CN102628863A - 标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种医药试剂，具体的说是一种标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液。其特征在于：由如下物质组成，磷酸盐缓冲液，多羟基类有机化合物，氨基酸及蛋白质类化合物，金属离子，非离子型表面活性剂，防腐剂。本发明同现有技术相比，能够稳定标记碱性磷酸酶的抗原抗体的活性，且将稀释液加入碱性磷酸酶标记的抗原抗体通过冷冻干燥法，制备成冻干品，这样能够长期稳定标记了碱性磷酸酶的抗原抗体的活性。

Description

标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液
[技术领域]
本发明涉及一种医药试剂，具体的说是一种标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液。该稀释液能够稳定标记碱性磷酸酶的抗原抗体的活性，并可通过冷冻干燥的方法来长期稳定标记了碱性磷酸酶的抗原抗体的活性，大大提升了碱性磷酸酶在免疫体外诊断行业的应用。
[背景技术]
碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)是一种广泛存在于动物、植物、微生物中的酶。临床体外诊断经常用到的碱性磷酸酶主要从小牛肠粘膜及大肠杆菌中获得，两种酶均可在市场购买如Roche、Sigma等。碱性磷酸酶可以催化多种底物显色，所以它在临床免疫体外诊断行业有着广泛的应用。
标记了碱性磷酸酶的抗原抗体试剂是临床免疫体外诊断试剂盒的重要组成部分。免疫体外诊断试剂的原理主要通过抗原抗体的特异性结合，然后通过酶催化底物显色，来达到定量诊断的效果，所以保证稳定的标记碱性磷酸酶的抗原抗体的活性至关重要。
国内以酶作为放大系统的厂家，用到的酶多是辣根过氧化物酶，主要原因是该酶便宜且标记试剂储存较稳定，但辣根过氧化物酶标记试剂灵敏度较碱性磷酸酶低。而碱性磷酸酶没有被广泛应用的原因在于性磷酸酶标记试剂的稳定性。
[发明内容]
本发明为了克服现有技术的不足，发明提供了一种稳定标记了碱性磷酸酶抗原抗体的稀释液，它能够稳定标记了碱性磷酸酶的抗原抗体的活性，该稀释液亦可通过冷冻干燥的方法来长期稳定标记了碱性磷酸酶的抗原抗体的活性。
为了实现上述目的，本发明设计了一种标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液，其特征在于：由如下物质组成，磷酸盐缓冲液，多羟基类有机化合物，氨基酸及蛋白质类化合物，金属离子，非离子型表面活性剂，防腐剂。
所述磷酸盐缓冲液，由如下物质组成：
NaCl             8.0g；
KCl              0.2g；
Na2HPO4.12H2O    2.9g；
KH2PO4           0.2g；
调PH至7.4，加DDW定容至1000mL。
所述多羟基类有机化合物为多糖类化合物或多元醇类化合物。
所述多糖类化合物为蔗糖、果糖、麦芽糖、葡聚糖、半乳糖、乳糖或海藻糖中的一种或多种混合物。
所述多元醇类化合物为甘油、甘露醇、肌醇、PEG6000、PEG8000、PEG1000或PEG20000中的一种或多种混合物。
所述氨基酸及蛋白质类化合物为甘氨酸、缬氨酸、牛血清白蛋白、酪蛋白、明胶中的一种或多种混合物。
所述金属离子为镁离子、锌离子、钙离子或铁离子中的一种或多种混合物。
所述非离子型表面活性剂为吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-80、TritonX-20、Triton X-100或Triton X-300中的一种或多种混合物。
所述防腐剂为叠氮钠、Proclin-300或庆大霉素中的一种或多种混合物。
本发明同现有技术相比，能够稳定标记碱性磷酸酶的抗原抗体的活性，且将稀释液加入碱性磷酸酶标记的抗原抗体通过冷冻干燥法，制备成冻干品，这样能够长期稳定标记了碱性磷酸酶的抗原抗体的活性。
具体实施方式]
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解这些实施例仅用于说明本发明不用于限制本发明的范围。
实施例1：
本发明稀释液由如下物质配置而成。
磷酸盐缓冲液：
NaCl                 8.0g；
KCl                  0.2g；
Na2HPO4.12H2O        2.9g；
KH2PO4               0.2g；
调PH至7.4，加DDW定容至1000mL。
多羟基类有机化合物：
甘露醇               30.0g。
氨基酸及蛋白质类化合物：
BSA(牛血清白蛋白)    10.0g；
甘氨酸               20.0g。
金属离子：
MgCl2                1mM；
ZnCl2                0.1mM；
非离子型表面活性剂：
Tween X-20           0.5ml。
防腐剂：
NaN3(叠氮钠)         0.90g。
将标记了碱性磷酸酶的AFP抗体浓溶液，按1∶4000用稀释液稀释，获得酶标试剂，将该试剂分成两份，一份置于37℃恒温箱内进行加速试验，另一份置于2-8℃冰箱内保存。37℃加速7天后，取出酶标试剂，以2-8℃的酶标试剂作为对照，分别加入包被了AFP抗体的ELISA板孔内，加入AFP抗原，抗原抗体37℃反应1h，洗板，最后以PNPP显色，终止反应测吸光度。37℃加速7天后其活性剩余99.72％。
亦可将稀释后的酶标抗体，分装成1.0ml每管，置于冷冻干燥机内，进行冷冻干燥。冷冻干燥后，该酶标稀释液可长期保存。
实施例2：
磷酸盐缓冲液：
NaCl                 8.0g；
KCl                  0.2g；
Na2HPO4.12H2O        2.9g；
KH2PO4               0.2g；
调PH至7.4，加DDW定容至1000mL。
多羟基类有机化合物：
蔗糖                25.0g。
氨基酸及蛋白质类化合物：
BSA(牛血清白蛋白)    10.0g；
缬氨酸               20.0g。
金属离子：
MgCl2                1mM；
ZnCl2                0.1mM；
非离子型表面活性剂：
Tween X-100          0.5ml。
防腐剂：
Proclin-300          0.5ml。
将标记了碱性磷酸酶的乙肝表面抗体浓溶液，按1∶2000用稀释液稀释，获得酶标试剂，将该试剂分成两份，一份置于37℃恒温箱内进行加速试验，另一份置于2-8℃冰箱内保存。37℃加速7天后，取出酶标试剂，以2-8℃的酶标试剂作为对照，分别加入包被了乙肝表面抗体的ELISA板孔内，加入乙肝表面抗原，抗原抗体37℃反应1h，洗板，最后以PNPP显色，终止反应测吸光度。37℃加速7天后其活性剩余98.67％。
亦可将稀释后的酶标抗体，分装成1.0ml每管，置于冷冻干燥机内，进行冷冻干燥。冷冻干燥后，该酶标稀释液可长期保存。
实施例3：
磷酸盐缓冲液：
NaCl                 8.0g；
KCl                  0.2g；
Na2HPO4.12H2O        2.9g；
KH2PO4               0.2g；
调PH至7.4，加DDW  容1000mL。
多羟基类有机化合物：
蔗糖                  25.0g。
半乳糖                20.0g
氨基酸及蛋白质类化合物：
BSA(牛血清白蛋白)    10.0g；
酪蛋白               10.0g。
金属离子：
MgCl2                1mM。
非离子型表面活性剂：
Tween X-100          0.5ml。
防腐剂：
Proclin-300          0.5ml。
将标记了碱性磷酸酶的乙肝核心抗体浓溶液，按1∶12000用稀释液稀释，获得酶标试剂，将该试剂分成两份，一份置于37℃恒温箱内进行加速试验，另一份置于2-8℃冰箱内保存。37℃加速7天后，取出酶标试剂，以2-8℃的酶标试剂作为对照，分别加入包被了乙肝核心抗原的ELISA板孔内，加入乙肝核心抗体竞争，抗原抗体37℃反应1h，洗板，最后以PNPP显色，终止反应测吸光度。37℃加速7天后其活性剩余99.16％。
亦可将稀释后的酶标抗体，分装成0.5ml每管，置于冷冻干燥机内，进行冷冻干燥。冷冻干燥后，该酶标稀释液可长期保存。

