CN108956973A - 一种多功能抗体稀释液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种多功能抗体稀释液及其制备方法，由以下组分按重量份数配比组成：酪蛋白钠1～3份，庆大霉素0.1～0.5份，碳酸氢钠38～67份，柠檬酸钠33～55份，柠檬酸11～21份，对氨基苯磺酰胺9～15份，氯化钾7～18份，氯化钠6～13份，胱氨酸2～8份，蔗糖11～19份，氢氧化钠0.3～1份，牛血清白蛋白0.1～0.6份，山羊IgG 0.1～0.7份，吐温‑40 0.3～0.7份，Proclin 300 0.1～0.5份，去离子水200～400份。本发明利用各组分间的协同作用，制备获得多功能抗体稀释液，该稀释液配制方法简单，能为抗体提供良好的阻断性与保护性，以降低非特异性反应的同时提高抗体稳定性。
Description
技术领域
本发明涉及免疫技术领域，尤其涉及一种多功能抗体稀释液及其制备方法。
背景技术
随着人类科技技术的不断发展，也带动了生物行业的发展，其中免疫学发展带来了对对疾病检测日益精准，甚至是提前发现病症，做到早发现早治疗，同时也能随时监测体内标志物的变动，以便观察治疗疗效，提高治疗效果。这些精准的检测都离不开免疫学发展，主要以抗体-抗原结合反应为基础进行疾病标志物的检测，是由抗原表面位点与抗体Fab发生特异性反应，而抗原不一定只有一个结合位点，非特异性位点可能与其他杂蛋白发生结合，从而导致检测结果出现假阳性或假阴性，这种情况可通过在稀释液中添加相应的保护剂以降低非特异性结合；另外，蛋白不适合长期储存，如需要保存需要适合的稀释液进行保护。因此，配制一种能保护抗体、降低非特异性结合的稀释液，对免疫试剂尤为重要。
发明内容
本发明解决的技术问题：获得一种多功能抗体稀释液，该稀释液为抗体提供保护与阻断作用，以降低非特异性结合控制免疫试剂的假阳性、假阴性，且增加抗体的稳定性，以达到长期保存的要求。
技术方案：一种多功能抗体稀释液，由以下组分按重量份数配比组成：酪蛋白钠1～3份，庆大霉素0.1～0.5份，碳酸氢钠38～67份，柠檬酸钠33～55份，柠檬酸11～21份，对氨基苯磺酰胺9～15份，氯化钾7～18份，氯化钠6～13份，胱氨酸2～8份，蔗糖11～19份，氢氧化钠0.3～1份，牛血清白蛋白0.1～0.6份，山羊IgG 0.1～0.7份，吐温-40 0.3～0.7份，Proclin 300 0.1～0.5份，去离子水200～400份。
优选的一种多功能抗体稀释液，由以下组分按重量份数配比组成：酪蛋白钠2份，庆大霉素0.3份，碳酸氢钠57份，柠檬酸钠45份，柠檬酸16份，对氨基苯磺酰胺12份，氯化钾15份，氯化钠8份，胱氨酸5份，蔗糖15份，氢氧化钠0.6份，牛血清白蛋白0.3份，山羊IgG 0.4份，吐温-40 0.4份，Proclin 300 0.3份，去离子水300份。
一种多功能抗体稀释液的制备方法，包括以下步骤：
第1步、将酪蛋白钠加入去离子水中，在30～45℃下以150～200rpm的搅拌速度搅拌5～8h，再以0.45μm滤膜过滤，加入庆大霉素，制得溶液A，存放于4℃保存待用；
第2步、依次将碳酸氢钠、柠檬酸钠、柠檬酸、对氨基苯磺酰胺、氯化钾、氯化钠、胱氨酸、蔗糖、氢氧化钠以100～150rpm的搅拌速度加入去离子水中，其中待溶液澄清后加入下一份试剂，当试剂依次全部加完，且溶液搅拌至澄清后，调节pH至6.6～7.1，制得溶液B；
第3步、将牛血清白蛋白与山羊IgG加入去离子水中，以80～150rpm的搅拌速度搅拌50～150min，再以0.45μm滤膜过滤，制得溶液C；
第4步、将溶液A、溶液B、溶液C混合，以50～100rpm的搅拌速度搅拌30～80min，再以0.45μm或0.22μm滤膜过滤后加入吐温与Proclin，即可制得多功能抗体稀释液。
优选的，第1步中将酪蛋白钠加入去离子水中，在40℃下以180rpm的搅拌速度搅拌6h，再以0.45μm滤膜过滤，加入庆大霉素，制得溶液A，存放于4℃保存待用。
