CN113252914A - 一种用于Rh系统分型检测卡的抗体稀释液及检测卡 - Google Patents

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Abstract

本发明属于血型定型测试领域，具体地说，涉及一种用于Rh系统分型检测卡的抗体稀释液的组合物及抗体稀释液。所述的组合物由甘露醇、海藻糖和聚蔗糖以质量比1‑2：3‑8：5‑12组成。采用本发明的组合物制备抗体稀释液时只需配制一种抗体稀释液即可适用Rh系统分型检测卡的各相关抗体，无需针对不同的抗体配制不同的抗体稀释液，简化了Rh系统分型检测卡的制备过程；同时制得的抗体稀释液可显著提高抗体稳定性，防止抗体效价下降，避免漏检现象的发生。并且，该抗体稀释液适于微柱凝胶免疫检测技术，采用单一型号的葡聚糖凝胶就可兼顾灵敏度与特异性，并有效保护抗体的稳定性。

Description

一种用于Rh系统分型检测卡的抗体稀释液及检测卡
技术领域
本发明属于血型定型测试领域，具体地说，涉及一种用于Rh系统分型检测卡的抗体稀释液的组合物及抗体稀释液。
背景技术
Rh系统是一个极为复杂的血型系统，重要性仅次于ABO系统。其中D抗原是Rh血型抗原系统中最重要的抗原，人红细胞膜上存在D抗原，即为RhD阳性，不存在D抗原，即为RhD阴性。除了D抗原之外，C、c、E、e抗原也是Rh系统中的主要抗原，具有较强的临床意义。另外，由于不规则抗体绝大多数属于Rh血型系统的抗体，在输入含有相应抗原的血液后，能引起严重的免疫性溶血性输血反应，且IgG性质的Rh系统的抗体通过胎盘能力强，从而破坏胎儿具有与抗体对应抗原的红细胞，引发严重的新生儿溶血病，因此进行准确的Rh分型对于减少免疫性溶血性输血反应、对新生儿溶血病进行诊断、预防和治疗具有重要的临床意义。
微柱凝胶免疫检测技术是20世纪90年代产生的一种免疫检测技术，其基本原理是利用分子筛技术，离心技术和特异性免疫反应技术原理，将血型血清学技术与凝胶分子筛技术有机地结合起来，可灵敏地检测出可能存在的微弱血型抗原抗体反应，被认为是血型血清学检验的里程碑。
目前国内外已有一些厂家生产Rh血型检测卡，但是存在以下一些不足：一是采用单一型号的葡聚糖凝胶，使得灵敏度与特异性无法兼顾；二是采用生理盐水或抗体缓冲液溶胀凝胶，使得凝胶无法充分完全溶胀，以及破坏反应体系的离子强度；三是对添加不同抗体的凝胶，凝胶洗涤缓冲液完全一致，无法有效保护抗体的稳定性、兼顾检测结果的灵敏度。
CN104569443A公开了一种Rh血型检测卡，包括含有六个微柱的检测卡，所述六个微柱内分别装有等量的抗D凝胶、抗C凝胶、抗c凝胶、抗E凝胶、抗e凝胶和空白凝胶，其通过以下方法制备而成：葡聚糖凝胶的溶胀、制备各抗体稀释液、制备各抗体工作液、凝胶洗涤、分装形成Rh血型检测卡。该方法采用不同大小、不同筛分范围的交联葡聚糖凝胶进行混合，并用纯化水进行溶胀，有效地保证特异性的同时还拥有很高的灵敏度，并有效保证了体系的离子强度。然而本发明由于需要采用不同大小、不同筛分范围的交联葡聚糖凝胶进行混合、并用纯化水进行溶胀，不仅使得制备过程相对显得复杂，而且针对不同的抗体需要配制不同组成和浓度的抗体稀释液，进一步增加了制备过程的复杂性。可见，该方法对于如何采用单一型号的葡聚糖凝胶、使用一种抗体稀释液以兼顾灵敏度与特异性等并没有给出有效的解决手段。
CN112067827A公开了一种用于血型检测卡的抗体稀释液，其包括：氯化钠5-15g/L、氯化钾0.1-1g/L、磷酸氢二钠0.5-1.5g/L、磷酸二氢钾0.1-1g/L、牛血清白蛋白10-30g/L、蔗糖5-15g/L、β-环糊精0.1-1g/L以及叠氮钠0.1-1g/L。该抗体稀释液适用于多种血型相关抗体的稀释或保存，简化了血型检测卡的制备过程。然而在进一步研究中发现，该抗体稀释液适于制备玻璃微珠血型检测卡，而在制备Rh系统分型检测卡时，由于装有抗D凝胶、抗C凝胶、抗c凝胶、抗E凝胶、抗e凝胶和空白凝胶的六个微柱的性能很难统一，使得灵敏度难以得到保证。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的首要目的在于提供一种用于Rh系统分型检测卡的抗体稀释液的组合物。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种用于Rh系统分型检测卡的抗体稀释液的组合物，其中，所述的组合物由甘露醇、海藻糖和聚蔗糖以质量比1-2：3-8：5-12组成。
一方面，采用本发明的组合物制备抗体稀释液时只需配制一种抗体稀释液就可适用Rh系统分型检测卡的各相关抗体，无需针对不同的抗体配制不同的抗体稀释液，简化了Rh系统分型检测卡的制备过程；同时制得的抗体稀释液可显著提高抗体稳定性，防止抗体效价下降，避免漏检现象的发生。
另一方面，采用本发明的组合物制备的抗体稀释液，适于微柱凝胶免疫检测技术，采用单一型号的葡聚糖凝胶就可兼顾灵敏度与特异性，并有效保护抗体的稳定性。
优选，所述的组合物由甘露醇、海藻糖和聚蔗糖以质量比1.5：5：8组成。
本发明还提供一种用于Rh系统分型检测卡的抗体稀释液，所述的抗体稀释液包括本发明所述的组合物。
作为一种优选方案，所述的抗体稀释液的配方为：磷酸二氢钾0.1-1g/L，磷酸氢二钠0.5-1.5g/L，氯化钾0.1-1g/L，氯化钠5-15g/L，牛血清白蛋白10-30g/L，甘露醇1-2g/L，海藻糖3-8g/L，聚蔗糖5-12g/L，注射用水加至1L。
本发明中，通过添加有甘露醇、海藻糖和聚蔗糖的组合提高了检测卡检测的稳定性和灵敏度。
本发明提供的抗体稀释液适用于Rh系统分型检测卡的相关抗体的稀释或保存，在制备Rh系统分型检测卡的过程中，无需针对不同的抗体配制不同的抗体稀释液，只需配制一种抗体稀释液就可适用于Rh系统分型检测卡的各抗体，大大简化了Rh系统分型检测卡的制备过程。并且，该抗体稀释液适于微柱凝胶免疫检测技术，采用单一型号的葡聚糖凝胶就可以兼顾灵敏度与特异性，并有效保护抗体的稳定性。
作为一种最优选方案，所述的抗体稀释液的配方为：磷酸二氢钾0.24g/L，磷酸氢二钠1.44g/L，氯化钾0.2g/L，氯化钠8g/L，牛血清白蛋白30g/L，甘露醇1.5g/L，海藻糖5g/L，聚蔗糖8g/L，注射用水加至1L。
本发明所提供的用于Rh系统分型检测卡的抗体稀释液的组合物及其抗体稀释液不仅适用于Rh系统分型检测卡，还适用于其它系统分型检测卡。
本发明还提供一种抗体工作液，所述的抗体工作液为采用本发明所述的抗体稀释液制备的抗体工作液。
本发明还提供一种Rh系统分型检测卡，其中，所述的血型检测卡包括本发明所述的抗体稀释液。
本发明还进一步提供一种所述的Rh系统分型检测卡的制备方法，其中，所述的制备方法包括如下步骤：
1）凝胶处理：取适量葡聚糖凝胶，用生理盐水漂洗，备用；
2）抗体稀释液配制：将抗体稀释液各组分充分混匀得到抗体稀释液，备用；
3）抗体工作液配制：将抗C、抗c、抗D、抗E和抗e单克隆抗体浓缩液分别与抗体稀释液混合，使得到的各抗体工作液的效价≥64；
4）胶液配制：将处理好的葡聚糖凝胶分别与配制好的抗体稀释液和各抗体工作液混合，得到抗体稀释液胶液和各抗体胶液，过夜平衡，备用；
5）血型卡灌装：取具有6个凝胶微柱的空血型检测卡，将抗C胶液、抗c胶液、抗D胶液、抗E胶液、抗e胶液分别加入到第1、2、3、4、5微柱，向第6个微柱加入抗体稀释液胶液，封口，即形成Rh系统分型检测卡。
其中，步骤4）中，葡聚糖凝胶与抗体稀释液或各抗体工作液的体积比为3:1。
步骤5）中，向各凝胶微柱中加入胶液后固液混合相的总高度在8-10mm，且液相高于固相不低于1mm。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
采用本发明的组合物制得的抗体稀释液可显著提高抗体的稳定性，防止抗体效价下降，避免漏检现象的发生，适用于Rh系统分型检测卡的相关抗体的稀释或保存，在制备Rh系统分型检测卡的过程中，无需针对不同的抗体配制不同的抗体稀释液，只需配制一种抗体稀释液就可适用于Rh系统分型检测卡的抗C、抗c、抗D、抗E和抗e抗体，大大简化了Rh系统分型检测卡的制备过程。并且，该抗体稀释液适于微柱凝胶免疫检测技术，采用单一型号的葡聚糖凝胶就可兼顾灵敏度与特异性，并有效保护抗体的稳定性。
附图说明
图1显示了Rh系统分型检测卡检测结果的判读标准。
具体实施方式
以下为本发明的具体实施方式，所述的实施例是为了进一步描述本发明，而不是限制本发明。
实施例1
抗体稀释液组分：磷酸二氢钾0.24g/L、磷酸氢二钠1.44g/L、氯化钾0.2g/L、氯化钠8g/L、牛血清白蛋白30g/L、甘露醇1.5g/L、海藻糖5g/L和聚蔗糖8g/L。
制备方法：
1）葡聚糖凝胶处理：取适量葡聚糖凝胶，用生理盐水漂洗3次，每次间隔2h，备用；
2）抗体稀释液配制：按上述抗体稀释液各组分充分混匀得到抗体稀释液，备用；
3）抗体工作液配制：
取抗C单克隆抗体浓缩液与抗体稀释液进行混合，使得到的抗C单克隆抗体工作液的效价≥64；
取抗c单克隆抗体浓缩液与抗体稀释液进行混合，使得到的抗c单克隆抗体工作液的效价≥64；
取抗D单克隆抗体浓缩液与抗体稀释液进行混合，使得到的抗D单克隆抗体工作液的效价≥64；
取抗E单克隆抗体浓缩液与抗体稀释液进行混合，使得到的抗E单克隆抗体工作液的效价≥64；
取抗e单克隆抗体浓缩液与抗体稀释液进行混合，使得到的抗e单克隆抗体工作液的效价≥64；
4）胶液配制：
将处理好的葡聚糖凝胶和配制好的抗体稀释液按照体积比3:1混合到一起，得到抗体稀释液胶液，过夜平衡，备用；
将处理好的葡聚糖凝胶分别与配制好的各抗体工作液按照体积比3:1混合到一起，得到各抗体胶液，过夜平衡，备用；
5）血型卡灌装：
取具有6个凝胶微柱的空血型检测卡，将抗C胶液、抗c胶液、抗D胶液、抗E胶液、抗e胶液分别加入到第1、2、3、4、5微柱，向第6个微柱加入抗体稀释液胶液，使固液混合相的总高度在8-10mm，且液相高于固相不低于1mm，最后用铝箔进行封口，即形成人Rh系统分型检测卡。
实施例2
抗体稀释液组分：磷酸二氢钾0.1g/L、磷酸氢二钠0.5g/L、氯化钾0.1g/L、氯化钠5g/L、牛血清白蛋白10g/L、甘露醇1g/L、海藻糖3g/L和聚蔗糖5g/L。
制备方法：同实施例1。
实施例3
抗体稀释液组分：磷酸二氢钾1g/L、磷酸氢二钠1.5g/L、氯化钾1g/L、氯化钠15g/L、牛血清白蛋白20g/L、甘露醇2g/L、海藻糖8g/L和聚蔗糖12g/L。
制备方法：同实施例1。
实施例4
抗体稀释液组分：磷酸二氢钾0.5g/L、磷酸氢二钠1g/L、氯化钾0.8g/L、氯化钠10g/L、牛血清白蛋白15g/L、甘露醇1.5g/L、海藻糖4g/L和聚蔗糖10g/L。
制备方法：同实施例1。
实施例5
抗体稀释液组分：磷酸二氢钾0.16g/L、磷酸氢二钠1.2g/L、氯化钾0.7g/L、氯化钠13g/L、牛血清白蛋白15g/L、甘露醇1.6g/L、海藻糖4.2g/L和聚蔗糖6.5g/L。
制备方法：同实施例1。
对比例1
抗体稀释液组分及Rh系统分型检测卡的制备方法同实施例1，与实施例1所不同的是，抗体稀释液的组分中不含聚蔗糖，即抗体稀释液组分为：磷酸二氢钾0.24g/L、磷酸氢二钠1.44g/L、氯化钾0.2g/L、氯化钠8g/L、牛血清白蛋白30g/L、甘露醇1.5g/L和海藻糖5g/L。
对比例2
抗体稀释液组分及Rh系统分型检测卡的制备方法同实施例1，与实施例1所不同的是，抗体稀释液的组分中不含海藻糖，即抗体稀释液组分为：抗体稀释液组分：磷酸二氢钾0.24g/L、磷酸氢二钠1.44g/L、氯化钾0.2g/L、氯化钠8g/L、牛血清白蛋白30g/L、甘露醇1.5g/L和聚蔗糖8g/L。
对比例3
抗体稀释液组分及Rh系统分型检测卡的制备方法同实施例1，与实施例1所不同的是，抗体稀释液的组分中不含甘露醇，即抗体稀释液组分为：磷酸二氢钾0.24g/L、磷酸氢二钠1.44g/L、氯化钾0.2g/L、氯化钠8g/L、牛血清白蛋白30g/L、海藻糖5g/L和聚蔗糖8g/L。
对比例4
抗体稀释液组分及Rh系统分型检测卡的制备方法同实施例1，与实施例1所不同的是，抗体稀释液的组分中仅含聚蔗糖，即抗体稀释液组分为：磷酸二氢钾0.24g/L、磷酸氢二钠1.44g/L、氯化钾0.2g/L、氯化钠8g/L、牛血清白蛋白30g/L和聚蔗糖8g/L。
对比例5
抗体稀释液组分及Rh系统分型检测卡的制备方法同实施例1，与实施例1所不同的是，抗体稀释液的组分中仅含海藻糖，即抗体稀释液组分为：磷酸二氢钾0.24g/L、磷酸氢二钠1.44g/L、氯化钾0.2g/L、氯化钠8g/L、牛血清白蛋白30g/L和海藻糖5g/L。
对比例6
抗体稀释液组分及Rh系统分型检测卡的制备方法同实施例1，与实施例1所不同的是，抗体稀释液的组分中仅含甘露醇，即抗体稀释液组分为：磷酸二氢钾0.24g/L、磷酸氢二钠1.44g/L、氯化钾0.2g/L、氯化钠8g/L、牛血清白蛋白30g/L和甘露醇1.5g/L。
对比例7
Rh系统分型检测卡的制备方法同实施例1，与实施例1所不同的是，抗体稀释液的组分为：氯化钠5g/L、氯化钾0.1g/L、磷酸氢二钠0.5g/L、磷酸二氢钾0.1g/L、牛血清白蛋白10g/L、蔗糖5g/L、β-环糊精0.1g/L、叠氮钠0.1g/L。
试验例1
本试验例考察了不同组合物组成对制得的Rh系统分型检测卡的灵敏度的影响。
试验中所用的检测卡分别为实施例1和对比例1至对比例6制得的检测卡，所用的样本为Rh分型全阳样本1份（天津血液中心）。
检测方法：
1、取出检测卡，平衡至室温，在有空白的一面做标记。检测卡使用前必须在卡式离心机中进行离心，开封后应30分钟内使用；
2、依照下表配制红细胞混悬液；
生理盐水 80%浓缩压积红细胞 红细胞悬液浓度
1mL 40μl 3%
3、小心撕去检测卡上的封口铝箔，避免试剂喷溅造成微柱之间交叉污染；
4、将10μL3%待检者红细胞悬液分别加入每柱中；
5、轻弹微柱，使微柱上方的反应物混匀；
6、立即用卡式离心机离心5分钟；
7、判读结果并记录，做好记录，并与现制备的检测卡进行对比。
结果判定：
凝集表现为红细胞停留于凝胶分离介质上表面或分布在分离介质中，红细胞凝集是阳性结果，表明样本中存在相应的抗原/抗体；未凝集则表现为红细胞通过分离介质留在微柱的底部，未凝集是阴性结果，表明样本中不存在相应的抗原/抗体。
凝集强度如下：
4+ 红细胞在凝胶分离介质的上表面凝集，并形成一个环形带；
3+ 发生凝集的大部分红细胞停留在凝胶分离介质的上半部分；
2+ 发生凝集的红细胞分布于整个凝胶分离介质中，微柱的底部有少量的红细胞；
1+ 大部分凝集的红细胞停留在凝胶分离介质的下半部分，微柱的底部有较多的红细胞；
- 为阴性反应，所有红细胞均穿过凝胶的间隙，在微柱的底部形成一个平整的红细胞凝集带。在部分情况下，有未凝集的红细胞在平整的凝集带上方形成雾状红色，也视为阴性。
判读标准如图1所示。
对照柱中的红细胞应该沉降到底部，否则需要考虑红细胞的自发凝集。对类似样品，应该用生理盐水进行洗涤。
检测结果：
如下表1所示：
表1、组合物组成对灵敏度的影响测试结果
Figure 983816DEST_PATH_IMAGE001
从上述试验结果可以看出，抗体稀释液的组成对所制得的Rh系统分型检测卡的灵敏度有较大的影响。结果表明：当抗体稀释液中的组合物仅含甘露醇、海藻糖和聚蔗糖中的一种或两种时，所制得的Rh系统分型检测卡的灵敏度不高；而当抗体稀释液中的组合物由甘露醇、海藻糖和聚蔗糖三种组成时，所制得的Rh系统分型检测卡的灵敏度显著提高。
试验例2
本试验例考察了抗体稀释液中组合物各组分的浓度对所制得的Rh系统分型检测卡的灵敏度的影响。
1、甘露醇的浓度对所制得的Rh系统分型检测卡的灵敏度的影响
改变抗体稀释液组分中组合物成分甘露醇的浓度，在其它组分及浓度相同（同实施例1）的条件下，测试其制得的Rh系统分型检测卡的灵敏度，测试方法同试验例1，测试结果见表2-1所示。
表2-1、甘露醇浓度对灵敏度的影响测试结果
Figure 578745DEST_PATH_IMAGE002
从上述试验结果可以看出，甘露醇的浓度对所制得的Rh系统分型检测卡的灵敏度有一定的影响。结果表明：当甘露醇的浓度在1-2.5g/L时，所制得的Rh系统分型检测卡的灵敏度最高，但当甘露醇的浓度在2.5g/L时，对照呈1+，说明特异性不正常。
综合以上结果，将甘露醇的最适浓度范围定为1-2g/L，但考虑扩大生产中带来的误差，将甘露醇的最优浓度定为1.5g/L。
2、海藻糖的浓度对所制得的Rh系统分型检测卡的灵敏度的影响
改变抗体稀释液组分中组合物成分海藻糖的浓度，在其它组分及浓度相同（同实施例1）的条件下，测试其制得的Rh系统分型检测卡的灵敏度，测试方法同试验例1，测试结果见表2-2所示。
表2-2、海藻糖浓度对灵敏度的影响测试结果
Figure 574383DEST_PATH_IMAGE003
从上述试验结果可以看出，海藻糖的浓度对所制得的Rh系统分型检测卡的灵敏度有一定的影响。结果表明：当海藻糖的浓度在3-8g/L时，所制得的Rh系统分型检测卡的灵敏度最高，但当海藻糖的浓度在8.5g/L时，对照呈1+，说明特异性不正常。
综合以上结果，将海藻糖的最适浓度范围定为3-8g/L，但考虑扩大生产中带来的误差，将海藻糖的最优浓度定为5g/L。
3、聚蔗糖的浓度对所制得的Rh系统分型检测卡的灵敏度的影响
改变抗体稀释液组分中组合物成分聚蔗糖的浓度，在其它组分及浓度相同（同实施例1）的条件下，测试其制得的Rh系统分型检测卡的灵敏度，测试方法同试验例1，测试结果见表2-3所示。
表2-3、聚蔗糖浓度对灵敏度的影响测试结果
Figure 243262DEST_PATH_IMAGE004
从上述试验结果可以看出，聚蔗糖的浓度对所制得的Rh系统分型检测卡的灵敏度有一定的影响。结果表明：当聚蔗糖的浓度在5-12.5g/L时，所制得的Rh系统分型检测卡的灵敏度最高，但当聚蔗糖的浓度在12.5g/L时，对照呈1+，说明特异性不正常。
综合以上结果，将聚蔗糖的最适浓度范围定为5-12g/L，但考虑扩大生产中带来的误差，将聚蔗糖的最优浓度定为8g/L。
试验例3
本试验例考察了本发明制得的Rh系统分型检测卡和采用现有技术的抗体稀释液制得的Rh系统分型检测卡的灵敏度。
试验用Rh系统分型检测卡：本发明实施例1制得的Rh系统分型检测卡；
对照用Rh系统分型检测卡：对比例7制得的Rh系统分型检测卡。
灵敏度测试方法同试验例1，测试结果见下表3所示：
表3、Rh系统分型检测卡灵敏度的测试结果
Figure 564522DEST_PATH_IMAGE005
从上述试验结果可以看出，与现有技术的抗体稀释液制得的Rh系统分型检测卡相比，本发明制得的Rh系统分型检测卡的灵敏度较高。
试验例4
本试验例考察了本发明制得的Rh系统分型检测卡的稳定性。
用各实施例制备的Rh系统分型检测卡检测Rh分型全阳样本（每次检测时所用样本均来自天津市血液中心），分别于0天、3个月、6个月、9个月、12个月和14个月各检测一次，每次检测时与现制备的检测卡（制备方法同实施例1）进行对照，观察阳性凝集强度是否有变化。
检测方法及结果判定同试验例1。
检测结果见表4至表9：
表4、0天检测结果
Figure 318851DEST_PATH_IMAGE006
表5、常温保存3个月检测结果
Figure 118180DEST_PATH_IMAGE007
表6、常温保存6个月检测结果
Figure 641565DEST_PATH_IMAGE008
表7、常温保存9个月检测结果
Figure 868147DEST_PATH_IMAGE009
表8、常温保存12个月检测结果
Figure 109773DEST_PATH_IMAGE010
表9、常温保存14个月检测结果
Figure 712792DEST_PATH_IMAGE011
从上述试验结果可以看出，本发明实施例1至5制备的Rh系统分型检测卡均可常温保存14个月，检测结果在14个月时依然能保持较高的灵敏度。

Claims (7)

1.一种用于Rh系统分型检测卡的抗体稀释液，其特征在于，所述的抗体稀释液的配方为：磷酸二氢钾0.1-1g/L，磷酸氢二钠0.5-1.5g/L，氯化钾0.1-1g/L，氯化钠5-15g/L，牛血清白蛋白10-30g/L，甘露醇1-2g/L，海藻糖3-8g/L，聚蔗糖5-12g/L，注射用水加至1L。
2.根据权利要求1所述的抗体稀释液，其特征在于，所述的抗体稀释液的配方为：磷酸二氢钾0.24g/L，磷酸氢二钠1.44g/L，氯化钾0.2g/L，氯化钠8g/L，牛血清白蛋白30g/L，甘露醇1.5g/L，海藻糖5g/L，聚蔗糖8g/L，注射用水加至1L。
3.一种抗体工作液，其特征在于，所述的抗体工作液为采用权利要求1或2所述的抗体稀释液制备的抗体工作液。
4.一种Rh系统分型检测卡，其特征在于，所述的Rh系统分型检测卡包括权利要求1或2所述的抗体稀释液。
5.一种权利要求4所述的Rh系统分型检测卡的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：
1）凝胶处理：取适量葡聚糖凝胶，用生理盐水漂洗，备用；
2）抗体稀释液配制：将抗体稀释液各组分充分混匀得到抗体稀释液，备用；
3）抗体工作液配制：将抗C、抗c、抗D、抗E和抗e单克隆抗体浓缩液分别与抗体稀释液混合，使得到的各抗体工作液的效价≥64；
4）胶液配制：将处理好的葡聚糖凝胶分别与配制好的抗体稀释液和各抗体工作液混合，得到抗体稀释液胶液和各抗体胶液，过夜平衡，备用；
5）血型卡灌装：取具有6个凝胶微柱的空血型检测卡，将抗C胶液、抗c胶液、抗D胶液、抗E胶液、抗e胶液分别加入到第1、2、3、4、5微柱，向第6个微柱加入抗体稀释液胶液，封口，即形成Rh系统分型检测卡。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤4）中，葡聚糖凝胶与抗体稀释液或各抗体工作液的体积比均为3:1。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤5）中，向各凝胶微柱中加入胶液后固液混合相的总高度在8-10mm，且液相高于固相不低于1mm。
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