CN107991500A

CN107991500A - 糖化血红蛋白检测试剂盒

Info

Publication number: CN107991500A
Application number: CN201810093434.9A
Authority: CN
Inventors: 甘萍萍; 耿英利; 黎明; 吴昌英; 龙腾镶
Original assignee: Mike Biological Ltd By Share Ltd
Current assignee: Mike Biological Ltd By Share Ltd
Priority date: 2018-01-31
Filing date: 2018-01-31
Publication date: 2018-05-04
Anticipated expiration: 2038-01-31
Also published as: CN107991500B

Abstract

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种糖化血红蛋白检测试剂盒，该试剂盒包含试剂R1和试剂R2，试剂R1包含胶乳、缓冲液A和表面活性剂；试剂R2包含抗体、缓冲液B和表面活性剂。该试剂盒可以消除个体血红蛋白含量差异在糖化血红蛋白检测中的影响，而且稳定性好，便于使用和保存。

Description

糖化血红蛋白检测试剂盒

技术领域

本发明属于糖化血红蛋白检测技术领域，具体涉及一种糖化血红蛋白检测试剂盒。

背景技术

糖化血红蛋白(HbA1c)是人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物。血糖和血红蛋白的结合生成糖化血红蛋白是不可逆反应，并与血糖浓度成正比，且保持120天左右，所以可以观测到120天之前的血糖浓度。糖化血红蛋白测试通常可以反映患者近8～12周的血糖控制情况。

糖化血红蛋白的特点决定了它在糖尿病监测中有很大的意义：(1)与血糖值相平行。血糖越高，糖化血红蛋白就越高，所以能反映血糖控制水平；(2)生成缓慢。由于血糖是不断波动的，每次抽血只能反映当时的血糖水平，而糖化血红蛋白则是逐渐生成的，短暂的血糖升高不会引起糖化血红蛋白的升高；反过来，短暂的血糖降低也不会造成糖化血红蛋白的下降；(3)一旦生成就不易分解。糖化血红蛋白相当稳定，不易分解，所以它虽然不能反映短期内的血糖波动，却能很好地反映较长时间的血糖控制程度，糖化血红蛋白能反映采血前2个月之内的平均血糖水平；(4)较少受血红蛋白水平的影响。因此，糖化血红蛋白是糖尿病诊断新标准和治疗监测的“金标准”。

现在糖尿病已成为继心脑血管疾病和肿瘤之后第三大非传染病，亦必然成为导致病残和死亡的重要原因之一，糖化血红蛋白可作为糖尿病患者长期血糖控制的指标，而且与糖尿病慢性并发症的发生及发展有密切关系。具体表现为①在糖尿病患者中，HbA1c水平能预测心血管疾病的危险；②在无糖尿病和HbA1c水平正常的人群中，HbA1c水平能预测死亡率；③具有较高浓度HbA1c的患者能从控制血压和降低胆固醇中获得裨益；④HbA1c可作为糖尿病或糖耐量受损(IGT)患者实用的筛查方法。

目前，临床上测定HbA1c的方法有很多，较常用的是HPLC法、酶法、胶乳免疫比浊法等。其中，HPLC方法作为检测糖化血红蛋白的金标准方法被广泛采用，但成本较高；酶法检测的精密度、准确度较差；胶乳免疫比浊法因为能够用于全自动生化分析仪，通量高，且结果比酶法准确，价格相比HPLC方法低，能够进行大规模推广使用。

目前市售糖化血红蛋白测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)基本原理如下：

样本中血红蛋白和糖化血红蛋白与试剂R1中胶乳有相同的非特异性吸附而固相化，正常情况下样本中血红蛋白含量相对于胶乳来讲是过量的，加入试剂R2后，R2中的糖化血红蛋白抗体后形成糖化血红蛋白抗原-胶乳-抗体免疫复合物，凝集量因胶乳表面固相化的糖化血红蛋白量的不同而不同。通过测定其吸光度并与糖化血红蛋白百分浓度的校准曲线比较，可得出样本中的糖化血红蛋白占血红蛋白的百分含量。

该方法存在以下缺陷：

当血红蛋白的量能够满足胶乳吸附量时，检测结果不受影响，但当血红蛋白量降低(如贫血)等情况下，胶乳不能达到饱和吸附量，同时糖化血红蛋白抗体会被吸附在胶乳上，不利于抗原抗体的特异性反应。导致糖化血红蛋白抗体形成的免疫复合物减少，以致检测结果降低，甚至低于参考范围下限，有可能会误导医生做出错误的判断，延误病情。