优选的，第2步中依次将碳酸氢钠、柠檬酸钠、柠檬酸、对氨基苯磺酰胺、氯化钾、氯化钠、胱氨酸、蔗糖、氢氧化钠以130rpm的搅拌速度加入去离子水中，其中待溶液澄清后加入下一份试剂，当试剂依次全部加完，且溶液搅拌至澄清后，调节pH至6.9，制得溶液B。
优选的，第3步中将牛血清白蛋白与山羊IgG加入去离子水中，以120rpm的搅拌速度搅拌80min，再以0.45μm滤膜过滤，制得溶液C。
优选的，第4步、将溶液A、溶液B、溶液C混合，以70rpm的搅拌速度搅拌50min，再以0.22μm滤膜过滤后加入吐温与Proclin，即可制得多功能抗体稀释液。
有益效果：本发明利用各组分间的协同作用，制备获得多功能抗体稀释液，该稀释液配制方法简单，能为抗体提供良好的阻断性与保护性，以降低非特异性反应的同时提高抗体稳定性。
具体实施方式
实施例1
一种多功能抗体稀释液，由以下组分按重量份数配比组成：酪蛋白钠2份，庆大霉素0.3份，碳酸氢钠57份，柠檬酸钠45份，柠檬酸16份，对氨基苯磺酰胺12份，氯化钾15份，氯化钠8份，胱氨酸5份，蔗糖15份，氢氧化钠0.6份，牛血清白蛋白0.3份，山羊IgG 0.4份，吐温-40 0.4份，Proclin 300 0.3份，去离子水300份。
一种多功能抗体稀释液的制备方法，包括以下步骤：
第1步、将酪蛋白钠加入去离子水中，在40℃下以180rpm的搅拌速度搅拌6h，再以0.45μm滤膜过滤，加入庆大霉素，制得溶液A，存放于4℃保存待用；
第2步、依次将碳酸氢钠、柠檬酸钠、柠檬酸、对氨基苯磺酰胺、氯化钾、氯化钠、胱氨酸、蔗糖、氢氧化钠以130rpm的搅拌速度加入去离子水中，其中待溶液澄清后加入下一份试剂，当试剂依次全部加完，且溶液搅拌至澄清后，调节pH至6.9，制得溶液B；
第3步、将牛血清白蛋白与山羊IgG加入去离子水中，以120rpm的搅拌速度搅拌80min，再以0.45μm滤膜过滤，制得溶液C；
第4步、将溶液A、溶液B、溶液C混合，以70rpm的搅拌速度搅拌50min，再以0.22μm滤膜过滤后加入吐温与Proclin，即可制得多功能抗体稀释液。
实施例2
一种多功能抗体稀释液，由以下组分按重量份数配比组成：酪蛋白钠2份，庆大霉素0.4份，碳酸氢钠57份，柠檬酸钠50份，柠檬酸17份，对氨基苯磺酰胺12份，氯化钾12份，氯化钠12份，胱氨酸5份，蔗糖15份，氢氧化钠0.5份，牛血清白蛋白0.3份，山羊IgG 0.5份，吐温-40 0.6份，Proclin 300 0.3份，去离子水350份。
一种多功能抗体稀释液的制备方法，包括以下步骤：
第1步、将酪蛋白钠加入去离子水中，在38℃下以180rpm的搅拌速度搅拌6h，再以0.45μm滤膜过滤，加入庆大霉素，制得溶液A，存放于5℃保存待用；
第2步、依次将碳酸氢钠、柠檬酸钠、柠檬酸、对氨基苯磺酰胺、氯化钾、氯化钠、胱氨酸、蔗糖、氢氧化钠以120rpm的搅拌速度加入去离子水中，其中待溶液澄清后加入下一份试剂，当试剂依次全部加完，且溶液搅拌至澄清后，调节pH至6.9，制得溶液B；
第3步、将牛血清白蛋白与山羊IgG加入去离子水中，以110rpm的搅拌速度搅拌120min，再以0.45μm滤膜过滤，制得溶液C；
第4步、将溶液A、溶液B、溶液C混合，以80rpm的搅拌速度搅拌60min，再以0.45μm滤膜过滤后加入吐温与Proclin，即可制得多功能抗体稀释液。
实施例3
一种多功能抗体稀释液，由以下组分按重量份数配比组成：酪蛋白钠1份，庆大霉素0.3份，碳酸氢钠52份，柠檬酸钠38份，柠檬酸12份，对氨基苯磺酰胺10份，氯化钾9份，氯化钠9份，胱氨酸5份，蔗糖13份，氢氧化钠0.5份，牛血清白蛋白0.2份，山羊IgG 0.5份，吐温-40 0.5份，Proclin 300 0.2份，去离子水280份。
一种多功能抗体稀释液的制备方法，包括以下步骤：
第1步、将酪蛋白钠加入去离子水中，在40℃下以190rpm的搅拌速度搅拌7h，再以0.45μm滤膜过滤，加入庆大霉素，制得溶液A，存放于6℃保存待用；
第2步、依次将碳酸氢钠、柠檬酸钠、柠檬酸、对氨基苯磺酰胺、氯化钾、氯化钠、胱氨酸、蔗糖、氢氧化钠以120rpm的搅拌速度加入去离子水中，其中待溶液澄清后加入下一份试剂，当试剂依次全部加完，且溶液搅拌至澄清后，调节pH至6.8，制得溶液B；
第3步、将牛血清白蛋白与山羊IgG加入去离子水中，以120rpm的搅拌速度搅拌100min，再以0.45μm滤膜过滤，制得溶液C；
第4步、将溶液A、溶液B、溶液C混合，以70rpm的搅拌速度搅拌70min，再以0.45μm滤膜过滤后加入吐温与Proclin，即可制得多功能抗体稀释液。
实施例4
将实施例1～3制备获得的多功能抗体稀释液用于抗体稀释，并与相应的抗体、抗原组合成试剂，对应检测阴性血清、马血清、试剂热稳定性，结果如下：
| 热稳定性(37℃加速7天) | 阴性血清(counts) | 马血清(counts) | |
| 实施例1 | 96.1％ | 2197 | 2871 |
| 实施例2 | 92.5％ | 4091 | 4311 |
| 实施例3 | 94.3％ | 3612 | 3991 |
Claims (7)
1.一种多功能抗体稀释液，其特征在于，由以下组分按重量份数配比组成：酪蛋白钠1～3份，庆大霉素0.1～0.5份，碳酸氢钠38～67份，柠檬酸钠33～55份，柠檬酸11～21份，对氨基苯磺酰胺9～15份，氯化钾7～18份，氯化钠6～13份，胱氨酸2～8份，蔗糖11～19份，氢氧化钠0.3～1份，牛血清白蛋白0.1～0.6份，山羊IgG 0.1～0.7份，吐温-40 0.3～0.7份，Proclin 300 0.1～0.5份，去离子水200～400份。
2.根据权利要求1所述的一种多功能抗体稀释液，其特征在于，由以下组分按重量份数配比组成：酪蛋白钠2份，庆大霉素0.3份，碳酸氢钠57份，柠檬酸钠45份，柠檬酸16份，对氨基苯磺酰胺12份，氯化钾15份，氯化钠8份，胱氨酸5份，蔗糖15份，氢氧化钠0.6份，牛血清白蛋白0.3份，山羊IgG 0.4份，吐温-40 0.4份，Proclin 300 0.3份，去离子水300份。
3.权利要求1所述一种多功能抗体稀释液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
第1步、将酪蛋白钠加入去离子水中，在30～45℃下以150～200rpm的搅拌速度搅拌5～8h，再以0.45μm滤膜过滤，加入庆大霉素，制得溶液A，存放于2～8℃保存待用；
第2步、依次将碳酸氢钠、柠檬酸钠、柠檬酸、对氨基苯磺酰胺、氯化钾、氯化钠、胱氨酸、蔗糖、氢氧化钠以100～150rpm的搅拌速度加入去离子水中，其中待溶液澄清后加入下一份试剂，当试剂依次全部加完，且溶液搅拌至澄清后，调节pH至6.6～7.1，制得溶液B；
第3步、将牛血清白蛋白与山羊IgG加入去离子水中，以80～150rpm的搅拌速度搅拌50～150min，再以0.45μm滤膜过滤，制得溶液C；
第4步、将溶液A、溶液B、溶液C混合，以50～100rpm的搅拌速度搅拌30～80min，再以0.45μm或0.22μm滤膜过滤后加入吐温与Proclin，即可制得多功能抗体稀释液。
4.根据权利要求3所述一种多功能抗体稀释液的制备方法，其特征在于，第1步中将酪蛋白钠加入去离子水中，在40℃下以180rpm的搅拌速度搅拌6h，再以0.45μm滤膜过滤，加入庆大霉素，制得溶液A，存放于4℃保存待用。
5.根据权利要求3所述一种多功能抗体稀释液的制备方法，其特征在于，第2步中依次将碳酸氢钠、柠檬酸钠、柠檬酸、对氨基苯磺酰胺、氯化钾、氯化钠、胱氨酸、蔗糖、氢氧化钠以130rpm的搅拌速度加入去离子水中，其中待溶液澄清后加入下一份试剂，当试剂依次全部加完，且溶液搅拌至澄清后，调节pH至6.9，制得溶液B。
6.根据权利要求3所述一种多功能抗体稀释液的制备方法，其特征在于，第3步中将牛血清白蛋白与山羊IgG加入去离子水中，以120rpm的搅拌速度搅拌80min，再以0.45μm滤膜过滤，制得溶液C。
7.根据权利要求3所述一种多功能抗体稀释液的制备方法，其特征在于，第4步、将溶液A、溶液B、溶液C混合，以70rpm的搅拌速度搅拌50min，再以0.22μm滤膜过滤后加入吐温与Proclin，即可制得多功能抗体稀释液。
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