CN108680739A - 一种碱性磷酸酶标记抗体用稀释液及其制备方法 - Google Patents

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凌天阳
金可心
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Abstract

本发明公开了一种碱性磷酸酶标记抗体用稀释液及其制备方法，由以下组分按重量份数配比组成：磷酸氢二钠42～71份，磷酸二氢钠41～77份，氯化镁15～25份，氯化锌11～17份，葡萄糖3～9份，EDTA3～8份，小鼠血清3～7份，吐温‑40 1～3份，Proclin300 1～4份，明胶2～5份，去离子水200～300份。本发明利用各组分之间的协同作用，制备获得的碱性磷酸酶标记抗体用稀释液本能保证标记抗体的稳定性，且非特异性结合低。

Description

一种碱性磷酸酶标记抗体用稀释液及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物领域，尤其涉及一种碱性磷酸酶标记抗体用稀释液及其制备方法。
背景技术
随着科学技术的发展，医学诊断技术也随着飞速发展，从一开始的放射性免疫分析发展到现在的酶联免疫分析、荧光免疫分析、时间分辨荧光、化学发光免疫分析。其中，化学发光免疫分析因其灵敏度高、线性范围宽、检测时间短等优势迅速崛起。化学发光法的发光体系又分为吖啶酯、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶发光体系。现在主流的发光体系多采用辣根过氧化物酶，主要因其标记简单、价格低廉，而相对碱性磷酸酶却存在易受污染、重复性差等先天缺陷。因此使用碱性磷酸酶体系将逐步成为主导。碱性磷酸酶体系中，标识了碱性磷酸酶的抗体成为检测试剂盒中重要的一部分，而碱性磷酸酶标识技术相对较难，存在稳定性问题。因此，一种合适的抗体稀释液就显得尤为的重要。
发明内容
本发明解决的技术问题：为了获得一种碱性磷酸酶标记抗体具有优良的稳定性，且非特异性结合低，空白不高，本发明提供了一种碱性磷酸酶标记抗体用稀释液及其制备方法。
技术方案：一种碱性磷酸酶标记抗体用稀释液，由以下组分按重量份数配比组成：磷酸氢二钠42～71份，磷酸二氢钠41～77份，氯化镁15～25份，氯化锌11～17份，葡萄糖3～9份，EDTA3～8份，小鼠血清3～7份，吐温-40 1～3份，Proclin300 1～4份，明胶2～5份，去离子水200～300份。
优选的一种碱性磷酸酶标记抗体用稀释液由以下组分按重量份数配比组成：磷酸氢二钠56份，磷酸二氢钠58份，氯化镁21份，氯化锌15份，葡萄糖6份，EDTA5份，小鼠血清3份，吐温-40 2份，Proclin300 2份，明胶4份，去离子水260份。
一种碱性磷酸酶标记抗体用稀释液的制备方法，包含以下步骤：
第1步、将去离子水加热至30～40℃，搅拌速度为80～100rpm，依次加入磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化镁、氯化锌、葡萄糖、EDTA，搅拌20～40min；
第2步、调节第1步得到的溶液pH至6.2～7.1；
第3步、在第2步所得溶液中加入小鼠血清、明胶，搅拌速度为50～70rpm，搅拌10～30min；
第4步、将吐温-40、Proclin300加入第3步所得溶液内，搅拌速度为40～60rpm，搅拌10～30min，即可制得碱性磷酸酶标记抗体用稀释液。
优选的，第1步中将去离子水加热至35℃，搅拌速度为90rpm，依次加入磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化镁、氯化锌、葡萄糖、EDTA，搅拌30min。
优选的，第2步中调节第1步得到的溶液pH至6.6。
优选的，第3步中在第2步所得溶液中加入小鼠血清、明胶，搅拌速度为60rpm，搅拌20min。
优选的，第4步中将吐温-40、Proclin300加入第3步所得溶液内，搅拌速度为50rpm，搅拌18min，即可制得碱性磷酸酶标记抗体用稀释液。
有益效果：本发明利用各组分之间的协同作用，制备获得的碱性磷酸酶标记抗体用稀释液本能保证标记抗体的稳定性，且非特异性结合低。
具体实施方式
实施例1
一种碱性磷酸酶标记抗体用稀释液，由以下组分按重量份数配比组成：磷酸氢二钠56份，磷酸二氢钠58份，氯化镁21份，氯化锌15份，葡萄糖6份，EDTA5份，小鼠血清3份，吐温-40 2份，Proclin300 2份，明胶4份，去离子水260份。
一种碱性磷酸酶标记抗体用稀释液的制备方法，包含以下步骤：
第1步、将去离子水加热至35℃，搅拌速度为90rpm，依次加入磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化镁、氯化锌、葡萄糖、EDTA，搅拌30min；
第2步、调节第1步得到的溶液pH至6.6；
第3步、在第2步所得溶液中加入小鼠血清、明胶，搅拌速度为60rpm，搅拌20min；
第4步、将吐温-40、Proclin300加入第3步所得溶液内，搅拌速度为50rpm，搅拌18min，即可制得碱性磷酸酶标记抗体用稀释液。
实施例2
一种碱性磷酸酶标记抗体用稀释液，由以下组分按重量份数配比组成：磷酸氢二钠66份，磷酸二氢钠56份，氯化镁18份，氯化锌13份，葡萄糖5份，EDTA6份，小鼠血清5份，吐温-40 2份，Proclin300 3份，明胶3份，去离子水280份。
一种碱性磷酸酶标记抗体用稀释液的制备方法，包含以下步骤：
第1步、将去离子水加热至33℃，搅拌速度为90rpm，依次加入磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化镁、氯化锌、葡萄糖、EDTA，搅拌30min；
第2步、调节第1步得到的溶液pH至6.8；
第3步、在第2步所得溶液中加入小鼠血清、明胶，搅拌速度为60rpm，搅拌20min；
第4步、将吐温-40、Proclin300加入第3步所得溶液内，搅拌速度为50rpm，搅拌12min，即可制得碱性磷酸酶标记抗体用稀释液。
实施例3
一种碱性磷酸酶标记抗体用稀释液，由以下组分按重量份数配比组成：磷酸氢二钠62份，磷酸二氢钠71份，氯化镁21份，氯化锌16份，葡萄糖6份，EDTA6份，小鼠血清5份，吐温-40 2份，Proclin300 3份，明胶3份，去离子水240份。
一种碱性磷酸酶标记抗体用稀释液的制备方法，包含以下步骤：
第1步、将去离子水加热至35℃，搅拌速度为100rpm，依次加入磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化镁、氯化锌、葡萄糖、EDTA，搅拌30min；
第2步、调节第1步得到的溶液pH至6.9；
第3步、在第2步所得溶液中加入小鼠血清、明胶，搅拌速度为50rpm，搅拌30min；
第4步、将吐温-40、Proclin300加入第3步所得溶液内，搅拌速度为40rpm，搅拌30min，即可制得碱性磷酸酶标记抗体用稀释液。
实施例4
将实施例1～3制备获得的碱性磷酸酶标记抗体用稀释液用于抗体稀释，对其进行热加速稳定性试验与空白试验，结果如下：
热加速稳定性试验(对比未加速下降百分比) 空白试验(counts)
实施例1 93.3％ 2976
实施例2 89.2％ 4897
实施例3 90.1％ 6712

Claims (7)

1.一种碱性磷酸酶标记抗体用稀释液，其特征在于，由以下组分按重量份数配比组成：磷酸氢二钠42～71份，磷酸二氢钠41～77份，氯化镁15～25份，氯化锌11～17份，葡萄糖3～9份，EDTA3～8份，小鼠血清3～7份，吐温-40 1～3份，Proclin300 1～4份，明胶2～5份，去离子水200～300份。
2.根据权利要求1所述一种碱性磷酸酶标记抗体用稀释液，其特征在于，由以下组分按重量份数配比组成：磷酸氢二钠56份，磷酸二氢钠58份，氯化镁21份，氯化锌15份，葡萄糖6份，EDTA5份，小鼠血清3份，吐温-40 2份，Proclin300 2份，明胶4份，去离子水260。
3.权利要求1所述一种碱性磷酸酶标记抗体用稀释液的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：
第1步、将去离子水加热至30～40℃，搅拌速度为80～100rpm，依次加入磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化镁、氯化锌、葡萄糖、EDTA，搅拌20～40min；
第2步、调节第1步得到的溶液pH至6.2～7.1；
第3步、在第2步所得溶液中加入小鼠血清、明胶，搅拌速度为50～70rpm，搅拌10～30min；第4步、将吐温-40、Proclin300加入第3步所得溶液内，搅拌速度为40～60rpm，搅拌10～30min，即可制得碱性磷酸酶标记抗体用稀释液。
4.根据权利要求3所述一种碱性磷酸酶标记抗体用稀释液的制备方法，其特征在于，第1步中将去离子水加热至35℃，搅拌速度为90rpm，依次加入磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化镁、氯化锌、葡萄糖、EDTA，搅拌30min。
5.根据权利要求3所述一种碱性磷酸酶标记抗体用稀释液的制备方法，其特征在于，第2步中调节第1步得到的溶液pH至6.6。
6.根据权利要求3所述一种碱性磷酸酶标记抗体用稀释液的制备方法，其特征在于，第3步中在第2步所得溶液中加入小鼠血清、明胶，搅拌速度为60rpm，搅拌20min。
7.根据权利要求3所述一种碱性磷酸酶标记抗体用稀释液的制备方法，其特征在于，第4步中将吐温-40、Proclin300加入第3步所得溶液内，搅拌速度为50rpm，搅拌18min，即可制得碱性磷酸酶标记抗体用稀释液。
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