CN109991408B - 一种抗体稀释液组合物、抗体稀释液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
发明人首先提供了一种抗体稀释液组合物，所述抗体稀释液组合物组分中包括聚乙烯吡咯烷酮和腺苷三磷酸镁盐。其次，发明人提供了一种抗体稀释液及其制备方式，所述抗体稀释液包括以下重量份的组分：磷酸二氢钠：0.1‑0.2份、磷酸氢二钠：3‑3.2份、氯化钠：8.9‑9.1份、小牛血清白蛋白9.5‑10.5份、Proclin 300 0.8‑1.2份、聚乙烯吡咯烷酮0.9‑1.1份、腺苷三磷酸镁盐0.4‑0.6份、去离子水950‑1050份。上述技术方案采用了聚乙烯吡咯烷酮和腺苷三磷酸镁盐作为抗体稀释液的成分；稀释液中含有聚乙烯吡咯烷酮和腺苷三磷酸镁盐组合后，多克隆抗体的非特异性背景染色减少，同时染色中“阴阳脸”出现的情况也降低。
Description
技术领域
本发明涉及免疫技术领域，具体涉及一种抗体稀释液组合物、抗体稀释液及其制备方法。
背景技术
目前在免疫组化领域中，抗体分为单克隆抗体和多克隆抗体，多克隆抗体由于批次产量大价格便宜，在该领域中应用较广。但由于多克隆抗体由多个抗原决定簇免疫产生，因此与单克隆抗体抗体相比，特异性较弱，在组织上会出现非特异性背景染色，干扰病理医生的判断，甚至会影响病理诊断的结果。为克服多克隆抗体的以上问题，目前可采用降低抗体工作液浓度的方法，但该方法会降低抗体染色强度，对一些弱阳性病理的判断有影响，容易造成漏诊的情况。
发明内容
为了解决背景技术所述的多克隆抗体在组织上易出现非特异性染色的情况，发明人提供了一种能有效减少多克隆抗体的非特异性背景染色情况的抗体稀释液；同时该稀释液也适用于单克隆抗体，可以有效减少单克隆或多克隆抗体染色中出现的“阴阳脸”现象，为广谱性抗体稀释液。
为实现目的，发明人首先提供了一种抗体稀释液组合物，所述抗体稀释液组合物组分中包括聚乙烯吡咯烷酮和腺苷三磷酸镁盐。
进一步地，所述抗体稀释液组合物包括以下重量份的组分：磷酸二氢钠 0.1-0.2份、磷酸氢二钠3-3.2份、氯化钠8.9-9.1份、小牛血清白蛋白 9.5-10.5份、聚乙烯吡咯烷酮0.9-1.1份、腺苷三磷酸镁盐0.4-0.6份。
其次，发明人提供了一种抗体稀释液，所述抗体稀释液包括以下重量份的组分：磷酸二氢钠：0.1-0.2份、磷酸氢二钠：3-3.2份、氯化钠：8.9-9.1 份、小牛血清白蛋白9.5-10.5份、Proclin 300 0.8-1.2份、聚乙烯吡咯烷酮0.9-1.1份、腺苷三磷酸镁盐0.4-0.6份、去离子水950-1050份。
进一步地，所述抗体稀释液包括以下重量份的组分：磷酸二氢钠：0.15 份、磷酸氢二钠：3.1份、氯化钠：9.0份、小牛血清白蛋白10份、Proclin 3001份、聚乙烯吡咯烷酮1份、腺苷三磷酸镁盐0.5份、去离子水1000份。
进一步地，所述抗体稀释液的pH值为7.3-7.5。
发明人最后提供了上述抗体稀释液的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：将磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠、小牛血清白蛋白和去离子水混合后搅拌均匀；再加入Proclin 300、聚乙烯吡咯烷酮、腺苷三磷酸镁盐，混合均匀后，使用1MNaOH或1MHCl将溶液pH值调至7.4±0.1，得到所述抗体稀释液。
区别于现有技术，上述技术方案采用了聚乙烯吡咯烷酮和腺苷三磷酸镁盐作为抗体稀释液的成分；稀释液中含有聚乙烯吡咯烷酮和腺苷三磷酸镁盐组合后，多克隆抗体的非特异性背景染色减少，同时染色中“阴阳脸”出现的情况也降低。
附图说明
图1为多克隆抗体PV对尖锐湿疣组织的染色结果对比图；
图2为多克隆抗体Thyroglobulin对结节性甲状腺肿组织的染色结果对比图；
图3为鼠单克隆抗体CD117(2E4)对应组织胃肠道间质瘤的染色结果对比图。
具体实施方式
为详细说明技术方案的技术内容、构造特征、所实现目的及效果，以下结合具体实施例并配合附图详予说明。
术语解释：“阴阳脸”着色是指免疫组化染色中，染色试剂仅仅覆盖了部分的待染色的组织，导致组织一半着色一半无着色，形成交界清晰或不甚清晰的两种染色结果。“阴阳脸”形成的原因有多种 ，例如：加试剂后试剂未流散开而集中在部分组织上；孵育盒不平，切片倾斜，导致试剂流向一边，部分组织未被试剂覆盖等等。
实施例1抗体稀释液的配制：
