冷冻干燥，即得到具有降血糖、降甘油三酯和降总胆固醇的银杏功能的多肽。
步骤(1)中的脱脂银杏蛋白是采用碱溶酸沉法，从银杏种仁冻干粉中提取得到的。
步骤(1)中木瓜蛋白酶的酶活为8×104U/g，菠萝蛋白酶的酶活为3×108U/g。
膜分离采用聚醚砜膜：离心后的上清液先采用截断分子量为10kDa的聚醚砜膜分离，获得<10kDa的透过液，透过液再经截断分子量为3kDa的聚醚砜膜分离，获得3-10kDa的截留液和<3kDa的透过液。
上述方法制得的银杏功能多肽。
上述银杏功能多肽为分子量<3kDa的多肽组分。
上述多肽组分在制备降血糖功能产品中应用。
上述多肽组分在制备降甘油三酯功能产品中应用。
上述多肽组分在制备降总胆固醇功能产品中应用。
有益效果：本发明制备的银杏功能多肽分子量<3kDa，通过动物试验证明该多肽同时具有体内降血糖、降甘油三酯和降总胆固醇活性。本发明工艺简单，生产成本低，产品安全无毒副作用，可用于开发预防和治疗糖尿病和高血脂症的药物或保健品。
附图说明
图1银杏功能多肽高效液相图谱；
图2银杏功能多肽对糖尿病小鼠降糖效果的影响。
具体实施方式
以下实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人是能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所做的等效变换或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
实施例1银杏功能多肽制备
称取10kg银杏粉，经石油醚脱脂后加入NaOH溶液提取银杏蛋白，提取结束后离心得到上清液，调节pH值至等银杏蛋白电点4.62，离心后冷冻干燥后得到脱脂银杏蛋白。称取100g脱脂银杏蛋白加入到pH为6.0的缓冲液中，配成浓度为0.5wt.％的料液，然后加入木瓜蛋白酶10g和菠萝蛋白酶8mg，在45℃下水浴振荡2h，进行酶解反应，将得到的多肽溶液置于沸水浴中灭活10min，灭活后的酶解液经5000rpm离心，上清液先采用截断分子量为10kDa的聚醚砜膜分离，获得<10kDa的透过液，透过液再经截断分子量为3kDa的聚醚砜膜分离，获得3-10kDa的截留液和<3kDa的透过液，透过液经冷冻干燥，得到银杏功能多肽，可用于银杏功能食品开发。
实施例2银杏功能多肽制备
称取10kg银杏粉，经石油醚脱脂后加入NaOH溶液提取银杏蛋白，提取结束后离心得到上清液，调节pH值至等银杏蛋白电点4.62，离心后冷冻干燥后得到脱脂银杏蛋白。称取100g脱脂银杏蛋白加入到pH为8.0的缓冲液中，配成浓度为3.0wt.％的料液，然后加入木瓜蛋白酶1g和菠萝蛋白酶2mg，在75℃下水浴振荡6h，进行酶解反应，将得到的多肽溶液置于沸水浴中灭活10min，灭活后的酶解液经5000rpm离心，上清液先采用截断分子量为10kDa的聚醚砜膜分离，获得<10kDa的透过液，透过液再经截断分子量为3kDa的聚醚砜膜分离，获得3-10kDa的截留液和<3kDa的透过液，透过液经冷冻干燥，得到银杏功能多肽，可用于银杏功能食品开发。
实施例3银杏功能多肽降血糖、降甘油三酯和降总胆固醇活性
选择小鼠42只，随机分配为6组，每组7只，连续喂养(腹腔注射)30天，分组如下：(1)正常组：生理盐水5ml/kg.bw；(2)模型组：生理盐水5ml/kg.bw；(3)低剂量组：银杏功能多肽125mg/kg.bw；(4)中剂量组：银杏功能多肽250mg/kg.bw；(5)高剂量组：银杏功能多肽500mg/kg.bw；(6)阳性对照组：二甲双胍125mg/kg.bw。小鼠分别在第0、5、10、15、20、25、30d称量体重；在第0、5、10、20、30d、停药12d尾静脉采血测定空腹血糖含量；在第0、15、30d尾静脉采血测总胆固醇、甘油三酯的含量。试验表明多肽干粉具有缓解糖尿病小鼠体重减轻的效果，可以有效降低血糖值、甘油三酯和胆固醇的含量。
表1银杏功能多肽对糖尿病小鼠体重的影响(n＝7，
Figure BDA0001342233890000031
)(g)
Figure BDA0001342233890000032
Figure BDA0001342233890000041
注：与正常组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，+P<0.05，++P<0.01；与阳性对照组比较，aP<0.05，aaP<0.01
表2银杏功能多肽对糖尿病小鼠血糖的影响(n＝7，
Figure BDA0001342233890000042
)(mmol/L)
Figure BDA0001342233890000043
注：与正常组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，+P<0.05，++P<0.01；与阳性对照组比较，aP<0.05，aaP<0.01
表3银杏功能多肽对糖尿病小鼠甘油三酯的影响(n＝7，
Figure BDA0001342233890000044
)(mmol/L)
Figure BDA0001342233890000045
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01；与阳性对照组比较，+P<0.05，++P<0.01
表4银杏功能多肽对糖尿病小鼠总胆固醇的影响(n＝7，
Figure BDA0001342233890000051
)(mmol/L)
Figure BDA0001342233890000052
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01；与阳性对照组比较，+P<0.05，++P<0.01

Claims (1)

1.多肽组分在制备同时体内降低血糖、甘油三酯和总胆固醇活性产品中应用，所述多肽组分由以下方法制得：（1）以脱脂银杏蛋白为原料，将其加入pH值为6.0-8.0的缓冲液中，蛋白浓度为0.5%-3.0wt.%，按E/S酶底比为1.0-5.0g/100g加入木瓜蛋白酶和2.0-8.0mg/100g加入菠萝蛋白酶，在45-75℃酶解2-6h；脱脂银杏蛋白是采用碱溶酸沉法，从银杏种仁冻干粉中提取得到的；木瓜蛋白酶的酶活为8×104U/g，菠萝蛋白酶的酶活为3×108U/g；（2）将步骤（1）得到的料液在100℃的沸水浴中灭酶，经离心取上清液进行膜分离，获得银杏功能多肽组分；膜分离采用聚醚砜膜：离心后的上清液先采用截断分子量为10kDa的聚醚砜膜分离，获得<10kDa的透过液，透过液再经截断分子量为3kDa的聚醚砜膜分离，获得3-10kDa的截留液和<3kDa的透过液；（3）将步骤（2）得到的分子量<3kDa的多肽组分冷冻干燥，即得到具有体内降血糖、降甘油三酯和降总胆固醇的银杏多肽。
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