CN103060220A - 一种低血清高效培养猪肺炎支原体培养基及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及低血清高效培养猪肺炎支原体培养基及其制备方法，属于兽医生物学技术领域。包括(1)基础培养基（2）辅助培养基，主要有MEM、酵母浸出粉、胰蛋白胨，葡萄糖，无机盐等组成，该培养基能够既保证半成品生长滴度高而且稳定，用本发明方法制备的半成品菌液效价高达109CCU/ml;同时该培养基采用降低猪血清培养猪肺炎支原体，减轻了猪血清对猪体的过敏应激反应，既考虑到动物的生物安全，又提高了抗原效价，而且降低了生产成本。
Description
技术领域
本发明属于兽医生物学技术领域，涉及一种低血清高效培养猪肺炎支原体培养基及其制备方法。
背景技术
猪肺炎支原体主要引起猪的慢性呼吸道疾病，是造成养猪业经济损失的最重要的疾病之一。猪肺炎支原体广泛分布于世界各地，猪感染后导致生长发育不良、生长率和饲料转化率降低，且易引起继发性病毒或细菌感染，造成猪死亡率升高，导致经济损失惨重。本病的预防应采用综合的措施、给猪体提供一个理想的环境是基础，包括通风、温度及合理的饲养密度和饲养方式，药物治疗虽有效，但由于长期治疗耗费大量药物，并带来肉质药物残留的突出问题，因此疫苗预防是重要的防制手段。
目前猪肺炎支原体疫苗生产中，培养猪肺炎支原体培养基有很多种，有煮沸猪肺组织的灭活细胞培养基，猪肺埋块无细胞培养基，江苏省农业科学院创造的KM2培养基等。
以上述传统培养基及培养工艺所培养的猪肺炎支原体繁殖能力差、活菌滴度低，加之过量血清制备的活疫苗无疑增加猪体的过敏应激反应，最终影响疫苗的免疫效力。
发明内容
本发明所要解决的问题是提供一种低血清高效培养猪肺炎支原体培养基及其制备方法，用以降低培养猪肺炎支原体所需血清用量，提高猪肺炎支原体抗原效价。
本发明另一目的是提供该猪肺炎支原体培养基的制备方法。
本发明所述问题是以下述技术方案解决的：
一种低血清高效培养猪肺炎支原体培养基及其制备方法，所述低血清高效培养猪肺炎支原体培养基按如下工艺配制：
基础培养基：
在116℃灭菌30min，待冷却后，在无菌条件下加入下列辅助培养基成分，制成供培养猪肺炎支原体培养基。
辅助培养基：
用1mol/L氢氧化钠溶液调整pH至7.4-7.6。
本发明还提供了该猪肺炎支原体培养基的制备方法，其特征在于制备步骤如下：
1、制备基础培养基：
取上述（1）-（8）成分逐一溶入1000ml蒸馏水，高压灭菌后备用。
2、制备辅助培养基：
取上述（9）-（14）混和、搅拌，即得辅助培养基。
3、将基础培养基和辅助培养基混和，调pH至7.4-7.6，分装备用。
本发明的低血清高效培养猪肺炎支原体培养基运用微生物学、无机、有机分析化学的技术原理，对不同的氮源、碳源、蛋白质、无机盐和胆固醇等诸多营养组分的组合进行了筛选，对培养基的pH值、渗透压等进行分析，研究出了适合低血清高效培养猪肺炎支原体的培养基。该培养基的配方中除基本成分外，在培养基中还添加了新鲜酵母浸出液、谷氨酰胺、精氨酸单盐酸盐，上述成分的添加能明显提高猪肺炎支原体的活菌滴度；未添加前的活菌滴度为108CCU/ml，添加后活菌滴度为109CCU/ml。而本发明最大的优势在于猪血清用量仅为15%左右，大大减轻了活疫苗中猪血清对猪体的过敏应激反应，为我们的养殖事业保驾护航。
具体实施方式
实施例1
1、本发明培养基的制备
基础培养基：
在116℃灭菌30min，待冷却后，在无菌条件下加入下列辅助培养基成分，制成供培养猪肺炎支原体培养基。
辅助培养基：
将基础培养基（1）-（8）成分逐一溶入500ml蒸馏水中高压灭菌，冷却后添加辅助培养基，1mol/L氢氧化钠溶液调整pH至7.5，制得低血清高效猪肺炎支原体培养基。
实施例2
1、本发明培养基的制备
基础培养基：
在116℃灭菌30min，待冷却后，在无菌条件下加入下列辅助培养基成分，制成供培养猪肺炎支原体培养基。
辅助培养基：
将基础培养基（1）-（8）成分逐一溶入800ml蒸馏水中高压灭菌，冷却后添加辅助培养基，1mol/L氢氧化钠溶液调整pH至7.6，制得低血清高效猪肺炎支原体培养基。
实施例3
应用猪肺炎支原体分别通过本发明支原体培养基、KM2培养基、PPLO支原体培养基对猪肺炎支原体进行比较培养试验。
1、本发明培养基的制备
基础培养基：
在116℃灭菌30min，待冷却后，在无菌条件下加入下列辅助培养基成分，制成供培养猪肺炎支原体培养基。
辅助培养基：
将基础培养基（1）-（8）成分逐一溶入1000ml蒸馏水中高压灭菌，冷却后添加辅助培养基，1mol/L氢氧化钠溶液调整pH至7.6，制得低血清高效猪肺炎支原体培养基。
1、猪肺炎支原体菌株和培养条件
按照江苏省农业科学院兽医研究所猪肺炎支原体168株培养方法，分别接种本发明的低血清高效培养猪肺炎支原体培养基、KM2培养基、和PPLO支原体培养基3种培养基，种子继代复壮后，分别按10%（V/V）的比例接种，37℃培养，当培养基的颜色变黄、pH由7.6降至6.5时，无菌取出培养物。
