CN110804563A - 一种用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基，属于动物疫苗生产技术领域。本发明的培养基由以下组分构成：MEM培养基、酵母粉、蛋白胨、葡萄糖、马血清蛋白冻干粉、转铁蛋白、丙酮酸钠、氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、苯酚红。本发明的培养基成分简单、低廉、易获取，其通过添加MEM、酵母粉、蛋白胨、葡萄糖、马血清蛋白冻干粉、丙酮酸钠、氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾和苯酚红等组分，可大大降低在猪肺炎支原体培养时的猪血清添加量，从而可以降低猪肺炎支原体的培养成本，并且还能保持猪肺炎支原体良好的生长状态以及较快的生长速度。

Description

一种用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基

技术领域

本发明涉及动物疫苗生产技术领域，特别涉及一种用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基。

背景技术

猪支原体肺炎，又称猪地方性流行肺炎，是由猪肺炎支原体引起的以慢性、高度传染性、高发病率和低死亡率为主要特点的呼吸道疾病。感染猪长期发育不良、饲料转化率低、日增重下降，严重影响养猪业的经济效益。猪肺炎支原体和其他呼吸道疾病的病原，如猪繁殖与呼吸道综合征病毒、放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、猪流感病毒、圆环病毒2型混合感染时，会使病情加剧，引起猪的死亡。

猪支原体肺炎是一种顽固性慢性病，抗支原体药物治疗一般可以抑制该病但很难清除，用药后咳喘症状消失，但停药后容易再次复发。加上近几年支原体耐药株的出现，使得药物防治更加困难，目前疫苗接种仍是预防猪支原体最为经济有效的手段。

猪肺炎支原体属于原核生物，是最小的细胞，无细胞壁、生长速度慢、对培养条件要求较为苛刻。在猪肺炎支原体疫苗的生产和研究过程中，往往需要通过往培养基中添加猪血清，以便于对分离的猪肺炎支原体进行高效的培养。

然而，使用传统商用培养基对猪肺炎支原体进行培养时，一般需要添加20％左右的猪血清，血清用量高，增加了培养成本及猪的过敏风险；一些商品化培养基要分两部分配制，一部分高压处理，一部分过滤处理，配制过程繁琐；传统方法采用煮沸猪肺组织制备培养基，支原体生长速度慢，菌体活力差；同时由于支原体培养的特殊性，导致培养基成为支原体疫苗研发的难点和关键点。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明提供了一种用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基。

本发明的技术方案为：

一种用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基，由以下组分构成：MEM培养基4-8g/L、酵母粉3-7g/L、蛋白胨15-20g/L、葡萄糖5-12g/L、马血清蛋白冻干粉6-10g/L、转铁蛋白30-100μg/L、丙酮酸钠0.6-2.0g/L、氯化钠3-7g/L、磷酸二氢钾0.1-0.4g/L、磷酸氢二钾0.5-2.5g/L、苯酚红0.005-0.02g/L。

本发明的培养基中含有猪肺炎支原体生长的必需营养成分。

猪肺炎支原体作为最小的细胞，其基因组小且数量有限，从而导致生物合成途径缺乏，需要从外界摄取氨基酸、糖类、微量元素等物质。MEM培养基含有细胞培养所需的20多种必须氨基酸；葡萄糖作为单糖类速效碳源，可被支原体快速利用，为菌体生长提供能量，但含量过高，导致其他生物途径激活，增加乙酸等代谢产物，导致代谢毒性。

蛋白胨、马血清蛋白冻干粉、酵母粉营养丰富，可为猪肺炎支原体的生长提供氮源，马血清蛋白冻干粉和酵母粉中含有前提类物质及微量元素，可有效促进支原体的生长。

转铁蛋白作为载体可结合铁离子，具有生物活性，同时可促进细胞的有丝分裂；丙酮酸钠作为一种能量物质，参与支原体细胞的代谢过程。

几种无机盐离子具有维持培养基渗透压平衡的作用，Na+/K+可调节膜电位，SO42-是机制所需的阴离子，同时也是形成大分子的养分前体以及细胞内电荷的调节者，调节菌体的生长代谢。猪肺炎支原体(Mhp)具有完整的糖酵解途径，能代谢葡萄糖产酸，因此，可利用酚红作为指示剂，通过颜色变化来反映其生长情况。

