CN108414767B - 糖化血红蛋白测定试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种糖化血红蛋白测定试剂盒,该试剂盒包括试剂1和试剂2，试剂1包括胶乳、缓冲液、表面活性剂；试剂2包括糖化血红蛋白单克隆抗体、双表面活性剂、缓冲液，该试剂盒测定准确度高、成本低、稳定性好。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种糖化血红蛋白测定试剂盒。
背景技术
糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin，HbA1c)是人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物，血糖和血红蛋白的结合生成糖化血红蛋白是不可逆反应，并与血糖浓度成正比，且保持120天左右，所以可以观测到120天之前的血糖浓度，它不受偶尔一次血糖升高或降低的影响，因此对糖化血红蛋白进行测定，可以比较全面地了解过去一段时间的血糖控制水平。
糖化血红蛋白与血糖的控制情况：4％～6％，血糖控制正常；6％～7％，血糖控制比较理想；7％～8％，血糖控制一般；8％～9％，控制不理想，需加强血糖控制，多注意饮食结构及运动，并在医生指导下调整治疗方案；>9％，血糖控制很差，是慢性并发症发生发展的危险因素，可能引发糖尿病性肾病、动脉硬化、白内障等并发症，并有可能出现酮症酸中毒等急性合并症。
目前测定糖化血红蛋白方法非常多，主要为酶法、HPLC法、胶乳免疫比浊法等。专利号为CN201180038604.X的中国专利公开了一种酶法测定糖化血红蛋白方法，其将含有血红蛋白的试样中的糖化血红蛋白与蛋白质分解酶反应，使果糖基肽氧化酶作用于得到的反应产物，并测定生成的过氧化氢，进而测定糖化血红蛋白，该法测定准确度较差；专利号为CN201110084781.3的中国专利公开了一种采用HPLC法测定糖化血红蛋白方法，通过设置四种固定浓度的洗脱液，使其分别对吸附有待测样本的阳离子交换树脂进行洗脱，并对洗脱后的液体进行色谱分析，确定洗脱成份的含量，进而确定糖化血红蛋白浓度，该法测定成本较高；胶乳免疫比浊法因为能够用于全自动生化分析仪，通量高，且结果比酶法准确，价格相比HPLC方法低，能够进行大规模体检使用，近年逐渐受到国内外市场亲睐，需求增长迅速。
目前市售糖化血红蛋白测定试剂盒是传统的三试剂，试剂1为空白胶乳颗粒，试剂2为糖化血红蛋白(HbA1C)的单克隆抗体，试剂3为对应二抗羊抗鼠IgG抗体。因为单抗和二抗形成的免疫复合物长期保存稳定性较差，逐渐失活导致测定信号下降，所以在使用前操作人员需将试剂2和试剂3混合，操作繁杂，且混合后的试剂稳定效期较短。此外，胶乳免疫比浊法测定结果由于是测定HbA1c占总血红蛋白的含量，在检测中重度贫血样本时易受影响，使检测结果偏低。
发明内容
鉴于以上现有技术存在的问题，本发明提供一种糖化血红蛋白测定试剂盒，该试剂盒测定准确度高、成本低、稳定性好。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种糖化血红蛋白测定试剂盒，包括试剂1和试剂2，其中所述试剂1包括胶乳、缓冲液、表面活性剂，所述试剂2包括糖化血红蛋白单克隆抗体、双表面活性剂、缓冲液。
在本发明的一些实施例中，所述试剂1缓冲液选自MOPSO-Na(3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸钠)缓冲液、TES缓冲液、Mes缓冲液、Hepes缓冲液、磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、硼酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液中的任意一种，优选甘氨酸缓冲液。在本发明的一些实施例中，所述试剂1缓冲液浓度为2mM-200mM，优选50mM-150mM，最优选100mM。
在本发明的一些实施例中，所述试剂1表面活性剂选自吐温系列表面活性剂，优选为吐温20(Tween-20)。在本发明的一些实施例中，所述试剂1表面活性剂浓度为0.01ml/L-1ml/L，优选0.01ml/L-0.1ml/L，最优选0.05ml/L。
