SU1091844A3 - Диагностикум дл вы влени антигена гепатита В - Google Patents

Abstract

ДИАГНОСТИКУМ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИГЕНА ГЕПАТИТА В, содержащий частицы полистирола размером 0,2-0,23 мкм с сорбированными на них специфическими антителами при концентрации последних 0,05% и солевой раствор, отличающийс  тем, что, с целью повышени  чувствительности диагностикума , он дополнительно содержит нормальную сьшоротку морских свинок, в качестве солевого раствора он содержит физиологический раствор при следующем количественном соотношении компонентов , мас.%: Частицы полистирола размером 0,2-0,23 мкм с сорбированными на них специфическими антителами при концентрации последних 0,05% 0,5-0,8 Нормальна  сыворотка морских свинок2-5 Физиологический О) растворОстальное

Description

QD

00 4 Изобретение относитс  к медицине и касаетс  диагностического состава дл  вы влени  гепатита В. Известен диагностикум дл  вы влени  антигена гепатита В, содержащий частицы полистирола с сорбированны -4и на них специфическими антителами и с левой раствор 1 1, Однако известный диагностикум не обладает достаточно высокой чувствительностью . Целью изобретени   вл етс  повышение чувствительности диагностикума Эта цель достигаетс  тем,, что диагноетикум дл  вы влени  антигена гепатита В, содержащий частицы полистирола размером 052-0,23 мкм с сор (бированными на них специфическими ан тителами при концентрации последних 0,05% и солевой раствор, дополнитель но содержит нормальную сыЕ.оротку мор ских свиноКз в качестве солевого ра вора он содержит физиологический ра вор при следующем количественном со отношении компонентов, мас,%: Част11цы полистирола размером 0,2-0523 мкм ,с сорбированными на них специфическими антителами при концентрации последних 0,05%0,5-0,8 Нормальна  сьшоротка морских свинок2-5 Физиологическю раствор Остально Диагностикум дл  вы влени  антиге на гепатита В содержит водную суспен зию мелко раздробленных частиц синте тической смолы, покрытых очищенным антителом, специфическим дл  поверх ностного антигена гепатита В. Эти частицы представл ют собой сферические полистироловые частицы, имеющие диаметр примерно 0,23 мкм, но подход т также частицы полистирола или других синтетических смол, например .акриловых, имеющие одинаковые размеры 0,05-25О мкм. Антитела, специфические дл  поверхностного антигена гепатита В, предпочтительно получают от млекопитающих, например.людейj овец, коз, кроликов или морских сви-HoKj или из птичьих источников, таких как куры или индейки, которые содержат антитела, или были иммунизированы в , высшей степени очищенньп-i поверхностным ; антигеном гепатита В,. полученным из крови человека. Морских свинок или других животь:ых , таких как кролики, козы, иммунизируют поверхностнымантигеном гепатита В по известному методу. Первична  иммунизаци  антигеном в полном вспомогательном лекарственном веществе Фреунда в подушечки лап сопровож,цаетс  повтор емыми внутрибрюшинными внутримышечньЕми, подкожными или внутривенными прививками антигена с использованием или без использовани  вспомогательного лекарственного вещества. После смешивани  сывороток, собранных от иммунизиро- ванньо; животных, остаточное антитело дл  протеинов сыворотрси человека, если оно присутствует, удал етс  посредством контактировани  антисыБоротки с нррмальной сьшороткой человека . Затем гамма-глобулин может изолироватьс  посредством преципитации 14%-ным BonHbM сульфатом натри , диализироватьс  против буферированного фосфатом водного физиологического раствора поваренной соли и, предпочтительно до 56 С в течение примерно 30 мин, чтобы разрушить комплемент. Далее антитела очищают по общим известным методам. Специфические поверхностные антитела гепатита В очищают от абсорбированных сывороток лшвотного (предпочтительно сывороток морской свинки) посредством смешивани  этих сывороток.:, в оптимальных пропорци х с сыворотками человека, со .цержащими поверхностньш антиген гепатита В, инкубировани  при 37°С в чение часа, а затем в течение ночи при i С, Образованный таким образом преципитат (осадок) антиген-антитела дважды промывают в холодном буферит рованном фосфатом физиологическом растворе поваренной соли, чтобы удалить большинство остаточных неспецифических протеинов. Затем этот преципитат амтиген-антР1тела раствор ют в холодзюй 0,2 М уксусной кислоте (2% сахгрозь:S рН 2,3) или различных т-- ольиь1х концентраций хаотропических ионов, например 2,0 М тиоцианата натри , рН 6,6. Могут использоватьс  другие соотватств пощие буферные смеси ,, чтобы диссоциировать комплексы антиген-антитело. Эти диссоциированны .е антигены и антитела раздел ют центрифугированием при 25000-28000 оборо1ов в минуту в течение 12-15 ч или при 30000 оборотов в минуту в 31 течение 4 ч на непрерывном градиенте сахарозы пор дка 10-40% в зональном роторе Бекмана типа Т1-15. Ротор раз гружают накачиванием в него 50% сахарозы . Чтобы смешать градиент, 20 м фракции провер  на ультрафиолетовое поглощение в 1 см  чейке при 280т(Ь-,, пиковые фракции смешивают и получают очищенную фракцию специфи ческого антитела и очищенную фракцию антигена. Затем обе фракции нейтрали зуют применением 0,1 н. NaOH. Фракци антитела концентрируют до объема исходной сыворотки и диализируют в течение ночи против буферированного глицином физиологического раствора поваренной соли. Затем очищенное антитело титрируют и стандартизируют. 0,1% азида натри  можно добавл ть в качестве противокоагулирующего средства дл  использовани  в приготовлении диагностического реагента. Антитела разбавл ют путем приготовлени  небольших дозировок диагностического реагента с различными разбав лени ми антитела и испытани  их с р дом сывороток человека, содержащих поверхностный антиген гепатита В. Разбавление, дающее лучшие показатели в сравнении с этим р дом, когда оно покрывает частицы смолы, выбирают дл  приготовлени  диагностическог реагента. Разбавленные антитела смешивают с имеющими диаметр 0,2 мкм латексными зернами полистирола. После смешивани  в течение одного или двух часов эти зерна трижды промываютс  буферированным глицином физиологическим раствором поваренной соли. Водна  суспензи  содержит примерно 0,5 вес.%/объем частиц смолы, но может содержать и 0,1-3 вес.%/объем частиц смолы. Дл  приготовлени  диаг ностикума эта суспензи  предпочтительно содержит примерно 0,05 вес.%/ /объем антитела, абсорбированного на частицах смолы, но этот состав может мен тьс  в соответствии с концентрацией частиц. Процентное содержание антитела должно быть достаточным, чтобы предупреждать аутоагрегацию частиц резины. Дл  шарообразных частиц полистирола пор дка 0,23 мкм в диаметре это составл ет примерно одну дес тую веса частиц. Суспензи  предпочтительно содержит стабилизатор дисперсии (антикоа 44 л тор), добавл емый после абсорбировани  антитела на частицах, например инертный протеин, такой как сывороточньш альбумин при концентрации, например, 0,1 Бес.%/объем. Диагностикум также содержит нормальную сыворотку (т.е сыворотку, не содержащую ни антитело, специфическое дл  поверхностного антигена гепатита В, ни сам антиген), полученную от той же разновидности животных, что и та, от которой получена сыворотка , содержаща , антитела. Присутствие этой нормальной сыворотки существенно снижает процентный состав ложно положительных результатов, когда используют диагностикум дл  вы влени  поверхностного антигена гепатита В в пробах крови. Предпочтительно около одной части нормальной сыворотки содержитс  на 20-50 частей (по объему) водной суспензии частиц смолы, покрытых антителом. Если нормальна  сыворотка от той же разновидности животных, что и та, от которой была получена содержаща  антитела сыворотка, не содержитс  в диагностикуме примерно 10% сывороток человека, не содержащих поверхностного антигена гепатита В, будут агглютинировать частицы смолы. Это происходит благодар  присутствию такого рода веществ в сыворотках человека, которые реагируют с другими материалами, происход щими от антисыворотки животных , из которой получен поверхностный антиген гепатита В. Однако, если содерукитс  нормальна  сыворотка животного , только примерно 1-3% сывороток человека будут агглютинировать частицы смолы при отсутствии в этих сыворотках поверхностного антигена гепатита В. Это может иметь место при наличии в нормальной сыворотке животного, которые способны реагировать с этими веществами в сыворотках человека и таким образом предупреждать их от вызывани  агглютинации частиц смолы. Обеспечиваетс  контроль нормальной сыворотки человека, котора  получаетс  из неразбавленной нормальной сыворотки человека; она  вл етс  отрицательной в отношении поверхностного антигена гепатита В при испытании латексным реагентом и методом радиоактивных изотопов. Сыворотку положительного контрол  ппиготавливают из имеющейс  известной поло}кительной на поверхност}1ый анти ген гепатита В сыворотки человека. Эту сыворотку подвергают термообработке при 60 С в течение 10 Ч; а затем дважды последовательно разбавл ют в нормальной сыворотке человека, РазбавлениеS используемое дл  этого продукта 5 представл ет собой разбавление , дающее определенную реакцию латексным реагентом. Диагностикум состоит из следуюш,их компонентов. АО Система отсеивающего испытани  1,Св занные с гепатитом антитела абсорбированные на латекснык зернах (бусинках, шариках), 2,Сыворотка положительного контрол . 3,Сыворотка отрицательного контрол . В Система подтверждающего испытани  . 1. Св занные с гепатитом антитела (человека), 2„ Контроль нормальной сыворотки человека (отрицательный дл  поверхностного антигена гепати та В) , 3, Реагент поглощени  ревматоидного фактора, 4 о Разбавитель подтверлщающего испытани . Св занные с гепатитом антитела (человека) получают из плазмы челов ка, котора  содерлшт антитела дл  п верхностного антигена гепатита В, Эту плазму принимают из различных плазмофорезисных (плазмоприготовительных ) центров, ее титрируют гель диффузией и преобразуют в сыворотку путем добавлени  хлорида кальци  и бычьего тромбина. Затем из этой сыворотки приготавливают гамма-глобул путем преципитаттии 16%-ным сульфато 5атри  После промывани  преципитат ( осадка) в 14%-ном сульфате натри  состав диализируют в течение всей н чи против низкой мол рности фосфат-него буфера и пропускают через целлюлозу типа ДЕАЕ, уравновешенную тем же буфером. Очищенный гамма-гло булин затем стандартизируют по концентрации и диализируют против буфег рированного фосфатом физиологическо го раствора поваренной соли, Реагент абсорбента ревматоидного фактора состоит из латексных зерен (бусинок, шариков),, покрытых нормал гамма-глобулином человека. Он образуетс  посредством приготовлени  стЕидартного раствора очищенного гамма-глобулина в буферированном | 1;1цином физиологическом растворе 110}1аренной соли с добавлением сус-чснзии из 0,2 мкм полистироловых зерен и путем нагревани  при 57°С R течение 5 мин. Затем эту суспензию разбавл ют в буферированном глицином физиологическом равтворе поваренной Разбавитель подтверждающего испытани  приготавливают путем разбавлени  раствора 30%-ного альбумина бычьей сыворотки буферированньгм фосфатом физиологического раствора поваpt-EiHOK соли до 5%-ной концентрации проте:ина. Испытани  провод т следующим образом , Приготавливают пробы крови. Сыгюротка  вл етс  предпочтительной формой пробы (образца) крови. Если ггровер ема  проба представл ет собой цельную кровь ее необходимо сначала обработать, чтобы растворить в ней клетки и предупредить коагул цию . Дл  этой цели ее обрабатывают зодньм разбавителем5 содержащим безионное поверхностно-активное вещество тика полиоксиэтилированного алкилфенолЯз нап)эимер изооктилфенокси-полиоксиэтилзтанол и лимонно-кислый натЕсли провер ема  проба представл ет собой сьпзоротку крови,, она должна, содержать антикоагул птъц такие как лимонно кислый натрий. Преимущественно ее также обрабатывают тем же cat4bJM водным разбавителем,, содержащим без- ионное поверхностно-активное вещество, как и дл  цельно.й кровИ; чтобь растзор ть любые остаточные клетки, прис у тс т 3 утащи в в не.й. Специфичность реагента определ ют путем сравнен.и  гго с цель1м р дом положительных и отрицательных сывороток , постав.п емых Бюро Биологических наук, а также с р дом из 100 отрицате .пьных сывороток, собранных от нормальных до бровольцев. Ре;г..кцион;гу1о способность определ ют путем суспендировани  данного реагента энергичны:м перемешиванием, дл  этого в одно из испытательных углублений на пластмассовых лабораторных аластинах наливают 3 капли сыворотки

положительного контрол . Во второе прилежащее углубление наливают 3 капли сыворотки отрицательного контрол 

К каждой пробе добавл ют по одной капле реагента. Перемешивают полность использу  отдельный миксер дл  каждого углублени . Вращают пластину на механическом ротаторе в течение 10 ми со скоростью вращени  150 оборотов в минуту. Провер ют смеси через освещаемый отраженным или рассе нным светом просмотровый прибор.

Отчетливо положительна , слаба  (1) реакци должна наблюдатьс  при пробе сыворотки положительного контрол . Никакой реакции не должно наблюдатьс  с пробой сыворотки отрицательного контрол .

Реакционную способность сыворотки положительного контрол  испытываю латексным реагентом, чтобы гарантировать реакционную способность пор дка 1 ,

Сыворотку отрицательного контрол  испытывают латексным реагентом, чтобы гарантировать отрицательную реакцию .

Контроль нормальной сыворотки человека.

Проверку на специфичность провод  дл  того, чтобы убедитьс , что она не реагирует с латексным реагентом и что она не подавл ет положительные .сыворотки в отношении поверхностного антигена гепатита В,

Св занные с гепатитом антитела (человека).

Реакционную способность провер ют путем гель-диффузионного титровани  посредством использовани  стандартного поверхностного антигена гепатита В.

Испытани  на специфичность провод т , чтобы определить, будет ли эта сыворотка специфически подавл ть положительные пробы поверхностного антигена гепатита Б,

Реагент поглощени .

Реакционную способность определ ю путем испытани  реагента с сыворотка ми, содержащими ревматоидный фактор, чтобы гарантировать его реакцию с этим фактором и частичное поглощение его из сывороток.

Разбавитель подтверждающего испытани .

Испытани  на специфичность провод т с использованием этого разбави-

тел , чтобы убедитьс , что он не реагирует с латексным реагентом и что он не подавл ет положительные сывороки поверхностного антигена гепатита В.

Испытание проб сыворотки (отсеивающее испытание) провод т путем отделени  120|О-Е сыворотки в углубление на пластмассовой пластине.

Добавл ют одну каплю латексного ре гента.

Полностью смешивают, использу  отдельньш наход щийс  в пользовании миксер дл  каждой пробы (образца).

Вращают пластину на механическом роторе в течение 10 мин со скоростью 150 оборотов в минуту.

Провер ют смеси через совмещаемьй отраженным или рассе нным светом просмотровый прибор.

Реакции подсчитывают по баллам на шкале от 1 до 4, соответствующей увеличению интенсивности агглютинации .

Подтверждающа  процедура нейтрализации .

Помечают одну пробирку объемом 10 X 75 мм идентификационным номером пробы и индексом А, Помечают втору-о пробирку идентификационным номером пробы и индексом В.

Добавл ют две капли (примерно ) св занного с. гепатитом антитела (человека) в пробирку, снабженной индексом А.

Добавл ют две капли нормальной сыворотки человека отрицательного контрол  в пробирку, снабженную ийдексом В,

Добавл ют 240jU.6 испытательной пробы в каждую из пробирок, отмеченных индексами А и В,

Перемешивают содержимое этих пробирок и подвергают инкубации в течение 30 мин при 37°С в вод ной ванне. - Испы.тывают 120|М- из пробирок А и в, использу  отсеивающие реагенты и процвдурь. Дл  большинства относительно мало титрованных положительных проб дифференциаци  между специфическими и неспецифическими положительными результатами может быть без дальнейшего испытани , поскольку проба А нереагирующа , в то врем , как проба В остаемс  положительной показыва  специфическое подавление антителом человека. Дл  тех образцов которые  вл ютс  специфическими, но более сильно титрованными, а также дл  тех, которые  вл ютс  неспецифическими , требуетс  дальнейшее ние. Дл  каждой пробирки, требующей дальнейшего испытани , помечают дополнительные шесть пробирок с разбавлени ми от 1 : 4 до . : 128, а также идентификационным номером пробы и индексами А или В. Добавл ют 20014 разбавител  подтверждающего испытани  в каждую пробирку , включа  пробирки, которые содержат пробу пациента и антисыворотк человека или нормальную сьшоротку человека, т.е. исходные пробирки А и в, дела  разбавление в них примерно 1 : 2, Дваж,цы разбавл ют переносом 200 использу  отдельные микропипетки дл  калсдой пробирки и хорошо перемешивггют перед удалением проб. Испытывают из калсдой пробирки , использу  отсеивающие реагенты и процедуры. Титр, полученньш в р ду В (проба и нормальна  сыворотка человека), должен быть в четыре раза (две пробирки ) выше, чем в р ду А (проба и нейтрализующее гепатит св занное антитела (человека) дл  того, чтобы рассматривать пробу (образец) в качестве специфического позитива поверхностного антигена гепатита В, В случае, когда, как титр А, так и титр в  вл етс  выше, чем 1:128,, разбавление должно производитьс  далее до тех пор, пока не будет опреде . лена конечна  точка. Поскольку целый р д проб,, содержа щих ревматоидньш фактор, реагирует с латексньм реагентом, необходимо диф ференцировать пробЫз содержшгие как поверхностный антиген гепатита В та и ревматоидный фактор. Присутствие ревматоидного фактора можно определить испытанием сыворотки реагентом поглощени  ревматоидног фактора (латекс 5 покрытьш гамма-гло-булином человека) путем смешивани  120 мл пробы и одной капли поглощающего реагента на пластмассовом слай де и вращени  в течение п ти минут., Если проба содержит ревматоидный факторJ она может поглощатьс  посред ством добавлени  720|ий пробы в пробирку 10 X 75 и добавлени  шести капель поглощающего агента в эту пробирку. Хорошо перемешать и инкуОнровать при :: омнатной температуре D течение п ти минут. Выполнить подтверждающую процедуру нейтрализации на абсорбированной пробе. Приготовление очищенного антитела поверхностному антигену гепатита В. Морских свинок иммунизируют поверхностным антигеном гепатита В, очищенньп известным способом. Первична  иммунизаци  антигеном в полном вспомогательном лекарственном веществе Фреунда в подушечки лап морских свинок сопровождаетс  двум  внутрибрюшинными прививками этого антигена без вспомогательного лекарственного вещества. После объединени  сыворотокJ собранных от иммунизированных животных, остаточный протеин, если это необходимо, удал ют посредством контактировани  антисыворотки с нормальной сывороткой человека. Гамма-глобулин затем очищают посредством преципитации с 14 вес.%/объём водньм сульфатом натри , диализируют против буферированного водныг- фосфатом физиологического раствора поваренной соли и предпочтительно нагревают при 56 С в течение примерно 30 мин, чтобы разр тлить комплемент . Очигденную сыворотку смешивают с сь вороткой человека, содержащей поверхностный антиген гепатита В, подвергают инкубации при 4 С. Полученный таким образом приципитат антиген-антитела затем дважды промывают в холодном буферированном фосфатом физиологическом растворе поваренной соли, чтобы удалить большинство остаточных неспецифических протеинов. Затем этот преципитат антиген-антитела раствор ют в холодной 0,2 М укс:|сной кислоте (2% сахарозы , рН 2,3 или хаотропических. ионов). Эти диссоциированные антигены и антитела раздел ют центрифугированием при 25000-28000 оборотах в минуту в течение 12-15 Чэ или при ЗрООО оборотах в минуту в течение 4 ч на непрерывном 10-40%-ном градиенте сахарозы в зональном роторе Бекмана типа Т1-15, Ротор разгружают посредством нагнетани  50% сахарозы в него, чтобы смешать градиент, а 20 мл фракции провер ют на ультрафиолетовое поглощение в 1 см  чейки ггри 280 мл, а пиковые фракции объедин ют,, чтобы давать очищенную. специфическую фракцию антитела, кото рую затем нейтрализуют 0,1 н. NaOH. Фракцию антитела концентрируют до исходного объема сыворотки и диализи руют в течение ночи против буферированного глицином физиологического раствора поваренной соли. Затем очищенные антитела титруют и стандартизируют . Эти антитела оптимально разбавл ют путем приготовлени  малых дозировок диагностикума с различными разбавлени ми антитела и испытани  их против целого р да сывороток человека , относительно которых известно, что они содержат поверхностный антиген гепатита В. Разбавление, дающее наилучшее показание против этого р д когда нанесено на частицы смолы, выбирают дл  приготовлени  диагностикума . Диагностикум готов т следующим образом. Пример 1. 30 вес.%/объём водной суспензии 0,23 мкм полистироловых шариков разбавл ют до 8 вес.%/ /объём буферированньЕМ глицином физиологическим раствором поваренной соли и диализируют против буферированного глицином физиологического раствора поваренной соли в течение всей ночи. Затем ее немедленно добавл ют к 9 объемам очищенной антисыворотки морских свинок,.содержащей антитела поверхностному антигену гепатита В (разбавленному до 0,05 вес.%/объём) и посто нно перемешивают в течение 30 мин. После этого добавл ют один объём альбумина бычьей сыворотки (1 вес.%/объём) и затем - азид натри , чтобы концентраци  была пор дка 0,1 вес.%/объём в окончательном продукте. Пример 2. 30 вес.%/объём суспензии полистироловых шариков (0,05-2,0 мкм) разбавл ют до 8 вес.%/объём буферированным гли-цином физиологичестим раствором поваренной соли и стерилизуют посредством добавлени  раствора гипохлорита . Затем диализируют против буферированного глицином физиологического раствора поваренной соли, чтобы удалить гипохлорит. Затем этот состав добавл ют к 9 объёмам с соответствующим образом разбавленной, очищенной сыворотки морских свинок - антителам поверхностного антигена гепатита В. А12 Полистироловую суспензию добавл ют медленно с перемешиванием, которое продолжаетс  в течение одного часа. Полистироловые шарики центрифугируют, дважды промывают на центрифуге буферированным физиологическим раствором поваренной соли и снова суспендируют в исходный объем в буферированном физиологическом растворе поваренной соли. Альбумин бычьей сыворотки добавл ют с перемешиванием в течение 30 мин. Одну дес тую объёма разбавленной нормальной сыворотки от неиммунизированных морских свинок (разбавленной 1:3,5 буферированным глицином физиологическим раствором поваренной соли) добавл ют к этому составу и смесь снова перемешивают в течение 30 мин, и, наконец, эту смесь энергично встр хивают, чтобы диспергировать любые агломерации частиц. Все растворы, которые использовались, стерилизуют посредством фильтрации и содержат в себе 0,1 вес.