CN103336110B - 一种全血质控物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种全血质控物，包含下列组分：三种细胞模拟物，抗凝剂，白细胞固定液，红细胞和血小板固定液。本发明还公开了所述的全血质控物的制备方法。本发明原料来源广泛，制作工艺简单，能够在三分类血球仪上清晰地分辨出白细胞三分类，红细胞与血小板大小差异明显，易于仪器识别，小红细胞对血小板的干扰小，且保存期限能够达到6个月，满足临床质控使用的要求。

Description

一种全血质控物及其制备方法

技术领域

本发明涉及临床检验领域，具体涉及一种全血质控物及其制备方法。

背景技术

全血质控物和校准物是应用于临床检验领域实验，血细胞分析仪溯源性必备的计量物质，作为全血细胞分析仪室内外质量控制、评价与确保实验室结果准确性的唯一依据。国内外全血质控物大多采用动物血细胞或高分子材料作为替代品，并在临床检验中大量使用。但国内厂商的全血质控物大多白细胞分类只能提供一个或两个白细胞亚群；在血细胞分析仪上，检测结果的直方图只能提供一个或两个波峰，直观上很难达到模拟人血液中白细胞分类的效果。

美国专利US3541137、US4179398、US4264470等描述了三分群血细胞分析仪质控物的白细胞和血小板模拟物的研制方法，其中人粒细胞模拟物可以从爬行动类、鱼类红细胞经过固定后获得；人单核细胞模拟物用火鸡血红细胞处理后获得；人淋巴细胞模拟物则由人活其他哺乳动物红细胞处理后获得，而人血小板模拟物使用山羊血红细胞处理后获得等等。

美国专利20030104631、US6514763、US4704364等等都报道了一些三分类全血质控物的制作方法，在这些方法中，红细胞模拟物大多采用猪血红细胞、或人血红细胞来进行稳定处理。这些方法的弊端在于：用猪血红细胞稳定处理后的红细胞模拟物，其红细胞体积过小，对血小板计数形成干扰，从而影响到了真实的血小板计数；而用人血红细胞其来源则非常困难，不易进行规模化生产。

美国专利US4198206报道了一种直接用人血小板进行稳定化处理后作为质控物的方法，但人血小板来源非常困难，不易进行规模化生产。

美国专利US42338564报道了一种用猪血小板进行稳定处理后模拟人血小板，但猪血小板本身容易聚集，且提取工艺复杂，若使用专门分离猪成分血的仪器，代价高昂。

发明内容

发明目的：针对现有技术中的问题，本发明的第一个目的是提供一种全血质控物。本发明的第二个目的是提供该全血质控物的制备方法。

技术方案：为了解决上述技术问题，本发明提供了一种全血质控物，包含下列组分：

1）三种细胞模拟物，2）抗凝剂，3）白细胞固定液，4）红细胞和血小板固定液。

所述三种细胞模拟物为白细胞模拟物、红细胞模拟物和血小板模拟物。

在1L抗凝剂中包括如下组分：

1）抗凝化合物30.0～75.0g，所述抗凝化合物为葡萄糖、柠檬酸、柠檬酸三钠、乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸衍生物中的一种或几种；

2）pH调节剂1.0～5.2g；

3）余量为水。

所述白细胞固定液终浓度为0.05%-10.0%，白细胞固定液为甲醛、多聚甲醛、戊二醛或F-68中的一种或几种。

在1L红细胞和血小板固定液中包括以下组分：

1）进行固定的化学试剂50.0-120.0g，所述进行固定的化学试剂为ATP、腺嘌呤、葡萄糖、乳糖中的一种或几种；

2）pH缓冲液0.1mL-1.0mL，所述pH缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液中的一种或几种；

3）进行固定的化学试剂0.5-5.0g，所述进行固定的化学试剂为甲醛、多聚甲醛、戊二醛或F-68的一种或几种；

4）防腐剂0.5-4.0g，所述防腐剂为Proclin300、叠氮钠或苯甲酸钠中的一种；

5）余量为水。

所述的全血质控物的制备方法，该方法包括以下步骤：

1）三种细胞模拟物的制备：

a、白细胞模拟物的制备：收集废弃的猪血、鸡血、和黄鳝血，加入5倍体积的抗凝剂进行抗凝，用离心机按照3000rpm离心30分钟后去除上清液，得到血细胞，加入PBS缓冲液摇匀后并使用白细胞固定液分别对猪血、鸡血、和黄鳝血进行固定处理，保持白细胞固定液的终浓度（V/V）在1.5%，室温下固定24小时，后将猪血、鸡血、和黄鳝血按照细胞数量30:10:60的比例进行混合，得到白细胞模拟物；

