CN114712481B - 一种复合植物源多肽及其制备方法与应用 - Google Patents
一种复合植物源多肽及其制备方法与应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种复合植物源多肽及其制备方法与应用，包括组分A和组分B，所述组分A包括人参多肽和桑叶多肽，所述组分B为苦瓜提取物；以质量比计，组分A中所述人参多肽和桑叶多肽的配比为16:1～1:2；所述组分A和组分B在所述复合植物源多肽的配比为4:1。在一定的配比范围内，所述复合植物源多肽具备优秀的抗氧化能力、降血糖能力和降血脂能力。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，涉及一种复合植物源多肽及其制备方法与应用。
背景技术
人参(Panax giseng C.A.Mey.)在我国医药史上具有极其特殊的地位，被誉为“百草之王”，是我国的标志性中药材。现代医学研究证明，人参对中枢神经系统、心脑血管系统、呼吸系统、血液及造血系统、内分泌系统及生殖系统都具有良好的保护作用。另外，研究证明，人参还具有明显的抗肿瘤、抗辐射、抗衰老和解毒功能。
桑叶(Folium Mori)是桑科植物桑的干燥叶。桑叶中含有蜕皮固酮、羽扁豆酮以及靶香甙、桑甙等许多氨基酸、维生素、缘原酸、叶酸、延胡索酸、内消旋肌酸、植物雌激素等人体所必需的各种生理活性物质，具有抗应激、降血糖、降血脂、降血压、抗炎、抗衰老、增强肌体耐力、抗肿瘤和调节肾上腺素功能等效果，桑叶因含有许多生理活性成分，而具有营养保健功能，是国家卫生部公布的药食两用品。
苦瓜(Momordica charantia L.)是葫芦科苦瓜属植物苦瓜的果实，具有消暑涤热、明目解毒的作用。苦瓜果实或苦瓜籽中分离出的植物降糖多肽的降糖作用已为人们所熟知。用苦瓜果实水提取物治疗实验性四氧嘧啶糖尿病大鼠，3周以后血糖下降率为84％。然而，更为重要的是，苦瓜降糖多肽与动物和化学合成类降糖产品相比，具有基本无毒副作用，降糖效果缓慢而持久，长期服用不致过度降低血糖，停药后24h内血糖没有回升同，以及无注射之苦等优点。
目前，大部分糖尿病患者主要依靠化学药物来控制病情，但化学药物的共同点是毒副作用较大，长期服用会使患者产生耐药性、腹泻、昏迷、肝肾损伤以及低血糖风险等，因而寻求一种积极有效的预防和控制糖尿病的天然产品是迫切需要解决的问题。目前将桑叶、苦瓜提取物直接用于降血糖治疗药物较为常见，但对于人参多肽、桑叶多肽、苦瓜提取物此类复合多肽且结合植物提取物的复合药剂未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能更有效调控血糖、降低血脂兼具提高抗氧化能力的多肽复合制剂。
基于上述目的，本申请通过提供一种复合植物源多肽及其制备方法与应用来解决该领域中的这种需要。
一方面，本发明涉及一种复合植物源多肽，其包括组分A和组分B，所述组分A包括人参多肽和桑叶多肽，所述组分B为苦瓜提取物；以质量比计，组分A中所述人参多肽和桑叶多肽的配比为16:1～1:2；所述组分A和组分B在所述复合植物源多肽的配比为4:1。
进一步地，本发明提供的复合植物源多肽中，以质量比计，组分A中所述人参多肽和桑叶多肽的配比为10:1～1:1。
进一步地，本发明提供的复合植物源多肽中，以质量比计，组分A中所述人参多肽和桑叶多肽的配比为3:1～2:1。
进一步地，本发明提供的复合植物源多肽中，以质量比计，组分A中所述人参多肽和桑叶多肽的配比为2.8:1。
