CN106526164B - 一种酶标记抗体应用稀释液及其制备方法 - Google Patents

一种酶标记抗体应用稀释液及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种酶标记抗体应用稀释液，由基础溶液和小牛血清按3～4:1的体积比例混合而成，并且每升基础溶液由以下组分制备而成：8.0‑9.0g的NaCl、2.0g的Na2HPO4·12H2O、0.25g的NaH2PO4·2H2O、0.05‑0.20g的KCl、1.5‑2.5g的MgCl2·2H2O、10‑12ml的25％吐温‑20、30‑38ml的甘油、6‑8ml的10g/100ml山梨酸钠、2‑3ml的10g/100ml硫柳汞、3.5‑4.5ml硫酸庆大霉素针剂、0.8‑1.2g的明胶，余量为蒸馏水。本发明的酶标记抗体稀释液能够防止酶标记抗体失活和抑制细菌、真菌等微生物生长。采用该酶标记抗体应用稀释液将浓缩的酶标记抗体稀释后，酶标记抗体可以保存在2‑8℃保存半年时间。

Description

一种酶标记抗体应用稀释液及其制备方法
技术领域
本发明属于生物试剂技术领域，具体涉及一种酶标记抗体应用稀释液及其制备方法。
背景技术
制备或者购买的酶标抗体一般都是以浓缩的形式冰冻(-20℃)保存，应用时再用稀释液稀释几百至几万倍后在应用于诊断试剂或实验中用。稀释后的酶标记抗体只能在2-8℃1-3天内用完，否则酶标记抗体会因为效价减低并且被污染而不能再用。酶标记抗体稳定是制备诊断试剂及实验应用的必备条件，因此研究制备使酶标记抗体在应用液中长期(6个月)保持稳定的稀释液是十分必要的，这将为诊断试剂的制备及实验室保持酶标记抗体的稳定提供必要的条件。
现有的浓缩酶标记抗体必须经过高倍稀释成应用液才能应用，然而，利用现有的应用稀释液稀释后，会使酶标记抗体效价下降，甚至造成污染。
发明内容
本发明提供的一种酶标记抗体应用稀释液及其制备方法，解决了利用现有的应用稀释液稀释后，会使酶标记抗体效价下降，甚至造成污染的问题。
本发明提供的一种酶标记抗体应用稀释液，由基础溶液和小牛血清按3～4:1的体积比例混合而成，并且每升基础溶液由以下组分制备而成：8.0-9.0g的NaCl、2.0g的Na2HPO4·12H2O、0.25g的NaH2PO4·2H2O、0.05-0.20g的KCl、1.5-2.5g的MgCl2·2H2O、10-12ml的25％吐温-20、30-38ml的甘油、6-8ml的10g/100ml山梨酸钠、2-3ml的10g/100ml硫柳汞、3.5-4.5ml硫酸庆大霉素针剂、0.8-1.2g的明胶，余量为蒸馏水；
所述25％吐温-20、10g/100ml硫柳汞的配制溶剂均为蒸馏水，所述10g/100ml山梨酸钠的配制溶剂为乙醇。
优选的，所述的酶标记抗体应用稀释液，由基础溶液和小牛血清按3:1的体积比例混合而成，并且每升基础溶液由以下组分制备而成：8.0g的NaCl、2.0g的Na2HPO4·12H2O、0.25g的NaH2PO4·2H2O、0.1g的KCl、2.0g的MgCl2·2H2O、10.8ml的25％吐温-20、36ml的甘油、6.75ml的10g/100ml山梨酸钠、2.7ml的10g/100ml硫柳汞、4.0ml硫酸庆大霉素针剂、1.0g的明胶，余量为蒸馏水。
本发明还提供了一种酶标记抗体应用稀释液的制备方法，具体按照以下步骤制备：
步骤1，配制25％吐温-20：以蒸馏水为溶剂配制体积分数为25％的吐温-20；
配制10g/100ml山梨酸钠：以乙醇为溶剂配制浓度为10g/100ml的山梨酸钠；
配制10g/100ml硫柳汞：以蒸馏水为溶剂配制浓度为10g/100ml的硫柳汞；
步骤2，每升基础溶液按以下步骤配制：
步骤2.1，分别量取8.0-9.0g的NaCl、2.0g的Na2HPO4·12H2O、0.25g的NaH2PO4·2H2O、0.05-0.20g的KCl、1.5-2.5g的MgCl2·2H2O、10-12ml的25％吐温-20、30-38ml的甘油、6-8ml的10g/100ml山梨酸钠、2-3ml的10g/100ml硫柳汞、3.5-4.5ml硫酸庆大霉素针剂、0.8-1.2g的明胶；
