CN107976540A - 可变色elisa试剂盒样品稀释液 - Google Patents

可变色elisa试剂盒样品稀释液 Download PDF

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王艳萍
苗立中
王金良
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Abstract

本发明提供一种可变色ELISA试剂盒样品稀释液,所述样品稀释液按质量分数包括下列组分：特效稳定剂25‑80％、血清制品10‑20％、可变色指示剂0.005‑0.02％、防腐剂0.001‑0.005％、余量为基础缓冲液；所述特效稳定剂为肌醇、海藻糖、NP‑40以质量比为10‑35:5‑20:10‑25组成的混合物。本发明在基础缓冲液中加入甲酚红指示剂，未加样品时颜色为淡黄色，加入后变为紫蓝色，显示反应明显，能完全避免ELISA检测过程样品的跳孔和错加现象。而且本发明提供的样品稀释液中包含血清蛋白组份、特效稳定剂等组分，能够很好地保护血清或血浆样品，还原体内血清环境，有效降低基质背景干扰，提高检测结果的准确性和稳定性。

Description

可变色ELISA试剂盒样品稀释液
技术领域
本发明涉及ELISA试剂盒检测分析技术领域，具体涉及一种可变色ELISA试剂盒样品稀释液。
背景技术
ELISA方法由于具有敏感、特异、操作简便、可定性定量检测，安全性好等优点，广泛应用于疫病诊断和体内多种免疫成分的检测。同时由于易于试剂盒化，特别适宜临床大样本的现场快速检测，在药物残留筛查等食品安全领域具有重要意义。相关ELISA试剂盒产品的商品化和推广应用很大程度上依赖于其产品质量的好坏，其中产品稳定性、结果准确性和操作的便易性使其主要影响因素。血清或血浆作为ELISA检测中最常用的样品，在ELISA抗原或抗体检测过程中常常需要进行不同比例的稀释，目前市场常见的ELISA试剂盒稀释液均不能对样品进行有效保护，使得稀释后的样品环境与血清或血浆存在明显差异，存在一定程度的基质背景干扰，影响检测结果准确性。且现有的试剂盒产品样稀多为无色或者呈单一组份颜色，在大规模样品检测中，使用无色样稀在加样过程中存在跳孔或错加的现象，而使用单一颜色样稀时，由于加入血液样品先后颜色无明显变化，存在漏加的现象。再者，在ELISA试剂盒推广中，常需要一定时间的产品保存期，这就需要开发具长时间稳定性试剂盒样品稀释液。
因此，研制一种易于区分样品稀释液中是否加入血清或血浆样品的稀释液，同时具有一定保存期和显著降低样品基质背景干扰的ELISA试剂盒样品稀释液具有重要意义。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种显色反应明显，可完全避免检测过程样品跳孔和错加现象的可变色ELISA试剂盒样品稀释液，同时还可对样品进行有效保护，降低样品基质背景干扰，提高检测结果的准确性和稳定性。
本发明提供的可变色ELISA试剂盒样品稀释液,所述样品稀释液按质量分数包括下列组分：特效稳定剂25-80％、血清制品10-20％、可变色指示剂0.005-0.02％、防腐剂0.001-0.005％、余量为基础缓冲液；
所述特效稳定剂为肌醇、海藻糖、NP-40以质量比为10-35:5-20:10-25组成的混合物；
进一步，所述样品稀释液按质量分数包括下列组分：特效稳定剂55％、血清制品12％、可变色指示剂0.017％、防腐剂0.003％、基础缓冲液32.98％；
所述特效稳定剂为肌醇、海藻糖、NP-40以质量比为25:15:15组成的混合物；
进一步，所述基础缓冲液的pH为7.2，以纯化水为溶剂，且所述基础缓冲液按浓度包括如下组分：
进一步，所述基础缓冲液按浓度包括如下组分：
进一步，所述血清制品为牛血清、猪血清、马血清、鸡血清、兔血清和牛血清白蛋白中的一种；
进一步，所述可变色指示剂为甲酚红指示剂；
进一步，所述防腐剂为KroVin750。
本发明的有益效果：
本发明在基础缓冲液中加入甲酚红指示剂，未加样品时颜色为淡黄色，加入后变为紫蓝色，显示反应明显，能完全避免ELISA检测过程样品的跳孔和错加现象。而且本发明提供的样品稀释液中包含血清蛋白组份、特效稳定剂等组分，能够很好地保护血清或血浆样品，还原体内血清环境，有效降低基质背景干扰，提高检测结果的准确性和稳定性。同时，本发明提供的样品稀释液指示剂中包括高浓度中性盐、海藻糖、血清蛋白、高效抑菌防腐剂和特效稳定剂，通过这些组分之间的相互配合、相互协同作用能够大大地提高样品稀释液的稳定性，而且能够在低温条件下长期保存，非常有利于ELISA试剂盒的推广应用。
本发明提供的可变色ELISA试剂盒样品稀释液，可用于ELISA试剂盒检测中的血清或血浆样本稀释，其显色反应明显，可完全避免检测过程样品跳孔和错加现象。相比市售的ELISA稀释液，本发明可对样品进行有效保护，降低样品基质背景干扰，提高检测结果的准确性和稳定性。本发明可以直接用于诊断ELISA试剂盒的制备，具有巨大的市场需求。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明作进一步描述：
图1为4℃条件下实施例一制得的可变色ELISA试剂盒样品稀释液稳定性试验结果图；
图2为37℃条件下实施例一制得的可变色ELISA试剂盒样品稀释液稳定性试验结果图。
具体实施方式
以下为具体实施例：
实施例一
本实施例的可变色ELISA试剂盒样品稀释液按质量分数包括下列组分：特效稳定剂60％、牛血清15％、甲酚红指示剂0.02％、KroVin750 0.003％、基础缓冲液24.977％；
其中：
所述特效稳定剂为肌醇、海藻糖、NP-40(Nonidet P-40，中文名：乙基苯基聚乙二醇)以质量比为30:10:25组成的混合物；
所述基础缓冲液的pH为7.2，以纯化水为溶剂，且所述基础缓冲液按浓度包括如下组分：
所述牛血清包括小牛血清、胎牛血清和新生牛血清，最优为胎牛血清；也可替换为猪血清、马血清、鸡血清、兔血清和牛血清白蛋白中的一种。
实施例二
本实施例的可变色ELISA试剂盒样品稀释液按质量分数包括下列组分：特效稳定剂80％、牛血清10％、甲酚红指示剂0.02％、KroVin750 0.005％、基础缓冲液9.975％；
其中：
所述特效稳定剂为肌醇、海藻糖、NP-40以质量比为35:20:25组成的混合物；
所述基础缓冲液的pH为7.2，以纯化水为溶剂，且所述基础缓冲液按浓度包括如下组分：
所述牛血清包括小牛血清、胎牛血清和新生牛血清，最优为胎牛血清；也可替换为猪血清、马血清、鸡血清、兔血清和牛血清白蛋白中的一种。
实施例三
本实施例的可变色ELISA试剂盒样品稀释液按质量分数包括下列组分：特效稳定剂25％、牛血清20％、甲酚红指示剂0.005％、KroVin750 0.001％、基础缓冲液54.994％；
其中：
所述特效稳定剂为肌醇、海藻糖、NP-40以质量比为10:5:10组成的混合物；
所述基础缓冲液的pH为7.2，以纯化水为溶剂，且所述基础缓冲液按浓度包括如下组分：
所述牛血清包括小牛血清、胎牛血清和新生牛血清，最优为胎牛血清；也可替换为猪血清、马血清、鸡血清、兔血清和牛血清白蛋白中的一种。
实施例四
本实施例的可变色ELISA试剂盒样品稀释液按质量分数包括下列组分：特效稳定剂55％、牛血清12％、甲酚红指示剂0.017％、KroVin750 0.003％、基础缓冲液32.980％；
其中：
所述特效稳定剂为肌醇、海藻糖、NP-40以质量比为25:15:15组成的混合物；
所述基础缓冲液的pH为7.2，以纯化水为溶剂，且所述基础缓冲液按浓度包括如下组分：
所述牛血清包括小牛血清、胎牛血清和新生牛血清，最优为胎牛血清；也可替换为猪血清、马血清、鸡血清、兔血清和牛血清白蛋白中的一种。
实施例五
本实施例的可变色ELISA试剂盒样品稀释液按质量分数包括下列组分：特效稳定剂40％、牛血清12％、甲酚红指示剂0.01％、KroVin750 0.005％、基础缓冲液47.985％；
其中：
所述特效稳定剂为肌醇、海藻糖、NP-40以质量比为10:20:10组成的混合物；
所述基础缓冲液的pH为7.2，以纯化水为溶剂，且所述基础缓冲液按浓度包括如下组分：
所述牛血清包括小牛血清、胎牛血清和新生牛血清，最优为胎牛血清；也可替换为猪血清、马血清、鸡血清、兔血清和牛血清白蛋白中的一种。
实施例六
本实施例的可变色ELISA试剂盒样品稀释液按质量分数包括下列组分：特效稳定剂50％、牛血清20％、甲酚红指示剂0.01％、KroVin750 0.005％、基础缓冲液29.985％；
其中：
所述特效稳定剂为肌醇、海藻糖、NP-40以质量比为35:5:10组成的混合物；
所述基础缓冲液的pH为7.2，以纯化水为溶剂，且所述基础缓冲液按浓度包括如下组分：
所述牛血清包括小牛血清、胎牛血清和新生牛血清，最优为胎牛血清；也可替换为猪血清、马血清、鸡血清、兔血清和牛血清白蛋白中的一种。
上述实施例中，所述的基础缓冲液的制备方法为：按每升溶液中溶质的浓度称取NaCl、KCl、Na2HPO4·12H2O和KH2PO4，用纯化水充分溶解后，用NaOH调节pH至7.2，然后定容至1L即可。
上述实施例中，各原料组分都可通过市场购买获取。
检测上述实施例中制得的可变色ELISA试剂盒样品稀释液的准确性和稳定性，方法及结果如下：
1、准确性验证
1.1实验方法及步骤：
(1)取实施例一配制的可变色ELISA试剂盒样品稀释液1000mL；
(2)选取国内科前生物生产的PCV2抗体ELISA试剂盒，采用本发明制得的样品稀释液替换原PCV2抗体ELISA试剂盒中的样品稀释液，制得新型可变色ELISA试剂盒，然后分别采用新型可变色ELISA试剂盒和原PCV2抗体ELISA试剂盒对6份不同抗体水平的血清样品进行检测，测定样品的OD450值，评价其检测结果稳定性，结果如下表1所示。
1.2实验结果
表1新型可变色ELISA试剂盒准确性验证结果
由上表可知，用本发明实施例五制备的可变色ELISA试剂盒样品稀释液替换原PCV2抗体ELISA试剂盒中的样品稀释液制得的新型可变色ELISA试剂盒，与原PCV2抗体ELISA试剂盒检测结果变异系数在0.136-4.803％之间，所检测样品OD值完全一致，具有很好准确性。
2、稳定性测试
2.1实验方法与步骤
(1)取实施例一配制的可变色ELISA试剂盒样品稀释液1000mL，分装30mL/瓶，保存于4℃和37℃温箱中；
(2)定期取出考察其稳定性：放于4℃条件样品稀释液每月取出检测一次，连续14个月；放于37℃条件下样品稀释液每1天取出检测一次，连续12天；分别进行ELISA检测，测定样品的OD450值，评价其稳定性，结果如表2、表3、图1、图2所示。
2.2实验结果
表2 4℃条件下ELISA样品稀释液稳定性试验
表3 37℃热加速ELISA样品稀释液稳定实验
结合表1、表2、图1、图2可知：置于4℃条件下，样品稀释液对血清样品检测结果，1-12月之间，OD值检测结果一致，无明显表变化，其样品检测值相关系数R2均在0.95以上，13月开始有所降低，到14月越是降低明显。而37℃热加速实验显示，1-10天内，检测结果基本一致，无显著变化，其检测值相关系数R2均在0.95以上，从11天开始OD值变化明显。由此可见，本发明实施例五制备的可变色ELISA试剂盒样品稀释液具有良好稳定性，能够有效延长试剂盒有效期。
进行准确性测试和稳定性测试的血清样品为常规临床血清样品。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (7)

1.一种可变色ELISA试剂盒样品稀释液,其特征在于：所述样品稀释液按质量分数包括下列组分：特效稳定剂25-80％、血清制品10-20％、可变色指示剂0.005-0.02％、防腐剂0.001-0.005％、余量为基础缓冲液；
所述特效稳定剂为肌醇、海藻糖、NP-40以质量比为10-35:5-20:10-25组成的混合物。
2.根据权利要求1所述的可变色ELISA试剂盒样品稀释液,其特征在于：所述样品稀释液按质量分数包括下列组分：特效稳定剂55％、血清制品12％、可变色指示剂0.017％、防腐剂0.003％、基础缓冲液32.98％；
所述特效稳定剂为肌醇、海藻糖、NP-40以质量比为25:15:15组成的混合物。
3.根据权利要求1所述的可变色ELISA试剂盒样品稀释液,其特征在于：所述基础缓冲液的pH为7.2，以纯化水为溶剂，且所述基础缓冲液按浓度包括如下组分：
4.根据权利要求3所述的可变色ELISA试剂盒样品稀释液,其特征在于：所述基础缓冲液按浓度包括如下组分：
5.根据权利要求1所述的可变色ELISA试剂盒样品稀释液,其特征在于：所述血清制品为牛血清、猪血清、马血清、鸡血清、兔血清和牛血清白蛋白中的一种。
6.根据权利要求1所述的可变色ELISA试剂盒样品稀释液,其特征在于：所述可变色指示剂为甲酚红指示剂。
7.根据权利要求1所述的可变色ELISA试剂盒样品稀释液,其特征在于：所述防腐剂为KroVin750。
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