Claims (9)

1.一种标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液，其特征在于：由如下物质组成，磷酸盐缓冲液，多羟基类有机化合物，氨基酸及蛋白质类化合物，金属离子，非离子型表面活性剂，防腐剂。
2.根据权利要求1所述的标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液，由如下物质组成：
NaCl             8.0g；
KCl              0.2g；
Na2HPO4.12H2O    2.9g；
KH2PO4           0.2g；
调PH至7.4，加DDW定容至1000mL。
3.根据权利要求1所述的标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液，其特征在于：所述多羟基类有机化合物为多糖类化合物或多元醇类化合物。
4.根据权利要求3所述的标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液，其特征在于：所述多糖类化合物为蔗糖、果糖、麦芽糖、葡聚糖、半乳糖、乳糖或海藻糖中的一种或多种混合物。
5.根据权利要求3所述的标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液，其特征在于：所述多元醇类化合物为甘油、甘露醇、肌醇、PEG6000、PEG8000、PEG1000或PEG20000中的一种或多种混合物。
6.根据权利要求1所述的标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液，其特征在于：所述氨基酸及蛋白质类化合物为甘氨酸、缬氨酸、牛血清白蛋白、酪蛋白、明胶中的一种或多种混合物。
7.根据权利要求1所述的标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液，其特征在于：所述金属离子为镁离子、锌离子、钙离子或铁离子中的一种或多种混合物。
8.根据权利要求1所述的标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液，其特征在于：所述非离子型表面活性剂为吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-80、Triton X-20、Triton X-100或Triton X-300中的一种或多种混合物。
9.根据权利要求1所述的标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液，其特征在于：所述防腐剂为叠氮钠、Proclin-300或庆大霉素中的一种或多种混合物。
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