在临床上，由于个体差异，部分病人样本中血红蛋白含量不一样，当血红蛋白浓度减少时，则会影响试剂盒检测结果，如贫血病人样本，临床上常以血红蛋白(Hb)浓度来代替。依据我国的标准：正常人(Hb含量在110-160g/L)，轻度贫血(Hb含量在90g/L-109g/L)，中度贫血(Hb含量在60-89g/L)、重度贫血(Hb含量在30-59g/L)。

发明内容

鉴于此，本发明提供了一种糖化血红蛋白检测试剂盒，其包含试剂R1和试剂R2，在试剂R1中使用的双缓冲液，可以消除胶乳过程中胶乳电荷的变化对物理吸附的影响，消除个体血红蛋白含量差异在糖化血红蛋白检测中的影响；本发明使用的表面活性剂可以进一步消除胶乳保存过程中胶乳电荷的变化对物理吸附的影响，使抗体不被吸附在胶乳上，同时促进抗原抗体的特异性反应；而且本发明试剂稳定性好，便于使用和保存。

为实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种糖化血红蛋白检测试剂盒，其包含试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包含胶乳、缓冲液A和表面活性剂，所述试剂R2包含抗体、缓冲液B和表面活性剂。

优选地，所述试剂R1包含胶乳0.2-10g/L、缓冲液A和表面活性剂0.01-1ml/L，所述试剂R2包含抗体0.01-1mg/mL、缓冲液B 10-200mmol/L和表面活性剂0.05-2ml/L；

其中，更优选地，所述胶乳是0.5-2g/L；进一步优选地，所述胶乳是0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9或2g/L，更进一步优选地，所述胶乳是1g/L。

本发明所使用的胶乳是可商购的，例如来自四川迈克生物新材料技术有限公司的物理吸附胶乳(例如，货号XCL1379)。

其中，更优选地，所述抗体是0.03-0.2mg/mL；进一步优选地，所述抗体是0.03、0.05、0.07、0.1、0.13、0.15、0.17或0.2mg/mL；更进一步优选地，所述抗体是0.1mg/mL。

优选地，所述抗体可以是动物抗人糖化血红蛋白单克隆抗体；更优选地，所述动物包括兔和鼠。

本发明所使用的抗体是可商购的，例如来自四川迈克生物新材料技术有限公司的鼠抗人糖化血红蛋白单克隆抗体(例如，货号XCL1378)。

优选地，所述缓冲液A可以是磷酸盐、甘氨酸、Tris和硼酸盐的任意两种的组合；更优选地，所述缓冲液A是甘氨酸和硼酸盐的组合；更优选地，所述甘氨酸的浓度是2-200mmol/L，所述硼酸盐的浓度是1-50mmol/L；更优选地，所述甘氨酸是50-150mmol/L，所述硼酸盐是10-30mmol/L；进一步优选地，所述甘氨酸可以是50、60、70、80、90、100、110、120、130、140或150mmol/L，所述硼酸盐可以是10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30mmol/L；更进一步优选地，所述甘氨酸是100mmol/L，所述硼酸盐是20mmol/L。

优选地，所述缓冲液A的pH值范围是5.0-9.0；更优选地，所述缓冲液A的pH值范围是8.0-8.5。

优选地，所述缓冲液B可以是MES、HEPES、Tris、CAPSO、MOPS、甘氨酸、硼酸盐和磷酸盐的一种；更优选地，所述缓冲液B是磷酸盐；更优选地，所述缓冲液B是10-200mmol/L，更优选地，所述缓冲液B是20-80mmol/L；进一步优选地，所述缓冲液B是20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75或80mmol/L；更进一步优选地，所述缓冲液B是50mmol/L。

优选地，所述缓冲液B的pH值范围是4.0-9.0；更优选地，所述缓冲液B的pH值范围是5.5-6.5。

本发明所使用的缓冲剂是可商购的，例如来自苏州市贝克生物科技有限公司的HEPES(例如，批次20170105)、来自上海天宇生物试剂有限公司的甘氨酸(例如，批次20170425)、来自ANGUS公司的Tris、来自天津科密欧有限公司的硼酸盐等。

