CN105092863A - 一种体外溶血试验配血方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种体外溶血试验配血方法，包括以下步骤：通过预处理得到供血者红细胞及供血者混合红细胞；制备阳性对照管，将患者血浆与供血者混合红细胞反应；制备阴性对照管；制备配血管，将患者血浆与各供血者红细胞分别反应，观察是否出现溶血；不溶血或轻度溶血的供血者可以供患者输注，中度溶血和重度溶血的供血者不能供患者输注。本发明的体外溶血试验配血方法，具有准确性高，结果稳定，操作简单的优点。

Description

一种体外溶血试验配血方法
技术领域
本发明涉及一种体外溶血试验配血方法。
背景技术
输血是临床上常用的治疗方法，也是挽救患者生命的紧急措施之一。输血时若血型不合，血型抗体或自身抗体会致敏或吸附在供血者红细胞上，在补体的参与下，供血者红细胞膜受损，细胞膜穿孔，红细胞内部的血红蛋白泄漏到细胞膜外，而出现溶血，从而产生一系列的症状，威胁患者生命。因此，输血前都需要进行血型检查，找出血型相合的供血者。
通常所称的“同型血”实际上是指ABO血型系统和Rh血型系统相同，但还存在其他多种血型系统。ABO血型系统和Rh血型系统相同时，其它红细胞血型系统未必相同，此时若进行输血，同样会导致抗体与相应抗原发生免疫反应，引起溶血性输血反应的发生。因此临床上不仅需要检查ABO血型系统和Rh血型系统，还需要对其他多种血型系统进行检测，仔细配血，避免输血后溶血的发生。
临床上配血时经常遇到疑难血型，如ABO亚型、红细胞抗原性减弱、新生儿抗体未形成、多发性骨髓瘤患者，或因反复、大量输血造成不规则抗体阳性等，尤其是溶血性贫血患者，这类疑难血型鉴定非常困难，需要通过卡式抗人球法，凝聚胺法，以及不规则抗体检测等多重方法，方可确定其准确血型。但当不规则抗体筛查结果出现Ⅰ.Ⅱ.Ⅲ.号细胞全部阳性、阳性结果程度较强、三管结果没有明显差异，且AC细胞也阳性，常规的检测方法无法确定准确血型时，目前临床上还没有有效的办法来找出合适的供血者。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种体外溶血试验配血方法，具有准确性高，结果稳定，操作简单的优点。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案之一是：
一种体外溶血试验配血方法，包括以下步骤：
1)预处理：按供血者数量取等量洁净试管，每管加入生理盐水，再分别加入上述供血者的压积红细胞，摇匀，配成红细胞悬液，向红细胞悬液中加入低离子液，摇匀，立即于800～1200g/min离心，弃上清液，下层即为供血者红细胞；另从每管各吸取等量供血者红细胞混合得到供血者混合红细胞；所述供血者与患者ABO同型且RhDCEce同型；所述生理盐水、供血者压积红细胞、低离子液之体积比为1100～1300:90～110:180～220；
2)阳性对照管制备：取洁净试管，加入患者首次配血血浆，再加入步骤1)中得到的供血者混合红细胞，混匀后置35～38℃孵育25～35min，取出800～1200g/min离心，弃上清液，加入体外溶血试验洗涤液，混匀，再次800～1200g/min离心，弃上清液，加入补体液，混匀，置35～38℃孵育，2.5～3.5h后取出再次混匀，继续置35～38℃孵育，孵育共7～19h后，出现溶血则表示阳性对照管制备成功；所述患者首次配血血浆为患者入院后未经临床治疗前的血浆；所述患者首次配血血浆、供血者混合红细胞、体外溶血试验洗涤液、补体液之体积比为250～350:20～30:90～110:250～350；
