CN105794767B - 一种用于保存猪全血的保养液及其应用方法 - Google Patents
一种用于保存猪全血的保养液及其应用方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种用于保存猪全血的保养液及应用方法,解决了现有能够替代人血的血细胞分析质控品的原材料成本高、直方图差异较大、效期较短的问题。本发明包括抗凝剂、固化剂、抑菌剂;所述抗凝剂包括枸橼酸、枸橼酸钠、EDTA‑Na2,所述固化剂包括磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、甲醛、腺嘌呤、蔗糖、氯化钠、阿司匹林;所述抑菌剂包括青霉素。本发明具有成本低廉,且能有效延长血液的保存期限到10个月以上,同时可减小的瓶间差异,使瓶间差异的变异系数CV≤5%,定值准确,保存期限内稳定性高,稳定性的变异系数CV≤7%等优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种保养液,具体涉及一种用于保存猪全血的保养液,并提供了该保养液的应用方法。
背景技术
目前我国使用的血细胞分析质控品多为国外进口品牌,如美国贝克曼库尔特和雅培公司、日本SYSMEX公司、德国拜耳公司等。进口血细胞分析质控品均需要与相应的血细胞分析仪配套使用,不同品牌仪器不能交叉使用;而且进口血细胞分析质控品稳定时间较短,仅有3个月;由于生产没有本土化和血液制品报关困难等因素,导致订货周期长,外加上运输时间,用户得到产品往往接近甚至超过效期;另外,进口血细胞分析质控品单支包装量大,浪费大,同时售价非常昂贵,高于200元/支。
鉴于以上情况,前几年国内出现了国产的以人血为主要原材料的血细胞分析质控品,一度出现供不应求的局面。但是《血液制品管理条例》和《血站管理办法》等国家法律法规的出台和颁布实施,限制了国内人血应用于生产,使得国内以人血为主要原材料的血细胞分析质控品全部停产。因此,国内纷纷开始研发一种能够替代人血的原材料,有相关报告的包括黑猩猩血、鳄鱼血、鸡血、猴血、鱼类血等以及选用乳胶颗粒作为细胞模拟物。但将上述物质作为血细胞分析质控品的原材料,其存在以下问题:直方图上显示的图形与临床人血标本的图形相差过大,稳定性差,效期较短(2-8℃稳定6个月)、瓶间差异大(批内瓶间差的变异系数CV≤15%),定值不准确。不能满足临床实验室的需求。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是:现有能够替代人血的血细胞分析质控品的原材料成本高、直方图差异较大,效期较短的问题,目的在于提供一种成本低廉、制成的血液原材料保存期长的用于保存猪全血的保养液。
血液在保存过程中,由于血红蛋白变性,酶活性逐渐下降,自由基大量堆积,诱导膜脂及膜蛋白发生过氧化作用,使膜结构和功能发生变化,导致膜变形性和稳定性下降,细胞逐渐衰亡。由于全血中的物质含量是很复杂的,且全血的在保存过程中,各种代谢和生理生化的变化是极其复杂的。全血保存中同时保留了血液中的各种物质,包括红细胞、白细胞、血小板、血浆中的各种蛋白、无机盐和有机物等多种物质。这些物质在血液保存过程中会发生一系列变化,包括细胞的聚集、变性、破损等。如何延长血液保存时间,提高血液保存质量与多种因素有关。
本发明通过下述技术方案实现:
一种用于保存猪全血的保养液,包括抗凝剂、固化剂、抑菌剂。
猪是哺乳类脊椎动物,血细胞种类和形态与人血细胞基本一致。猪血不易感染人源性的传染病(如乙肝、丙肝、艾滋病毒、梅毒等),生物安全得到保证,且其来源比人血容易,成本低廉。以猪血为主要原材料应用于血细胞分析质控品的开发,可有效的降低成本。
现有技术中虽然公开了一系列应用于人血、黑猩猩血、鳄鱼血、鸡血、猴血、鱼类血等的保养液维持其细胞形态,但由于血液种类的不同,血液中各种物质的含量不同,因而适用于上述种类血液的保养液并不能有效适用于猪血,如何提高猪血在体外保存的质量和期限,这方面的研究成为一道医学难题。
由于猪血的血小板是人血的2-3倍,有很强的聚集性,与人血比较更容易发生血液凝固,因而本发明采用抗凝剂能有效解决血液的凝固,采用固化剂保持细胞的固有形态与结构,采用抗生素防止血液中细菌的滋生,保证全血质控品的长期稳定性。
因而通过在猪血中加入一种创新性自主开发的具有抗凝剂、固化剂、抑菌剂的保养液,能有效保持猪血的黏稠度、悬浮性与人全血标本性质相似,保证猪血细胞在保存期内细胞膜的完整性及细胞不受损害,防止细菌滋生。
且本发明不添加任何的细胞模拟物,与人体标本更加接近,基质效应减少。具有很好的推广应用价值和前景。
为了延长保存时间,本发明不仅要防止血细胞凝固,又要保证对细胞体积大小影响不大,维持一定的pH、渗透压,避免血细胞肿胀与皱缩,保持血细胞形态的完整性。同时需要防止溶血,提供营养物质、能量物质,减缓细胞的新陈代谢的问题。因而本发明优化了抗凝剂、固化剂、抑菌剂的具体组成成分,所述抗凝剂包括枸橼酸、枸橼酸钠、EDTA-Na2,所述固化剂包括磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、甲醛、腺嘌呤、蔗糖、氯化钠、阿司匹林;所述抑菌剂包括青霉素。
通过本发明各组分的共同协作,不仅仅能有效促使猪血的黏稠度、悬浮性与人全血标本性质相似,使猪血在直方图上显示的图形与临床人血标本的图形相差不大,还能有效延长血液保存时间,保证猪血细胞在保存期内细胞膜的完整性及细胞不受损害,防止细菌滋生,防止溶血,保证在较长时间细胞内各种成分无明显改变。
作为最优的选择,所述抗凝剂中各物质的浓度为:枸橼酸0.5-3.0g/L、枸橼酸钠5-20g/L、EDTA-Na2 10-60g/L;
所述固化剂中各物质的浓度为:磷酸氢二钠1-20g/L、磷酸二氢钾0.1-5g/L、甲醛10-50ml/L、腺嘌呤0.1-2.0g/L、蔗糖5-30g/L、氯化钠0.5-10g/L、阿司匹林0.5-10g/L;
所述抑菌剂中该青霉素的浓度为800-20000万单位/L。
通过上述浓度的优化设置,且经过实施例1-3的试验数据表明:本发明的保养液不仅仅能使猪血在直方图上显示的图形与临床人血标本的图形相差不大,有效延长血液的保存期限,提高稳定性。而且其保存期限可延长到10个月以上,瓶间差异的变异系数CV≤5%,在10个月保存期限内稳定性的变异系数CV≤7%,定值更加准确。
作为最优的混合比例,所述抗凝剂、固化剂、抑菌剂之间的混合体积比为4-10∶2-10∶1-4。
一种用于保存猪全血的保养液的应用方法,包括:
(1)分别完成抗凝剂、固化剂、抑菌剂的配置;
(2)在猪血中加入抗凝剂、固化剂、抑菌剂,该抗凝剂、固化剂、抑菌剂的添加量为:抗凝剂20-50ml/500ml、固化剂10-50ml/500ml、抑菌剂5-20 ml/500ml;
(3)混合均匀后分装即可。
本发明与现有技术相比,具有如下的优点和有益效果:
1、本发明以猪血为主要原材料应用于血细胞分析质控品的开发,可有效的降低成本,且通过在猪血中加入一种创新性自主开发的具有抗凝剂、固化剂、抑菌剂的保养液,能有效保持猪血的黏稠度、悬浮性与人全血标本性质相似,保证猪血细胞在保存期内细胞膜的完整性及细胞不受损害,防止细菌滋生;
2、通过本发明各组分的共同协作,不仅仅能有效促使猪血的黏稠度、悬浮性与人全血标本性质相似,还能有效延长血液保存时间;
3、通过本发明各组分的浓度设置,有效延长血液的保存期限,可延长到10个月以上;同时可减小瓶间的差异,瓶间差异的变异系数CV≤5%,定值准确,保存期限内稳定性高,稳定性的变异系数CV≤7%。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白,下面结合实施例,对本发明作进一步的详细说明,本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明,并不作为对本发明的限定。
实施例1
本发明一种用于保存猪全血的保养液,该保养液的配置和运用方法如下:
1)抗凝剂配制:在水中,加入枸橼酸2.8g、枸橼酸钠19g、EDTA-Na250g,然后定容至1L即可。
2)固化剂配制:在水中,加入磷酸氢二钠18g、磷酸二氢钾4.5g、甲醛40ml、腺嘌呤2g、蔗糖30g、氯化钠10g、阿司匹林8g,然后定容至1L即可。
3)抑菌剂配制:在水中,加入青霉素20000万单位,然后定容至1L即可。
4)采集健康猪血500ml,加入抗凝剂25ml、固化剂15ml、抑菌剂5ml,并及时将各成分混匀。
5)对所得的猪血混合物进行性能检查,并将猪血混合物进行分装。分装要求充分混匀、不破坏血细胞,分装规格为2ml/支。
6)对分装后的猪血混合物进行性能监测,并采用迈瑞BC-3000血细胞分析仪检测该猪血混合物主要指标的变异系数CV百分值,主要指标包括:WBC、RBC、HGB、HCT、MCV、PLT。
经过本实施例的保养液处理后的猪血,呈鲜红色悬浊液,无溶血、脂血和凝块。显微镜下检测各血细胞形态正常。瓶间差试验结果见表1,CV≤4%;10个月稳定性观察主要指标的试验结果见表2,CV≤7%。
表1
表2
。
实施例2
本实施例与实施例1的区别在于,各组成成分的加入量不同,具体设置如下:
该抗凝剂配制中,各物质的加入量为:枸橼酸1.5g、枸橼酸钠12g、EDTA-Na2 40g,然后定容至1L即可。固化剂配制中,各物质的加入量为:磷酸氢二钠15g、磷酸二氢钾3g、甲醛30ml、腺嘌呤1g、蔗糖10g、氯化钠5g、阿司匹林5g,然后定容至1L即可。抑菌剂配制中,各物质的加入量为:青霉素15000万单位,然后定容至1L即可。
本实施例中,每500ml健康猪血中,抗凝剂加入量为35ml、固化剂加入量为25ml、抑菌剂加入量为10ml。
采用相同的方法对本实施例中分装后的猪血混合物进行性能监测,检测结果如下:
经过本实施例的保养液处理后的猪血,呈鲜红色悬浊液,无溶血、脂血和凝块。显微镜下检测各血细胞形态正常。瓶间差试验结果见表3,CV≤5%;10个月稳定性观察主要指标的试验结果见表4,CV≤6%。
表3
表4
。
实施例3
本实施例与实施例1的区别在于,各组成成分的加入量不同,具体设置如下:
该抗凝剂配制中,各物质的加入量为:枸橼酸1g、枸橼酸钠5g、EDTA-Na2 15g,然后定容至1L即可。固化剂配制中,各物质的加入量为:磷酸氢二钠2g、磷酸二氢钾0.5g、甲醛10ml、腺嘌呤0.2g、蔗糖5g、氯化钠1g、阿司匹林1g,然后定容至1L即可。抑菌剂配制中,各物质的加入量为:青霉素10000万单位,然后定容至1L即可。
本实施例中,每500ml健康猪血中,抗凝剂加入量为50ml、固化剂加入量为45ml、抑菌剂加入量为20ml。
采用相同的方法对本实施例中分装后的猪血混合物进行性能监测,检测结果如下:
经过本实施例的保养液处理后的猪血,呈鲜红色悬浊液,无溶血、脂血和凝块。显微镜下检测各血细胞形态正常。瓶间差试验结果见表5,CV≤4%;10个月稳定性观察主要指标的试验结果见表6,CV≤7%。
表5
表6
通过上述表1-表3中的数据即可有效证明:通过本发明的组成物质的筛选和组成浓度的优化后,使用本发明的保养液可使猪血保存时间延长至10个月甚至以上,并且保存效果较好,其黏稠度、悬浮性与临床人全血标本性质相似,保证血细胞在保存期内细胞膜的完整性及细胞不受损害,防止细菌滋生,保证在较长时间细胞内各种成分无明显改变。同时采用本发明的保养液制成的猪血混合物瓶间差异小,变异系数CV小于5%,使利用其作为原材料制成的血细胞分析质控品的定值更加准确。
根据市场调查,全国医疗机构拥有血细胞分析仪至少在5万台以上。主要集中在县级以上医疗机构、科研及教学机构。如果每家医疗机构都能较好的开展室内质控和室间质评,每台仪器平均每年使用质控品100支。那么每年血细胞分析质控品的市场需求量约为500万支。以猪血混合物为主要原材料开发的血细胞质控品性能明显优于目前市场上的同类产品,以稳定期长(2-8℃稳定10个月)、适用于多种机型、价格低、生物安全为主要特点,具有广阔的市场前景。
实施例4
本实施例是实施例1-3的对照实施例,本实施例中的组成成分的浓度不同,本实施例中具体实施方式如下:
1)抗凝剂配制:在水中,加入枸橼酸4g、枸橼酸钠25g、EDTA-Na270g,然后定容至1L即可。
2)固化剂配制:在水中,加入磷酸氢二钠0.8g、磷酸二氢钾0.1g、甲醛5ml、腺嘌呤0.1g、蔗糖4g、氯化钠0.4g、阿司匹林0.4g,然后定容至1L即可。
3)抑菌剂配制:在水中,加入青霉素10000万单位,然后定容至1L即可。
4)采集健康猪血500ml,加入抗凝剂25ml、固化剂15ml、抑菌剂5ml,并及时将各成分混匀。
5)对所得的猪血混合物进行性能检查,并将将猪血混合物进行分装。分装要求充分混匀,不破坏血细胞,分装规格为2ml/支。
6)对分装后的猪血混合物进行性能监测,检测结果是:外观呈鲜红色悬浊液,无溶血、脂血和凝块。但显微镜下检测各血细胞形态,出现红细胞皱缩,血小板聚集以及细胞碎片的情况,不满足质量要求。
实施例5
本实施例与实施例1的区别在于,本实施例中组成成分和各成分的浓度均不同,本实施例的具体设置如下:
1)抗聚剂的制备,
其中,抗聚剂配方按1升水中各组分重量计是:枸橼酸 2.22g/L、枸橼酸钠 26.3g/L 、EDTA-Na 60g/L 、葡萄糖 25g/L 、磷酸二氢钠 2.25g/L 、腺嘌呤 0.275g/L 。
2)固定剂的制备,
其中,固定剂配方按体积比计是: 乙醇∶戊二醛=30ml∶1.8ml。
3)保护剂的制备,
其中,保护剂配方按1升水中所含各组分重量计是:阿司匹林 1.7g 、潘生丁 0.3g、青霉素1300万单位。
首先按上述比例分别配制抗聚剂、固定剂及保护剂,将三组分按照抗聚剂35ml、固定剂0.8ml、保护剂15ml的量混合均匀,得混合液,于2~8℃温度下保存时间小于24小时,待用。
4)采集健康猪血400ml ,加入上述混合液,并及时混匀。
5)对所得的猪血混合物进行性能检查,并将将猪血混合物进行分装。分装要求充分混匀,不破坏血细胞,分装规格为2ml/支。
6)对分装后的猪血混合物进行性能监测,通过外观的观察,出现猪血凝固的现象,显微镜下进一步观察出现血小板聚集,红细胞破坏。
以上所述的具体实施方式,对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明,所应理解的是,以上所述仅为本发明的具体实施方式而已,并不用于限定本发明的保护范围,凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.一种用于保存猪全血的保养液,其特征在于,包括抗凝剂、固化剂和 抑菌剂;
所述抗凝剂包括枸橼酸、枸橼酸钠、EDTA-Na2,所述固化剂包括磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、甲醛、腺嘌呤、蔗糖、氯化钠、阿司匹林;所述抑菌剂包括青霉素;
所述抗凝剂中各物质的浓度为:枸橼酸0.5-3.0g/L、枸橼酸钠5-20g/L、EDTA-Na2 10-60g/L;
所述固化剂中各物质的浓度为:磷酸氢二钠1-20g/L、磷酸二氢钾0.1-5g/L、甲醛10-50ml/L、腺嘌呤0.1-2.0g/L、蔗糖5-30g/L、氯化钠0.5-10g/L、阿司匹林0.5-10g/L;
所述抑菌剂中该青霉素的浓度为800-20000万单位/L;
所述抗凝剂、固化剂、抑菌剂之间的混合体积比为 4-10:2-10:1-4 。
2.如权利要求1所述的一种用于保存猪全血的保养液的制备方法,其特征在于,包括:
(1)分别完成抗凝剂、固化剂、抑菌剂的配置;
(2)在猪血中加入抗凝剂、固化剂、抑菌剂,每 500ml 猪血中 抗凝剂、固化剂、抑菌剂的添加量为:抗凝剂20-50ml、固化剂10-50ml、抑菌剂5-20ml;
(3)混合均匀后分装即可。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |