CN112362432B - 一种通用于血清中tt3和tt4的解离剂及其制备方法 - Google Patents
一种通用于血清中tt3和tt4的解离剂及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112362432B CN112362432B CN202110036268.0A CN202110036268A CN112362432B CN 112362432 B CN112362432 B CN 112362432B CN 202110036268 A CN202110036268 A CN 202110036268A CN 112362432 B CN112362432 B CN 112362432B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- serum
- percent
- dissociation
- dissociation agent
- agent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
- G01N33/78—Thyroid gland hormones, e.g. T3, T4, TBH, TBG or their receptors
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了一种通用于血清中TT3和TT4的解离剂,包括如下质量分数的组分:金属螯合物0.01%~0.1%;N‑杂环化合物0.01%~1.0%;稳定剂0.05%~0.2%;表面活性剂0.2%~1.0%;助剂0.5%~4.0%,其余为水。本发明的解离剂具有很好的解离效果,可当作样本预处理液用于甲功类项目检测试剂中,能够很好地将血清中结合态的TT3及TT4从各自运转蛋白中解离出来,使之成为游离态后,采用化学发光免疫分析法对游离态的TT3和TT4的含量进行检测验证,使得样本结果测值更准确。本发明还提供一种通用于血清中TT3和TT4的解离剂的制备方法。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断试剂技术领域,尤其涉及一种通用于血清中TT3和TT4的解离剂及其制备方法。
背景技术
三碘甲状腺原氨酸(TT3)、甲状腺素(TT4)是临床甲功项目检测中的重要组成部分,目前临床上常用的上述两种成分的检测试剂主要是依靠采购进口的检测试剂,该检测试剂的主要作用是将结合状态下的TT3及TT4从各自运转蛋白中解离出来,从而成为游离态的分子,以方便相关试剂对其进行检测,以提高临床测值准确性,避免结果异常,导致临床判断有误。
在人体血液中99.7%的三碘甲状腺原氨酸(TT3)与运转蛋白结合,主要是与甲状腺素结合球蛋白(TBG)和少量的白蛋白,以及甲状腺结合前白蛋白 (TBPA) 结合;99.95%的甲状腺素(TT4)是可逆性地结合在运转蛋白上,其中主要是甲状腺素结合球蛋白(TBG)和少量的白蛋白,以及甲状腺结合前白蛋白(TBG),这种特别性结合为甲功类定量检测试剂的研发工作带来了困难与挑战。因此,在检测血清中的TT3及TT4时,必须将结合形式的分子全部解离出来,这样才能得到准确的血清中TT3和TT4各自的含量。目前,怎样能够很好地将样本血清中的TT3及TT4从结合态中解离出来成为游离态的分子,成了实验研发中的一个难题。
发明内容
为了克服现有技术的不足,本发明的目的之一在于提供一种通用于血清中TT3和TT4的解离剂,其能够很好地将血清中结合态的TT3及TT4从各自运转蛋白中解离出来,通过测定游离态的含量来获得样本临床实验数据,以提高临床测值准确性。
本发明的目的之二在于提供一种通用于血清中TT3和TT4的解离剂的制备方法。
本发明的目的之一采用如下技术方案实现:
一种通用于血清中TT3和TT4的解离剂,包括如下质量分数的组分:
金属螯合物0.01%~0.1%;N-杂环化合物0.01%~1.0%;稳定剂0.05%~0.2%;表面活性剂0.2%~1.0%;助剂0.5%~4.0%,其余为水。
其中,水为去离子水。
进一步地,所述金属螯合物为DTPA、EDTA中的一种或者两种的组合物。DTPA和EDTA都是氨基羧酸类的螯合剂,EDTA能与Mg2+、Ca2+、Mn2+和Fe2+等二价金属离子结合的螯合剂。由于多数核酸酶类和有些蛋白酶类的作用需要Mg2+,故EDTA也常用做核酸酶和蛋白酶的抑制剂。DTPA是高效鳌合剂,鳌合性强,能迅速与钙、镁、铁、铅、铜、锰等离子生成水溶性络合物。
进一步地,所述N-杂环化合物为5-溴-2-甲基吡啶、3-溴-5-羟基吡啶中的一种或者两种的组合物。N-杂环化合物的作用原理是将TT3、TT4从结合态中解离出来,然后N-杂环化合物再与运转蛋白结合,形成稳定结构,避免TT3、TT4与运转蛋白再次结合,使得TT3、TT4成为游离态的分子,方便后续的检测。
进一步地,所述稳定剂为Proclin 300、庆大霉素、硫柳汞中的一种或者两种以上的组合物。硫柳汞为杀菌剂,能有效预防有害微生物污染所致的潜在危害。Proclin300是用于诊断试剂或产品中控制微生物含量的高效来灭菌剂,以其广谱活性、优越的兼容性和稳定性及其在使用浓度下的低毒性,ProClin 300成为用于诊断试剂的理想高效稳定剂。ProClin 300可在更长的时间内根除细菌、真菌及酵母,从而延长本发明的解离剂的储存时间,其水溶性确保其可轻易溶入所需试剂中,特别是,ProClin 300对大多数的酶或抗体交联反应的功能无影响,所以不会干扰检验指示剂。庆大霉素能作用于细菌体内的核糖体,抑制细菌蛋白质合成,并破坏细菌细胞膜的完整性。