3)阴性对照管制备：取洁净试管，加入生理盐水，再加入步骤1)中得到的供血者混合红细胞，混匀后置35～38℃孵育25～35min，取出800～1200g/min离心，弃上清液，加入体外溶血试验洗涤液，混匀，再次800～1200g/min离心，弃上清液，加入补体液，混匀，置35～38℃孵育，2.5～3.5h后取出再次混匀，继续置35～38℃孵育，孵育共7～19h后，不出现溶血则表示阴性对照管制备成功；所述生理盐水：供血者混合红细胞：体外溶血试验洗涤液：补体液之体积比为250～350:20～30:90～110:250～350；
4)配血管的制备：按供血者数量取等量洁净试管，标号，每管加入患者血浆，再分别加入步骤1)中得到的供血者红细胞，混匀后置35～38℃孵育25～35min，取出800～1200g/min离心，弃上清液，加入体外溶血试验洗涤液，混匀，800～1200g/min离心，弃上清液，加入补体液，混匀，置35～38℃孵育，2.5～3.5h后取出再次混匀，继续置35～38℃孵育，孵育共7～19h后，不摇动，800～1200g/min离心，观察是否出现溶血；不溶血或轻度溶血的供血者可以供患者输注，中度溶血和重度溶血的供血者不能供患者输注；所述患者血浆、供血者红细胞、体外溶血试验洗涤液、补体液之体积比为250～350:20～30:90～110:250～350。
一实施例中：包括以下步骤：
1)预处理：按供血者数量取等量洁净试管，每管加入生理盐水，再分别加入上述供血者的压积红细胞，摇匀，配成红细胞悬液，向红细胞悬液中加入低离子液，摇匀，立即于1000g/min离心60s，弃上清液，下层即为供血者红细胞；另从每管各吸取等量供血者红细胞混合得到供血者混合红细胞；所述供血者与患者ABO同型且RhDCEce同型；所述生理盐水、供血者压积红细胞、低离子液之体积比为1200:100:200；
2)阳性对照管制备：取洁净试管，加入患者首次配血血浆，再加入步骤1)中得到的供血者混合红细胞，混匀后置37℃孵育30min，取出1000g/min离心30s，弃上清液，加入体外溶血试验洗涤液，混匀，再次1000g/min离心30s，弃上清液，加入补体液，混匀，置37℃孵育，3h后取出再次混匀，继续置37℃孵育，孵育共8～18h后，出现溶血则表示阳性对照管制备成功；所述患者首次配血血浆为患者入院后未经临床治疗前的血浆；所述患者首次配血血浆、供血者混合红细胞、体外溶血试验洗涤液、补体液之体积比为300:25:100:300；
3)阴性对照管制备：取洁净试管，加入生理盐水，再加入步骤1)中得到的供血者混合红细胞，混匀后置37℃孵育30min，取出1000g/min离心30s，弃上清液，加入体外溶血试验洗涤液，混匀，再次1000g/min离心30s，弃上清液，加入补体液，混匀，置37℃孵育，3h后取出再次混匀，继续置37℃孵育，孵育共8～18h后，不溶血则表示阴性对照管制备成功；所述生理盐水：供血者混合红细胞：体外溶血试验洗涤液：补体液之体积比为300:25:100:300；
4)配血管的制备：按供血者数量取等量洁净试管，标号，每管加入患者血浆，再分别加入步骤1)中得到的供血者红细胞，混匀后置37℃孵育30min，取出1000g/min离心30s，弃上清液，加入体外溶血试验洗涤液，混匀，1000g/min离心1min，弃上清液，加入补体液，混匀，置37℃孵育，3h后取出再次混匀，继续置37℃孵育，孵育共8～18h后，不摇动，1000g/min离心30s，观察是否出现溶血；不溶血或轻度溶血的供血者可以供患者输注，中度溶血和重度溶血的供血者不能供患者输注；所述患者血浆、供血者红细胞、体外溶血试验洗涤液、补体液之体积比为300:25:100:300。
一实施例中：若该患者具有IgM抗体，则所述步骤2)中，在加入步骤1)中得到的供血者混合红细胞，混匀后置35～38℃孵育25～35min后，再置3～5℃吸收25～35min；所述步骤4)中，在加入步骤1)中得到的供血者红细胞，混匀后置35～38℃孵育25～35min后，再置3～5℃吸收25～35min。
