JP3003281B2 - 活性汚泥液中のａｔｐの測定方法 - Google Patents
活性汚泥液中のａｔｐの測定方法Info
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- JP3003281B2 JP3003281B2 JP3154450A JP15445091A JP3003281B2 JP 3003281 B2 JP3003281 B2 JP 3003281B2 JP 3154450 A JP3154450 A JP 3154450A JP 15445091 A JP15445091 A JP 15445091A JP 3003281 B2 JP3003281 B2 JP 3003281B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、活性汚泥中の微生物に
含まれるアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）を抽出する方法
に関する。
含まれるアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）を抽出する方法
に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、細胞内や菌体内に存在する物質を
定性的あるいは定量的に測定することにより有効な知見
を得ることができることはよく知られている。
定性的あるいは定量的に測定することにより有効な知見
を得ることができることはよく知られている。
【０００３】例えば、生体細胞中には生体のリン酸代謝
及びエネルギー代謝機能を有するＡＴＰが必ず存在する
のに対し、微生物が死滅するとこのＡＴＰは速やかに消
失するので死細胞中にはＡＴＰが存在せず、従ってＡＴ
Ｐは微生物の濃度を表す指標となり得ると考えられてい
る。（１９８４年版 下水試験方法Ｐ２９３）また、同
種類の細胞においては、１個の細胞中に存在するＡＴＰ
量は等しい。従って、ＡＴＰが定量できれば、細胞の数
及び生細胞か死細胞かの判定や細胞の活性度等が測定で
きる。
及びエネルギー代謝機能を有するＡＴＰが必ず存在する
のに対し、微生物が死滅するとこのＡＴＰは速やかに消
失するので死細胞中にはＡＴＰが存在せず、従ってＡＴ
Ｐは微生物の濃度を表す指標となり得ると考えられてい
る。（１９８４年版 下水試験方法Ｐ２９３）また、同
種類の細胞においては、１個の細胞中に存在するＡＴＰ
量は等しい。従って、ＡＴＰが定量できれば、細胞の数
及び生細胞か死細胞かの判定や細胞の活性度等が測定で
きる。
【０００４】従って、微生物の細胞中のＡＴＰを測定す
ることは水処理、食品、医学当の等様々な分野において
注目されている。特に水処理分野においては、下水、工
場排水等の有機性汚濁物質を分解、除去するために活性
汚泥法を用いており、この活性汚泥法は有機性汚泥物質
を各種の微生物に摂取させて浄化を行う方法であるの
で、浄化に関与する微生物濃度は活性汚泥法においては
非常に重要な操作条件となる。
ることは水処理、食品、医学当の等様々な分野において
注目されている。特に水処理分野においては、下水、工
場排水等の有機性汚濁物質を分解、除去するために活性
汚泥法を用いており、この活性汚泥法は有機性汚泥物質
を各種の微生物に摂取させて浄化を行う方法であるの
で、浄化に関与する微生物濃度は活性汚泥法においては
非常に重要な操作条件となる。
【０００５】ところで微生物内のＡＴＰを測定するため
には、ＡＴＰを微生物の外部へ抽出することが必要であ
る。このような抽出方法について現在まで数多くの方法
が試みられており、その条件としてはＡＴＰの抽出効率
が高く、操作性に優れ、測定に対する影響が小さいこと
が挙げられる。
には、ＡＴＰを微生物の外部へ抽出することが必要であ
る。このような抽出方法について現在まで数多くの方法
が試みられており、その条件としてはＡＴＰの抽出効率
が高く、操作性に優れ、測定に対する影響が小さいこと
が挙げられる。
【０００６】その一例として、本出願人は、特願平１−
１０９４８６号明細書において活性汚泥中に存在する微
生物体内から微生物体外へＡＴＰを抽出する試薬として
ＴＣＡを用いる抽出方法を提案している。
１０９４８６号明細書において活性汚泥中に存在する微
生物体内から微生物体外へＡＴＰを抽出する試薬として
ＴＣＡを用いる抽出方法を提案している。
【０００７】上記ＴＣＡを用いたＡＴＰの測定方法にお
いては、図６に示すように試料にＴＣＡ及び希釈液を加
えてＡＴＰを抽出し、更にルシフェリン、ルシフェラー
ゼ等の発光試料を加えて図７に示す発光反応を起こし、
この際に発光計測を行ってＡＴＰ濃度を測定している。
いては、図６に示すように試料にＴＣＡ及び希釈液を加
えてＡＴＰを抽出し、更にルシフェリン、ルシフェラー
ゼ等の発光試料を加えて図７に示す発光反応を起こし、
この際に発光計測を行ってＡＴＰ濃度を測定している。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】しかし、上記ＡＴＰ濃
度の測定方法においては、活性汚泥液中の微生物体内か
らＡＴＰを完全に抽出するために、比較的高濃度のＴＣ
Ａを用いる必要があるが、ＴＣＡ濃度が高くなると微生
物体内からのＡＴＰ抽出効率が高くなる反面、発光反応
が阻害されて正確な測定が困難になる。
度の測定方法においては、活性汚泥液中の微生物体内か
らＡＴＰを完全に抽出するために、比較的高濃度のＴＣ
Ａを用いる必要があるが、ＴＣＡ濃度が高くなると微生
物体内からのＡＴＰ抽出効率が高くなる反面、発光反応
が阻害されて正確な測定が困難になる。
【０００９】従って発光反応時には試料溶液を希釈して
ＴＣＡ濃度を低くする必要があるが、一般に希釈操作を
行うと操作が繁雑となって自動化が難しく、また希釈倍
率が高くなると測定時間も長くなるうえ、測定精度も低
下し易い。
ＴＣＡ濃度を低くする必要があるが、一般に希釈操作を
行うと操作が繁雑となって自動化が難しく、また希釈倍
率が高くなると測定時間も長くなるうえ、測定精度も低
下し易い。
【００１０】またＡＴＰ抽出時のＴＣＡ濃度を低く抑え
ると、微生物体内からのＡＴＰの抽出が不完全となって
ＡＴＰの計測値が真の値より小さくなるおそれがある。
ると、微生物体内からのＡＴＰの抽出が不完全となって
ＡＴＰの計測値が真の値より小さくなるおそれがある。
【００１１】このため、より正確なＡＴＰの測定を行う
ためには、微生物内のＡＴＰの抽出が完全に行われる範
囲内でＴＣＡ濃度をできるだけ低く抑えるとともに、Ｔ
ＣＡの発光阻害の影響が殆ど現れない範囲内にて発光試
験時における溶液の希釈倍率を低く抑える必要がある。
ためには、微生物内のＡＴＰの抽出が完全に行われる範
囲内でＴＣＡ濃度をできるだけ低く抑えるとともに、Ｔ
ＣＡの発光阻害の影響が殆ど現れない範囲内にて発光試
験時における溶液の希釈倍率を低く抑える必要がある。
【００１２】しかし、上記ＴＣＡ濃度及び希釈倍率の選
択基準に関してはいまだ定量的な報告はなされておら
ず、最適ＴＣＡ濃度及び希釈倍率の判定方法は確立され
ていない。
択基準に関してはいまだ定量的な報告はなされておら
ず、最適ＴＣＡ濃度及び希釈倍率の判定方法は確立され
ていない。
【００１３】本発明は上記背景の下になされたものであ
り、上記最適ＴＣＡ濃度及び希釈倍率を決定することに
より容易でかつ正確な活性汚泥中の微生物に含まれるＡ
ＴＰの測定方法を提供することを目的とする。
り、上記最適ＴＣＡ濃度及び希釈倍率を決定することに
より容易でかつ正確な活性汚泥中の微生物に含まれるＡ
ＴＰの測定方法を提供することを目的とする。
【００１４】
【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
に、本発明は活性汚泥液にＡＴＰ抽出薬としてトリクロ
ロ酢酸溶液を投入してこの混合液を希釈し、この希釈さ
れた混合溶液に発光試薬を添加し、この際に生じる発光
反応における発光量を計測して活性汚泥液中のＡＴＰの
定量を行う活性汚泥液中のＡＴＰの測定方法において、
前記活性汚泥液に対し１：１の体積比率で投入させる前
記トリクロロ酢酸溶液の濃度を５％〜１０％とするとと
もに、前記活性汚泥液にＡＴＰ抽出薬としてトリクロロ
酢酸溶液を投入した混合液を希釈する際に使用する希釈
液による希釈倍率を２０倍〜１００倍とすることを特徴
とする。
に、本発明は活性汚泥液にＡＴＰ抽出薬としてトリクロ
ロ酢酸溶液を投入してこの混合液を希釈し、この希釈さ
れた混合溶液に発光試薬を添加し、この際に生じる発光
反応における発光量を計測して活性汚泥液中のＡＴＰの
定量を行う活性汚泥液中のＡＴＰの測定方法において、
前記活性汚泥液に対し１：１の体積比率で投入させる前
記トリクロロ酢酸溶液の濃度を５％〜１０％とするとと
もに、前記活性汚泥液にＡＴＰ抽出薬としてトリクロロ
酢酸溶液を投入した混合液を希釈する際に使用する希釈
液による希釈倍率を２０倍〜１００倍とすることを特徴
とする。
【００１５】上記のようなトリクロロ酢酸の濃度及び希
釈倍率によって測定を行うことにより、ＴＣＡによる発
光反応の阻害及び希釈時の測定誤差を充分小さく抑える
ことができ、従って容易かつ正確に活性汚泥中の微生物
に含まれるＡＴＰの測定を行うことができる。
釈倍率によって測定を行うことにより、ＴＣＡによる発
光反応の阻害及び希釈時の測定誤差を充分小さく抑える
ことができ、従って容易かつ正確に活性汚泥中の微生物
に含まれるＡＴＰの測定を行うことができる。
【００１６】
【作用】実験の結果、表１に示すようにＡＴＰの抽出効
率はＴＣＡ濃度が高ければ高い程向上し、また活性汚泥
に１：１の比率でＴＣＡ溶液を加える場合、この溶液中
のＴＣＡ濃度が５％以上において抽出されるＡＴＰ濃度
はほぼ一定となる。
率はＴＣＡ濃度が高ければ高い程向上し、また活性汚泥
に１：１の比率でＴＣＡ溶液を加える場合、この溶液中
のＴＣＡ濃度が５％以上において抽出されるＡＴＰ濃度
はほぼ一定となる。
【００１７】更に、発光反応の阻害は５％〜１０％のＴ
ＣＡ溶液において２０倍〜１００倍に希釈するこにより
発光反応の阻害は減少して適性な測定が可能となる。
ＣＡ溶液において２０倍〜１００倍に希釈するこにより
発光反応の阻害は減少して適性な測定が可能となる。
【００１８】よって、上記のＴＣＡ脳と及び希釈倍率に
よって活性汚泥内の微生物に含まれるＡＴＰの抽出が効
率良く行われ、また発光反応の阻害による測定誤差を十
分小さく抑えることができるので、精度のよい微生物濃
度及び微生物の活性度の判定が可能となる。
よって活性汚泥内の微生物に含まれるＡＴＰの抽出が効
率良く行われ、また発光反応の阻害による測定誤差を十
分小さく抑えることができるので、精度のよい微生物濃
度及び微生物の活性度の判定が可能となる。
【００１９】
【実施例】以下、本発明を実施例によって説明する。
【００２０】通常、活性汚泥中の微生物に含まれるＡＴ
Ｐの抽出は、微生物に用いるＴＣＡはＴＣＡとＡＴＰの
混合溶液に発光試薬としてルシフェリン及びルシフェラ
ーゼを加え、この発光反応の際の発光量を測定すること
によりＡＴＰ濃度を決定するものである。しかし、この
発光反応は高濃度のＴＣＡの共存により阻害されて発光
量が低下する。
Ｐの抽出は、微生物に用いるＴＣＡはＴＣＡとＡＴＰの
混合溶液に発光試薬としてルシフェリン及びルシフェラ
ーゼを加え、この発光反応の際の発光量を測定すること
によりＡＴＰ濃度を決定するものである。しかし、この
発光反応は高濃度のＴＣＡの共存により阻害されて発光
量が低下する。
【００２１】また、通常上記発光反応によるＡＴＰ濃度
の測定を行う場合、所定濃度のＴＣＡとＡＴＰの混合溶
液を適当な倍率に希釈して検量線を作成し、この検量線
を用いて実験試料の発光量をＡＴＰ濃度に換算すること
によりＡＴＰ濃度を決定している。
の測定を行う場合、所定濃度のＴＣＡとＡＴＰの混合溶
液を適当な倍率に希釈して検量線を作成し、この検量線
を用いて実験試料の発光量をＡＴＰ濃度に換算すること
によりＡＴＰ濃度を決定している。
【００２２】従って、本実施例においては検量線を作成
する際のＴＣＡ濃度による発光反応の阻害を調べるため
に下記の実験を行った。尚、便宜上ＴＣＡ濃度において
は１％＝0.01g/mlとし、また希釈液としてはＥＤＴＡと
ＮＨ2Ｃ(ＣＨ2ＯＨ)3［トリス］からなる緩衝溶液を用
いた。
する際のＴＣＡ濃度による発光反応の阻害を調べるため
に下記の実験を行った。尚、便宜上ＴＣＡ濃度において
は１％＝0.01g/mlとし、また希釈液としてはＥＤＴＡと
ＮＨ2Ｃ(ＣＨ2ＯＨ)3［トリス］からなる緩衝溶液を用
いた。
【００２３】まず、10-5mol/lのＡＴＰ標準液と濃度0.1
％のＴＣＡ溶液とを調製する。
％のＴＣＡ溶液とを調製する。
【００２４】次に、上記ＡＴＰ標準液0.5mlに上記0.1％
ＴＣＡ溶液0.5mlを加えた混合溶液を調製し、この溶液
をＥＤＴＡを４mmol/l含む0.1mol/lのＮＨ2Ｃ(ＣＨ2Ｏ
Ｈ)3緩衝液で２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍に希
釈して各試料溶液をそれぞれ調製する。
ＴＣＡ溶液0.5mlを加えた混合溶液を調製し、この溶液
をＥＤＴＡを４mmol/l含む0.1mol/lのＮＨ2Ｃ(ＣＨ2Ｏ
Ｈ)3緩衝液で２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍に希
釈して各試料溶液をそれぞれ調製する。
【００２５】更に、上記各希釈した試料溶液0.5mlに発
光試薬0.5mlを加えて１秒から３０秒までの３０秒間の
発光量を計測して標準曲線を作成した。
光試薬0.5mlを加えて１秒から３０秒までの３０秒間の
発光量を計測して標準曲線を作成した。
【００２６】次に、濃度0.5％，1.0％，5.0％の各ＴＣ
Ａ溶液と、比較例として純水とを調製し、上記発光量の
計測実験をそれぞれ行った。その結果を図２に示す。図
２において、Ａ線は上記10-5molのＡＴＰ標準溶液0.5ml
に純水0.5mlを加えて各２倍、５倍、１０倍、２０倍、
５０倍に希釈し、発光試験を行って得られる標準曲線で
ある。
Ａ溶液と、比較例として純水とを調製し、上記発光量の
計測実験をそれぞれ行った。その結果を図２に示す。図
２において、Ａ線は上記10-5molのＡＴＰ標準溶液0.5ml
に純水0.5mlを加えて各２倍、５倍、１０倍、２０倍、
５０倍に希釈し、発光試験を行って得られる標準曲線で
ある。
【００２７】同様にＢ線(Ａ線と重複)、Ｃ線、Ｄ線、Ｅ
線はそれぞれ上記10-5molのＡＴＰ標準液に0.1％ＴＣＡ
溶液，0.5％ＴＣＡ溶液，1％ＴＣＡ溶液，5％ＴＣＡ溶
液をそれぞれ加え、これらを上記各倍率に希釈し、発光
試験を行って得られる検量線を表している。
線はそれぞれ上記10-5molのＡＴＰ標準液に0.1％ＴＣＡ
溶液，0.5％ＴＣＡ溶液，1％ＴＣＡ溶液，5％ＴＣＡ溶
液をそれぞれ加え、これらを上記各倍率に希釈し、発光
試験を行って得られる検量線を表している。
【００２８】この図により、0.1％ＴＣＡ溶液を用いた
場合は、純水を用いた場合と同様に直線関係が得られて
おり、ＴＣＡによる発光阻害の影響は殆ど認められな
い。
場合は、純水を用いた場合と同様に直線関係が得られて
おり、ＴＣＡによる発光阻害の影響は殆ど認められな
い。
【００２９】これに対し、0.5％〜5％のＴＣＡ溶液を用
いた場合は、ＴＣＡによる発光阻害が認められるが、上
記トリス緩衝液を用いて0.5％ＴＣＡ溶液においては５
倍、1.0％ＴＣＡ溶液においては１０倍、5％ＴＣＡ溶液
においては５０倍にそれぞれ希釈を行うことにより発光
阻害が殆ど認められなくなっている。
いた場合は、ＴＣＡによる発光阻害が認められるが、上
記トリス緩衝液を用いて0.5％ＴＣＡ溶液においては５
倍、1.0％ＴＣＡ溶液においては１０倍、5％ＴＣＡ溶液
においては５０倍にそれぞれ希釈を行うことにより発光
阻害が殆ど認められなくなっている。
【００３０】上記結果より、ＴＣＡによる発光反応の阻
害はＴＣＡ濃度及びＡＴＰ濃度の双方の影響を受けるこ
とがわかる。
害はＴＣＡ濃度及びＡＴＰ濃度の双方の影響を受けるこ
とがわかる。
【００３１】次にＴＣＡによりＡＴＰの抽出実験を行っ
た。
た。
【００３２】本実施例においてはＡＴＰの測定における
最適ＴＣＡ濃度及び最適希釈倍率を調べるために、まず
各種濃度のＴＣＡ溶液0.5mlに対してそれぞれ10-5mol/
l,10-6mol/l，10-7mol/lのＡＴＰ標準溶液0.5mlを加
え、この溶液を適当な倍率に希釈した。
最適ＴＣＡ濃度及び最適希釈倍率を調べるために、まず
各種濃度のＴＣＡ溶液0.5mlに対してそれぞれ10-5mol/
l,10-6mol/l，10-7mol/lのＡＴＰ標準溶液0.5mlを加
え、この溶液を適当な倍率に希釈した。
【００３３】その後、上記各希釈倍率におけるＡＴＰ濃
度と発光量を測定して標準曲線を作成し、発光試験結果
からＡＴＰ濃度を決定する際にはこの標準曲線に基づい
てＡＴＰ濃度を決定した。以下にその詳細を示す。
度と発光量を測定して標準曲線を作成し、発光試験結果
からＡＴＰ濃度を決定する際にはこの標準曲線に基づい
てＡＴＰ濃度を決定した。以下にその詳細を示す。
【００３４】（Ａ） 標準曲線の作成 （１） 10-5mol/lのＡＴＰ標準液を蒸留水で希釈し
て、10-6mol/l,10-7mol/lのＡＴＰ標準液を調製する。
て、10-6mol/l,10-7mol/lのＡＴＰ標準液を調製する。
【００３５】（２） 10-5mol/l，10-6mol/l，10-7mol/
lの各ＡＴＰ標準液0.5mlに0.1％ＴＣＡ溶液0.5mlを混合
する。
lの各ＡＴＰ標準液0.5mlに0.1％ＴＣＡ溶液0.5mlを混合
する。
【００３６】（３） ４mmol/lのＥＤＴＡを含む0.1mol
/lのトリス緩衝液にて、上記各濃度のＡＴＰとＴＣＡと
の混合溶液を２倍、１０倍、５０倍に希釈する。
/lのトリス緩衝液にて、上記各濃度のＡＴＰとＴＣＡと
の混合溶液を２倍、１０倍、５０倍に希釈する。
【００３７】（４） 上記各希釈溶液0.5mlに発光試薬
0.5mlを加えて反応させ、１秒から３０秒までの３０秒
間の発光量を計測する。
0.5mlを加えて反応させ、１秒から３０秒までの３０秒
間の発光量を計測する。
【００３８】（Ｂ） 活性汚泥中に存在する微生物体内
のＡＴＰ濃度の測定 （１） 活性汚泥0.5mlにＴＣＡ溶液0.5mlを加えた混合
液を調製する。
のＡＴＰ濃度の測定 （１） 活性汚泥0.5mlにＴＣＡ溶液0.5mlを加えた混合
液を調製する。
【００３９】（２） ４mmol/lのＥＤＴＡを含む0.1mol
/lのトリス緩衝液にて上記混合液を２倍、５倍、１０倍
に希釈する。
/lのトリス緩衝液にて上記混合液を２倍、５倍、１０倍
に希釈する。
【００４０】（３） それぞれの希釈液0.5mlと発光試
薬0.5mlとを反応させ、１秒から３０秒までの３０秒間
の発光量を計測する。
薬0.5mlとを反応させ、１秒から３０秒までの３０秒間
の発光量を計測する。
【００４１】上記実験（Ａ）にて得られた、２倍希釈、
１０倍希釈、５０倍希釈を行ったＡＴＰの標準曲線をそ
れぞれ図３、図４、図５に示す。
１０倍希釈、５０倍希釈を行ったＡＴＰの標準曲線をそ
れぞれ図３、図４、図５に示す。
【００４２】また、上記実験（Ｂ）にて得られた発光量
からＡＴＰ濃度を実験（Ａ）にて得られたそれぞれの標
準曲線から読み取ると、２倍希釈においては5.20×10-7
mol/l，１０倍希釈においては1.10×10-6mol/l，５０倍
希釈においては1.20×10-6mol/lという結果が得られ
た。
からＡＴＰ濃度を実験（Ａ）にて得られたそれぞれの標
準曲線から読み取ると、２倍希釈においては5.20×10-7
mol/l，１０倍希釈においては1.10×10-6mol/l，５０倍
希釈においては1.20×10-6mol/lという結果が得られ
た。
【００４３】上記実験においてＴＣＡ濃度は一定なの
で、微生物内からのＡＴＰ抽出量は等しく、従ってこれ
らの測定値は本来は一致するはずである。しかし、発光
試験におけるＴＣＡ濃度は５０倍希釈、１０倍希釈、２
倍希釈の順に高くなっており、特に２倍希釈溶液から得
られる値は発光阻害による影響がもっとも大きく、ＡＴ
Ｐ濃度は他の値の半分程度となっている。
で、微生物内からのＡＴＰ抽出量は等しく、従ってこれ
らの測定値は本来は一致するはずである。しかし、発光
試験におけるＴＣＡ濃度は５０倍希釈、１０倍希釈、２
倍希釈の順に高くなっており、特に２倍希釈溶液から得
られる値は発光阻害による影響がもっとも大きく、ＡＴ
Ｐ濃度は他の値の半分程度となっている。
【００４４】次に、ＴＣＡ濃度を0.5％，1.0％，5.0
％，10.0％として上記実験と同様に標準曲線を作成して
活性汚泥中に存在する微生物体内のＡＴＰ濃度の測定を
行った。尚、上記実験においてＴＣＡ濃度0.5％におい
ては希釈倍率を２倍、５倍、１０倍、５０倍とし、1.0
％においては５倍、１０倍、５０倍、またＴＣＡ濃度5.
0％，10.0％においては２倍、５倍、１０倍、２０倍、
５０倍、１００倍の各希釈倍率にて測定を行った。
％，10.0％として上記実験と同様に標準曲線を作成して
活性汚泥中に存在する微生物体内のＡＴＰ濃度の測定を
行った。尚、上記実験においてＴＣＡ濃度0.5％におい
ては希釈倍率を２倍、５倍、１０倍、５０倍とし、1.0
％においては５倍、１０倍、５０倍、またＴＣＡ濃度5.
0％，10.0％においては２倍、５倍、１０倍、２０倍、
５０倍、１００倍の各希釈倍率にて測定を行った。
【００４５】上記実験によるＡＴＰ濃度の測定結果を表
１に示す。
１に示す。
【００４６】
【表１】
【００４７】この表から、例えば希釈倍率を５０倍とし
た場合におけるＴＣＡ濃度10.0％におけるＡＴＰ濃度の
測定値はＴＣＡ濃度0.1％における測定値に比べて２倍
以上の値となっており、ＴＣＡ濃度が高くなるにつれて
ＡＴＰの抽出効率が高くなっていることがわかる。
た場合におけるＴＣＡ濃度10.0％におけるＡＴＰ濃度の
測定値はＴＣＡ濃度0.1％における測定値に比べて２倍
以上の値となっており、ＴＣＡ濃度が高くなるにつれて
ＡＴＰの抽出効率が高くなっていることがわかる。
【００４８】一方、ＴＣＡ濃度が高くなると発光阻害に
よりＡＴＰ濃度の測定値が小さくなり、測定不能となる
場合もある。例えばＴＣＡ濃度を10％とすると、希釈率
が10倍以下ではＡＴＰは検出不能となっており、また希
釈率２０倍における測定値は希釈率１００倍における測
定値の85％程度の値となっている。
よりＡＴＰ濃度の測定値が小さくなり、測定不能となる
場合もある。例えばＴＣＡ濃度を10％とすると、希釈率
が10倍以下ではＡＴＰは検出不能となっており、また希
釈率２０倍における測定値は希釈率１００倍における測
定値の85％程度の値となっている。
【００４９】上記実験結果より、ＴＣＡにより微生物体
内のＡＴＰを抽出してＡＴＰ濃度の測定を行う場合は、
微生物体内からのＡＴＰ抽出効率を高くするためにＴＣ
Ａ濃度を高くし、また発光阻害を抑制するために希釈倍
率を高くする必要があることがわかる。
内のＡＴＰを抽出してＡＴＰ濃度の測定を行う場合は、
微生物体内からのＡＴＰ抽出効率を高くするためにＴＣ
Ａ濃度を高くし、また発光阻害を抑制するために希釈倍
率を高くする必要があることがわかる。
【００５０】一方、上記のように希釈倍率を高くすると
測定誤差は大きくなる。従って、本実施例においては発
光阻害による影響を抑え、かつ測定誤差が十分小さい希
釈倍率として希釈倍率５０倍を選択し、ＴＣＡ濃度に対
するＡＴＰ濃度の相関を調べた。
測定誤差は大きくなる。従って、本実施例においては発
光阻害による影響を抑え、かつ測定誤差が十分小さい希
釈倍率として希釈倍率５０倍を選択し、ＴＣＡ濃度に対
するＡＴＰ濃度の相関を調べた。
【００５１】上記ＴＣＡ濃度とＡＴＰ濃度の相関図を図
１に示す。
１に示す。
【００５２】この図により、ＴＣＡ濃度が5％以上とな
ると抽出したＡＴＰ濃度はほぼ一定となることが示され
る。
ると抽出したＡＴＰ濃度はほぼ一定となることが示され
る。
【００５３】従って、上記実験結果及び表１により、本
実施例においてはＴＣＡ濃度を5％〜10％とし、また希
釈倍率を２０倍〜１００倍程度とすると精度の高いＡＴ
Ｐの測定を行うことができることがわかる。
実施例においてはＴＣＡ濃度を5％〜10％とし、また希
釈倍率を２０倍〜１００倍程度とすると精度の高いＡＴ
Ｐの測定を行うことができることがわかる。
【００５４】
【発明の効果】上記のように本発明によれば、微生物内
のＡＴＰの抽出が完全に行われる範囲内でＴＣＡ濃度を
できるだけ低く抑え、かつＴＣＡによる発光阻害の影響
が殆ど現れない範囲内にて発光試験時における溶液の希
釈倍率をできるだけ低く抑えることができる。
のＡＴＰの抽出が完全に行われる範囲内でＴＣＡ濃度を
できるだけ低く抑え、かつＴＣＡによる発光阻害の影響
が殆ど現れない範囲内にて発光試験時における溶液の希
釈倍率をできるだけ低く抑えることができる。
【００５５】従って、本発明によれば容易かつ正確に活
性汚泥中の微生物に含まれるＡＴＰの測定を行うことが
できる。
性汚泥中の微生物に含まれるＡＴＰの測定を行うことが
できる。
【図１】ＴＣＡ濃度とＡＴＰ濃度の相関図。
【図２】各ＴＣＡ濃度におけるＡＴＰ濃度と発光量の相
関図。
関図。
【図３】ＡＴＰ濃度と発光量の相関図。
【図４】ＡＴＰ濃度と発光量の相関図。
【図５】ＡＴＰ濃度と発光量の相関図。
【図６】ＡＴＰの抽出工程図。
【図７】ＡＴＰの発光反応式の説明図。
Claims (1)
- 【請求項１】 活性汚泥液にＡＴＰ抽出薬としてトリク
ロロ酢酸溶液を投入してこの混合液を希釈し、この希釈
された混合溶液に発光試薬を添加した際に生じる発光反
応における発光量を計測して活性汚泥液中のＡＴＰの定
量を行う活性汚泥液中のＡＴＰの測定方法において、 前記活性汚泥液に対し１：１の体積比率で投入させる前
記トリクロロ酢酸溶液の濃度を５％〜１０％とするとと
もに、前記活性汚泥液にＡＴＰ抽出薬としてトリクロロ
酢酸溶液を投入した混合液を希釈する際に使用する希釈
液による希釈倍率を２０倍〜１００倍とすることを特徴
とする活性汚泥液中のＡＴＰの測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3154450A JP3003281B2 (ja) | 1991-06-26 | 1991-06-26 | 活性汚泥液中のａｔｐの測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3154450A JP3003281B2 (ja) | 1991-06-26 | 1991-06-26 | 活性汚泥液中のａｔｐの測定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH051994A JPH051994A (ja) | 1993-01-08 |
| JP3003281B2 true JP3003281B2 (ja) | 2000-01-24 |
Family
ID=15584486
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3154450A Expired - Fee Related JP3003281B2 (ja) | 1991-06-26 | 1991-06-26 | 活性汚泥液中のａｔｐの測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3003281B2 (ja) |
-
1991
- 1991-06-26 JP JP3154450A patent/JP3003281B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH051994A (ja) | 1993-01-08 |
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