步骤2.2，取少量蒸馏水，加入步骤2.1量取的各组分，搅拌，待各组分充分溶解后用蒸馏水定容至1L；
步骤3，将基础溶液和小牛血清按3～4:1的体积比例混合，得到酶标记抗体应用稀释液。
本发明提供的酶标记抗体稀释液，其中包含了甘油、小牛血清等保护酶标记抗体活性的成分，也包含了硫柳汞、硫酸庆大霉素等抑菌成分，该稀释液能够防止酶标记抗体失活和抑制细菌、真菌等微生物生长。采用该酶标记抗体应用稀释液将浓缩的酶标记抗体稀释后，酶标记抗体可以保存在2-8℃保存半年时间。
附图说明
图1为不同酶标记抗体应用稀释液的细菌培养结果图。
其中，图1A为实施例1的酶标记抗体应用稀释液的细菌培养结果图，图1B为普通酶标记抗体应用稀释液的细菌培养结果图。
具体实施方式
下面结合具体附图和实施例对本发明进行详细说明，但不应理解为本发明的限制。
本发明提供的一种酶标记抗体应用稀释液，由基础溶液和小牛血清按3～4:1的体积比例混合而成，并且每升基础溶液由以下组分制备而成：8.0-9.0g的NaCl、2.0g的Na2HPO4·12H2O、0.25g的NaH2PO4·2H2O、0.05-0.20g的KCl、1.5-2.5g的MgCl2·2H2O、10-12ml的25％吐温-20、30-38ml的甘油、6-8ml的10g/100ml山梨酸钠、2-3ml的10g/100ml硫柳汞、3.5-4.5ml硫酸庆大霉素针剂、0.8-1.2g的明胶，余量为蒸馏水；
其中，所述25％吐温-20是指吐温-20的体积浓度为25％，配制溶剂为蒸馏水；所述10g/100ml硫柳汞的配制溶剂为蒸馏水；所述10g/100ml山梨酸钠的配制溶剂为乙醇；所述硫酸庆大霉素针剂和小牛血清均为市售，且硫酸庆大霉素针剂中硫酸庆大霉素的浓度为40mg/ml。
同时，基于同一种发明构思，本发明还提供了一种酶标记抗体应用稀释液的制备方法，具体按照以下步骤制备：
步骤1，配制25％吐温-20：以蒸馏水为溶剂配制体积分数为25％的吐温-20；
配制10g/100ml山梨酸钠：以乙醇为溶剂配制浓度为10g/100ml的山梨酸钠；
配制10g/100ml硫柳汞：以蒸馏水为溶剂配制浓度为10g/100ml的硫柳汞；
步骤2，每升基础溶液按以下步骤配制：
步骤2.1，分别量取8.0-9.0g的NaCl、2.0g的Na2HPO4·12H2O、0.25g的NaH2PO4·2H2O、0.05-0.20g的KCl、1.5-2.5g的MgCl2·2H2O、10-12ml的25％吐温-20、30-38ml的甘油、6-8ml的10g/100ml山梨酸钠、2-3ml的10g/100ml硫柳汞、3.5-4.5ml硫酸庆大霉素针剂、0.8-1.2g的明胶；
步骤2.2，取少量蒸馏水，加入步骤2.1量取的各组分，搅拌，待各组分充分溶解后用蒸馏水定容至1L；
步骤3，将基础溶液和小牛血清按3～4:1的体积比例混合，得到酶标记抗体应用稀释液。
优选的，本发明提供的酶标记抗体应用稀释液，包括以下实施例：
实施例1
一种酶标记抗体应用稀释液，由基础溶液和小牛血清按3:1的体积比例混合而成，并且每升基础溶液由以下组分制备而成：8.0g的NaCl、2.0g的Na2HPO4·12H2O、0.25g的NaH2PO4·2H2O、0.1g的KCl、2.0g的MgCl2·2H2O、10.8ml的25％吐温-20、36ml的甘油、6.75ml的10g/100ml山梨酸钠、2.7ml的10g/100ml硫柳汞、4.0ml硫酸庆大霉素针剂、1.0g的明胶，余量为蒸馏水。具体按照以下步骤制备：
步骤1，配制25％吐温-20：以蒸馏水为溶剂配制体积分数为25％的吐温-20；
配制10g/100ml山梨酸钠：以乙醇为溶剂配制浓度为10g/100ml的山梨酸钠；
配制10g/100ml硫柳汞：以蒸馏水为溶剂配制浓度为10g/100ml的硫柳汞；
