CN115980332B - 一种可提高免疫诊断试剂灵敏度的增强液及其制配方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种可提高免疫诊断试剂灵敏度的增强液及其制配方法,组分包括缓冲液、表面活性剂、催化剂、金属螯合剂和其他化合物;催化剂包括三乙基苄基氯化铵和N,N‑二甲基‑N‑十八碳酰基氯化苄铵中一种或两种,其他化合物是N‑油酰基‑N‑甲基牛磺酸钠、十二烷基磺酸铵和四辛基氯化铵的一种或多种;配制方法如下:(1)配制缓冲液;(2)在缓冲液中加入表面活性剂、催化剂、金属螯合剂和其他化合物,混合均匀后调节pH值至8.4;本发明增强液可处理用于免疫诊断检测的样本,克服免疫诊断试剂在实验过程中出现灵敏度不够而导致临床样本结果容易出现假阴性而漏诊的难点,有效解决免疫诊断试剂灵敏度不够的问题。
Description
技术领域
本发明属于体外诊断技术领域,具体涉及一种可提高免疫诊断试剂灵敏度的增强液,也涉及该增强液的制配方法和应用。
背景技术
免疫诊断属于体外诊断试剂领域的其中一个细分领域,是应用免疫学的理论、技术和方法诊断各种疾病和测定免疫状态,被广泛应用于肝炎检测、性病检测、肿瘤检测、孕检等的测定中。
免疫诊断检测方法是应用免疫学理论设计的一系列测定抗原、抗体的实验方法,主要原理是通过抗原或抗体特异性捕获样本中的待测物,再通过提前结合发光物质的抗原或抗体对捕获好的待测物进行标记,从而间接对待测物进行发光物质的标记,通过仪器对待测物上标记的发光物质进行测定其发光值,通过拟合曲线计算即可得到待测物的浓度。
根据免疫诊断检测方法的原理可知,检测精度与抗体/抗原的特异性捕获待测样本中抗原/抗体的能力相关,如果该特异性捕获能力低,导致一些微量或低浓度样本中的抗原/抗体没有被捕获或捕获的量很少,就会出现测不出浓度或测值浓度偏低的现象,导致出现假阴性的结果,也即,试剂的灵敏度不高。
在实际检测操作中,试剂的灵敏度不仅跟抗原抗体有关,还跟试剂所用的缓冲液体系有关,合适的缓冲体系可以提高抗体/抗原的特异性识别能力,从而提高特异性捕获能力,有效降低临床样本检测到假阴性的现象,如选用不合适的缓冲体系,则会导致试剂灵敏度不够,进而影响临床样本测值的准确性。
因此,研发一种可提高免疫诊断试剂灵敏度的增强液是非常有必要的,这对于未来免疫诊断类试剂的开发也有帮助。
发明内容
为解决上述技术问题,本发明的目的在于提供一种可提高免疫诊断试剂灵敏度的增强液及其制配方法,克服了免疫诊断试剂在实验过程中出现灵敏度不够而导致临床样本结果容易出现假阴性而导致漏诊的一个难点,可有效解决免疫诊断试剂灵敏度不够的问题。
为实现上述发明目的,本发明采取的技术方案如下:
在本发明的第一方面,本发明提供一种可提高免疫诊断试剂灵敏度的增强液,包括缓冲液和溶解于缓冲液中的以下成分:表面活性剂、催化剂、金属螯合剂和其他化合物;
其中,所述催化剂是苄胺衍生物的氯化物,所述其他化合物是N-油酰基-N-甲基牛磺酸钠、十二烷基磺酸铵和四辛基氯化铵的一种或多种。
本发明的增强液是在缓冲液内加入多种辅助的物质以起到增强抗体/抗原特异性识别的目的,在本发明中,催化剂的作用是加快抗原与抗体之间的结合从而提高检测效率,使检测灵敏度得到提升;其他化合物的作用是促进离子化合物与不溶于水的有机物质在低极性溶液中进行反应,以及加速这些反应,其中,四辛基氯化铵还具有一定的分散和增溶的能力,显著降低液体表面张力,有助于增强分子间的结合能力。
优选的,所述催化剂包括三乙基苄基氯化铵(也即苄基三乙基氯化铵)、N,N-二甲基-N-十八碳酰基氯化苄铵的一种或两种。
优选的,所述催化剂的质量占缓冲液质量的百分比是0.2~1.0%,其含义是每1kg缓冲液中含有2~10g的催化剂,具体的,当催化剂包括三乙基苄基氯化铵和N,N-二甲基-N-十八碳酰基氯化苄铵时,三乙基苄基氯化铵的质量占缓冲液质量的百分比是0.1~0.5%,N,N-二甲基-N-十八碳酰基氯化苄铵的质量占缓冲液质量的百分比是0.1~0.5%。
优选的,所述其他化合物的质量占缓冲液质量的百分比是1.5~4.5%,其含义是每1kg缓冲液中含有15~45g的其他化合物,具体的,N-油酰基-N-甲基牛磺酸钠的质量占缓冲液质量的百分比是0.5~1.5%,十二烷基磺酸铵的质量占缓冲液质量的百分比是0.5~1.5%,四辛基氯化铵的质量占缓冲液质量的百分比是0.5~1.5%。
优选的,所述表面活性剂的质量占缓冲液质量的百分比是0.1~0.3%,其含义是每1kg缓冲液中含有10~30g的表面活性剂。
表面活性剂是非离子型表面活性剂和离子型表面活性剂中的一种或多种,容易理解的是,表面活性剂不与增强液中的其他成分发生反应,优选的在本发明中,表面活性剂包括非离子型表面活性剂和离子型表面活性剂中的一种或多种,更优选的,表面活性剂包括Triton X-100和十二烷基硫酸钠中的一种或两种,其中,当表面活性剂同时包含Triton X-100和十二烷基硫酸钠时,Triton X-100的质量占缓冲液质量的百分比是0.05~0.15%,十二烷基硫酸钠的质量占缓冲液质量的百分比是0.05~0.15%。
优选的,所述金属螯合剂的质量占缓冲液质量的百分比是0.1~0.2%,其含义是每1kg缓冲液中含有10~20g的金属螯合剂。金属螯合剂的作用是减少金属离子对测试结果的影响,容易理解的是,金属螯合剂不与增强液中的其他成分发生反应。本发明的金属螯合剂是EDTA、DTPA等的一种或多种,优选的,金属螯合剂是EDTA。
在本发明中,缓冲液是现有常规的缓冲液,与增强液中其他成分不发生反应,优选的,缓冲液是HEPES缓冲液,其浓度是10mmol/L。
在本发明的第二方面,本发明提供了一种可提高免疫诊断试剂灵敏度的增强液的制配方法,具体步骤如下:
(1)配制浓度为10mmol/L的HEPES缓冲液;
(2)在HEPES缓冲液中加入表面活性剂、催化剂、金属螯合剂和其他化合物,混合均匀后调节pH值至8.4;
其中,步骤(2)中,以每1kg缓冲液为基准计算,各成分的添加量分别是催化剂2~10g、其他化合物15~45g、表面活性剂10~30g和金属螯合剂10~20g。
在本发明的第三方面,本发明提供了一种可提高免疫诊断试剂灵敏度的增强液的应用,使用增强液处理用于免疫诊断检测的样本,以提高免疫诊断试剂的灵敏度。
有益效果:
本发明提供一种可提高免疫诊断试剂灵敏度的增强液,克服了免疫诊断试剂在实验过程中出现灵敏度不够而导致临床样本结果容易出现假阴性而导致漏诊的一个难点,通过本发明的增强液,可以将免疫诊断试剂中试剂灵敏度不够的问题有效解决,让产品的灵敏度大大提高,质量也大大提升,更能满足临床要求,减少医院漏诊。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将说明本发明的具体实施方式。显而易见地,下面描述仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些实施例获得其他的实施方式。
本发明提供一种可用于处理待测样本的增强液,以提高免疫诊断试剂灵敏度。增强液是一种改进优化的缓冲体系,在现有的缓冲液体系中加入辅助功能的物质,在不影响检测效果的前提下,增强抗原/抗体的特异性捕获能力。
具体的,增强液包括缓冲液和溶解于缓冲液中的催化剂、表面活性剂、金属螯合剂和其他化合物,其中,催化剂和其他化合物对于增强抗原/抗体的特异性捕获能力有关键作用。
在本发明中,缓冲剂是现有常规的缓冲剂,可根据免疫检测的具体项目而定,容易理解的是,缓冲剂中的有效成分不与增强液的其他成分发生反应。本发明的缓冲剂体系优选为10mmol/L的HEPES缓冲液,对细胞无毒副作用,并能长时间控制恒定的pH范围,常常被用在病毒保存液或者细胞保存液、细胞培养。
本发明的催化剂是苄胺衍生物的氯化物,结构如下所示,其中,R1、R2、R3包括氢、烷基、碳酰基的任意一种。
催化剂包括三乙基苄基氯化铵和N,N-二甲基-N-十八碳酰基氯化苄铵的一种或两种,三乙基苄基氯化铵(即苄基三乙基氯化铵)有杀菌作用,N,N-二甲基-N-十八碳酰基氯化苄铵具有阳离子表面活性剂的效果,更重要的是,本发明创新性地将三乙基苄基氯化铵和N,N-二甲基-N-十八碳酰基氯化苄铵作为提高灵敏度的催化剂使用,加快抗原与抗体之间的结合。
在本发明的实践中,单一种类的催化剂具有提高免疫诊断试剂检测灵敏度的效果,而多种类催化剂混合使用的效果更好,为了最大限度地提高检测灵敏度,优选的,本发明的催化剂由三乙基苄基氯化铵和N,N-二甲基-N-十八碳酰基氯化苄铵组成。
在本发明中,以缓冲液的质量为基准,催化剂的质量占缓冲液质量的百分比是0.2~1.0%,具体的,当催化剂仅包括三乙基苄基氯化铵或N,N-二甲基-N-十八碳酰基氯化苄铵时,三乙基苄基氯化铵的质量占缓冲液质量的百分比是0.2~1.0%,或N,N-二甲基-N-十八碳酰基氯化苄铵的质量占缓冲液质量的百分比是0.2~1.0%;当催化剂同时包含三乙基苄基氯化铵和N,N-二甲基-N-十八碳酰基氯化苄铵时,三乙基苄基氯化铵的质量占缓冲液质量的百分比是0.1~0.5%,N,N-二甲基-N-十八碳酰基氯化苄铵的质量占缓冲液质量的百分比是0.1~0.5%。
其他化合物的作用是促进离子化合物与不溶于水的有机物质在低极性溶剂中进行反应,以及加速这些反应,具体地,其他化合物对于催化剂的催化作用有着促进效果,其中,四辛基氯化铵具有一定的分散和增溶能力等特点,能够显著地降低液体表面张力,大大地增强分子间的结合能力。
在本发明的实践中,N-油酰基-N-甲基牛磺酸钠、十二烷基苯磺酸铵或四辛基氯化铵对于催化剂均有促进效果,有助于提高检测的准确性,而多种其他化合物的混合使用,对于催化剂的促进效果最好,为了最大限度地提高检测灵敏度,优选的,本发明的其他化合物由N-油酰基-N-甲基牛磺酸钠、十二烷基苯磺酸铵和四辛基氯化铵组成。
在本发明中,以缓冲液的质量为基准,其他化合物的质量占缓冲液质量的百分比是1.5~4.5%。其他化合物包括N-油酰基-N-甲基牛磺酸钠、十二烷基苯磺酸铵和四辛基氯化铵的一种或多种,当其他化合物同时包含N-油酰基-N-甲基牛磺酸钠、十二烷基苯磺酸铵和四辛基氯化铵三者时,N-油酰基-N-甲基牛磺酸钠的质量占缓冲液质量的百分比是0.5~1.5%,十二烷基磺酸铵的质量占缓冲液质量的百分比是0.5~1.5%,四辛基氯化铵的质量占缓冲液质量的百分比是0.5~1.5%。
金属螯合剂的作用是屏蔽杂质金属离子对于检测的影响,金属螯合剂是EDTA、DTPA等的一种或多种。在本发明中,以缓冲液的质量为基准,金属螯合物的质量占缓冲液质量的百分比是0.1~0.2%。
表面活性剂包括非离子型表面活性剂和离子型表面活性剂的一种或多种,具体的,表面活性剂包括Triton X-100和十二烷基硫酸钠中的一种或两种。在本发明中,以缓冲液的质量为基准,表面活性剂的质量占缓冲液质量的百分比是0.1~0.3%。当表面活性剂同时包含Triton X-100和十二烷基硫酸钠时,Triton X-100的质量占缓冲液质量的百分比是0.05~0.15%,十二烷基硫酸钠的质量占缓冲液质量的百分比是0.05~0.15%。
本发明也提供了一种可用于处理待测样本的增强液的制配方法,步骤如下:
(1)配制浓度为10mmol/L的HEPES缓冲液;
(2)在HEPES缓冲液中加入表面活性剂、催化剂、金属螯合剂和其他化合物,混合均匀后调节pH值至8.4;
其中,步骤(2)中,以每1kg缓冲液为基准计算,各成分的添加量分别是催化剂2~10g、其他化合物15~45g、表面活性剂10~30g和金属螯合剂10~20g。
下面以具体实施例详细介绍本发明的技术方案。
实施例1
在100g 10mmol/L的HEPES缓冲液中加入0.05%的Triton X-100、0.05%的十二烷基硫酸钠、0.1%的三乙基苄基氯化铵、0.1%的N,N-二甲基-N-十八碳酰基氯化苄铵、0.1%的EDTA、0.5%的N-油酰基-N-甲基牛磺酸钠、0.5%的十二烷基苯磺酸铵、0.5%的四辛基氯化铵混匀后调节pH值为8.4,得到增强液。
实施例2
在100g 10mmol/L的HEPES缓冲液中加入0.1%的Triton X-100、0.1%的十二烷基硫酸钠、0.25%的三乙基苄基氯化铵、0.25%的N,N-二甲基-N-十八碳酰基氯化苄铵、0.15%的EDTA、1.0%的N-油酰基-N-甲基牛磺酸钠、1.0%的十二烷基苯磺酸铵、1.0%的四辛基氯化铵混匀后调节pH值为8.4,得到增强液。
实施例3
在100g 10mmol/L的HEPES缓冲液中加入0.15%的Triton X-100、0.15%的十二烷基硫酸钠、0.5%的三乙基苄基氯化铵、0.5%的N,N-二甲基-N-十八碳酰基氯化苄铵、0.2%的EDTA、1.5%的N-油酰基-N-甲基牛磺酸钠、1.5%的十二烷基苯磺酸铵、1.5%的四辛基氯化铵混匀后调节pH值为8.4,得到增强液。
实施例4
在100g 10mmol/L的HEPES缓冲液中加入0.1%的Triton X-100、0.1%的十二烷基硫酸钠、0.25%的三乙基苄基氯化铵、0.15%的EDTA、1.0%的N-油酰基-N-甲基牛磺酸钠、1.0%的十二烷基苯磺酸铵、1.0%的四辛基氯化铵混匀后调节pH值为8.4,得到增强液。
实施例5
在100g 10mmol/L的HEPES缓冲液中加入0.1%的Triton X-100、0.1%的十二烷基硫酸钠、0.25%的N,N-二甲基-N-十八碳酰基氯化苄铵、0.15%的EDTA、1.0%的N-油酰基-N-甲基牛磺酸钠、1.0%的十二烷基苯磺酸铵、1.0%的四辛基氯化铵混匀后调节pH值为8.4,得到增强液。
实施例6
在100g 10mmol/L的HEPES缓冲液中加入0.1%的Triton X-100、0.1%的十二烷基硫酸钠、0.25%的三乙基苄基氯化铵、0.25%的N,N-二甲基-N-十八碳酰基氯化苄铵、0.15%的EDTA、1.0%的N-油酰基-N-甲基牛磺酸钠混匀后调节pH值为8.4,得到增强液。
实施例7
在100g 10mmol/L的HEPES缓冲液中加入0.1%的Triton X-100、0.1%的十二烷基硫酸钠、0.25%的三乙基苄基氯化铵、0.25%的N,N-二甲基-N-十八碳酰基氯化苄铵、0.15%的EDTA、1.0%的十二烷基苯磺酸铵混匀后调节pH值为8.4,得到增强液。
实施例8
在100g 10mmol/L的HEPES缓冲液中加入0.1%的Triton X-100、0.1%的十二烷基硫酸钠、0.25%的三乙基苄基氯化铵、0.25%的N,N-二甲基-N-十八碳酰基氯化苄铵、0.15%的EDTA、1.0%的四辛基氯化铵混匀后调节pH值为8.4,得到增强液。
对比例1
在100g 10mmol/L的HEPES缓冲液中加入0.1%的Triton X-100、0.1%的十二烷基硫酸钠、0.15%的EDTA、1.0%的N-油酰基-N-甲基牛磺酸钠、1.0%的十二烷基苯磺酸铵、1.0%的四辛基氯化铵混匀后调节pH值为8.4,得到增强液。
对比例2
在100g 10mmol/L的HEPES缓冲液中加入0.1%的Triton X-100、0.1%的十二烷基硫酸钠、0.25%的三乙基苄基氯化铵、0.25%的N,N-二甲基-N-十八碳酰基氯化苄铵、0.15%的EDTA混匀后调节pH值为8.4,得到增强液。
从化学发光法免疫诊断试剂项目中挑选高敏肌钙蛋白I(hs-cTnI)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)这2个项目进行以下实验验证,每个项目各收集20例有进口试剂测值的样本,用实施例1-3配制的增强液处理样本,对照为未经增强液处理的样本(对照组),最后的结果分别与进口试剂结果进行符合率计算,再分别进行比较,如下表所示。
表1高敏肌钙蛋白I(hs-cTnI)实验结果(cutoff值:≤0.034ng/mL)
表2 高敏肌钙蛋白I(hs-cTnI)实验结果的符合率数据
表3 肌酸激酶同工酶(CK-MB)实验结果(cutoff值:≤5.8ng/mL)
表4肌酸激酶同工酶(CK-MB)实验结果的符合率
从上面表格的实验结果进行分析得出,未经增强液处理的样本,跟进口试剂的结果相比,结果普遍较低,且假阴性结果较多,其中高敏肌钙蛋白I(hs-cTnI)的总符合率为45%,肌酸激酶同工酶(CK-MB)的总符合率为40%,而经过实施例增强液处理的样本总符合率都大于或等于80%,符合率有一定提高,通过分析可以看出,实施例1-3均是含有多种催化剂及多种其他化合物,由于实施例1的浓度相比于实施例2和3较低,实施例1的样本总符合率低于实施例2-3的样本总符合率,实施例2、实施例3配制出来的增强液效果最好,总符合率都能做到100%,避免了假阴性的存在,且比对结果好,测值准确。
根据实施例2和实施例4、5可知,在本发明中,混合使用不同苄胺衍生物的氯化物比单独使用一种苄胺衍生物的氯化物的效果要好,即使是仅单独使用一种苄胺衍生物的氯化物的情况下,样本总符合率都在80%以上,而根据对比例1的结果显示,在未使用催化剂的情况下,样本总符合率发生显著下降,在高敏肌钙蛋白I检测项目中,样本总符合率甚至下降至65%,说明催化剂对于提高检测准确性有着重要作用。根据实施例2-5可知,催化剂为三乙基苄基氯化铵和N,N-二甲基-N-十八碳酰基氯化苄铵时的效果最好。根据实施例2和实施例6-8及对比例2可知,本发明的其他化合物对于检测结果也存在着明显的影响,根据检测结果可知,三种其他化合物混合使用的效果最好,但是当不加入其他化合物成分时,样本总符合率也发生显著下降。
由此可知,本发明的增强液可以将免疫诊断试剂试剂灵敏度有效的提高。
以上对本发明所提供的实施例进行了详细阐述。本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述,以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的核心思想。应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明的原理的前提下,还可以本发明进行若干改进和修饰,这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
Claims (6)
1.一种可提高免疫诊断试剂灵敏度的增强液,包括缓冲液和溶解于缓冲液中的以下成分:表面活性剂、催化剂、金属螯合剂和其他化合物;
其中,所述催化剂由三乙基苄基氯化铵和N ,N-二甲基-N-十八碳酰基氯化苄铵组成,所述其他化合物由N-油酰基-N-甲基牛磺酸钠、十二烷基磺酸铵和四辛基氯化铵组成;
所述缓冲液是HEPES缓冲液;
所述表面活性剂包括Triton X-100和十二烷基硫酸钠中的一种或两种;
以缓冲液的质量为基准,所述金属螯合剂的质量占缓冲液质量的百分比是0.1~0.2%;所述金属螯合剂包括EDTA、DTPA、PEG-EA、PEO和柠檬酸的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的可提高免疫诊断试剂灵敏度的增强液,其特征在于,以缓冲液的质量为基准,所述催化剂的质量占缓冲液质量的百分比是0.2~1.0%。
3.根据权利要求1所述的可提高免疫诊断试剂灵敏度的增强液,其特征在于,以缓冲液的质量为基准,所述其他化合物的质量占缓冲液质量的百分比是1 .5~4 .5%。
4.根据权利要求1所述的可提高免疫诊断试剂灵敏度的增强液,其特征在于,以缓冲液的质量为基准,所述表面活性剂的质量占缓冲液质量的百分比是0 .1~0 .3%。
5.一种可提高免疫诊断试剂灵敏度的增强液的制配方法,其特征在于,制备如权利要求1-4任一项所述的增强液,步骤如下:
(1)配制缓冲液;
(2)在缓冲液中加入表面活性剂、催化剂、金属螯合剂和其他化合物,混合均匀后调节pH值至8.4。
6.一种可提高免疫诊断试剂灵敏度的增强液的应用,其特征在于,将如权利要求1-4任一项所述的增强液处理用于免疫诊断检测的样本。
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GR01 | Patent grant | ||
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