CN108802402A - 一种快速鉴别呼吸道感染类型的试剂盒及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种快速鉴别呼吸道感染类型的试剂盒及其应用，属于试剂盒领域。该试剂盒，包括基板和试纸条，所述基板内开设有至少两条微流体通道和加样孔，至少两条所述微流体通道的一端均与所述加样孔相连通，所述试纸条嵌设于所述微流体通道内。这种试剂盒可同时检测数类感染指标，具有方便快捷、特异敏感、稳定性强、不需要特殊设备和仪器、结果判断直观等优点，可以用于快速鉴别呼吸道细菌、支原体、衣原体和病毒的感染类型。

Description

一种快速鉴别呼吸道感染类型的试剂盒及其应用
技术领域
本发明涉及试剂盒领域，具体而言，涉及一种快速鉴别呼吸道感染类型的试剂盒及其应用。
背景技术
呼吸道感染是一类种类繁多的常见疾病，可引起不同程度的症状，可分为细菌性呼吸道感染、病毒性呼吸道感染和支原体、衣原体呼吸道感染。对于不同类型的呼吸道感染需要截然不同的治疗方法，因此鉴别呼吸道感染的类型尤为重要。
目前临床主要通过对CRP、PCT、中性粒细胞百分比等指标的判断和分泌物的培养结果来判断呼吸道感染的类型，但这种技术需要专用的大型仪器和专业的技术人员，而在偏远山区或一些紧急情况下无法达到这种检测条件，因此急需一种不需要大型设备，可方便快速鉴别检测呼吸道感染类型的方法。
目前试纸条的检测样本多为血清或血浆，检验人员需对血样本进行离心处理才能得到血清用于检测，并且只检测一种感染指标，造成抽多管血，浪费血液，特别是婴幼儿，抽血十分困难，因此开发一种仅用少量指血，不需要离心机即可快速判断呼吸道感染的类型的方法具有重大意义。
发明内容
本发明提供了一种快速鉴别呼吸道感染类型的试剂盒及其应用，旨在改善现有的检测方法一次只能检测一种感染指标，耗血量大、检测耗时的问题。
本发明是这样实现的：
一种快速鉴别呼吸道感染类型的试剂盒，试剂盒包括基板和试纸条，基板内开设有至少两条微流体通道和加样孔，至少两条微流体通道的一端均与加样孔相连通，试纸条嵌设于微流体通道内。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，基板为圆形，加样孔位于基板的圆心处，至少两条微流体通道以加样孔为中心，沿基板的半径方向延伸。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，试纸条选自血液降钙素原检测条带、C反应蛋白检测条带、中性粒细胞载脂蛋白检测条带、流感病毒IgM抗体检测条带和支/衣原体IgM抗体检测条带组成的群组。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，试纸条上依次设置有血浆分离膜、金标垫、检测线、质控线和吸水膜，血浆分离膜位于靠近加样孔的一端。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，加样孔内嵌设有样品垫，基板在与检测线对应的位置开设有检测窗，以及在与质控线相对应的位置开设有质控窗。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，血液降钙素原检测条带、C反应蛋白检测条带和中性粒细胞载脂蛋白检测条带中，在血浆分离膜与金标垫之间还设置有样品结合垫。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，样品结合垫上固定有对应检测指标的α特异性单克隆抗体。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，金标垫上包被有对应检测指标的胶体金标记的α特异性单克隆抗体；
优选地，检测线上固定有对应检测指标的β特异性单克隆抗体；
优选地，质控线上固定有对应检测指标的羊抗鼠IgG多克隆抗体。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，微流体通道有五条，试纸条有五条、分别为血液降钙素原检测条带、C反应蛋白检测条带、中性粒细胞载脂蛋白检测条带、流感病毒IgM抗体检测条带和支/衣原体IgM抗体检测条带。