优选地，所述试剂R1还包含防腐剂。

优选地，所述试剂R2还包含无机盐、防腐剂。

优选地，所述试剂R2还包含保护剂、蛋白质稳定剂、螯合剂。

优选地，所述试剂盒包含试剂R1和试剂R2，

所述试剂R1包含：

胶乳 0.2-10g/L

甘氨酸缓冲液 2-200mmol/L

磷酸盐缓冲液 1-50mmol/L

表面活性剂 0.01-1ml/L

pH值 5.0-9.0

所述试剂 R2包含：

抗体 0.01-1mg/mL

缓冲液B 10-200mmol/L

表面活性剂 0.05-2ml/L

pH值 4.0-9.0；

更优选地，所述试剂盒包含试剂R1和试剂R2，

所述试剂R1包含：

胶乳 0.5-2g/L

甘氨酸缓冲液 50-150mmol/L

硼酸盐缓冲液 10-30mmol/L

表面活性剂 0.01-0.1ml/L

pH值 8.0-8.5

所述试剂R2包含：

抗体 0.03-0.2mg/mL

缓冲液B 20-80mmol/L

表面活性剂 0.2-0.8ml/L

pH值 5.5-6.5；

进一步优选地，所述试剂盒包含试剂R1和试剂R2，

所述试剂R1包含：

胶乳 1g/L

甘氨酸缓冲液 100mmol/L

硼酸盐缓冲液 20mmol/L

表面活性剂0.05ml/L

pH值 8.1

所述试剂R2包含：

抗体 0.1mg/mL

缓冲液B 50mmol/L

表面活性剂 0.5ml/L

pH值 6。

优选地，所述试剂盒包含试剂R1和试剂R2，

所述试剂R1包含：

胶乳 0.2-10g/L

甘氨酸缓冲液 2-200mmol/L

磷酸盐缓冲液 1-50mmol/L

表面活性剂 0.01-1ml/L

防腐剂 0.01-5ml/L

pH值 5.0-9.0

所述试剂R2包含：

抗体 0.01-1mg/mL

缓冲液B 10-200mmol/L

表面活性剂 0.05-2ml/L

保护剂 2-50ml/L

蛋白质稳定剂 1-50g/L

无机盐 1-30g/L

防腐剂 0.5-5g/L

螯合剂 0.01-4g/L

pH值 4.0-9.0；

更优选地，所述试剂盒包含试剂R1和试剂R2，

所述试剂R1包含：

胶乳 0.5-2g/L

甘氨酸缓冲液 50-150mmol/L

硼酸盐缓冲液 10-30mmol/L

表面活性剂 0.01-0.1ml/L

防腐剂 0.2-2ml/L

pH值 8.0-8.5

所述试剂R2包含：

抗体 0.03-0.2mg/mL

缓冲液B 20-80mmol/L

表面活性剂 0.2-0.8ml/L

保护剂 5-30ml/L

蛋白质稳定剂 1-10g/L

无机盐 5-15g/L

防腐剂 2-4g/L

螯合剂 0.1-1g/L

pH值 5.5-6.5；

进一步优选地，所述试剂盒包含试剂R1和试剂R2，

所述试剂R1包含：

胶乳 1g/L

甘氨酸缓冲液 100mmol/L

硼酸盐缓冲液 20mmol/L

表面活性剂 0.05ml/L

防腐剂 1ml/L

pH值 8.1

所述试剂R2包含：

抗体 0.1mg/mL

缓冲液B 50mmol/L

表面活性剂 0.5ml/L

保护剂 20ml/L

蛋白质稳定剂 5g/L

无机盐 9g/L

防腐剂 3g/L

螯合剂 0.5g/L

pH值 6。

优选地，所述表面活性剂可以是阴离子性表面活性剂、阳离子性表面活性剂、两性离子表面活性剂或非离子性表面活性剂中的一种。

所述阴离子性表面活性剂可以是十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠、八烷基三甲基氯化铵、胆酸钠、脱氧胆酸钠或牛磺脱氧胆酸钠中的一种或两种以上的组合。