作为优选方案，由以下组分构成：MEM培养基5-7g/L、酵母粉4-6g/L、蛋白胨16-18g/L、葡萄糖6-8g/L、马血清蛋白冻干粉7-9g/L、转铁蛋白50-80μg/L、丙酮酸钠1.0-1.5g/L、氯化钠4-6g/L、磷酸二氢钾0.2-0.3g/L、磷酸氢二钾1.3-1.7g/L、苯酚红0.008-0.012g/L。

进一步地，由以下组分构成：MEM培养基6g/L、酵母粉6g/L、蛋白胨16.5g/L、葡萄糖6.5g/L、马血清蛋白冻干粉8g/L、转铁蛋白60μg/L、丙酮酸钠1.5g/L、氯化钠5.2g/L、磷酸二氢钾0.24g/L、磷酸氢二钾1.56g/L、苯酚红0.01g/L。

所述用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基的制备方法，4-8g MEM培养基、3-7g酵母粉、15-20g蛋白胨、5-10g葡萄糖、6-10g马血清蛋白冻干粉、30-100μg转铁蛋白、0.6-2.0g丙酮酸钠、3-7g氯化钠、0.1-0.4g磷酸二氢钾、0.5-2.5g磷酸氢二钾、0.005-0.02g苯酚红置于容器中，加注射用水摇匀，继续加注射用水定容至1L，除菌过滤即可。

所述培养基用于猪肺炎支原体低血清培养的方法，包括步骤：

1)在无菌条件下，向所述培养基中家加入占培养基质量分数0.5％～5％的猪血清，得到培养液；

2)向步骤1)所得培养液中加入猪肺炎支原体菌液，并置于恒温条件下摇瓶培养。

作为优选方案，步骤1)中，向所述培养基中家加入占培养基质量分数0.5％～5％的猪血清。

作为优选方案，步骤2)中，摇瓶培养的温度为33～40℃。

作为优选方案，步骤2)中，猪肺炎支原体菌液与培养液的体积之比为1:8～12。

本发明的有益效果为：

1)本发明的培养基成分简单、价格低廉、易获取，其通过添加MEM、酵母粉、蛋白胨、葡萄糖、马血清蛋白冻干粉、转铁蛋白、丙酮酸钠、氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾和苯酚红等组分，可大大降低在猪肺炎支原体培养时的猪血清添加量，从而可以降低猪肺炎支原体的培养成本，并且还能保持猪肺炎支原体良好的生长状态以及较快的生长速度。

2)本发明的培养基制备方法简单，使用前加注射水无菌过滤即可。

3)本发明的培养基用于猪肺炎支原体的培养，操作简单、成本低，可满足疫苗生产的规定，同时可实现疫苗行业大规模生产的需要。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1：

本实施例提供了一种用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基，该培养基由以下组分构成：

MEM培养基6.0g/L、酵母粉6.0g/L、蛋白胨16.5g/L、葡萄糖6.5g/L、马血清蛋白冻干粉8.0g/L、转铁蛋白60μg/L、丙酮酸钠1.5g/L、氯化钠5.2g/L、磷酸二氢钾0.24g/L、磷酸氢二钾1.56g/L、苯酚红0.01g/L。

该培养基的制备方法包括以下步骤：将6.0g的MEM、6.0g的酵母粉、16.5g的蛋白胨、6.5g的葡萄糖、8.0g的马血清蛋白冻干粉、60μg转铁蛋白、1.5g的丙酮酸钠、5.2g的氯化钠、0.24g的磷酸二氢钾、1.56g的磷酸氢二钾以及0.01g的苯酚红添加到1L的容量瓶中，加适量注射用水，摇匀，再往容量瓶中添加注射用水，定容至1L，除菌过滤即可得到培养基。

实施例2：

本实施例提供了一种用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基，该培养基由以下组分构成：

MEM培养基4.0g/L、酵母粉3.0g/L、蛋白胨15.0g/L、葡萄糖8.0g/L、马血清蛋白冻干粉6.0g/L、转铁蛋白50μg/L、丙酮酸钠0.6g/L、氯化钠3.0g/L、磷酸二氢钾0.1g/L、磷酸氢二钾0.5g/L、苯酚红0.005g/L。