另一方面，本发明提供了所述人参多肽的制备方法，其包括：
每新鲜人参20g，加入200mL 0.01mo1/L PBS(pH＝7)，浸提12-48小时，取上清液加入体积比为400mL冰预冷丙酮沉淀，充分混匀后静置过夜，离心后取沉淀用200mL 0.01mo1/L PBS(pH＝7)溶解后，冻干，得到人参粗蛋白；将得到的粗蛋白溶解后，经过滤装置进行过滤，经膜孔径为30KDa超滤浓缩，收集滤出液，再经10KDa的超滤，收集分子量小于10KDa流出液，冻干，即得到所述人参多肽。
另一方面，本发明提供了所述桑叶多肽的制备方法，其包括：取新鲜桑木经洗涤去除杂质，干燥后，粉碎至20目，得到桑叶粉。常温下，向桑叶粉中依次加入纯净水和亚硫酸氢钠，桑叶粉、亚硫酸氢钠和纯净水的固液比为1:0.1:15，调节pH为8，再加热至60℃，在此温度下下保温1h，过滤得到桑叶粗滤液。待桑叶粗滤液降至常温，再调节pH为8后，向桑叶粗滤液中加入碱性蛋白酶和果胶酶，桑叶粗滤液、碱性蛋白酶和果胶酶的体积比为1：0.03：0.01，充分搅拌，再次加热15min，温度控制在60℃，在加热过程中保持pH值大于7.5，得到一次酶解液。待一次酶解液降至常温，再次调整pH值至7.6，向一次酶解液中加入多肽复合酶，一次酶解液与多肽复合酶的体积比为1：0.02，充分搅拌，再次加热15min，温度控制在60℃，当pH值降至7.1，酶解完成，得到二次酶解液。将二次酶解液加温至90℃，保持10min，离心，得到蛋白肽液。待蛋白肽液降至常温，过滤浓缩后，得到桑叶多肽。
另一方面，本发明提供了所述苦瓜提取物的制备方法，其包括：
将苦瓜洗净后切片，置于烘箱中60℃烘干至恒重，磨成苦瓜粉末。依照固液比为1g:40mL将苦瓜粉末和体积浓度为90％的乙醇水溶液，置于超声波提取器中，在80℃下超声提取60分钟，过滤，加入相当于乙醇水溶液体积1/2的正丁醇震荡10分钟，静止分层，取上层溶液，即为所述苦瓜提取物。
本发明与现有技术相比具有以下有益效果或者优点：
本发明提供了一种复合植物源多肽及其制备方法与应用，其通过植物多肽和植物提取物的混合，得到了一种能更有效调控血糖、降低血脂兼具提高抗氧化能力的多肽复合制剂，且优于各单一组分的使用效果，表明该复合植物源多肽具有协同增效的效果。
附图说明
图1为复合植物源多肽对DPPH·的清除效果图。
图2为大鼠空腹血糖值变化图。
图3为大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)的浓度变化图。
具体实施方式
下面，结合实施例对本发明的技术方案进行说明，但是，本发明并不限于下述的实施例。
实施例1
本实施例提供了一种复合植物源多肽的制备试验。
人参多肽的制备方法包括：取新鲜人参20g，加入200mL0.01mo1/L PBS(pH＝7)，浸提12-48小时，取上清液加入体积比为400mL冰预冷丙酮沉淀，充分混匀后静置过夜，离心后取沉淀用200mL 0.01mo1/L PBS(pH＝7)溶解后，冻干，得到人参粗蛋白；将得到的粗蛋白溶解后，经过滤装置进行过滤，经膜孔径为30KDa超滤浓缩，收集滤出液，再经10KDa的超滤，收集分子量小于10KDa流出液，冻干，即得到所述人参多肽。