所述阳离子性表面活性剂可以是十六烷基三甲基溴化铵、四癸基溴化铵或十二烷基吡啶鎓氯化物中的一种。

所述两性离子表面活性剂可以是3-[(3-胆酰胺丙基)二甲基铵]-1-丙磺酸盐、3-[(3-胆酰胺丙基)二甲基铵]-2-羟基-1-丙磺酸盐、十二烷基二甲基甜菜碱、棕榈酰溶血卵磷脂、十二烷基-N-甜菜碱或十二烷基-β-丙氨酸中的一种。

所述非离子性表面活性剂可以是辛基葡糖苷、庚基硫代葡糖苷、癸酰基-N-甲基葡糖胺、聚氧乙烯十二烷基醚、聚氧乙烯七甲基己基醚、聚氧乙烯异辛基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚、聚氧乙烯脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、聚氧乙烯基联苯乙烯化苯基醚、聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯或聚环氧乙烷山梨糖醇酯中的一种。

更优选地，所述表面活性剂是非离子性表面活性剂；进一步优选地，所述表面活性剂是聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯(亦称吐温20)。

本发明所使用的表面活性剂是可商购的，例如来自温州清明化工有限公司的吐温20(例如，批号20161010)、花王株式会社化学品事业部门的聚氧乙烯基联苯乙烯化苯基醚(例如，批号4826)等。

本发明的发明人发现本发明的试剂盒中，当表面活性剂的浓度是以下数值范围时，更有利于实现本发明的目的：优选地，试剂R1中表面活性剂的浓度是0.01-1ml/L，试剂R2中表面活性剂的浓度是0.05-2ml/L；更优选地，试剂R1中表面活性剂的浓度是0.01-0.1ml/L，试剂R2中表面活性剂的浓度是0.2-0.8ml/L；进一步优选地，试剂R1中表面活性剂的浓度是0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09或0.1ml/L，试剂R2中表面活性剂的浓度是0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7或0.8ml/L；更进一步优选地，试剂R1中表面活性剂的浓度是0.05ml/L，试剂R2中表面活性剂的浓度是0.5ml/L。

优选地，所述防腐剂可以是ProClin系列防腐剂(例如，PC150、PC200、PC300、PC950)、叠氮钠、苯酚、咪唑烷基脲(IZU)、2-氯乙酰胺(CAA)的一种或多种；更优选地，所述试剂R1中的防腐剂是PC950，所述试剂R2中的防腐剂是IZU。

优选地，所述无机盐可以是氯化钾、氯化钠、氯化镁的一种或多种。

优选地，所述保护剂可以是甘露醇、蔗糖、山梨醇、海藻糖的一种或多种；更优选地，所述保护剂可以是甘露醇、蔗糖、山梨醇、海藻糖的一种；进一步优选地，所述保护剂是甘露醇。

优选地，所述蛋白质稳定剂可以是牛血清白蛋白(BSA)、血清白蛋白(ALB)、酪蛋白的一种或者多种；更优选地，所述蛋白质稳定剂可以是牛血清白蛋白(BSA)、血清白蛋白(ALB)、酪蛋白的一种；进一步优选地，所述蛋白质稳定剂是牛血清白蛋白。

优选地，所述螯合剂可以是EDTA.2Na、EDTA.2K、EDTA.4Na的一种或者多种；更优选地，所述螯合剂可以是EDTA.2Na、EDTA.2K、EDTA.4Na的一种；进一步优选地，所述螯合剂是EDTA.2Na。

本发明还提供了使用本发明的试剂盒进行糖化血红蛋白检测的方法，包括使用本发明试剂盒的步骤；所述检测方法包括以下步骤：

(a)取采集的样本，采用纯化水稀释50倍，溶血后将其和校准品分别与所述试剂R1混合并孵育3-5min；

(b)将所述试剂R2与经孵育的步骤(a)的混合物混合，孵育1min和5min后测定所得混合物的吸光度A1和A2；

(c)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；

(d)根据校准曲线计算出样本中HbA1c的百分含量。

所述“校准品”来自于迈克生物股份有限公司市售的糖化血红蛋白校准品。

优选地，所述方法中使用的试剂R1、试剂R2的比例为试剂R1：试剂R2＝1:1-6:1。本发明使用的样本为全血样本或血细胞层样本。

本发明还提供了本发明的试剂盒用于糖化血红蛋白检测的用途。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明提供了一种糖化血红蛋白检测试剂盒，其包含试剂R1和试剂R2，在试剂R1中使用的双缓冲液，可以消除胶乳过程中胶乳电荷的变化对物理吸附的影响，消除个体血红蛋白含量差异在糖化血红蛋白检测中的影响；本发明使用的表面活性剂可以进一步消除胶乳保存过程中胶乳电荷的变化对物理吸附的影响，使抗体不被吸附在胶乳上，同时促进抗原抗体的特异性反应；而且本发明试剂稳定性好，便于使用和保存。