该培养基的制备方法包括以下步骤：将4.0g的MEM、3.0g的酵母粉、15.0g的蛋白胨、8.0g的葡萄糖、6.0g的马血清蛋白冻干粉、50μg转铁蛋白、0.6g的丙酮酸钠、3.0g的氯化钠、0.1g的磷酸二氢钾、0.5g的磷酸氢二钾以及0.005g的苯酚红添加到1L的容量瓶中，加适量注射用水，摇匀，再往容量瓶中添加注射用水，定容至1L，除菌过滤即可得到培养基。

实施例3：

本实施例提供了一种用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基，该培养基由以下组分构成：

MEM培养基8.0g/L、酵母粉7.0g/L、蛋白胨20.0g/L、葡萄糖12.0g/L、马血清蛋白冻干粉10.0g/L、转铁蛋白100μg/L、丙酮酸钠2.0g/L、氯化钠7.0g/L、磷酸二氢钾0.4g/L、磷酸氢二钾2.5g/L、苯酚红0.02g/L。

该培养基的制备方法包括以下步骤：将8.0g的MEM、7.0g的酵母粉、20.0g的蛋白胨、12.0g的葡萄糖、10.0g的马血清蛋白冻干粉、100μg转铁蛋白、2.0g的丙酮酸钠、7.0g的氯化钠、0.4g的磷酸二氢钾、2.5g的磷酸氢二钾以及0.02g的苯酚红添加到1L的容量瓶中，加适量注射用水，摇匀，再往容量瓶中添加注射用水，定容至1L，除菌过滤即可得到培养基。

实施例4：

本实施例提供了一种用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基，该培养基由以下组分构成：

MEM培养基6.0g/L、酵母粉4.0g/L、蛋白胨16.0g/L、葡萄糖9.0g/L、马血清蛋白冻干粉7.0g/L、转铁蛋白65μg/L、丙酮酸钠1.0g/L、氯化钠4.0g/L、磷酸二氢钾0.2g/L、磷酸氢二钾1.3g/L、苯酚红0.008g/L。

该培养基的制备方法包括以下步骤：将6.0g的MEM、4.0g的酵母粉、16.0的蛋白胨、9.0g的葡萄糖、7.0g的马血清蛋白冻干粉、65μg转铁蛋白、1.0g的丙酮酸钠、4.0g的氯化钠、0.2g的磷酸二氢钾、1.3g的磷酸氢二钾以及0.008g的苯酚红添加到1L的容量瓶中，加适量注射用水，摇匀，再往容量瓶中添加注射用水，定容至1L，除菌过滤即可得到培养基。

实施例5：

本实施例提供了一种用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基，该培养基由以下组分构成：

MEM培养基7.0g/L、酵母粉6.0g/L、蛋白胨18.0g/L、葡萄糖11.0g/L、马血清蛋白冻干粉9.0g/L、转铁蛋白90μg/L、丙酮酸钠1.8g/L、氯化钠6.0g/L、磷酸二氢钾0.3g/L、磷酸氢二钾1.7g/L、苯酚红0.012g/L。

该培养基的制备方法包括以下步骤：将7.0g的MEM、6.0g的酵母粉、18.0g的蛋白胨、11.0g的葡萄糖、9.0g的马血清蛋白冻干粉、90μg转铁蛋白、1.8g的丙酮酸钠、6.0g的氯化钠、0.3g的磷酸二氢钾、1.7g的磷酸氢二钾以及0.012g的苯酚红添加到1L的容量瓶中，加适量注射用水，摇匀，再往容量瓶中添加注射用水，定容至1L，除菌过滤即可得到培养基。

实施例6：

该实施例提供了一种用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基，该培养基由以下组分构成：

MEM培养基6.0g/L、酵母粉5.0g/L、蛋白胨17.5g/L、葡萄糖10.0g/L、马血清蛋白冻干粉7.5g/L、转铁蛋白75μg/L、丙酮酸钠1.5g/L、氯化钠5.2g/L、磷酸二氢钾0.24g/L、磷酸氢二钾1.56g/L、苯酚红0.01g/L。

该培养基的制备方法包括以下步骤：将6.0g的MEM、5.0g的酵母粉、17.5g的蛋白胨、10.0g的葡萄糖、7.5g的马血清蛋白冻干粉、75μg转铁蛋白、1.5g的丙酮酸钠、5.2g的氯化钠、0.24g的磷酸二氢钾、1.56g的磷酸氢二钾以及0.01g的苯酚红添加到1L的容量瓶中，加适量注射用水，摇匀，再往容量瓶中添加注射用水，定容至1L，除菌过滤即可得到培养基。