一实施例中：所述体外溶血试验洗涤液的组成为：枸橼酸1.6～1.7g/L，枸橼酸钠13～14g/L，磷酸二氢钠1.0～1.3g/L，腺嘌呤0.1～0.2g/L，氯化钠4～5g/L，葡萄糖15～17g/L，溶剂为水。
一实施例中：所述补体液为健康AB型男性血清，且该血清中补体浓度≥1.5g/L，置-20～-16℃贮存，使用前37℃孵育溶解并混匀，并于1h内使用。
一实施例中：所述供血者为6～8位。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案之二是：
一种体外溶血试验洗涤液，所述体外溶血试验洗涤液的组成为：枸橼酸1.6～1.7g/L，枸橼酸钠13～14g/L，磷酸二氢钠1.0～1.3g/L，腺嘌呤0.1～0.2g/L，氯化钠4～5g/L，葡萄糖15～17g/L，溶剂为水。
一实施例中：所述体外溶血试验洗涤液的组成为：枸橼酸按C6H8O7.H2O计1.64g/L，枸橼酸钠按C6H5Na3O7.2H2O计13.2g/L，磷酸二氢钠按NaH2PO4.H2O计1.1g/L，腺嘌呤0.14g/L，氯化钠4.5g/L，葡萄糖按C6H12O6.H2O计16g/L，溶剂为水。
本技术方案与背景技术相比，它具有如下优点：
1.本发明的体外溶血试验配血方法，设置了阳性对照管，阳性对照管内设有多位供血者的混合红细胞，与患者血浆内的抗体混合孵育8～18h后，一定要出现溶血才表示阳性对照管设置成功，这是由于IgG抗体与抗原反应时间较长，若孵育时间不够，有时本应出现溶血的配血管却因为IgG抗体与抗原还没有反应从而没有出现溶血，如果这时候就认为配血成功，给患者输血的话，同样会引起溶血性输血反应；而本发明通过阳性对照管的设置，当阳性对照管出现溶血后，与之平行操作的其他配血管若不出现溶血，这就可以确保不出现溶血的配血管中确实没有与患者血型对应的抗体，而不是由于配血管中患者血浆中IgG抗体与供血者红细胞膜上的抗原还没有发生反应。通过供血者混合红细胞的阳性对照管的设置，可以使试验结果更为准确。
2.传统的配血试验方法，阴性对照管往往也会出现少量的溶血，这是由于体外的环境不如体内稳定，而且在配血过程中，在反复的离心、孵育、移液枪吹打等情况下，红细胞膜的稳定性大大降低，难免会发生细胞膜穿孔或破裂，导致血红蛋白泄露，从而出现溶血，阴性对照管出现溶血，会造成对配血管溶血情况难以判断，降低了配血的准确性。而本发明的体外溶血试验洗涤液，能够提供红细胞代谢所必需的物质，保护红细胞细胞膜的稳定性，采用了该体外溶血试验洗涤液后，阴性对照管不会发生溶血，从而保证配血管中出现的溶血确实是因为抗体与供血者红细胞膜上抗原反应引起的，而不是因为红细胞膜稳定性差引起的；通过该体外溶血试验洗涤液，能够使反应格局更清楚，进一步提高了配血试验的准确性与结果的稳定性。
3.本发明的体外溶血试验配血方法中，患者血浆与供血者红细胞的比例较高，可以充分放大对较弱抗体的敏感性，提高配血的准确度。
4.疑难配血患者，如ABO亚型、多发性骨髓瘤患者等，尤其是溶血性贫血患者，在入院时往往都有非常严重的黄疸或溶血，常规配血方法中上清液由于溶血的原因会带有黄色或红色，难以准确判断是否溶血，本发明的体外溶血试验配血方法，通过反复多次离心，可以充分去除上清液中的黄色或红色，避免了黄疸或溶血对配血试验造成的干扰。
5.本发明采用的各种试剂均为常规试剂，且操作简单，适用面广，有利于大规模推广使用。
具体实施方式
下面通过实施例具体说明本发明的内容：
实施例1
患者，男性，25岁,因贫血入院，有输血史，入院后查血Hb为38g/L,血型B型，Rh阳性；卡式抗人球法，凝聚胺法配血时发现凝集反应，不规则抗体筛查Ⅰ.Ⅱ.Ⅲ.号细胞全部阳性。