将0.15g磷酸二氢钠、3.1g磷酸氢二钠、9.0g氯化钠、10g小牛血清白蛋白和1L去离子水混合后搅拌均匀；再加入1g Proclin 300、1g聚乙烯吡咯烷酮、0.5g腺苷三磷酸镁盐，混合均匀后，使用1MNaOH或1MHCl将溶液 pH值调至7.4±0.1，得到所述抗体稀释液。
聚乙烯吡咯烷酮是一种非离子型高分子化合物，有亲水基团、又有亲油基团；腺苷三磷酸镁盐(ATP-Mg)为生物助溶剂，可有效促进蛋白的分散与溶解；两者同时加入稀释液配方中，能在最终染色强度不变的情况下，减少多克隆抗体在组织中产生的非特异性背景染色，同时能够提高抗体对组织的浸染度，使得抗体均匀分散在组织上，能有效降低不良操作引起的“阴阳脸”边缘效应。
实施例2抗体稀释液的配制：
将0.1g磷酸二氢钠、3.0g磷酸氢二钠、8.9g氯化钠、9.5g小牛血清白蛋白和950ml去离子水混合后搅拌均匀；再加入0.8g Proclin 300、0.9g聚乙烯吡咯烷酮、0.4g腺苷三磷酸镁盐，混合均匀后，使用1MNaOH或1MHCl将溶液pH值调至7.4±0.1，得到所述抗体稀释液。
实施例3抗体稀释液的配制：
将0.2g磷酸二氢钠、3.2g磷酸氢二钠、9.1g氯化钠、10.5g小牛血清白蛋白和1050ml去离子水混合后搅拌均匀；再加入1.2g Proclin 300、1.1g 聚乙烯吡咯烷酮、0.6g腺苷三磷酸镁盐，混合均匀后，使用1MNaOH或1MHCl 将溶液pH值调至7.4±0.1，得到所述抗体稀释液。
用实施例1配制的抗体稀释液和市售的常规抗体稀释液(对比例)对20 个易产生背景的兔多克隆抗体(原料抗体的浓度一般较高，在使用前用抗体稀释液进行稀释)稀释到工作浓度，使用稀释后到达工作浓度的抗体对组织进行染色。
原料抗体名称和对应染色组织名称见下表：
以上多克隆抗体染色中，对比例中有4个抗体出现非特异性背景染色、1 个抗体出现“阴阳脸”的情况，而实施例1在染色强度相同的情况下，抗体均没有出现背景染色。说明本发明的抗体稀释液配方能够有效的减少多克隆抗体非特异性背景染色的情况。
其中，多克隆抗体PV对尖锐湿疣组织的染色结果对比图为图1；多克隆抗体Thyroglobulin对结节性甲状腺肿组织的染色结果对比图为图2。
此外，发明人还对20个单克隆抗体进行了免疫组化对比染色，其中对比例中鼠单克隆抗体CD117(2E4)，其对应组织胃肠道间质瘤出现“阴阳脸”着色，而实施例1的染色强度相同，而无背景染色；具体见图3。
综上，本发明所提供的抗体稀释液，能够在不降低染色强度的情况下，有效降低多克隆抗体的非特异性背景染色，同时能有效降低抗体染色中的“阴阳脸”情况。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者终端设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者终端设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括……”或“包含……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者终端设备中还存在另外的要素。此外，在本文中，“大于”、“小于”、“超过”等理解为不包括本数；“以上”、“以下”、“以内”等理解为包括本数。
需要说明的是，尽管在本文中已经对上述各实施例进行了描述，但并非因此限制本发明的专利保护范围。因此，基于本发明的创新理念，对本文所述实施例进行的变更和修改，或利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，直接或间接地将以上技术方案运用在其他相关的技术领域，均包括在本发明的专利保护范围之内。
Claims (3)
1.一种免疫组化抗体稀释液，其特征在于，所述抗体稀释液包括以下重量份的组分：磷酸二氢钠0.1-0.2份、磷酸氢二钠3-3.2份、氯化钠8.9-9.1份、小牛血清白蛋白9.5-10.5份、Proclin 300 0.8-1.2份、聚乙烯吡咯烷酮0.9-1.1份、腺苷三磷酸镁盐0.4-0.6份、去离子水950-1050份。
2.根据权利要求1所述的抗体稀释液，其特征在于，所述抗体稀释液包括以下重量份的组分：磷酸二氢钠0.15份、磷酸氢二钠3.1份、氯化钠 9.0份、小牛血清白蛋白10份、Proclin300 1份、聚乙烯吡咯烷酮 1份、腺苷三磷酸镁盐 0.5份、去离子水1000份。
3.根据权利要求1或2所述的抗体稀释液，其特征在于，所述抗体稀释液的pH值为7.3-7.5。
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