CN104459113B

CN104459113B - 一种甘胆酸检测试剂盒

Info

Publication number: CN104459113B
Application number: CN201410736234.2A
Authority: CN
Inventors: 李元丽
Original assignee: Chongqing Zhongyuan Biotechnology Co Ltd
Current assignee: Chongqing Zhongyuan Biotechnology Co Ltd
Priority date: 2014-12-05
Filing date: 2014-12-05
Publication date: 2016-03-16
Anticipated expiration: 2034-12-05
Also published as: CN104459113A

Abstract

本发明公开了一种甘胆酸检测试剂盒及其制备方法。本发明试剂盒盒体内包括试剂R1、试剂R2和校准品，所述试剂R1的组分包括：生物缓冲液1、保护剂1、反应增强剂1、表面活性剂1、防腐剂1、稳定剂1；试剂R2的组分包括：生物缓冲液2、抗甘胆酸抗体的胶乳颗粒、保护剂2、反应增强剂2、表面活性剂2、防腐剂2、稳定剂2；校准品的组分包括：缓冲液3、保护剂3、防腐剂3、甘胆酸标准品。本发明采用双试剂模式不仅可以有效避免非特异性反应的干扰，同时可以最大限度的减少来自样本本身浊度的干扰，保证了测定结果的准确可靠，具有重复性好、精确度高、稳定性好、检测灵敏度高、线性测试范围宽、抗干扰性强等优点。

Description

一种甘胆酸检测试剂盒

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种甘胆酸检测试剂盒及其制备方法和用途。

背景技术

甘胆酸(Cholyglycine,CG)是胆酸与甘氨酸结合而成的结合型胆酸，在肝细胞内，胆固醇经过及其复杂的酶促反应，转变成初级胆汁酸。其中有胆酸(CA)和鹅去氧胆酸(CD-CA)。胆酸的类固醇核上有三个羟基(C3、C7、C12)，侧链末端的羟基以肽键与甘氨酸结合。

CG由肝细胞合成，正常代谢途径为肠肝循环，经毛细胆管、胆管排入胆囊，随同胆汁进入十二指肠，帮助食物消化。95％胆酸在回肠末端重吸收，经门静脉再回肝脏，由肝细胞摄取再利用。在血清中主要以蛋白结合形式存在，溢入体循环的总量小于1％。在正常情况下，外周血中胆酸含量甚微,正常成人无论空腹或餐后,其血清CG浓度稳定在低水平。当肝细胞受损时，肝细胞摄取CG能力下降，致使血中CG含量增高；胆汁郁滞时，肝脏排泄胆酸发生障碍，而返流血液循环的CG含量增高，也使血CG含量增高。测定血清甘胆酸(CG)是评价肝细胞功能及其肝胆系物质循环功能的敏感指标之一。

临床上急性肝炎、慢性活动性肝炎、原发性肝癌、肝硬化、慢迁肝、梗阻性肝病、肠—肝循环障碍、胆石症伴黄疸、胆管、胆囊排泄功能障碍患者血CG均明显高于正常人。

甘胆酸同时也是妊娠晚期血清中最主要的胆汁酸组分。正常妊娠时孕妇血清CG水平随孕周逐步增高，大量雌激素会引起肝细胞膜的改变，减少窦状膜浆的流动性，从而出现胆汁分泌减少，返流入血，出现妊娠期内胆汁淤积现象，CG水平升高。胎盘绒毛静脉腔内外均处于高浓度胆汁酸刺激之中，引起血管收缩，胎盘绒毛表面血管痉挛，氧合血流量减少，导致胎儿缺氧，可出现各种并发症，如胎儿宫内窘迫、早产等。

