CN110672588A

CN110672588A - 一种用于化学发光反应体系的清洗试剂及其制备方法

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Publication number: CN110672588A
Application number: CN201810717528.9A
Authority: CN
Inventors: 兰玉勇; 刘丽; 都家琦
Original assignee: Shenyang Medical Land Biotechnology Co Ltd
Current assignee: Shenyang Medical Land Biotechnology Co Ltd
Priority date: 2018-07-03
Filing date: 2018-07-03
Publication date: 2020-01-10

Abstract

本发明属于体外诊断领域，涉及一种用于化学发光反应体系的清洗试剂及其制备方法。试剂pH值在6.77‑6.83，包括增稠剂、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、防腐剂、非离子表面活性剂；每升试剂中增稠剂的浓度1.5‑2.3mol/L，磷酸氢二钠的浓度0.3‑0.8mmol/L，磷酸二氢钾的浓度14.5‑18.7mmol/L，防腐剂的浓度0.05‑0.12g/L，非离子表面活性剂的浓度0.02‑0.11mmol/L，余量为水。本发明提供的试剂对滋生的细菌具有良好的抑制作用；并且清洗效果优良，作用时间长，无残留；降解性好，不易造成环境污染；pH值接近中性，不会对仪器反应体系产生损害负荷，能够普遍应用到不同厂家机型的化学发光免疫分析仪的清洗工作中，可替代相应的原装试剂，降低检测成本，具有一定的临床意义。

Description

一种用于化学发光反应体系的清洗试剂及其制备方法

技术领域

本发明属于体外诊断领域，涉及一种用于化学发光反应体系的清洗试剂及其制备方法。

背景技术

免疫分析是临床诊断的重要手段，包括病毒、激素、肿瘤标志物等多种检测项目。化学发光免疫分析是继放射免疫、荧光免疫、酶免疫分析之后发展起来的最新免疫检测技术，具有灵敏度高、检测范围广、标记物稳定性好等特点。检测结果的准确性有了很大的提高，为临床提供了可靠的诊断依据。

化学发光免疫检测的基本原理是利用生物免疫技术实现待测物、发光标记物与靶物质的特异结合，令其在碱性环境下发光，释放的光能与待测物浓度单调对应，进而通过光能间接得到待测物的浓度。在化学发光免疫检测过程中涉及三个关键环节：加样、洗涤和测量。加样是免疫分析的基础，样本量和试剂分别通过加样针和试剂针吸入反应杯中，才能进行后续分析。临床检测样本种类繁多，包括血液、尿液、脓液、脑脊液等，反应杯和反应体系容易被油脂、蛋白等物质污染，容易滋生细菌，进而影响临床检测结果的准确性。由此可见，对反应体系清洗的效果直接影响到临床检测结果。

目前，市场上流通的清洗试剂除进口外，国内清洗试剂包括酸性试剂、碱性试剂、复合型试剂等。但是，进口清洗试剂成本高，直接增加检测成本。国内清洗试剂为了增强清洗效果，加入了酸碱成分，直接导致仪器反应体系的损害负荷增加，而且清洗效果并不理想，有的试剂甚至会携带污染。市场上流通的清洗试剂不能通用到仪器清洗当中，所以很多产品不能满足临床检测的需求。

因此，有必要研制一种中性清洗试剂，并将该试剂普遍应用到现今临床实验室常用的化学发光免疫分析仪的清洗工作当中。在保证检测结果准确性的前提下，降低检测成本，具有重大意义。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种用于化学发光反应体系的清洗试剂及其制备方法。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为：

一种用于化学发光反应体系的清洗试剂，试剂pH值在6.77-6.83，包括增稠剂、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、防腐剂、非离子表面活性剂；每升试剂中增稠剂的浓度1.5-2.3mol/L，磷酸氢二钠的浓度0.3-0.8mmol/L，磷酸二氢钾的浓度14.5-18.7mmol/L，防腐剂的浓度0.05-0.12g/L，非离子表面活性剂的浓度0.02-0.11mmol/L，余量为水，其中水为纯化水。

所述每升试剂中增稠剂的浓度1.5-1.7mmol/L，磷酸氢二钠的浓度0.3-0.5mmol/L，磷酸二氢钾的浓度14.5-16.2mmol/L，防腐剂的浓度0.05-0.08g/L，非离子表面活性剂的浓度0.02-0.06mmol/L，余量为水，其中水为纯化水。所述增稠剂为氯化钠、硫酸钠或三聚磷酸钠；所述防腐剂为卡松或Proclin 300；所述非离子表面活性剂为吐温20或吐温80。

一种用于化学发光反应体系的清洗试剂的制备方法，按上述比例将磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、增稠剂、表面活性剂以及卡松于水中，搅拌均匀，而后再经纯化水定容，即得到用于化学发光反应体系的清洗试剂。

所述依次添加的各物质过程中前一加入物质溶解完全后再添加下一种物料。

所述增稠剂为氯化钠、硫酸钠或三聚磷酸钠，所选用的增稠剂对清洗试剂的增稠作用是通过与表面活性剂协同实现的。同时，其中的氯化钠具有杀菌、消毒等功能。

所述防腐剂为卡松，卡松是国际上公认的安全、高效、广谱性防腐性。卡松对常见细菌、真菌等微生物具有很强的抑制和灭杀作用，而且其作用时间长，降解性好，具有不产生残留、操作安全、稳定性强、使用成本低等特点。

所述纯化水为饮用水通过纯化水设备经过反渗透、离子交换等方法将水中的导电介质几乎完全除去，又将水中不离解的胶体物质、气体及有机物均去除而制备所得的水。纯化水制备过程(1)预处理，由活性炭过滤器进行预处理，预处理主要目的是去除原水中含有的泥沙、铁锈、胶体物质、悬浮物、色度、异味、生化有机物，(2)反渗透，主要目的是脱盐，出水导电率≦10us.CM以下，(3)离子交换，由离子交换床设备进行，根据要求，出水阻率达到18.2MΩ.CM。

本发明具有如下有益效果：

本发明提供的试剂对滋生的细菌具有良好的抑制作用；并且清洗效果优良，作用时间长，无残留；降解性好，不易造成环境污染；pH值接近中性，不会对仪器反应体系产生损害负荷，能够普遍应用到不同厂家机型的化学发光免疫分析仪的清洗工作中，可替代相应的原装试剂，降低检测成本，具有一定的临床意义。

具体实施方式

下面结合实例对本发明作进一步详细说明，但应理解本发明保护的范围并非仅限于这些实例的范围。

实施例1

本实施中，每1000mL试剂成分为：

具体配置方法：

首先，物料称量。氯化钠称取量为87.6632g，磷酸氢二钠称取量为42.5883g，磷酸氢二钾称取量为1.9733g，卡松称取量为0.0523g，吐温20称取量为0.0243g。

其次，搅拌。向含800ml纯化水的反应釜中，依次加入上述称取磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、吐温20以及卡松，设置转速为300r/min进行搅拌；其中，每次添加物料必须溶解完全后才能添加下一种物料。待所有物料完全溶解后，用纯化水定容。

最后，试剂过滤和分装。使用微孔滤膜对上述获得试剂经过蠕动泵过滤，而后进行分装。于2-8℃保存，待用。

按照上述实施例1提出的问题对下述各实施例进行修改。

实施例2

本实施中，每1000mL试剂成分为：

具体配置方法：

首先，物料称量。氯化钠称取量为262.9893g，磷酸氢二钠称取量为127.7652g，磷酸氢二钾称取量为5.9216g，卡松称取量为0.1572g，吐温20称取量为0.0732g。

其次，搅拌。向含800ml纯化水的反应釜中，依次加入上述称取磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、吐温20以及卡松，设置转速为300r/min进行搅拌；其中，每次添加物料必须溶解完全后才能添加下一种物料。待所有物料完全溶解后，纯化水定容。

实施例3

本实施中，每1000mL试剂成分为：

具体配置方法：

首先，物料称量。氯化钠称取量为1051.9584g，磷酸氢二钠称取量为511.0612g，磷酸氢二钾称取量为23.6703g，卡松称取量为0.6273g，吐温20称取量为0.2921g。

按照上述实施例的记载将氯化钠由硫酸钠或三聚磷酸钠，非离子表面活性剂的吐温20由吐温80进行替换，组成的试剂均能实现本发明的技术效果。

应用例

1)比对试验

采用雅培i2000全自动化学发光免疫分析仪、西门子ADVIA

XP全自动化学发光免疫分析仪、贝克曼UniCel Dxl 800全自动化学发光免疫分析仪、迈瑞CL-2000i全自动化学发光免疫分析仪和迈克IS 1200全自动化学发光免疫分析仪分别对相应的原装试剂和实施例1试剂进行检测，各检测同一组临床样本(40例)，每例样本检测项目包括癌胚抗原CEA、游离T4和乙型病毒肝炎表面抗体。检测结果如表1-5所示。

表1雅培原装试剂和实施例1检测结果

	癌胚抗原CEA	游离T4	乙型病毒肝炎表面抗体
				原装试剂	6.65±4.31	17.99±9.84	32.32±30.09
实施例1	6.69±4.36	18.02±9.62	31.61±29.68
				P值	>0.05	>0.05	>0.05
r<sup>2</sup>值	0.998	0.995	0.997

表2西门子原装试剂和实施例1检测结果

表3贝克曼原装试剂和实施例1检测结果

	癌胚抗原CEA	游离T4	乙型病毒肝炎表面抗体
				原装试剂	6.37±4.25	18.37±9.63	32.24±29.81
实施例1	6.26±4.39	18.45±9.79	32.53±29.65
				P值	>0.05	>0.05	>0.05
r<sup>2</sup>值	0.995	0.992	0.994

表4迈瑞原装试剂和实施例1检测结果

	癌胚抗原CEA	游离T4	乙型病毒肝炎表面抗体
				原装试剂	5.72±3.92	17.78±9.52	31.94±28.72
实施例1	5.87±3.76	17.56±9.39	31.59±28.47
				P值	>0.05	>0.05	>0.05
r<sup>2</sup>值	0.997	0.991	0.995

表5迈克原装试剂和实施例1检测结果

	癌胚抗原CEA	游离T4	乙型病毒肝炎表面抗体
				原装试剂	5.89±3.82	17.86±9.92	31.76±28.95
实施例1	5.76±3.95	17.65±10.03	31.97±29.11
				P值	>0.05	>0.05	>0.05
r<sup>2</sup>值	0.993	0.998	0.991

由表1-5可知，本发明试剂与各原装试剂各项检测值均接近，对应两组数据进行t检验，均显示差异无统计学意义(p>0.05)。对应两组数据进行相关性分析，相关系数r²均不小于0.990，说明本发明试剂准确度良好，且与雅培、西门子、贝克曼、迈瑞及迈克原装试剂一致性良好。

2)重复性试验

采用实施例2配置试剂，对本发明试剂进行的重复性进行了研究，并与雅培、西门子、贝克曼、迈瑞及迈克原装试剂进行对比。分别用浓度为癌胚抗原CEA(4.00ng/mL、6.00ng/mL)、游离T4(15.0pmol/L、28.0pmol/L)、乙型病毒肝炎表面抗体(5.55mIU/mL、16.12mIU/mL)的样本，在相应分析仪上，对实施例2和各原装试剂各重复检测10次，按公式(1)计算批内变异系数(CV)，结果见表6-10。

表6雅培原装试剂和实施例2检测结果

表7西门子原装试剂和实施例2检测结果

表8贝克曼原装试剂和实施例2检测结果

表9迈瑞原装试剂和实施例2检测结果

表10迈克原装试剂和实施例2检测结果

表6-10结果表明，本发明试剂的批内变异系数CV均小于10％，与雅培、西门子、贝克曼、迈瑞及迈克试剂的批内变异系数CV接近，符合一般诊断试剂的批内变异系数不大于10％的要求。由此说明本发明试剂的重复性良好。

3)稳定性试验

采用实施例3配置的试剂，对本发明试剂的稳定性进行了研究，并与雅培原装试剂进行对比。将实施例3试剂以及雅培原装试剂分别分为6瓶，每瓶为2L，于室温环境下分别放置0个月、3个月、6个月、9个月、12个月、15个月后进行检测，用浓度分别为4.62ng/mL CEA、10.0pmol/L FT4、5.05mIU/mL HBsAb的样本各重复检测3次，按公式(2)计算其相对偏差(B)，结果如表11-15所示。

式中：M—测试结果均值；

T—标准物质标示值。

表11雅培原装试剂和实施例3检测结果

由计算其相对偏差，偏差越小则说明清洗效果越好，无残留，试剂稳定性好。根据表11结果显示，本发明试剂于室温环境中放置15个月后，检测样本的准确度良好，说明本发明试剂的清洗效果能与雅培原装试剂的清洗效果接近，本发明试剂的稳定性好。

上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明的保护范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。

Claims

1.一种用于化学发光反应体系的清洗试剂，其特征在于：试剂pH值在6.77-6.83，包括增稠剂、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、防腐剂、非离子表面活性剂；每升试剂中增稠剂的浓度1.5-2.3mol/L，磷酸氢二钠的浓度0.3-0.8mmol/L，磷酸二氢钾的浓度14.5-18.7mmol/L，防腐剂的浓度0.05-0.12g/L，非离子表面活性剂的浓度0.02-0.11mmol/L，余量为水。

2.按权利要求1所述的用于化学发光反应体系的清洗试剂，其特征在于：所述每升试剂中增稠剂的浓度1.5-1.7mmol/L，磷酸氢二钠的浓度0.3-0.5mmol/L，磷酸二氢钾的浓度14.5-16.2mmol/L，防腐剂的浓度0.05-0.08g/L，非离子表面活性剂的浓度0.02-0.06mmol/L，余量为水。

3.按权利要求1或2所述的用于化学发光反应体系的清洗试剂，其特征在于：所述增稠剂为氯化钠、硫酸钠或三聚磷酸钠；所述防腐剂为卡松或Proclin 300；所述非离子表面活性剂为吐温20或吐温80。

4.一种权利要求1所述的用于化学发光反应体系的清洗试剂的制备方法，其特征在于：按上述比例将磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、增稠剂、表面活性剂以及卡松于水中，搅拌均匀，而后再经水定容，即得到用于化学发光反应体系的清洗试剂。

5.按权利要求4所述的用于化学发光反应体系的清洗试剂的制备方法，其特征在于：所述依次添加的各物质过程中前一加入物质溶解完全后再添加下一种物料。