应用实施例一

该实施例提供了一种用于猪肺炎支原体低血清培养的方法，其包括以下步骤：

(1)称取上述实施例1中各组分，加入1L注射水，除菌过滤得到的培养基；接着，在无菌条件下，往处理后的培养基中添加50mL猪血清，得到培养液，备用；

(2)量取100mL上述培养液转入到500mL三角摇瓶中，加入5mL的猪肺炎支原体菌液，置于36℃的恒温条件以及100rpm的转速条件下进行摇瓶培养48h，得到培养完成后的样品，即可完成对猪肺炎支原体的培养。

应用实施例二

该实施例提供了一种用于猪肺炎支原体低血清培养的方法，其包括以下步骤：

(1)称取上述实施例1中各组分，加入1L注射水，除菌过滤得到的培养基；接着，在无菌条件下，往处理后的培养基中添加30mL猪血清，得到培养液，备用；

(2)量取100mL上述培养液转入到500mL三角摇瓶中，加入5mL的猪肺炎支原体菌液，置于36℃的恒温条件以及100rpm的转速条件下进行摇瓶培养48h，得到培养完成后的样品，即可完成对猪肺炎支原体的培养。

应用实施例三

该实施例提供了一种用于猪肺炎支原体低血清培养的方法，其包括以下步骤：

(1)称取上述实施例1中各组分，加入1L注射水，除菌过滤得到的培养基；接着，在无菌条件下，往处理后的培养基中添加20mL猪血清，得到培养液，备用；

(2)量取100mL上述培养液转入到500mL的三角摇瓶中，加入5mL的猪肺炎支原体菌液，置于36℃的恒温条件以及100rpm的转速条件下进行摇瓶培养48h，得到培养完成后的样品，即可完成对猪肺炎支原体的培养。

对照应用实施例一

一种用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基，该培养基由以下组分构成：

MEM培养基6.0g/L、酵母粉6.0g/L、蛋白胨16.5g/L、葡萄糖6.5g/L、转铁蛋白60μg/L、丙酮酸钠1.5g/L、氯化钠5.2g/L、磷酸二氢钾0.24g/L、磷酸氢二钾1.56g/L、苯酚红0.01g/L。

该培养基的制备方法包括以下步骤：将6.0g的MEM、6.0g的酵母粉、16.5g的蛋白胨、6.5g的葡萄糖、60μg转铁蛋白、1.5g的丙酮酸钠、5.2g的氯化钠、0.24g的磷酸二氢钾、1.56g的磷酸氢二钾以及0.01g的苯酚红添加到1L的容量瓶中，加适量注射用水，摇匀，再往容量瓶中添加注射用水，定容至1L，除菌过滤即可得到培养基。

即，该对照应用实施例一中所用培养基，与实施例1相比，去除马血清蛋白冻干粉，其他同实施例1。

采用以上去除马血清蛋白冻干粉的培养基培养，其包括以下步骤：

(1)称取上述实施例1中各组分，加入1L注射水，除菌过滤得到的培养基；接着，在无菌条件下，往处理后的培养基中添加20mL猪血清，得到培养液，备用；

(2)量取100mL上述培养液转入到500mL的三角摇瓶中，然后往血清瓶中加入5mL的猪肺炎支原体菌液，并置于36℃的恒温条件以及100rpm的转速条件下进行摇瓶培养48h，得到培养完成后的样品，即可完成对猪肺炎支原体的培养。

对照应用实施例二

一种用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基，该培养基由以下组分构成：

MEM培养基6.0g/L、酵母粉6.0g/L、蛋白胨16.5g/L、马血清蛋白冻干粉8.0g/L、转铁蛋白60μg/L、丙酮酸钠1.5g/L、氯化钠5.2g/L、磷酸二氢钾0.24g/L、磷酸氢二钾1.56g/L、苯酚红0.01g/L。

该培养基的制备方法包括以下步骤：将6.0g的MEM、6.0g的酵母粉、16.5g的蛋白胨、6.5g的葡萄糖、8.0g马血清蛋白冻干粉、60μg转铁蛋白、1.5g的丙酮酸钠、0.24g的磷酸二氢钾、1.56g的磷酸氢二钾以及0.01g的苯酚红添加到1L的容量瓶中，加适量注射用水，摇匀，再往容量瓶中添加注射用水，定容至1L，除菌过滤即可得到培养基。