目前已知的甘胆酸检测方法有放射免疫法(RIA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、化学发光法(CL)等。但这些方法均存在较多缺陷，如放射免疫法同位素试剂具有放射性污染及有效期较短和操作不方便等弊端，酶联免疫吸附法操作较为繁琐，耗时较长，不适宜临床上使用。化学发光法尽管灵敏度较高，但需要专用的测定设备，费用较高不利于推广。而胶乳增强免疫比浊法操作简便、可适用于全自动生化分析仪，检测时间不到10分钟适合临床推广。但目前我国市场上的甘胆酸检测试剂盒准确度、灵敏度、重复性仍然较差。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种检测时间短，稳定性好、重复性好、精确度高、检测灵敏度高、线性测试范围宽、抗干扰性强的甘胆酸检测试剂盒，用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明的第一方面提供一种甘胆酸检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1、试剂R2和校准品，所述试剂R1的组分包括：生物缓冲液1、保护剂1、反应增强剂1、表面活性剂1、防腐剂1、稳定剂1；试剂R2的组分包括：生物缓冲液2、抗甘胆酸抗体的胶乳颗粒、保护剂2、反应增强剂2、表面活性剂2、防腐剂2、稳定剂2；校准品的组分包括：生物缓冲液3、保护剂3、防腐剂3、甘胆酸标准品、稳定剂3。

优选的，所述试剂R1中，所述生物缓冲液1选自氨基丁三醇缓冲液、磷酸盐缓冲液、Tris-HCL缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液中的一种或多种的组合；所述试剂R2中，所述生物缓冲液2选自氨基丁三醇缓冲液、磷酸盐缓冲液、Tris-HCL缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液中的一种或多种的组合；校准品中，所述生物缓冲液3选自氨基丁三醇缓冲液、磷酸盐缓冲液、Tris-HCL缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液中的一种或多种的组合。

更优选的，所述试剂R1中，生物缓冲液1的浓度为20～200mmol/L，PH6.5-7.5；所述试剂R2中，生物缓冲液2的浓度为20～200mmol/L，PH6.5-7.5；校准品中，生物缓冲液3的浓度为20～200mmol/L，PH6.5-7.5。

本发明中，各生物缓冲液的主要作用是保证试剂中各组分PH值保持在一定范围内，保证各组分性能稳定，最终保证整个试剂盒的性能稳定，测试结果稳定可靠。

优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，本发明对所述试剂R1中的生物缓冲液1进行了改进，所述试剂R1中的生物缓冲液1包括下列组分：水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠和甘氨酸，且水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠、甘氨酸的总浓度为3.5－7.5g/L，生物缓冲液1的pH值为7.2－7.6。

优选的，各组分在生物缓冲液1中的浓度为：

所述生物缓冲液1的溶剂为水。

所述生物缓冲液1可以采用本领域内公知的各种pH调节剂来进行pH调节。

优选的，所述试剂R1中，所述表面活性剂1选自椰子油脂肪酸二乙醇酰胺、Tween-20、Tween-30、Tween-80、TritonX-100中的一种或多种的组合；更优选椰子油脂肪酸二乙醇酰胺，所述椰子油脂肪酸二乙醇酰胺属于非离子表面活性剂，易溶于水，具有发泡、稳泡、渗透去污、抗硬水等功能，并且在一定浓度下能完全溶解于不同种类的表面活性剂中，增稠效果明显。

优选的，所述试剂R2中，所述表面活性剂2选自椰子油脂肪酸二乙醇酰胺、Tween-20、Tween-30、Tween-80、TritonX-100中的一种或多种的组合；更优选椰子油脂肪酸二乙醇酰胺。

更优选的，所述试剂R1中，表面活性剂1的浓度为3～50mmol/L；所述试剂R2中，表面活性剂2的浓度为3～50mmol/L。

优选的，所述试剂R1中，所述反应增强剂1选自PEG4000、PEG6000、PEG8000、PEG20000中的一种或多种的组合；更优选PEG6000，所述PEG6000具有优良的水溶性，不挥发性、非油脂性、可调节粘度、分散度。

优选的，所述试剂R2中，所述反应增强剂2选自PEG4000、PEG6000、PEG8000、PEG20000中的一种或多种的组合；更优选PEG6000。

优选的，所述试剂R1中，反应增强剂1的浓度为0.1～5.0g/L；所述试剂R2中，反应增强剂2的浓度为0.1～5.0g/L。

优选的，所述试剂R1中，所述防腐剂R1选自叠氮钠、硫柳汞、ProClin200、ProClin300中的一种或多种的组合；更优选叠氮钠，所述叠氮钠具有优良的防腐杀菌性能。