一种上述试剂盒在快速鉴别呼吸道细菌、支原体、衣原体和病毒感染类型中的应用。
本发明的有益效果是：
本发明通过上述设计得到的试纸盒，含有多个微流体通道，且多个微流体通道的一端均与加样孔相连通。使用时，将待测血液样本滴至加样孔中，待测血液会在多个微流体通道内的试纸条上逐渐扩散，通过试纸条上指示的检测结果，工作人员便可判断该样本是否存在相应检测指标的感染。
通过这种试纸盒，可以同时检测多种感染指标，例如当微流体通道有五条时，并分别放置血液降钙素原(PCT)的检测条带、C反应蛋白(CRP)的检测条带、中性粒细胞载脂蛋白(HNL)的检测条带、流感病毒IgM抗体的检测条带和支/衣原体IgM抗体的检测条带，便可在短时间内同时检测血液PCT、CRP、HNL浓度是否超标，是否存在肺炎支原体、肺炎衣原体和呼吸道感染病毒的IgM抗体。由此可见，这种试剂盒可同时检测数类感染指标，仅用少量指血便可检查，具有方便快捷、特异敏感、稳定性强、不需要特殊设备和仪器、结果判断直观等优点。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施方式的技术方案，下面将对实施方式中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1是本发明实施例1提供的试纸盒的结构示意图；
图2是本发明实施例1提供的CRP、PCT、HNL检测条带的结构示意图；
图3是本发明实施例1提供的流感病毒IgM抗体检测条带和支/衣原体IgM抗体检测条带的结构示意图。
图中标记分别为：
1-CRP检测条带；2-PCT检测条带；3-HNL检测条带；4-支/衣原体IgM抗体检测条带；5-流感病毒IgM抗体检测条带；6-血浆分离膜；7-样品固定垫；8-金标垫；9-检测线；10-质控线；11-吸水膜；12-加样孔；13-检测窗；14-质控窗；15-基板；16-微流体通道；17-盖板；18-通孔。
具体实施方式
为使本发明实施方式的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施方式中的附图，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。因此，以下对在附图中提供的本发明的实施方式的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。
在本发明的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“纵向”、“横向”、“长度”、“宽度”、“厚度”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”、“顺时针”、“逆时针”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的设备或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。
在本发明中，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”、“固定”等术语应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或成一体；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
在本发明中，除非另有明确的规定和限定，第一特征在第二特征之“上”或之“下”可以包括第一和第二特征直接接触，也可以包括第一和第二特征不是直接接触而是通过它们之间的另外的特征接触。而且，第一特征在第二特征“之上”、“上方”和“上面”包括第一特征在第二特征正上方和斜上方，或仅仅表示第一特征水平高度高于第二特征。第一特征在第二特征“之下”、“下方”和“下面”包括第一特征在第二特征正下方和斜下方，或仅仅表示第一特征水平高度小于第二特征。
实施例1，参照图1至图3所示，