在本发明的一些实施例中，所述试剂1胶乳浓度为0.2g/L-10g/L，优选0.5g/L-2g/L，最优选1g/L。
在本发明的一些实施例中，所述试剂1还包括防腐剂，所述防腐剂选自PC300、PC950、NaN3、CAA(2-氯乙酰胺)、苯酚、IZU(咪唑烷基脲)中的任意一种，优选PC950。在本发明的一些实施例中，所述试剂1防腐剂浓度为0.01ml/L-5ml/L，优选0.2ml/L-2ml/L，最优选1ml/L。
在本发明的一些实施例中，所述试剂1pH为5.0-9.0，优选8.0-8.5，最优选8.1。
在本发明的一些实施例中，所述试剂2双表面活性剂为吐温系列表面活性剂+聚氧乙烯烷基醚型非离子表面活性剂。在本发明的一些实施例中，所述吐温系列表面活性剂选自下组：吐温20(Tween-20)、吐温21(Tween-21)、吐温40(Tween-40)、吐温60(Tween-60)、吐温61(Tween-61)、吐温80(Tween-80)、吐温81(Tween-81)、吐温85(Tween-85)。在一些优选实施方案中，所述吐温系列表面活性剂是Tween-20或Tween-80，优选为Tween-20。
在本发明的一些实施例中，所述聚氧乙烯烷基醚型非离子表面活性剂可以是聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯十二烷基醚、聚氧乙烯十六烷基醚、或二苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚；优选为二苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚。
在本发明的一些实施例中，所述试剂2吐温系列表面活性剂的浓度为0.05ml/L-2ml/L，优选为0.2ml/L-0.8ml/L，最优选为0.5ml/L。在一些实施方案中，所述试剂2聚氧乙烯烷基醚型非离子表面活性剂的浓度为0.05ml/L-2ml/L，优选为0.2ml/L-0.8ml/L；最优选为0.5ml/L。
在本发明的一些实施例中，所述试剂2缓冲液选自MPOSO缓冲液、TES缓冲液、Mes缓冲液、Hepes缓冲液、磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、硼酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液中的任意一种，优选磷酸盐缓冲液。在本发明的一些实施例中，所述试剂2缓冲液浓度为10mM-200mM，优选20mM-80mM，最优选50mM。
在本发明的一些实施例中，所述试剂2糖化血红蛋白单克隆抗体浓度为0.01mg/mL-1mg/mL，优选0.03mg/mL-0.2mg/mL，最优选0.1mg/mL。
在本发明的一些实施例中，所述试剂2还包括保护剂、蛋白稳定剂、盐、防腐剂，以及螯合剂。
在本发明的一些实施例中，所述试剂2保护剂选自甘油、甘露醇、蔗糖、山梨醇、海藻糖中的任意一种，优选甘露醇；所述试剂2蛋白稳定剂为BSA；所述试剂2盐为无机盐，优选NaCl或KCl；所述试剂2防腐剂选自PC300、PC950、NaN3、CAA、苯酚、IZU中的任意一种，优选IZU；所述试剂2螯合剂选自EDTA.2Na、EDTA.2K、EDTA.4Na中的任意一种，优选EDTA.2Na。
在本发明的一些实施例中，所述试剂2保护剂浓度为2ml/L-50ml/L，优选5ml/L-30ml/L，最优选20ml/L；所述试剂2蛋白稳定剂浓度为1g/L-50g/L，优选1g/L-10g/L，最优选5g/L；所述试剂2盐浓度为1g/L-30g/L，优选5g/L-15g/L，最优选9g/L；所述试剂2防腐剂浓度为0.5-5g/L，优选2-4g/L，最优选3g/L；所述试剂2螯合剂浓度为0.01g/L-4g/L，优选0.1g/L-1g/L，最优选0.5g/L。
在本发明的一些实施例中，所述试剂2pH为4.0-9.0，优选5.5-6.5，最优选6。