1)预处理：与患者ABO同型且RhDCEce同型的供血者共8名；取8根洁净试管，每管加入生理盐水1200μl，再分别加入8位供血者的压积红细胞各100μl，摇匀，配成红细胞悬液，迅速向红细胞悬液中加入低离子液(购自合肥天一)200μl，摇匀，立即于1000g/min离心60s，弃上清液，下层即为供血者红细胞，留100μl备用；另从每管各吸取50μl供血者红细胞混合得到供血者混合红细胞；
2)阳性对照管制备：取洁净试管，标上“阳性”，加入患者首次配血血浆300μl，再加入步骤1)中得到的供血者混合红细胞25μl，混匀后置37℃孵育30min，再置4℃吸收30min，取出1000g/min离心30s，弃上清液，加入体外溶血试验洗涤液100μl，混匀，再次1000g/min离心30s，弃上清液，加入补体液300μl，混匀，加盖置37℃孵育，3h后取出置于振荡器上振动30s以再次混匀，继续置37℃孵育，孵育共8～18h后，出现溶血则表示阳性对照管制备成功；所述患者首次配血血浆为患者入院后未经临床治疗前的血浆，由于经过临床治疗后患者血浆中的成分有可能发生改变，因此，采用首次配血血浆，可以排除药物等的干扰，获得最准确配血结果；由于IgG抗体与抗原反应时间较长，若反应时间不够，有时本应出现溶血的却没有出现溶血，通过阳性对照管的设置，可以确保患者血浆中IgG抗体与供血者红细胞膜上的抗原发生了反应；
3)阴性对照管制备：取洁净试管，标上“阴性”，加入生理盐水300μl，再加入步骤1)中得到的供血者混合红细胞25μl，混匀后置37℃孵育30min，取出1000g/min离心30s，弃上清液，加入体外溶血试验洗涤液100μl，混匀，再次1000g/min离心30s，弃上清液，下层留25μl备用，加入补体液300μl，混匀，加盖置37℃孵育，3h后取出置于振荡器上振动30s以再次混匀，继续置37℃孵育，孵育共8～18h后，不溶血则表示阴性对照管制备成功；
4)配血管的制备：取8根洁净试管，标号，每管加入患者血浆300μl，再分别加入步骤1)中得到的供血者红细胞各25μl，混匀后置37℃孵育30min，再置4℃吸收30min，取出1000g/min离心30s，弃上清液，加入体外溶血试验洗涤液100μl，混匀，1000g/min离心1min，弃上清液，加入补体液300μl，混匀，加盖置37℃孵育，3h后取出置于振荡器上振动30s以再次混匀，继续置37℃孵育，孵育共8～18h后，不摇动，1000g/min离心30s，观察是否出现溶血；
溶血判断方法为；不溶血：离心后上清液为浅黄色；轻度溶血：离心后上清液为微红色；中度溶血：离心后上清液为浅红色；重度溶血：离心后上清液为深红色；不溶血或轻度溶血的供血者可以供患者输注，中度溶血和重度溶血的供血者不能供患者输注。
经观察，8管配血管中，有1管不溶血，1管出现轻度溶血，可供患者输注。
本实施例之中，由于患者具有IgM抗体，由于IgM抗体在4℃下与抗原反应的效率最高，因此在所述步骤2)中，在加入步骤1)中得到的供血者混合红细胞，混匀后置37℃孵育30min后，再置4℃吸收30min；所述步骤4)中，在加入步骤1)中得到的供血者红细胞，混匀后置37℃孵育30min后，再置4℃吸收30min，这样，在4℃吸收30min，可以充分促进IgM抗体与抗原的反应；若患者不具有IgM抗体，则不需要额外在4℃吸收30min。
