CN109142742A - 一种过敏原特异性IgE抗体质控品及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种过敏原特异性IgE抗体质控品，所述的过敏原特异性IgE抗体质控品包括质控品L、质控品M和质控品H，所述的质控品L、所述的质控品M和所述的质控品H的原料组分分别包括基质以及至少两种过敏原，所述的质控品L、所述的质控品M和所述的质控品H中的过敏原的浓度不同。本发明的质控品成分多，可以满足过敏常见过敏原的检验需求，还可以根据需要添加多种过敏原，使其检测范围更加广泛，且能够有效的控制批间差，使得检测结果更加准确可靠。

Description

一种过敏原特异性IgE抗体质控品及其制备方法
技术领域
本发明属于检验质量控制领域，具体涉及一种过敏原特异性IgE抗体质控品及其制备方法。
背景技术
过敏性疾病又称变态反应性疾病，是指人体通过吸入、食入、注入或接触某种含有致敏成分的物质(称为过敏原或变应原)后触发人体产生过量的免疫球蛋白E(IgE)，从而引起各种功能性障碍或组织损伤的一类疾病，常表现为支气管哮喘、过敏性鼻炎、过敏性皮肤病等，有时会发生威胁生命的过敏性休克。过敏性疾病影响着全世界近1/4的人口，被世界卫生组织列为21世纪重点防治的三大疾病之一。相对于体外诊断试剂，过敏原检测的主要的替代品是皮试。这是传统的检测方法，具有准确性高、简便易行的优点。但是，皮试具有受检者痛苦、危险性高、发作期不能检查、依赖主观判断的致命缺点。目前全国没有经过药监局批准的合法皮试产品，所以其替代性较差。实际上，很多的过敏性疾病，只要知道了过敏原，就可以采取简单的避免接触和谨慎使用的方式，防止过敏性疾病的发生，减少抗过敏类药物的使用，极大节省医疗开支。
IgE的检测是诊断变态反应性疾病的关键方法。过敏的体外诊断发展迅速，但是由于过敏本身的发展和特性，过敏诊断一般基于膜条，酶联免疫和免疫荧光等方法，但低浓度的IgE需要灵敏度和特异度均高的检测方法应用于临床诊断。高灵敏度的检测试剂盒不仅需要好的技术平台，稳定、高效价的诊断试剂原料也很关键。
在过敏原特异性IgE抗体检测中，大部分的过敏原由于其成分复杂，目前仅有D1(屋尘螨)D2(粉尘螨)有国际标准，从而造成不同的检测方法或者不同的厂家的检测产品所得的检测结果可能出现不一致，为有效控制批间差，特建立一种多项过敏原特异性IgE抗体质控品及其制备方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种能够有效的控制批间差的过敏原特异性IgE抗体质控品及其制备方法。
为解决以上技术问题，本发明采取如下技术方案：
本发明的一个目的是提供一种过敏原特异性IgE抗体质控品，所述的过敏原特异性IgE抗体质控品包括质控品L、质控品M和质控品H，所述的质控品L、所述的质控品M和所述的质控品H的原料组分分别包括基质以及至少两种过敏原，所述的质控品L、所述的质控品M和所述的质控品H中的过敏原的浓度不同。
优选地，所述的质控品L、所述的质控品M和所述的质控品H中的过敏原的种类和个数相同。
优选地，所述的过敏原为吸入过敏原或者食物过敏原。
本发明中，所有的吸入过敏原或者食物过敏原均可使用。优选地，吸入过敏原为屋尘螨(D1)和粉尘螨(D2)或者为猫毛(E1)、狗毛(D5)、蟑螂(I6)、交链孢霉(M6)、柳树(T12)、豚草(W1)、艾蒿(W6)、葎草(W22)中的两种或两种以上的组合)。优选地，食物过敏原为牛奶(F2)、鳕鱼(F3)、小麦(F4)、花生(F13)、大豆(F14)、蟹(F23)、虾(F24)、牛肉(F27)、羊肉(F88)、鸡蛋(F245)中的两种或两种以上的组合。
优选地，所述的质控品L中每个过敏原的浓度独立地为0.2-0.5IU/mL；所述的质控品M中每个过敏原的浓度独立地为2-5IU/mL；所述的质控品H中每个过敏原的浓度独立地为30-40IU/mL。
由于sIgE项目的线性范围是：0-100IU/mL，分级情况如下：
因此，本发明中所述的质控品L处于0/1级；所述的质控品M处于2/3级；所述的质控品H处于4级；从而能够很好的覆盖线性范围，便于对检测质量的控制。
优选地，所述的过敏原为过敏原阳性质控血清，其制备方法参见CN2014091114，该过敏原阳性质控血清来源稳定，具有批间差小，成本低的优势。
优选地，所述的基质为血清或血浆。
优选地，所述的质控品L、所述的质控品M和所述的质控品H的原料组分分别还包括占所述的基质体积0.05％～0.1％的防腐剂。
进一步优选地，所述的防腐剂为PC300。
本发明的另一个目的是提供一种所述的过敏原特异性IgE抗体质控品的制备方法，包括如下步骤：
(1)在成品人血清或血浆中加入氯化钙溶液后在36～38℃下孵育1.5～2.5h，以7000～9000转/分钟的速度进行离心，去除纤维蛋白质；
(2)添加过敏原阳性质控血清配制成相应的质控品；
(3)选择性地添加防腐剂，混合均匀；
(4)分析质控品中各个过敏原的含量并定值。
本发明中的成品人血清或血浆选用来源充足、易获得的成品人血浆为材料，血浆处理后有机物的成分与血清在理论上完全一致，且添加剂和调制物数量少，瓶间差异小。
由于以上技术方案的实施，本发明与现有技术相比具有如下优点：
本发明的质控品成分多，可以满足过敏常见过敏原的检验需求，还可以根据需要添加多种过敏原，使其检测范围更加广泛，且能够有效的控制批间差，使得检测结果更加准确可靠。
附图说明
附图1为质控品-Panel A的制备流程图；
附图2为质控品-Panel A的稳定性(室温)；
附图3为质控品-Panel A的稳定性(4℃)；
附图4为质控品-Panel A的稳定性(-20℃)。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步详细的说明，但本发明并不限于以下实施例。实施例中采用的实施条件可以根据具体使用的不同要求做进一步调整，未注明的实施条件为本行业中的常规条件。
实施例1、制备流程见图1。
(1)采集成品人血清或血浆，选用来源充足、易获得的成品人血浆为材料，血浆处理后有机物的成分与血清在理论上完全一致，且添加剂和调制物数量少，瓶间差异小；
(2)在成品人血清或血浆中加入CaCl2溶液后在36～38℃温度下孵育2小时，7000-9000转/min速度离心，去除血浆中的纤维蛋白质；(3)按照质控品的要求，配制相应的质控盘；
(4)添加防腐剂(PC300)，添加比例为成品人血清或血浆体积的0.05％，混合均匀；
(5)分析质控品中各个过敏原的含量并定值；
(6)分装、贴标签。
将制备的质控品进行稳定性测试，见图2至4，各分析成分稳定，在室温下可稳定28天，在4℃下可稳定性3个月，在-20℃下可稳定12个月。
实施例2、对实施例1制备的质控品-Panel A进行性能测试。
1、瓶内重复性
(1)测试方法：对每瓶质控品-Panel A(Panel A-L、Panel A-M、Panel A-H)，分别连续测定10次，计算测定结果的平均值及标准差S1，按下列公式计算瓶内变异系数
(2)测试要求：CV≤10％。
(3)测试结果：
(4)结果描述：质控盘Panel-A瓶内重复性均≤10％；
2、瓶间差
(1)测试方法：取瓶内重复的质控品-Panel A(Panel A-L、Panel A-M、Panel A-H)及另外同批号的其他质控品-Panel A(Panel A-L、Panel A-M、Panel A-H)四瓶，对该五瓶质控品-Panel A(Panel A-L、Panel A-M、Panel A-H)，重复测定1次，按下面的公式计算测试结果的平均值和标准差S2；按下列各公式计算瓶间重复性CV％，所有参数的瓶间重复性结果均应符合要求。
公式1
公式2
公式3
公式4
当S2<S1时，令CV瓶间＝0
式中：
----平均值；
S----标准差；
n----测量次数；
xi----指定参数第i次测量值
(2)测试要求：CV≤15％.
(3)测试结果：
(4)结果描述：质控盘Panel-A瓶间差均≤15％；
3、批间差控制
(1)测试方法：分别取D1D2的三批试剂(Lot1、Lot2、Lot3)，测试质控品-Panel A(Panel A-L、Panel A-M、Panel A-H)，对该质控品-Panel A重复测定3次，以9次的数据计算批间差，批间差结果应符合要求。
(2)测试要求：批间差≤15％
(3)测试结果
(3.1)质控盘测试：
(3.2)临床血清测试：
(4)结果描述：通过质控盘Panel-A测试D1、D2批间差均≤15％，后用临床血清测试三批试剂均合格(运用线性回归判定，标准Slope：0.85＜k＜1.15、Intercept：-1＜b＜+1、R2＞0.9)，证明运用质控盘Panel-A能够有效的控制D1、D2试剂的批间差。
以上对本发明做了详尽的描述，其目的在于让熟悉此领域技术的人士能够了解本发明的内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明的精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种过敏原特异性IgE抗体质控品，其特征在于：所述的过敏原特异性IgE抗体质控品包括质控品L、质控品M和质控品H，所述的质控品L、所述的质控品M和所述的质控品H的原料组分分别包括基质以及至少两种过敏原，所述的质控品L、所述的质控品M和所述的质控品H中的过敏原的浓度不同。
2.根据权利要求1所述的过敏原特异性IgE抗体质控品，其特征在于：所述的质控品L、所述的质控品M和所述的质控品H中的过敏原的种类和个数相同。
3.根据权利要求1或2所述的过敏原特异性IgE抗体质控品，其特征在于：所述的过敏原为吸入过敏原或者食物过敏原。
4.根据权利要求3所述的过敏原特异性IgE抗体质控品，其特征在于：所述的吸入过敏原为屋尘螨和粉尘螨或者为猫毛、狗毛、蟑螂、交链孢霉、柳树、豚草、艾蒿、葎草中的两种或两种以上的组合；
所述的食物过敏原为牛奶、鳕鱼、小麦、花生、大豆、蟹、虾、牛肉、羊肉、鸡蛋中的两种或两种以上的组合。
5. 根据权利要求1所述的过敏原特异性IgE抗体质控品，其特征在于：所述的质控品L中每个过敏原的浓度独立地为0.2-0.5 IU/ mL；所述的质控品M中每个过敏原的浓度独立地为2-5 IU/ mL；所述的质控品H中每个过敏原的浓度独立地为30-40 IU/ mL。
6.根据权利要求1所述的过敏原特异性IgE抗体质控品，其特征在于：所述的过敏原为过敏原阳性质控血清。
7.根据权利要求1所述的过敏原特异性IgE抗体质控品，其特征在于：所述的基质为血清或血浆。
8.根据权利要求1所述的过敏原特异性IgE抗体质控品，其特征在于：所述的质控品L、所述的质控品M和所述的质控品H的原料组分分别还包括占所述的基质体积0.05%~0.1%的防腐剂。
9.根据权利要求8所述的过敏原特异性IgE抗体质控品，其特征在于：所述的防腐剂为PC300。
10.一种如权利要求1至9中任一项所述的过敏原特异性IgE抗体质控品的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）在成品人血清或血浆中加入氯化钙溶液后在36~38℃下孵育1.5~2.5h，以7000~9000转/分钟的速度进行离心，去除纤维蛋白质；
（2）添加过敏原阳性质控血清配制成相应的质控品；
（3）选择性地添加防腐剂，混合均匀；
（4）分析质控品中各个过敏原的含量并定值。
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