2、活菌滴度（CCU）测定
每个菌株取13只无菌试管，每管装4.5ml含猪肺炎支原体培养基，在第1管加入0.5ml生长良好的培养物，混合均匀后，吸取0.5ml加入第2根管，如此进行10倍系列稀释至最末1管，同时设未加菌液的猪肺炎支原体培养基作为阴性对照。试验管设三个重复。之后，将试管放置37℃恒温箱中静止培养，每日观察1次，主要观察培养基的颜色变化，连续观察时间为10天，最后发生颜色变化的小管稀释度即为该培养物的CCU滴度。此试验共进行了3次。
3、结果
1）、猪肺炎支原体接种3种培养基3次生长试验CCU（颜色变化单位）测定结果见表1
表1猪肺炎支原体F36株接种3种培养基3次生长试验CCU测定结果
从猪肺炎支原体（168株）使用本发明制备的培养基、KM2培养基、PPLO支原体培养基的活菌滴度（CCU）测定结果看，在同样的试验条件下，本发明的低血清高效培养猪肺炎支原体培养基3次试验CCCU测定结果均在109CCU/ml；而KM2培养基、PPLO支原体培养基3次试验CCU测定结果均为108CCU/ml。说明本发明的低血清高效培养猪肺炎支原体具有生长迅速，活菌滴度高的特点。
Claims (4)
1.一种低血清高效培养猪肺炎支原体培养基及其制备方法，其特征是培养基包括：
基础培养基：
在116℃灭菌30min，待冷却后，在无菌条件下加入下列辅助培养基成分，制成供培养猪肺炎支原体培养基；
辅助培养基：
用1mol/L氢氧化钠溶液调整pH至7.4-7.6。
2.如权利要求1所述的低血清高效培养猪肺炎支原体培养基，其特征是每1000ml培养基中加猪血清170-180ml。
3.一种低血清高效培养猪肺炎支原体培养基及其制备方法，包括如下步骤：
（1）制备基础培养基：
取上述（1）-（8）成分逐一溶入1000ml蒸馏水，高压灭菌后备用；
（2）制备辅助培养基：
取上述（9）-（14）混和、搅拌，即得辅助培养基；
将高压灭菌冷却后的基础培养基和辅助培养基混和，调pH至7.4-7.6，分装备用。
4.一种低血清高效培养猪肺炎支原体培养基及其制备方法适用于猪肺炎支原体所有活疫苗抗原的制备。
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Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103555641A (zh) * | 2013-11-19 | 2014-02-05 | 浙江美保龙生物技术有限公司 | 一种猪肺炎支原体培养基及其制备方法 |
| CN103667154A (zh) * | 2013-12-20 | 2014-03-26 | 广西壮族自治区兽医研究所 | 支原体培养基及其制备方法 |
| CN104560835A (zh) * | 2015-01-27 | 2015-04-29 | 新疆天康畜牧生物技术股份有限公司 | 一种培养猪肺炎支原体培养基及其制备方法 |
| CN105779362A (zh) * | 2016-05-16 | 2016-07-20 | 南京大爻网络科技有限公司 | 一种低血清培养猪肺炎支原体培养基及其制备方法和应用 |
| CN106497826A (zh) * | 2016-09-29 | 2017-03-15 | 内蒙古金源康生物工程有限公司 | 低血清高效培养猪肺炎支原体培养基及其制备方法 |
| CN108949623A (zh) * | 2018-07-13 | 2018-12-07 | 北京农学院 | 用于分离和培养猪肺炎支原体的固体培养基及其制备方法 |
| CN109078003A (zh) * | 2018-08-02 | 2018-12-25 | 南京大爻网络科技有限公司 | 一种猪肺炎支原体活疫苗大规格生产方法 |
| CN109468248A (zh) * | 2018-12-14 | 2019-03-15 | 南京天邦生物科技有限公司 | 一种猪支原体肺炎抗原高效培养方法 |
| CN110607260A (zh) * | 2019-09-23 | 2019-12-24 | 山东甲骨文生物科技有限公司 | 一种用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基及方法 |
| CN110804563A (zh) * | 2019-11-13 | 2020-02-18 | 山东滨州沃华生物工程有限公司 | 一种用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基 |
| CN110938560A (zh) * | 2019-11-19 | 2020-03-31 | 成都天邦生物制品有限公司 | 一种快速高效猪肺炎支原体培养基及其配制方法 |