本实施例之中，所述体外溶血试验洗涤液的组成为：枸橼酸1.6～1.7g/L，枸橼酸钠13～14g/L，磷酸二氢钠1.0～1.3g/L，腺嘌呤0.1～0.2g/L，氯化钠4～5g/L，葡萄糖15～17g/L，溶剂为水；优选地，枸橼酸按C6H8O7.H2O计1.64g/L，枸橼酸钠按C6H5Na3O7.2H2O计13.2g/L，磷酸二氢钠按NaH2PO4.H2O计1.1g/L，腺嘌呤0.14g/L，氯化钠4.5g/L，葡萄糖按C6H12O6.H2O计16g/L，溶剂为水；该体外溶血试验洗涤液能够提供红细胞代谢所必需的物质，保护红细胞细胞膜的稳定性，能够保证出现的溶血是因为抗体与供血者红细胞膜上抗原反应引起的，而不是因为红细胞膜稳定性差引起的。
本实施例之中，所述补体液为健康AB型男性血清，且该血清中补体浓度≥1.5g/L，置-18℃贮存，使用前37℃孵育溶解并混匀，并于1h内使用。补体存在的情况下，抗体与供血者红细胞膜上的抗原反应，导致红细胞膜受损，细胞膜穿孔，红细胞内部的血红蛋白泄漏到细胞膜外，而出现溶血。AB型男性血清中不含有抗A和抗B抗体，同时可以避免女性血清中因妊娠产生的不规则抗体对检测结果造成的干扰。
实施例2
患者，女性，29岁,有妊娠史，入院前3月出现无明显诱因的头晕、心悸、乏力、黄疸、肝脾肿大等症状，入院后查血Hb为26g/L,血型A型，Rh阳性，经诊断为溶血性贫血；患者不含有IgM抗体。
1)预处理：与患者ABO同型且RhDCEce同型的供血者共6名；取6根洁净试管，每管加入生理盐水1200μl，再分别加入6位供血者的压积红细胞各100μl，摇匀，配成红细胞悬液，迅速向红细胞悬液中加入低离子液(购自合肥天一)200μl，摇匀，立即于1000g/min离心60s，弃上清液，下层即为供血者红细胞，留100μl备用；另从每管各吸取50μl供血者红细胞混合得到供血者混合红细胞；
2)阳性对照管制备：取洁净试管，标上“阳性”，加入患者首次配血血浆300μl，再加入步骤1)中得到的供血者混合红细胞25μl，混匀后置37℃孵育30min，取出1000g/min离心30s，弃上清液，加入体外溶血试验洗涤液100μl，混匀，再次1000g/min离心30s，弃上清液，加入补体液300μl，混匀，加盖置37℃孵育，3h后取出置于振荡器上振动30s以再次混匀，继续置37℃孵育，孵育共8～18h后，出现溶血则表示阳性对照管制备成功；
3)阴性对照管制备：取洁净试管，标上“阴性”，加入生理盐水300μl，再加入步骤1)中得到的供血者混合红细胞25μl，混匀后置37℃孵育30min，取出1000g/min离心30s，弃上清液，加入体外溶血试验洗涤液100μl，混匀，再次1000g/min离心30s，弃上清液，下层留25μl备用，加入补体液300μl，混匀，加盖置37℃孵育，3h后取出置于振荡器上振动30s以再次混匀，继续置37℃孵育，孵育共8～18h后，不溶血则表示阴性对照管制备成功；
4)配血管的制备：取6根洁净试管，标号，每管加入患者血浆300μl，再分别加入步骤1)中得到的供血者红细胞各25μl，混匀后置37℃孵育30min，取出1000g/min离心30s，弃上清液，加入体外溶血试验洗涤液100μl，混匀，1000g/min离心1min，弃上清液，加入补体液300μl，混匀，加盖置37℃孵育，3h后取出置于振荡器上振动30s以再次混匀，继续置37℃孵育，孵育共8～18h后，不摇动，1000g/min离心30s，观察是否出现溶血；
溶血判断方法为；不溶血：离心后上清液为浅黄色；轻度溶血：离心后上清液为微红色；中度溶血：离心后上清液为浅红色；重度溶血：离心后上清液为深红色；不溶血或轻度溶血的供血者可以供患者输注，中度溶血和重度溶血的供血者不能供患者输注。
经观察，6管配血管中，有1管不溶血，可供患者输注。
本实施例之中，所述体外溶血试验洗涤液的组成为：枸橼酸1.6～1.7g/L，枸橼酸钠13～14g/L，磷酸二氢钠1.0～1.3g/L，腺嘌呤0.1～0.2g/L，氯化钠4～5g/L，葡萄糖15～17g/L，溶剂为水；优选地，枸橼酸按C6H8O7.H2O计1.64g/L，枸橼酸钠按C6H5Na3O7.2H2O计13.2g/L，磷酸二氢钠按NaH2PO4.H2O计1.1g/L，腺嘌呤0.14g/L，氯化钠4.5g/L，葡萄糖按C6H12O6.H2O计16g/L，溶剂为水。
