CN111077324A - 一种补体介导下的abo血型鉴定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种补体介导下的ABO血型鉴定方法，属于利用可见光，通过测试反应的结果产生颜色变化来测试材料的方法，属于免疫分析技术领域。本发明的技术方案是：抗‑A、抗‑B血型试剂中含有补体C3C试剂，当抗‑A、抗‑B抗体和红细胞在液体介质中发生抗原‑抗体反应时，激活补体C3C形成免疫复合物，致使红细胞破裂，若出现溶血现象，表明有抗原‑抗体反应，可判断为阳性，本发明方法是以溶血反应判断为阳性的，溶血较凝集更容易判断，灵敏度更高。

Description

一种补体介导下的ABO血型鉴定方法
技术领域
本发明属于免疫技术领域；或是利用可见光，通过测试反应的结果产生颜色变化来测试材料的方法，特别是涉及一种补体介导下的ABO血型鉴定方法。
背景技术
根据红细胞膜表面有无A抗原和B抗原，将红细胞ABO血型分为A型、B型、AB型及O型4种。血液凝集试验是指抗体和红细胞在液体介质中发生肉眼可见的凝集或溶血反应。通过红细胞凝集试验，进行正、反定型，从而准确鉴定ABO血型。正定型，是用抗-A和抗-B血型定型试剂来测定红细胞表面有无相应的A抗原或B抗原。反定型，是用A1型和B型红细胞试剂来测定血清中有无相应的抗-A或抗-B抗体。根据受检者红细胞表达的A、B抗原及血清(或血浆)中的抗-A、抗-B抗体情况判断ABO血型。常见检测方法包括:玻片法、试管法、微板法、微柱凝集法等。常用方法：1.玻片法 利用商品化IgM抗-A、抗-B血型定型试剂鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型。玻片法不适用于ABO反定型鉴定，只能用于ABO血型正定型初筛，不能出具正式检验报告。2.试管法 利用商品化IgM抗-A、抗-B血型定型试剂鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO血型的试剂红细胞鉴定同一标本血清(或血浆)中的抗-A和抗-B抗体即反定型。正、反定型结果一致方可确定受检标本ABO血型，若正、反定型结果不一致，需增加辅助试验以确定ABO血型。3.微柱凝集法 微柱凝集免疫分析技术是利用微柱内介质的分子筛效应来区分凝集反应中游离红细胞和凝集红细胞的技术，ABO血型鉴定微柱中分别充填IgM类抗-A、抗-B单克隆抗体试剂，用于检测红细胞上A、B抗原。微柱内的介质起到分子筛作用，分子筛在一定离心力的作用下只允许游离红细胞通过，沉淀于底部，即为阴性反应；凝集的红细胞因体积大于分子筛孔径而被阻滞，不能通过微柱介质层，滞留于微柱介质的顶部或介质的中间，即为阳性反应。
在前述的三种测定方法中，血型的判定是以红细胞凝固为判断依据的，进行血型定型实验时，常常出现弱凝集，致使血型无法正确判断的现象。
发明内容：
为了解决现有技术中血型判断出现出现弱凝集，致使血型无法正确判断的现象,本发明提供一种补体介导下的ABO血型鉴定方法，以出现溶血现象为判断阳性反应的方法，能够提高血型判断的灵敏度。若出现溶血现象，表明存在抗原抗体反应并有补体激活现象发生。
采用的技术方案是：抗-A、抗-B血型试剂中含有补体C3C试剂，当抗-A、抗-B抗体和红细胞在液体介质中发生抗原-抗体反应时，激活补体C3C形成免疫复合物，致使红细胞破裂，造成溶血，若出现溶血现象，表明有抗原-抗体反应，可判断为阳性。
本发明与现有技术相比有如下优点：原有的血型鉴定方法是以红细胞凝集为判断的，本发明方法是以溶血反应判断为阳性的，溶血较凝集更容易判断，灵敏度更高。
具体实施方式：
下面通过采用一种补体介导下的ABO血型鉴定方法实施例对本发明做进一步详细说明。
实施例1
试剂的组成：
a. 试剂来源：抗A、B血型定型单克隆抗体试剂由上海血液生物医药有限责任公司生产，按照《中华人民共和国药典》（2015 年版）三部要求，对抗 A 抗 B 血型定型试剂国家参考品的亲和力的效价 1:256以上，作为补体来源的人血清冻干粉（0.2g,必须于-70至-20℃保存）由欧蒙医学诊断（中国）有限公司提供。
b.试剂的配置：将补体来源的人血清冻干粉用100ｕl蒸馏水溶解20分钟，分别加入抗A、B血型定型单克隆抗体试剂，20分钟平衡后备用。
c.测定方法： 1.取两支试管，做好标记，分别向试管中加入1滴抗-A、抗-B血型定型试剂；2.向标记试管中各加入1滴3%-5%被检红细胞悬液；3.轻轻混合试管内容物，以1000g，离心15s；4.将试管从离心机中取出，拿成锐角，缓慢倾斜，使液体反复冲刷细胞扣，当红细胞不再附着在试管壁上时，继续缓慢地倾斜和振摇，观察试管内是否出现溶血现象，如溶血，即为阳性反应。
实施例2
试剂的组成：
a.试剂来源：抗A、B血型定型单克隆抗体试剂由上海血液生物医药有限责任公司生产。
b.测定方法： 1.取两支试管，做好标记，分别向试管中加入1滴抗-A、抗-B血型定型试剂；2.向标记试管中各加入1滴3%-5%被检红细胞悬液；3.轻轻混合试管内容物，以1000g，离心15s；4.将试管从离心机中取出，拿成锐角，缓慢倾斜，使液体反复冲刷细胞扣，当红细胞不再附着在试管壁上时，继续缓慢地倾斜和振摇，观察试管内是否出现形成均匀的红细胞悬液或凝集块；5.怀疑为弱凝集的应用显微镜下观察结果，记录观察到的凝集强度，通过ABO反定型试验进一步验证正定型结果。
实施例3
1.检测方法：采用实施例1和实施例2检测我院体检人员136例血型，比较两种方法测定的血型差异性。
2.结果
2.1 采用实施例1和实施例2分别测定血型结果比较如表1：
表1 本两种方法血型结果比较
Figure DEST_PATH_IMAGE001
组别 例数 A型 B型 O型 AB型
Figure 472204DEST_PATH_IMAGE002
实施例1 136 51 45 31 9
实施例2 136 51 45 31 9
Figure 54363DEST_PATH_IMAGE003
通过表1分析得知：本发明方法与原有的推荐方法结果一致，说明本发明的补体介导下的ABO血型鉴定方法可以应用于血型鉴定。
经过以上统计学分析可看出，原有的血型鉴定方法是以红细胞凝集为判断的，本发明方法是以溶血反应判断为阳性的，溶血较凝集更容易判断，灵敏度更高。

Claims (3)

1.一种补体介导下的ABO血型鉴定方法，属于免疫分析技术领域，本发明的技术方案是：抗-A、抗-B血型试剂中含有补体C3C试剂，当抗-A、抗-B抗体和红细胞在液体介质中发生抗原-抗体反应时，激活补体C3C形成免疫复合物，致使红细胞破裂，若出现溶血现象，表明有抗原-抗体反应，可判断为阳性。
2.根据权利要求1所述的一种补体介导下的ABO血型鉴定方法，其特征在于，本发明方法是以溶血反应判断为阳性的，溶血较凝集更容易判断，灵敏度更高。
3.根据权利要求1所述的一种补体介导下的ABO血型鉴定方法，其特征在于抗-A、抗-B血型试剂效价不低于1:128，试剂中补体C3C试剂含量为10～30g/L。
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