本实施例提供一种快速鉴别呼吸道感染类型的试剂盒，这种试剂盒可以仅用少量指血，便能同时检测多种感染指标，用以判断患者的感染情况。下面以呼吸道感染为例，说明这种试剂盒的结构和在快速鉴别呼吸道细菌、支原体、衣原体和病毒感染类型中用途：
如图1所示，这种试剂盒包括基板15和试纸条(图未标)，基板15内开设有至少两条微流体通道16，该微流体通道16的数量可以为2条、3条或者更多，在本实施例中，微流体通道16的数量为五条。基板内位于中心的位置还开设有加样孔，在检测过程中，待测血液放置于该加样孔中。多条微流体通道16的一端与加样孔12相连通，即多条微流体通道16的一端交汇于加样孔12，位于加样孔12内的待测血液会沿着多条微流体通道16扩散。
在本实施例中，这种试剂盒还包括盖板17，盖板17与基板15相互配合，基板15内开设有微流体通道16和加样孔12，盖板17将微流体通道16与外界环境隔离开，并通过在盖板17上开设的通孔18与位于基板15的加样孔12相连通。盖板17和基板15可以相对独立的结构，也可以是一体成型结构。
基板15和盖板17的形状可以有多种，例如圆形、方形或者不规则形。在本实施例中，基板15和盖板17为圆形，加样孔12和通孔18分别位于基板15和盖板17的圆心处，多条微流体通道16以加样孔12为中心，呈辐射状沿基板的半径方向延伸。
在这多条微流体通道16内，嵌设有用于检测特定感染指标的试纸条。在本实施例中，微流体通道15有五条，其内嵌设的试纸条分别为：PCT检测条带2、CRP检测条带1、HNL检测条带3、流感病毒IgM抗体检测条带5和支/衣原体IgM抗体检测条带4。通过这五条试纸条，便可同时检测血液PCT、CRP、HNL、支原体、衣原体和呼吸道感染病毒的IgM抗体多种指标。其中，呼吸道感染病毒包括：甲型流感病毒、乙型流感病毒、丙型流感病毒、鼻病毒、冠状病毒、副流感病毒等常见病毒。
如图2和图3所示，这五条试纸条的共同结构均包括：在试纸条上依次设置的血浆分离膜6、金标垫8、检测线9、质控线10和吸水膜11，其中血浆分离膜6位于靠近加样孔12的一端。并且，加样孔12内嵌设有样品垫(图未示)，盖板17在与检测线9对应的位置开设有检测窗13，用于实时观察试纸条检测线的颜色；盖板17在与质控线10相对应的位置开设有质控窗14，用于观察试纸条质控线的颜色。
与流感病毒IgM抗体检测条带5和所述支/衣原体IgM抗体检测条带4不同的是，如图2所示，PCT检测条带2、CRP检测条带1、HNL检测条带3中，在血浆分离膜6与金标垫8之间还设置有样品结合垫7。该样品结合垫7上固定有PCT、CRP和HNL相应的α特异性单克隆抗体，该样品结合垫7的材料是棉短绒纸。
各试纸条上的血浆分离6膜用于分离待测血液样品，截留红细胞，其采用的材料是结晶玻璃纤维。各试纸条上的金标垫8、检测线9、质控线10的材料均为玻璃纤维纸。
金标垫8上包被有对应检测指标的胶体金标记的α特异性单克隆抗体。胶体金是一种常用的标记技术，是以胶体金为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型免疫标记技术，具有方便快捷、特异敏感、稳定性强、不需要特殊设备和仪器、结果判断直观等优点。
检测线9上固定有对应检测指标的的β特异性单克隆抗体；质控线10上固定有对应检测指标的羊抗鼠IgG多克隆抗体。
进一步地，α特异性单克隆抗体和β特异性单克隆抗体包括但不限于：肺炎支原体的鼠抗人IgM单抗、肺炎衣原体的鼠抗人IgM单抗、降钙素原的2-H12抗体、C反应蛋白的2-E11抗体、中性粒细胞载脂蛋白的Mab764抗体以及流感病毒的鼠抗人IgM抗体。具体如表1所示。
表1.α特异性单克隆抗体和β特异性单克隆抗体
通过这种试剂盒检测呼吸道感染类型的方法及原理为：
将待测血液样本滴至加样孔12中，待测血液会在多个微流体通道16内的试纸条上逐渐扩散，依次发生下述步骤：
a.当待测样本通过血浆分离膜6时，红细胞被截留；
b.分离后的样品与固定在样品结合垫7上定量的相应的α特异性单克隆抗体反应(仅在CRP、PCT和HNL三个条带上)，10㎎/L的CRP、0.5㎎/L的PCT和0.155㎎/L的HNL被截留在样品结合垫上。(流感病毒IgM抗体检测条带和支/衣原体IgM抗体检测条带不发生此步骤)；
c.步骤b反应后的样品与金标垫8上过量的相应的胶体金标记的α单克隆抗体反应，若有抗原抗体结合物生成则与检测线9上固定的相应的特异性β单克隆抗体反应。
d.步骤c反应后的样品与质控线10上的羊抗鼠IgG抗体反应。
检测后，工作人员只需在检测窗13和质控窗14处观察试纸条的颜色，即可判断相应指标为阳性或是阴性，从而得出呼吸道的感染类型。
试验例
用实施例1提供的试剂盒进行检测：
检测方法：将患者的指血直接滴入圆形加样孔，5分钟内观察检测窗和质控窗颜色。
试纸条检测结果的解释：
1)阴性——质控窗C显红色、检测窗T不显色；
2)阳性——质控窗C显红色、检测窗T鲜红色；
3)无效——质控窗C不显色则表明操作失误或试剂盒失效。
试纸条检验结果的解读：
注：1、2、3任一指标为阳性皆判定为阳性；CRP的阳性判定需排除心血管系统疾病、急性排斥反应；推荐用药需根据说明书在医师或药师指导下用药。
综上所述，本提供的这种快速鉴别呼吸道感染类型的试剂盒，可通过同时检测血液PCT、CRP、HNL，支原体、衣原体和呼吸道感染病毒的IgM抗体多种指标，来判断患者呼吸道感染类型。通过血浆分离膜的使用，去掉血细胞干扰。本发明操作简单、时间短、不需仪器设备、适合条件落后地区和临床快速鉴别检测呼吸道感染类型。
以上所述仅为本发明的优选实施方式而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种快速鉴别呼吸道感染类型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括基板和试纸条，所述基板内开设有至少两条微流体通道和加样孔，至少两条所述微流体通道的一端均与所述加样孔相连通，所述试纸条嵌设于所述微流体通道内。
2.根据权利要求1所述的快速鉴别呼吸道感染类型的试剂盒，其特征在于，所述基板为圆形，所述加样孔位于所述基板的圆心处，至少两条所述微流体通道以所述加样孔为中心，沿所述基板的半径方向延伸。
3.根据权利要求1所述的快速鉴别呼吸道感染类型的试剂盒，其特征在于，所述试纸条选自血液降钙素原检测条带、C反应蛋白检测条带、中性粒细胞载脂蛋白检测条带、流感病毒IgM抗体检测条带和支/衣原体IgM抗体检测条带组成的群组。
4.根据权利要求3所述的快速鉴别呼吸道感染类型的试剂盒，其特征在于，所述试纸条上依次设置有血浆分离膜、金标垫、检测线、质控线和吸水膜，所述血浆分离膜位于靠近所述加样孔的一端。
5.根据权利要求4所述的快速鉴别呼吸道感染类型的试剂盒，其特征在于，所述加样孔内嵌设有样品垫，所述基板在与检测线对应的位置开设有检测窗，以及在与所述质控线相对应的位置开设有质控窗。
6.根据权利要求4所述的快速鉴别呼吸道感染类型的试剂盒，其特征在于，所述血液降钙素原检测条带、C反应蛋白检测条带和中性粒细胞载脂蛋白检测条带中，在所述血浆分离膜与所述金标垫之间还设置有样品结合垫。
7.根据权利要求6所述的快速鉴别呼吸道感染类型的试剂盒，其特征在于，所述样品结合垫上固定有对应检测指标的α特异性单克隆抗体。
8.根据权利要求4所述的快速鉴别呼吸道感染类型的试剂盒，其特征在于，所述金标垫上包被有对应检测指标的胶体金标记的α特异性单克隆抗体；
优选地，所述检测线上固定有对应检测指标的β特异性单克隆抗体；
优选地，所述质控线上固定有对应检测指标的羊抗鼠IgG多克隆抗体；
优选地，所述α特异性单克隆抗体和所述β特异性单克隆抗体包括肺炎支原体的鼠抗人IgM单抗、肺炎衣原体的鼠抗人IgM单抗、降钙素原的2-H12抗体、C反应蛋白的2-E11抗体、中性粒细胞载脂蛋白的Mab764抗体以及流感病毒的鼠抗人IgM单抗。
9.根据权利要求1～8任一项所述的快速鉴别呼吸道感染类型的试剂盒，其特征在于，所述微流体通道有五条，所述试纸条有五条、分别为血液降钙素原检测条带、C反应蛋白检测条带、中性粒细胞载脂蛋白检测条带、流感病毒IgM抗体检测条带和支/衣原体IgM抗体检测条带。
10.一种根据权利要求1～9任一项所述的试剂盒在快速鉴别呼吸道细菌、支原体、衣原体和病毒感染类型中的应用。
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