本实施例之中，所述补体液为健康AB型男性血清，且该血清中补体浓度≥1.5g/L，置-18℃贮存，使用前37℃孵育溶解并混匀，并于1h内使用。
本领域普通技术人员可知，当本发明的技术参数在如下范围内变化时，可预期得到与上述实施例相同或相近的结果：
一种体外溶血试验配血方法，包括以下步骤：
1)预处理：按供血者数量取等量洁净试管，每管加入生理盐水，再分别加入上述供血者的压积红细胞，摇匀，配成红细胞悬液，向红细胞悬液中加入低离子液，摇匀，立即于800～1200g/min离心，弃上清液，下层即为供血者红细胞；另从每管各吸取等量供血者红细胞混合得到供血者混合红细胞；所述供血者与患者ABO同型且RhDCEce同型；所述生理盐水、供血者压积红细胞、低离子液之体积比为1100～1300:90～110:180～220；
2)阳性对照管制备：取洁净试管，加入患者首次配血血浆，再加入步骤1)中得到的供血者混合红细胞，混匀后置35～38℃孵育25～35min，取出800～1200g/min离心，弃上清液，加入体外溶血试验洗涤液，混匀，再次800～1200g/min离心，弃上清液，加入补体液，混匀，置35～38℃孵育，2.5～3.5h后取出再次混匀，继续置35～38℃孵育，孵育共7～19h后，出现溶血则表示阳性对照管制备成功；所述患者首次配血血浆为患者入院后未经临床治疗前的血浆；所述患者首次配血血浆、供血者混合红细胞、体外溶血试验洗涤液、补体液之体积比为250～350:20～30:90～110:250～350；
3)阴性对照管制备：取洁净试管，加入生理盐水，再加入步骤1)中得到的供血者混合红细胞，混匀后置35～38℃孵育25～35min，取出800～1200g/min离心，弃上清液，加入体外溶血试验洗涤液，混匀，再次800～1200g/min离心，弃上清液，加入补体液，混匀，置35～38℃孵育，2.5～3.5h后取出再次混匀，继续置35～38℃孵育，孵育共7～19h后，不出现溶血则表示阴性对照管制备成功；所述生理盐水：供血者混合红细胞：体外溶血试验洗涤液：补体液之体积比为250～350:20～30:90～110:250～350；
4)配血管的制备：按供血者数量取等量洁净试管，标号，每管加入患者血浆，再分别加入步骤1)中得到的供血者红细胞，混匀后置35～38℃孵育25～35min，取出800～1200g/min离心，弃上清液，加入体外溶血试验洗涤液，混匀，800～1200g/min离心，弃上清液，加入补体液，混匀，置35～38℃孵育，2.5～3.5h后取出再次混匀，继续置35～38℃孵育，孵育共7～19h后，不摇动，800～1200g/min离心，观察是否出现溶血；不溶血或轻度溶血的供血者可以供患者输注，中度溶血和重度溶血的供血者不能供患者输注；所述患者血浆、供血者红细胞、体外溶血试验洗涤液、补体液之体积比为250～350:20～30:90～110:250～350。
若该患者具有IgM抗体，则所述步骤2)中，在加入步骤1)中得到的供血者混合红细胞，混匀后置35～38℃孵育25～35min后，再置3～5℃吸收25～35min；所述步骤4)中，在加入步骤1)中得到的供血者红细胞，混匀后置35～38℃孵育25～35min后，再置3～5℃吸收25～35min。
所述体外溶血试验洗涤液的组成为：枸橼酸1.6～1.7g/L，枸橼酸钠13～14g/L，磷酸二氢钠1.0～1.3g/L，腺嘌呤0.1～0.2g/L，氯化钠4～5g/L，葡萄糖15～17g/L，溶剂为水。
所述补体液为健康AB型男性血清，且该血清中补体浓度≥1.5g/L，置-20～-16℃贮存，使用前37℃孵育溶解并混匀，并于1h内使用。
所述供血者为6～8位，该供血者数量经过统计学考察，为兼顾配血试验便利性与配血成功率的最佳选择，既方便操作，也能保证6～8位供血者中能有至少1位配血成功。
所述步骤4)中，观察是否出现溶血的判断方法为：不溶血：离心后上清液为浅黄色；轻度溶血：离心后上清液为微红色；中度溶血：离心后上清液为浅红色；重度溶血：离心后上清液为深红色。
以上所述，仅为本发明较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。

Claims (8)

1.一种体外溶血试验配血方法，其特征在于：包括以下步骤：
1）预处理：按供血者数量取等量洁净试管，每管加入生理盐水，再分别加入上述供血者的压积红细胞，摇匀，配成红细胞悬液，向红细胞悬液中加入低离子液，摇匀，立即于800～1200g/min离心，弃上清液，下层即为供血者红细胞；另从每管各吸取等量供血者红细胞混合得到供血者混合红细胞；所述供血者与患者ABO同型且RhDCEce同型；所述生理盐水、供血者压积红细胞、低离子液之体积比为1100～1300:90～110:180～220；
2）阳性对照管制备：取洁净试管，加入患者首次配血血浆，再加入步骤1）中得到的供血者混合红细胞，混匀后置35～38℃孵育25～35min，取出800～1200g/min离心，弃上清液，加入体外溶血试验洗涤液，混匀，再次800～1200g/min离心，弃上清液，加入补体液，混匀，置35～38℃孵育，2.5～3.5h后取出再次混匀，继续置35～38℃孵育，孵育共7～19h后，出现溶血则表示阳性对照管制备成功；所述患者首次配血血浆为患者入院后未经临床治疗前的血浆；所述患者首次配血血浆、供血者混合红细胞、体外溶血试验洗涤液、补体液之体积比为250～350:20～30:90～110:250～350；
3）阴性对照管制备：取洁净试管，加入生理盐水，再加入步骤1）中得到的供血者混合红细胞，混匀后置35～38℃孵育25～35min，取出800～1200g/min离心，弃上清液，加入体外溶血试验洗涤液，混匀，再次800～1200g/min离心，弃上清液，加入补体液，混匀，置35～38℃孵育，2.5～3.5h后取出再次混匀，继续置35～38℃孵育，孵育共7～19h后，不出现溶血则表示阴性对照管制备成功；所述生理盐水：供血者混合红细胞：体外溶血试验洗涤液：补体液之体积比为250～350:20～30:90～110:250～350；
4）配血管的制备：按供血者数量取等量洁净试管，标号，每管加入患者血浆，再分别加入步骤1）中得到的供血者红细胞，混匀后置35～38℃孵育25～35min，取出800～1200g/min离心，弃上清液，加入体外溶血试验洗涤液，混匀，800～1200g/min离心，弃上清液，加入补体液，混匀，置35～38℃孵育，2.5～3.5h后取出再次混匀，继续置35～38℃孵育，孵育共7～19h后，不摇动，800～1200g/min离心，观察是否出现溶血；不溶血或轻度溶血的供血者可以供患者输注，中度溶血和重度溶血的供血者不能供患者输注；所述患者血浆、供血者红细胞、体外溶血试验洗涤液、补体液之体积比为250～350:20～30:90～110:250～350。
2.根据权利要求1所述的一种体外溶血试验配血方法，其特征在于：包括以下步骤：
1）预处理：按供血者数量取等量洁净试管，每管加入生理盐水，再分别加入上述供血者的压积红细胞，摇匀，配成红细胞悬液，向红细胞悬液中加入低离子液，摇匀，立即于1000g/min离心60s，弃上清液，下层即为供血者红细胞；另从每管各吸取等量供血者红细胞混合得到供血者混合红细胞；所述供血者与患者ABO同型且RhDCEce同型；所述生理盐水、供血者压积红细胞、低离子液之体积比为1200:100:200；