优选的，所述试剂R2中，所述防腐剂R2选自叠氮钠、硫柳汞、ProClin200、ProClin300中的一种或多种的组合；更优选叠氮钠。

优选的，校准品中，所述防腐剂R3选自叠氮钠、硫柳汞、ProClin200、ProClin300中的一种或多种的组合；更优选叠氮钠。

更优选的，所述试剂R1中，防腐剂1的浓度为0.3～3.0g/L；试剂R2中，防腐剂2的浓度为0.3～3.0g/L；校准品中，防腐剂3的浓度为0.3～3.0g/L。

优选的，所述试剂R1中，所述保护剂1选自牛血清白蛋白BSA、卵清蛋白OVA和明胶中的一种或多种的组合；更优选牛血清白蛋白BSA。

优选的，所述试剂R2中，所述保护剂2选自牛血清白蛋白BSA、卵清蛋白OVA和明胶中的一种或多种的组合；更优选牛血清白蛋白BSA。

优选的，校准品中，所述保护剂3选自牛血清白蛋白BSA、卵清蛋白OVA和明胶中的一种或多种的组合；更优选牛血清白蛋白BSA。

更优选的，所述试剂R1中，保护剂1的浓度为1～10g/L；所述试剂R2中，保护剂2的浓度为1～10g/L；校准品中，保护剂3的浓度为1～8g/L。

本发明中，各保护剂可以保护致敏聚苯乙烯胶乳颗粒表面的甘胆酸抗体的活性。

优选的，所述试剂R1中，所述稳定剂1选自无机盐、金属络合物、抗氧化剂中的一种或多种的组合；更优选乙二胺四乙酸二钠与氯化钠的组合，所述乙二胺四乙酸二钠与氯化钠价格低廉、原料易得，配合使用可以保持体系长时间稳定。

优选的，所述试剂R2中，所述稳定剂2选自无机盐、金属络合物、抗氧化剂中的一种或多种的组合；更优选乙二胺四乙酸二钠与氯化钠的组合。

优选的，校准品中，所述稳定剂3选自无机盐、金属络合物、抗氧化剂中的一种或多种的组合；更优选乙二胺四乙酸二钠与氯化钠的组合。

更优选的，所述试剂R1中，稳定剂1中的乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.05～5.0g/L，氯化钠的浓度为0.5～2.0g/L；所述试剂R2中，稳定剂2中的乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.05～5.0g/L，氯化钠的浓度为0.5～2.0g/L；校准品中，稳定剂3中的乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.05～5.0g/L，氯化钠的浓度为0.5～2.0g/L。

优选的，所述胶乳颗粒为致敏聚苯乙烯胶乳颗粒，表面官能团为氨基、羧基、酰肼、醛基或环氧基。更优选表面官能团为羧基的聚苯乙烯胶乳颗粒，羧基更容易被碳化二亚胺活化，能快速与甘胆酸抗体结合，增强偶联效果。其粒径为200-500nm。

优选的，所述抗甘胆酸抗体的胶乳颗粒由抗甘胆酸抗体和致敏聚苯乙烯胶乳颗粒偶联得到；所述抗甘胆酸抗体为鼠源抗人甘胆酸抗体、兔源抗人甘胆酸抗体或羊源抗人甘胆酸抗体，优选鼠源抗人甘胆酸抗体，所述鼠源抗人甘胆酸抗体免疫原性、抗原结合亲和力更强，血清半衰期更长，与血清中的甘胆酸特异性结合能力强，可明显提高检测准确性。

优选的，所述校准品中，甘胆酸标准品的浓度为2.5、5.0、10.0、20.0、40.0mg/L。

优选的，所述试剂盒的组成为：

试剂R1:

试剂R2:

包被有鼠抗人甘胆酸多克隆致敏聚苯乙烯胶乳颗粒，粒径200-500nm，浓度1％

校准品：

本发明的第二方面提供前述试剂盒的制备方法和使用方法，具体包括如下步骤：

(a)按照比例分别配置试剂R1、试剂R2，按照需要的甘胆酸参考校准品浓度将相应的甘胆酸标准品分别加入校准品中，制备得到含有不同浓度甘胆酸标准品的一组校准品，并绘制标准曲线；

(b)将待测样本与试剂R1和R2按一定比例混合，使其充分反应；

(c)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值。

(d)根据校准曲线得到样本中甘胆酸的含量。

本发明第三方面公开了前述试剂盒在检测甘胆酸的含量中的应用。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

