CN108414336A - 一种提高抗原和抗体稳定性的稀释液 - Google Patents

一种提高抗原和抗体稳定性的稀释液 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种稀释液，通过在稀释液中加入一些保护性试剂，让抗原或抗体失活的时间大大延长，从而达到提高抗原或抗体的稳定性，满足临床检测需要的目的。通过大量实验表明其不仅能保护普通大分子蛋白或抗体，而且对于某些小分子，连接蛋白，和某些经过表达、重组的复杂蛋白也能起到很好的保护作用，具有很好的推广价值。

Description

一种提高抗原和抗体稳定性的稀释液
技术领域
本发明属于免疫分析范畴。具体涉及一种稀释液，该稀释液可以有效提高抗原和抗体的稳定性。
背景技术
在临床医学分析领域，抗原和抗体是主角，人们借助纯化的抗原通过免疫动物获得相应的抗体，继而建立起各种类型的抗原-抗体反应模型和检测方法，普遍应用于临床检测与科研的各个领域。我们获得抗原的途径主要有以下两种，其一是自然方法获得，就是取自自然界直接存在的或通过不破坏蛋白结构的简单方法得到抗原，例如微球蛋白(β2-MG)就是通过对肾小球病人的尿液进行简单地沉淀浓缩，再通过G50凝胶过滤从而可以获得纯度较高的抗原。其二是需要较为复杂的工艺，通过培养，表达，重组等方法来获得一些抗原，如三型胶原氨端肽(PIIINP)，在其获得的过程中，原有抗原的有效信息被表达出来，但分子结构会发生很大变化。所以相对第一种简单抗原来说，这类抗原就可能存在稳定性不好的现象，也往往成为医学领域检测时所面临的比较棘手的问题，因为我们在临床医学检测的一般方法就是要把抗原实现从分离-纯化-免疫-定量检测的目的，如果抗原的稳定性不好，那么直接影响到检测结果的客观性和准确性。相对于抗原来说，总体上抗体的稳定性要好一些，但一旦抗体经过提纯，经过与血清中的保护蛋白分离开，其稳定性也会大大降低，如何有效地保护蛋白，不仅仅可以使得检测误差大大降低同时也可以大大地减少浪费。同时，各个试剂公司研制试剂盒时对于保护液或稀释液的使用也是千差万别，各不公开。
为了解决这样的问题，本发明通过在稀释液中加入一些保护性试剂，让抗原或抗体失活的时间大大延长，从而达到提高稳定性来满足临床检测需要的目的。
本发明要解决的问题是：提高在医学检验领域中抗原或抗体的稳定性，从而满足临床检测的要求。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是提供一种可以有效提高抗原和抗体稳定性的稀释液。
本发明的技术优势在于：
(1)试剂简单容易获得，均为实验室常规化学试剂。尤其主体溶液中含氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠等常用试剂。
(2)不含腐蚀性溶剂，无污染，安全环保。不会对环境产生危害。
(3)适用范围广，在所有已适用的放射免疫法，化学发光法，酶联免疫技术领域中均产生很好的效果。具有推广和应用价值。
发明内容
本发明涉及一种稀释液可以有效提高抗原和抗体的稳定性。
一种提高抗原和抗体稳定性的稀释液，其特征在于所述稀释液包括：磷酸盐溶液、牛血清白蛋白、D-海藻糖、聚乙二醇6000、对乙酰氨基酚、ProClin 300。
本发明所涉及的稀释液中包括：磷酸盐溶液；质量百分浓度分别为0.50％牛血清白蛋白；0.15％D-海藻糖；1.0％聚乙二醇6000；0.10％对乙酰氨基酚和体积百分浓度为0.05％ProClin 300。
本发明稀释液中，所述的磷酸盐溶液包含有氯化钾，磷酸氢二钠，磷酸二氢钾和氯化钠，其配置方法为：以1升为例，称取KH2PO4 0.4克；Na2HPO4·12H2O5.8克；KCl 0.4克用生理盐水定容至1升。
本发明的稀释液的配置方法为：以1升为例，称取5克牛血清白蛋白；1.5克D-海藻糖；1.0克对乙酰氨基酚；10.0克聚乙二醇6000；0.4克磷酸氢二钾KH2PO4；5.8克磷酸氢二钠Na2HPO4·12H2O；0.4.克氯化钾，量取0.5毫升ProClin300，用生理盐水定容至1升。
本发明的稀释液中当牛血清白蛋白不能满足稳定性要求时可以用20％新生牛血清，或其他保护蛋白替代如卵清蛋白，水解明胶等代替。
本发明的稀释液中聚乙二醇6000常规使用的质量百分浓度为1.0％，但可视被保护蛋白的情况将浓度提高到最高2.0％，其保护效果更佳，但继续增高其浓度会可能有蛋白沉淀出现，不宜采用。当蛋白影响测定时，本稀释液不加BSA亦有保护作用。
本发明的稀释液中对乙酰氨基酚AP常规使用的质量百分浓度为0.10％，最高浓度可到1.5％；D-海藻糖常规使用的质量百分浓度0.15％，最高浓度可到3.0％(不易溶解)，因二者浓度太高会增加缓冲液的粘性，不建议采用。
本发明稀释液的使用方法为：将抗原，抗体或连接物按照一定的体积百分浓度加到稀释液中，混匀，放置在-15℃以下或2～8℃保存。
本发明进一步提供了上述稀释液的用途，用于提高抗体或抗原稳定性。
其中抗原优选为EMC2蛋白、醛固酮、PIIINP抗原或癌胚抗原CEA单克隆抗体与辣根过氧化物酶的连接物。
本发明稀释液中所用化学试剂的纯度均为分析纯，成剂的pH值为7.0。
附图说明
图1低、中、高样本在两种稀释液中测值下降率图
具体实施方式
实施例1：EMC2试剂盒组分运用本发明效果的比较
方法为：
表1 稀释液说明
分别使用A稀释液和B稀释液稀释相同浓度的EMC2蛋白(购于Novus Biologicals公司，货号：NBP2-23028)标准品和酶结合物，实验时将50μL标准品和50μL酶结合物加入包被反应板相应孔中，2～8℃反应20-24小时。
表2 EMC2组分不同稀释液标准品发光值结果
类别 S0 S1 S2 S3 S4 S5 r S1/S0
A稀释液 1157 1272 1838 2141 33055 51940 0.947 1.19
B稀释液 1052 7354 19213 64558 160654 353449 0.999 6.99
本实验采用的EMC2蛋白属于重组蛋白，特别容易失活。从结果来看，A稀释液组分属于常规稀释液，虽然只是过夜反应，S0和S1点计数差别已经不大了，说明本抗原或酶结合物出现大量失活的现象，稀释液起不到保护作用，而B稀释液相同浓度的组分标准品计数明显提高很多，不仅曲线的相关系数好，而且S1/S0可以达到6.99，二者差别明显，说明本发明稀释液优于常规稀释液。
实施例2：试剂盒组分稳定性效果的比较
方法：以醛固酮定量检测试剂盒(化学发光法)为例，(醛固酮抗原，产品编号：706035，CAS：1261254-31-2，购自SIGMA公司)分别配制于A和B两种稀释液(见表3)相同浓度的标准品、酶结合物和抗体溶液，将其贮存于2～8℃不同的时间，定期进行发光值的检测，以考察1年的时间内不同稀释液对于几种组分的保护效果。结果见于表4。
表3 稀释液说明
表4 醛固酮试剂盒在A和B两种稀释液下储存时间-标准品发光值变化结果
醛固酮属于小分子蛋白，易失活，难于保护。从表格数据看，A稀释液中，校准品发光值下降明显，12个月后发光计数只有原来的20％左右。而在B稀释液中仍持续保持80％左右且趋于平稳状态，曲线相关系数，变化不大，说明本发明稀释液的保护效果好。
实施例3：稀释液对抗原热稳定性保护效果的比较
方法：针对于不稳定抗原进行稳定性测定的比较：使用A和B两种稀释液(见表5)分别稀释PIIINP抗原(北京北方生物技术研究所有限公司重组合成PIIINP抗原)，配置低、中、高三份样本分装0.5ml/瓶小包装若干，分别将其放置37℃ 1，3，5，7天取出检测浓度变化情况。0天为分装后冻存保护的样本，计算时以其测定浓度为基准，统计样本经过37℃1，3，5，7天破坏性烘烤后测值的下降率。结果见于表6。
表5 稀释液说明
表6 不同稀释液对抗原热稳定性保护效果结果
(ng/ml)
通过表6数据和图1可以直观地发现B稀释液对热稳定性的保护效果非常好，低、中、高三份样本的失活率可控在10％以内，可以达到保护的目的。
实施例4：稀释液对抗体与辣根过氧化物酶的连接物保护效果的比较
方法：将癌胚抗原CEA单克隆抗体与辣根过氧化物酶的连接物(CEA单克隆抗体来自Medix Biochemica公司，货号：100044；辣根过氧化物酶，Sigma公司，产品编号：77332，二者采用改良的高碘酸钠氧化法联接)按照一定比例分别稀释至表7所示A和B两种稀释液中，混匀后分装10毫升/瓶，分别放置在表8的贮存条件下。进行对照检测，结果见表9：
表7 稀释液说明
表8 贮存条件对照表
表9 CEA抗体与辣根过氧化物酶连接物在A和B两种稀释液中稳定性结果
从表9数据直观看出，A稀释液中酶连接物保存得不够好，37℃破坏性烘烤使其各标准品的发光值有所下降，但经过2～8℃保存其失活更明显，尤其经过12个月放置后，其S5发光计数比-15℃冻存时降了一个数量级只有的10％左右了。而本发明的B稀释液各种条件下标准品的发光计数无明显变化，说明抗体及其连接物的活性保存完好。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。

Claims (10)

1.一种提高抗原和抗体稳定性的稀释液，其特征在于所述稀释液包括：磷酸盐溶液、牛血清白蛋白、D-海藻糖、聚乙二醇6000、对乙酰氨基酚、ProClin 300。
2.如权利要求1所述的稀释液，其特征在于所述稀释液包括：磷酸盐溶液；质量百分浓度分别为0.50％牛血清白蛋白、0.15％ D-海藻糖、1.0％聚乙二醇6000、0.10％乙酰氨基酚和体积百分浓度为0.05％ProClin 300。
3.如权利要求1所述稀释液，其特征在于所述磷酸盐溶液含有质量百分浓度为0.04％氯化钾，质量百分浓度为0.58％磷酸氢二钠，质量百分浓度为0.04％磷酸二氢钾，质量百分浓度为0.9％氯化钠。
4.如权利要求1-3任一权利要求所述稀释液，其特征在于所述牛血清白蛋白用20％新生牛血清、卵清蛋白或水解明胶中的任一一种代替。
5.如权利要求1所述稀释液，其特征在于所述D-海藻糖的质量百分浓度为0.15％-3.0％。
6.如权利要求1所述稀释液，其特征在于所述对乙酰氨基酚的质量百分浓度为0.1％-1.5％。
7.如权利要求1所述稀释液，其特征在于所述聚乙二醇6000的质量百分浓度为1.0％-2.0％。
8.一种权利要求1-2所述稀释液的配置方法，其特征在于包括如下步骤：称取5克牛血清白蛋白、1.5克 D-海藻糖、1.0克对乙酰氨基酚、10.0克聚乙二醇6000、0.4克磷酸氢二钾、5.8克磷酸氢二钠、0.4克氯化钾，量取0.5毫升ProClin 300，用生理盐水定容至1升。
9.权利要求1-8任一权利要求所述的稀释液在提高抗体或抗原稳定性方面的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述抗原，抗体或连接物为EMC2蛋白、醛固酮、PIIINP抗原或癌胚抗原CEA单克隆抗体与辣根过氧化物酶的连接物。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109669040A (zh) * 2018-12-14 2019-04-23 厦门艾德生物医药科技股份有限公司 一种用于增强pd-l1单克隆抗体使用效果的抗体稀释液及其使用方法
CN111896754A (zh) * 2020-08-04 2020-11-06 四川沃文特生物技术有限公司 一种pct校准品缓冲溶液
CN114137220A (zh) * 2021-10-22 2022-03-04 苏州普瑞斯生物科技有限公司 一种采用免疫比浊法的补体C1q检测试剂生产工艺

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1715920A (zh) * 2004-06-30 2006-01-04 中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所 血清或血浆样品稀释液及其应用
JP2006501050A (ja) * 2002-09-05 2006-01-12 ミラリ バイオサイエンシズ，インコーポレーテッド 指向性マイクロ波化学
CN101672849A (zh) * 2009-09-16 2010-03-17 花群义 鹿流行性出血病竞争酶联免疫吸附试验试剂盒及其制备方法和用途
CN102628863A (zh) * 2012-04-19 2012-08-08 上海蓝怡科技有限公司 标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液
US8609353B2 (en) * 2006-02-02 2013-12-17 Systagenix Wound Management (Us), Inc. Diagnostics and methods for removal and detection of interferents
CN104122395A (zh) * 2013-04-28 2014-10-29 北京协和洛克生物技术有限责任公司 一种检测样本中髓过氧化物酶浓度的试剂盒及其制备方法
CN104198725A (zh) * 2014-08-14 2014-12-10 上海睿康生物科技有限公司 抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒
CN105628914A (zh) * 2016-02-04 2016-06-01 广州科方生物技术有限公司 一种能使吖啶酯抗原抗体结合物稳定的稀释液及其制备方法

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006501050A (ja) * 2002-09-05 2006-01-12 ミラリ バイオサイエンシズ，インコーポレーテッド 指向性マイクロ波化学
CN1715920A (zh) * 2004-06-30 2006-01-04 中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所 血清或血浆样品稀释液及其应用
US8609353B2 (en) * 2006-02-02 2013-12-17 Systagenix Wound Management (Us), Inc. Diagnostics and methods for removal and detection of interferents
CN101672849A (zh) * 2009-09-16 2010-03-17 花群义 鹿流行性出血病竞争酶联免疫吸附试验试剂盒及其制备方法和用途
CN102628863A (zh) * 2012-04-19 2012-08-08 上海蓝怡科技有限公司 标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液
CN104122395A (zh) * 2013-04-28 2014-10-29 北京协和洛克生物技术有限责任公司 一种检测样本中髓过氧化物酶浓度的试剂盒及其制备方法
CN104198725A (zh) * 2014-08-14 2014-12-10 上海睿康生物科技有限公司 抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒
CN105628914A (zh) * 2016-02-04 2016-06-01 广州科方生物技术有限公司 一种能使吖啶酯抗原抗体结合物稳定的稀释液及其制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
孙汉巨等: "《食品分析与检测实验》", 31 December 2016, 合肥工业大学出版社 *
曹蔚等: "《药学专业 45天通关》", 31 March 2015, 西安交通大学出版社 *
杜军等: "《现代药学生物技术综合实验教程》", 31 December 2014, 中山大学出版社 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109669040A (zh) * 2018-12-14 2019-04-23 厦门艾德生物医药科技股份有限公司 一种用于增强pd-l1单克隆抗体使用效果的抗体稀释液及其使用方法
CN111896754A (zh) * 2020-08-04 2020-11-06 四川沃文特生物技术有限公司 一种pct校准品缓冲溶液
CN114137220A (zh) * 2021-10-22 2022-03-04 苏州普瑞斯生物科技有限公司 一种采用免疫比浊法的补体C1q检测试剂生产工艺

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