2）阳性对照管制备：取洁净试管，加入患者首次配血血浆，再加入步骤1）中得到的供血者混合红细胞，混匀后置37℃孵育30min，取出1000g/min离心30s，弃上清液，加入体外溶血试验洗涤液，混匀，再次1000g/min离心30s，弃上清液，加入补体液，混匀，置37℃孵育，3h后取出再次混匀，继续置37℃孵育，孵育共8～18h后，出现溶血则表示阳性对照管制备成功；所述患者首次配血血浆为患者入院后未经临床治疗前的血浆；所述患者首次配血血浆、供血者混合红细胞、体外溶血试验洗涤液、补体液之体积比为300:25:100:300；
3）阴性对照管制备：取洁净试管，加入生理盐水，再加入步骤1）中得到的供血者混合红细胞，混匀后置37℃孵育30min，取出1000g/min离心30s，弃上清液，加入体外溶血试验洗涤液，混匀，再次1000g/min离心30s，弃上清液，加入补体液，混匀，置37℃孵育，3h后取出再次混匀，继续置37℃孵育，孵育共8～18h后，不溶血则表示阴性对照管制备成功；所述生理盐水：供血者混合红细胞：体外溶血试验洗涤液：补体液之体积比为300:25:100:300；
4）配血管的制备：按供血者数量取等量洁净试管，标号，每管加入患者血浆，再分别加入步骤1）中得到的供血者红细胞，混匀后置37℃孵育30min，取出1000g/min离心30s，弃上清液，加入体外溶血试验洗涤液，混匀，1000g/min离心1min，弃上清液，加入补体液，混匀，置37℃孵育，3h后取出再次混匀，继续置37℃孵育，孵育共8～18h后，不摇动，1000g/min离心30s，观察是否出现溶血；不溶血或轻度溶血的供血者可以供患者输注，中度溶血和重度溶血的供血者不能供患者输注；所述患者血浆、供血者红细胞、体外溶血试验洗涤液、补体液之体积比为300:25:100:300。
3.根据权利要求1所述的一种体外溶血试验配血方法，其特征在于：若该患者具有IgM抗体，则所述步骤2）中，在加入步骤1）中得到的供血者混合红细胞，混匀后置35～38℃孵育25～35min后，再置3～5℃吸收25～35min；所述步骤4）中，在加入步骤1）中得到的供血者红细胞，混匀后置35～38℃孵育25～35min后，再置3～5℃吸收25～35min。
4.根据权利要求1或2所述的一种体外溶血试验配血方法，其特征在于：所述体外溶血试验洗涤液的组成为：枸橼酸1.6～1.7g/L，枸橼酸钠13～14g/L，磷酸二氢钠1.0～1.3g/L，腺嘌呤0.1～0.2g/L，氯化钠4～5g/L，葡萄糖15～17g/L，溶剂为水。
5.根据权利要求1或2所述的一种体外溶血试验配血方法，其特征在于：所述补体液为健康AB型男性血清，且该血清中补体浓度≥1.5g/L，置-20～-16℃贮存，使用前37℃孵育溶解并混匀，并于1h内使用。
6.根据权利要求1或2所述的一种体外溶血试验配血方法，其特征在于：所述供血者为6～8位。
7.一种体外溶血试验洗涤液，其特征在于：所述体外溶血试验洗涤液的组成为：枸橼酸1.6～1.7g/L，枸橼酸钠13～14g/L，磷酸二氢钠1.0～1.3g/L，腺嘌呤0.1～0.2g/L，氯化钠4～5g/L，葡萄糖15～17g/L，溶剂为水。
8.根据权利要求7所述的一种体外溶血试验洗涤液，其特征在于：所述体外溶血试验洗涤液的组成为：枸橼酸按C6H8O7.H2O计1.64g/L，枸橼酸钠按C6H5Na3O7.2H2O计13.2g/L，磷酸二氢钠按NaH2PO4.H2O计1.1g/L，腺嘌呤0.14g/L，氯化钠4.5g/L，葡萄糖按C6H12O6.H2O计16g/L，溶剂为水。
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