1.本发明中的试剂盒采用胶乳增强免疫比浊法的原理测定人血清中的甘胆酸含量，可以用于半自动、全自动生化分析仪，具有检测灵敏度高、检测限低、线性测试范围宽、精确度高、重复性好、稳定性好、抗干扰性强等优点，适用于临床上的推广应用，特别是对于急诊能实现快速诊断。

2.致敏聚苯乙烯胶乳颗粒表面官能团为氨基、羧基、酰肼、醛基或环氧基，其表面的官能团能与抗体表面的氨基等结合形成共价偶联结构，增强了抗体偶联的稳定性，减少了抗体的用量，降低了生产成本。

附图说明

图1是实施例1制备的甘胆酸检测试剂盒的线性范围相关性曲线。

具体实施方式

以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。

在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围；在本发明说明书和权利要求书中，除非文中另外明确指出，单数形式“一个”、“一”和“这个”包括复数形式。

当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。

除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULARCLONING：ALABORATORYMANUAL，Secondedition，ColdSpringHarborLaboratoryPress，1989andThirdedition，2001；Ausubel等，CURRENTPROTOCOLSINMOLECULARBIOLOGY，JohnWiley&Sons，NewYork，1987andperiodicupdates；theseriesMETHODSINENZYMOLOGY，AcademicPress，SanDiego；Wolffe，CHROMATINSTRUCTUREANDFUNCTION，Thirdedition，AcademicPress，SanDiego，1998；METHODSINENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.WassarmanandA.P.Wolffe，eds.)，AcademicPress，SanDiego，1999；和METHODSINMOLECULARBIOLOGY，Vol.119，ChromatinProtocols(P.B.Becker，ed.)HumanaPress，Totowa，1999等。

实施例1：

本发明的试剂盒举例是双试剂，其中：

试剂R1:

试剂R2:

包被有鼠抗人甘胆酸多克隆致敏聚苯乙烯胶乳颗粒，粒径200nm，浓度1％。

校准品：

按照需要的甘胆酸参考校准品浓度将相应的甘胆酸标准品分别加入上述缓冲液，制备得到浓度分别为2.5、5.0、10.0、20.0、40.0mg/L的一组校准品。

实施例2：试剂盒使用方法。

1.试剂准备，试剂为液体双试剂，开瓶即用，其中：

试剂R1:

试剂R2:

校准品：

2.全自动生化仪参数设置

(a)检测波长：主波长为600nm，副波长为none；

(b)检测温度：37℃；

(c)反应时间：10min，其中，孵育时间5min，加入试剂R2后立即测定读取吸光度A1，5分钟后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA＝A2-A1；

(d)反应方向：负方向

3.检测步骤

(a)取200ul试剂R1与5ul血清样本(避免溶血)混匀；

(b)将混匀后的溶液在37℃孵育时间5min；

(c)再加入50ul试剂R2，立即测定读取吸光度A1，5分钟后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA＝A2-A1。

4.通过校准曲线计算出样本中甘胆酸的含量。

下述测试为对实施例1试剂盒的性能测试

将实施例1制备的甘胆酸检测试剂盒进行性能测试，主要测试其分析灵敏度、最低检出限、线性范围、准确度、重复性、稳定性及抗干扰性等。

1)分析灵敏度：取浓度在1.5～80.0mg/L之间的定值甘胆酸样本测定其吸光度变化值，重复测定2次取平均值。结果显示其分析灵敏度为0.0112A·L/mg。

2)最低检测限：采用5％BSA生理盐水溶液作为空白样本，空白样本应不含被测物。在生化分析仪上连续重复检测20次，记录检测结果。结果显示其最低检测限为1.9164mg/L。

3)线性范围：用低值血清(L)与高值标准品(H)按L、0.9L+0.1H、0.8L+0.2H、0.7L+0.3H、0.6L+0.4H、0.5L+0.5H、0.4L+0.6H、0.3L+0.7H、0.2L+0.8H、0.1L+0.9H、H比例稀释，每个稀释度重复测定4次，计算偏差及相关系数r。数据经可用性检查和精密度检验后，进行多项式回归分析，结果显示在1.5～80.0mg/L范围内，本试剂结果为线性，其直线回归方程如图1所示，线性回归方程为y＝0.987x+0.869，相关系数r＝0.998，线性范围内相关性较好。