本发明的糖化血红蛋白测定试剂盒，包括试剂1和试剂2，试剂1包括浓度0.2g/L-10g/L的胶乳、浓度2mM-200mM的缓冲液、浓度0.01ml/L-1ml/L的吐温系列表面活性剂、浓度0.01ml/L-5ml/L的防腐剂，pH值5-9；试剂2包括浓度0.01mg/ml-1mg/ml的糖化血红蛋白单克隆抗体、浓度0.05ml/L-2ml/L的吐温系列表面活性剂、浓度0.05ml/L-2ml/L的聚氧乙烯烷基醚型非离子表面活性剂、浓度10mM-200mM缓冲液、浓度2ml/L-50ml/L的保护剂、浓度1g/L-50g/L的蛋白稳定剂、浓度1g/L-30g/L的无机盐、浓度0.5g/L-5g/L的防腐剂、浓度0.01g/L-4g/L的螯合剂，pH值4-9。
本发明的糖化血红蛋白测定试剂盒，包括试剂1和试剂2，试剂1包括浓度0.5g/L-2g/L的胶乳、浓度50mM-150mM的甘氨酸缓冲液、浓度0.01ml/L-0.1ml/L的Tween-20、浓度0.2ml/L-2ml/L的PC950，pH值8-8.5；试剂2包括浓度0.03mg/ml-0.2mg/ml的糖化血红蛋白单克隆抗体、浓度0.05ml/L-2ml/L的Tween-20、浓度0.05ml/L-2ml/L的聚氧乙烯烷基醚型非离子表面活性剂、浓度20mM-80mM磷酸盐缓冲液、浓度5ml/L-30ml/L的甘露醇、浓度1g/L-10g/L的BSA、浓度5g/L-15g/L的NaCl或KCl、浓度2g/L-4g/L的IZU、浓度0.1g/L-1g/L的EDTA.2Na，pH值5.5-6.5。
有益效果
与现有技术相比，本发明具有以下有益优点：本发明在试剂1中所采用的缓冲液能够保持PH值稳定，可以消除胶乳保存过程中胶乳电荷的变化导致胶乳凝集和物理吸附能力发生变化，使试剂稳定性更好。而试剂2中的双表面活性剂作为助悬剂，保持抗体的结构稳定，同时可以进一步消除胶乳保存过程中胶乳电荷的变化对物理吸附的影响，同时使抗体不被吸附在胶乳上，促进抗原抗体的特异性反应。因此，本发明的试剂可以使胶乳物理吸附非特异性吸附血红蛋白和糖化血红蛋白的能力维持在一个合适的水平，使固相化的蛋白量到达恒定，因为样本中血红蛋白和糖化血红蛋白含量远远过量，受总血红蛋白量影响小，可以消除个体差异的影响，在测定中重度贫血样本更具优势。
具体实施方式
为了使本领域技术人员更好地理解本申请中的技术方案，下面将结合实施例对本发明作进一步说明，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都应当属于本申请保护的范围。
本发明试剂盒检测原理：样本中血红蛋白和糖化血红蛋白与试剂1中胶乳有相同的非特异性吸附而固相化，当加入糖化血红蛋白单克隆抗体后形成糖化血红蛋白抗原抗体免疫复合物，凝集量因胶乳表面固相化的糖化血红蛋白量的不同而不同。通过测定其吸光度并与糖化血红蛋白百分浓度的标准曲线比较，可求出样本中的糖化血红蛋白占总血红蛋白的百分含量。当总血红蛋白的量能够满足胶乳吸附量时，检测结果不受影响，但当总血红蛋白量降低不足满足胶乳吸附量时，与试剂2中的糖化血红蛋白单克隆抗体形成的免疫复合物减少，导致检测结果降低，同时抗体会被吸附在胶乳上，不利于抗原抗体的特异性反应。在临床应用上，由于个体差异，部分病人样本总血红蛋白含量不一样，当血红蛋白浓度减少时，则会影响试剂盒检测，如贫血病人样本，临床上常以血红蛋白(Hb)浓度来代替。依据我国的标准：正常人Hb含量在110-160g/L，轻度贫血(90g/L-109g/L)，中度贫血(60-89g/L)、重度贫血(30-59g/L)。
本发明试剂盒的使用方法：
1.按照上文所述实施方案任一项所述的组分及含量配制本发明的试剂盒；
2.取采集的全血样本，采用纯化水进行50倍稀释，溶血后将其与试剂1结合，样本中血红蛋白和糖化血红蛋白与胶乳有相同的非特异性吸附而固相化；
3.与试剂R2混合，试剂2中糖化血红蛋白单克隆抗体与其充分反应，结合形成糖化血红蛋白抗原抗体免疫复合物，凝集量因胶乳表面固相化的糖化血红蛋白量的不同而不同；
4.用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；
5.根据吸光度变化值计算出样本中HbA1c的百分含量。
实施例1