步骤2，每升基础溶液按以下步骤配制：
步骤2.1，分别量取8.0g的NaCl、2.0g的Na2HPO4·12H2O、0.25g的NaH2PO4·2H2O、0.1g的KCl、2.0g的MgCl2·2H2O、10.8ml的25％吐温-20、36ml的甘油、6.75ml的10g/100ml山梨酸钠、2.7ml的10g/100ml硫柳汞、4.0ml硫酸庆大霉素针剂、1.0g的明胶；
步骤2.2，取少量蒸馏水，加入步骤2.1量取的各组分，搅拌，待各组分充分溶解后用蒸馏水定容至1L；
步骤3，将基础溶液和小牛血清按3:1的体积比例混合，得到酶标记抗体应用稀释液。
实施例2
一种酶标记抗体应用稀释液，由基础溶液和小牛血清按3.5:1的体积比例混合而成，并且每升基础溶液由以下组分制备而成：8.5g的NaCl、2.0g的Na2HPO4·12H2O、0.25g的NaH2PO4·2H2O、0.05g的KCl、1.5g的MgCl2·2H2O、10ml的25％吐温-20、30ml的甘油、6ml的10g/100ml山梨酸钠、2ml的10g/100ml硫柳汞、3.5ml硫酸庆大霉素针剂、1.0g的明胶，余量为蒸馏水。具体按照以下步骤制备：
步骤1，配制25％吐温-20：以蒸馏水为溶剂配制体积分数为25％的吐温-20；
配制10g/100ml山梨酸钠：以乙醇为溶剂配制浓度为10g/100ml的山梨酸钠；
配制10g/100ml硫柳汞：以蒸馏水为溶剂配制浓度为10g/100ml的硫柳汞；
步骤2，每升基础溶液按以下步骤配制：
步骤2.1，分别量取8.5g的NaCl、2.0g的Na2HPO4·12H2O、0.25g的NaH2PO4·2H2O、0.05g的KCl、1.5g的MgCl2·2H2O、10ml的25％吐温-20、30ml的甘油、6ml的10g/100ml山梨酸钠、2ml的10g/100ml硫柳汞、3.5ml硫酸庆大霉素针剂、1.0g的明胶；
步骤2.2，取少量蒸馏水，加入步骤2.1量取的各组分，搅拌，待各组分充分溶解后用蒸馏水定容至1L；
步骤3，将基础溶液和小牛血清按3.5:1的体积比例混合，得到酶标记抗体应用稀释液。
实施例3
一种酶标记抗体应用稀释液，由基础溶液和小牛血清按4:1的体积比例混合而成，并且每升基础溶液由以下组分制备而成：9.0g的NaCl、2.0g的Na2HPO4·12H2O、0.25g的NaH2PO4·2H2O、0.2g的KCl、2.5g的MgCl2·2H2O、12ml的25％吐温-20、38ml的甘油、8ml的10g/100ml山梨酸钠、3ml的10g/100ml硫柳汞、4.5ml硫酸庆大霉素针剂、1.2g的明胶，余量为蒸馏水。具体按照以下步骤制备：
步骤1，配制25％吐温-20：以蒸馏水为溶剂配制体积分数为25％的吐温-20；
配制10g/100ml山梨酸钠：以乙醇为溶剂配制浓度为10g/100ml的山梨酸钠；
配制10g/100ml硫柳汞：以蒸馏水为溶剂配制浓度为10g/100ml的硫柳汞；
步骤2，每升基础溶液按以下步骤配制：
步骤2.1，分别量取9.0g的NaCl、2.0g的Na2HPO4·12H2O、0.25g的NaH2PO4·2H2O、0.2g的KCl、2.5g的MgCl2·2H2O、12ml的25％吐温-20、38ml的甘油、8ml的10g/100ml山梨酸钠、3ml的10g/100ml硫柳汞、4.5ml硫酸庆大霉素针剂、1.2g的明胶；
步骤2.2，取少量蒸馏水，加入步骤2.1量取的各组分，搅拌，待各组分充分溶解后用蒸馏水定容至1L；
步骤3，将基础溶液和小牛血清按4:1的体积比例混合，得到酶标记抗体应用稀释液。
由于实施例1-3的酶标抗体稀释液效果相似，下面仅以实施例1为例，对本发明的效果进一步说明。
一、酶标记抗体应用稀释液保藏时间的评价