4)准确性：选择合适浓度的常规检测样本，向常规样本中加入不同量的定值标准品制作成回收样本，定值样本用去离子水作为溶剂；在常规样本中加入同样量的去离子水制作成基础样本，加入的定值标准品的量不超过总体积的1/10，每个重复3次检测取其均值为回收浓度。结果显示平均回收率为101.24％，准确度较高。

5)重复性：每天做2批试验，每批取同一浓度的血清样本做2次测定，记录试验结果，连续测定20天，结果显示CV_批内为1.35％，CV_批间为3.14％，CV_天间为3.53％，总精密度为4.99％，重复性较好。

6)稳定性：取甘胆酸检测试剂盒进行常规贮存稳定性试验，2-8℃放置分别按时间2，4，6，8，9，10，11，12，13，14个月进行检测；开盖稳定性试验分别按2-8℃放置0天、7天、14天、16天、18天、20天、22天、24天、26天、28天、30天、32天进行测定。结果显示甘胆酸检测试剂盒贮存于2-8℃、避光环境中，有效期为12个月。开盖贮存于2-8℃、避光环境中，有效期为30天。

7)抗干扰性：将不同浓度的干扰物加入到血清标本中，对照组加入蒸馏水,以加入干扰物质的血清三次检测平均值，作为实测值，以加入蒸馏水的血清的对照组三次检测平均值为基准值。实测值减去基准值然后除以基准值得偏差。结果显示样本中胆红素≤300μmol/L、血红蛋白≤1mg/mL、乳糜≤0.30％、类风湿因子≤500IU/mL时对甘胆酸检测试剂盒检测结果的干扰小于10％。

实施例3

对比试剂盒的制备及使用：

试剂R1中的缓冲液采用氨基丁三醇缓冲液75mmol/L，PH7.2，其他试剂及实验方法均同实施例1和2。

试剂R1:

试剂R2:

校准品：

将实施例3制备的甘胆酸检测试剂盒进行性能测试，方法同实施例2。

1)分析灵敏度：取浓度在1.5～80.0mg/L之间的定值甘胆酸样本测定其吸光度变化值，重复测定2次取平均值。结果显示其分析灵敏度为0.12A·L/mg。

2)最低检测限：采用5％BSA生理盐水溶液作为空白样本，空白样本应不含被测物。在生化分析仪上连续重复检测20次，记录检测结果。结果显示其最低检测限为9.9650mg/L。

3)线性范围：用低值血清(L)与高值标准品(H)按L、0.9L+0.1H、0.8L+0.2H、0.7L+0.3H、0.6L+0.4H、0.5L+0.5H、0.4L+0.6H、0.3L+0.7H、0.2L+0.8H、0.1L+0.9H、H比例稀释，每个稀释度重复测定4次，计算偏差及相关系数r。数据经可用性检查和精密度检验后，进行多项式回归分析，结果显示在1.5～80.0mg/L范围内，本试剂结果为线性，其直线回归方程如图1所示，线性回归方程为y＝0.957x+0.819，相关系数r＝0.996，线性范围内相关性较好。

4)准确性：选择合适浓度的常规检测样本，向常规样本中加入不同量的定值标准品制作成回收样本，定值样本用去离子水作为溶剂；在常规样本中加入同样量的去离子水制作成基础样本，加入的定值标准品的量不超过总体积的1/10，每个重复3次检测取其均值为回收浓度。结果显示平均回收率为100.04％，准确度较高。

5)重复性：每天做2批试验，每批取同一浓度的血清样本做2次测定，记录试验结果，连续测定20天，结果显示CV_批内为1.38％，CV_批间为3.64％，CV_天间为3.83％，总精密度为5.99％，重复性较好。

6)稳定性：取甘胆酸检测试剂盒进行常规贮存稳定性试验，2-8℃放置分别按时间2，4，6，8，9，10，11，12，13，14个月进行检测；开盖稳定性试验分别按2-8℃放置0天、7天、14天、16天、18天、20天、22天、24天、26天、28天、30天、32天进行测定。结果显示甘胆酸检测试剂盒贮存于2-8℃、避光环境中，有效期为10个月。开盖贮存于2-8℃、避光环境中，有效期为26天。