具体实施方式

为了使本领域技术人员更好地了解本申请中的技术方案，下面结合实施例对本发明作进一步说明，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域平台技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本申请保护的范围。一、糖化血红蛋白检测试剂盒的配制

实施例1：糖化血红蛋白检测试剂盒的配制

将下表1中所示的所有组分按照如下所示浓度混合以制备试剂R1和试剂R2。

表1

实施例2：糖化血红蛋白检测试剂盒的配制

将下表2中所示的所有组分按照如下所示浓度混合以制备试剂R1和试剂R2。

表2

实施例3：糖化血红蛋白检测试剂盒的配制

将下表3中所示的所有组分按照如下所示浓度混合以制备试剂R1和试剂R2。

表3

实施例4：糖化血红蛋白检测试剂盒的配制

将下表4中所示的所有组分按照如下所示浓度混合以制备试剂R1和试剂R2。

表4

实施例5：糖化血红蛋白检测试剂盒的配制

将下表5中所示的所有组分按照如下所示浓度混合以制备试剂R1和试剂R2。

表5

实施例6：糖化血红蛋白检测试剂盒的配制

将下表6中所示的所有组分按照如下所示浓度混合以制备试剂R1和试剂R2。

表6

实施例7：糖化血红蛋白检测试剂盒的配制

将下表7中所示的所有组分按照如下所示浓度混合以制备试剂R1和试剂R2。

表7

实施例8：糖化血红蛋白检测试剂盒的配制

将下表8中所示的所有组分按照如下所示浓度混合以制备试剂R1和试剂R2。

表8

实施例9：糖化血红蛋白检测试剂盒的配制

将下表9中所示的所有组分按照如下所示浓度混合以制备试剂R1和试剂R2。

表9

实施例10：糖化血红蛋白检测试剂盒的配制

将下表10中所示的所有组分按照如下所示浓度混合以制备试剂R1和试剂R2。

表10

对比例1：

将下表11中所示的所有组分按照如下所示浓度混合以制备试剂R1和试剂R2。

表11

对比例2：

将下表12中所示的所有组分按照如下所示浓度混合以制备试剂R1和试剂R2。

表12

对比例3：

将下表13中所示的所有组分按照如下所示浓度混合以制备试剂R1和试剂R2。

表13

对比例4：

将下表14中所示的所有组分按照如下所示浓度混合以制备试剂R1和试剂R2。

表14

对比例5：

将下表15中所示的所有组分按照如下所示浓度以制备试剂R1和试剂R2。

表15

二、个体差异样本的HbA1c测定结果验证实验

通过测定10例HbA1c浓度一样的样本，差别在于Hb浓度不同。10例样本HbA1c值均为5.2％，采用国际公认的IFCC质谱方法测定，该方法具有高度的特异性，数值能反映其真实含量。10例样本Hb浓度分别为32g/L、45g/L、55g/L、65g/L、98g/L、110g/L、122g/L、125g/L、130g/L、155g/L，为希森美康血球仪测定值，Hb浓度呈梯度分布，可以反映不同个体差异。其中：1-5#样本属于贫血样本，Hb值越低说明贫血越明显，6-10#样本为常规样本。采用本发明试剂盒、市售试剂盒分别测定这10例样本，根据市售试剂盒测定值可以进行判定HbA1c检测受个体差异影响。

市售试剂盒1的主要成分：

试剂R1包含乳胶液0.1％、甘氨酸缓冲液0.09mol/L、聚乙二醇80000.2mmol/L、叠氮钠0.33g/L、氯化钠2.8g/L、EDTA-Na20.9g/L组成的水溶液；试剂R2包含甘氨酸缓冲液30mmol/L、抗人工血红蛋白(A1c)老鼠单一抗体0.05mg/ml、老鼠IgG山羊抗体0.05mg/ml、曲拉通X-100 0.1％、叠氮钠1g/L组成的水溶液；