丁型肝炎病毒酶标记抗体应用效价为1:3000，分别采用实施例1的酶标记抗体应用稀释液和普通酶标抗体稀释液(0.02M PBS，1％BSA)，按照1:3000的比例将酶标记抗体稀释成应用液，放置在4℃冰箱，分别在0天、1个月、3个月、6个月采用双抗体夹心法(酶联免疫双抗体夹心法)对病人血清进行检测，以添加酶标抗体稀释液为阳性对照，以不添加酶标抗体稀释液为阴性对照，测定血清样本的OD值，评价酶标记抗体的效价，结果如表1所示。
OD值越稳定，说明酶标抗体的效价越稳定，由表1可知，采用实施例1酶标记抗体应用稀释液稀释的酶标抗体，血清样本的OD值在0天至6个月之间均保持相对稳定，说明实施例1的应用稀释液能够使抗体的效价保持稳定；而普通酶标抗体稀释液稀释的酶标抗体，血清样本的OD值在1个月之后骤降，接近阴性对照的OD值，该普通酶标抗体稀释液(0.02MPBS，1％BSA)在一个后使抗体的效价骤降，无法继续使用。
表1利用不同抗体稀释液检测血清样本得到的OD值
二、酶标记抗体应用稀释液抑菌效果的评价
分别将实施例1酶标记抗体应用稀释液和普通酶标抗体稀释液(0.02M PBS，1％BSA)于2-8℃放置3个月，取出样本做细菌培养，观察菌落数量，结果如图1所示，其中，图1A为实施例1的酶标记抗体应用稀释液的细菌培养结果图，图1B为普通酶标记抗体应用稀释液的细菌培养结果图。由图1可知，实施例1的酶标记抗体应用稀释液无细菌生长，而普通酶标抗体稀释液有大量细菌生长，说明实施例1的酶标记抗体应用稀释液具有良好的抑菌效果。
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (3)

1.一种酶标记抗体应用稀释液，其特征在于，由基础溶液和小牛血清按3～4:1的体积比例混合而成，并且每升基础溶液由以下组分制备而成：8.0-9.0g的NaCl、2.0g的Na2HPO4·12H2O、0.25g的NaH2PO4·2H2O、0.05-0.20g的KCl、1.5-2.5g的MgCl2·2H2O、10-12ml的25％吐温-20、30-38ml的甘油、6-8ml的10g/100ml山梨酸钠、2-3ml的10g/100ml硫柳汞、3.5-4.5ml硫酸庆大霉素针剂、0.8-1.2g的明胶，余量为蒸馏水；
所述25％吐温-20、10g/100ml硫柳汞的配制溶剂均为蒸馏水，所述10g/100ml山梨酸钠的配制溶剂为乙醇。
2.根据权利要求1所述的酶标记抗体应用稀释液，其特征在于，由基础溶液和小牛血清按3:1的体积比例混合而成，并且每升基础溶液由以下组分制备而成： 8.0g的NaCl、2.0g的Na2HPO4·12H2O、0.25g的NaH2PO4·2H2O、0.1g的KCl、2.0g的MgCl2·2H2O、10.8ml的25％吐温-20、36ml的甘油、6.75ml的10g/100ml山梨酸钠、2.7ml的10g/100ml硫柳汞、4.0ml硫酸庆大霉素针剂、1.0g的明胶，余量为蒸馏水。
3.根据权利要求1所述的酶标记抗体应用稀释液的制备方法，其特征在于，具体按照以下步骤制备：
步骤1，配制25％吐温-20：以蒸馏水为溶剂配制体积分数为25％的吐温-20；
配制10g/100ml山梨酸钠：以乙醇为溶剂配制浓度为10g/100ml的山梨酸钠；
配制10g/100ml硫柳汞：以蒸馏水为溶剂配制浓度为10g/100ml的硫柳汞；
步骤2，每升基础溶液按以下步骤配制：
步骤2.1，分别量取8.0-9.0g的NaCl、2.0g的Na2HPO4·12H2O、0.25g的NaH2PO4·2H2O、0.05-0.20g的KCl、1.5-2.5g的MgCl2·2H2O、10-12ml的25％吐温-20、30-38ml的甘油、6-8ml的10g/100ml山梨酸钠、2-3ml的10g/100ml硫柳汞、3.5-4.5ml硫酸庆大霉素针剂、0.8-1.2g的明胶；
步骤2.2，取少量蒸馏水，加入步骤2.1量取的各组分，搅拌，待各组分充分溶解后用蒸馏水定容至1L；
步骤3，将基础溶液和小牛血清按3～4:1的体积比例混合，得到酶标记抗体应用稀释液。
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