7)抗干扰性：将不同浓度的干扰物加入到血清标本中，对照组加入蒸馏水,以加入干扰物质的血清三次检测平均值，作为实测值，以加入蒸馏水的血清的对照组三次检测平均值为基准值。实测值减去基准值然后除以基准值得偏差。结果显示样本中胆红素≤300μmol/L、血红蛋白≤1mg/mL、乳糜≤0.30％、类风湿因子≤500IU/mL时对甘胆酸检测试剂盒检测结果的干扰小于16％。

综上所述，本发明所提供的检测试剂盒具有良好的抗干扰性和特异性，且具有很好的灵敏性，阳性显色强，阴性本底更低，有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。

上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims

1.一种甘胆酸检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1、试剂R2和校准品，所述试剂R1的组分包括：生物缓冲液1、保护剂1、反应增强剂1、表面活性剂1、防腐剂1、稳定剂1；所述试剂R1中，所述生物缓冲液1包括下列组分：水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠和甘氨酸，且水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠、甘氨酸的总浓度为3.5－7.5g/L，生物缓冲液1的pH值为7.2－7.6；试剂R2的组分包括：生物缓冲液2、抗甘胆酸抗体的胶乳颗粒、保护剂2、反应增强剂2、表面活性剂2、防腐剂2、稳定剂2；校准品的组分包括：生物缓冲液3、保护剂3、防腐剂3、甘胆酸标准品、稳定剂3。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中，所述生物缓冲液2选自磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液中的一种或多种的组合；校准品中，所述生物缓冲液3选自磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液中的一种或多种的组合；所述试剂R2中，生物缓冲液2的浓度为20～200mmol/L，pH6.5-7.5；校准品中，生物缓冲液3的浓度为20～200mmol/L，pH6.5-7.5。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中，所述表面活性剂1选自椰子油脂肪酸二乙醇酰胺、Tween-20、Tween-30、Tween-80、TritonX-100中的一种或多种的组合；所述试剂R2中，所述表面活性剂2选自椰子油脂肪酸二乙醇酰胺、Tween-20、Tween-30、Tween-80、TritonX-100中的一种或多种的组合；所述试剂R1中，表面活性剂1的浓度为3～50mmol/L；所述试剂R2中，表面活性剂2的浓度为3～50mmol/L。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中，所述反应增强剂1选自PEG4000、PEG6000、PEG8000、PEG20000中的一种或多种的组合；所述试剂R2中，所述反应增强剂2选自PEG4000、PEG6000、PEG8000、PEG20000中的一种或多种的组合；所述试剂R1中，反应增强剂1的浓度为0.1～5.0g/L；所述试剂R2中，反应增强剂2的浓度为0.1～5.0g/L。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中，所述防腐剂1选自叠氮钠、硫柳汞、ProClin200、ProClin300中的一种或多种的组合；所述试剂R2中，所述防腐剂2选自叠氮钠、硫柳汞、ProClin200、ProClin300中的一种或多种的组合；所述校准品中，所述防腐剂3选自叠氮钠、硫柳汞、ProClin200、ProClin300中的一种或多种的组合；所述试剂R1中，防腐剂1的浓度为0.3～3.0g/L；所述试剂R2中，防腐剂2的浓度为0.3～3.0g/L；校准品中，防腐剂3的浓度为0.3～3.0g/L。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中，所述保护剂1选自牛血清白蛋白BSA、卵清白蛋白OVA和明胶中的一种或多种的组合；所述试剂R2中，所述保护剂2选自牛血清白蛋白BSA、卵清白蛋白OVA和明胶中的一种或多种的组合；校准品中，所述保护剂3选自牛血清白蛋白BSA、卵清白蛋白OVA或明胶中的一种或多种的组合；所述试剂R1中，保护剂1的浓度为1～10g/L；所述试剂R2中，保护剂2的浓度为1～10g/L；校准品中，保护剂3的浓度为1～8g/L。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中，所述稳定剂1选自无机盐、金属络合物、抗氧化剂中的一种或多种的组合；所述试剂R2中，所述稳定剂2选自无机盐、金属络合物、抗氧化剂中的一种或多种的组合；校准品中，所述稳定剂3选自无机盐、金属络合物、抗氧化剂中的一种或多种的组合。

8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述胶乳颗粒为致敏聚苯乙烯胶乳颗粒，表面官能团为氨基、羧基、酰肼、醛基或环氧基。