b、红细胞模拟物的制备：收集选用成年猪血红细胞或豚鼠血红细胞，取血时用5倍体积抗凝剂进行抗凝，用离心机按照3000rpm离心30分钟后去除上清液，得到血细胞，加入PBS缓冲液摇匀后使用红细胞、血小板固定液对采取的红细胞进行固定，室温下固定24小时，得到红细胞模拟物；

c、血小板模拟物的制备：血小板模拟物选用山羊血红细胞，取血时用5倍体积的抗凝剂进行抗凝，用离心机按照3000rpm离心30分钟后去除上清液，加入PBS缓冲液摇匀后使用红细胞、血小板固定液对采取的红细胞进行固定，室温下固定24小时，得到血小板模拟物。

2）按照白细胞模拟物1.0～20.0×10⁹/L，红细胞模拟物2.0～6.0×10¹²/L，血小板模拟物50～500×10⁹/L的比例混合，配制成三分类全血质控物。

有益效果：本发明原料来源广泛，制作工艺简单，其中白细胞替代物能够在三分类血球仪上的直方图清晰地形成3个独立的波峰，分别代表了淋巴细胞、中间细胞和粒细胞，易于仪器软件分辨出白细胞三分类；并且红细胞与血小板大小差异明显，使得小红细胞被误计作血小板的干扰大大降低，易于仪器软件识别，且保存期限能够达到6个月，满足临床质控使用的要求。

附图说明

图1为本发明的全血质控物在三分类血球仪上白细胞(WBC)直方图。

图2为本发明的全血质控物在三分类血球仪上红细胞（RBC）直方图。

图3为本发明的全血质控物在三分类血球仪上血小板（PLT）直方图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明作更进一步的说明。

实施例1

抗凝剂：在1L的抗凝剂中，葡萄糖32.4g，柠檬酸3.85g，磷酸二氢钠4.82g，余量为水。

PBS缓冲液：在1L的PBS缓冲液，氯化钠4.5g、磷酸氢二钠22.1g、磷酸二氢钠2.1g。

白细胞固定液：甲醛:戊二醛（V:V）=1:1混合溶液，甲醛和戊二醛终浓度为5%。

红细胞、血小板固定液：在1L的红细胞、血小板固定液中，ATP2.5g、乳糖75g、甲醛0.85ml、F-680.36g、柠檬酸0.5g、柠檬酸三钠、14.2g、叠氮钠3.0g，其余为水。

实施例2

抗凝剂：在1L的抗凝剂中，乙二胺四乙酸28.4g，柠檬酸1.6g，磷酸二氢钠1g，余量为水。

PBS缓冲液：在1L的PBS缓冲液，氯化钠4.5g、磷酸氢二钠22.1g、磷酸二氢钠2.1g。

白细胞固定液：多聚甲醛：F-68（V:V）=1:1混合溶液，终浓度为0.05%。

红细胞、血小板固定液：在1L的红细胞、血小板固定液中，腺嘌呤2.5g、葡萄糖47.5g、多聚甲醛0.3g、F-680.2g、柠檬酸0.3g、柠檬酸三钠10.2g、叠氮钠0.5g，其余为水。

实施例3

抗凝剂：在1L的抗凝剂中，葡萄糖65.4g，柠檬酸三钠9.6g，磷酸二氢钠5.2g，余量为水。

PBS缓冲液：在1L的PBS缓冲液，氯化钠5.5g、磷酸氢二钠20.3g、磷酸二氢钠3.1g。

白细胞固定液：甲醛:戊二醛（V:V）=1:1混合溶液，甲醛和戊二醛终浓度为10%。

红细胞、血小板固定液：在1L的红细胞、血小板固定液中，ATP10g、乳糖110g、甲醛2ml、F-684.0g、磷酸氢二钠3.0g、磷酸二氢钠2.0g、叠氮钠4.0g，其余为水。

实施例4：

采取猪血、鸡血、黄鳝血分别用5倍体积的抗凝剂抗凝，用离心机按照3000rpm离心30分钟后去除上清液，得到血细胞，加入PBS缓冲液摇匀后加入白细胞固定液，保持白细胞固定液的终浓度（V/V）在1.5%，室温下固定24小时，后按照猪血：鸡血：黄鳝血(细胞个数比)=30:10:60配制成白细胞模拟物，4℃下存放。

实施例5

采取猪血用5倍体积的抗凝剂抗凝，用离心机按照3000rpm离心30分钟后去除上清液，得到血细胞，加入PBS缓冲液摇匀后加入红细胞固定液，室温下固定24小时，制成红细胞模拟物，4℃下存放。

实例6

采取山羊血用5倍体积的抗凝剂抗凝，用离心机按照3000rpm离心30分钟后去除上清液，得到血细胞，加入PBS缓冲液摇匀后加入红细胞固定液，室温下固定24小时，制成血小板模拟物，4℃下存放。

实例7

按照白细胞模拟物1.0～20.0×10⁹/L，红细胞模拟物2.0～6.0×10¹²/L，血小板模拟物50～500×10⁹/L的比例，配制成三分类全血质控物，4℃下存放，有效期能达到6个月。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (1)

1.一种全血质控物，其特征在于，包含下列组分：1）三种细胞模拟物，2）抗凝剂，3）白细胞固定液，4）红细胞和血小板固定液；所述三种细胞模拟物为白细胞模拟物、红细胞模拟物和血小板模拟物；所述白细胞模拟物的制备：收集废弃的猪血、鸡血、和黄鳝血，加入5倍体积的抗凝剂进行抗凝，用离心机按照3000rpm离心30分钟后去除上清液，得到血细胞，加入PBS缓冲液摇匀后并使用白细胞固定液分别对猪血、鸡血、和黄鳝血进行固定处理，保持白细胞固定液的终浓度（V/V）在1.5%，室温下固定24小时，后将猪血、鸡血、和黄鳝血按照细胞数量30:10:60的比例进行混合，得到白细胞模拟物。

2、根据权利要求1所述的全血质控物，其特征在于，在1L抗凝剂中包括如下组分：1）抗凝化合物30.0～75.0g，所述抗凝化合物为葡萄糖、柠檬酸、柠檬酸三钠、乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸衍生物中的一种或几种； 

2）pH调节剂1.0～5.2g；

3）余量为水。

3、根据权利要求1所述的全血质控物，其特征在于，所述白细胞固定液终浓度为1.5%，白细胞固定液为甲醛、多聚甲醛、戊二醛或F-68中的一种或几种。

4、根据权利要求1所述的全血质控物，其特征在于，在1L红细胞和血小板固定液中包括以下组分：

1）提供能量的化学试剂50.0-120.0g，所述提供能量的化学试剂为ATP、腺嘌呤、葡萄糖、乳糖中的一种或几种；

2）pH缓冲液0.1mL-1.0mL，所述pH缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液中的一种或几种；

3）进行固定的化学试剂0.5-5.0g，所述进行固定的化学试剂为甲醛、多聚甲醛、戊二醛或F-68的一种或几种；

4）防腐剂0.5-4.0g，所述防腐剂为Proclin 300、叠氮钠或苯甲酸钠中的一种；

5）余量为水。

5、 一种权利要求1~4任一项所述的全血质控物的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1）  三种细胞模拟物的制备：

a、  白细胞模拟物的制备：收集废弃的猪血、鸡血、和黄鳝血，加入5倍体积的抗凝剂进行抗凝，用离心机按照3000rpm离心30分钟后去除上清液，得到血细胞，加入PBS缓冲液摇匀后并使用白细胞固定液分别对猪血、鸡血、和黄鳝血进行固定处理，保持白细胞固定液的终浓度（V/V）在1.5%，室温下固定24小时，后将猪血、鸡血、和黄鳝血按照细胞数量30:10:60的比例进行混合，得到白细胞模拟物；

b、  红细胞模拟物的制备：收集选用成年猪血红细胞或豚鼠血红细胞，取血时用5倍体积抗凝剂进行抗凝，用离心机按照3000rpm离心30分钟后去除上清液，得到血细胞，加入PBS缓冲液摇匀后使用红细胞、血小板固定液对采取的红细胞进行固定，室温下固定24小时，得到红细胞模拟物；

c、  血小板模拟物的制备：血小板模拟物选用山羊血红细胞，取血时用5倍体积的抗凝剂进行抗凝，用离心机按照3000rpm离心30分钟后去除上清液，加入PBS缓冲液摇匀后使用红细胞、血小板固定液对采取的红细胞进行固定，室温下固定24小时，得到血小板模拟物；

2）  按照白细胞模拟物1.0～20.0×10⁹/L，红细胞模拟物2.0～6.0×10¹²/L，血小板模拟物50～500×10⁹/L的比例混合，配制成三分类全血质控物。