市售试剂盒2的主要成分：

试剂R1包含甘氨酸缓冲液、乳胶液；试剂R2包含甘氨酸缓冲液、鼠抗人糖化血红蛋白单克隆抗体、羊抗鼠免疫球蛋白G(IgG)抗体。

验证实验1见下表16：

全血样本	1#	2#	3#	4#	5#	6#	7#	8#	9#	10#
											Hb(g/L)	32	45	55	65	98	110	122	125	130	155
质谱测定(对照)	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2
											市售试剂盒1	1.02	2.36	3.69	3.96	5.02	5.12	5.25	5.36	5.36	5.36
市售试剂盒2	1.53	2.93	3.54	3.87	4.89	5.13	5.27	5.42	5.29	5.26
											实施例1试剂盒	3.92	4.26	4.53	4.96	5.42	5.18	5.25	5.31	5.29	5.31
实施例2试剂盒	3.93	4.25	4.59	4.83	5.36	5.21	5.23	5.26	5.27	5.28

由以上结果可见，市售试剂盒1和市售试剂盒2测定HbA1c在Hb>110g/L时，测定结果较为准确；当Hb＜110g/L时，随着Hb值的降低，测定结果与真实值差异越来越大，说明Hb的浓度低于110g/L，影响HbA1c的检测，且Hb越低，HbA1c测值越低；说明个体差异样本影响检测HbA1c结果。

本发明试剂盒测定值比市售试剂盒测定值更接近真实值，则说明本发明试剂盒在糖化血红蛋白检测中可以消除个体差异。

验证实验2见下表17：

全血样本	1#	2#	3#	4#	5#	6#	7#	8#	9#	10#
											Hb(g/L)	32	45	55	65	98	110	122	125	130	155
质谱测定(对照)	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2
											实施例3试剂盒	3.98	4.36	4.66	4.97	5.42	5.18	5.28	5.25	5.25	5.29
实施例4试剂盒	3.95	4.25	4.69	4.89	5.35	5.22	5.26	5.32	5.26	5.27
											实施例5试剂盒	4.63	5.11	5.09	5.15	5.51	5.25	5.21	5.25	5.26	5.26
实施例6试剂盒	4.65	5.13	5.11	5.16	5.53	5.13	5.21	5.26	5.24	5.22
											实施例7试剂盒	5.13	5.25	5.15	5.27	5.55	5.23	5.20	5.26	5.21	5.22
市售试剂盒1	1.02	2.36	3.69	3.96	5.02	5.12	5.25	5.36	5.36	5.36
											市售试剂盒2	1.53	2.93	3.54	3.87	4.89	5.13	5.27	5.42	5.29	5.26

由以上结果可见，市售试剂盒1和市售试剂盒2测定HbA1c在Hb>110g/L时，测定结果较为准确；当Hb＜110g/L时，随着Hb值的降低，测定结果与真实值差异越来越大，说明Hb的浓度低于110g/L，影响HbA1c的检测，且Hb越低，HbA1c测值越低；说明个体差异样本影响HbA1c的检测结果。

本发明5个试剂盒的HbA1c检测结果相较市售试剂盒更接近真实值，说明在消除个体差异样本对HbA1c测值影响上有效果。而且实施例5、实施例6的测定结果相较于实施例3、实施例4更接近于真实值，实施例7的检测结果相较于实施例5、实施例6更接近于真实值，且与真实值基本无差异，说明其能很好的消除个体差异的影响。

验证实验3见下表18：

全血样本	1#	2#	3#	4#	5#	6#	7#	8#	9#	10#
											Hb(g/L)	32	45	55	65	98	110	125	122	130	155
质谱测定(对照)	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2
											实施例8试剂盒	3.75	4.11	4.52	4.63	5.29	5.19	5.25	5.18	5.23	5.28
实施例9试剂盒	3.76	4.19	4.53	4.62	5.26	5.18	5.26	5.26	5.26	5.28
											实施例10试剂盒	3.59	4.02	4.53	4.69	5.26	5.15	5.25	5.25	5.32	5.26
市售试剂盒1	1.02	2.36	3.69	3.96	5.02	5.12	5.36	5.25	5.36	5.36
											市售试剂盒2	1.53	2.93	3.54	3.87	4.89	5.13	5.42	5.27	5.29	5.26

由以上结果可见，本发明实施例的HbA1c检测结果相较于市售试剂盒更接近真实值，说明本发明试剂盒可以消除个体差异样本对HbA1c检测结果的影响。

验证实验4见下表19：

结论：对比例1试剂盒校准曲线较差，低端灵敏度较差，高端无梯度，校准不通过；对比例2试剂盒灵敏度较好，但高端信号值超限，也导致校准失败，说明采用该范围外的配方不合适。

验证实验5见下表20：

全血样本	1#	2#	3#	4#	5#	6#	7#	8#	9#	10#
											Hb(g/L)	32	45	55	65	98	110	125	122	130	155
质谱测定(对照)	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2	5.2
											对比例3试剂盒	2.36	2.63	2.39	3.20	4.23	4.89	5.03	4.79	5.13	4.86
对比例4试剂盒	2.53	3.12	2.36	4.21	4.36	4.52	4.89	4.93	4.91	5.03
											对比例5试剂盒	2.39	2.39	2.96	3.39	4.32	4.89	4.93	5.11	5.05	5.06
市售试剂盒1	1.02	2.36	3.69	3.96	5.02	5.12	5.36	5.25	5.36	5.36
											市售试剂盒2	1.53	2.93	3.54	3.87	4.89	5.13	5.42	5.27	5.29	5.26

由以上结果可见，对比例3试剂盒、对比例4试剂盒、对比例5试剂盒、市售试剂盒1和市售试剂盒2的HbA1c检测结果均偏离真实值，说明检测不够准确。

三、长期稳定性验证实验

在2～8℃贮存条件下，分别在0天、3月对糖化血红蛋白项目的质控(QC)进行测定，观察试剂盒的长期稳定性。

验证实验6见下表21：

由以上结果可见，3月的质控测定数据与0天的相比，测得值差异很小，偏差均在质控要求范围(±7％)内，说明本发明的试剂盒在2～8℃贮存条件下稳定性较好。

验证实验7见下表22：

由以上结果可见，3月的质控测定数据与0天的相比，测得值差异很小，偏差均在质控要求范围(±7％)内，说明本发明的试剂盒在2～8℃贮存条件下稳定性较好，且实施例7试剂盒的偏差最小。

验证实验8见下表23：

验证实验9见下表24：

由以上结果可见，0天的质控测定数据，偏差均较大，3月质控测定均不在要求范围(±7％)内，说明对比例试剂盒在2-8℃稳定性不好。

Claims

1.一种糖化血红蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包含胶乳、缓冲液A和表面活性剂，所述试剂R2包含抗体、缓冲液B和表面活性剂。

2.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述缓冲液A是选自磷酸盐、甘氨酸、Tr i s和硼酸盐的任意两种的组合。

3.根据权利要求2所述的糖化血红蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述缓冲液A是甘氨酸和硼酸盐的组合。

4.根据权利要求3所述的糖化血红蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述甘氨酸的浓度是2-200mmo l/L，所述硼酸盐的浓度是1-50mmo l/L。

5.根据权利要求1-4任一项所述的糖化血红蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述缓冲液A的pH值范围是5.0-9.0，优选为8.0-8.5。

6.根据权利要求1-5任一项所述的糖化血红蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述缓冲液B是选自MES、HEPES、Tr i s、CAPSO、MOPS、甘氨酸、硼酸盐和磷酸盐的一种，优选为磷酸盐。

7.根据权利要求1-6任一项所述的糖化血红蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述缓冲液B的pH值范围是4.0-9.0，优选为5.5-6.5。

8.根据权利要求1-7任一项所述的糖化血红蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1还包含防腐剂。

9.根据权利要求1-8任一项所述的糖化血红蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2还包含无机盐、防腐剂。

10.根据权利要求1-9任一项所述的糖化血红蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含试剂R1和试剂R2，

所述试剂R1包含：

所述试剂R2包含：

优选为，

所述试剂R1包含：

所述试剂R2包含：

更优选为，

所述试剂R1包含：

所述试剂R2包含：

11.根据权利要求1-10任一项所述的糖化血红蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含试剂R1和试剂R2，

所述试剂R1包含：

所述试剂R2包含：

优选为，

所述试剂R1包含：

所述试剂R2包含：

更优选为，

所述试剂R1包含：

所述试剂R2包含：