| CN111635876A (zh) * | 2020-06-16 | 2020-09-08 | 武汉科前生物股份有限公司 | 一种猪肺炎支原体培养基及其制备方法与应用 |
| CN114836341A (zh) * | 2022-04-15 | 2022-08-02 | 辽宁益康生物股份有限公司 | 一种猪肺炎支原体培养基及其制备方法 |
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- 2012-08-31 CN CN201210318816.XA patent/CN103060220B/zh active Active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 郭福全 等: "支原体培养基的改良及其效果评价", 《微生物学免疫学进展》 * |
Cited By (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103555641B (zh) * | 2013-11-19 | 2015-08-05 | 浙江美保龙生物技术有限公司 | 一种猪肺炎支原体培养基及其制备方法 |
| CN103555641A (zh) * | 2013-11-19 | 2014-02-05 | 浙江美保龙生物技术有限公司 | 一种猪肺炎支原体培养基及其制备方法 |
| CN103667154A (zh) * | 2013-12-20 | 2014-03-26 | 广西壮族自治区兽医研究所 | 支原体培养基及其制备方法 |
| CN103667154B (zh) * | 2013-12-20 | 2015-11-18 | 广西壮族自治区兽医研究所 | 支原体培养基及其制备方法 |
| CN104560835A (zh) * | 2015-01-27 | 2015-04-29 | 新疆天康畜牧生物技术股份有限公司 | 一种培养猪肺炎支原体培养基及其制备方法 |
| CN105779362A (zh) * | 2016-05-16 | 2016-07-20 | 南京大爻网络科技有限公司 | 一种低血清培养猪肺炎支原体培养基及其制备方法和应用 |
| CN106497826B (zh) * | 2016-09-29 | 2020-02-07 | 内蒙古金源康生物工程有限公司 | 低血清高效培养猪肺炎支原体培养基及其制备方法 |
| CN106497826A (zh) * | 2016-09-29 | 2017-03-15 | 内蒙古金源康生物工程有限公司 | 低血清高效培养猪肺炎支原体培养基及其制备方法 |
| CN108949623A (zh) * | 2018-07-13 | 2018-12-07 | 北京农学院 | 用于分离和培养猪肺炎支原体的固体培养基及其制备方法 |
| CN109078003A (zh) * | 2018-08-02 | 2018-12-25 | 南京大爻网络科技有限公司 | 一种猪肺炎支原体活疫苗大规格生产方法 |
| CN109078003B (zh) * | 2018-08-02 | 2021-02-26 | 南京大爻网络科技有限公司 | 一种猪肺炎支原体活疫苗大规格生产方法 |
| CN109468248A (zh) * | 2018-12-14 | 2019-03-15 | 南京天邦生物科技有限公司 | 一种猪支原体肺炎抗原高效培养方法 |
| CN110607260A (zh) * | 2019-09-23 | 2019-12-24 | 山东甲骨文生物科技有限公司 | 一种用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基及方法 |
| CN110804563A (zh) * | 2019-11-13 | 2020-02-18 | 山东滨州沃华生物工程有限公司 | 一种用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基 |
| CN110938560A (zh) * | 2019-11-19 | 2020-03-31 | 成都天邦生物制品有限公司 | 一种快速高效猪肺炎支原体培养基及其配制方法 |
| CN110938560B (zh) * | 2019-11-19 | 2023-08-18 | 成都史纪生物制药有限公司 | 一种快速高效猪肺炎支原体培养基及其配制方法 |
| CN111635876A (zh) * | 2020-06-16 | 2020-09-08 | 武汉科前生物股份有限公司 | 一种猪肺炎支原体培养基及其制备方法与应用 |
| CN114836341A (zh) * | 2022-04-15 | 2022-08-02 | 辽宁益康生物股份有限公司 | 一种猪肺炎支原体培养基及其制备方法 |
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