即，该对照应用实施例二中所用培养基，与实施例1相比，去葡萄糖，其他同实施例1。

采用以上去除氯化钠的培养基培养，其包括以下步骤：

(1)称取上述实施例1中各组分，加入1L注射水，除菌过滤得到的培养基；接着，在无菌条件下，往处理后的培养基中添加20mL猪血清，得到培养液，备用；

(2)量取100mL上述培养液转入到500mL的三角摇瓶中，然后往血清瓶中加入5mL的猪肺炎支原体菌液，并置于36℃的恒温条件以及100rpm的转速条件下进行摇瓶培养48h，得到培养完成后的样品，即可完成对猪肺炎支原体的培养。

对照应用实施例三

一种用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基，该培养基由以下组分构成：

MEM培养基6.0g/L、酵母粉6.0g/L、蛋白胨16.5g/L、葡萄糖6.5g/L、马血清蛋白冻干粉8.0g/L、丙酮酸钠1.5g/L、氯化钠5.2g/L、磷酸二氢钾0.24g/L、磷酸氢二钾1.56g/L、苯酚红0.01g/L。

该培养基的制备方法包括以下步骤：将6.0g的MEM、6.0g的酵母粉、6.5g的葡萄糖、16.5g蛋白胨、8.0g马血清蛋白冻干粉、1.5g的丙酮酸钠、5.2g的氯化钠、0.24g的磷酸二氢钾、1.56g的磷酸氢二钾以及0.01g的苯酚红添加到1L的容量瓶中，加适量注射用水，摇匀，再往容量瓶中添加注射用水，定容至1L，除菌过滤即可得到培养基。

即，该对照应用实施例三中所用培养基，与实施例1相比，去除转铁蛋白，其他同实施例1。

采用以上去除蛋白胨的培养基培养，其包括以下步骤：

(1)称取上述实施例1中各组分，加入1L注射水，除菌过滤得到的培养基；接着，在无菌条件下，往处理后的培养基中添加20mL猪血清，得到培养液，备用；

(2)量取100mL上述培养液转入到500mL的三角摇瓶中，然后往血清瓶中加入5mL的猪肺炎支原体菌液，并置于36℃的恒温条件以及100rpm的转速条件下进行摇瓶培养48h，得到培养完成后的样品，即可完成对猪肺炎支原体的培养。

对照应用实施例四

与应用实施例一相比，培养基替换为KM2培养基；往KM2培养基中添加猪血清量为培养基体积的20％；其余同应用实施例一。

对照应用实施例五

与应用实施例一相比，培养基替换为PPLO培养基；往PPLO培养基中添加猪血清量为培养基体积的20％；其余同应用实施例一。

以上应用实施例以及对照应用实施例中，猪肺炎支原体菌株和培养条件

将公司分离获得猪肺炎支原体WH-39继代复壮后，按照10％量分别接种至本发明的低血清培养基、KM2支原体培养基、PPLO支原体培养基，37℃培养，当培养基的颜色变黄，pH由7.6降至6.5时，无菌收获培养液。

活菌滴度(CCU)检测：

各取13个试管，加入4.5ml猪肺炎支原体培养基，第一管加入0.5ml生长良好的培养物，混匀后吸取0.5ml加入第二个试管，依次进行10倍系列稀释至最后一个试管，同时设置未接种猪肺炎支原体的阴性对照。试验管设置3个重复，放置37℃静置培养，每天观察培养基颜色变化，连续观察10d，最后发生颜色变化的试管，即为该培养物的活菌滴度(CCU)，结果如表1所示。

表1猪肺炎支原体WH-39接种生长试验CCU测定结果

由表1可知：

1、应用实施例一至应用实施例三中，猪肺炎支原体前几天的生长状况略有差异，但随着时间的延长，趋于相同。可见，本发明的培养基配方中仅加入2％的猪血清即可满足猪肺炎支原体的生长需求。

2、对照应用实施例一中的培养基与应用实施例三相比，培养基中去除了马血清蛋白冻干粉，其余同应用实施例三，然而，马血清蛋白冻干粉的去除导致猪肺炎支原体的生长情况明显变差；由此说明，马血清蛋白冻干粉作为培养基的必要组分之一，对猪肺炎支原体的生长具有显著的促进作用。