按以下配方配制1-1、1-2两组试剂，检测10例Hb含量不同，HbA1c值均为5.2％的样本，观察其测定值与真实值的差异。同时在2～8℃贮存条件下，分别在0月、3月对HbA1c项目的质控品进行测定，观察试剂稳定性。
试剂1：
| 试剂组成 | 试剂名称 | 1-1(pH:5) | 1-2(pH:9) |
| 物理吸附裸胶乳 | 物理吸附裸胶乳 | 0.2g/L | 10g/L |
| 缓冲液 | 甘氨酸 | 2mM | 200mM |
| 表面活性剂 | Tween-20 | 0.01ml/L | 1ml/L |
试剂2：
按照本发明试剂盒的使用方法，将上述1-1、1-2两组试剂分别测定个体差异样本10例，结果如下：
表1-1测定个体差异样本的HbA1c结果
在2～8℃贮存条件下，分别在0月、3月对HbA1c项目的质控品进行测定，观察试剂稳定性，结果如下：
表1-2长期稳定性
表1-1试验结果表明：市售厂家1和市售厂家2测定HbA1c在Hb>110g/L时，测定结果较为准确；当Hb＜110g/L时，随着Hb值的降低，测定结果与真实值差异越来越大，说明Hb的浓度低于110g/L时，影响HbA1c的检测，且Hb越低，HbA1c测值越低，说明个体差异样本影响HbA1c检测结果，而本发明1-1、1-2两组试剂的HbA1c检测结果相较市售试剂更接近真实值，则说明在消除个体差异样本对HbA1c测值影响上有效果，在优于市售试剂测定结果的基础上，测定结果越接近于真实值，说明效果越好。
表1-2稳定性数据表明：3月的质控测定数据与0月的相比，测得值差异很小，偏差均在质控要求范围(±7％)内，说明本发明的检测试剂盒在2～8℃贮存条件下可稳定。
实施例2
按以下配方配制2-1、2-2、2-3、2-4、2-5五组试剂，检测10例Hb含量不同，HbA1c值均为5.2％的样本，观察其测定值与真实值的差异。同时在2～8℃贮存条件下，分别在0月、3月对HbA1c项目的质控品进行测定，观察试剂稳定性。
试剂1：
试剂2：
按照本发明试剂盒的使用方法，将上述2-1、2-2、2-3、2-4以及2-5五组试剂分别测定个体差异样本10例，结果如下：
表2-1测定个体差异样本的HbA1c结果
在2～8℃贮存条件下，分别在0月、3月对HbA1c项目的质控品进行测定，观察试剂稳定性，结果如下：
表2-2长期稳定性
表2-1试验结果表明：市售厂家1和市售厂家2测定HbA1c在Hb>110g/L时，测定结果较为准确；当Hb＜110g/L时，随着Hb值的降低，测定结果与真实值差异越来越大，说明Hb的浓度低于110g/L时，影响HbA1c的检测，且Hb越低，HbA1c测值越低，说明个体差异样本影响检测HbA1c结果，而本发明2-1、2-2、2-3、2-4、2-5五组试剂的HbA1c检测结果相较市售试剂更接近真实值，则说明在消除个体差异样本对HbA1c测值影响上有效果，在优于市售试剂测定结果的基础上，测定结果越接近于真实值，说明效果越好。另外，表2-1试验结果还表明2-3、2-4相较于2-1、2-2测定结果更接近于真实值，说明效果更好，而2-5测定结果相较于2-3、2-4更接近于真实值，且与真实值基本无差异，说明其能完全消除个体差异对HbA1c检测的影响。
表2-2稳定性数据表明：3月的质控测定数据与0月的相比，测得值差异很小，偏差均在质控要求范围(±7％)内，说明本发明的检测试剂盒在2～8℃贮存条件下可稳定，且2-3、2-4结果优于2-1、2-2，2-5最优。
实施例3
按以下配方配制3-1、3-2两组试剂：
试剂1：
| 试剂组成 | 试剂名称 | 3-1(pH:4.4) | 3-2(pH:9.5) |
| 物理吸附裸胶乳 | 物理吸附裸胶乳 | 0.1g/L | 20g/L |
| 缓冲液 | 甘氨酸 | 1mM | 200mM |
| 表面活性剂 | Tween-20 | 0.003ml/L | 1.2ml/L |
| 防腐剂 | PC950 | 0.01ml/L | 6ml/L |
试剂2：
| 试剂组成 | 试剂名称 | 3-1(pH:4) | 3-2(pH:9) |
| 抗体 | 糖化血红蛋白单克隆抗体 | 0.01mg/ml | 2mg/ml |
| 表面活性剂1 | Tween-20 | 0.03ml/L | 3ml/L |
| 表面活性剂2 | A-90 | 0.02ml/L | 4ml/L |
| 缓冲液 | 磷酸盐 | 5mM | 300mM |
| 保护剂 | 甘露醇 | 1g/L | 90g/L |
| 蛋白稳定剂 | BSA | 0.5g/L | 60g/L |
| 盐 | NaCl | 0.5g/L | 80g/L |
| 防腐剂 | IZU | 0.2g/L | 6g/L |
| 螯合剂 | EDTA.2Na | 0.002g/L | 5g/L |
3-1实验组校准曲线较差，低端灵敏度较差，高端无梯度，校准不通过。3-2实验组灵敏度较好，但高端信号值超限，也导致校准失败，说明采用3-1、3-2试剂配方不合适。
实施例4
按以下配方配制4-1(试剂1缓冲液替换为柠檬酸–柠檬酸钠)、4-2(试剂2缓冲液替换为柠檬酸缓冲液、表面活性剂替换为十四烷基二羟乙基氧化胺)、4-3(试剂2缓冲液替换为乙醇胺缓冲液、表面活性剂替换为烷基联苯醚二磺酸钠)三组试剂，检测10例Hb含量不同，HbA1c值均为5.2％的样本，观察其测定值与真实值的差异。同时在2～8℃贮存条件下，分别在0月、3月对该项目的质控进行测定，观察试剂稳定性。
试剂1：
| 试剂组成 | 试剂名称 | 4-1(pH:8.1) | 4-2(pH:8.1) | 4-3(pH:8.1) |
| 物理吸附裸胶乳 | 物理吸附裸胶乳 | 1g/L | 1g/L | 1g/L |
| 缓冲液 | 柠檬酸–柠檬酸钠 | 100mM | 100mM | 100mM |
| 表面活性剂 | Tween-20 | 0.05ml/L | 0.05ml/L | 0.05ml/L |
| 防腐剂 | PC950 | 1ml/L | 1ml/L | 1ml/L |
试剂2：
按照本发明试剂盒的使用方法，将上述4-1、4-2以及4-3三组试剂分别测定个体差异样本10例，结果如下：
表4-1测定个体差异样本的HbA1c结果
| 全血样本 | 1# | 2# | 3# | 4# | 5# | 6# | 7# | 8# | 9# | 10# |
| Hb(g/L) | 32 | 45 | 55 | 65 | 98 | 110 | 125 | 122 | 130 | 155 |
| 质谱测定(对照) | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 |
| 4-1 | 2.35 | 2.89 | 4.02 | 4.56 | 5.12 | 5.11 | 4.86 | 5.36 | 4.78 | 4.96 |
| 4-2 | 2.43 | 2.92 | 4.22 | 4.39 | 5.09 | 5.13 | 4.93 | 5.13 | 4.96 | 5.02 |
| 4-3 | 2.51 | 3.25 | 4.03 | 4.39 | 5.03 | 5.21 | 4.98 | 5.02 | 4.87 | 4.76 |
| 市售厂家1 | 1.02 | 2.36 | 3.69 | 3.96 | 4.98 | 5.12 | 5.36 | 5.25 | 5.36 | 5.36 |
| 市售厂家2 | 1.53 | 2.93 | 3.54 | 3.87 | 4.89 | 5.13 | 5.42 | 5.27 | 5.29 | 5.26 |
在2～8℃贮存条件下，分别在0月、3月对HbA1c项目的质控品进行测定，观察试剂稳定性，结果如下：
表4-2长期稳定性
表4-1表明：市售厂家1和市售厂家2测定HbA1c在Hb>110g/L时，测定结果较为准确；当Hb＜110g/L时，随着Hb值的降低，测定结果与真实值差异越来越大，说明Hb的浓度低于110g/L时，影响HbA1c的检测，且Hb越低，HbA1c测值越低，说明个体差异样本影响检测HbA1c结果，而本发明试剂替换成分后的三组试验试剂，其中1#-5#的HbA1c检测结果相较市售试剂更接近真实值，则说明在消除个体差异样本对HbA1c测值影响上有效果；而6#-10#的HbA1c检测结果与真实值有较大差异，说明测值不够准确，则说明在消除个体差异样本对HbA1c测值影响上没有效果。
表4-2稳定性数据表明：0月的质控测定数据，偏差均较大，3月质控测定均不在要求范围(±7％)内，说明本发明试剂替换成分后，2-8℃稳定性不好。
实施例5
按以下配方配制5-1(试剂1缓冲液替换为硼酸盐；试剂2缓冲液替换为MES，保护剂替换为蔗糖，盐替换为氯化钾，防腐剂替换为叠氮钠，螯合剂替换为EDTA.3Na)、5-2(试剂1缓冲液替换为Tris；试剂2表面活性剂1替换为Tween-80，表面活性剂2替换为A-60，缓冲液替换为甘氨酸，保护剂替换为山梨醇，盐替换为氯化钾，防腐剂替换为CAA，螯合剂替换为EDTA.4Na)两组试剂，检测10例Hb含量不同，HbA1c值均为5.2％的样本，观察其测定值与真实值的差异。同时在2～8℃贮存条件下，分别在0月、3月对该项目的质控进测定，观察试剂稳定性。
试剂1：
| 试剂组成 | 5-1(pH:5) | 浓度 | 5-2(pH:9) | 浓度 |
| 物理吸附裸胶乳 | 物理吸附裸胶乳 | 0.2g/L | 物理吸附裸胶乳 | 10g/L |
| 缓冲液 | 硼酸盐 | 2mM | Tris | 200mM |
| 表面活性剂 | Tween-20 | 0.01ml/L | Tween-20 | 1ml/L |
| 防腐剂 | PC950 | 0.01ml/L | PC950 | 5ml/L |
试剂2：
按照本发明试剂盒的使用方法，将上述5-1、5-2两组试剂分别测定个体差异样本10例，结果如下：
表5-1测定个体差异样本的HbA1c结果
表5-2长期稳定性
表5-1表明：市售厂家1和市售厂家2测定HbA1c在Hb>110g/L时，测定结果较为准确；当Hb＜110g/L时，随着Hb值的降低，测定结果与真实值差异越来越大，说明Hb的浓度低于110g/L，影响HbA1c的检测，且Hb越低，HbA1c测值越低；说明个体差异样本影响检测HbA1c结果，而本发明5-1、5-2两组试剂的HbA1c检测结果相较市售试剂更接近真实值，则说明在消除个体差异样本对HbA1c测值影响上有效果，在优于市售试剂测定结果的基础上，测定结果越接近于真实值，说明效果越好。
表5-2稳定性数据表明：3月的质控测定数据与0月的相比，测得值差异很小，偏差均在质控要求范围(±7％)内，说明本发明的检测试剂盒在2～8℃贮存条件下可稳定。
应该理解到披露的本发明不仅仅限于描述的特定的方法、方案和物质，因为这些均可变化。还应理解这里所用的术语仅仅是为了描述特定的实施方式方案的目的，而不是意欲限制本发明的范围，本发明的范围仅受限于所附的权利要求。
本领域的技术人员还将认识到，或者能够确认使用不超过常规实验，在本文中所述的本发明的具体的实施方案的许多等价物。这些等价物也包含在所附的权利要求中。
Claims (12)
1.一种糖化血红蛋白测定试剂盒，包括试剂1和试剂2，其特征在于，所述试剂1包括胶乳、缓冲液和表面活性剂，所述试剂2包括糖化血红蛋白单克隆抗体、双表面活性剂和缓冲液；
所述试剂1缓冲液选自Tris缓冲液、硼酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液中的任意一种；
所述试剂1的pH为5.0-9.0；
所述试剂1中胶乳浓度为0.2g/L-10g/L；所述试剂1中缓冲液浓度为2mM-200mM；
所述试剂1中表面活性剂浓度为0.01ml/L-1ml/L；
所述试剂2双表面活性剂为吐温系列表面活性剂+聚氧乙烯二苯乙烯化苯基醚型非离子表面活性剂；
所述试剂2缓冲液选自Mes缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液中的任意一种；所述试剂2的pH为4.0-9.0；
所述试剂2中糖化血红蛋白单克隆抗体的浓度为0.01mg/ml-1mg/ml；所述试剂2中吐温系列表面活性剂的浓度为0.05ml/L-2ml/L；所述试剂2中聚氧乙烯二苯乙烯化苯基醚型非离子表面活性剂的浓度为0.05ml/L-2ml/L；所述试剂2中缓冲液的浓度为10mM-200mM。
2.如权利要求1所述的糖化血红蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述试剂1缓冲液为甘氨酸缓冲液。
3.如权利要求1所述的糖化血红蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述试剂1表面活性剂选自吐温系列表面活性剂。
4.如权利要求3所述的糖化血红蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述试剂1表面活性剂为Tween-20。
5.如权利要求1-4任一项所述的糖化血红蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述试剂1还包括防腐剂，所述防腐剂选自PC300、PC950、NaN3、CAA、苯酚、IZU中的任意一种。
6.如权利要求5所述的糖化血红蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述防腐剂为PC950。
7.如权利要求1所述的糖化血红蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述试剂2缓冲液为磷酸盐缓冲液。
8.如权利要求1所述的糖化血红蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述试剂2还包括保护剂、蛋白稳定剂、盐、防腐剂，以及螯合剂。
9.如权利要求8所述的糖化血红蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述试剂2保护剂选自甘油、甘露醇、蔗糖、山梨醇、海藻糖中的任意一种；所述试剂2蛋白稳定剂为BSA；所述试剂2盐为无机盐；所述试剂2防腐剂选自PC300、PC950、NaN3、CAA、苯酚、IZU中的任意一种；所述试剂2螯合剂选自EDTA·2Na、EDTA·2K、EDTA·4Na中的任意一种。
10.如权利要求9所述的糖化血红蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述试剂2保护剂为甘露醇；所述试剂2盐为NaCl或KCl；所述试剂2防腐剂为IZU；所述试剂2螯合剂为EDTA·4Na。
11.一种糖化血红蛋白测定试剂盒，包括试剂1和试剂2，其特征在于，所述试剂1包括浓度0.2g/L-10g/L的胶乳、浓度2mM-200mM的缓冲液、浓度0.01ml/L-1ml/L的吐温系列表面活性剂和浓度0.01ml/L-5ml/L的防腐剂，pH值5-9；所述试剂2包括浓度0.01mg/ml-1mg/ml的糖化血红蛋白单克隆抗体、浓度0.05ml/L-2ml/L的吐温系列表面活性剂、浓度0.05ml/L-2ml/L的聚氧乙烯二苯乙烯化苯基醚型非离子表面活性剂、浓度10mM-200mM缓冲液、浓度2ml/L-50ml/L的保护剂、浓度1g/L-50g/L的蛋白稳定剂、浓度1g/L-30g/L的无机盐、浓度0.5g/L-5g/L的防腐剂和浓度0.01g/L-4g/L的螯合剂，pH值4-9；
所述试剂1缓冲液选自Tris缓冲液、硼酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液中的任意一种；
所述试剂2缓冲液选自Mes缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液中的任意一种。
12.一种糖化血红蛋白测定试剂盒，包括试剂1和试剂2，所述试剂1包括浓度0.5g/L-2g/L的胶乳、浓度50mM-150mM的甘氨酸缓冲液、浓度0.01ml/L-0.1ml/L的Tween-20和浓度0.2ml/L-2ml/L的PC950，pH值8-8.5；所述试剂2包括浓度0.03mg/ml-0.2mg/ml的糖化血红蛋白单克隆抗体、浓度0.2ml/L-0.8ml/L的Tween-20、浓度0.2ml/L-0.8ml/L的聚氧乙烯二苯乙烯化苯基醚型非离子表面活性剂、浓度20mM-80mM磷酸盐缓冲液、浓度5ml/L-30ml/L的甘露醇、浓度1g/L-10g/L的BSA、浓度5g/L-15g/L的NaCl或KCl、浓度2g/L-4g/L的IZU和浓度0.1g/L-1g/L的EDTA.2Na，pH值5.5-6.5。
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