%/объём азида Натри  в качестве стабилизатора дисперсии (антикоагул тора). Пример 3. Сыворотку положительного контрол  готов т из целого р да известных в качестве положительных на поверхностный антиген гепатита В сывороток человека. Эту сыворотку подвергают тепловой обработке при 60°С в течение примерно 10 ч, а затем дважды последовательно, разбавл ют в нормальной сыворотке человека . Используемое разбавление  в- . л етс  таким, которое дает (1-4) реакцию с латексным реагентом по примерам 1 и 2. Затем этот состав стерильно фильтруют и помещают в стерильные контейнеры. Пример 4. Сыворотку отрицательного контрол  получают из неразбавленной сыворотки человека, котора  показала себ  отрицательной в отношении поверхностного антигена гепатита В при использовании латексноге реагента по примеру 1 или примеру 2 в применении метода радиоактивных изотопов. Состав стерильно фильтруют и помещают в стерильные контейнеры . Пример 5. Плазму человека, котора  содержит антитела поверхностному антигену гепатита В, титруют гельдиффузией и преобразует в сыворотку посредством добавлени  хлорида кальци  и бычьего тромбина. Гамма-глобуЛИН затем приготавливают из этой сыворотки посредством преципитации с 16 вес,%/объём сульфатом натри . После промывани  этого преципитата в 14 вес.%/объём сульфата натри  его диализируют против фосфатного буфера низкой мол рности и пропускают через целлюлозу типа ДЕЛЕ, котор а была ранее уравновешена тем же самым буфером. Очищенный гамма-глобулин затем стандартизируют и диализируют против буферированного фосфатом физиологического раствора поваренной соли. Затем этот состав стерильно фильтруют и помещают в стерильные контейнеры. Пример 6. Стандартный раствор очищенного гамма-глобулина человека в буферированном глицином физиологическом растворе поваренной соли добавл ют к суспензии 0,2 мкм полистирольного латекса и нагревают при в течение 15 мин. Суспензию, ис пользуемую дл  абсорбировани  ревматоидного фактора в испытываемых сыворотках , разбавл ют в буферированно глицином физиологическом растворе по варенной соли и помещают в стерильны контейнеры. Пример 7. Разбавитель подтверждающего испытани  приготавлива ют посредством разбавлени  раствора 30 вес,%/объём раствора альбумина бычьей сыворотки в буферированном фосфатом физиологическом растворе поваренной соли до 5%-ной концентра ции протеина. Этот раствор затем стерильно с ильтруют и помещают в стерильные контейнеры. Пример 8, Относительно концентрации очищенных антител морских свинок; объём суспензии полистирола смешан с таким объёмом очищенной антисыворотки морских свинок, что получаема  в результате суспензи  будет иметь концентрацию антител, равную 0,05 процента в/в, т.е. про;укт содерлшт около 0,8 процента в/в сфер полистирола и примерно 0,05 процента в/в антител по отношению к поверхностному антигену гепатита В. Пример 9. Аналогично примеру 1 продукт содержит 0,8 процента сфер полистирола. Кроме того, он содержит одну дес тую объёма (10 процентов в/в) разбавленной в отношении 1:3,5 нормальной сыворотки морских свинок. Разбавленна  в отношении 1:3,5 сыворотка соответствует раствоipy , которьм содержит примерно 3D процентов в/в сыворотки. Соответственно, конечный продукт содержит около 3 процентов в/в нормальной сыворотки морских свинок. Предлагаемый диагностику обладает высокой чувствительностью дл  вы влени  антигена гепатита В за счет того, что используют BbiCOKo очищенные антитела и нормальную сыворотку той же разновидности животных, от которых были получены специфические антитела, что позвол ет снизить число ложно положительных результатов,

Claims (1)

1. ДИАГНОСТИКУМ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИГЕНА ГЕПАТИТА В, содержащий частицы полистирола размером 0,2-0,23 мкм с сорбированными на них специфическими антителами при концентрации последних 0,05% и солевой раствор, отли- чающийся тем, что, с целью повышения чувствительности диагностикума, он дополнительно содержит нормальную сыворотку морских свинок, в качестве солевого раствора он содержит физиологический раствор при следующем количественном соотношении компонентов, мас.%:

   Частицы полистирола размером 0,2-0,23 мкм с сорбированными на них специфическими антителами при концентрации последних 0,05% Нормальная сыворотка морских свинок Физиологический раствор

   0,5-0,8 ²~5 g

   Остальное sy_<„> 1091844

   109'1844