3、对照应用实施例二中的培养基与应用实施例三相比，培养基中去除了葡萄糖，其余同应用实施例三，然而，葡萄糖的去除导致猪肺炎支原体的生长情况明显变差；由此说明，作为猪肺炎支原体的速效碳源的葡萄糖从培养基去除后，显著降低了猪肺炎支原体的生长。且去除葡萄糖后的猪肺炎支原体的生长情况与去除马血清蛋白冻干粉后，猪肺炎支原体的生长情况相近。

4、对照应用实施例三中的培养基与应用实施例三相比，培养基中去除了转铁蛋白，其余同应用实施例三，然而，转铁蛋白的去除导致猪肺炎支原体的生长情况明显变差；由此说明，转铁蛋白作为培养基的必要组分之一，对猪肺炎支原体的生长具有显著的促进作用。

5、对照应用实施例四和对照应用实施例五采用现有的猪肺炎支原体培养基，并加入20％的猪血清，对照应用实施例四和对照应用实施例五中猪肺炎支原体的生长情况显著差于本发明的培养基，而且本发明的培养基中仅加入了2％的猪血清；猪血清的加入量为现有培养基的十分之一。

Claims (8)

1.一种用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基，其特征在于，由以下组分构成：MEM培养基4-8 g/L、酵母粉3-7 g/L、蛋白胨15-20 g/L、葡萄糖5-12 g/L、马血清蛋白冻干粉6-10g/L、转铁蛋白30-100 μg/L、丙酮酸钠0.6-2.0 g/L、氯化钠3-7 g/L、磷酸二氢钾0.1-0.4g/L、磷酸氢二钾0.5-2.5 g/L、苯酚红0.005-0.02 g/L。

2.如权利要求1所述用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基，其特征在于，由以下组分构成：MEM培养基5-7 g/L、酵母粉4-6 g/L、蛋白胨16-18 g/L、葡萄糖6-8 g/L、马血清蛋白冻干粉7-9 g/L、转铁蛋白50-80 μg/L、丙酮酸钠1.0-1.5 g/L、氯化钠4-6 g/L、磷酸二氢钾0.2-0.3 g/L、磷酸氢二钾1.3-1.7 g/L、苯酚红0.008-0.012 g/L。

3.如权利要求2所述用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基，其特征在于，由以下组分构成：MEM培养基6 g/L、酵母粉6 g/L、蛋白胨16.5 g/L、葡萄糖6.5 g/L、马血清蛋白冻干粉8 g/L、转铁蛋白60 μg/L、丙酮酸钠1.5 g/L、氯化钠5.2 g/L、磷酸二氢钾0.24 g/L、磷酸氢二钾1.56 g/L、苯酚红0.01 g/L。

4.如权利要求1所述用于猪肺炎支原体低血清培养的培养基的制备方法，其特征在于：4-8 g MEM培养基、3-7 g酵母粉、15-20 g蛋白胨、5-10 g葡萄糖、6-10 g 马血清蛋白冻干粉、30-100 μg转铁蛋白、0.6-2.0 g丙酮酸钠、3-7 g氯化钠、0.1-0.4 g磷酸二氢钾、0.5-2.5 g磷酸氢二钾、0.005-0.02 g苯酚红置于容器中，加注射用水摇匀，继续加注射用水定容至1 L，除菌过滤即可。

5.如权利要求1所述培养基用于猪肺炎支原体低血清培养的方法，其特征在于，包括步骤：

1）在无菌条件下，向所述培养基中家加入占培养基质量分数0.5%~5%的猪血清，得到培养液；

2）向步骤1）所得培养液中加入猪肺炎支原体菌液，并置于恒温条件下摇瓶培养。

6.如权利要求5所述的猪肺炎支原体低血清培养的方法，其特征在于：步骤1）中，向所述培养基中家加入占培养基质量分数1%~4%的猪血清。

7.如权利要求5所述的猪肺炎支原体低血清培养的方法，其特征在于：步骤2）中，摇瓶培养的温度为33~40℃。

8.如权利要求5或7所述的猪肺炎支原体低血清培养的方法，其特征在于：步骤2）中，猪肺炎支原体菌液与培养液的体积之比为1:8~12。