桑叶多肽的制备方法包括：取新鲜桑木经洗涤去除杂质，干燥后，粉碎至20目，得到桑叶粉。常温下，向桑叶粉中依次加入纯净水和亚硫酸氢钠，桑叶粉、亚硫酸氢钠和纯净水的固液比为1:0.1:15，调节pH为8，再加热至60℃，在此温度下下保温1h，过滤得到桑叶粗滤液。待桑叶粗滤液降至常温，再调节pH为8后，向桑叶粗滤液中加入碱性蛋白酶和果胶酶，桑叶粗滤液、碱性蛋白酶和果胶酶的体积比为1：0.03：0.01，充分搅拌，再次加热15min，温度控制在60℃，在加热过程中保持pH值大于7.5，得到一次酶解液。待一次酶解液降至常温，再次调整pH值至7.6，向一次酶解液中加入多肽复合酶，一次酶解液与多肽复合酶的体积比为1：0.02，充分搅拌，再次加热15min，温度控制在60℃，当pH值降至7.1，酶解完成，得到二次酶解液。将二次酶解液加温至90℃，保持10min，离心，得到蛋白肽液。待蛋白肽液降至常温，过滤浓缩后，得到桑叶多肽。
苦瓜提取物的制备方法包括：将苦瓜洗净后切片，置于烘箱中60℃烘干至恒重，磨成苦瓜粉末。依照固液比为1g:40mL将苦瓜粉末和体积浓度为90％的乙醇水溶液，置于超声波提取器中，在80℃下超声提取60分钟，过滤干燥后即为所述苦瓜提取物。
以质量份计，本实施例所述复合植物源多肽包含组分A和组分B，所述组分A中所述人参多肽和桑叶多肽的配比为16:1；所述组分A和组分B在所述复合植物源多肽的配比为4:1。依照上述比例混合后，即为所述复合植物源多肽。
实施例2
本实施例提供了一种复合植物源多肽的制备试验。
本实施例制备方法同实施例1，区别在于，以质量份计，本实施例所述复合植物源多肽包含组分A和组分B，所述组分A中所述人参多肽和桑叶多肽的配比为10:1；所述组分A和组分B在所述复合植物源多肽的配比为4:1。依照上述比例混合后，即为所述复合植物源多肽。
实施例3
本实施例提供了一种复合植物源多肽的制备试验。
本实施例制备方法同实施例1，区别在于，以质量份计，本实施例所述复合植物源多肽包含组分A和组分B，所述组分A中所述人参多肽和桑叶多肽的配比为3:1；所述组分A和组分B在所述复合植物源多肽的配比为4:1。依照上述比例混合后，即为所述复合植物源多肽。
实施例4
本实施例提供了一种复合植物源多肽的制备试验。
本实施例制备方法同实施例1，区别在于，以质量份计，本实施例所述复合植物源多肽包含组分A和组分B，所述组分A中所述人参多肽和桑叶多肽的配比为2.8:1；所述组分A和组分B在所述复合植物源多肽的配比为4:1。依照上述比例混合后，即为所述复合植物源多肽。
实施例5
本实施例提供了一种复合植物源多肽的制备试验。
本实施例制备方法同实施例1，区别在于，以质量份计，本实施例所述复合植物源多肽包含组分A和组分B，所述组分A中所述人参多肽和桑叶多肽的配比为2:1；所述组分A和组分B在所述复合植物源多肽的配比为4:1。依照上述比例混合后，即为所述复合植物源多肽。
实施例6
本实施例提供了一种复合植物源多肽的制备试验。
本实施例制备方法同实施例1，区别在于，以质量份计，本实施例所述复合植物源多肽包含组分A和组分B，所述组分A中所述人参多肽和桑叶多肽的配比为1:1；所述组分A和组分B在所述复合植物源多肽的配比为4:1。依照上述比例混合后，即为所述复合植物源多肽。
实施例7
本实施例提供了一种复合植物源多肽的制备试验。
本实施例制备方法同实施例1，区别在于，以质量份计，本实施例所述复合植物源多肽包含组分A和组分B，所述组分A中所述人参多肽和桑叶多肽的配比为1:2；所述组分A和组分B在所述复合植物源多肽的配比为4:1。依照上述比例混合后，即为所述复合植物源多肽。
实施例8
本实施例提供了一种复合植物源多肽抗氧化能力的试验。
将BHT、实施例1～7得到的复合植物源多肽、人参多肽、桑叶多肽、苦瓜提取物分别配制成浓度为1mg/mL溶液，分别测定DPPH·清除率。