进一步地,所述表面活性剂为Tween-20、Tween-40、Triton X-100、十二烷基硫酸钠中的一种或者两种以上的组合物。Tween-20、Tween-40和Triton X-100均为非离子表面活性剂,十二烷基硫酸钠为阴离子表面活性剂,Tween-20有复性抗原的作用,可提高特异性的识别能力;Triton X-100为用于细胞裂解液成分之一,在保护蛋白活性方面有一定作用;十二烷基硫酸钠能溶解细胞膜上的脂类与蛋白质。
进一步地,所述助剂为8-苯氨基-1-萘磺酸铵盐、柠檬酸钠中的一种或者两种的组合物。8-苯氨基-1-萘磺酸铵盐对蛋白质的疏水表面具有高亲和力,可结合到低极性区域的蛋白质表面;柠檬酸钠具有很好的抗凝性和缓冲效果,不会使蛋白质变性。
进一步地,所述金属螯合物、N-杂环化合物、稳定剂的质量比为0.05:0.1-1:0.1。
进一步地,所述N-杂环化合物、表面活性剂、助剂的质量比为0.1-1:0.5:1-4。
本发明的目的之二采用如下技术方案实现:
一种通用于血清中TT3和TT4的解离剂的制备方法,包括如下制备步骤:
在1L去离子水中依次加入金属螯合物、N-杂环化合物、稳定剂、表面活性剂和助剂,混合均匀后,即得通用于血清中TT3和TT4的解离剂。
进一步地,所述通用于血清中TT3和TT4的解离剂需放置在2℃-8℃中避光保存。
相比现有技术,本发明的有益效果在于:
本发明的解离剂具有很好的解离效果,可当作样本预处理液用于甲功类项目检测试剂中,能够很好地将血清中结合态的TT3及TT4从各自运转蛋白中解离出来,使之成为游离态后,采用化学发光免疫分析法(CLIA)对游离态的TT3和TT4的含量进行检测验证,使得样本结果测值更准确。
本发明根据人血清标本中TT3及TT4的特异性以及主要的存在形式,研发出能将标本中TT3及TT4从其运转蛋白中解离出来的解离剂,克服了国产类甲功系列检测试剂盒项目研发的一个难点,通过本发明的解离剂,能够将标本中结合态的TT3及TT4从其运转蛋白中有效解离,使测得的实验结果更准确,更符合临床要求,这对于整个甲功类型的项目的实验研发具有重要意义,便于项目后续的研发以及优化,能够让国产的甲功检测技术更接近进口试剂的水平,加上,其通用型的特性,使得实验操作中更方便临床人员,大大提高工作效率。
本发明的制备方法工艺简单、易控制,有利于放大生产。
具体实施方式
下面,结合具体实施方式,对本发明做进一步描述,需要说明的是,在不相冲突的前提下,以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
以下是本发明具体的实施例,在下述实施例中所采用的原材料、设备等除特殊限定外,均可以通过购买方式获得。以下各组分的含量为质量分数含量。
实施例1
一种通用于血清中TT3和TT4的解离剂的制备方法,包括如下制备步骤:
在1L去离子水中加入0.05%EDTA、0.05%5-溴-2-甲基吡啶、0.05%3-溴-5-羟基吡啶、0.1% Proclin 300、0.5% Tween-40、0.5%8-苯氨基-1-萘磺酸铵盐、0.5%柠檬酸钠混匀后,放入2℃-8℃避光保存,即得通用于血清中TT3和TT4的解离剂。
实施例2
一种通用于血清中TT3和TT4的解离剂的制备方法,包括如下制备步骤:
在1L去离子水中加入0.05%EDTA、0.25%5-溴-2-甲基吡啶、0.25% 3-溴-5-羟基吡啶、0.1% Proclin 300、0.5% Tween-40、1.0% 8-苯氨基-1-萘磺酸铵盐、1.0%柠檬酸钠混匀,放入2℃-8℃避光保存,即得通用于血清中TT3和TT4的解离剂。
实施例3
一种通用于血清中TT3和TT4的解离剂的制备方法,包括如下制备步骤:
在1L去离子水中加入0.05%EDTA、0.5%5-溴-2-甲基吡啶、0.5% 3-溴-5-羟基吡啶、0.1% Proclin 300、0.5% Tween-40、2.0% 8-苯氨基-1-萘磺酸铵盐、2.0%柠檬酸钠混匀,放入2℃-8℃避光保存,即得通用于血清中TT3和TT4的解离剂。
性能检测
1、收集使用进口试剂用于TT3、TT4等两项甲功项目的测值。
2、收集有该进口试剂盒测值的用于TT3、TT4等两项甲功项目的标本,各15例(包含有低中高值),总共30例标本,其中,TT3标本编号为1~15号,TT4标本编号为16~30号,每个标本用移液枪分别取20μL标本到4个样品反应杯中,反应杯编号为A、B、C、D。
在A反应杯中各添加80μL的实施例1的解离剂;
在B反应杯中各添加80μL的实施例2的解离剂;
在C反应杯中各添加80μL的实施例3的解离剂;
在D反应杯中各添加80μL的常规项目处理液。
3、将上述反应杯的溶液混匀后,常温静置10分钟,然后用化学发光免疫分析法(CLIA)进行上机实验验证,测得的结果跟进口试剂盒测定的结果进行对比分析,检测比对结果如下表1和表2。
表1 TT3比对实验结果(单位:ng/mL)
表2 TT4比对实验结果(单位:ng/mL)
从表1和表2的对比结果进行分析得出,常规项目处理液处理标本后测值结果普遍偏低很多,从而可以推断出标本中的TT3及TT4没有被解离出来,没有起到从运转蛋白中解离的效果,而具体实例配制出来的解离剂稀释标本后得出的结果浓度跟进口试剂盒测得的浓度很接近。可以推断具体实例配制出来的通用型解离剂对标本中TT3及TT4的解离是很充分的,根据解离剂中各成分所含质量比的摸索,实施例2的解离效果最明显,跟进口试剂所测结果基本吻合,相关性最高达到0.99以上。
因此,本发明提供的能针对血清中与运转蛋白结合的TT3/TT4的通用型解离剂,用该解离剂预处理临床血清标本,能将血清中的TT3及TT4从各自运转蛋白中解离出来。
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式,不能以此来限定本发明保护的范围,本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。
Claims (8)
1.一种通用于血清中TT3和TT4的解离剂,其特征在于,包括如下质量分数的组分:
金属螯合物0.01%~0.1%;N-杂环化合物0.01%~1.0%;稳定剂0.05%~0.2%;表面活性剂0.2%~1.0%;助剂0.5%~4.0%,其余为水;所述N-杂环化合物为5-溴-2-甲基吡啶、3-溴-5-羟基吡啶的组合物;所述助剂为8-苯氨基-1-萘磺酸铵盐、柠檬酸钠的组合物。
2.根据权利要求1所述的通用于血清中TT3和TT4的解离剂,其特征在于,所述金属螯合物为DTPA、EDTA中的一种或者两种的组合物。
3.根据权利要求1所述的通用于血清中TT3和TT4的解离剂,其特征在于,所述稳定剂为Proclin 300、庆大霉素、硫柳汞中的一种或者两种以上的组合物。
4.根据权利要求1所述的通用于血清中TT3和TT4的解离剂,其特征在于,所述表面活性剂为Tween-20、Tween-40、Triton X-100、十二烷基硫酸钠中的一种或者两种以上的组合物。
5.根据权利要求1所述的通用于血清中TT3和TT4的解离剂,其特征在于,所述金属螯合物、N-杂环化合物、稳定剂的质量比为0.05:0.1-1:0.1。
6.根据权利要求1所述的通用于血清中TT3和TT4的解离剂,其特征在于,所述N-杂环化合物、表面活性剂、助剂的质量比为0.1-1:0.5:1-4。
7.一种如权利要求1-6任一项所述的通用于血清中TT3和TT4的解离剂的制备方法,其特征在于,包括如下制备步骤:
在1L去离子水中依次加入金属螯合物、N-杂环化合物、稳定剂、表面活性剂和助剂,混合均匀后,即得通用于血清中TT3和TT4的解离剂。
8.根据权利要求7所述的通用于血清中TT3和TT4的解离剂的制备方法,其特征在于,所述通用于血清中TT3和TT4的解离剂需放置在2℃-8℃中避光保存。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110036268.0A CN112362432B (zh) | 2021-01-12 | 2021-01-12 | 一种通用于血清中tt3和tt4的解离剂及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110036268.0A CN112362432B (zh) | 2021-01-12 | 2021-01-12 | 一种通用于血清中tt3和tt4的解离剂及其制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN112362432A CN112362432A (zh) | 2021-02-12 |
CN112362432B true CN112362432B (zh) | 2021-04-09 |
Family
ID=74534824
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202110036268.0A Active CN112362432B (zh) | 2021-01-12 | 2021-01-12 | 一种通用于血清中tt3和tt4的解离剂及其制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN112362432B (zh) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113866429B (zh) * | 2021-12-03 | 2022-02-22 | 南京岚轩生物科技有限公司 | 用于检测tt3和tt4含量的解离剂及其制备方法 |
CN114011111B (zh) * | 2022-01-05 | 2022-04-01 | 广州科方生物技术股份有限公司 | 用于结合蛋白中萃取维生素的萃取液及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3941564A (en) * | 1973-09-13 | 1976-03-02 | Miles Laboratories, Inc. | Method for assessing thyroid function |
US4225576A (en) * | 1978-11-20 | 1980-09-30 | Miles Laboratories, Inc. | Combined radioimmunoassay for triiodothyronine and thyroxine |
WO2005113523A1 (en) * | 2004-05-20 | 2005-12-01 | Foldrx Pharmaceuticals, Inc. | 2-((hetero) aryl)-benzoxazole compounds and derivatives, compositions and methods for stabilizing transthyretin and inhibiting transthyretin misfolding |
CN101865916B (zh) * | 2009-04-14 | 2014-07-30 | 博阳生物科技(上海)有限公司 | 四碘甲状腺素的检测试剂盒及其使用方法 |
CN101949942B (zh) * | 2010-08-03 | 2013-09-18 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 游离三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒 |
CN101949944B (zh) * | 2010-08-03 | 2013-09-18 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒 |
KR20200024905A (ko) * | 2017-07-04 | 2020-03-09 | 큐어백 아게 | 신규 핵산 분자 |
-
2021
- 2021-01-12 CN CN202110036268.0A patent/CN112362432B/zh active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN112362432A (zh) | 2021-02-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN110862881B (zh) | 一种全自动化学发光测定仪专用的清洗液或其稀释液及其制备方法 | |
CN112362432B (zh) | 一种通用于血清中tt3和tt4的解离剂及其制备方法 | |
US5482866A (en) | Method for quantitation of calcium and magnesium and the novel reagent compositions | |
CN110579615A (zh) | 一种通用于血清中类固醇激素的释放剂及其制备方法 | |
Cheesbrough et al. | Determination of the spin state of iron in native and activated soybean lipoxygenase 1 by paramagnetic susceptibility | |
Yang et al. | Fluorimetric determination of hemoglobin using spiro form rhodamine B hydrazide in a micellar medium | |
CN112362864B (zh) | 一种降低免疫诊断试剂背景发光值的处理剂及其制备方法 | |
CN101226152A (zh) | 一种血清总铁结合力的自动分析法及液体稳定试剂 | |
JPH04287695A (ja) | エタノール分析用組成物 | |
CN115980332B (zh) | 一种可提高免疫诊断试剂灵敏度的增强液及其制配方法 | |
CN107043762A (zh) | 一种提高辣根过氧化物酶保存稳定性的保存稳定剂及其保存方法 | |
Li et al. | Study of the catalytic effect of copper (II)–protein complexes on luminol-H2O2 chemiluminescence reaction and its analytical application | |
JP4958500B2 (ja) | カルシウム濃度測定試薬および測定方法 | |
CA2407508A1 (en) | Improved process for the measurement of non-transferrin bound iron | |
Sun et al. | Microdetermination of double-stranded DNA by linear sweep voltammetry with phenosafranine | |
WO2018233174A1 (zh) | 糖化血红蛋白在线溶血酶法检测试剂盒 | |
CN113866429B (zh) | 用于检测tt3和tt4含量的解离剂及其制备方法 | |
CN110824174B (zh) | 一种用于检测血清总蛋白的试剂及其制备方法 | |
CN110672588A (zh) | 一种用于化学发光反应体系的清洗试剂及其制备方法 | |
Li et al. | Study on catalytic effect of copper (II) complex on 1, 10-phenanthroline-H2O2-CTMAB chemiluminescence reaction and its analytical applications | |
JP3003281B2 (ja) | 活性汚泥液中のatpの測定方法 | |
JP3971967B2 (ja) | 還元性物質の定量方法及び定量用試薬 | |
Ping et al. | Microdetermination of proteins with the 1, 10-phenanthroline–H2O2–cetyltrimethylammonium bromide–Cu (II) chemiluminescence system | |
CN117740765A (zh) | 适用于化学发光体系的清洗液及其制备方法和应用 | |
CN112964867A (zh) | 一种多糖类抗原-抗体复合物解离剂及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |