FI63493C - Paovisande av hepatitis b ytantigen genom latex-agglutination - Google Patents
Paovisande av hepatitis b ytantigen genom latex-agglutination Download PDFInfo
- Publication number
- FI63493C FI63493C FI760326A FI760326A FI63493C FI 63493 C FI63493 C FI 63493C FI 760326 A FI760326 A FI 760326A FI 760326 A FI760326 A FI 760326A FI 63493 C FI63493 C FI 63493C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- antibody
- serum
- hepatitis
- human
- surface antigen
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
- G01N33/5761—Hepatitis B
- G01N33/5764—Hepatitis B surface antigen
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/82—Hepatitis associated antigens and antibodies
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/806—Antigenic peptides or proteins
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
- Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
- Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
- Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
- Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer
- Y10S530/816—Attached to the carrier via a bridging agent
Description
F5Br*l M »««UULUTU.JULKAI.U 63493 IJ UTLAQGNINQSSKKIPT ^ (45) rater.*. e-od-.lclat ^ ^ (51) Kv.lk.3/lnt.CI.3 G 01 N 33/5^- SUOMI—FINLAND (21) ρκμ«ιι^-ν«μιιμιι 760326 (22) Hak*ml«p«iv< —AiwMcnlnprfaf 11.02.76 ' * (23) Alkupttvft—GlMfhcttdtc 11.02.76 (41) Tullut fulklMliai — BltvK off«ndl| 20 08.76 rekisfrihallttiM NihtMMfNnon „ P»t«it>och regkteratyralMn v ' AmMcmmkfd «h utiUrtfuo pubttnratf 28.02.83 (32)(33)(31) Pyydetty «uoOtut l«|M priority 19.02.75 USA(US) 5509U9 (71) Warner-Lambert Company, 201 Tabor Road, Morris Plains, New Jersey Ο795Ο, USA(US) (72) George Edward Lovke, Gales Ferry, Connecticut, Bela Zoltan Horvath, Ledyard, Connecticut, USA(US) (7*0 Oy Roister Ab (5I+) Hepatitis B pinta-antigeenin toteaminen lateksi-agglutinaation avulla -P&visande av hepatitis B ytantigen genom latex-agglutination
Keksinnön kohteena on hepatitis B pinta-antigeenin havaitseminen lateksi-agglutinaation avulla.
Hepatitis B pinta-antigeeni (Australia-antigeeni), jonka löysi Blumberg et al., Bull. N.Y. Acad. Med., 40, 377 (1961»), ja myöhempi korrelaatio pitkän inkuboimisajan vaativan hepatitiksen kanssa on kannustanut aktiivisuuteen veren luovuttajaväestön seulonnassa yleisessä terveydenhuoltomielessä.
Vasta-aineelle herkistettyjen lateksihiukkasten käyttö, joka on esitetty US-patenttijulkaisussa 3 085 875 ja 3 551 555, on erikoisesti sovellettu hepatitis B pinta-antigeenin havaitsemiseksi veriseerumista, kuten on kuvattu julkaisussa The Journal of Immunology, n:o 1, sivut 108-111, tammikuu 19, 1972.
Diagnostinen koe Australia-antigeenin tai sen vasta-aineen toteamiseksi on esitetty DE-hakemusjuikaisussa 2 237 204.
Herkän, mutta aikaa vievän radioimmuno-määrityksen ovat kuvanneet Ling, C.M. ja Overby, L.R. julkaisussa The Journal of Immunology 109, n:o 4, sivut 834-841 (1971) (1972).
2 63493
Tarvitaan kuitenkin parannettua diagnostista menetelmää, joka on nopea, herkkä ja mikä tärkeintä, luotettava (vähin mahdollinen määrä "vääriä positiivisia’1).
Keksinnön kohteena on menetelmä hepatitis B pinta-antigeenin toteamiseksi ihroisverestä, jolloin verinäyte, josta punaiset verisolut on poistettu, sekoitetaan diagnostiseen koostumukseen, joka muodostuu vesisuspensiosta, jossa on käytännöllisesti katsoen samanlaisia pallomaisia polystyreenihiukkasia, joiden halkaisjja on 0,05 - 2,0 /jm ja jotka on päällystetty puhdistetulla hepatitis B pinta-antigeenille spesifisellä vasta-aineella, jolloin tämä vasta-aine on eristetty sellaisten marsujen seerumista, jotka on immunisoitu puhdistetulla ihmisverestä eristetyllä hepatitis B pinta-antigeeni 1 la ja jolloin tämä vasta-aine ei sisällä muita ihmisseerumiproteiinei1 le spesifisiä vasta-aineita, ja jolloin vesisuspensio sisältää myös liuenneena normaalia marsun seerumia, joka ei sisällä hepatitis B pinta-antigeenille spesififistä vasta-ainetta ja jolloin polystyreenihiukkaset on päällystetty sellaisella määrällä mainittua vasta-ainetta, joka juuri estää hiukkasten aggregoitumisen itsestään, ja verinäytteen ja suspension seoksesta tutkitaan, tapahtuuko siinä agglutinoitumista.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että (a) polystyreeni-hiukkasten päällystykseen käytetty vasta-aine on puhdistettu tunnetulla tavalla saattamalla antigeeni/vasta-ainekompleksin liuos, joka on valmistettu sekoittamalla vasta-ainetta sisältävää marsun seerumia ihmisseerumiin, joka sisältää hepatitis B pinta-antigeenille spesifisiä antigeenipitoisia vasta-aineita, kosketukseen tiheysgradientin sisältävän nestemäisen väliaineen tiheämmän pään kanssa, minkä jälkeen nestemäinen väliaine uitrasentrifugoidaan, kunnes seerumi komponenttien jakautuminen tiheysgradienttiin on saavuttanut tasapainotilan, ja sen jälkeen hepatitis B pinta-antigeenille spesifistä vasta-ainetta sisältävät fraktiot erotetaan, (b) kaikki verinäytteet, joissa havaitaan agglutinoitumista, neutraloidaan sekoittamalla niihin ihmisen hepatitikseen sidottua vasta-ainetta, (c) vaiheesta (b) saaduista näytteistä erotetaan reumafaktori sekoittamalla näytteet lateksipallojen kanssa, jotka on päällystetty ihmisen gamma-glo-buliinilla, ja pallot yhdessä niihin absorboituneen reumafaktorin kanssa erotetaan , ja (d) mainitut näytteet, joissa agglutinoitumista on havaittu, sekoitetaan uudestaan mainittuun diagnostiseen koostumukseen.
3 63493
Marsut tehdään immuuneiksi hepatitis B pinta-antigeeni 1lä,joka on puhdistettu menetelmäΠS, joka on kuvattu US-patenttijulkaisussa 3 838 ]kk. Alku-immunointi suoritetaan antigeenillä Freund'in apuaineessa eläimen jalan polku-känsiin, minkä jälkeen suoritetaan toistuvia antigeeni rokotuksia, joko apuaineen kanssa tai ilman sitä, vatsaontelonsisäisesti, lihaksensisäisesti, ihonalaisesti tai laskimonsisäisesti. Immunoiduista eläimistä kerätyt seerumit yhdistetään ja mahdollisesti jäljellejäänyt ihmisen seerumiproteiini 1 le spesifinen vasta-aine poistetaan saattamalla antiseerumi kosketukseen normaalin ihmis-seerumin kanssa. Gammaglobuliini voidaan sitten eristää seostamalla lA-%:isel-la vesipitoisella natriumsulfaati1 la, dialysoida vesipitoista fosfaatilla puskuroitua suolaliuosta vastaan ja edullisesti kuumentaa 56°C:ssa n. 30 minuuttia komplementin hävittämiseksi.
Vasta-ainetta puhdistetaan edelleen yleisillä menetelmi1lä,joi ta on kuvattu julkaisuissa The Journal of Immunology, Voi. 106, no 3, sivut 589“597» maaliskuu 1971, ja Biochemistry, Voi 6, no 5, sivut 1A60-1A66, toukokuu 1967. Spesifinen hepatitis B pintavasta-aine puhdistetaan absorboituneesta marsun seerumista sekoittamalla seerumi optimaalisissa suhteissa ihmisseerumiin, joka sisältää hepatitis B pinta-antigeeniä, inkuboimalla 37°C:ssa 1 tunti ja sitten yli yön !40C:ssa. Näin muodostunut antigeeni-vasta-aine-saostuma pestään sitten kahdesti kylmässä fosfaatilla puskuroidussa suolaliuoksessa; jolloin suurin osa jäljelle jääneistä ei-spesifisistä proteiineista saadaan poistetuksi. Antigeeni -vasta-aine-saostuma liuotetaan sitten kylmään 0,2M et?kkahappoon, joka sisältää 2 % sakkaroosia, pH 2,3, tai eri molaansim kaotrooppisia ioneja sisältäviin liuoksiin (esim. 2,OM natriumtiosyanaattiin, pH 6,6). Asiantuntijalle on selvää, että muitakin sopivia puskureita antigeeni-vasta-aine-kompleksien dis-sosioimiseksi voidaan käyttää. Nämä dissosioidut antigeenit ja vasta-aineet erotetaan linkoamalla kierrosluvulla 25 000 - 28 000 r/min 12-15 tunnin ajan tai kierrosnopeudella 30 000 3/min k tunnin ajan 4-AO %:n jatkuvalla sakkaroosi-gradientilla Beckman TI-15 vyöhykeroottorissa. Roottori tyhjennetään pumppaamalla sisään 50-%:ista sakkaroosia gradientin muuttamiseksi ja 20 ml:n jakeista määritetään U.V.-absorptio 1 cm:n kennossa 280 nmrssä ja huippujakeet yhdistetään, jolloin saadaan puhdistettu, spesifinen vasta-ainefraktio ja puhdistettu antigeenifraktio. Kumpikin fraktio neutraloidaan sitten 0,1N NaOHrlla. Vasta-ainefraktio väkevöidään alkuperäiseen seerumi tilavuuteen ja dialysoidaan yli yön glysiinillä puskuroitua suolaliuosta vastaan. Puhdistettu vasta-aine tiirataan sitten ja standardoidaan.
„ 63493
Keksinnön kohteena on myös testipakkaus edellä kuvattua hepatitis B pinta-antigeenin toteamismenetelmää yarten, joka koostuu muovilevyistä, joilla testit suoritetaan, sekä reagenssipui loista, jotka käsittävät: (a) reagenssipul lon, joka sisältää diagnostista koostumusta, jossa on vesipitoisessa suspensiossa 0,1 - 3 paino/tilavuus-% käytännöllisesti katsoen samanlaisia pallon muotoisia polystyreenihiukkasia, joiden halkaisija on 0,05- 2,0 pm ja jotka on päällystetty puhdistetulla hepatitis B pinta-antigeenille spesifisellä vasta-aineella, jolloin vasta-aine on valmistettu sellaisen marsun seerumista, joka on immunoitu puhdistetulla ihmisverestä eristetyllä hepatitis B pinta-antigeeni 1 la ja joka ei sisällä muita ihmisen seerumiproteiinei1 le spesifisiä vasta-aineita, jolloin vesipitoinen suspensio sisältää myös liuenneessa muodossa 2-5 tilavuus-% kokonaissuspension määrästä laskettuna normaalia marsun seerumia, joka ei sisällä hepatitis B pinta-antigeeni 1 le spesifistä vasta-ainetta, ja jolloin polystyreenihiukkaset on päällystetty sellaisella määrällä mainittua vasta-ainetta, joka juuri riittää estämään hiukkasten aggre-goitumisen itsestään, (b) reagenssipullon, joka sisältää ihmisen positiivista vertailuseeru- mia, (c) reagenssipullon, joka sisältää ihmisen negatiivista vertailuseeru- mia, ja (d) reagenssipullon, joka sisältää fosfaatilla puskuroitua suolaliuosta, jossa on 5 % naudan seerumialbumiiniproteiinia. Testipakkaukselle on tunnusomaista, että reagenssipullossa (a) käytetty vasta-aine, jolla polystyreenihiukkaset päällystetään, on puhdistettu tunnetulla tavalla saattamalla antigeeni /vasta-aine-kompleks in liuos, joka on valmistettu sekoittamalla vasta-ainetta sisältävää marsun seerumia ihmisseerumiin, joka sisältää hepatitis B pinta-antigeenille spesifisiä antigeenipitoisia vasta-aineita, kosketukseen tiheys-gradientin sisältävän vesipitoisen väliaineen tiheämmän pään kanssa, minkä jälkeen vesipitoinen väliaine ultrasentrifugoidaan, kunnes seerumi komponenttien jakautuminen tiheysgradienttiin on saavuttanut tasapainotilan, ja sen jälkeen hepatitis B pinta-antigeenille spesifistä vasta-ainetta sisältävät fraktiot erotetaan, ja jolloin reagenssipullot käsittävät lisäksi: (e) reagenssipuilon, joka sisältää ihmisen hepatitikseen sidotun vasta-aineen vesiliuosta, ja (f) reagenssipullon, joka sisältää ihmisen gamma-globuliini 1 la päällystettyjen lateksipallojen vesisuspensiota.
5 63493
Natriumatsidia 0,1 %, voidaan lisätä säilöntäaineeksi diagnostiseen reagensiin. Vasta-aine laimennetaan optimaalisesti valmistamalla pieniä eriä diagnostista reagenssia eri vasta-aineen laimennuksin ja testaamalla näillä ihmisseerumeita, joiden tiedetään sisältävän hepatitis B pinta-antigeeniä.
Laimennus, jolla saadaan paras tulos, valitaan diagnostisen reagenssin valmistukseen.
Sopivasti laimennettu vasta-aine sekoitetaan 0,2 /um:n läpimittaisten polystyreenilateksipallosten kanssa. 1-2 tunnin sekoittamisen jälkeen palloset pestään kolmasti glysiinillä puskuroidulla suolaliuoksella ja suspendoidaan uudelleen glysiinillä puskuroituun suolaliuokseen.
Vesipitoinen suspensio sisältää 0,1 - 3 paino/tilav.-¾. edullisesti n. 0,5 paino/tilav.-% hartsihiukkasia. Diagnostisen reagenssin valmistusta varten suspensio sisältää edullisesti n. 0,05 paino/tilav.-% vasta-ainetta absorboituneena hartsihiukkasi1 le, mutta tätä voidaan vaihdella hiukkasten pitoisuuden mukaan. Vasta-aineen määrän tulisi olla juuri riittävä estääkseen hartsi-hiukkasten itsestään kasautumisen. Pallomaisille polystyreeni hiukkasi 1 le, joiden läpimitta on 0,23 mikronia, tämä määrä on n. yksi kymmenesosa hiukkasten painosta.
Suspensio sisältää edullisesti stabiloimisainetta, joka on lisätty vasta-aineen absorption jälkeen, esim. inerttiä proteiinia, kuten seerumi aibumii-nia väkevyydessä esimerkiksi 0,1 paino/tilav.-%.
Keksinnön erään edullisen suoritusmuodon mukaan diagnostinen reagenssi sisältää myös normaaliseerumia (ts. seerumia, joka ei sisällä hepatitis B pinta-antigeenille spesifistä vasta-ainetta tai antigeeniä itseään), joka on saatu samasta eläinlajista, kuin mistä vasta-aineen sisältävä seerumi saatiin. Tällaisen normaaliseerumi n läsnäolo vähentää oleellisesti "väärien positiivisten" osuutta, kun tätä diagnostista reagenssia käytetään hepatitis B pinta-antigeenin havaitsemiseen verinäytteistä. Edullisesti lisätään n. 1 osa normaaliseerumia 20-50 tilavuusosaa kohti vasta-aineella päällystettyjen hartsihiukkasten vesipitoista suspensiota. Jos normaa1iseerumia samasta eläinlajista, kuin mistä vasta-ainetta sisältävä seerumi saatiin, ei ole mukana diagnostisessa reagens-sissa, n. 10 % ihmisseerumia, joka ei sisällä hepatitis B pinta-antigeeniä, aiheuttaa hartsiosasten aggregoitumisen. Tämä johtuu todennäköisesti siitä, että tällaisissa ihmisseerumeissa on mukana aineita, jotka reagoivat muiden aineiden kanssa, jotka ovat peräisin eläimen anti-seerumista, josta vasta-aine hepatitis B pinta-antigeeneille saatiin. Jos normaalia eiäinseerumia on mukana, i 6 63493 kuitenkin jo n. 1-3 t ihraisen seerumeita aggregoi hartsihiukkaset hepatitis B pinta-antigeenin puuttuessa seerumeista. Tämä saattaa johtua normaalin eläin-seerumin komponenteista, Jotka pystyvät reagoimaan näiden aineiden kanssa ihmisseerumeis$a ja siten estämään niitä aikaansaamasta hartsihiukkasten yhteen-kasautumi sta.
Normaali ihmisen vertailuseerumi valmistetaan laimentamattomasta normaalista ihmisseerumista, jonka on osoitettu olevan negatiivinen hepatitis B pinta-antigeenille lateksireagenssi1 la ja radioimmunomäärityksellä.
Positiivinen vertailuseerumi valmistetaan tunnetuista hepatitis B pinta-antigeenille positiivisista ihmisseerumeista. Seerumia lämpökäsitellään 60°C:-ssa ainakin 10 tuntia virustarttuvuuden hävittämiseksi ja laimennetaan sitten kaksinkertaiseksi sarjaksi normaalissa ihmisseerumissa. Laimennus, jota käytetään tuotetta varten, on se, joka antaa selvän 1+reaktion lateksireagenssin kanssa.
Hepatitikseen sidottu vasta-aine (ihmisen) valmistetaan ihmisen verinesteestä, joka sisältää vasta-aineita hepatitis B pinta-antigeenille. Verineste saadaan eri plasmaforeesikeskuksista, tiirataan geelidiffuusion avulla ja muutetaan seerumiksi lisäämällä kalsiumkloridia ja naudan trombiinia. Gammaglobuliinia valmistetaan sitten seerumista seostamalla 16-%:ise11a natriumsul-faatilla. Saostuma pestään l4-$:lsessa natriumsulfaatissa, minkä jälkeen sitä dialysoidaan yli yön vähämolaarista fosfaattipuskuria vastaan, ja sitten se johdetaan DEAE-selluloosan läpi, joka on etukäteen tasapainotettu samalla puskurilla. Puhdistettu gammaglobuliini standardoidaan sitten väkevöimällä ja dialysoidaan fosfaatilla puskuroitua suolaliuosta vastaan.
Reumafaktorin absorboiva reagenssi käsittää lateksipallosia, jotka on päällystetty normaalilla ihmisen gammaglobuliinilla. Sitä saadaan valmistamalla standardi 1iuos puhdistetusta gammaglobuliinista glysiinillä puskuroidussa suolaliuoksessa, lisäämällä suspensio, jossa on 0,2^im:n läpimittaisia polystyreeni-pallosia, ja lämmittämällä 57°C:ssa 15 minuutin ajan. Suspensio laimennetaan sitten glysiinillä puskuroituun suolaliuokseen.
Tarkistustestilaimennin valmistetaan laimentamalla liuos, jossa on 30 % naudan seerumialbumiinia, fosfaatilla puskuroidulla suolaliuoksella 5 %:n proteiinipitoisuuteen.
i Ί 63493
Testimenetelmiä A. Verinäytteen valmistus
Seerumi on verinäytteen edullinen muoto. Jos testinäyte on täysverta, täytyy sitä ensin käsitellä siinä olevien solujen hajoittamiseksi ja koagu-loitumisen estämiseksi. Tätä tarkoitusta varten sitä voidaan käsitellä vesipitoisella laimentimella, joka sisältää polyoksietyloitu ai kyy1ifenolityyppistä ei-ionista pinta-aktiivista ainetta, esim. iso-oktyylidenoksipolyöksietyyli-etanolia (Triton X-100, Rohm ε Haas Co.) ja natriumsitraattia.
Jos testinäyte on veriplasmaa, sen täytyy sisältää koaguloitumisen esto-ainetta, esim. natriumsitraattia. Sitä käsitellään edullisesti myös samalla ei-ionista pinta-aktiivista ainetta sisältävällä vesipitoisella laimeniimelJa, kuin täysveren yhteydessä jäljelle jääneiden solujen hajoittamiseksi.
B. Reagenssit 1. Lateksireagenss? a. Spes i f ?syys 1. Määritetty testaamalla reagenssia ryhmällä positiivisia ja negatiivisia seerumeita, joita toimittaa Bureau of Biologies, sekä myös ryhmällä, jossa on 100 negatiivista normaaleilta vapaaehtoisilta kerättyä negatiivista seerumia.
b. Reakti ivisuus 1. Reagenssi suspendoidaan uudelleen voimakkaasti sekoittaen.
2. Yhteen muovisen testi levyn testisyvennykseen lisätään 3 pisaraa positiivista vertailuseerumia. Viereiseen syvennykseen lisätään 3 pisaraa negatiivista verta?luseerumia.
3. Kuhunkin näytteeseen lisätään 1 pisara reagenssia.
k. Sekoitetaan perusteellisesti käyttäen eri sekoitinta kutakin syvennystä kohti.
5. Pyöritetään levyä mekaanisella sekoittajalla 10 minuuttia kierros-luvulla 150 r/roin.
6. Seoksia tutkitaan epäsuorasti valaistussa katselulaitteessa.
7· Positiivisella vertailuseeruminäytteellä pitäisi havaita selvästi positiivinen, heikko (+)reaktio. Negatiivisella vertailuseeruminäytteellä ei reaktiota pitäisi havaita.
3 63493 2. Positiivinen yertailuseerumi a. ReaktIivisuus 1. Positiiyinen vertailuseerumi testataan lateksireagenssi1 la 1+ reaktiivisuuden varmistamiseksi.
3» Neqätiiyinen vertailuseerumi a. Reakti iyisuus 1. Negatiivinen vartai1useerumi testataan lateksireagenssi1 la negatiivisen reaktion varmistamiseksi.
fr. Normaali ihmisen vertai 1useerumi a. Spesi f isyys 1. Varmistustesti suoritetaan sen varmistamiseksi, että se ei reagoi iateksireagenssin kanssa ja että siinä ei ole hepatitis B pinta-antigeenille positiivista seerumia.
5. Hepatitikseen liittyvä vasta-aine (ihmisellä) a. Reaktiivisuus 1. Geelidiffuusiotitraus suoritetaan käyttäen standardi hepatitis B pinta-antigeeniä.
b. Spesifisyys 1. Käyttötesti suoritetaan sen määrittämiseksi, inhiboiko seerumi spesifisesti hepatitis B pinta-antigeenille positiivisia näytteitä, kun sitä käytetään tarkistustestissä.
6. Absorptioreagenssi a. Reakti ivisuus 1. Reagenssi testataan seerumilla, joka sisältää reumafaktorin sen varmistamiseksi, että se reagoi reumafaktorin kanssa ja osittain absorboi sen.
7. Tarkistustestilaimennin a. Spesifisyys 1. Tarkistustesti suoritetaan käyttäen laimenninta sen varmistamiseksi, että se ei reagoi lateksireagenssin kanssa ja että se ei inhiboi hepatitis B pinta-antigeenille positiivista seerumia.
C. Seeruminäytteiden testaus (seulontatesti) 1. 120>ul seerumia pannaan muovilevyn syvennykseen.
2. Lisätään yksi pisara lateksireagenssia.
3. Sekoitetaan perusteellisesti käyttäen erillistä kertakäyttösekoi-tinta kutakin näytettä varten.
fr. Pyöritetään levyä mekaanisella sekoittajalla 10 minuuttia kierros-nopeudella 150 r/min.
63493 9 5. Seokset tutkitaan epäsuorasti valaistulla katselulaitteelIa.
6. Reaktiot arvioidaan asteikolla l+:sta 4+:aan vastaten lisääntyvää agg1ut i naat i ovoimakkuutta.
D. Tarkistava neutralöimisroenetelmä 1. Näytteet a. Kaikki näytteet, jotka on havaittu positiivisiksi seulontatestissä.
b. Positiivinen vertailuseerurai, joka on otettu mukaan heikoksi positiiviseksi näytteeksi.
2. Menettelytapa a. 10 x 75 mm:n kertakäyttökoeputki merkitään näytteen tunnusnumerolla ja "A":11a. Toinen putki merkitään näytteen tunnusnumerolla ja "B":llä.
b. Kaksi pisaraa (n. 80 μ] ) hepatitikseen liittyvää vasta-ainetta (ihmisellä) lisätään "A":11a merkittyyn putkeen.
c. Lisätään kaksi pisaraa normaalia ihmisen negatiivista vertailuseeru-mia "B":11ä merkittyyn putkeen.
d. Lisätään 240 yul testinäytettä kuhunkin "A":11a ja "B":llä merkittyyn putkeen.
e. Putkien sisältöjä sekoitetaan ja inkuboidaan 30 minuuttia 37°C:ssa vesihauteella.
f. Testataan 120 yul putkista "A" ja "B" käyttäen seulontareagensseja ja -menetelmiä. Useimmille suhteelisen heikosti positiivisille näytteille voidaan erottaminen spesifisten ja ei-spesifisten positiivisten välillä tehdä ilman 1isätestausta, koska "A"-näyte ei reagoi, kun taas "B"-näyte pysyy positiivisena ja ihmisen vasta-aine estää sitä spesifisesti. Niitä näytteitä varten, jotka ovat speisifisiä, mutta voimakkaammin positiivisia ,sekä myös niitä varten, jotka ovat ei-spesifisiä, vaaditaan 1isätestausta, kuten seuraavassa yksityiskohtaisemmin esitetään.
g. Jokaista putkea varten, joka vaatii 1isätestausta, merkitään kuusi lisäputkea laimennuksin 1:4 - 1:128 sekä näytteen tunnuksella, että myös "A":11a tai "B":1lä.
h. Kuhunkin putkeen lisätään 200yul tarkistustestilaimenninta, mukaanluettuna putket, jotka sisältävät potilaan näytteen ja ihmisen antiseerumia tai normaalia ihmisseerumia, ts. alkuperäisiin MAM- ja "B"-putkiin laimentamalla ne suurinpiirtein suhteeseen 1:2.
i. Tehdään kaksinkertaiset laimennukset siirtämällä 200 ^il, käyttäen erillisiä mikropipettisuukappaleita kutakin putkea varten ja sekoittamalla hyvin ennen näytteiden poistamista.
i : |0 63493 ί j. Testataan 120 ^ul kustakin putkesta käyttäen seulontareagensseja ja -njenetelmiä.
k. Sarjassa "B" ( näyte ja normaali ihmisseeruml) täytyy tiitterin olla neljä kertaa (2 putkea) suurempi kuin sarjassa "A" (näyte ja neutraloiva hepa-titikseen liittyvä vasta-aine (ihmisen) , jotta näytettä voitaisiin pitää spesifisenä hepatitis B pinta-antigeenille positiivisena). Tapauksissa, joissa sekä "A" että "Β’'-ti i tter i on suurempi kuin 1:128, täytyy laimentamista jatkaa edelleen, kunnes pääpiste on määritetty.
Koska jotkut näytteet, jotka sisältävät reumafaktoria reagoivat lateksi-reagenssin kanssa, on välttämätöntä erottaa ne näytteet, jotka sisältävät sekä hepatitis B pinta-antigeeniä ja reumafaktorin.
Reumafaktorin läsnäolo voidaan määrittää testaamalla seerumi reumafak-torin absorboivalla reagenssilla (ihmisen gammaglobuliini 1 la päällystetty lateksi) sekoittamalla 120 jul näytettä ja I pisara absorboivaa reagenssia muovi-syvennyksessä ja sekoittamalla 5 minuuttia.
Jos näyte sisältää reumafaktorin, se voidaan absorboida erilleen lisäämällä 720 jul näytettä 10 x 75 mm:n koeputkeen ja lisäämällä 6 pisaraa absorboivaa reagenssia putkeen. Sekoitetaan hyvin ja inkuboidaan huoneen lämpötilassa 15 minuuttia. Lingotaan kierrosnopeudella 3000 r/min. 5 minuuttia. Tarkistava neutraloimisprosessi suoritetaan absorboidulla näytteellä kuten yksityiskohtaisemmin edellä esitettiin.
Puhdistetun vasta-aineen valmistus hepatitis B pinta-antigeeni 1 le
Marsuja immunoidaan hepatitis B pinta-antigeeni 1 la, joka on puhdistettu US-patenttijulkaisussa 3 838 kuvatulla menetelmällä.
Alkuimmunointia antigeenillä Freund1in apuaineessa marsujen jalkojen pol-kukänsiin seuraa kaksi vatsaontelonsisäistä rokotusta antigeenillä ilman apuainetta. Immunoiduista eläimistä kerätyt seerumit kootaan yhteen, minkä jälkeen tarvittaessa poistetaan jäljellejäänyt ihmisseerumiproteiinei1 le spesifinen vasta-aine saattamalla anti-seerumi kosketukseen normaalin ihmisseeru-min kanssa.Gammaglobu1iini puhdistetaan sitten seostamalla H paino/tilav.-%;isel1a vesipitoisella natriumsulfaatilIa, dialysoidaan vesipitoista, fosfaatilla puskuroitua suolaliuosta vastaan ja lämmitetään edullisesti 56°C:ssa n. 30 minuuttia komplementin hävittämiseksi.
Puhdistettu seerumi sekoitetaan ihmisseerumiin, joka sisältää hepatitis B pinta-antigeeniä, inkuboidaan 37°C:ssa I tunti ja sitten yli yön A°C:ssa.
Näin muodostunut antigeeni-vasta-aine-saostuma pestään sitten kahdesti kyl- 11 63493 mässä fosfaatilla puskuroidussa suolaliuoksessa, jotta suurin osa jäljelle jääneistä ei-spesifisistä proteiineista saadaan poistetuksi. Antigeeni-vasta-aine-saosturoa liuotetaan sitten kylmään 0,2M etikkahappoon, jossa on 2 % sakkaroosia, pH 2,3 tai kaotrooppisia Ioneja sisältävään liuokseen. Dissosi-oituneet antigeenit ja vasta-aineet erotetaan linkoamalla kierrosluvulla 25 000-28 000 r/min 12-15 tunnin ajan tai kierrosluvulla 30 000 r/min A tunnin ajan jatkuvalla 10-^0 %:n sakkaroosigradienti1 la Beckman T1 — 15 vyöhykeroottorilla. Roottori tyhjennetään pumppaamalla sisään 50 % sakkaroosia gradientin muuttamiseksi ja 20 ml:n jakeista määritetään U.V.-absorptio 1 cm:n kennossa 280 nmcssä ja huippujakeet kootaan, jolloin saadaan, spesifinen vasta-ainejae, joka sitten neutraloidaan 0,1 N NaOHrlla. Vasta-ainejae väkeväidään alkuperäiseen seerumitilavuuteen ja sitä dialysoidaan yli yön glysiinillä puskuroitua suolaliuosta vastaan. Puhdistettu vasta-aine tiirataan sitten ja standardoidaan.
Vasta-aine laimennetaan optimaalisesti valmistamalla pieniä eriä diagnostista reagenssia, joilla on eri vasta-ainelaimennukset ja nämä testataan ihmisseerumei1 la, joiden tiedetään sisältävän hepatitis B pinta-antigeenia. Laimennus, jolla saadaan paras tulos, valitaan diagnostisen reagenssin valmistusta varten.
Diagnostisten reagenssien valmistus
Esimerkki I
30 paino/tilav.-$:inen vesipitoinen suspensio, jossa on Dow Chemical'in valmistamia 0,23 /um:n polystyreenipallosia, laimennetaan 8 paino/tilav.-%:isek-si glysiinillä puskuroidulla suolaliuoksella ja dialysoidaan glysiinillä puskuroitua suolaliuosta vastaan yli yön. Se lisätään sitten välittömästi 9-ker-taiseen tilavuusmäärään puhdistettua marsun anti-seerumia, joka sisältää vasta-ainetta hepatitis B pinta-antigeenille (laimennettu 0,05 paino/tilav.-%:i-seksi) ja sekoitetaan jatkuvasti 30 minuuttia. Yksi tilavuusosa naudan seerumi-albumiinia (1 % paino/tilav.) lisätään sitten ja lopuksi natriumatsidia, jolloin lopullisen tuotteen väkevyydeksi saadaan 0,1 paino/tilav?%.
Esimerkki 11 30 paino/tilav.-fc suspensio, jossa on polystyreenipallosia (0,05 - 2.0 μ) laimennetaan 8-%:iseksi glysiinillä puskuroidulla suolaliuoksella ja steriloidaan lisäämällä hypoklori i tti 1 iuosta . Sitä dialysoidaan sitten glysii-nillä puskuroitua suolaliuosta vastaan hypokloriitin poistamiseksi. Se lisätään sitten 9-kertaiseen tilavuusmäärään sopivasti laimennettuja, puhdistettuja 63493 12 hepatitis B pinta-antigeenille spesifisiä vasta-aineita. Polystyreenisuspen-slo lisätään hitaasti ja sekoittaen, jatkaen sekoittamista 1 tunnin ajan. Poly-styreenipalloset lingotaan, pestään kahdesti1ingossa puskuroidulla suolaliuoksella ja suspendoidaan uudestaan alkuperäiseen tilavuuteen puskuroitua suolaliuosta. Naudan seerumi ai burniinia lisätään sekoittaen 30 minuutin ajan. 0,1 tilavuusosaa immunoiduista marsuista eristettyä normaa1iseerumia (laimennettu suhteeseen 1:3,5 glysiinillä puskuroidulla suolaliuoksella) lisätään ja seosta sekoitetaan jälleen 30 minuuttia. Lopuksi seosta ravistellaan voimakkaasti aggregaattien hajoittamiseksi. Kaikki käytetyt liuokset steriloidaan suodattamalla ja ne sisältävät 0,1 paino/tilav.-l natriumatsidia säilöntäaineena.
Esimerkki 11 I
Valmistetaan positiivinen vertailuseerumi yhdistetyistä tunnetuista hepatitis B pinta-antigeenille positiivisista Ihmisseerumeista. Seerumia lämpökäsi-tellään sitten 60°C:ssa n. 10 tunnin ajan νίrustarttuvuuden hävittämiseksi ja laimennetaan sitten kaksinkertaiseksi sarjaksi normaalissa ihmisseerumissa. Käytettävä laimennus on se, joka antaa selvän 1+reaktion esimerkin I tai esimerkin Il lateksireagenssin kanssa. Se steriloidaan suodattamalla ja pannaan sterileihin säiliöihin.
Esimerkki IV
Negatiivinen verta11useerumi valmistetaan laimentamattomasta ihmissee-rumista, joka on osoittautunut negatiiviseksi hepatitis B pinta-antigeenille esimerkin I tai esimerkin II lateksireagenssi1 la ja radioimmunomäärityksί1lä.
Se steriloidaan suodattamalla ja pannaan steriileihin säiliöihin.
Esimerkki V
Ihmisen verinestettä, joka sisältää vasta-aineita hepatitis B pinta-antigeenille, titrataan geelidiffuusion avulla ja muutetaan seerumiksi lisäämällä kalslumkloridia ja naudan trombiinia. Gammaglobuliinia valmistetaan sitten seerumista seostamalla 16 paino/tilav.-%:isella natriumsulfaati1 la. Saostuma pestään 1¾ paino/ti1 av.isessa natriumsulfaatissa, sitä dialysoidaan yli yön vä-hämolaarista fosfaattipuskuria vastaan, minkä jälkeen se johdetaan DEAE-sellu-loosan läpi, joka on etukäteen tasapaino!tettu samalla puskurilla. Puhdistettu gammaglobuliini standardoidaan sitten väkevöimällä ja dialysoimalla fosfaatilla puskuroitua suolaliuosta vastaan. Se steriloidaan sitten suodattamalla ja pannaan steri ίleihin säiliöihin.
,3 63493
Esimerkki VI
Puhdistetun ihmis-gammaglobuliin?n standardi 1iuos glysiinillä puskuroidussa suolaliuoksessa lisätään suspensioon, jossa on 0,2 pm:n polystyree-nilateksia ja kuumennetaan 57°C:ssa 15 minuuttia- Suspensio, jota käytetään absorboimaan reumafaktori testiseerumeissa, laimennetaan glysiinillä puskuroidussa suolaliuoksessa ja pannaan steriileihin säiliöihin.
Esimerkki VI|
Tarkistustestilaimennin valmistetaan laimentamalla liuos, jossa on 30 paino/tilav.-% naudan seerumialbumiinia, fosfaatilla puskuroidulla suolaliuoksella 5 paino/ti1av.-%:n proteiinIväkevyyteen. Liuos steriloidaan sitten suodattamalla ja pannaan steriileihin säiliöihin.
Claims (2)
1. Menetelmä hepatitis B pinta-antigeenin toteamiseksi ihmisverestä, jolloin verinäyte, josta punaiset yexisolut on poistettu, sekoitetaan diagnostiseen koostumukseen, joka muodostuu vesisuspensiosta, jossa on käytännöllisesti katsoen samanlaisia pallomaisia polystyreenihiukkasia, joiden halkaisija on 0,05- 2,0 >um ja jotka on päällystetty puhdistetulla hepatitis B pinta-antigeenille spesifisellä vasta-aineella, jolloin tämä vasta-aine on eristetty sellaisten marsujen seerumista, jotka on immunisoitu puhdistetulla ihmisverestä eristetyllä hepatitis B pinta-antigeeni11a ja jolloin tämä vasta-aine ei sisällä muita ihmisseerumiproteiineille spesifisiä vasta-aineita, ja jolloin vesisuspensio sisältää myös liuenneena normaalia marsun seerumia, joka ei sisällä hepatitis B pinta-antigeenille spesififistä vasta-ainetta ja jolloin polystyree-nihiukkaset on päällystetty sellaisella määrällä mainittua vasta-ainetta, joka juuri estää hiukkasten aggregoitumisen itsestään, ja verinäytteen ja suspension seoksesta tutkitaan, tapahtuuko siinä agglutinoitumista, tunnettu siitä, että (a) polystyreenihiukkasten päällystykseen käytetty vasta-aine on puhdistettu tunnetulla tavalla saattamalla antigeeni/vasta-ainekompleksin liuos, joka on valmistettu sekoittamalla vasta-ainetta sisältävää marsun seerumia ihmissee-rumiin, joka sisältää hepatitis B pinta-antigeenille spesifisiä antigeenipitoi-sia vasta-aineita, kosketukseen tiheysgradientin sisältävän nestemäisen väliaineen tiheämmän pään kanssa, minkä jälkeen nestemäinen väliaine ultrasentri-fugoidaan, kunnes seerumikomponenttien jakautuminen tiheysgradienttiin on saavuttanut tasapainotilan, ja sen jälkeen hepatitis B pinta-antigeenille spesifistä vasta-ainetta sisältävät fraktiot erotetaan, (b) kaikki verinäytteet, joissa havaitaan agglutinoitumista, neutraloidaan sekoittamalla niihin ihmisen hepatitikseen sidottua vasta-ainetta, (c) vaiheesta (b) saaduista näytteistä erotetaan reumafaktori sekoittamalla näytteet lateksipallojen kanssa, jotka on päällystetty ihmisen gamma-glo-buliinilla, ja pallot yhdessä niihin absorboituneen reumafaktorin kanssa erotetaan, ja (d) mainitut näytteet, joissa agglutinoitumista on havaittu, sekoitetaan uudestaan mainittuun diagnostiseen koostumukseen. is 63493
2. Testipakkaus patenttivaatimuksen 1 mukaista hepatitis B pinta-antigeenin toteamismenetelmää varten, joka koostuu muovilevyistä, joilla testit suoritetaan, sekä reagenssipulloista, jotka käsittävät: (a) reagenssipullon, joka sisältää diagnostista koostumusta, jossa on vesipitoisessa suspensiossa 0,1-3 paino/tilavuus-% käytännöllisesti katsoen samanlaisia pallon muotoisia polystyreenihiukkasia, joiden halkaisija on 0,05-2,0 /um ja jotka on päällystetty puhdistetulla hepatitis B pinta-antigeenille spesifisellä vasta-aineella, jolloin vasta-aine on valmistettu sellaisen marsun seerumista, joka on immunoitu puhdistetulla ihmisverestä eristetyllä hepatitis B pinta-antigeenilla ja joka ei sisällä muita ihmisen see-rumiproteiineille spesifisiä vasta-aineita, jolloin vesipitoinen suspensio sisältää myös liuenneessa muodossa 2-5 tilavuus-% kokonaissuspension määrästä laskettuna normaalia marsun seerumia, joka ei sisällä hepatitis B pinta-antigeenille spesifistä vasta-ainetta, ja jolloin polystyreenihiukkaset on päällystetty sellaisella määrällä mainittua vasta-ainetta, joka juuri riittää estämään hiukkasten aggregoitumisen itsestään, (b) reagenssipullon, joka sisältää ihmisen positiivista vertailuseerumia, (c) reagenssipullon, joka sisältää ihmisen negatiivista vertailuseerumia ja (d) reagenssipullon, joka sisältää fosfaatilla puskuroitua suolaliuosta, jossa on 5 % naudan seerumialbumiiniproteiinia, tunnettu siitä, että reagenssipullossa (a) käytetty vasta-aine, jolla polystyreenihiukkaset päällystetään, on puhdistettu tunnetulla tavalla saattamalla antigeeni/vasta-aine-komp-leksin liuos, joka on valmistettu sekoittamalla vasta-ainetta sisältävää marsun seerumia ihmisseerumiin, joka sisältää hepatitis B pinta-antigeenille spesifisiä antigeenipitoisia vasta-aineita, kosketukseen tiheysgradientin sisältävän vesipitoisen väliaineen tiheämmän pään kanssa, minkä jälkeen vesipitoinen väliaine ultrasentrifugoidaan, kunnes seerumikomponenttien jakautuminen tiheys-gradienttiin on saavuttanut tasapainotilan, ja sen jälkeen hepatitis B-pinta-antigeenille spesifistä vasta-ainetta sisältävät fraktiot erotetaan, ja jolloin reagenssipullot käsittävät lisäksi: (e) reagenssipullon, joka sisältää ihmisen hepatitikseen sidotun vasta-aineen vesiliuosta, ja (f) reagenssipullon, joka sisältää ihmisen gamma-globuliinilla päällystettyjen lateksipallojen vesisuspensiota. ,6 63493
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US55094975 | 1975-02-19 | ||
| US05/550,949 US3992517A (en) | 1975-02-19 | 1975-02-19 | Detection of hepatitis B surface antigen by latex agglutination |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI760326A FI760326A (fi) | 1976-08-20 |
| FI63493B FI63493B (fi) | 1983-02-28 |
| FI63493C true FI63493C (fi) | 1983-06-10 |
Family
ID=24199232
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI760326A FI63493C (fi) | 1975-02-19 | 1976-02-11 | Paovisande av hepatitis b ytantigen genom latex-agglutination |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US3992517A (fi) |
| JP (1) | JPS51106723A (fi) |
| AR (1) | AR210753A1 (fi) |
| AT (1) | AT352290B (fi) |
| BE (1) | BE838474A (fi) |
| BR (1) | BR7600906A (fi) |
| CH (1) | CH613048A5 (fi) |
| CS (1) | CS188129B2 (fi) |
| DD (1) | DD124128A5 (fi) |
| DE (1) | DE2604844C3 (fi) |
| DK (1) | DK144395C (fi) |
| EG (1) | EG12696A (fi) |
| ES (2) | ES445042A1 (fi) |
| FI (1) | FI63493C (fi) |
| FR (1) | FR2301825A1 (fi) |
| GB (1) | GB1529891A (fi) |
| IE (1) | IE42031B1 (fi) |
| IL (1) | IL48927A (fi) |
| IT (1) | IT1066096B (fi) |
| LU (1) | LU74348A1 (fi) |
| MX (1) | MX4962E (fi) |
| NL (1) | NL7601441A (fi) |
| NZ (1) | NZ179988A (fi) |
| PL (1) | PL98604B1 (fi) |
| RO (1) | RO71615A (fi) |
| SE (1) | SE429481B (fi) |
| SU (1) | SU1091844A3 (fi) |
| ZA (1) | ZA76721B (fi) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1508132A (en) * | 1974-05-20 | 1978-04-19 | Technicon Instr | Analysis of biological fluids |
| IL49752A (en) * | 1975-07-09 | 1979-07-25 | Kabi Ab | Compositions having affinity for hepatitis virus and method for hepatitis virus removal or concentration |
| US4202665A (en) * | 1978-11-06 | 1980-05-13 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University A Division Of Yeshiva University | Detection of hepatitis B surface antigen |
| US4204989A (en) * | 1978-12-13 | 1980-05-27 | Merck & Co., Inc. | Isolation of hepatitis B e antigen |
| US4310508A (en) * | 1979-06-19 | 1982-01-12 | Siber George | Diagnostic test and reagent therefor |
| US4340564A (en) * | 1980-07-21 | 1982-07-20 | Daryl Laboratories, Inc. | Immunoadsorptive surface coating for solid-phase immunosubstrate and solid-phase immunosubstrate |
| CA1172561A (en) * | 1981-01-28 | 1984-08-14 | Richard H. Decker | Igm detection method |
| US4351824A (en) * | 1981-02-05 | 1982-09-28 | Icl Scientific | Polystyrene latex reagents, methods of preparation, and use in immunological procedures |
| US4493899A (en) * | 1981-10-16 | 1985-01-15 | City Of Hope | Method of testing for particular antibodies in the serum of a patient |
| FR2531718B1 (fr) * | 1982-08-16 | 1986-11-21 | Sanofi Sa | Reactif permettant un dosage de tres haute sensibilite de l'antigene caracteristique du virus de l'hepatite b dans les liquides biologiques humains |
| US4542103A (en) * | 1982-09-13 | 1985-09-17 | Miles Laboratories Inc. | Latex agglutination determination of IgG in neonatals and in colostrum |
| JPS60256057A (ja) * | 1984-06-01 | 1985-12-17 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | 免疫学的測定法 |
| US6881536B1 (en) * | 1986-04-30 | 2005-04-19 | Bioveris Corporation | Particle based electrochemiluminescent assays |
| EP0737863A4 (en) * | 1993-12-28 | 1998-09-30 | Ss Pharmaceutical Co | METHOD FOR DETECTING BLOOD COMPONENTS AND KIT THEREFOR |
| US6159748A (en) * | 1995-03-13 | 2000-12-12 | Affinitech, Ltd | Evaluation of autoimmune diseases using a multiple parameter latex bead suspension and flow cytometry |
| JP3840521B2 (ja) * | 1995-08-21 | 2006-11-01 | Ａｓｐｉｏｎ株式会社 | ウイルス検出方法およびウイルス検査用キット |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BE759948A (fr) * | 1969-12-08 | 1971-06-07 | Mc Culler James F | Procede de detection de l'hepatite infectieuse et sereuse et reactifs utilises a cet effet |
| BE787014A (fr) * | 1971-07-31 | 1973-01-31 | Pfizer | Procede et reactif pour deceler la presence de l'antigene australien |
| GB1356413A (en) * | 1971-09-09 | 1974-06-12 | Pfizer Ltd | Method of obtaining purified australia antigen from blood serum |
| JPS49126818A (fi) * | 1973-04-13 | 1974-12-04 |
-
1975
- 1975-02-19 US US05/550,949 patent/US3992517A/en not_active Expired - Lifetime
- 1975-11-07 IE IE2435/75A patent/IE42031B1/en unknown
-
1976
- 1976-01-26 SE SE7600797A patent/SE429481B/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-01-28 IL IL48927A patent/IL48927A/xx unknown
- 1976-02-02 MX MX763642U patent/MX4962E/es unknown
- 1976-02-07 DE DE2604844A patent/DE2604844C3/de not_active Expired
- 1976-02-09 ZA ZA721A patent/ZA76721B/xx unknown
- 1976-02-10 ES ES445042A patent/ES445042A1/es not_active Expired
- 1976-02-10 AT AT91776A patent/AT352290B/de not_active IP Right Cessation
- 1976-02-11 RO RO7684761A patent/RO71615A/ro unknown
- 1976-02-11 FI FI760326A patent/FI63493C/fi not_active IP Right Cessation
- 1976-02-12 IT IT48062/76A patent/IT1066096B/it active
- 1976-02-12 NZ NZ179988A patent/NZ179988A/xx unknown
- 1976-02-12 NL NL7601441A patent/NL7601441A/xx not_active Application Discontinuation
- 1976-02-12 BE BE1007197A patent/BE838474A/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-02-13 BR BR7600906A patent/BR7600906A/pt unknown
- 1976-02-13 DK DK60876A patent/DK144395C/da not_active IP Right Cessation
- 1976-02-13 LU LU74348A patent/LU74348A1/xx unknown
- 1976-02-13 FR FR7604009A patent/FR2301825A1/fr active Granted
- 1976-02-13 CH CH178076A patent/CH613048A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-02-13 DD DD191240A patent/DD124128A5/xx unknown
- 1976-02-13 SU SU2322065A patent/SU1091844A3/ru active
- 1976-02-13 AR AR262244A patent/AR210753A1/es active
- 1976-02-14 PL PL1976187226A patent/PL98604B1/pl unknown
- 1976-02-14 JP JP51015405A patent/JPS51106723A/ja active Pending
- 1976-02-16 CS CS76998A patent/CS188129B2/cs unknown
- 1976-02-17 EG EG90/76A patent/EG12696A/xx active
- 1976-02-18 GB GB6477/76A patent/GB1529891A/en not_active Expired
- 1976-08-27 ES ES451061A patent/ES451061A1/es not_active Expired
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI63493C (fi) | Paovisande av hepatitis b ytantigen genom latex-agglutination | |
| US4294817A (en) | Method of fluoro immunoassay | |
| Grauballe et al. | Optimized enzyme‐linked immunosorbent assay for detection of human and bovine rotavirus in stools: Comparison with electron‐microscopy, immunoelectro‐osmophoresis, and fluorescent antibody techniques | |
| US5312744A (en) | Method of immobilizing and preserving an immunologically reactive substance | |
| US4299815A (en) | Carcinoembryonic antigen determination | |
| CA1170180A (en) | Process for the enzyme immuno determination in the heterogenous phase | |
| CA1168580A (en) | Immunological reagent for the detection of tubes of the rheumatoid factor in a biological specimen and process for preparing this novel reagent | |
| EP1709451B1 (en) | Reducing time to result for blood bank diagnostic testing | |
| EP0122620B1 (en) | Reagent and kit for determination of blood coagulation factor xiii | |
| CN101446586A (zh) | 免疫分析试剂和分析方法 | |
| Rizzetto et al. | A radioimmunoassay for HBcAg in the sera of HBsAg carriers: Serum HBcAg, serum DNA polymerase activity, and liver HBcAg immunofluorescence as markers of chronic liver disease | |
| GB2030294A (en) | Composition for determination of human beta 2-microglobulin, process for its preparation and its use | |
| US4460694A (en) | Bovine glycoproteins and use in diagnosing infectious mononucleosis | |
| CA2088404C (en) | Method for the determination of antigens or antibodies in the presence of an immune complex | |
| CA2005204C (en) | Solid phase immunoassay with lyophilised conjugate | |
| US5637472A (en) | Hydrazine derivatized cells | |
| AU784387B2 (en) | Immunoassay of human medullasin and diagnosis of multiple sclerosis using the same | |
| US4409200A (en) | Reverse transcriptase from human milk, method for its purification, and its use in the detection of breast cancer | |
| KR100454770B1 (ko) | 인간파르보비루스의검출방법및이를위한시약 | |
| US3733398A (en) | Determining and reversing anticomplementary activity in complement fixation test for australia antigen | |
| RU2021815C1 (ru) | Способ диагностики алеутской болезни норок | |
| Sato et al. | Treponema pallidum specific IgM haemagglutination test for serodiagnosis of syphilis. | |
| JPH08193999A (ja) | 免疫測定法 | |
| JPS63503241A (ja) | 特にｈｔｌｖ３ウイルスによってひき起こされた感染の実験室的改良診断方法 | |
| JP3692055B2 (ja) | 抗原抗体反応の判定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: WARNER-LAMBERT COMPANY |