反应体系中加9mmol/L FeSO42mL，9mmolL水杨酸-乙醇2mL，样品3mL，最后加8.8mmol/L H2O22mL，启动反应，37℃反应1h，以蒸馏水为参比，在510nm下测量样品的吸光值Ax；反应体系中加9mmol/L FeSO42mL，9mmol/L水杨酸-乙醇2mL，3mL蒸馏水和2mL的8.8mmol/L H2O2，以蒸馏水为参比在510nm下测量空白对照的吸光值A0；反应体系中加9mmol/LFeSO42mL，9mmol/L水杨酸-乙醇2mL，样品3mL和2mL蒸馏水，以蒸馏水为参比在510nm下测量吸光值Ax0。DPPH·清除率(％)计算公式如下：
清除率(％)＝[A0-(Ax-Ax0)/A0]×100％
式中，A0为空白对照液的吸光度；Ax为加入待测溶液后的吸光度；Ax0为不加显色剂H2O2的待测溶液吸光度。
从图1可以看出，以BHT为对照，复合植物源多肽能实现对DPPH·的清除效果，且优于各单剂的水平，其中，实施例4的清除效果最佳，去除率可达到52.40％。由此可见，本发明提供的复合植物源多肽具有一定的抗氧化能力，且表现出协同增效的效果。
实施例9
本实施例提供了一种复合植物源多肽降血糖能力的试验。
选取健康的雄性小鼠，编号后在正常环境中适应性饲养2周，自由进食饮水。适应性饲养结束后，选30只作为空白对照组，其余用剂量200mg/kg腹腔注射5％链脲佐菌素，2h之内如果有昏迷现象饲喂葡糖糖水直至清醒，2天以后，测定空腹血糖，取血糖值在10以上的作为糖尿病动物模型。
将造模成功的小鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组、试验组，各组30只小鼠。其中，空白对照组：自由进食饮水；模型组：自由进食饮水；阳性对照组：按照给药剂量为15mg/kg·d饲喂罗格列酮进行治疗，自由进食饮水；试验组：按照给药剂量为1.5g/kg·d饲喂本发明提供的复合植物源多肽或各单剂进行治疗。实验过程中每天对各个组份的小鼠进行腹腔注射给药，连续15天，45天后，对小鼠禁食8h测定空腹血糖值。实验结束，记录最终血糖含量，其结果如图2所示。
如图2所示，以罗格列酮为阳性对照，复合植物源多肽能实现对极为优秀的降血糖效果，且优于各单剂的水平，其中，实施例4的降血糖效果最佳，空腹血糖值为5.70mmol/L。由此可见，本发明提供的复合植物源多肽具有优秀的降血糖能力，且表现出协同增效的效果。
实施例10
本实施例提供了一种复合植物源多肽降血脂能力的试验。
选取健康的雄性大鼠，编号后在正常环境中适应性饲养2周，自由进食饮水。适应性饲养结束后，每组20只，各组分别为空白对照组、模型组、阳性对照组、试验组。除空白对照组，其余各组均采用高脂饲料。建模3周后将复合植物源多肽或辛伐他汀(阳性对照药剂)按照给药剂量为15mg/kg·d进行灌胃，空白对照组灌胃相应体积蒸馏水。连续喂养10周后，末次喂养后。禁食不禁水10h，主动脉取血测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)的浓度，检测结果如图3所示。
如图3所示，以辛伐他汀为阳性对照，复合植物源多肽能实现对极为优秀的降血脂效果，且优于各单剂的水平，其中，实施例4的降血脂效果最佳，给予实施例4提供的复合植物源多肽后，大鼠血清中总胆固醇(TC)的浓度为2.52mmol/L，甘油三酯(TG)的浓度为0.24mmol/L。由此可见，本发明提供的复合植物源多肽具有优秀的降血脂能力，且表现出协同增效的效果。
如上所述，即可较好地实现本发明，上述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种改变和改进，均应落入本发明确定的保护范围内。
Claims (9)
1.一种复合植物源多肽，其特征在于，由组分A和组分B构成，所述组分A由人参多肽和桑叶多肽构成，所述组分B为苦瓜提取物；以质量比计，组分A中所述人参多肽和桑叶多肽的配比为16:1~1:2；所述组分A和组分B在所述复合植物源多肽的配比为4:1；
所述人参多肽的制备方法包括：每新鲜人参20g，加入200mL 0.01mo1/L PBS pH=7，浸提12-48小时，取上清液加入体积比为400mL冰预冷丙酮沉淀，充分混匀后静置过夜，离心后取沉淀用200mL 0.01mo1/L PBS pH=7溶解后，冻干，得到人参粗蛋白；将所述人参粗蛋白溶解后，经过滤装置进行过滤，经膜孔径为30KDa超滤浓缩，收集滤出液，再经10KDa的超滤，收集分子量小于10KDa流出液，冻干，即得到所述人参多肽；
所述桑叶多肽的制备方法包括：取新鲜桑叶经洗涤去除杂质，干燥后，粉碎至20目，得到桑叶粉；常温下，向所述桑叶粉中依次加入纯净水和亚硫酸氢钠，所述桑叶粉、亚硫酸氢钠和纯净水的固液比为1:0.1:15，调节pH为8，再加热至60℃，在此温度下下保温1h，过滤得到桑叶粗滤液；待所述桑叶粗滤液降至常温，再调节pH为8后，向所述桑叶粗滤液中加入碱性蛋白酶和果胶酶，所述桑叶粗滤液、碱性蛋白酶和果胶酶的体积比为1:0.03:0.01，充分搅拌，再次加热15min，温度控制在60℃，在加热过程中保持pH值大于7.5，得到一次酶解液；待所述一次酶解液降至常温，再次调整pH值至7.6，向所述一次酶解液中加入多肽复合酶，所述一次酶解液与多肽复合酶的体积比为1:0.02，充分搅拌，再次加热15min，温度控制在60℃，当pH值降至7.1，酶解完成，得到二次酶解液；将所述二次酶解液加温至90℃，保持10min，离心，得到蛋白肽液；待所述蛋白肽液降至常温，过滤浓缩后，得到桑叶多肽；
所述苦瓜提取物的制备方法包括：将苦瓜洗净后切片，置于烘箱中60℃烘干至恒重，磨成苦瓜粉末；依照固液比为1g:40mL将所述苦瓜粉末和体积浓度为90%的乙醇水溶液，置于超声波提取器中，在80℃下超声提取60分钟，过滤，加入相当于乙醇水溶液体积1/2的正丁醇震荡10分钟，静止分层，取上层溶液，即为所述苦瓜提取物。
2.根据权利要求1所述复合植物源多肽，其特征在于，以质量比计，组分A中所述人参多肽和桑叶多肽的配比为10:1~1:1。
3.根据权利要求1所述复合植物源多肽，其特征在于，以质量比计，组分A中所述人参多肽和桑叶多肽的配比为3:1~2:1。
4.根据权利要求1所述复合植物源多肽，其特征在于，以质量比计，组分A中所述人参多肽和桑叶多肽的配比为2.8:1。
5.权利要求1~4中任一项所述复合植物源多肽在制备抗氧化药物中的应用。
6.权利要求1~4中任一项所述复合植物源多肽在制备降血糖血脂药物中的应用。
7.一种抗氧化药物，其特征在于，包含权利要求1~4中任一项所述复合植物源多肽。
8.一种降血糖药物，其特征在于，包含权利要求1~4中任一项所述复合植物源多肽。
9.一种降血脂药物，其特征在于，包含权利要求1~4中任一项所述复合植物源多肽。
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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